JPH0344759B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0344759B2 JPH0344759B2 JP15516282A JP15516282A JPH0344759B2 JP H0344759 B2 JPH0344759 B2 JP H0344759B2 JP 15516282 A JP15516282 A JP 15516282A JP 15516282 A JP15516282 A JP 15516282A JP H0344759 B2 JPH0344759 B2 JP H0344759B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tryptophan
- indole
- water
- crude
- activated carbon
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 65
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 claims description 37
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 10
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 8
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N serine Chemical compound OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HXVNBWAKAOHACI-UHFFFAOYSA-N 2,4-dimethyl-3-pentanone Chemical compound CC(C)C(=O)C(C)C HXVNBWAKAOHACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCFAJYNVAYBARA-UHFFFAOYSA-N 4-heptanone Chemical compound CCCC(=O)CCC HCFAJYNVAYBARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWOLFJPFCHCOCG-UHFFFAOYSA-N Acetophenone Chemical compound CC(=O)C1=CC=CC=C1 KWOLFJPFCHCOCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010006152 Serine racemase Proteins 0.000 description 2
- 102100035717 Serine racemase Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZFOZVQLOBQUTQQ-UHFFFAOYSA-N Tributyl citrate Chemical compound CCCCOC(=O)CC(O)(C(=O)OCCCC)CC(=O)OCCCC ZFOZVQLOBQUTQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N butyl acetate Chemical compound CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N chlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1 MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- CATSNJVOTSVZJV-UHFFFAOYSA-N heptan-2-one Chemical compound CCCCCC(C)=O CATSNJVOTSVZJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- LQNUZADURLCDLV-UHFFFAOYSA-N nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC=C1 LQNUZADURLCDLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 2
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- HNAGHMKIPMKKBB-UHFFFAOYSA-N 1-benzylpyrrolidine-3-carboxamide Chemical compound C1C(C(=O)N)CCN1CC1=CC=CC=C1 HNAGHMKIPMKKBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTTPXKJBFFKCEK-UHFFFAOYSA-N 2-Methyl-4-heptanone Chemical compound CC(C)CC(=O)CC(C)C PTTPXKJBFFKCEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QZCLKYGREBVARF-UHFFFAOYSA-N Acetyl tributyl citrate Chemical compound CCCCOC(=O)CC(C(=O)OCCCC)(OC(C)=O)CC(=O)OCCCC QZCLKYGREBVARF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 Aliphatic ketones Chemical class 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- DOOTYTYQINUNNV-UHFFFAOYSA-N Triethyl citrate Chemical compound CCOC(=O)CC(O)(C(=O)OCC)CC(=O)OCC DOOTYTYQINUNNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040653 Tryptophan 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 1
- 101710136122 Tryptophan 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 108010075344 Tryptophan synthase Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- OBNCKNCVKJNDBV-UHFFFAOYSA-N butanoic acid ethyl ester Natural products CCCC(=O)OCC OBNCKNCVKJNDBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical class OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- GJRQTCIYDGXPES-UHFFFAOYSA-N iso-butyl acetate Natural products CC(C)COC(C)=O GJRQTCIYDGXPES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGKJLKRYENPLQH-UHFFFAOYSA-M isocaproate Chemical compound CC(C)CCC([O-])=O FGKJLKRYENPLQH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- OQAGVSWESNCJJT-UHFFFAOYSA-N isovaleric acid methyl ester Natural products COC(=O)CC(C)C OQAGVSWESNCJJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004701 malic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001256 steam distillation Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000003899 tartaric acid esters Chemical class 0.000 description 1
- WEAPVABOECTMGR-UHFFFAOYSA-N triethyl 2-acetyloxypropane-1,2,3-tricarboxylate Chemical compound CCOC(=O)CC(C(=O)OCC)(OC(C)=O)CC(=O)OCC WEAPVABOECTMGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001069 triethyl citrate Substances 0.000 description 1
- VMYFZRTXGLUXMZ-UHFFFAOYSA-N triethyl citrate Natural products CCOC(=O)C(O)(C(=O)OCC)C(=O)OCC VMYFZRTXGLUXMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013769 triethyl citrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、微生物を用いて製造したL−トリプ
トフアンの精製方法に関するものである。
トフアンの精製方法に関するものである。
従来、L−トリプトフアンは水または含水アル
コールで再結晶できることが知られている。
コールで再結晶できることが知られている。
しかし、微生物を利用して製造したL−トリプ
トフアンを精製するには、L−トリプトフアンを
水に溶解したときに見られる微生物に由来する濁
りを除去する必要があること、また工業的にはそ
の再結晶時の反応器の容積効率を高める必要があ
ること、さらに、商品としては得られたL−トリ
プトフアンの結晶形が良好である必要があること
などから、より改善された精製法が切望されてい
る。
トフアンを精製するには、L−トリプトフアンを
水に溶解したときに見られる微生物に由来する濁
りを除去する必要があること、また工業的にはそ
の再結晶時の反応器の容積効率を高める必要があ
ること、さらに、商品としては得られたL−トリ
プトフアンの結晶形が良好である必要があること
などから、より改善された精製法が切望されてい
る。
本発明者らは、これらの問題を解決すべく鋭意
検討した。その結果、アルコールとしてイソプロ
ピルアルコールを用い、かつ30〜60容量%の含水
物として用い活性炭処理して再結晶すれば、L−
トリプトフアンの含水イソプロピルアルコールへ
の溶解度が水または含水アルコールにくらべて高
いので、再結晶時の反応器の容積効率が高く、し
かも、活性炭処理を併用することにより微生物に
由来する溶解時の濁りも完全に除去でき、その
上、得られるL−トリプトフアンの結晶形も比較
的大きな鱗片状の結晶となること、さらに、粗製
L−トリプトフアンに未反応のインドールが含ま
れていても、これを完全に除去できるので、粗製
L−トリプトフアンの製造工程での未反応インド
ールを除去する工程を省畧できることなどを見出
し、本発明の方法を完成するに到つた。
検討した。その結果、アルコールとしてイソプロ
ピルアルコールを用い、かつ30〜60容量%の含水
物として用い活性炭処理して再結晶すれば、L−
トリプトフアンの含水イソプロピルアルコールへ
の溶解度が水または含水アルコールにくらべて高
いので、再結晶時の反応器の容積効率が高く、し
かも、活性炭処理を併用することにより微生物に
由来する溶解時の濁りも完全に除去でき、その
上、得られるL−トリプトフアンの結晶形も比較
的大きな鱗片状の結晶となること、さらに、粗製
L−トリプトフアンに未反応のインドールが含ま
れていても、これを完全に除去できるので、粗製
L−トリプトフアンの製造工程での未反応インド
ールを除去する工程を省畧できることなどを見出
し、本発明の方法を完成するに到つた。
すなわち、本発明の方法は、微生物を用いてL
−トリプトフアンを製造する方法において、30〜
60容量%含水イソプロピルアルコール中、活性炭
処理を併用して再結晶させることを特徴とするL
−トリプトフアンの精製法である。
−トリプトフアンを製造する方法において、30〜
60容量%含水イソプロピルアルコール中、活性炭
処理を併用して再結晶させることを特徴とするL
−トリプトフアンの精製法である。
本発明の方法において、微生物を用いて製造さ
れる粗製のL−トリプトフアンは、通常良く知ら
れているエシエリヒア・コリの存在下、L−セリ
ンとインドールより製造したもの、エシエリヒ
ア・コリおよびシユードモナス・プチーダの存在
下DL−セリンとインドールより製造したもの、
バチルス・ブチルスの存在下アンスラニル酸を前
駆体として製造したもの、またはアエロバクタ
ー・アエロゲネの存在下、インドールとピルビン
酸およびアンモニアより製造したもの等があげら
れる。
れる粗製のL−トリプトフアンは、通常良く知ら
れているエシエリヒア・コリの存在下、L−セリ
ンとインドールより製造したもの、エシエリヒ
ア・コリおよびシユードモナス・プチーダの存在
下DL−セリンとインドールより製造したもの、
バチルス・ブチルスの存在下アンスラニル酸を前
駆体として製造したもの、またはアエロバクタ
ー・アエロゲネの存在下、インドールとピルビン
酸およびアンモニアより製造したもの等があげら
れる。
例えば、インドールとL−セリンより製造する
ものは、L−トリプトフアン要求性エシエリヒ
ア・コリのトリプトフアナーゼ欠損変位株を炭素
および窒素源ならびに無機塩を含有する培地を用
いてまず好気性の条件下28〜40℃、PH6〜8の条
件でエシエリヒア・コリ変異株を培養し、菌体を
その培養液のまままたは培地から分離してピリド
キザールリン酸塩およびL−セリン、無機物を溶
解した溶液に懸濁させる。PH7.5〜9.5好ましくは
PH8〜9の条件下、インドールを直接、あるいは
水と混和しないがインドールと混和する有機溶媒
に溶解したインドール溶液を一括または連続的に
酵素の活性を阻害しないような濃度以下に保ちな
がら加え20〜40℃の範囲で反応を行いL−トリプ
トフアンを生成せしめる。
ものは、L−トリプトフアン要求性エシエリヒ
ア・コリのトリプトフアナーゼ欠損変位株を炭素
および窒素源ならびに無機塩を含有する培地を用
いてまず好気性の条件下28〜40℃、PH6〜8の条
件でエシエリヒア・コリ変異株を培養し、菌体を
その培養液のまままたは培地から分離してピリド
キザールリン酸塩およびL−セリン、無機物を溶
解した溶液に懸濁させる。PH7.5〜9.5好ましくは
PH8〜9の条件下、インドールを直接、あるいは
水と混和しないがインドールと混和する有機溶媒
に溶解したインドール溶液を一括または連続的に
酵素の活性を阻害しないような濃度以下に保ちな
がら加え20〜40℃の範囲で反応を行いL−トリプ
トフアンを生成せしめる。
前記の有機溶媒を用いる場合、有機溶媒として
は、ベンゼン、トルエン、クロルベンゼン、ニト
ロベンゼン、アセトフエノン等の芳香族炭化水素
およびその誘導体、炭素数6以上の脂肪族エステ
ル類、例えばn−ブチルアセテート、イソアミル
アセテート、エチルブチレート、イソブチルアセ
テート等、炭素数6以上の脂肪族ケトン類、例え
ばメチルイソブチルケトン、ジイソブチルケト
ン、ジイソプロピルケトン、メチル−n−アミル
ケトン、ジ−n−プロピルケトン等クエン酸エス
テル類、例えばアセチルトリエチルシトレート、
アセチルトリブチルシトレート、トリエチルシト
レート、トリブチルシトレート等そのほか酒石酸
エステル類、リンゴ酸エステル類が使用される。
エーテル類としてアニソール等も使用される。
は、ベンゼン、トルエン、クロルベンゼン、ニト
ロベンゼン、アセトフエノン等の芳香族炭化水素
およびその誘導体、炭素数6以上の脂肪族エステ
ル類、例えばn−ブチルアセテート、イソアミル
アセテート、エチルブチレート、イソブチルアセ
テート等、炭素数6以上の脂肪族ケトン類、例え
ばメチルイソブチルケトン、ジイソブチルケト
ン、ジイソプロピルケトン、メチル−n−アミル
ケトン、ジ−n−プロピルケトン等クエン酸エス
テル類、例えばアセチルトリエチルシトレート、
アセチルトリブチルシトレート、トリエチルシト
レート、トリブチルシトレート等そのほか酒石酸
エステル類、リンゴ酸エステル類が使用される。
エーテル類としてアニソール等も使用される。
この反応において、インドールは水相中の濃度
が酵素の活性阻害濃度以下に維持する必要がある
ので、インドールを直接加えるときは、反応液中
のインドール濃度を確認しながら適宜添加し、ま
た、前記のような有機溶媒を用いるときは、使用
する有機溶媒の分配能に応じて適当量の有機溶媒
に溶解して添加する。
が酵素の活性阻害濃度以下に維持する必要がある
ので、インドールを直接加えるときは、反応液中
のインドール濃度を確認しながら適宜添加し、ま
た、前記のような有機溶媒を用いるときは、使用
する有機溶媒の分配能に応じて適当量の有機溶媒
に溶解して添加する。
この際、反応生成物であるL−トリプトフアン
は酵素含有液中に結晶として析出してくるが、こ
の反応条件下では、反応の進行に何ら影響を与え
ない。
は酵素含有液中に結晶として析出してくるが、こ
の反応条件下では、反応の進行に何ら影響を与え
ない。
得られた反応混合液から、有機溶媒を用いたと
きはこれを留去した後、酵素を除去する。酵素の
除去は、公知の各種方法で可能であるが、次のよ
うな方法で行なえば一層効果的である。
きはこれを留去した後、酵素を除去する。酵素の
除去は、公知の各種方法で可能であるが、次のよ
うな方法で行なえば一層効果的である。
すなわち、反応混合液に、必要に応じて水また
は水−アルコールを加え、鉱酸でPH2〜5に調整
した後、加熱処理して微生物を凝集させ、つい
で冷却する。この反応混合液にアルカリを添加し
てトリプトフアンを溶解し、凝集した微生物を濾
別するか、または加熱して熱濾過したり、反応
液を十分に希釈したりして、L−トリプトフアン
の溶解度以下で、凝集した微生物を濾別する。
は水−アルコールを加え、鉱酸でPH2〜5に調整
した後、加熱処理して微生物を凝集させ、つい
で冷却する。この反応混合液にアルカリを添加し
てトリプトフアンを溶解し、凝集した微生物を濾
別するか、または加熱して熱濾過したり、反応
液を十分に希釈したりして、L−トリプトフアン
の溶解度以下で、凝集した微生物を濾別する。
得られる濾・洗液には生成したL−トリプトフ
アンの外、未反応のインドールを含むので、通常
これを水蒸気蒸留または有機溶媒による抽出等で
除去するが、本発明の方法では未反応インドール
を含んでいても、精製工程は除去できるので、前
記濾・洗液の未反応インドールの除去工程を省畧
して濃縮、放冷し濾過して粗製のL−トリプトフ
アンを得る。
アンの外、未反応のインドールを含むので、通常
これを水蒸気蒸留または有機溶媒による抽出等で
除去するが、本発明の方法では未反応インドール
を含んでいても、精製工程は除去できるので、前
記濾・洗液の未反応インドールの除去工程を省畧
して濃縮、放冷し濾過して粗製のL−トリプトフ
アンを得る。
以上のような粗L−トリプトフアンの製造にお
いてDL−セリンとインドールを用い、セリンラ
セマーゼとしてのシユードモナス・プテイーダ
(MT−10182)またはシユードモナス・ブンクタ
ータ(MT−10243)を併用して、同様に粗製の
L−トリプトフアンを製造してもよい。
いてDL−セリンとインドールを用い、セリンラ
セマーゼとしてのシユードモナス・プテイーダ
(MT−10182)またはシユードモナス・ブンクタ
ータ(MT−10243)を併用して、同様に粗製の
L−トリプトフアンを製造してもよい。
本発明の方法において用いられる含水アルコー
ルは、30〜60容量%、好ましくは30〜50容量%の
含水イソプロピルアルコールである。
ルは、30〜60容量%、好ましくは30〜50容量%の
含水イソプロピルアルコールである。
L−トリプトフアンは水または含水アルコール
に、例えば、つぎの溶解度を示す。
に、例えば、つぎの溶解度を示す。
溶 媒 溶解度(wt%、各溶媒の沸点)
水 4.5
30%含水メタノール 2.9
50% 〃 3.7
70% 〃 3.4
30%含水エタノール 3.2
50% 〃 5.5
70% 〃 3.3
30%含水イソプロパノール 6.0
50% 〃 6.5
つぎに、含水イソプロピルアルコールによる再
結晶の特徴は、得られる精製L−トリプトフアン
の結晶形が優れていることである。すなわち、水
または含水メタノールもしくはエタノールで再結
晶して得られるものは粉状または微細な鱗片状の
結晶であるのに対し、含水イソプロパノールで再
結晶して得られるものは3〜5mmφの大きな鱗片
状の結晶であり、製品としての外観が一段と優れ
たものである。
結晶の特徴は、得られる精製L−トリプトフアン
の結晶形が優れていることである。すなわち、水
または含水メタノールもしくはエタノールで再結
晶して得られるものは粉状または微細な鱗片状の
結晶であるのに対し、含水イソプロパノールで再
結晶して得られるものは3〜5mmφの大きな鱗片
状の結晶であり、製品としての外観が一段と優れ
たものである。
さらに含水イソプロピルアルコールを再結晶す
る特徴は、未反応インドールが再結晶処理により
除去できることである。
る特徴は、未反応インドールが再結晶処理により
除去できることである。
したがつて、インドールとセリンを反応させて
得た反応混合液から未反応のインドールを除去す
る操作を省畧して得られる粗製のL−トリプトフ
アンを用いても、未反応インドールをほとんど含
有しないL−トリプトフアンを得ることができ
る。
得た反応混合液から未反応のインドールを除去す
る操作を省畧して得られる粗製のL−トリプトフ
アンを用いても、未反応インドールをほとんど含
有しないL−トリプトフアンを得ることができ
る。
本発明の方法に用いられる活性炭は特に限定さ
れるものではない。通常、精製用として使用され
る粉末活性炭または造粒活性炭を使用することが
できる。
れるものではない。通常、精製用として使用され
る粉末活性炭または造粒活性炭を使用することが
できる。
活性炭の使用量は、とくに限定はなく、通常、
粗L−トリプトフアンに対して0.1〜10wt%使用
すれば十分である。
粗L−トリプトフアンに対して0.1〜10wt%使用
すれば十分である。
本発明の精製処理は、粗L−トリプトフアンに
対して14〜20重量倍量、好ましくは14.5〜16)倍
量の30〜60%含水イソプロピルアルコールに、活
性炭および粗L−トリプトフアンを添加し、沸点
で、L−トリプトフアンが十分に溶解するまで加
熱撹拌し、これを熱濾過して、得られる濾液を冷
却して、析出してくる精L−トリプトフアンを濾
取するような一般的な再結晶方法で実施すればよ
い。
対して14〜20重量倍量、好ましくは14.5〜16)倍
量の30〜60%含水イソプロピルアルコールに、活
性炭および粗L−トリプトフアンを添加し、沸点
で、L−トリプトフアンが十分に溶解するまで加
熱撹拌し、これを熱濾過して、得られる濾液を冷
却して、析出してくる精L−トリプトフアンを濾
取するような一般的な再結晶方法で実施すればよ
い。
以下、本発明の方法を実施例で示す。
実施例 1
エシエリヒア・コリMT−10242を培地組成1
の培地50mlに一白金耳接種し、30℃にて20時間振
とう培養した。
の培地50mlに一白金耳接種し、30℃にて20時間振
とう培養した。
培地組成
肉エキス 1.0wt%
ペプトン 0.5wt%
酵母エキス 0.1wt%
KH2PO4 0.2wt%
初期PH 7.0
培養液1を遠心分離して菌体を集め、これを
トリプトフアン・シンセターゼの酵素源とした。
トリプトフアン・シンセターゼの酵素源とした。
シユードモナス・プチーダIFO12996を培地組
成の培地50mlに一白金耳接種し、30℃にて20時
間振とう培養した。培養液1を遠心分離して菌
体を集め、これをセリン・ラセマーゼの酵素源と
した。
成の培地50mlに一白金耳接種し、30℃にて20時
間振とう培養した。培養液1を遠心分離して菌
体を集め、これをセリン・ラセマーゼの酵素源と
した。
培地組成
肉エキス 1.0wt%
ペプトン 0.5wt%
NaCl 0.5wt%
初期PH 7.0
撹拌機を備えた300mlにフラスコにDL−セリン
11.3g、硫酸アンモニウム6g、ピリドキサール
リン酸10mgおよび水66gを加えて良くかきまぜ
る。濃アンモニウム水でPHを8.5に調整し、エシ
エリヒア・コリ湿潤濾塊6.8g(固形分1.7g)お
よびシユードモナス・プチーダ湿潤濾塊3.4g
(固形分0.85g)を水に懸濁さて全体の体積を20
mlとして加える。
11.3g、硫酸アンモニウム6g、ピリドキサール
リン酸10mgおよび水66gを加えて良くかきまぜ
る。濃アンモニウム水でPHを8.5に調整し、エシ
エリヒア・コリ湿潤濾塊6.8g(固形分1.7g)お
よびシユードモナス・プチーダ湿潤濾塊3.4g
(固形分0.85g)を水に懸濁さて全体の体積を20
mlとして加える。
35℃に保温したのち、インドール11.5gを溶解
したトルエン溶液57.2gを加え、35℃、48時間反
応させた。反応収率は定量的であつた。トルエン
を蒸留により除去し、水を加えて全量を450gと
し、硫酸でPHを3.5に調整し、活性炭3gを加え、
95〜98℃に加熱する。1時間保温し、L−トリプ
トフアンが溶解した状態で同温度で熱時濾過を行
なう。この濾液を濃縮し、L−トリプトフアン濃
度を10wt%にする。20℃に冷却し、晶出した結
晶を濾別する。純度99.5%のL−トリプトフアン
の結晶が80%の単離収率(対インドール)で得ら
れた。
したトルエン溶液57.2gを加え、35℃、48時間反
応させた。反応収率は定量的であつた。トルエン
を蒸留により除去し、水を加えて全量を450gと
し、硫酸でPHを3.5に調整し、活性炭3gを加え、
95〜98℃に加熱する。1時間保温し、L−トリプ
トフアンが溶解した状態で同温度で熱時濾過を行
なう。この濾液を濃縮し、L−トリプトフアン濃
度を10wt%にする。20℃に冷却し、晶出した結
晶を濾別する。純度99.5%のL−トリプトフアン
の結晶が80%の単離収率(対インドール)で得ら
れた。
この粗製L−トリプトフアン結晶を、16重量倍
の50%含水イソプロピルアルコールに分散し、L
−トリプトフアンに対し、1重量%の粉末活性炭
を加え、沸点まで昇温する。同温度で1時間加熱
し、熱時吸引濾過すると、淡黄色透明のL−トリ
プトフアン溶液を得た。5℃まで冷却し析出した
結晶を濾別、乾燥した。回収率85%、純度100%、
3〜5mmφの鱗片状晶のL−トリプトフアンを得
た。
の50%含水イソプロピルアルコールに分散し、L
−トリプトフアンに対し、1重量%の粉末活性炭
を加え、沸点まで昇温する。同温度で1時間加熱
し、熱時吸引濾過すると、淡黄色透明のL−トリ
プトフアン溶液を得た。5℃まで冷却し析出した
結晶を濾別、乾燥した。回収率85%、純度100%、
3〜5mmφの鱗片状晶のL−トリプトフアンを得
た。
Claims (1)
- 1 微生物を用いてL−トリプトフアンを製造す
る方法において、30〜60%含水イソプロピルアル
コール中、活性炭処理を併用して再結晶させるこ
とを特徴とするL−トリプトフアンの精製法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15516282A JPS5945898A (ja) | 1982-09-08 | 1982-09-08 | L−トリプトフアンの精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15516282A JPS5945898A (ja) | 1982-09-08 | 1982-09-08 | L−トリプトフアンの精製法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5945898A JPS5945898A (ja) | 1984-03-14 |
JPH0344759B2 true JPH0344759B2 (ja) | 1991-07-08 |
Family
ID=15599869
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP15516282A Granted JPS5945898A (ja) | 1982-09-08 | 1982-09-08 | L−トリプトフアンの精製法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5945898A (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0410005B1 (en) * | 1989-02-13 | 1995-12-27 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for crystallizing amino acid |
EP0770676A3 (en) * | 1995-10-23 | 1999-05-19 | Ajinomoto Co., Ltd. | Method for treating fermentation broth |
DE102018100810A1 (de) * | 2018-01-16 | 2019-07-18 | Technische Universität Dortmund | Verfahren zur Aufarbeitung von L-Tryptophan |
-
1982
- 1982-09-08 JP JP15516282A patent/JPS5945898A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS5945898A (ja) | 1984-03-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPH0331258A (ja) | トリプトファンの精製方法 | |
JP3273578B2 (ja) | オルニチンと酸性アミノ酸類又はケト酸類との塩の製造法 | |
JPH0344759B2 (ja) | ||
JP3528205B2 (ja) | L−3,4−ジヒドロキシフェニルアラニンの製造方法 | |
JPH07285919A (ja) | アスパラギン酸アンモニウムからl−アスパラギン酸を製造する方法 | |
JP2886576B2 (ja) | シクロヘキサンカルボン酸誘導体の製法 | |
JPH0435156B2 (ja) | ||
US3812188A (en) | Purification of 7-chlorotetracycline | |
JP4614180B2 (ja) | グルタミン酸の転移再結晶による精製方法 | |
US3206506A (en) | Separation of acetylglutamine | |
JPS6224076B2 (ja) | ||
JPS6225353B2 (ja) | ||
CA1207689A (en) | Enzyme reaction | |
KR870001146B1 (ko) | L-트립토판의 분리방법 | |
JPH0468917B2 (ja) | ||
JPH0435157B2 (ja) | ||
JPS6125359B2 (ja) | ||
JPS6019997B2 (ja) | L−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素の製造法 | |
JPH07238063A (ja) | 5−アミノレブリン酸の回収精製法 | |
JPH0825972B2 (ja) | アスパラギン酸の精製法 | |
JP2674076B2 (ja) | D−α−アミノ酸の製造方法 | |
KR870001150B1 (ko) | 효소 반응의 개량방법 | |
JP2783823B2 (ja) | シクロヘキサンカルボン酸誘導体の製法 | |
JP2931629B2 (ja) | L‐トリプトファンの晶析方法 | |
JPH06181788A (ja) | L−セリンの製造方法 |