JPH03130299A - ペプチド化合物とその製造法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の利用分野 この発明は、新規なペプチド化合物とその製造法および
用途に関する。より詳しくは、この発明は、生理活性こ
とにエンドセリン拮抗作用を有する新規なペプチド構造
を有する抗生物質およびその同族体、それらの製造法な
らびにそれらを含有する医薬製剤に関する。

（ロ）従来の技術と発明によって解決されるべき課題 高血圧、脳卒中に対する治療薬、ぜんそくに対する治療
薬などについて、種々の合成薬が開発されている。しか
し、より強力で副作用の少ない薬の開発が望まれている
。

一方、最近血管内皮細胞からエンドセリンが見出され、
このものは血管収縮作用を示す他に、体内で多彩な作用
を示す物質であることか判明してきている。

（ハ）課題を解決するための手段 この発明の発明者らは、生理活性を示す抗生物質の研究
を種々に行なった結果、ストレプトミセス属に属する菌
の培養物からＷ　Ｓ　７３３ｇ物質と名付けた物質を単
離した。

この単離物質の構造解明ならびに合成法の検討を行なう
とともに、薬理作用の研究を重ねた結果、この発明を完
成するに至った。

かくして、この発明は、ストレプトミセス属に属する培
養物からＷ　Ｓ　７３３８物質を分離、採取することか
らなるＷ　９７３３８物質を得る方法を提供するもので
ある。なお、Ｗ９７３３ｇ物質は、この発明で付けられ
た略称で、Ｗ　Ｓ　７３３８Ａ物質とＷ　Ｓ　７３３８
Ｂ物質とからなる。

また、この発明によれば、式： （式中、ＡはＤ−Ｖａｌ基またはＤ　−ａｌｔｏ　−１
１２ｅ基、Ｒ１は水素原子またはアミノ保護基、Ｒ′は
水素原子またはカルボキシ保護基を意味する）で示され
るペプチド化合物およびその塩類ならびにこれらを含有
するエンドセリン拮抗剤が提供される。

さらに、この発明は、式： ％式％（） （式中、Ａは上記と同じ意味、Ｒ’ａはアミノ保護基、
Ｒ”ａはカルボキシ保護基を意味する）で示される化合
物またはアミノ基および／またはカルボキシ基における
反応性誘導体あるいはそれらの塩類を閉環反応に付し、
必要に応じてアミノ保護基および／またはカルボキシ１
５ｉｃ護基の脱離反応を付すことからなる式（１）の化
合物またはその塩の製造法を提供するものである。

［培養によるＷ　Ｓ　７３３８物質の産生］Ｗ　９７３
３ｇ物質は、培地中でストレプトミセス属に属するＷ　
Ｓ　７３３８産生菌味を培養することにより生産するこ
とができる。ストレプトミセス属に属するＷ　Ｓ　７３
３ｇ産生菌株としは、北海道夕張市で採取した土壌から
分離したストレプトミセスＮｏ、７３３８菌株が挙げら
れる。この菌株の凍結乾燥サンプルは、通商産業省工業
技術院微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ　ＢＰ−２２５
０として１９８９年８月１１日に寄託されている。この
発明のＷ　Ｓ　７３３ｇ産生菌株は、上記の菌殊に限定
されず、たとえばその天然変異株ならびに人工変異味で
あってもよい。人工変異味は、Ｘ線照射、紫外線照射、
Ｎ−メチル−Ｎ゛−ニトロ−４−ニトロソグアニジン、
２−アミノプリンなどでの処理のような常法によって作
ることができろ。

ストレプトミセス７３３８菌株は、次の形態学的、培養
上、生物学的および生理学的特性を有する。

（ｉ）形態学的特性 分類学上の検討には、シャーリングとゴヅトリープの方
法（ＳＬｉｒｔｉｎｇ、Ｅ、Ｂ　ａｎｄ　Ｐ、Ｇｏｔｔ
Ｌｉｅｂ　：Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｃｈａｒａｃｔ
ｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｓｐｅｃｉｅｓ、　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｒ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ、　１６．３１３−３４０．１９６６）を
用いた。

菌株を酵母エキス−麦芽エキス寒天培地、無磯塩−澱粉
寒天培地およびグリセリンーアスＩ＜ラギン寒天培地上
で３０℃、！４日間に培養して、その培養物を光学顕微
鏡と電子顕微鏡で形態学上の観察を行なう。

栄養菌糸は、分裂なくよく発達。気菌糸は、単茎性に分
枝し、鎖当り２０以上の胞子を有するゆるやかなラセン
状胞子鎖及び直曲状液を形成。胞子は平滑面を有し、０
．５〜０．７Ｘ　１．０〜１．３μｍの大きさの円筒形
、硬化顆粒、胞子嚢と遊走子は観察されず。

（ｉｉ）培養上の特性 培養上の特性は、上記シャーリングとゴツトリープの方
法及びワークスマンの方法（Ｗａｋｓｍａｎ、Ｓ。

Ａ、　：　Ｔｈｅ　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　Ｖｏ
ｌ、２　：　Ｃ１ａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ。

１ｄｅｎｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｃｒｉ
ｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅｒａ　ａｎｄｓｐｅｃｉｅ
ｓ　：　Ｔｈｅ　ｌｌｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　１ｌｉ
ｌｋｉｎｓ　Ｃｏ、　、　Ｂａｌ−ｔｉｍｏｒｅ、　１
９６１）で観察した。

培養は３０℃で１４日間行ない、色名は、メスウーイン
　ハンドブック　オブ　カラー（Ｋｏｒｎｅｒｕｐ。

Ａ、　ａｎｄ　Ｊ、Ｈ，Ｙａｎｓｃｈｅｒ　：　Ｍｅｔ
ｈｕｅｎ　１ｌａｎｄｂｏｏｋ　ｏｒｃｏｌｏｕｒ、　
Ｍｅｔｈｕｅｎ、　Ｌｏｎｄｏｎ、１９７８）に従った
。その結果を第１表に示す。

（以下余白） 第１表 ７３８８菌株の培養上の特性 Ｓ＝可溶性色素 気菌糸は、酵母エキス・麦芽エキス寒天培地及びグリセ
リン・アスパラギン寒天培地上では木灰色であった。菌
叢裏面色は酵母エキス、麦芽エキス寒天培地では暗褐色
であり、オートミル寒天培地では赤褐色であった。この
菌糸色素はｐ）ｌに鋭敏ではなく、メラニン様色素は、
ＩＳＰ　１培養液、ペプトン・酵母エキス・鉄寒天培地
及びチロシン寒天培地では生成されなかった。淡赤褐色
色素はグリセリン・アスパラギン寒天培地及びチロシン
寒天培地中に痕跡量みられる。この可溶性色素はｐＨに
鋭敏で、０．０５Ｎ塩酸の添加により褐色から黄色に僅
かに変化し、０．０５Ｎ水酸化ナトリウムの添加により
、褐色からピンク色に変化する。

（ｉｉｉ）細胞壁型 細胞壁の分析をベラカー等の方法（Ｂｅａｋｅｒ、　Ｂ
、。

Ｍ、Ｐ、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ、　Ｒ，Ｅ、Ｇｏｒｄ
ｏｎ　ａｎｄＨ，Ａ、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　：　Ｒ
ａｐｉｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅ
ｅｎ　Ｎｏｒｃａｄｉａ　ａｎｄ　Ｓｔｅｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　ｂｙ　ｐａｐｅｒｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐ
ｈｙ　ｏｆ　ｗｈｏｌｅ−ｃｅｌｌ　ｈｙｄｒｏｌｙｓ
ａｔｅｓ　：Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　１２．４２１−
４２３．１９６４）及び山口床の方法（Ｙａｍａｇｕｃ
ｈｉ、　Ｔ、　：　Ｃａｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈ
ｅ　ｃｅｌｌｗａｌｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｒ
　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ｄｉｓｔｉｎｃｔ
ａｃｔｉｎｏＩＩｌｙｃｅｔｅｓ　：　Ｊ、Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ、、　　８９．　４４４−４５３．　１９６５
）により行なった・ ７３３８菌味の全細胞加水分解物を分析するとＬＬ−ジ
アミノピメリン酸の存在を示した。従って、この菌株の
細胞壁はＩ型として分類される。

（ｉｖ）生物学的及び生理学的性質 Ｗ　Ｓ　７３３ｇ菌株の生理学的性質及び炭素源の利用
については各第２表及び第３表に示す。

生育温度範囲は、温度勾配付恒温器（アドヴアンテック
　トーヨー（株）製）を用い、酵母・麦芽エキス寒天培
地で測定した。

炭素源の利用はプリーダムとゴツトリーブの方法（Ｐｒ
ｉｄｈａＩＩｌ、　Ｔ、Ｇ、　ａｎｄ　Ｄ、　Ｇｏｔｔ
ｌｉｅｂ：Ｔｈｅ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃ
ａｒｂｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｂｙ　ｓｏｍｅＡｃ
ｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ　ａｓ　ａｎｄ　ａｉｄ　
ｆｏｒ　ｓｐｅｃｉｅｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　
：　Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　５６　：　１０７〜
１１４゜１９４８）により試験した。

第２表 ７３３８菌株の生理学的物質 第３表 ７３３８菌昧の炭素源の利用度 ＋：よく利用される ±：利用度は疑わしい −：利用されない 上記のような分類学上の性質に基づいて、７３３８菌株
はストレプトミセス属に属し、前記のプリーダムとトレ
スナーのグルーピングで灰色または赤色系の菌株である
と考えられる。従って、この菌株をストレプトミセスｓ
ｐ、　Ｎｏ、７３３８菌昧と命名した。

次に培養条件について記載する。

培養は、Ｗ　Ｓ　７３３ｇ産生菌株を、同化性の炭素源
及び窒素源を含有する栄養培地中で好気性条件下で培１
（例えば、振盪培養、液内培養等）で行なうことかでき
る。

好ましい炭素源としては、ブドウ糖、澱粉、蔗糖、果糖
、グリセリン等のような炭水化物が挙げられる。

好ましい窒素源としては、酵母エキス、肉粉、ペプトン
、グルテン粉、綿実粉、大豆粉、コーンステープリカー
、乾燥酵母、小麦の麦芽、ジャガイモ蛋白等、並びにア
ンモニウム塩（例えば、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニ
ウム、リン酸アンモニウム等）、尿素、アミノ酸等のよ
うな無機及び有機の窒素化合物が挙げられる。

炭素源と窒素源は、適宜組合わせて用いられるか、純品
を用いることは必要とされない。これらは痕跡量の発育
促進物質や相当量の無機栄養素を含むものであってもよ
い。

培地には、所望により、炭酸ナトリウムもしくはカルシ
ウム、リン酸ナトリウムもしくはカリウム、塩化ナトリ
ウムもしくはカリウム、ヨウ化ナトリウムもしくはカリ
ウム、マグネシウム塩、銅塩、亜鉛塩、コバルト塩等の
ような無礪塩を加えてもよい。

培地が発泡性の場合には、流動パラフィン、随物油、鉱
物油またはシリコーンのような哨泡剤を加えてもよい。

Ｗ　Ｓ　７３３ｇ物質の大量生産には、他の生理学的活
性物質の大量生産法と同様に、通気液内培養が好ましい
。なお、少量の生産には、フラスコ内での振盪培養が用
いられる。

さらに大きいタンク内で培養を行なう時には、Ｗ　９７
３３８物質の産生工程中で発育遅滞を避けるために生産
タンク中に接種用微生物の栄養細胞を接種するのが望ま
しい。従って、まず、微生物の細胞を比較的少量の培地
に接種して培養し、微生物の栄養細胞を作り、ついで、
培養した栄養細胞を大きなタンクに移すことが望ましい
。栄養細胞を産生ずる培地は、Ｗ　Ｓ　７３３８物質の
産生に用いられる培地と実質的に同一または異なってよ
い。

培養混合物の撹拌及び通気は種々の方法で行うことがで
きる。撹拌はプロペラもしくは同様す機械的撹拌装置の
使用、醗酵漕の回転らしくは振盪、種々のポンプ装置の
使用または培地中に滅菌した空気の導入等により行なう
ことができる。通気は、培養混合物中に滅菌空気を導入
することにより行なうことができる。

醗酵は、通常的１０℃〜４０℃、好ましくは２０℃〜３
０℃、約５０〜２００時間で行われるか、醗酵の条件及
び規模により変化させてもよい。

醗酵が完了した後、培養液からＷ　Ｓ　７３３８物質の
分離、採取が行われる。その方法としては、生理活性物
質の分離、採取に用いられる常法が利用できる。

この発明に従えば、Ｗ　Ｓ　７３３ｇ物質は一般に濾過
した培養液の中に見出される。従ってＷ　Ｓ　７３３ｇ
物質は濾過した培養液から適切な溶媒（例えばアセトン
、酢酸エチル等）の単独らしくはそれらの混合溶媒によ
る抽出で分離するのが好ましい。

この抽出液は、例えば少量になるまで蒸発または蒸留に
より濃縮し、得られた活性物質、即ちＷＳ　７３３８物
質を含む残渣を通常の精製法、例えばクロマトグラフィ
ーまたは適切な溶媒らしく混合溶媒からの再結晶に付さ
れる。これによりＷ　Ｓ　７３３１３物質の純品を得る
ことができる。

Ｗ　Ｓ　７３３ｇ物質の物理化学的な性質や性状は実施
例によって詳しく説明するが、その化学構造を検討した
結果、Ｗ　Ｓ　７３３８Ａ物質は前記式（１）において
ＡがＤ−Ｖａｌ、　Ｒ’とＲｆが共に水素原子、Ｗ　Ｓ
　７３３８Ｂ物質は前記式（Ｉ）においてＡがＤ−ａｌ
ｌｏ−［Ｉ２ｅ。

Ｒ１とＲ１が共に水素原子である化合物であることを確
認するとともに、それらの合成法を見出した。

かくして、この発明の１つの観点によれば、ＷＳ　７３
３８Ａ物質およびＷ　Ｓ　７３３８Ｂ物質を含む式（【
）の化合物及びその塩類の合成による製造法が提供され
る。

［式（１）の化合物及び塩類の合成］ 式（１）の化合物及びその塩類は、式（［［）の化合物
そのアミノ基らしくはカルボキシ基における反応性誘導
体またはその塩類を閉環反応に付し、必要に応じてアミ
ノ保護基および／またはカルボキン保護基の脱離反応に
付すことによって合成することができる。

Ｈ−Ａ　−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｒ’ａ）　−Ｄ−Ｇｌ
ｕ（ＯＲ”ａ）−Ａｌａ−ＯＨ（ＩＩ）↓ （式中、各略号は前記と同じ意味） 上記の式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒ１及びＲ’ａ
のアミノ保護基としては、アミノ酸およびペプチド化学
の分野で使用される常用のアミノ基に対する保護基、す
なわち、例えばトリチル、ベンズヒドリル、ベンジル等
のアルアルキル基、ジニトロフェニル基、例えばｌ−メ
トキシカルボニル−１−プロペン−２−イル等の低級ア
ルコキシカルボニル（低級）アルケニル基、例えば１−
ベンゾイル−ｌ−プロペン−２−イル等のアロイル（低
級）アルケニル基、例えば２−ヒドロキシベンジリデン
等のヒドロキシアル（低級）アルキリデン基、例えばト
リメチルシリル基等のトリ（低級）アルキルシリル基、
例えばホルミル、アセチル、プロピオニル等の低級アル
カノイル基、例えばメシル、エタンスルホニル、プロパ
ンスルホニル等の低級アルカンスルホニル基、例えばエ
トキシカルボニル、プロポキシカルボニル、ブトキシカ
ルボニル、第３級ブトキシカルボニル等の低級アルコキ
シカルボニル基、例えばベンゾイル、トルオイル等のア
ロイル基、例えばベンゼンスルホニル、トシル等のアリ
ールスルホニル基等が挙げられる。

ＲｆおよびＲ”ａのカルボキシ保護基としては、アミノ
酸およびペプチドの化学分野で使用される常用のカルボ
キシ基に対する保護基が含まれる。

例えばメチル、エチル、プロピル等の低級アルキル基、
例えばシクーロペンチル、シクロヘキシル等のシクロア
ルキル基、例えばベンジル、置換ベンジル等のアリール
基、アルカリ金属、シリル基等が挙げられる。

前記式（［［）において、アミノ基の反応性誘導体とし
ては、化合物のアミノ基とアルデヒド、ケトン等のよう
なカルボニル化合物との反応によって精製するシッフの
塩基型イミノまたはそのエナミン型互変異性体：化合物
のアミノ基とビス（トリメチルシリル）アセトアミド、
モノ（トリメチルシリル）アセトアミド、ビス（トリメ
チルシリル）尿素等のようなシリル化合物との反応によ
って生成するシリル誘導体：化合物のアミノ基と三塩化
燐またはホスゲンとの反応によって生成する誘導体等が
挙げられる。

さらに、カルボキシ基におけろ反応性誘導体としては、
酸ハロゲン化物、酸無水物、活性化アミド、活性化エス
テル等が挙げられる。好ま゛しくは、酸塩化物；酸アジ
化物；脂肪族カルボン酸（例、酢酸、プロピオン酸、酪
酸、トリクロロ酢酸等）または芳香族カルボン酸（例、
安息香酸等）との混合酸無水物：対称酸無水物等が挙げ
られろ。これらの反応性誘導体は使用すべき化合物の種
類により、上記のものから選択することができる。

式（Ｉ［）の化合物、その反応性誘導体またはその塩か
ら、式（【）の化合物、その反応性誘導体、またはその
塩への閉環反応は、通常の方法、例えば加熱または縮合
剤の存在下で行われる。

好ましい縮合剤としては、カルボジイミドまたはその塩
［例えば、Ｎ、！！’−ジシクロへキシルカルボジイミ
ド、Ｎ−シクロへキシル−Ｎ′−モルホリノエチルカル
ボジイミド、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’−（４−ジエチ
ルアミノシクロヘキシル）カルボジイミド、Ｎ−エチル
−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミ
ドまたはその塩酸塩等コ、　Ｎ、Ｎ’−カルボジイミダ
ゾール、Ｎ、Ｎ’−カルボニルビス（２−メチルイミダ
ゾール）；ケテンイミン化合物（例えばペンタメチレン
ケテン−Ｎ−シクロヘキシルイミン、ジフェニルケテン
−Ｎ−シクロヘキシルイミン等）：エトキシアセチレン
：ｌ−アルコキシ−１−クロロエチレン；エチルボリホ
スフェート：イソブロビルボリホスフエート；オキシ塩
化リン：三塩化リン；チオニルクロリド；オキサリフロ
リド；トリフェニルホスフィンと四塩化炭素もしくはジ
アゼンカーボキシレートとの組合わせ＝２−エチル−７
−ヒトロキシベンズイ・ソキサゾリウム塩；２−エチル
−５−（Ｉｌｌ−スルホフェニル）イソキサゾリウムヒ
ドロキシド分子内塩；１−（ｐ−クロロベンゼンスルホ
ニルオキシ）−６−クロロ−ＩＨ−ベンゾトリアゾール
、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、ＮＪ−ジメチル
ホルムアミドとチオニルクロリド、ホスゲン、オキシ塩
化リン等との反応によって調製したいわゆるビルスマイ
ヤー試薬等が挙げられる。

この縮合剤の存在下の反応は、反応に悪影響を与えない
ような通常の有機溶媒（例えばジクロロメタン、メタノ
ール、エタノール、プロパツール、アセトニトリル、ピ
リジン、）ＩＪ−ジエチルホルムアミド、４−メチル−
２−ペンタノン、テトラヒドロフラン、ベンゼン、トル
エン、キシレン等またはそれらの混合溶（媒）中で行わ
れる。また、反応温度は特に限定されないが、通常冷却
下ないし加温下に行われる。

さらに、加熱下における閉環反応は、上記のような有機
溶媒中で、使用した溶媒の沸点以下に加熱して行なうこ
とが′できる。

閉環反応によって生成した化合物は、必要に応じ、脱保
護反応に付される。脱保護反応は、アミノ保護基、カル
ボキシ保護基の種類に応じて、アミノ酸およびペプチド
の化学の分野で公知の手段を適宜選択、利用することに
よって行なうことができる。

アミノ保護基の脱離反応は、加水分解、還元等のような
常法に従って行われる。

加水分解は塩基、またはルイス酸を含めた酸の存在下に
行なうのか好ましい。好適な塩基としては、例えばナト
リウム、カリウム等のアルカリ金属、例えばマグシウム
、カルシウム等のアルカリ土類金属、それらの金属の水
酸化物、炭酸塩または炭酸水素塩、例えばトリメチルア
ミン、トリエチルアミン等のトリアルキルアミン、ピコ
リン、ｔ、Ｓ−ジアザビシクロ［４，３，０］ノン−５
−エン、ｌ。

４−ジアザビシクロ［２，２，２］オクタン、１．８−
ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデス−７−エン等の
ような無機塩基および有晴塩基が挙げられる。

好適な酸としては、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、
トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸、例えば
塩酸、臭化水素酸、硫酸、フッ化水素酸等の無機酸およ
び例えばピリジン塩酸塩の酸付加塩等が挙げられる。

例えばトリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸等のトリハロ
酢酸等のようなルイス酸をしようする脱離は、例えばア
ニソール、フェノール等の陽イオン捕促剤の存在下に行
なうのが好ましい。

反応は通常、水、例えばメタノール、エタノール等のア
ルコール、塩化メチレン、クロロホルム、テトラクロロ
メタン、テトラヒドロフラン、それらの混合物のような
溶媒中で行われるが、反応に悪影響を及ぼさない溶媒で
あればその他のいかなる溶剤中でも反応を行なうことが
できる。液状の塩基または酸も溶剤として使用すること
ができる。

反応温度は特に限定されず、通常冷却下ないし加熱下に
反応を行うなことができる。

脱離反応に適用できる還元法としては化学的還元と接触
還元とか挙げられる。

化学的還元に使用される好適な還元剤は、例えばスズ、
亜鉛、鉄等の金属または例えば塩化クロム、酢酸クロム
等の金属化合物と、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、
トリフルオロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、塩酸、臭
化水素酸等の有機酸または無機酸との組合わせである。

接触還元に使用される好適な触媒は、例えば白金板、白
金海綿、白金黒、コロイド白金、酸化白金、白金線等の
白金触媒、例えばパラジウム海綿、パラジウム黒、酸化
パラジウム、パラジウム−炭素、コロイドパラジウム、
パラジウム−硫酸バリウム、パラジウム−炭酸バリウム
等のパラジウム触媒、例えば還元ニッケル、酸化ニッケ
ル、ラネニッケル等のニッケル触媒、例えば還元コバル
ト、ラネーコバルト等のコバルト触媒、例えば還元鉄、
ラネー鉄等の鉄触媒、例えば還元銅、ラネー銅、ウルマ
ン銅等の銅触媒等のような常用の触媒である。

還元は通常、水、メタノール、エタノール、プロパツー
ル、！ｌ、Ｎ’−ジメチルホルムアミドのような反応に
悪影響を及ぼさない常用の溶媒中、またはそれらの混合
物で行われる。

さらに、化学的還元に使用される上記酸が液体である場
合にはそれらら溶媒として使用することができる。さら
にまた、接触還元に使用される好適な溶媒としては、上
記溶媒およびその他ジエチルエーテル、ジオキサン、テ
トラヒドロフラン等のような常用の溶媒またはそれらの
混合物か挙げられる。

次に、カルボキシ保護基の脱離反応は、例えば加水分解
、還元、ルイス酸を使用する脱離等のカルボキシ保護基
の脱離反応に使用される常法が適宜選択利用される。カ
ルボキシ保護基がエステルである場合には保護基は加水
分解またルイス酸を使用する脱離によって脱離すること
ができろ。加水分解は塩基または酸の存在下に行なうの
が好ましい。

好適な塩基および酸としては、アミノ保護基の脱離反応
を挙げたものが利用できろ。この加水分解は通常有機溶
媒、水またはそれらの混合溶媒中で行われる。

反応温度は特に限定されず、カルボキシ保護基の種類お
よび脱離法の種類によって適宜選択すればよい。

ルイス酸を用いる脱離は置換されたまＩこは非置換アル
（低級）アルキルエステルの脱離に好ましく、化合物（
Ｉｇ）またその塩を例えば三塩化ホウ素、三塩化ホウ素
等の三ハロゲン化ホウ素、例えば四塩化チタン、四臭化
チタン等の四ハロゲン化チタン、例えば四塩化スズ、四
臭化スズ等のハロゲン化スズ、例えば塩化アルミニウム
、臭化アルミニウム等のアルミニウムハロゲン化物、例
えばトリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸等のトリハロ酢
酸等のルイス酸と反応させることにより行われる。この
脱離反応は例えばアニソール、フェノール等の陽イオン
浦足剤の存在下に行なうのが好ましく、通常例えばニト
ロメタン、ニトロエタン等のニトロアルカン、例えば塩
化メチレン、塩化エチレン等のハロゲン化アルキレン、
ジエチルエーテル、二硫化炭素のような溶剤中で行われ
るが、反応に悪影響を及ぼさない溶媒であればその他の
いかなる溶媒中でも反応を行なうことができる。これら
の溶媒はそれらの混合物を使用してもよい。

還元による脱離は、例えば２−ヨードエチルエステル、
２，２．２−　トリクロロエチルエステル等のハロ（低
級）アルキルエステル、例えばベンジルエステル等のア
ル（低級）アルキルエステル等のような保護基の脱離に
適用するのが好ましい。

脱離反応に適用されうる還元法としては、例えば亜鉛、
亜鉛アマルガム等の金属または例えば塩化クロム、酢酸
クロム等のクロム化合物の塩と、例えば酢酸、プロピオ
ン酸、塩酸等の有機酸または無機酸との組合わせを用い
る還元：および例えばパラジウム−炭素、ラネーニッケ
ル等の常用の金属触媒の存在下における常用の触媒還元
がその例として挙げられる。

反応温度は特に限定されないが、通常は冷却下、常温ま
たは加温下に反応が行われる。

次いで、生成した化合物は、粉砕、再結晶、クロマトグ
ラフィー、再沈澱等の−ような常法により単離、精製す
ることができろ。

なお、上記の反応に用いる原料物質の式（■）の化合物
、その反応性誘導体またはその塩は、公知の原料から作
ることができる。式（ＩＩ）において、ＡがＤ−ａｌｌ
ｏ−１＆ｅ、　Ｒ’ａがホルミル基、Ｒ”ａがベンジル
基である化合物を例にとり、その製法を以下に示す。

（以下余白） Ｆｏｒ Ｂｚ　ｔ ［式中Ｂｏａは第３級ブトキシカルボニル基、Ｆｏｒは
ホルミル基、Ｂｚｌはベンジル基、Ｐａｃはフェナシル
基を意味するコ 上記■〜■の各反応は、夫々アミノ保護基の脱離反応と
縮合反応からなる。すなわち、各反応においては、まず
原料化合物の一方（上記反応工程図で上立にある化合物
）を、アミノ保護基の脱離反応に付し、ついで、下位に
ある化合物との縮合反応に付される。アミノ保護基の脱
離反応は、前記と同様にして行なうことができろ。また
、縮合反応も前記閉環反応と同様にして行なうことがで
きる。

さらに、■の反応はアミノ保護基の脱離反応であり、■
の反応はカルボキシ保護基の脱離反応で、これらの脱保
護反応は前記と同様に行なうことができる。

なお、式（【）の化合物の脱保護反応は、一般にアルカ
リ性条件下で行なうのが望ましい。■〜■における脱保
護反応及び■、■の脱保護反応では、所望の脱離基のみ
が脱離されるようになるべく酸性条件下で行なうのが望
ましい。

上記の式（ＩＩ）の化合物の製造を、特定の例を用いて
説明したが、ＡがＤ−Ｙａｌｌ、　Ｒ’　ａとＲ”ａが
他の保護基の場合でも同様に製造できろことは理解され
るであろう。

この発明の式（１）の化合物の塩としては、医薬的に受
容な塩が好ましい。式（１）の化合物の塩は、例えば式
（Ｉ）の化合物を塩基で処理することにより製造するこ
とができる。

適切な塩基としては、アルカリ金属（例えばナトリウム
、カリウム等）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシ
ウム、カルシウム等）、それらの水酸化物または炭酸塩
、アルカリ金属アルコキシド（例えば、ナトリウムメト
キシド、ナトリウムエトキシド、カリウム３級ブトキシ
ド等）等が挙げられる。

式（Ｉ）の化合物及びその塩類は、エンドセリン拮抗作
用を有し、すなわち末梢循環不全による高血圧症：狭心
症、心筋症、動脈硬化症、心筋梗塞等のような心臓病；
レーノー病二大脳動脈れん縮、大脳虚血、クモ膜下出血
後の後期大脳れん縮等のような大脳発作：気管支縮合等
のようなぜん息；急性腎不全のような腎不全等の治療ま
たは予防に血管拡張剤として用いることができる。

この発明の式（０の化合物またはその塩類は、経口的ま
たは非経口的に用いることができろ。投与剤型としては
、錠剤、ペレット剤、カプセル剤、顆粒剤、水剤、乳剤
、懸濁剤、注射剤等が挙げられる。これらの投与剤型は
、それぞれの剤型に適した有機もしくは無機の担体また
は賦形剤、必要に応じ加えられる他の種々の添加剤を用
い、常法に従って作ることができる。

この発明の式（」）の化合物またはその塩類は、ヒトへ
の投与には静脈内注射らしくは筋肉内注射による非経口
投与、または経口投与が一般に好ましい。

投与量は、患者の年令、症状等によって異なるが、静脈
内注射の場合は、１回の投与量は、０．１〜１００１ｇ
／　Ｋｇ、筋肉内注射の場合は、０．１−１００ス２／
に９、経口投与の場合には、１日投与量が０．１〜１０
０ｘ９／Ｋｇである。

［実施例］ この発明を実施例によって説明する。

なお、アミノ酸、ペプチド、保護基、縮合剤等はＩＵＰ
Ａｃ−ＩＵＢ　（生化学命名法委員会）による略号で示
し、さらに下記略号を使用した。

Ｂｏａ　：第３級ブトキシカルボニル Ｂｚｌ：ベンジル ＨＯＢｔ　：　Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールＰａ
ｃ　：　７　ｚナシル（ＧトＣ０ＣＨ＊　−）Ｆｏｒ　
：ホルミル ｗｓｃｏ　：　ｔ−エチル−３−（３−ジメチルアミノ
プロピル）カルボジイミド 実施例１（培養による１３７３３ｇ物質の製造）水性種
培地１６０ｆｆｃ　［可溶性澱粉１％、蔗糖１％ブドウ
糖１％、綿実粉１％、ペプトン０．５％、大豆粉０．５
％、炭酸カルシウム０．１％、６Ｎ水酸化ナトリウムで
ｐＨ７，０に調整］を２０個のマイヤーフラスコ（５０
０３Ｆ（２）各々に注入し、１２０℃で３０分間滅菌し
た。

斜面培養したストレプトミセス７３３８菌昧（ＦＥＲＭ
ＨＰ−２５００）を各培地に１白金耳ずつ接種し、回転
振盪器（２２Ｏｒｐｍ、　５．１ｃｍ工程）で、３０℃
で３日間培養した。

得られた種培養液を、ステンレス製ジャー醗酵槽（２０
Ｇ＆）中の滅菌したａ酵培地１６Ｂ［ｉｌｌｌｌ外。

グルテン０．２％、肉粉０．５％、綿実粉０．３％、乾
燥酵母０．１％］に接種した。

３０℃で３日間、通気量１６０１２／分、撹拌数２０Ｏ
ｒｐｍで培養を行なった。培養液中のＷ　Ｓ　７３３８
物質は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）　（日
立６５５型）により定量した。このクロマトグラフィー
には、リクロスフィアー（Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒｅ）
　ＲＰ　−１８（メルク社製）を詰めたステンレスカラ
ム（内径４．Ｏｉｚ。

長さ２５０ｇｍ）を用い、ｔ、０ｉ１２／分の流量で、
移動相として５ｍＭセチルトリメチルアンモニウムプロ
ミド中４中外５セトニトリル−５０ｍＭリン酸緩衝液（
ｐ　Ｈ７，０）の混合液を用いた。Ｌ、０ｘＱ１分の流
速で、Ｗ　Ｓ　７３３８Ａ物質とＷ　Ｓ　７３３８Ｂ物
質の保持時間は各８．９分と１２．４分であった（　Ｕ
Ｖ２３ＯｎＩ＋＋で検出）。

なお、ＨＰＬＣ用試料は、培養液にアセトンの等量を加
えて激しく撹拌し、１時間放置した後、遠心分離し、調
製した。上澄液５μＱをＨＰＬＣ（８２６５５１）に付
した。

（ｉｉ）分離と精製 得られた培養液（１００（りを、珪藻土（Ｉ　Ｋｇ）を
用いて濾過した。菌糸体塊をアセトン３０１２で処理し
、６０分間撹拌した。菌糸体の抽出液（３０１２）を水
３０（２で希釈した。その溶液を、活性炭素のカラム（
３０に通し、水１５１２で洗浄後、活性画分を０．２％
アンモニア含有の８０％アセトン水溶液１０＆で溶出し
た。溶出液を６Ｎ塩酸でｐＨ７，０に調整し、ｎ−ヘキ
サン１Ｏ１２で洗浄した。ヘキサン層を除去した後、溶
出液を６Ｎ塩酸でｐＨ２，０に調整し、酢酸エステルｌ
ＯＱで抽出した。抽出液を減圧下でａ縮し、粗粉末（２
９）を得た。この粉末を０．１％アンモニア水（２０ｍ
９／ｘ１２）　ｌｏｏｍ（２に溶解し、予め充填したカ
ラム（リクロプリープ（ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ）ＲＰ−
１８，４Ｇ−６３ｇｍ、　　内１１２５ｚｘ、　　長さ
３１０ｉｘ。

メルク圓）を用い、５−セチルトリメチルアンモニウム
プロミドを含有する４５％アセトニトリル−５０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，０）で溶出した。最初に溶出され
る活性画分（画分Ａ）ｉｆｆはＷ　Ｓ　７３３８８Ａ物
質を含有し、次の活性画分（画分Ｂ）はＷ　９７３３８
Ｂ物質を含有した。両分Ａｌｔ２をダウエックス５（１
１１１（「型）カラム、ライで５Ｐ−２０７カ５ム（５
０３１１２）　ｌ：通過させ、水５００ＲＱで洗浄後、
８０％メタノール２００！！１２で熔出した。活性画分
を減圧下で濃縮し、Ｗ　Ｓ　７３３８Ａ物質６２ｘｇを
白色の純粉末として得た。

次に、画分Ｂ２ｆｆをダウエックス５０Ｗカラム（Ｈ″
型。

４００ｘｌＪ）に付した。活性画分を減圧下で濃縮し、
Ｗ　Ｓ　７３３８Ｂ物質（９２Ｈｚｇ）を白色の純粉末
として得た。

Ｗ　Ｓ　７３３ｇ物質の物理化学的性質：（ｉ　）Ｗ　
Ｓ　７３３８Ａ物質： 外観二白色粉末 性質：酸性物質 分子式：Ｃ１゜Ｈ４ｔ　Ｎ　ｓ　Ｏ？ 元素分析：　Ｃｓ　ｏ　Ｈ４＊　Ｎ　ａ　Ｏ？　、　Ｈ
ｔ　Ｏとして理論値：　Ｃ，５８，４３、）（，７，１
９、Ｎ、１３．６３　（％）実測値：Ｃ・、５ｇ、８３
　、　Ｈ，７，１３、Ｎ、１３．３３　（％）分子１ ＦＡＢ−ＭＳ　ｅｒｒ／ｚ　６２１（Ｍ＋Ｎａ）”ＨＲ
ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　６２１，３Ｇ２７［理論値：　
６２１，３０１３（ＣｓｏＨ４１Ｎ　ｇｏ　？＋　Ｎ　
ａ　）］溶解性 ジメチルスルホキシド、アンモニア水溶液に可溶 水、メタノールに難溶 クロロホルム、ヘキサンに不溶 呈色反応： ヨウ素蒸気反応、ＴＮ酸セリウム反応、エールリッヒ反
応：陽性 ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、ドラーゲンドル
フ試薬、塩化第二鉄反応：陰性廓層クロマトグラフィー
（ＴＬＣ）： ＊シリカゲルプレート：キーザルゲル６０Ｆ！ｓ４（メ
ルク社製）＊＊逆相ＴＬＣ用シリカゲルプレート：ＲＰ
−１８１Ｆ、ｓ、Ｓ（メルク社製） ＵＶλｗａｘ　　（ＭｅＯＨ）　　ｒｕｎ（ε）　：２
８Ｇ（５，７００）、　２８９（４，８００）ａｙλｗ
ａｘ　　（ＭｅＯＨ＋ＨＣ１）　　ｎｍ：２ｇ０．２８
９ＵＶλｍａｘ　　（ＭｅＯＨ＋Ｎａ０Ｈ）　　ｎｍ：
２８０．２８９ＩＲλｔａａｙ、　　（ＫＢｒ）　：　
３２７０．２９５０．１７００．１６５Ｑ、　１６３５
．１５４０゜１４４Ｇ、　ｌａｇｏ、　１３４０．１２
２０．１１７０．１１５０゜１０９０、１００１００Ｏ
’ ’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、、　４００ＭＨｚ）　　δ
：１０．８０（ｌＨ，ｂｒ、ｄ、Ｊ＝２ＦＩｚ）。

８．７６（ＩＨ９ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ）、　８．ＴＯ（ＩＨ
，ｄｊ＝８Ｈｚ）、　８．５４（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ
）７．５３ＣＩＨ，ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ）、　７．５１（Ｌ
Ｈ，ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ＞、　７．４０（ＩＩＩ、ｄ、Ｊ＝
７Ｈｚ）。

７．３２（１８，ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ）、　７．１２（１８
，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ）、　７．０４（１８，ｍ）、　６．
９６（ＩＨ，＋ｎ）、　４．４５（ＬＨ，ｍ）、　４．
３１−４．２３（２Ｈ，ｍ）、　４．１６−４．０９（
２Ｈ，ｍ）。

３．２６（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝１４Ｈｚ、３Ｈｚ）、　２
．９２（ＬＨ，ｄｄＪ＝１４Ｈｚ、１２Ｈｚ）、　２．
１５（２Ｈ，ｍ）、　１．８７（２Ｂ劃）、　１．７８
（ＬＨ，ｍ）、　１．２４−１．１８（２Ｈ劃）、　１
．１３（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ）、　１．０２（ＬＨ，
ｍ）、　０．８３（３Ｈ，ｄ、Ｊ−７Ｈｚ）、　０．８
１（３１，ｄ。

Ｊ＝７Ｈｚ）、　０．７４（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ
）、　０．６３（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ）、”ＮＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ−ｄｓ、１００ＭＨｚ）　　δ：　１７４
．（＋（ｓ）、　１７２．０（ｓ）、　１７１．９（ｓ
）、　１７１．６（ｓ）、　１７０．４（ｓ）、　１３
６．３（ｓ）、　１２７．１（ｓ）、　１２３．８（ｄ
）。

１２０．９（ｄ）、　１１８．４（ｄ）、　１１１！１
．２（ｄ）、　１１１．４（ｄ）。

１１０．７（ｓ）、　５７．４（ｄ）、　５５．３（ｄ
）、　５２．４（ｄ）、　５２．２（ｄ）、　４７．４
（ｄ）。

３８．１１１（ｔ）、　３０．９（ｄ）、　３０，３（
ｔ）、　２７．４（ｔ）、　２７．０（ｔ）、　２４．
０（ｄ）。

２２．４（ｑ）、　２２．２（Ｑ）、　１９．２（Ｑ）
、　Ｌ８．３（Ｑ）、　１４．５（Ｑ）。

アミノ酸分析： Ｗ　Ｓ　７３３８Ａ　（１λ９）を封管中、０８２％３
−（２−アミノエチル）インドール含有の４Ｎメタンス
ルホン酸（０，４村）で１１５℃。

４８時間加水分解した。

アミノ酸分析の結果 Ｇｌｕ（１）、　Ａｌａ（１）、　Ｖａｌ（１）、　Ｌ
ｅｕ（１）、　Ｔｒｐ（１）（ｉｉ　）Ｗ　Ｓ　７３３
８Ｂ物質： 外観：白色粉末 性質；酸性物質 分子式：　Ｃ３１Ｈ４４Ｎ　ａ　Ｏ？ 元素分ｖＴ：Ｃ□Ｈ４４Ｎ８０７・ｌ／２Ｈ１Ｏとして
理論値：　Ｃ，５９，８９；　Ｈ，７，３０；　Ｎ、１
３．５２　（％）実測値：　Ｃ，６０，１３、Ｈ，７，
１４；　Ｎ、１２．４７　（％）分子ＩＩ。

ＰＡＢ−ＭＳ　　ｍＨｚ　６３５　（Ｍ　＋　Ｎ　ａ　
）　”ＨＲＦＡＢ−ＭＳ　　ｒｎ／ｚ　　６３５．３１
６７（Ｍ＋Ｎａ）　”［理論値：　８（５，３１６９（
Ｃ３ｔ８４ａＮａＯｙ＋　Ｎａ）コ溶解性ニ ジメチルスルホキシド、アンモニア水溶液に可溶水、メ
タノールに難溶 クロロホルム、ヘキサンに不溶 呈色反応： ヨウ素蒸気反応、硫酸セリウム反応、エールリッヒ反応
：陽性 ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、ドラーゲンドル
フ試薬、塩化第二鉄反応：陰性 ＊シリカゲルプレート；キーセルゲル６０Ｆ＊ｓ４（メ
ルク社製） ＊＊逆相ＴＬＣ用シリカゲルプレート：　ＲＰ−１８Ｗ
Ｆ１％、Ｓ（メルク社製） ＵＶλｗａｘ　　（ＭｅＯＨ）　　ｎｍ（ε）　：２８
０（５，７００）、　２８９（４，７００） ＵＶλｍａｘ　　（ＭｅＯＨ＋　ＨＣＩ）　　ｎｍ　：
　２８Ｇ、　２８９ＵＶλｍａｘ　　（ＭｅＯＨ＋　Ｎ
ａ０Ｈ）　　ｎｔｎ　：　２ｇ０．２８９ＩＲλｍａｘ
　　（ＫＢｒ）　：　３２７０．２９５０．１７００．
１６５０．　＋６３５１５４０、１４４０．１３８０．
１：（４０，１２２０１１７０、１１５０，１０９０，
ｌｏｏｏｃｍ”’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｉ、　４００
ＭＨｚ）　　δ：ｌＧ、７９（ＬＨ，ｂｒ、ｄ。

Ｊ＝２Ｈｚ）、　８．７７（ＬＨ，ｄ、Ｊ：８Ｈｚ）、
　８．７４（ＬＨ，ｄｊ＝１３Ｈｚ）。

８．５９（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ）、　７．５２（ＩＨ
，ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ）、　７．５０（ＬＨ。

ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ）、　７．４５（ｌＨ，ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ
）、　７．３１（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ）。

７．１２（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ）、　７．０５（ＬＨ
，ｍ）、　６．９６（ＬＨ，ｍ）。

４．４６（ＩＨ，ｍ）、　４．３２−４．２４（３８，
ｅ＋）、　４．０７（ＩＨ，ｍ）。

３．２８（ＩＨ，ｍ、）、　２．９０（ＬＨ，ｍ）、　
２．１６（２Ｈ，ｍ）、　１．８９（２Ｈ。

ｍ）、　１，８９（２Ｈ，ｍ）、　１．５８（ＬＨ，ｍ
）、　１．３０（ＩＨ，ｍ）、　１．２０（２Ｈ，ｍ）
、　１．１３（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝７）１ｚ）、　１．０８
（ＬＨ，ｍ）、　０．９６（ＬＨ，ｍ）、　０．８７（
３Ｈ，ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ）、０．７８（３Ｈ，ｄ、Ｊ’７
Ｈｚ）。

０．７３（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ）、　０．６３（
３Ｈ，ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ）。

１３ＮＩＡＲ（Ｄ’ｊＳＯ−ｄａ、１００ＭＨｚ）　　
δ：　１７３．９（ｓ）、　　１７２．４（ｓ）、　　
１７２．０（ｓ）、　　１７１．６（ｓ）、　　１７０
．３（ｓ）、　　１３６．３（ｓ）。

１２７．０（ｓ）、　　１２３．８（ｄ）、　　１２０
．９（ｄ）、　　１１８．４（ｄ）。

１１８．１（ｄ）、　　１１１．４（ｄ）、　　１１０
．７（ｓ）、　　５５．６（ｄ）、　　５５．２（ｄ）
、　　５２．５（ｔ）、　５２．４（ｄ）、　４７．４
（ｄ）、　　３８．７（ｔ）。

３７．４（ｄ）、　３０．３（ｔ）、　２７．４（ｔ）
、　　２６．９（ｔ）、　２６．０（ｔ）。

２３．９（ｄ）、　２２．５（Ｑ）、２２．１（Ｑ）、
１４．７（Ｑ）、　　１４．４（Ｑ）。

Ｌｌ、５（ｑ）。

アミノ酸分Ｆｒ＝ Ｗ　Ｓ　７３３８Ａ（１１９）を封管中、０．２％３−
（２−アミノエチル）インドール含有の４Ｎメタンスル
ホン酸（０，４１１２）で１１５℃、４８時間加水分解
した。屋台物を水酸化ナトリウムで中和して、日立８３
５型自動アミノ酸分析計で分析した。

アミノ酸分析の結果 Ｇｌｕ（１）、　Ａｌａ（１）、　Ｌｅｕ（１）、　ａ
ｌｌｏ−１ｅｅ（１）、　Ｔｒｐ（Ｌ）実施例２　（Ｂ
ｏａ−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｌａ−ＯＰａｃの製
造）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−０Ｈ（１６，８
９）、Ｈｃｌ−Ｈ−Ａｌａ−ＯＰａｃ（１１，０９）及
びＨＯＢｔ（７，３２９）の塩化メチレン溶液（２００
１Ｏに、ＷＳ　ＣＤ　（８，４１９）を０℃で加え、屋
台物を同温度で３時間撹拌した。溶媒を除去後、残渣を
酢酸エチル（６００１ｆ２）に溶解した。その溶液を５
％塩酸、１Ｍ炭酸水素ナトリウム溶液及び飽和食塩水で
順次洗浄し、無水芒硝で乾燥し、減圧濃縮した。得られ
た残渣を酢酸エチル（ｌｏＯｘ＆）とエーテルＣ３００
ｘＱ）から再結晶して、標題化合物（１９，１９゜８０
．４％）を得た。

ｍ　ｐ　１２２〜１２５℃、１１．値：　０．７２　（
ベンゼン：酢酸エチル：酢酸、　２０：２０：ｌ、ｖ／
ｖ）。

実施例３　（ＨＣｌ−Ｈ−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａ
ｌａ−ＯＰａｃの製造）実施例２で得た化合物（Ｂｏａ
−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−ＡｌａＯＰａｃ）　（１３
，４９）のトリフルオロ酢酸（５０ｚ１２）とアニソー
ル（５ｎ）の溶液を水冷下１時間撹拌した。トリフルオ
ロ酢酸を留去後、残渣に４Ｎ塩酸のジオキサン（２５，
５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１０分間撹拌し、減圧濃
縮した。残渣を乾燥エーテルでトリチュレートして標題
化合物（１１，７Ｌ　９９．２％）を得た。ｍ　ｐ　１
１２〜１１６℃、Ｒｒ、値：　０．４９゜実施例４　（
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ
）−Ａｌａ−ＯＰａｃの製造） Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−０Ｈ（３，９５９）、
ＨＣＩ−Ｈ−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−＾１ａ−ＯＰａ
ｃ　（実施例３の化合物（５，００９））及びＨＯＢｔ
（１，７６９）のＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０
０肩Ｑ）溶液に、ＷＳ　ＣＤ　（２，０２９）を０℃で
加えた。反応混合物を同温度で３時間撹拌した。溶媒を
留去後、残渣を酢酸エチル（５００ｚｆ２）に溶解し、
５％塩酸、ＩＮ炭酸水素ナトリウム溶液、飽和食塩水で
順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、減圧濃縮し
た。残渣を酢酸エチル（４ｏｚ＋２）とエーテル（５０
０ｊｌｃ）から再結晶し、標題化合物（６，８５９，８
５，６％）を得た。ｍ　ｐ　１７６〜１７８℃。Ｒｆ、
値：　０．７２　（１０％メタノールのクロロホルム溶
液）。

実施例５　（ＨＣｌＨ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−Ｄ−Ｇ
ｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｌａ−ＯＰａｃの製造） Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ
）−Ａｌａ−ＯＰａｃ　（実施例４の化合物）（４，０
０９）のトリフルオロ酢酸（９５肩０とアニソール（５
ＲＯの溶液を、水冷下１時間撹拌した。トリフルオロ酢
酸を留去した後、残渣に４Ｎ塩酸のジオキサン（１３，
０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１０分間撹拌し、減圧濃
縮した。残渣を乾燥エーテルでトリチュレートして標題
化合物（３；４６９．９９．７％）を得た。ｍ　ｐ　２
２７〜２２９°ｃ、Ｒｒｆ値＋　０．２７実施例６　（
Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−Ｄ−Ｇｌｕ（
ＯＢｚｌ）−Ａｌａ−ＯＰａｃの製造） Ｂｏａ−Ｌｅｕ−ＯＨ（ＩＪＯｆ）、　ＨＣｌＨ−Ｄ−
ＴｒＰ（Ｆｏｒ）−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｌａ−
ＯＰａｃ　（実施例５の化合物）　（３，２０９）及び
ＨＯＢｔ　（０，７７９）のＮ、＋１−ジメチルホルム
アミド（ＲＯｚＱ　）溶液１．−ＷＳ　ＣＤ　（０，８
８９）を０℃で加えた。反応混合物を同温度で一夜撹拌
した後、減圧で濃縮した。残渣を酢酸エチル（２０ｂＣ
）に溶解し、溶液を５％塩酸、１Ｍ炭酸水素ナトリウム
溶液及び飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチル（１ｏＯ
ｘ１２）とｘ　−−ｒ　７Ｌ、　（２００１１ｆ２）か
ら再結晶し、標題化合物（３，８９９，９６，３％）を
得た。ｍｐ１６０−１６２℃、Ｒ４，値：　ｏ、ｇｏ。

実施例７　（ＨＣｌ−Ｈ−Ｌｅｕ−Ｄ−ＴｒＰ（Ｆｏｒ
）−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）Ａｌａ−ＯＰａｃの製造） Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−Ｄ−Ｇｌｕ（
ＯＢｚｌ）−Ａｌａ−ＯＰａｃ　（実施例６の化合物、
　３．５０９）のトリフルオロ酢酸（３０ｍａ＞及びア
ニソール（３７１１２）の溶液を水冷下１時間撹拌した
。トリフルオロ酢酸を留去後、４Ｎ塩酸ジオキサン（１
０，０ｍｍｏｌ　）を残渣に加え、混合物を１０分間撹
拌し、減圧で濃縮した。残渣を乾燥エーテルでトリチュ
レートし、標題化合物（３，２０９゜９８．８％）を得
た。ｍ　ｐ　１０８〜１１２°Ｃ，Ｒｒ、値：Ｏ，’４
Ｌａ実施例８　（Ｂｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏ−ＩＱｅ−Ｌｅ
ｕ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−
Ａｌａ−ＯＰａｃの製造）Ｂｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏ−＋１
２ｅ−ＯＨ（０，９６６９）、ＨＣＩ−Ｈ−Ｌｅｕ−Ｄ
−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｌａ
−ＯＰａｃ　（実施例７の化合物。

３、ＱＱ９）及ヒｔ（ＯＢｔ　（０，６１６９）　（７
））１．Ｎ−ジメチルホルムアミド（８０ｆｆｌり溶液
にＷＳ　ＣＤ　（０，７０８９）を０℃で加えた。反応
屋台物を同温度で一夜撹拌した後、減圧で濃縮した。残
渣を酢酸エチル（２０ｈｆ２）に溶解し、５％塩酸、ｌ
ｌｌ！炭酸水素ナトリウム溶液、及び飽和食塩水で順次
洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧で濃縮し
た。残渣を酢酸エチル（１０１１２）とエーテル（５０
ｆｆ１２）から再結晶し、標題化合物Ｃ３，４４９，９
３，５％）を得た。ｍｐ１７５〜１７７℃、Ｒｒｔ値：
　０．８２゜ 実施例９　（Ｂｏａ−Ｄ−ａｌｔｏ−ＩＱｅ−Ｌｅｕ−
Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−ＤＧｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｌａ
−ＯＨの製造）Ｂｏｃ−Ｄ−ａｌｔｏ−１１２ｅ−Ｌｅ
ｕ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）Ａ
ｌａ−ＯＰａｃ　（実施例８の化合物、　３，００９）
をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０２１２）と酢酸
（２０３！１２）の混合液に溶解し、Ｚｎ末（３，０９
）を室温で加えた。混合物を同温度で１時間撹拌した後
、不溶物を濾去して減圧濃縮した。残渣をエーテル（５
０ｉ１２）とｎ−ヘキサン（１００１１２）から再結晶
して、標題化合物（２，５２９゜９５．８％）を得た。

ｍｐ１４８−１５０℃、Ｒｆ、値：　０．４９（ＣＨＣ
Ｌ３　：　ＭｅＯＨ：　ＡｃＯＨ，２０：２：１．　ｖ
／ｖ）。

実施例１０　（ＨＣｌ−Ｈ−Ｄ−ａｌｌｏ−１２ｅ−Ｌ
ｅｕ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）
−Ａｌａ−ＯＨの製造）Ｂｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏ−ＩＱｅ
−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＢｚ
ｌ）−Ａｌａ−ＯＨ（実施例９の化合物、　１．００９
）のトリフルオロ酢酸（２５ｍ１２）とアニソール（２
，５ｘｅ）溶液を水冷下１時間撹拌した。トリフルオロ
酢酸を留去後、残渣に４Ｎ塩酸のジオキサン（１１，８
ｆｆｆ２）を加え、混合物を１０分間撹拌し、減圧ａ縮
した。残渣を乾燥エーテルでトリチュレートし、標題化
合物（Ｊ３３ｎ、　１１９．９％）を得た。ｍ　ｐ　１
３２〜１３６℃、Ｒｆ４値：　０．３６　（ＣＨＣＬ３
　：　ＭｅＯＨ：　ＡｃＯＨ，１６：１：ｌ）。

ＨＣ１−Ｈ−Ｄ−ａ　１１ｏ−ＩＱｅ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔ
ｒｐ（Ｆｏｒ）　−Ｄ−Ｇ　１ｕ（ＯＢｚ　１）−＾１
ａ−ＯＨ（実施例１０の化合物、ｇｏｏｘ９）とＨＯＢ
ｔ（１，３８９）のＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（１
ｏ００ｉ（７）溶液に、ＷＳ　ＣＤ　−ＨＣｌ　（１，
５６９）及びＷＳＣＤ　（３１７１９）を水冷下加えた
。反応混合物を１０℃で一夜撹拌した後、減圧下撫縮し
た。残渣を酢酸エチル（２００１１２）に溶解した後、
５％塩酸、ＩＭ炭酸水素ナトリウム溶岐及び飽和食塩水
で順次洗浄した。生じた沈澱物を濾過し、酢酸エチルで
洗浄して標題化合物（６６９５１９，８９，７％）を得
た。

ｍｐ２９４℃（分解）、Ｒｆ、値：　０．５７゜実施例
１１の化合物（６２０ｆｆ１２）をＸ、Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド（３０ｉ０に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム
溶液（８，４８ｉ（ｉ）を水冷下加えた。反・芯温合物
を室温で１５分間撹拌した後、減圧濃縮した。

残渣をジメチルスルホキシド（１０ｉ（２）に溶解した
溶液に５％塩酸（１００ｉ１２）及び酢酸エチル（２０
０！！１２）を加えた。生じた沈殿を濾取し、水及びエ
ーテルで洗浄して標題化合物（４３３１９，８３，３％
）を得た。

ｍｐ２６８℃（分解） ＦＡＢ−ＭＳ　　ｍ／ｚ６１３（Ｍ十〇）″［理論値６
１３．７５　（Ｃ３゜Ｈ４ｔ　Ｎ　ｓ　Ｏ？＋　Ｈ）　
］Ｒｆ値：　０．２１　（ＣＨＣＩｓ　：　ＭｅＯＨ：
　：　２８％アンモニア水溶液、　１２：、４：ｌ） ［α］　ｏｆ３−７．０’　（ｃ　１．ＯＤＭＳＯ）。

試験例１ （ａ）徂受容体膜調製； ブタの大動脈をペルーフリーズ・バイオロギカルズ社（
Ｐｅｔ−Ｆｒｅｅｚ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）　（米
国）から入手し、使用時まで一８０℃で貯蔵した。この
大動脈（５０９）を解凍し、脂肪組織を除去し、はさみ
で細切し、ついで、緩衝液（０，２５Ｍ蔗糖、　５０ｍ
Ｍトリス−ＨＣｌ、　０．ｌｎＭ　ＥＤＴＡ・４Ｎａ）
　ｌｏｏｍＱ中ポリトロン（ＹＡＭＡＴＯｔｌｌｔｒａ
−Ｄｉｓｐｅｒｓｅｒ　ＭＯＤＥＬ　ＬＫ−２１）で均
質化した。ホモジネートを４℃、２０分間ｔｏ、ｏｏ。

９で遠心分離した。

形質膜画分を含む上澄液を４℃、６０分間１００．００
０９で遠心分離し、得られたペレットを粗膜画分とする
。

ベレットを分析用＠歪波［５０ｍＭ　）リス−ＨＣｌ。

１０ＱｉＭＮａｃｌ、　５　ｍＭ　　ＭｇＣ１ｔ　、フ
ェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）　１．
５μ９／　＊ａ。バシトラシンＬ２０ａ９／＊（１，ｃ
イベプシンＬ２ａ９／ｘ（１，キモスタチン６μｇ／ｘ
Ｑ、　０．１％ウシの血清アルブミン（ＢＳＡ）、ｐＨ
７，５］　５０ｘ（ｌ中に再懸濁した。

大動脈の膜画分を使用時まで一８０℃で貯蔵した。

（ｂ）ｇ製膜に対するｌ！５！−エンドセリン−１とＩ
！ＳＩ−エンドセリン−２の結合分Ｖｒ：１５■−エン
ドセリン−１または口５【−エンドセリン−２（１，６
７Ｘ　ｌ　Ｏ−１Ｍ）　　（アメルシャム。

比活性：　２０００Ｃｉ／ａｍｏｌ）を分析用緩衝液中
の大動脈膜試料５０μｅと共に最終容量２５０μｇで室
温（２０〜２２℃）で６０分間インキュベートした。

その後インキュベートした混合物をセルハーヴエスタ−
（Ｃｅ１ｌ　Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ、ブランデルＭ−２４
Ｓ）を用いて、ＣＦ／Ｃフィルター（使用前に０．１％
ポリエチレンイミンで３時間予備処理した）で濾過した
。

ついで、フィルターを０℃で洗浄用緩衝液（５０ｍＭ）
　ＩＪ　ス−ＨＣｌ、　ｐ［Ｉ７，５）全３ｍｌ”１０
回洗浄した。

濾液をガンマ−カウンター（パラカード自動ガンマー計
　５６５０型）で計数した。

その結果を第４表に示す。

第４表　ブタの大動脈膜中でＩ！Ｊ−エンドセリン−１
及び１１８１−エンドセリン−２の特定結合に対するＷ
　Ｓ　７３３ｇ物質の作用試験例２　エンドセリン誘発
のウサギの大動脈の収縮に対するＷ　９７３３ｇの作用 ウサギ（アルピノ種、雄、１１週令）を屠殺後、直ちに
大動脈を摘出し、内膜のついたストリップ（２１１巾×
２５０長）に裁断した。脂肪組織を除去した後、上記ス
トリップを、クレープスーリンガー液（ｌ１３ｍＭ　Ｎ
ａＣ１，４，ｌＳｌ１１Ｍ　ＫＣＩ、　２．２１１１Ｍ
　ＣａＣｌｔｍ。

Ｌ、２ｘＭ　ｍｇＣｌｔ、　２５ｄ　　ＮａＨＣＯｉ、
　１．２ｘＭ　　ＫＨ＊Ｐ０４゜５．５ｍＭグルコース
）を入れた２５ｘＱのオーガンチェンバー（ｏｒｇａｎ
　ｃｈａａ＋ｂｅｒｓ）に＠濁し、３７℃を保持し、か
つ９５％０２１５％ＣＯ２の混合ガスを通気した。

大動脈は、ＫＣＩの濃度を増して調製した後、１９の予
負荷型を加えた。収縮は等長時の張力増加を測定した。

エンドセリン（３，２ＸｌＧ−’Ｍ）により誘発された
ウサギの大動脈の収縮応答に対してＷ　Ｓ　７３３８物
質をテストした。合成エンドセリンはペプチド　インス
ティテユート社（株）（Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｉｎ５ｔｉｔ
ｕｔｅ　ｌｉｅ。

大阪）から人手した。エンドセリンにより全収縮応答を
誘発した後Ｗ　Ｓ　７３１ｇ物質を加えた。

Ｗ　Ｓ　７３３８物質の活性度は、エンドセリンにより
誘発された最大収縮応答の阻止百分率で表わし、第５表
に示す。

（以下余白） 第５表 エンドセリン誘発のウサギの胸部大動脈の収縮 応答に対するＷ　Ｓ　７３３ｇ物質の作用上記試験の結
果から、 Ｗ　Ｓ　７３３ｇ物質は生理活性 作用、 特に抗エンドセリン作用を有することが判明した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、ＡはＤ−Ｖａｌ基またはＤ−ａｌｌｏ−Ｉｌｅ
   基、Ｒ＾１は水素原子またはアミノ保護基、Ｒ＾２は水
   素原子またはカルボキシ保護基を意味する） で示されるペプチド化合物およびその塩類。 ２、Ｒ＾１が水素原子または低級アルカノイル基、Ｒ＾
   ２が水素原子またはアル（低級）アルキル基である請求
   項１記載の化合物。 ３、Ｒ＾１およびＲ＾２が水素原子である請求項１また
   は２に記載の化合物。 ４、ストレプトミセス属に属するＷＳ７３３８物質産生
   菌株を培地中で培養し、得られた培養物からＷＳ７３３
   ８物質を分離、採取することからなるＷＳ１３３８物質
   の製造法。５、式： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、ＡはＤ−Ｖａｌ基またはＤ−Ａｌｌｏ−Ｉｌｅ
   基、Ｒ＾１はアミノ保護基、Ｒ＾２はカルボキシ保護基
   を意味する）で示される化合物またはアミノ基及び／ま
   たはカルボキシ基における反応性誘導体あるいはそれら
   の塩類を閉環反応に付し、必要に応じてアミノ保護基及
   び／またはカルボキシ保護基の脱離反応に付すことから
   なる式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ａは上記と同一意味、Ｒ＾１は水素原子または
   アミノ保護基、Ｒ＾２は水素原子またはカルボキシ保護
   基を意味する）で示される化合物またはその塩の製造法
   。 ６、式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、ＡはＤ−Ｖａｌ基またはＤ−ａｌｌｏ−Ｉｌｅ
   基、Ｒ＾１は水素原子またはアミノ保護基、Ｒ＾２は水
   素原子またはカルボキシ保護基を意味する） で示されるペプチド化合物およびその塩類を有効成分と
   して含有することらなるエンドセリン拮抗剤。 ７、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）ｓ
   ｐ．Ｎｏ．７３３８（微工研条寄第２５５０号）の生物
   学的純粋培養物。