JPH03179237A - フローサイトメータ用の捕獲管分類装置及びその方法 - Google Patents
フローサイトメータ用の捕獲管分類装置及びその方法Info
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Abstract
め要約のデータは記録されません。
Description
可能である捕獲管を備える粒子流のフロースルー装置の
ための捕獲篭分類装置に関し、特に、所定の特性に従っ
て粒子を分類するこのような捕獲篭分類装置によってシ
トメータ(細胞測定装置)を通って流動する粒子の1又
は2以上の特性を判定するフローシトメータに関する。
明の一部に属する。
来る分析オリフィスを通って流動する流体力学的に収束
された流れを利用するフローシトメータ装置及び技術に
基づく多数の細胞又は粒子分析装置がある。粒子のフロ
ー分析は、個人個人の各種の特性を判定するために使用
されている。
ある情報を得るために細胞の性質を判定する上で最も有
用である。例えば、研究者は、こうした細胞を分類し、
同定し、定量化する必要がある場合、更に研究又は分析
をするために分類することが望ましい場合、個人個人の
細胞の特定の性質を判定することに関心がある。
フローシトメータは、カリフォルニア州、サナゼイのベ
クトン・ディッキンソン・イムノシトメートリ・システ
ムズ・インコーホレイテッド(Becton Dick
inson Immunocytometry Sys
tems)から販売されているFAC3can (登録
商標)計器のようなものが公知である。FAC3can
計器は蛍光及び光の散乱の特性を基にして、細胞を迅速
に分析するものである。分析は、懸濁液中の細胞を収束
された液体流の中心に導入し、これによって、細胞が一
時に一つずつ高出力のレーザからの収束された光を通っ
て進むようにして行われる。各細胞は、その光の散乱信
8により、及び照射されている間に放出される蛍光の強
度及び色によって個々の特性が判断される。
数能力と関係するオリフィスを通るときに粒子又は細胞
を集束させる。米国特許第4.503゜385号及び同
第4.526.276号は、流れの中を流動する粒子が
鞘液体中に収容され、これが、液体標本を(粒子又は細
胞と共に)収束させかつ流れの中心に到じ込めるように
する、粒子の分析システムを記載している。米国特許第
4.110.604号は、流れ中を流動する粒子が鞘液
体内に収容され、該鞘液体が液体試料を(粒子と共に)
収束させかつ流れの中心に封じ込める、粒子の密度測定
システムを記載している。
、電気的に作動されるポンプ、注射器ポンプ等を該シス
テムの流体中に使用して、液体及び粒子をフローセル分
析オリフィス及び通路を通って動かす。
る鞘液体中に中心決めされた試料吸い上げ毛細管を通じ
て試料試験管からの粒子と共に液体を強制し又は吸引す
ることである。本出願人は、粒子による目詰りがないこ
とを特徴とするフローシトメータ用のハウジングを開示
する、1988年12月12日付けにて発行された米国
特許第4.790.653号を有している。1987年
11月25日付けで出願された米国特許出願第125.
098号は、差圧によって制御された鞘粒子流れを開示
しており、1988年4月29日に出願された米国特許
出願第188.582号は、逆流隔離装置及び捕獲シス
テムを開示している。これら特許の全ては本発明にとっ
て有用である。
0−911. November (1965)におけ
るM、 J、 フルワイラ−(Fulwyler)に
よる「体積による生物学的細胞の電気的分離」、又はN
uclear 5cience N5−21のIEEE
翻訳版、 PP、714720 (1973)における
「高速度の細胞分析及びフローンステムのよる分類;生
物学的応用及び新たなアプローチ」において、光学電気
的システム内における所望の特性を検出した後、粒子を
含有する水滴の放出の少し前に、懸濁流を適当な装置に
よ−て荷電する装置を記載している。数千ボルトlCI
+の極めて極めて強力な静電界が、極性及び水滴の電荷
に依存して、水滴を包含する2又はそれ以上の粒子流を
破断させ、各種の分割された流れが異なる小さい容器中
に集められる。粒子を静電気によって分離する型式の粒
子分類装置は、米国特許第3.380.584号、同第
3.710.933号、同第3.826.364号、同
第4.148.718号、同第4.230.558号及
び同第4.138.480号に記載されている。
子分類装置は、同一の電気極によって荷電された粒子を
それぞれその収集ウェル内に集める。その結果、収集ウ
ェル自体が、集められた粒子の電気的極性を備えること
になる。収集ウェルのかような電気的荷電が実現された
ならば、同一極性の流入する粒子は、同様の性質の電荷
を分離させる働きをする静電力によって偏向される。収
集内に接地線を設けることにより、電荷を除去すること
は公知である。これらの分類装置は、危険な粒子を分類
するとき、付近の人に対する生物学的危険を回避するた
めに収容しなればならないエーロゾルを発生させる可能
性がある。
学的な特性に従って粒子又は細胞を分類し、粒子の懸濁
流を偏向させ、異なるチャネル内に流動させる電解質の
ガス圧力を利用して、粒子を分析した後に分類する方法
及び装置を開示している。この分類装置は、レーザビー
ムによって粒子の流れが乱れ、これによって、粒子の光
学的分析が妨害される可能性がある。
粒子の損傷を防止するため、粒子の偏向を利用せずに容
易に適用可能な分類装置が必要とされている。上記に鑑
み、フローシトメトリー試料中における粒子を分類する
ための改良した技術が依然として求められている。分類
機器を簡単にし、かつかかる機器をフローシトメータ又
はその他の粒子分析装置に適用可能にすることが必要と
されている。生物学的に危険であるエーロゾルを回避し
、かつ分析装置の光学的整合を妨害する圧力パルスの発
生の回避に関する改良が必要とされている。本発明はか
かる改良を目的とするものである。
粒子用の通路を有するフローシトメータ用の捕獲管分類
装置を備えている。該通路は分析部分、予分析部分及び
後分析部分を備えている。
共に、粒子の試料を含有する粒子源に流体連通し、粒子
源からフローシトメータの分析部分内まで伸長する流路
を提供し得るようにされている。
ーシトメータの分析部分を通って流動した後、分析され
た粒子を間欠的に受け取り得るように分析部分と流体連
通状態に選択的に位置決め可能であるように取り付けら
れる。操作者が1又は2以上の粒子の特性に関する分析
部分からの入力信号を受け取り、捕獲管を動かしてフロ
ーシトメータの分析部分と流体連通させる。
入され、通路の軸線に沿って分析部分に向は粒子の鞘流
れを提供する。1つの好適な実施形態において、フロー
シトメータは、一時に略1つの粒子が分析部分を通って
通過するのを許容し得るような寸法としたオリフィスを
有するフローセルを備え、入力信号が1又は2以上の粒
子の特性に対して光学的に応答するようにしたものであ
る。後分析部分は捕獲管を中心として配設されており、
該捕獲管内に選択的に捕獲されなかった粒子を受け取り
かつ該管から吸引する。好適な実施形態において、入力
信号は、捕獲管を分析部分と流体連通状態に選択的に位
置決めするのに十分な強さ及び持続時間を有するパルス
である。本体部材に取り付けられかつ捕獲管と関係する
ドライバが入力信号パルスを受け取り、捕獲管を分析部
分と流体連通ずるよう少なくとも部分的に整合状態に位
置決めする。捕獲管は、軸線を有しており、その軸線を
分析部分と少なくとも一部分整合する位置まで動かし得
るよう本体部材上に担持されている。
に対する捕獲管分類装置は、分析領域を有する貫通路が
形成された本体部材を備えており、装置の作動中、一時
に略1つの粒子が該分析領域を通って流動方向に流れる
ことが出来る。通路と流体連通状態に接続された粒子の
供給源が、分析領域に対して一時に略1つの粒子を提供
する。鞘液体が通路内の粒子の供給源に対し供給され、
粒子を液体に対し水力学的に集束させる。
本体部材上に支持することが望ましい。
該捕獲管手段が分析領域からの粒子の無い流れと整合す
る位置から分析領域からの粒子流れと略整合する位置ま
で位置決めすることが出来る。
れた型式の粒子に作用可能に応答する。制御手段は、粒
子流に対して略整合及び非整合状態となる位置間にて捕
獲管を動かし得るよう配設することが出来る。
応力が加えられる弾性的な支持体を備えることが出来る
。同様に、制御手段は、分析領域を通る1又は2以上の
粒子の少なくとも1つの特性に応答して、制御手段内の
ドライバを作動させ、これにより弾性的な支持体を屈曲
させる。
におけるさらに別の構成において、軸線に沿って、該通
路は、分析部分、予分析部分及び後分析部分を備えてい
る。吸い上げ管が、分析部分の付近にて通路の予分析部
分内に位置決めされた内端、及び本体部材の外方向に伸
長しかつ液体及び粒子を保持する試料供給源内に挿入さ
れた外端を備えている。吸い上げ管は、粒子を分析部分
の方向に通過させる貫通して伸長する内腔を有している
。一時に略1つずつの粒子が通過することを許容し得る
寸法としたオリフィスを有するフローセルが、分析部分
内に設けられている。後分析部分内には、フローセルか
らの出口と選択的に整合し得るように捕獲管分類装置が
取り付けられている。
かし、分析部分を通る捕獲管及び軸線を略整合させるこ
とによって分析部分と流体連通状態にする。捕獲管はそ
の軸線に対して細長いことが望ましく、可撓性の支持体
が捕獲管を本体部材に取り付け、捕獲管の軸線を通路の
軸線と再整合させる位置まで捕獲管を運び、これら軸線
が相互に略平行となるようにする。
え、該捕獲管の中央部分と本体部材との間には、可撓性
の支持体が取り付けられており、これにより、捕獲管が
該捕獲管の軸線に沿った一点を中心として枢動可能であ
るようにする。捕獲管は旋回し、フロルセルから通路の
軸線に対し整合状態にて一時に1つCつの流れ状態にて
通過する粒子と軸方向に整合した略平行状態となり、こ
れら軸が相互に直線状の同軸状となるようにする。
されたドライバを有しており、他端を動かして粒子流と
同軸状に整合させる。
う1つの形態であり、ここにおいて、液体中で運ばれた
粒子の試料は、液体に加えられた空気圧力により運ばれ
る。この方法は、分析装置の分析領域を通る封子の1又
は2以上の特性を示す信号を発生させる段階と、該信号
をドライバに付与し捕獲管の位置を変え、捕獲管が動い
て1又は2以上の特性を有する粒子を受け入れ得るよう
にする段階とを備えている。
、捕獲管の支持体を屈曲させ、分類しようとする1又は
2以上の特性を有する、粒子分析装置を通過する粒子と
略整合状態にする段階を備えている。分析領域を通過す
る粒子の1又は2以上の特性を示す信号を発生させる段
階は、光を使用し分析領域を一時に1つずつ通過する粒
子を分析し、電気的信号を提供する段階を備えることが
出来る。光を使用して分析領域を一時に1つずつ通過す
る粒子を分析し信号を提供する段階は、ドライバに信号
を付与し、捕獲管の位置を変更する段階を備えることが
出来る。捕獲管の支持体を屈曲させ、該捕獲管を粒子と
整合させる段階は、−点を中心として捕獲管を枢動させ
る段階を備えることが出来る。
とが出来るが、本発明の好適な実施例を図面に示し、以
下詳細に説明する。但し、以下の開示は、本発明の原理
の一例にしか過ぎず、本発明を図示した実施例にのみ限
定することを意図するものではない。本発明の範囲は特
許請求の範囲及びその均等物によって判断されるべきで
ある。
の特性を判定する本発明のフローシトメータ装置10が
図示されている。この装置10は以下に説明するように
粒子又は細胞検出及び分析要素を備えるよう構成された
液体試料採取コンソール12を備える細胞分析装置とす
ることが出来る。特に、該装置10は以下に説明するよ
うに粒子、散乱光及び蛍光測定構成要素を収容するよう
構成された液体試料採取コンソール12を備えているが
、該液体試料採取コンソール12は、分析コンソール1
3とは分離している。分析コンソール13は、電気的構
成要素、デイスプレィスクリーン及び装置10の制御及
び機能に関するその他のデータ情報を備えている。液体
試料採取コンソール12は、第1図に図示するように、
分析しようとする粒子を含有する流動する液体流を提供
し得るようにしたハウジング14の形態のフローマニホ
ルド組立体を備えている。この装置において、分析しよ
うとする粒子は、粒子供給源又はハウジング14上に密
封可能に係合し得る試験管15内に包含することが出来
る。ハウジング14について詳細に説明する前に、フロ
ーシトメータ装置10の光学的及び流動構成要素の一般
的説明をする。
光学的及び粒子の流動構成要素が図示されている。第2
図の光学的及び流動構成要素は、細胞等のような粒子を
液体流中にて、一時に略1つずつ動かし、これら粒子の
特定の特性を測定するためのフローシトメトリー装置1
0の主要な構成要素を示す。例えば、第2図の装置の構
成要素は、カルフォルニア州すナゼイのベクトン・デイ
・ソキンソン・イムノシトメトリー・システムズから製
造販売されているFAC3can分析装置に含め、様々
な研究実験のため散乱光及び蛍光を基に細胞学的研究に
利用することが出来る。より詳細に説明する光学的及び
流動構成要素は、上記FAC8can分析装置に具体化
することが出来る。本発明は、散乱光、粒子の体積、蛍
光又はその他の光学的パラメータを測定し、液体試料媒
介中の細胞等の同定又は定量化層であるかどうかを問わ
ず、多くの異なる型式のフロー蛍光又はフローシトメト
リー装置に有用である。
装置10に対する光の入力は単一の波長又は多数の異な
る波長にて直線偏光平行光ビーム17を提供するレーザ
のような光源により提供される。これとは別に、光源1
6は水銀またはキセノンのような広スペクトルのアーク
灯とし、光源16により形成される励起光路18内に偏
光手段を設けることが出来る。典型的に、装置10は、
又光ビーム17を検査中の粒子又は細胞を包含する液体
流20に集束するレンズ19を備えている。
ズルは、液体流20中の細胞又は粒子の流れを促進する
。ノズルの使用は周知であり、例えば、米国特許第3.
826.364号に記載されている。
の液体流20中に水力学的に集束された細胞流を提供す
る。各細胞又は粒子は、集光ビーム17が液体流20と
交錯する箇所を通過するとき、これにより散乱される光
によって検出される。
所を通過するとき、細胞又は粒子によって散乱される光
を適当なシリコン発光ダイオード21によって検出する
ことが出来る。同様にして1、光源からの照射によって
励起された粒子により蛍光が発生されるならば、かかる
蛍光を同様に検出することが出来る。液体流20中の自
動蛍光粒子又は蛍光標識又は着色された粒子により発生
される蛍光を検出することが出来る。
って前方に散乱された光を受け取り得るように位置決め
されている。光源16からの照射によって励起された細
胞により蛍光が発生されるならば、かかる蛍光を同様に
検出することが出来る。同様にして、前方以外の異なる
方向に散乱される光を検出することも出来る。レーザ励
起によるフローシトメトリーにおいて、蛍光及び角度の
広い散乱光は、典型的に、光ビーム17の励起軸線に対
する視覚軸が90°となる角度にて集光される。第2図
において、軸線22は蛍光及び広い角度の散乱光を集光
し得るように、90°の視覚アクセスを示す。このよう
にして、軸線22に沿って進む光は、その構成要素とし
て蛍光及び散乱光の双方を包含している。
光し得るようにするためには、散乱光及び蛍光は、分離
し又は分割することを要する。かかる分割を行うために
は、二色フィルタ又はビームスプリッタ23を使用して
、90°の角度にて散乱光及び蛍光の双方を受光し、そ
の各構成要素を異なる方向に方向変えすることを要する
。かかる散乱光及び蛍光の方向の変更により、双方共に
、900にて放出された場合でさえ、散乱光及び蛍光を
別個に集光させることが出来る。
することが出来る。蛍光が多数の異なる色領域を備えて
いる場合、二色ミラー23を使用して、異なる色波長を
分離させることが出来る。
沿って二色ミラー23により伝送し、適当な光検出器2
7に集めることが出来る。米国特許第4.662.74
2号に記載されているように、付加的な二色ミラーを含
め、蛍光色は分析される細胞又は粒子の付加的な特性と
関係付けることが出来る。
、各種のレンズ、フィルタ、バリヤー等を使用して、可
能な限り純な信号が得られるようにすることが出来るこ
とを理解し得よう。かかる光学的に清浄な信号を得るこ
とは、特に、第2図に図示した装置におけるように、蛍
光及び散乱光チャネルを使用する場合に最も望ましいこ
とである。
細胞又は粒子の1又は2以上の特性が以下に説明するよ
うに、判定され又は分類し得るように、デイスプレィ2
9、記憶又は更に別の処理豐+回路値夏 を目的として、装置の篭葎28に別個のパルスとして供
給されるようにする。電子回路装置28は、所望であれ
ば、分析コンソール13内に包含することが出来る。
詳細がより明確に図示されている。該ハウジング14は
、説明する実施例において、ブロック又は矩形の角柱体
の形態とすることが望ましい本体部材30を備えている
のが分かる。図面に図示していないが、ハウジング14
がブロックの形態であることは、該ハウジングをフロー
シトメータ装ff1lO内に取り付けるのが容易である
。分析部分32a1千分析部分32b1及び後分析部分
32cという3つの領域により画成された通路32がハ
ウジング14を通って伸長している。第3図に図示する
ように、通路32のすれら分析部分32a1千分析部分
32b1及び後分析部分32Cは、本体部材30を通る
軸線A上にあり、矢印で示した通路32を通る粒子の流
動方向に対して上記の順序にて配列されている。
部材30内に伸長する線対称状の孔とすることが望まし
い。通路の予分析部分32bは、通路の分析部分32a
の方向を向いたその狭小な端部を有する截頭円錐形の通
路を画成するテーパ付きの壁34を備えることが望まし
い。
分析を容易にするフローセル又はフローチャンバ35を
通路の分析部分32a内に位置決めすることが望ましい
。フローセル35は、矩形の断面を有し、一時に略−つ
の粒子が通過するのを許容し得るように寸法決めされる
ことが望ましいオリフィス36を備える。光ビームがオ
リフィス36により画成された領域と交錯するとき、粒
子は、光ビームを通過し、これらよって、検出可能であ
る光に関係する信号の基礎を画成する。
を照射する光エネルギが利用可能であるようにするため
、ハウジングの本体部分30は第2図に図示するように
凹所38を備え、該凹所38内にレンズ組立体19を位
置決めし、該レンズ組立体19がフローセル35に隣接
して位置するようにする。第2図に示唆されたこの配設
形態は、分析中の粒子を検査するための光エネルギを提
供する技術と一致する。光は、フローセルを通過する粒
子の上記方向に対して略直交又は直角にレンズ組立体に
よって方向決めされる。該レンズ組立体19は、オリフ
ィス36を通る粒子上に入射光を焦点法めする集光レン
ズ組立体内に1又は2以上のレンズを備えると共に、入
射ビーム18により照射された粒子からの蛍光のような
光を受け取ることが出来る。勿論、本発明は、粒子から
の光が入射光ビームの軸線に対して任意の方向で検知さ
れるようにする。
を集光し、又は粒子により吸収された光エネルギを検出
するため所望の角度にて位置決めされている。この目的
のため、第3図に図示するように、1又は2以上のウィ
ンド40が本体部材30を通ってフローセル35内に伸
長し、光が該フローセル35を通って光検出器要素によ
って集光される。一方、本体部材30が十分な光透過性
を備え、光が検出するのに十分な強度にて通過し得るな
らば、かかるウィンドを設ける必要はない。
セルは洗浄、交換が必要である場合に本体部材30から
取り外し得るようにすることが望ましい。
通ずる第1のチャネル42を備えている。
側部ブロック44を通って伸長し、このため、該チャネ
ルは通路32の軸線A対して略直角となる。側部ブロッ
ク44は、拡大する導管に接続し、該導管は、予分析部
分32bに入る流体の速度を遅くし、これによって、流
体流の方向の変更に伴う乱流を軽減する。流体コネクタ
46は、その内腔48がチャネル42と流体連通し得る
ように側部ブロック44上に位置決めされている。
し、特に、フローセル35を通って流動する粒子を包み
込む液体を導入するための通路を提供することである。
することは周知であり、上記の米国特許に記載されてい
る。鞘液体は一般に空気によって加圧され、典型的に、
10乃至20 mlの流量、及び0゜5乃至10psi
の圧力にてチャネル42を通って流動する。鞘流体は、
通常、実質的に粒子を含まない塩水であり、分析に対し
て障害とならないようにされる。
る別のチャネル50が通路の後分析部分32cと連通し
ている。
することが望ましい。貫通する内腔54を有する流体コ
ネクタ52がチャネル50と流体連通している。チャネ
ル50の目的は、粒子及び液体が通路の分析部分を通過
した後、ハウジング14から出るための1つの出口を提
供することである。チャネル50は、その内端55が通
路の後分析部分32cに対して開放していることが望ま
しい。
有する中空の吸い上げ管58を通って運ぶことが望まし
い。吸い上げ管58は、通路32の軸線Aに略沿って伸
長し、通路の予分析部分32内に配置された内警ヒ有す
る。吸い上げ管の内端60が通路の予分析部分32b内
の流体速度の遅い領域内にあるようにするため、内端6
0は予分析部分32bの傾斜壁34内に位置決めするの
が好ましい。吸い上げ管58は、本体部材30の外方向
に伸長する外端62を有している。ノ1ウジングの本体
部材は、円形の伸長部64を備えることが望ましく、管
58が、本体部材の外方向に伸長する前に、該伸長部6
4を通って伸長する。気体密の密制を実現するシール部
材65又はその他の構成要素は、円形の伸長部64の周
囲に位置決めされる。第3図及び第4図において、試験
管15は伸長部64内に嵌まり、シール部材65が試験
管と本体部材の伸長部64間の気密密封を促進し得るよ
うに位置決めする。試験管15は、試料採取液66及び
分析しようとする粒子68を包含している。鎖管の外端
62は試料採取液66内まで伸長している。
するため、本体部材30の凹所内に受け入れられたOリ
ングの形態による一対のりングガスケット70備えてい
る。
5の内部と流体連通している。内腔75が調節された加
圧空気又はその他の液体の供給源と流体連通し、試験管
15内への圧力の駆動力として機能し、このため、試料
採取液体66及び粒子68が吸い上げ管58の内腔59
を通って通過することが出来る。通常、空気は鞘液体を
チャネル42を通じて駆動するのに付与される圧力より
も僅かに高い圧力にて内腔75を通じて供給される。好
適な実施例において、調節された空気圧力は、1.0マ
イクbリットル/秒又は0.20マイクロリットル7秒
の高流量又は低流量を選択してそれぞれ5.0psi又
は4.0psiの圧力に制御することが出来る。
分析部分32b内に入る。ここで、粒子及び試料採取液
体は、鞘液体によって包み込まれ、粒子は、第3図に図
示するように、略一時に一つずつフローセル35のオリ
フィス36を通って通過することが出来る。標本採取液
体(及び粒子)と鞘液体の合流によって、同軸状の二成
分の流れが形成される。分析しようとする粒子68を包
含する試料採取液体は、流動する流れの内側成分を形成
する。流れがフローセル35内に入ると、鞘液体及び標
本液体の速度が均衡し、粒子は、流れの中間にてフロー
セル36の壁から離れて水力学的に集束し流れの中心に
位置せしめられる。
ズ組立体19を通ってフローセルに入る光に応答して、
各粒子に対する光情報を求めることが出来る。粒子、試
料採取液体及び鞘液体が通路の分析領域を通過した後、
流れは連続しハウジング14の後分析部分32c内に続
く。
ソール上の制御装置によって手操作にて調節することが
出来る。典型的な試料の流量は、標本採取管を通って標
本採取液が02乃至1.0マイクロリツトルとなるよう
にする。更に、内腔75内の空気圧を調節して、フロー
チャンバを通る粒子の分析速度を制御することが出来る
。典型的に、分析量は、フローセルを通1で流動する1
0乃至1.000粒子/秒の範囲にある。通路32の設
計及び吸い上げ管58の位置決めは、液体がフローセル
35に向けて流動するとき、該液体の二成分の液体流に
対して最小の流れ抵抗及び乱流を提供し得るようにする
ことを目的とする。
0の略図が図示されている。この制御装置80は空気ポ
ンプ82を備え、該ポンプ82は鞘液体供給リザーバ8
6に対して約4.0psiの頭部圧力入力を提供し得る
ように調節された圧力調整装置84に接続されている。
の内腔48に運ばれるとき、該鞘液体から粒子物を除去
するフィルタ88に接続することが望ましい。
続され、使用される加圧された空気を調整して、鞘液体
66及び粒子68を吸い上げ管58を通じてハウジング
14の予分析部分32bに供給する。好適な実施例にお
いて、試料流量制御装置90は、内腔75を通じて試験
管15に付与される空気圧力を調整し、粒子68の高流
量又は低流量が所望であるかどうかにより、4 psi
又は5psiの圧力に設定される。予分析部分32cの
一部としての廃液リザーバ92は、内腔54に接続され
、通路32を通過した後の鞘液体及び粒子の一部を集め
る。分類された粒子は、以下に説明するように捕獲され
る。 第3図には、捕獲管分類装置93の詳細が図示さ
れている。第4図の略図には、全体的なシステムが図示
されている。特に、試験管15には、内腔75を通じて
駆動空気圧が供給され、吸い上げ管58の内腔59を通
じて粒子を動かす。分析部分32aの直後の後分析部分
32cには、細長い捕獲管94がある。捕獲管94は、
吸い上げ°管58を通って上方に伸長すると共に、オリ
フィス36を通る軸線Aに対して略整合して動くことが
出来得るように位置決めされている。捕獲管94は、テ
ーパ付きのセラミック先端を有する毛細管であり、軸線
Aに対して略平行にかつ略同軸状に動くことが出来る。
の軸線Bは捕獲管94の下端96と捕獲管94の上端9
7間に配置された点9.5を中心として枢動可能である
。
、カリフォルニア州ペテイルマのスモール・プリスイジ
ョン・ツールズ(Small Precisi。
amの釘頭毛細管結合チップモデルMS−60のよう
なアルミナセラミンクにて形成することが望ましい。
図に示したドライバ98により駆動されたとき枢動して
軸線Aと略同軸状に整合するが、捕獲管の軸線Bはドラ
イバ98により枢動され第5図に示した位置になるとき
、軸線Aから僅かな距離Cだけ離間されているため、軸
線Aと略同軸状になるに過ぎない。捕獲管94の入口、
先端又は下端96の内径150μmの部分は、内径18
0X430μmであるフローセル36の矩形のオリフィ
スと協働する。フローセル36のオリフィスの幅は43
0μmである。より大きい内径とすれば、捕獲管は粒子
68の一部を保持するオリフィス出口に溜まる流体を拾
いあげることが出来よう。より小さい内径とすれば、捕
獲管94の入口、先端又は下端96がより頻繁に詰まる
ことになろう。このため、捕獲管94の内径はフローセ
ル36のオリフィスの最小寸法に等しいか又はこれより
僅かに小さいようにする必要がある。勿論、オリフィス
36の出口の再循環する流体に代えて、粒子を含まない
液体を用いる場合、捕獲管94の内径はオリフィス36
の最小寸法よりも大きくすることが出来る。
管94は第6図に図示するように粒子流から離して又は
夏位して位置決めし、依然ブローセル36のオリフィス
から出る鞘流体内に完全に位置するようにすることが出
来る。これによりオリフィス出口にて再循環する流体が
捕獲管94に入り、該再循環する流体内に存在する粒子
によって集液管及びフィルタが汚染されるのを回避する
。
該ドライバ98の軸受It 99が上端97付近にて捕
獲管94に接触し1、捕獲管94を位置決めさせ得るよ
うに位置決めされている。好適な実施例において、軸受
け99は捕獲管94の上端97と点接触する球状の形状
をしている。点接触は、ドライバ98の力が軸線Bに対
して略直角となるように上端97に付与されたとき、捕
獲管94が点95を中心として枢動可能であるようにす
る。ドライバ98は、好適な実施例において、フィシツ
ク・インストラメンテ(Physik Instrum
ente)(PI) Gmbh & Co、のモデルP
−810,20PZTの変換器のような圧電装置であり
、該圧電装置は十分な強さ及び持続時間の100vの電
気パルスに応答し、長さ30μmの伸長部分を形成し、
軸受け99はドライバ98に対して動き、捕獲管94を
枢動させて軸線Aと略整合させる。ドライバ98の回路
は印加される電圧及び電流の最大値及びそれらの変動時
間速度を制御し、分類、流体及びドライバ98の特性に
対するその所望の位置、速度、加速度及び減衰程度を設
定する。好適なドライバ98は共振周波数15 KHz
、電気的容量0.8マイクロフアランド、定格剛性6N
/μ−である。捕獲管94は高共振周波数を実現するた
め低質量及び高剛性を備えるように構成する。好適な実
施例において、捕獲管94は約20 KH2の共振周波
数を有している。
て約7 KH2の共振周波数を有している。
図及び第3図に関してここに説明した検出器24により
粒子68を分析した後に得ることが出来る。励起パルス
の適当な増幅又は変調は当該技術分野の当業者の案出可
能な範囲であり、故にここに詳細に記載していない。好
適な変換器はコンデンサのように充電及び放電すること
により約(000回/秒のピーク速度にて作動すること
が出来る。板ばね100が軸受け99を縦断して本体部
材30上に取り付けられており、捕獲管94の上端97
を軸受け99に押し付ける。ドライバ98からリード線
が伸長し電子回路装置28と電気的に接続されて上記の
作用を行う。
8がドライバ98の励起前、レーザにより検出された位
置から捕獲管94まで動き得るようにしである。この遅
延時間は、粒子68の移動時間を設定する。好適な分類
装置93において、ドライバ98は約500μSeCに
て励起され、所望の粒子がレーザビームを通過して検出
された後、約700μseCにて非励起状態とされる。
させ、流体温度、供給タンク26の圧力又は後分析部分
内の背圧の変化に起因する粒子流の速度の変化を補正す
る。これは、粒子68がレーザビームを通る移動時間を
測定し、その時間を利用して遅延時間を設定することに
より行われる。
ことも出来るが、軸受け99に着接して位置決めし、ド
ライバ98の30 amの動きを増幅し、第3図、第4
図、第5図及び第6図に図示するように、捕獲管の端部
96の動きが100μm以上となるようにすることが望
ましい。可撓性の薄い金属製ダイヤフラムの形態をした
弾性的な支持体101が、点95の高さにて本体部材3
0及び捕獲管94間のスペースを跨ぎ、軸線Bの上述の
枢動を許容する。好適な弾性的なフランジ付き支持体1
01は、ヘリリウム銅等のようなばね材料にて形威し、
肉厚約0.25mmとし、これにより、点95を中心と
して屈曲することにより弾性的支持体101に僅かな応
力が加わるようにしであるため、ドライバ98からの力
は極く小さくて済む。
体101のダイヤフラムに約70.000 psiの曲
げ応力を生じさせる。故に、システムの慣性力は最小で
あり、共振周波数は高く、捕獲管94の急速な動きを可
能にし、このため捕獲管94は以下に説明するように、
分析オリフィス36を通過した粒子68から所望の粒子
を捕獲しかつ選択的に分類し得るよう位置決めすること
が出来る。
面図で図示されている。一対の直立フランジ102が弾
性的支持体101を本体部材30に取り付ける。第3図
の部分断面図には、これら直立フランジの1つのみが図
示されている。弾性的支持体101が接続される上端9
7は、ステンレス鋼であるため、弾性的支持体のベリリ
ウム銅の取り付けは、一対の圧力ばね金属リング103
にて行うことが出来る。リング103が捕獲管94の断
面部分の周囲に位置決めされており、弾性的支持体10
1は、これらリング103の間に挟持状態に捕捉されて
いる。捕獲管94の下端96は、説明したように、分類
中に整合されたとき、捕獲管94の働きにより粒子68
をきれいに分離させ得るようテーパを付けることが望ま
しい。
に位置決めすることにより対象とする粒子を選択的に捕
獲するための最適な位置が得られる。弾性的支持体10
1は、本体部材30及び弾性的支持体101間の○リン
グ104によって捕獲管94の周囲のスペース内にて通
路32を閉塞しかつ密封するため、捕獲管94が軸方向
に整合されていないとき、後分析部分32Cからの粒子
の流れの出口は、リザーバ92に対するチャネル54を
通ることになる。
略図的に図示されている。ドライバ98により枢動され
て第5図に図示するように軸線Aと略同軸状になるとき
、軸線A、Bは正確に同軸状に整合せず、距離Cを置い
て離間される。軸線A、Bが完全に整合せずに幾分変位
することにより、捕獲管の下端96は軸線Aと略同軸状
の粒子流から所望の粒子を集めることが可能となる。変
位又はオフセット距離Cにより、動くべき距離が短くな
るため、捕獲管94の動作時間を短く維持することが可
能となる。このため、分類装置93の応答時間は短くな
り、第5図に図示するように粒子の急速な分離が促進さ
れる。
周囲に取り付けられており、捕獲管94の動きにより分
類されたシーズ流体及び粒子68を運ぶことが出来る。
液を集液システムlO6まで運ぶ。集液システム106
は、分類された粒子を集めるためのフィルタ107を備
えている。このフィルタ107は真空源108の作用を
受け、該真空源108は粒子懸濁液から液体を除去し、
粒子のみがフィルタ107上に残るようにする。真空源
108は、エーロゾルがフラスコ111から逃げるのを
防止すると共に、液体が真空システム108に入るのを
阻止する。通常開放したピンチ弁110を利用して、可
撓性の出口管105を選択的に閉塞させることが出来る
。プラスコ111は液体を集めるためのトラップとして
使用される。これとは別に、分類された粒子の希釈した
懸濁戚は、ホース105の端部を容器内に位置決めし、
その後遠心力により濃縮し又は培養又は分析のため直接
使用することが出来る。捕獲管分類装置93の使用は容
易である。調節は全く不要である。粒子はフィルタ上に
集められ直ちに培養し又は顕微鏡で検査することが出来
る。捕獲管による分類は、圧力の乱れによって分析を妨
害されることなく、又ガスにより流れの2つの成分(集
められた成分及び集められない成分)が汚染されること
がない。捕獲管の動作時間は適正に設定する必要がある
。粒子がその分析部分から捕獲管に最初に入る位置まで
動くの&;要する移動時間は約600μSeCである。
ら別の位置まで動かすのに要する時間の変化を実現可能
にするため、ドライバ98を最初に励起させ(約500
μsecにて)及び遅れて非励起状態とする(約700
μ5ec)。この追加的な時間により、粒子は捕獲管内
に十分穴る、即ち捕獲される。その他の信号を利用して
、移動時間の変化に合わせて自動的に補正することが出
来る。さらに、レーザビーム移動時間、フローセルの圧
力低下、シーズ液の流量、捕獲管の衝撃圧力、シーズ流
体の温度等又はその組み合わせを採用することが出来る
。
明の別の形態である。この方法は、装置10の分析オリ
フィス36を通過する粒子68の1又は2以上の特性を
示す信号を発生させる段階と、該信号をドライバ98に
付与して捕獲管94の位置を変化させ、捕獲管94が動
いて、1又は2以上の所望の特性を有する粒子を受け取
りかつ分類する段階とを備えている。
を変化させる段階は、捕獲管94の弾性的支持体101
゛を屈曲させ捕獲管94の軸線Bをオリフィス36から
出る粒子と略整合させる段階を包含している。オリフィ
ス36から出る粒子の1又は2以上の特性を示す信号を
発生させる段階は、レーザ16からの光を利用して、フ
ローセルのオリフィス36を一時に1つずつ通過する粒
子を分析する段階を備えている。電気的信号を付与する
段階は、該信号をドライバ98に付与し、弾性的支持体
101を屈曲させることによって捕獲管94の位置を変
化させ、捕獲管94をその下端96及び上端97間の点
95を中心として枢動させる段階を包含している。
置の重要な利点は、生物学的に危険なエーロゾル又は飛
散を無くし、全てが製造時に設定されるため、部品の整
合又は電子的タイミングを設定する必要がないことであ
る。同様にして、高電圧の充電偏向システムが不要であ
り、水滴の破断を測定する顕微鏡的な測定又はタイミン
グ装置も不要である。故に、この装置は低度に製造する
ことが出来る。装置93の全体は、粒子分析器に対して
分類機能を付与する簡単な方法を実現するものである。
なるようにする等の枢動以外の方法にて捕獲管94を再
整合させることも本発明の範囲に属するものである。管
の支持体は必須の動きが可能であるように適当に変形さ
せることを要する。
多くの変形例及び改良が可能であることが理解されよう
。捕獲管93が適用可能である基本的な装置は、多数の
形態を取ることが出来る。捕獲管分類装置93は容積(
インピーダンス)オリフィスのような(単に一例であり
、限定するものではない)その他の任意の形態又は分析
器、カウンタ等の後に使用することが出来る。
徴を判断する捕獲管を有するフローシトメータの好適な
実施例の斜視図、 第2図は細胞等の1又は2以上の特徴を判断する本発明
のフローシトメータの光学的要素及び光路の好適な実施
例を示す略図、 第3図は第1図の線3−3に沿った本発明の好適なフロ
ーハウジング及び捕獲管分類装置の拡大断面図、 第4図は制御装置と第1図の分析装置との接続部を含む
、捕獲管の分類装置の作用可能な構成要素と構成賞素間
の流路との関係を示す略図、第5図は捕獲管が整合した
位置にあるときに行われる粒子の分類を示す、捕獲管の
拡大略図、第6図は粒子の分類が不要であるとき、捕獲
管が変位と又は非整合位置にあり、粒子の分類が行われ
ない状態の捕獲管の拡大略図である。 (主要部分の符号の説明) 10 フローシトメトリー装置 12・液体試料採取コンソール 14:ハウジング 15、試験墨 16;レーザ 19 レンズ 21.24.27:光検出器 23、ビームスプリッタ 32a:予分析部分 32b:分析部分 32c:後分析部分 93:捕獲管分類装置 94:捕獲管 98: ドライバ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、フローシトメータ用の捕獲管分類装置にして、 分析しようとする粒子が通過するための貫通する通路で
あって、分析部分、予分析部分及び後分析部分を有する
前記通路を備える本体部材と、前記通路の予分析部分と
流体連通状態に接続されかつ粒子の供給源と流体連通し
得るようにされ、粒子の供給源から分析部分内まで粒子
の流動路を提供する吸い上げ管と、 本体部材上に担持されかつ分析部分と流体連通状態に選
択的に位置決め可能に取り付けられ、粒子が分析部分を
通過した後、分析された粒子を間欠的に受け取る捕獲管
と、 粒子の1又は2以上の特性に関する分析部分からの入力
信号を受け取り得るように接続されると共に、捕獲管を
作動させ、捕獲管を分析部分と流体連通状態に選択的に
位置決めするオペレータと、を備え、 前記通路の分析部分が分析部分を通って一時に略1つず
つの粒子が通過するのを許容し得るように寸法決めされ
たオリフィスを有するフローセルを備え、 入力信号が1又は2以上の粒子特性に光学的に応答する
ものであることを特徴とする捕獲管分類装置。 2、請求項1記載の分類装置にして、 本体部材がフローセルを通る粒子の流れ方向に対して略
直交する角度にて光をオリフィスに当てるのを許容する
手段を備え、 前記光を当てるを許容する手段が、レンズをフローセル
に隣接して位置決めするための凹所を備えることを特徴
とする分類装置。 3、請求項1記載の分類装置にして、 前記オペレータ手段が、捕獲管を分析部分と流体連通状
態に選択的位置決めするのに十分な強さ及び持続時間の
電気的パルスを発生させ、 本体部材に取り付けられて、捕獲管に関係するドライバ
が入力信号パルスを受け取り、分析部分と流体連通する
ように少なくとも部分的に整合するように捕獲管を選択
的に位置決めし、 前記捕獲管が軸線を有し、かつ本体部材上に取り付けら
れ、前記軸線に対して動き、分析部分と部分的に整合す
るようにしたことを特徴とする分類装置。 4、請求項3記載の分類装置にして、 鞘液体が吸い上げ管の内端を中心として予分析部分内に
導入され、通路の軸線に沿って分析部分に向かう粒子の
鞘液体流を提供し、 後分析部分が捕獲管を中心として配設され、選択的に捕
獲されなかった粒子流れを捕獲管内に受け取りかつ該捕
獲管から離反させるようにしたことを特徴とする分類装
置。 5、粒子フロー装置にして、 装置が作動しているとき、一時に略1つずつの粒子が分
析部分を通る流れ方向に向けて通過し得る分析部分を有
する貫通する通路を備える本体部材と、 通路内の供給される粒子に付与され、液体に対して該粒
子を水力学的に集束させる鞘液体と、本体部材に設けら
れ、分析部分からの液体及び粒子と関係する捕獲管手段
であって、分析部分から流動する粒子と略整合する位置
に位置決め可能であり、粒子を、分析位置から、捕獲管
が分析部分から流動する粒子と整合しないが、分析部分
から流動する流体と整合する別の位置まで集め得るよう
する前記捕獲管手段と、 分析部分を通過する1又は2以上の予め選択された型式
の粒子に対して作用可能に応答する制御手段であって、
分析領域から流動する粒子と略整合及び非整合状態とな
る位置間にて捕獲管を動かし得るように配設された前記
制御手段と、を備え、捕獲管が、該捕獲管が前記位置間
を動くとき応力を受ける弾性的な支持体を備え、 前記制御手段が、分析部分を通過する1又は2以上の粒
子の少なくとも1つの特性に応答する手段と、捕獲管手
段に応答しかつ該捕獲管に接続されて、弾性的な支持体
を非整合位置から整合位置に屈曲させる手段により作動
されるドライバと、を備えることを特徴とする分類装置
。 6、フローシトメータ用の捕獲管分類装置にして、 分析しようとする粒子が通過するための貫通する通路で
あって、分析部分、予分析部分及び後分析部分を有し、
全てが本体部材を通る略同一の軸線上にある前記通路を
備える本体部材と、 分析部分に隣接して通路の予分析部分内に位置決めされ
た内端、及び本体部材の外方向に伸長し、液体及び粒子
を保持する加圧された試料供給源内に挿入される外端を
有する吸い上げ管であって、通路の分析部分に向けて粒
子を通過させる貫通して伸長する内腔を有する前記吸い
上げ管と、分析部分内に位置決めされかつ粒子が分析部
分を通って一時に1つずつ通過するのを許容し得るよう
に寸法決めされたオリフィスを有するフローセルと、 予分析部分、分析部分及び後分析部分を通って伸長する
軸線と流体連通し得るように移動可能な捕獲管と、 本体部材上に設けられ、捕獲管と作用可能に関係し、該
捕獲管を軸線と略整合させる調整手段と、を備えること
を特徴とする分類装置。 7、請求項6記載の分類装置にして、 捕獲管が、軸線に対して細長く、可撓性の支持体が捕獲
管を本体部材に移動自在に取り付け、捕獲管を該捕獲管
の軸線が通路の軸線と再整合する位置に担持し、これら
の軸線が相互に略同軸状となり、 捕獲管が、一対の端部及びその間の中央部分を備え、 可撓性支持体が捕獲管の中央部分を本体部材に取り付け
、捕獲管の軸線に沿って位置決めされた点を中心として
枢動し、捕獲管の軸線を通路の軸線と再整合させる位置
になり、これらの軸線が相互に変位されるようにし、 捕獲管が、該捕獲管の一端及び本体部材間に位置決めさ
れ且つ捕獲管の他端を通路の軸線に対して変位した整合
状態に動き得るようにしたドライバを備えることを特徴
とする分類装置。 8、液体流にて、流動する粒子等の1又は2以上の特性
を判定するフローシトメータにして、液体流中の粒子を
動かす手段と、 一時に略1つづつの粒子が分析部分を通る流れ方向に向
けて通過し得る分析部分を有する貫通する通路を備える
本体部材と、 細長い捕獲管が前記通路と長手方向に整合されたとき、
該通路からの流れを選択的に受け取るように作動する細
長い捕獲管を有する捕獲管分類手段と、 分析領域を通る粒子を照射する光ビームを提供する手段
と、 各動く粒子に対する光を検出し、該検出された光を各粒
子の1又は2以上の特性に関係付け、粒子の特性を示す
信号を発生させる手段と、 信号を受け取ると共に、該信号に応答して、細長い捕獲
管を前記通路と整合状態に作用可能に位置決めする手段
と、を備えることを特徴とするフローシトメータ。 9、粒子の分析装置を通過する粒子を分類し、液体にて
運ばれる粒子の試料を移動させる方法にして、 分析装置の分析領域を通過する粒子の1又は2以上の特
性を示す信号を発生させる段階と、前記信号をドライバ
に付与して捕獲管の位置を変更し、該捕獲管が動いて、
1又は2以上の特性を有する粒子を受け入れ得るように
する段階と、を備えることを特徴とする方法。 10、請求項9記載の方法にして、 前記信号をドライバに付与して捕獲管の位置を変更する
段階が、捕獲管の支持体を屈曲させ、捕獲管を粒子の分
析装置を通過する1又は2以上の特性を有する粒子と略
整合させる段階を備え、分析装置の分析領域を通過する
粒子の1又は2以上の特性を示す信号を発生させる段階
が、光を使用して、分析領域を一時に1つずつ通過する
粒子を分析すると共に、電気的信号を発生させる段階を
備え、 光を使用して、分析領域を一時に1つずつ通過する粒子
を分析すると共に、電気的信号を発生させる前記段階が
、その1段階として、ドライバに信号を付与し、捕獲管
の方向を変更する段階を備え、 捕獲管を位置決めし、該捕獲管を粒子と略整合させる段
階が、その1段階として、捕獲管の端部間に位置決めさ
れた一点を中心として、該捕獲管を枢動させる段階を備
えることを特徴とする方法。
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