JPH03255034A - 免疫刺激剤およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

［０００１］

【産業上の利用分野】

本発明は免疫刺激剤、その製造方法および醗酵乳の分野
で免疫刺激剤および／又は方法の使用に関する。 ［０００２］

【従来の技術】

制癌剤ハラクトハチルス、特にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌ
ｕｓ　　ｂｕｌｇａｒｉＣＵＳを培養し、たん自分群酵
素によりラクトバチルスを加水分解し、たん白および制
癌活性を示すリボ核酸の豊富な生成物を加水分解物から
抽出する工程を含む方法により製造できることが知られ
ている。 ［０００３］ さらに、幼児に対する乳に基づく食品はＬａｃｔｏｂａ
ｃｉｌｌｕｓ　　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓにより酸性化
した乳にオリゴ要素、ビタミンおよびリゾチーム溶液を
補う方法により製造できることが知られている。 ［０００４］

【発明が解決しようとする課題】

本発明の目的は乳酸菌から得ることができ、醗酵乳分針
で使用するのに特に適する有効な免疫刺激剤を供するこ
とである。 ［０００５］

【課題を解決するための手段】

このために、本発明による免疫刺激剤はリゾチームに感
受性の乳酸菌、特にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｂ
ｕｌｇａｒｉｃｕｓの細胞壁からノベプチド

【請求項５
】リゾチームにより加水分解して誘導したＮ−アセチル
ムラミルペプチドを含む。 ［０００６］ 同様に、本発明による免疫刺激剤の製造方法では、リゾ
チームに感受性の乳酸菌、特にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌ
ｕｓ　　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓの細胞壁からのペプチド

【請求項５】リゾチームにより加水分解してそこからＮ
−アセチルムラミルペプチドを誘導する。このタイプの
剤は免疫応答、特にダラム陰性の腸病原性細菌、例えば
Ｅ、ｃｏｌｉに対する免疫応答に著しい刺激効果を有す
ることが分かった。 ［０００７］ 本発明による免疫刺激剤は醗酵乳、特にヨーグルト又は
ホエイ製品に使用するのに特に適する。 ［０００７】 同様に、本発明方法は醗酵乳、特にヨーグルトの製造に
、又はホエイ製品の製造に使用するのに適する、すなわ
ち直接性なうことができる。 ［０００９］ 従って、本発明はこれらの使用にも関する。 ［００１０］ 本発明に関連して、本発明生成物の免疫刺激剤効果はマ
ウスに対する試験で定性的に評価される。これらの試験
結果は直接ヒトに適用することはできない力板それでも
尚有用な情報を提供することが知られる。 ［００１１］ 本発明に関連して、［リゾチームに感受性の乳酸菌」と
は細胞壁かリゾチームにより加水分解しうる、すなわち
リゾチームの作用下でＮ−アセチルムラミルペプチドに
分解しうるペプチド

【請求項５】含む乳酸菌の意味に使
用する。 ［００１２］ 本発明方法はリゾチームに感受性の乳酸菌の純粋培養体
または懸濁液又はリゾチームに感受性および非感受性の
細菌を含む混合培養体又は懸濁液を使用して行なうこと
ができる。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｂｕｌｇａ
ｒｉｃｕｓの純粋培養体又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕ
ｓ　　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓおよび５ｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ　　ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓの混合培養体、
すなわち、例えば市販されているタイプのヨーグルト培
養体は特に使用することができる。 ［００１３］ ６ 特に、リゾチームに感受性の乳酸菌の１０〜１０１０細
胞／ｍｌを含有する培養体又は懸濁液を使用することが
できる。十分な濃度の所望量の細胞を生産するなめに、
適当な培地に当該細菌の種子培養体を接種し、出発培養
体のものに匹敵しうる細胞濃度を培地に再定着するのに
十分な時間細菌の生育に有利な温度およびｐＨでインキ
ュベートできる。培地は例えば脱脂又は未脱脂牛乳、ホ
エイ、限外濾過透過物のような乳に基づく培地、又は合
成培地でよい。

【００１４】 Ｌ、　　　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓの培養体を使用するこ
とが好ましい。この培養体を製造するために、牛乳、又
は例えばＭＲ３培地（Ｄｉｆｃｏ）のような合成培地に
この微生物の種子培養体を接種し、３〜６時間、３７〜
４５℃でインキュベートできる。培養体を３時間未満又
は３７℃以下の温度でインキュベートする場合、いわゆ
る潜伏相、すなわち微生物増殖が出発相に留まり、又は
いわゆる指数相、すなわち微生物の指数増殖相に十分な
永さで含まれない危険がある。 ［００１５］ 他方、培養体を６時間以上インキュベートする場合、定
常相、すなわち微生物の増殖が停止し、その間細胞壁の
組成が不利に変化する相に入る危険がある。最後に４５
℃を超えると、温度はもはやり、　　　ｂｕｌｇａｒｉ
ｃｕｓの生育に有利ではなくなる。 ［００１６］ 次に加水分解工程はリゾチームにより行なう。リゾチー
ムは任意の起源由来でよく、特にレンネット、特に反射
動物（特に牛）レンネット、又は卵白、任意には純粋形
がよい。本発明方法の１態様では、レンネットはそのま
ま、すなわちリゾチームをそこから分離せずに使用する
。 ［００１７］ 上記乳酸菌の細胞壁からのペプチドグリカンは１〜４８
時間、好ましくは１２胞１０６〜１０１０を含有する培
養体を使用して例えば使用リゾチームの作用に有利なｐ
Ｈ値で加水分解できる。このｐＨは例えばレンネットの
リゾチームに対し４〜［００１７】 本発明による使用に対し、一方ではそのまま、又は水性
抽出物形で液体又は攪拌ヨーグルトのような醗酵乳に、
又はホエイに基づく飲料のようなホエイ製品に免疫刺激
剤を添加することができる。剤添加量は例えば醗酵乳又
はホエイ製品１ｍｌにっきリゾチームに感受性の１０６
〜１０１０の乳酸菌細胞の壁由来のＮ−アセチルムラミ
ルペプチド量に相当する。 ［００１９］ 他方、加水分解工程は例えば、醗酵乳、特に独自で、又
はＳ、ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓと組み合せたり、　　
　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓにより醗酵乳に、又は乳清に実
施できる。醗酵乳の場合、リゾチームは醗酵前、中又は
後に、例えば、約１〜５００μｇリゾチーム／ｍｌ乳の
量で乳に添加できる。ホエイの場合、リゾチームに感受
性の上記細菌はホエイに添加でき、又は適当な場合、そ
こで培養することもでき、必要な場合、リゾチームを添
加できる。 ［００２０］ 本発明は次側により例示する。例中特記しない限り％は
重量による。 ［００２１３ 免疫刺激効果、すなわち免疫応答に対する刺激効果はＥ
ＬＩＳＡ試、験によりマウスの特異抗体濃度を測定する
ことにより評価する。 ［００２２］ 専門家には周知のＥＬＩＳＡ試、験は、例えば細菌抗原
のような抗原に順次結合し、水性媒体に不溶性の支持体
に結合する免疫グロブリン、例えばＩｇＧ、ＩｇＭ又は
ＩｇＡの特異抗体に結合する抗−抗体をマークする酵素
を検出することを含む。 ［００２３］ 伝よ 次の組成（ｇ乾物／１培地で表わす）：たん白加水分解
物 内袖出物 酵母抽出物 ０ ０ グルコース ラクトース 乳化剤 クエン酸アンモニウム 酢酸ナトリウム ＭｇＳＯ３ Ｍｎ５○４ に２ＨＰ○４ を有する改質ＭＲ３培地 製する。 ０ ０ ０、　１ ０．０５ （Ｄｉｆｃｏ　　Ｌａｂ、、米国）から成る合成培地を
調［００２４］ この合成培地は６．５のｐＨを有する。１２１℃で１５
分滅菌し、次にＬａｃ　ｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｂｕ
ｌｇａｒｉｃｕｓの種子培養体、この場合り、　　　ｂ
ｕＩｇａｒｉｃｕｓ　　ＮＣＤ０１４８９（Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ　　Ｃｏ１１ｅｃｔｉ。 ｎ　　ｏｆ　　Ｆｏｏｄ　　Ｂａｃｔｅｒｉａ、ＡＦＲ
ＣＩｎ５ｔｉｔｕｔｅ　　ｏｆＦｏｏｄ　　Ｒｅ５ｅａ
ｒｃｈ、Ｒｅａｄｉｎｇ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、５
ｈｉｎｆｉｅｌｄ、Ｒｅａｄｉｎｇ、ＲＧ２　９ＡＴ、
英国）の培養体を接種する［００２５］ 培養体は６時間４０℃でインキュベートする。バイオマ
スを分離し、洗滌し、ＡおよびＢの２部に分割する。部
Ａはｐｌ（７の０．０２Ｍリン酸塩緩衝液に懸濁し一方
部ＢはｐＨ５の０．０１Ｍ酢酸塩緩衝液に、微生物の２
・１０９細胞／ｍｌの量で懸濁する。 ［００２６］ 懸濁液Ａのり、　　　ｂｕｌ・ｇａｒ　１ｃｕｓ細胞は
市販品として入手しうる卵白からのリゾチーム（Ｃａｌ
ｂｉｏｃｈｅｍ、　　ドイツ連邦共和国）により加水分
解する。懸濁液Ｂのり、ｂｕ１ｇａｒｉｃｕｓ細胞は抽
出レンネットリゾチームにより加水分解し、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、　　　Ｊ、　　　２０１，６６１〜６６４　（１
９８２）にＪ、Ｊ、　　　Ｐａｈｎｄらが記載したよう
に精製した。 ［００２７］ このために、１６μｇのリゾチームを懸濁液１ｍｌにつ
いて添加し、１８時間２５℃でインキュベートする。次
に懸濁液は遠心分離し、上澄相は０．４５μｍ直径孔を
有する膜を通して濾過する。 ［００２７】 ２種の免疫刺激剤ＡおよびＢは卵白（Ａ）又はレンネッ
）　（Ｂ）由来のリゾチームニよる加水分解により１ｍ
ｌにつき２−１０９（７）Ｌ、ｂｕ　ｌ　ｇａｒ　１ｃ
ｕｓ細胞の細胞壁由来のＮ−アセチルムラミルペプチド
を含有する滅菌溶液または抽出物形で得る。 ［００２９］ 剤ＡおよびＢの免疫刺激効果は次の試験手順を使用して
「スイス白色」種のマウス（Ｔｕ　ｔ　ｔ　ｌ　ｉ　ｎ
ｇｅｎ、　　ドイツ連邦共和国）で測定する。 ［００３０１ 体重１８〜２０ｇの６匹のマウスを含む番号１〜６の６
群に通常飼料および水を自由に与える。試、験開始の０
日から出発して経口挿管法を１．３，５，１５゜１７．
１９および３０日に行なう。飼料および水はこれらの挿
管法を行なう３時間前に除去し、その後直ちに戻す。血
清は０．２９および４０日にマウスから採取する。腸の
洗滌は４０日二行なう。 ［００３１］ 各経口挿管法は０．５ｍｌ／マウスの用量で行なう。こ
れらの投与物の組成は同じ群のマウスに対しては同一で
あるカミ表■に示すように群毎に異なる。表■では、「
ワクチン」とは１用量につき５−１０９のＥｓｃｈｅｒ
ｉｃｉａ　　ｃｏｌｉ　　０１１１；に５８の細胞が懸
濁し、細胞の半数は１００℃で１時間不活性化し、他の
半数は０．０５％グルタルアルデヒドにより不活性化し
たことを示す（Ｈｉｌｐｅｒｔら、Ｆｏｏｄ　　ａｎｄ
　　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９７７、編集り、　　Ｈ
ａｍｂｒａｅｎｘ、Ｌ、Ａ、Ｈａｎｓｏｎ、Ｉ−（、Ｍ
ｃＦａｒ　ｌａｎｅＳｗｅｄｉｓｈ　　Ｎｕｔｒｉｔｉ
ｏｎ　　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ
　　ＸＩＩＩ、１８２〜１９６）。ＣＴとは専門家に周
知の免疫刺激剤、コレラ毒素を表わす。「生理的溶液」
とは０．９％ＮａＣ１を含有する蒸留水を表わす。 ［００３２］

【表１】 群　　　　　　　基本液 添加物質 ％ 生理的溶液　　　　　　　　３ 生理的溶液　　　　　　　　　　　　　　　　　　１μ
ｇ　　Ｃｒ２　　　　　− 生理的溶液　　　　　　　　３　　ワクチン生理的溶液
　　　　　　　　３　　ワクチン　　　１μｇ　　ＣＴ
免疫刺激剤　Ａ　　　　　　３　　ワクチン免疫刺激剤
　Ｂ　　　　　　３　　ワクチン　　　　　−［００３
３］ マウスから採取した血清中のＩｇＧおよびＩｇＭ抗体濃
度および腸管洗滌液中のＩｇＧおよびＩｇＡ抗体濃度を
ＥＬＬＳＡ試、験により測定する。表２は得た相対値を
示す。数字は１つの同じ群の各６匹のマウスに対し測定
した幾何学的平均値である。星印はマークした数学に対
し群３（対照、ワクチンのみを与えたマウス）の相当す
る数字（同じカラム）と異ることに対し要求される誤差
の確率は５％より低いことを示す。換言すれば、星印に
よりマークした数字に対し一方的分散分析により測定し
た値ｒＰＪは０，０５より小さい。 ［００３４］

【表２】 群 血清から： ＩｇＧ ｄ２９　　　　ｄ４０ １　　　　　　　６９　　　　５７ ２　　　　　　　９６　　　　９４ ３１８９４８９ ４５７２７５９ ｇＭ ｄ２９　　　　ｄ４ ３６　　　３ ２５　　　８ ３１　　　８ １１３　　　１２ 腸液から： 工ｇＧ　　　ＩｇＡ Ｏｄ４０　　　ｄ４０ ９　　　８　　　８ ０　　　１０　　　１１ ３　　　１１　　　　１８ ３＊　　　１３　　　２４ ５　　　　５２５　　８２８　　１０４　　１４１＊　
　１８　　　５３＊６　　　　３９７１３６２　　　３
９　　　４５　　　２４＊　　７２＊＊ ［００３５］ ２９日および４０日こ取り出した血清はワクチンおよび
免疫刺激剤Ａ又はＢ（本発明、群５および６）又はＣＴ
　（比較、群４）を与えたマウスに対しワクチンのみを
与えたマウス（対照、群３）に関してＩｇＧ抗体の濃度
に約２〜３の率で増加を示す。対照的に、ＩｇＭ抗体濃
度の増加は単に免疫刺激剤Ａ（本発明、群５）およびＣ
Ｔ　（比較、群３）に対してのみ認められる。 ［００３６］ ワクチンおよび免疫刺激剤Ａ又はＢ（本発明、５および
６）を与えたマウスの腸管液のＩｇＧおよび工ｇＡ抗体
の濃度はワクチンのみ（対照、群３）を与えたマウスの
腸管液のものに関し非常に明白な増加を示す。 ［００３７］ 例ス Ｌ、ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓのバイオマスを例１記載と同
じ方法で調製する。バイオマスをｐ！（５の０．０１Ｍ
酢酸塩緩衝液に１ｍｌにつき１．６・１０９微生物細胞
量で懸濁する。 ４％リゾチーム（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅ　　Ｐｒｅｓ
ｕｒｅ、ＧｒａｎｄａｙＢｅａｕｍｅ、フランス）を含
有する１％液体レンネットを懸濁液に添加し、次いで穏
やかに攪拌しながら２５℃で１８時間インキュベーショ
ンする。次に懸濁液は遠心分離し、上澄相は０．４５μ
ｍ直径孔を有する膜を通して濾過する。 ［００３７】 免疫刺激剤Ｃは滅菌溶液形、又はレンネット自体の形の
レンネットリゾチームにより加水分解することにより１
ｍｌにつきり、ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓの１．６・１０９
細胞の細胞壁由来のＮ−アセチルムラミルペプチドを含
有する抽出物形で得る。 ［００３９］ 免疫刺激剤Ｃの免疫刺激効果は例１と同様の方法で「ス
イス白色」種のマウスで立証される。但し免疫刺激剤は
挿管法によりマウスに投与せず、１部の免疫刺激剤対５
０部の水量で自由に飲用する水に添加する。試、験を通
して、毎日の要求が約４〜７ｍｌであるマウスに対しＬ
Ｏｍｌリピド／２４時間を自由に使用させる。 ［００４０］ １〜４番号の６匹のマウスの４群には通常飼料を与える
。これらの群のうちの２群は自由に生理的溶液が受けら
れる。他の２群には免疫刺激剤Ｃを添加した生理的溶液
を与える。さらに、これらの群のうちの２群のマウスに
は例１の試験手順に記載のものと同じ方法で経口挿管法
によりＥ、ｃｏｌｉのワクチンも与える。表ＩＩＩは各
種群のマウスに対し給飼および／又はワクチンプログラ
ムを要約する。 ［００４，１］

【表３】 群　　　　　液体　　　　　　　　　　　　　　挿管法
１　　　生理的溶液 ２　　　生理的溶液＋免疫刺激剤Ｃ− ３生理的溶液＋免役刺激剤Ｃワクチン ４　　　生理的溶液＋免役刺激剤Ｃワクチン［００４２
］ 血清のＩｇＧおよびＩｇＭ抗体の濃度およびマウスから
採取した腸管洗滌液のＩｇＡ抗体の濃度はＥＬＩＳＡ試
験により測定する。表４は得た相対値を示す。 ［００４３］

【表４】 群　　　　　　　　　　血清から　　　　　　　　　腸
管液からＩｇＧ　　　　　　　　ＩｇＭ　　　　　　　
　ＩｇＡｄ２９　　　ｄ４、Ｏｄ、２９　　　　ｄ４０
　　　　　ｄ４０１　　　７７　　　６８　　　　５４
　　　１０１　　　　　　２２　　　９６　　　７８　
　　　３７　　　　６６　　　　　　３３　１４２７　
１２１３　　　　７１　　　　９４　　　　　２５＊　
　　　　　　　　　　　　＊ ４　２３６５　３１８０　　　２１９　　　３６０　　
　　　３１８値ｐ＝０．０６５ 値ｐ　＝０．０１４ ［００４４］ ２９日および４０日に取り出した血清はワクチンを与え
、免役刺激剤Ｃ（本発明、群４）を含有する水を飲用し
たマウスに対しワクチンのみを与えたマウス（対照、群
３）に関しＩｇＧおよびＩｇＭ抗体の濃度に約２〜３又
はそれ以上でさえの率の増加を示すことが分る。対照的
に、これらの群３および４のマウスではＩｇＡ抗体の濃
度間にほとんど差はない。 ［００４５］ 例立 牛乳に１ｍｌにつきＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｂ
ｕｌｇａｒｉｃｕｓの約１０　細胞を含有する市販品の
純粋種子培養体の３容量％を接種する。こうして接種し
た培養体は４０℃で５時間インキュベートする。１ｍｌ
につきこの微生物の約１０８細胞を含有し、４．６のｐ
Ｈを有するり、ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓの純粋培養体を得
る。 ［００４６］ ２０μｇ／ｍｌのレンネットリゾチームを培養体に添加
し、次に２５℃で１２時間インキュベートする。 ［００４７］ レンネットリゾチームで加水分解することによりり、ｂ
ｕｌｇａｒｌｃｕｓの１０　細胞の壁からペプチドグリ
カン由来のＮ−アセチルムラミルペプチド／ｍｌを含有
する免役刺激剤をこうして得る。 ［００４７】 例↓ Ｌ、ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓの純粋培養体を例３記載と同
じ方法で製造する。 ［００４９］ 約４％リゾチームを含有する１％液体レンネット自体を
培養体に添加し、次に２０℃で８時間インキュベートす
る。 ［００５０１ レンネットリゾチームによる加水分解によりり、ｂｕｌ
ｇａｒｉｃｕｓの１０８細胞の細胞壁のペプチドグリカ
ン由来のＮ−アセチルムラミルペプチド／ｍｌを含有す
る免疫刺激剤をこうして得る。 ［００５１） 例】 牛乳に市販品の培養体から得たＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌ
ｕｓ　　ｂｕ１ｇａｒｉＣｕｓ＋７）約５−１０７細胞
／ｍｌおよび５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　ｔｈｅｒ
ｍｏｐｈｉｌｕｓの約２・１０８細胞／ｍｌを含有する
５容量％の混合種子培養体を接種する。約２−１０７／
ｍｌのｂｕ　Ｉｇａｒ　１ｃｕｓ細胞および約１０８７
ｍ１のＳ、　　　ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｌｕｓ細胞を含
有するヨーグルトを４３℃で３時間のインキュベーショ
ン後得る。 ［００５２］ ５０μｇのレンネットリゾチームをこのヨーグルト／ｍ
ｌについて添加する。次にヨーグルトは２５℃で１２時
間インキュベートし、４℃に冷却する。 ［００５３］ レンネットリゾチームによる加水分解により２・１０７
Ｌ、ｂｕ１ｇａｒｉｃＵＳ細胞の壁からペプチドグリカ
ン由来のＮ−アセチルムラミルペプチドを含有し、免役
刺激剤の性質を有するヨーグルトタイプの生成物をこう
して得る。 ［００５４］ 肚 ヨーグルトを例５記載と同じ方法で得る。４％リゾチー
ムを含有する１％液体レンネットをこのヨーグルトに添
加し、次いで２５℃で２４時間インキュベートする。 ［００５５］ レンネットリゾチームによる加水分解により２・１０７
１０７ｂｕ１１ｃｕｓ細胞の細胞壁からのペプチドグリ
カン由来のＮ−アセチルムラミルペプチドを含有し、免
役刺激剤の性質を有するヨーグルトタイプの生成物をこ
うして得る。 ［００５６］ 例Ｊ ゾチームによる加水分解によりり、ｂｕｌｇａｒｉｃｕ
ｓの細胞壁からのペプチドグリカン由来のＮ−アセチル
ムラミルペプチドの豊富な免役刺激剤を表わす。 ［００５７］ 例旦 チーズ製造からのスイートホエイにＬａｃｔｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ　　ｂｕｌｇａｒ　１ｃｕｓの種子培養体を接
種し、次いで４２℃で６時間インキュベートする。 ［００５７】 ２５℃に冷却後、４％リゾチームを含有する１％レンネ
ット自体を添加し、２５℃で１８時間インキュベートす
る。 ［００５９］ こうして得た免役刺激剤はレンネットリゾチームによる
加水分解によりり、　　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓの細胞壁
からのペプチドグリカン由来のＮ−アセチルムラミルペ
プチドが豊富である。

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】リゾチームに感受性を有する乳酸菌の細胞
   壁からのペプチドグリカンをリゾチームにより加水分解
   することにより誘導したＮ−アセチルムラミルペプチド
   を含有する免疫刺激剤。
2. 【請求項２】リゾチームに感受性を有する細菌はＬａｃ
   ｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓである、
   請求項１記載の免疫刺激剤。
3. 【請求項３】グラム陰性の腸病原性細菌に対し免疫応答
   を刺激する、請求項１記載の免疫刺激剤。
4. 【請求項４】Ｅ．ｃｏｌｉに対し免疫応答を刺激する、
   請求項１記載の免疫刺激剤。
5. 【請求項５】リゾチームに感受性を有する乳酸菌の細胞
   壁からのペプチドグリカンをリゾチームにより加水分解
   してそこからＮ−アセチルムラミルペプチドを誘導する
   ことを特徴とする、免疫刺激剤の製造法。
6. 【請求項６】リゾチームに感受性を有する乳酸菌はＬａ
   ｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓである
   、請求項５記載の方法。
7. 【請求項７】リゾチームは純粋形又はレンネット自体の
   形のレンネットリゾチームである、請求項５記載の方法
   。
8. 【請求項８】リゾチームは卵白のリゾチームである、請
   求項５記載の方法。
9. 【請求項９】加水分解するｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ細胞は
   牛乳又は合成培地にこの微生物の種子培養体を接種する
   ことにより製造し、こうして接種も培地は３７〜４５℃
   で３〜６時間インキュベートする、請求項６記載の方法
   。
10. 【請求項１０】加水分解工程はリゾチームに感受性を有
    する乳酸菌の１０＾６〜１０＾１＾０細胞／ｍｌを含有
    する１〜５００μｇリゾチーム／ｍｌ培養体を使用して
    １５〜３７℃で１〜２４時間行なう、請求項５記載の方
    法。
11. 【請求項１１】醗酵乳、特にヨーグルト又はホエイ製品
    に使用する、請求項１記載の免疫刺激剤の使用。
12. 【請求項１２】醗酵乳、特にヨーグルトの製造に、又は
    ホエイ製品の製造に使用する、請求項５記載の方法の使
    用。