JPS5998094A - 免疫調節剤 - Google Patents

免疫調節剤

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JPS5998094A
JPS5998094A JP58181744A JP18174483A JPS5998094A JP S5998094 A JPS5998094 A JP S5998094A JP 58181744 A JP58181744 A JP 58181744A JP 18174483 A JP18174483 A JP 18174483A JP S5998094 A JPS5998094 A JP S5998094A
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JP58181744A
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ロナルド・デイ−・ジヨ−ンソン
ロベルト・エス・ゴルデイ−
ラルフ・エム・カストナ−
ステフアン・エイチ・ラルセン
ヤ−ル・イ−・オ−ズ
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Eli Lilly and Co
Original Assignee
Eli Lilly and Co
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 る。また、本発明はある種の既知抗生物質を免疫調節剤
として用い得ることを見出したことにも関する。
新規改良抗生物質は不断に望まれており、ヒトの病気を
治療するのにより良い抗生物質、更に、家畜の疾病に用
いる改良抗生物質も要望されている。活性の増大、抗菌
スペクトルの拡大、生体内糸における効力の増大および
製剤上の特性の改良（経口吸収の増大、血中または組織
内濃度の増大、体内半減期の長期化、排出率または排出
経路の改良、代謝率または代謝形式の改良など）などが
改良抗生物質の意図するところである。
生体内防御系（免疫系）は非常に複雑であり、その機構
を解明することは重要な目的である。この分野における
知識はこの１０年で急速に拡大したが、なお多くの事が
未知である。マクロファージは免疫系において重要な役
割を演じており、捕食性（微生物細胞を飲み込み殺すこ
とができる）、且つ、分泌性（体内のすみすみにまで到
達する化学的信号を放出することができる）である。マ
クロファージは５０以上のそれ自身破壊的であるかまた
は他の細胞への指令となる分泌産物を保有（または少な
くとも合成）することができ、時として腫瘍細胞を完全
に破壊することができる。従って、マクロファージ細胞
を活性化することにより作用する免疫調節′剤は非常に
有用である。
免疫調節剤の分野の現状は、Ｈ．Ｕｍｅｇａｗａ［肺癌
治療における非常に有用な抗生物質および小分子免疫調
節剤に関する最近の研究、第■部−微生物により生産さ
れる小分子量免疫調節剤Ｊ　（　ＩｎＬｅｒ。
Ｊ，ＣＩ　ｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　、Ｔ’ｈｅｒ．
ａｎｄ　Ｔｏｘｉｃｏｌ　、　２０　（１）　。
１９−２３（１９８２））に示されている。
アメリカ合尿国特許Ａ　４，３　３　１，５　９１には
、ある特定のα−アミノホスホン酸のべブタイド誘導体
の化学的製造方法を開示している。この誘導体はペニン
リン、セファロスポリンおよびＤ−シクロセリンなどの
抗生物質活性を増強する。この参照化合物は構造的にも
機能的にも本化合物とは異なる。
本発明は、抗生物質Ａ３３８６８因子Ａ、即ち、式１で
表わされるＮ２−グリシル−Ｎ＝（１−メチレン−２−
ホスホノエチル）ロイシンアミドと称する化合物を提供
する。
抗生物質Ａ３３８６８因子Ａはホスホノペプタイド抗生
物質群に属する新規物質である。この群には、アラホス
ファリン（Ｌ−アラニル−Ｌ−１−アミノエチルホスホ
ン酸）　（ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｒｉｔｓ
　　ａｎｄ　　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、　　１８（
６）、８９７−９０５（１９８０）参照〕、ＦＲ−３１
５６４Ｃ同上、１９（６）。
１０１３−１０２３（１９８１）参照〕およびその１也
のもの〔ヨーロッパ特許２６．−４０９および２６−４
１０ならびに日本特許Ｊ５６０５１−４９４およびＪ５
６１５６−２９４参照〕が包含される。
本発明化合物は式２ 〔式中、Ｒ１は蛋白質中に通常存在する型のび一アミノ
酸に特徴的な基、 Ｒ２オヨヒＲ３はそれぞれ水素またはＣ１−６３アルキ
ルＺは水素、Ｃ１−０６アルキル、ｃ、−Ｃ６アルカノ
イル、フェニル−ｃ、−Ｃ３アルキル、フェニル−（Ｘ
）ｍ−０１−０３アルカノイルまたはアミン保護基、Ｚ
′は水素またはＣ，−Ｃ６アルキル、Ｘは酸素または硫
黄、 ｍはＯまたは１１ ｎは０，１．２または３を表わす。
但し、Ｒ２およびＲ３か共にアルキルである場合は、同
じ基を表わすものとする。〕 で表わされる化合物およびその塩である。
式２においてｎが１であり、　Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｚ　
オヨびＺ′が水素である化合物は上記の式１の化合物で
ある。
好ましい式２で表わされる化合物は、２′かアルキルの
場合はＺもアルキルである化合物である。
式２で表わされる更に好劇しい化合物は、式２ａ〔式中
、ｋｌは蛋白質中に通常存在する型のα−アミノ酸に特
徴的な基、 Ｒ２およびＲはそれぞれ水素またはＣ，−Ｃ３アルキル
、Ｚは水素、Ｃ−Ｃアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルカノイル
、６ フエニルーＣ１−Ｃ５アルキル、フェニル−（Ｘ）ｒｎ
−Ｃ，−Ｃ３アルカノイルまたはアミノ保護基、Ｚ′は
水素またはＣ１−Ｃ６アルキル、Ｘは酸素または硫黄、
　　゛ ｍは０またはＩＪ ｎは０，１．２または３を表わす。
但し、１）Ｒ２およびＲ３が共にアルキルである場合、
　　　−同じ基を表わすものとし、２）　ｎが１の場合
、Ｒ１゜ＰＬ２．Ｒ３，ＺおよびＺ′が全て水素である
ことはないものとする。〕 で表わされる式１の化合物の誘導体およびその塩である
。
式２で表わされる化合物は、抗生物質および／または抗
生物質への中間体としても有用である。
式２で表わされる化合物またはその製薬上許容し得る塩
によりある特定の感染症を治療する方法および上記の化
合物または塩を含有して成る医薬組生物も本発明により
提供する。
本発明は更に、マクロファージ細胞を式１，２または下
記３で表わされる化合物およびその塩で活性化すること
により免反系を調節する方法を提供する。
〔式中、ｋおよびＲ３は前記と同意義である。〕Ａ３３
８６８因子Ａの製造方法は、Ａ３３８６８因子Ａを生産
するストレプトマイセス・ルリダス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　Ｉｕｒｉｄｕｓ）　ＮＲＲＬ　　１５１Ｑｌ
、その−変異株またはそれらの組替え体を、同化し得る
炭素源、墾素源および無機塩を含有する培養培地中で深
部通気発酵の条件下にて実質量の抗菌活性か得られるま
で培養することを特徴とする。
Ａ３３８６８因子Ａは常法により反応液から採取し得る
。式１で表わされる生成物を常法により史に反応させて
上式２ａで表わされる化合物を得ることができる。
この方法には、 式２ａにおいてＲ２，Ｒ３，Ｚおよび２′のうちの少な
くとも１つは水素ではない化合物の誘導体化、式１で表
わされる化合物を溶液相ペプタイド合成により反応させ
て式２ａにおいてｋは水素てありＺまたはＺ′は水素で
はない化合物を得ること、式１で表わされる化合物をロ
イシン・アミノペプチダーゼまたは選択的酸加水分解で
反応させ、−通常の溶ン夜相ペプチド合成により上式２
ａで表わされる化合物を得ること、 を包含する。
本明細書において、下記の略語を用いた。もっともその
大部分はよく知られている。
Ａｌａ−アラニン Ａ　ｒ　ｇ−アルギニン Ａｓｐ−アスパラギン酸 Ａｓｘ−アスパラギンまたはアスパラギン酸ＣγＳ−シ
スティン Ｇｌｎ−グルタミン Ｇｌｕ−グルタミン酸 Ｇｌｘ−グルタミンまたはグルタミン酸ｃ１ｙ−グリシ
ン Ｈｓｅ−ホモセリン １１ｅ−インロイシン Ｌｅｕ−ロイシン Ｌｙｓ−リジン Ｍｅｔ−メチオニン Ｎ１ｅ−フルロイシン Ｎ　ｖ　ａ−フルバリン Ｐｒｏ−プロリン Ｐｈｅ−フェニルアラニン ５ｅｔ−セリン ｊ’ｈｒ−スレオニン ｊ’ｒｐ　　トリプトファン ’ｌ’ｙ　ｒ−チロシン ＼’ａｌ−パリン〆 ＬＡｌ）Ｐ（ロイシルアミノプロペニルホスホン酸塩、
１ｃｕｃｙｌ　ａｍｉｎｏＢｒｏｐｅｎｙｌＪ！ｈｏｓ
ｐｏｎａｔｅ　の略称）は、式４ 〔式中、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ水素またはＣ１−Ｃ
５アルキルを表わす。但し、Ｒ２およびＲ３が共にアル
キルである場合は、同じ基を表わすものとする。〕で表
わされる式１および式２に共通の部分４に対して用いら
れる。
本発明の化合物は式２ｂおよびその塩で表わし？“・　
　　　７ 〔式中、Ｌ　Ａ　ｌ’　Ｐは上式４、 Ｒ１は蛋白質中に通常存在する型のび一アミノ酸に特徴
的な基、 Ｚは水素、ｃｌ−Ｃ６アルキル、ｃ、−Ｃ６アルカノイ
ル、フェニル−Ｃ１−Ｃ３アルキル、フェニル−（Ｘ）
、ｎ−Ｃ１−Ｃ５アルカノイルまたはアミノ保獲基、Ｚ
′は水素またはＣ，−Ｃ６アルキ／Ｉｚ。
Ｘは酸素または硫黄、 ｍは０才たは１、 ｎは０，１．２または３を表わす。
［蛋白質中に通常存在する型のび一アミノ酸に特徴的な
基」とは、蛋白質中で天然に存在する型である一般式 で表わされる天然のアルファーアミノ酸の残基に１を意
味する。このようなアミノ酸と対応するに１基の例とし
ては以下のものか挙げられる。アラニン（Ｒ１−メチル
）、ロイシン（Ｒ１−イソブチル）、グルタミン酸（Ｒ
’＝２−カルボキシエチル）。更に、ｋはアミノ窒素に
連結した残基を表わし得て（それに伴ない菫索に隣接す
る水素原子のうちの１つを除去して）、かくしてプロリ
ンなどの窒素含有環を形成し得る。
本明細書で用いる「Ｃ１−Ｃ６アルキル」および「Ｃ，
−Ｃ３アルキル」は、それぞれ炭素数１〜６または１〜
３の直鎖状または分枝鎖状アルキル基を意味する。この
ような基としては、メチノペエチル、イソプロピル、ｎ
−ブチル、５ｅｃ−ブチル、イソブチル、【−ブチル、
ｎ−ペンチル、イソペンチルなどか挙けられる。
本明細書で用いるｌ’−Ｃ１−Ｃ６アルカノイル」は、
炭素数１〜６のカルボン酸から誘導したアシル部分を意
味する。このアシル部におけるアルキル基は、直鎖状、
分校状または環状であり得る。このヨウなアシル基とし
ては、アセチル、プロピオニル、ｎ−ブチリル、インブ
チリル、ｎ−パレＩＪ　／ｌ／およびインバレリルが例
示される。
「フェニル−Ｃ１−Ｃ３アルキルＪおよび「フェニル−
（Ｘ）ｍ−Ｃ１−Ｃ３アルカノイル」は、ベンジル、フ
ェネチル、ベンゾイル、フェニルアセチ／へ　フェニル
プロピオニ／ｌｚ、フェノキシアセチルおよびフェニル
チオアセチルなどの基を意味する。
「アミノ保護基」は当業者にとって公知である。
適当な保護基の例は、［有機合成における保護基Ｊ　　
（１’ｈｅｏｄｏｒａ　　’ｖＶ、Ｇｒｅｅｎｅ、　　
〕ｏｈｎ　Ｗｉｌｃｙ　　ａｎｄＳｏｎｓ、　Ｎｅｗ　
Ｙｏｒｋ、　１９８１　、ＣｈａＩ）ｔｅｒ　７　）に
記載されている。
抗生物質Ａ３３８６８因子Ａは、１種以上の因子を含有
する抗生物質複合体の１っである。Ａ３３８６８複合体
は主因子Ａと未た特徴付けられていない因子を包含する
。
発酵分野および本明細書において用いる「複合体」とは
、同時に生産される個々の抗生物質因子の混合物を意味
する。発酵による抗生物質生産に通じている者には自明
のことであるか、生産される個々の因子の抗生物質複合
体に占める数および割合は、用いられる発酵条件により
変化する。Ａ３３８６８複合体においては、因子Ａか主
因子である。
次項にＡ３３８６８因子Ａの特性を記載する。
Ａ３３８６８因子Ａは、実験に基いた式Ｃ１１Ｈ２□Ｎ
３０５Ｐて表わされる、分子量約３０７の無色の非結晶
性物質である。Ａ３３８６８因子Ａの元素分析は、次に
示すおおよそのバーセン＋−ａ成を有している。
（以下余白） 実測値　　Ｃ１□Ｆ１２１Ｎ３０５ＰＮａ試料工　　　
試料■　　に基く計算値 炭素　　４１．３２　　　３８．７４　　　　４０．１
２水素　　　７．６１　　　　６．７８　　　　　６．
４３窒素　　１１．５３　　　１２．４２　　　　１２
．７６酸素　　２４．３８　　　　　　　　　　　２４
．３０リ　ン　　　　　　　−７，７０９，４１来　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　−灰分　　１３．５８　　　　〜 未灰分はリン酸塩であることが分った。
ファスト−アトム・ホンバードメント・モード（［ａｓ
Ｌ−ａ【ｏｍ　ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ　ｍｏｄｅ　）
でｆｌｔｌＪ定したＡ３３８６８因子Ａのマス・スペク
トルは、以下の如くであった。
ｒｎ７’ｌ　　　ＨＲＭ　Ｓ　　　　　元素組成Ｍ＋Ｈ
３Ｏ８３０８，１３８１８Ｃ１、■−１２３Ｎ３０５Ｐ
１４３　１４３．１１８７８　　　Ｃ７Ｈ，５Ｎ２０１
３８　１３８．０３２４０　　　Ｃ３馬Ｎ０３Ｐ分子量
−３０７ 分子式＝Ｃ１１Ｈ２□Ｎ３０５Ｐ ＫＢｒペレットによるＡ３３８６８因子Ａ（遊離酸）の
赤外線吸収スペクトルは、添付図に示すとおりである。
顕著な極大吸収は次の周波数（ｃ１〃−１）において起
こる。
３３６８．３３１２および３３００（巾広５強）。
３０６３（弱）、２９６６（中〜弱）、２８３３（非常
に弱）、２６６３（弱）、１６７１（強）。
１６２５（肩）、１５３６（強）、１４６９（弱）。
１４４２（弱）、１３８６（中〜弱）、１３４０（非常
に弱）、１２７７（非常に弱）、１２４０（肩）、１２
０７（強）、１１５７（非Ｎ　ニ弱）ｓ１０６８（中）
、１０４８（強）、９１８（中〜弱）、７９７（中）、
７７８（中）および６２５（弱）。
６へｈｃｇでＡ３３８６８因子Ａの試料を加水分解して
アミノ酸分析すると次の様な結果を得た。
クリシン　　　２．８　　　３．２　　　　８７％ロイ
シン　　　２．８６　　　３．２　　　　８７％６６％
ジメチルホルムアミド水溶液中でＡ３３８６８因子Ａを
電気滴定すると、滴定し得る基が存在してｐＫａ値は８
．２（グリシルアミ７基）であった。
Ａ３３８６８因子Ａは、水およびジメチルスルホキシド
に可Ｍで、大部分の有機溶媒に不溶である。
３５ＱＭＨｚ装置を用いた、Ａ３３８６８因子ＡのＤＭ
ＳＣ）−ｄ６に溶解した試料での核磁気共鳴スペクトル
は、Ａ３３８６８因子Ａが上式１で示される構造を有す
ることを示した。
式１および式２の化合物は塩を形成することができ、こ
の塩も本発明の一部分である。
式１および式２の化合物は、塩を形成し得る酸官能基お
よび酸付加塩を形成し得るアミ７基を共に有している。
このような塩は、例えは、抗生物質を分離および精製す
るのに宵月である。更に、製薬上許容される塩は特に有
用である。
製薬上計容されるアルカリ金属、アルカリ土類金属およ
Ｏ：アミン塩ならひに酸付加塩は特に有用である。適当
なアルカリ金属およびアルカリ土類金属塩の例としては
、ナトリウム、カリウム、す１　　　　チウム、セシウ
ム、ルビジウム、バリウム、カルシウムおよびマグネシ
ウムなどの塩が挙げられる適当なアミン塩としては、ア
ンモニウムならびに第１級、第２級あるいは第３級Ｃ１
−Ｃ４アルキルアンモニウムおよびヒドロキシ−Ｃ２−
Ｃ４アルキルアンモニウム塩などが挙げられる。アミン
塩の例としては、式２の化合物を水酸化アンモニウム、
メチルアミン、５ｅｃ−ブチルアミン、イソプロピルア
ミン、ジエチルアミン、シクロヘキシルアミン、ジイソ
プロピルアミン、エタノールアミン、トリエチルアミン
、３−アミノ−１−プロパツールなどと反応させて得ら
れるアミン塩が挙げられる。
アルカリ金属およびアルカリ土類金属の陽性塩は陽性塩
の製造に汎用される方法に従って製造する。例えば、式
２の適当な化合物を水などの適当な溶媒中に溶解し、化
学量論量の所望無機塩を含有する溶成をｐＨが極端に塩
基性になることのない　・ように注意しながら加える。
こうして得た塩は濾過または溶媒の蒸発などの常法によ
り単離し得る。
または、式２の化合物を溶解して適当なイオン交換樹脂
に通してもよい。
有機アミンとの塩も同様に製造し得る。例えは、適当な
式２の化合物を水などの適当な溶媒に溶解して、ここに
気体状または液体状のアミンを加え、溶媒および過剰の
アミンを蒸発除去し得る。
適当な酸付加塩の例としては、例えば、塩酸、硫酸、リ
ン酸、酢酸、コハク酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、
フマル酸、バルミチン酸、コール酸、パモ酸（ｐａｍｏ
ｉｃ　ａｃｉｄ　）、ムチン酸、Ｄ−グルタミン酸、ｄ
−樟脳酸、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石
酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンス
ルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン
酸、安息香酸、ケイ皮酸などの有機および無機酸との標
準的反応により形成される塩が挙げられる。
式１で表わされる新規抗生物質は、ストレプトマイセス
・ルリダスのＡ３３８６８因子Ａ生産菌を実質量の抗菌
活性が得られるまで適当な培養培地にて深部通気発酵の
条件下に培養させることにより生産する。得られる抗生
物質は、発酵分野でよく知られている種々の単離および
精製の方法で回収する。
Ａ３３８６ｇ因子Ａを製造するのに有用な新規微生物は
、アリシナ州のグランド・キャニオンの底部にあるクラ
ニック・ラピツズ（ＧｒａｎｉｋＲａｐｉｄｓ　）から
採取した土壌試料から単離した。
培養菌Ａ３３８６８と称するこの微生物は、ストレプト
マイセス・ルリダスの株として分類される。
このように分類したのは、出版物中の上記の種に関する
記載との比較に基いている（　ＲｌＥ、Ｂｕｃｈａｎａ
ｎａｎｄ　Ｎ、Ｅ、Ｇｉｂｂｏｎｓ、　［バージ−（Ｂ
ｅｒｇｅＹ　）　ノ細菌同定の手ひきＪ　８ｔｈ　Ｅｄ
　、Ｔｈｅ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ
　Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、１９７
４゜Ｅ、Ｂ。
Ｓｈｉｒｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｄ、　Ｇｏｔ【１ｉｅｂ、
　「ストレプトマイセス属菌の共同記述」、Ｉｎｔｅｒ
ｎ、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｌｓ
ａｃｔｃｒｉｏｌ　１８　（２）　：１４２　（１９６
８）。Ｅ、Ｋｕｓｔｅｒ汗国際的ストレプトマイセス属
プロジェクトに包含されるタクソンの分類および同定に
関する簡単な実施要点」、同上、２２（３）＝１３４〜
１４８（１９７２）。ＨｌＮｏｎｏｍｕｒａ　、　「Ｉ
　Ｓ　Ｐに包含されるストレプトマイセス属の４５８菌
種の分類および同定に対する要点」、Ｊ、Ｆｅｒｍｅｎ
Ｌ、　Ｔｅｃｈｎｏｌ、　５２　（２）　：　７８〜９
２（１９７４）。ｌ、Ｍ、５ｚａＢｏ　ｅｔ　ａｌ、、
　［国除的ストレプトマイセス属プロジェクトに包含さ
れるストレプトマイセス属およびストレストパーティシ
ルム属（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｍ　）の
棟を同定するための判断要項」、ＡｃＬａ　Ｂｏｔａｎ
ｉｃａ　Ａ’ｃａｄｅｍｉａｅ　Ｓｃｉｅｎｔｉａｒｉ
ｕｍＨｕｎｇａｒｉｃａｅ　２１（３〜４）’、３８７
−４１８（１９７５）。
Ｓ、Ａ、　Ｗａｋｓｍａｎ　、　［７’ｙチノマイセテ
ス属ＪＶｏｌ。
ＩＩ　、Ｔｈｅ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｗｉｌｋ
ｉｎｓ　Ｇｏ、、　Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ。
ＭＤ、１９６１．Ｐ、２３６）。
この分類は、国際的ストレプトマイセス属プロジェクト
（ＩＳＰ）の推奨する方法ＣＥ、Ｂ、　Ｓｈｉｒｌｉｎ
ｇａｎｄ　Ｄ、ＧｏｔＬＩｉｅｂ江ストレプトマイセス
属棟の特徴付方法」、Ｉｎｔｅｒｎ、　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌ、　
１６（３）、３１３−３４０（１９６６）’）とある特
定の追加試験に基いている。
炭素利用は、滅菌沖過した炭素源を最終ｄ度か１．０％
に等しくなるまで加えた１５１′≠９基礎培地で決定し
た。基礎培地はオートクレーブで殺菌した。プレートは
３０℃で１４日間培養したのち読み取った。
細胞壁の糖は、Ｌｅｃｈｅｖａｌ　ｉｅｒ　　の方法（
Ｍ、Ｐ。
Ｌｃｃｈｅｖａｌ　ｉｅｒ　、　「アクチノマイセテス
の属への分離基阜としての化学的方法」アメリカ微生物
学会のアクチノマイセテスに関する小委員会により提供
された’）−クシＥ”／プ、Ｄｒ、Ｔｈｏｍａｓ　Ｇ、
　Ｐｒｉｄｈａｍ委員会議長、微生物協会、ＲｕＬｇｅ
ｒｓ大学、ニューシャーシー州立大学、Ｎｅｗ　Ｂｒｕ
ｎｓｗｉｃｋ、　ＮＪ（１９７１年）で開催）の変法を
用いて決定した。ジアミノヒメリン酸ノ異性体はＢｅｃ
ｋｅｒ等の方法（Ｂ、Ｂｅｃｋｅｒ。
ｅｔａｌ、、　　［細胞全体の加水分解物をペーノく−
・クロマトグラフィーにかけることによるノカルジア属
とストレプトマイセス属の迅速な識別Ｊ　、ＡＰＰＩ。
Ｍｉｃｒｏｌ）ｉｏｌ、１１　、４２１−４２３（１９
６４）　’）を用いて決定した。
メラノイド色素生産（色素産生）は、ＩＳＰ≠１（トリ
プトン−酵母抽出ブロス）、ＩＳＰ舎５（ペプトン−酵
母抽出鉄寒天培地）、Ｉ　Ｓ　Ｐ　＋　７（チロシン寒
天培地）および改変ｌ５Ｐ＝ｌ）〜７（チロシンを用い
ないＩＳｌ＋７）を用し）で決定しｔこ。
デンプン加水分解は、ＩＳＰ寺４（無機塩−デンプン寒
天培地）プレー１−　（Ｄ、Ｊ、　Ｂｌａｚｅｖｉｃ　
ａｎｄＧ、　Ｍ、　Ｅｄｅｒｅｒ　、　「微生物判定に
おける生イヒ学試験の原理Ｊ　、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ
　ａｎｄ　５ｏｎｓ　、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、Ｎ　Ｙ。
１９７５、Ｐ、９９　）上でヨードによりデンプンの存
在を試験して決定した。
温度範囲およびＮａＣβ耐性は、ＩＳＰ寺２寒天培地を
用いて行った。ＮａＣｇ耐性Ｃま、１す１望の濃度にな
るまで寒天培地にＮａＣ，５を加えること番こより測定
した。どちらも３０℃で培養した。
ｌ５ＣＣ−ＮＢＳ質量中心色図（Ｃｅｎｔ　ｒｏｉｄ　
Ｃｏ１ｏｒＣｈａｒｔｓ　）、標準試料／Ｆａ２１０６
（アメ１ツ力合衆国、商務省、ｔｕ内標ｓ局、Ｗａｓｈ
ｉｎｇｔｏｎ、ｌ）、Ｃ，１９５８）および色調便覧（
４ｔ　ｈ　Ｅｄ　、Ｃｏ１ｏｒ　５ｔａｎｄａｒｄｓ　
Ｄｃｐｔ、。
Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　　Ｃｏｒｐ、　ｏｆ　　Ａｍｅｒ
ｉｃａ　、　　Ｉ　Ｌ　、　　１９５８）を月４Ｌ、）
て色名を決定した。
培養上の性状 Ａ３３８６８　は、胞子の集合色力Ｓ赤（Ｒ）色＆てあ
る気中菌糸体を豊富に産生ずる。Ｔｒｅｓｎｅｒ　ａｎ
ｄＢａｃｋｕｓ系〔色調便覧、Ｈ，Ｄ、Ｔｒｅｓｎｅｒ
　ａｎｄ　Ｅ、Ｊ。
Ｂａｃｋｕｓ　、　ｌ”ストレプトマイセス属分類に関
する色円板系Ｊ　、　Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
、ｌ　ｌ　、　３３５〜３３８（１９５６）’）におい
て上記赤色系に最も良く合致する色のタブは、５　ｃａ
淡黄桃色〜４ｅｃ灰黄桃色である。ｌ　５ＣＣ−ＮＢＳ
系において最も良く合致する色のナツプは３１　Ｐ、Ｙ
、桃色、淡黄桃色である。
この培養菌の性状は、オートミール寒天培地（ｌｓＰＡ
３）、ツアペック−溶液寒天培地およびトマト・ペース
ト−オートミール寒天培地（ＴＰＯ）上で現われる。無
機塩−デンプン寒天培地（Ｉ　ＳＰ塵４）上で生育した
とき、その性状は最も良く見られる。
コロニーの裏面は何ら特徴的な色素を産生じない。裏面
の色は、ｌ５ＰＡｄ上で生育させた場合、中程度の橙黄
色である。他の培地上で生育させた場合、上記色の濃淡
および色彩強度は変化する。
可溶性色素は産生されない。
変化性をプレートで調べると、この培養菌は安定な同質
のコロニー型を示した。気中菌糸を自さない変種も時々
観聚された。上記の培養に関して得られた所見を第１表
に詳述する。
第工表 第　■　表　つづき ａｃ−生育、ｋ−裏面、Ａｍ−気中菌糸体、Ｓ　ｌ）　
−’ｉｊＪ溶性色素 形態学的性状 培養菌Ａ３３８６８は、よく生育し、フラグメントを有
さない、単軸型に分枝した気中菌糸体を産生ずる。芽胞
柄は中程度の長さであり、鉤状および直径の大きな開環
状になっている。原始的な螺旋体も時々観察され、その
場合は短く、非常に密になっている。芽胞柄の形態は、
上述のｌ’ｒｉｄｈａｍ等のレチナクリアペルチ（Ｒｅ
ｔｉｎａｃｕｌ＋ａｐｅｒｔｉ　、ＲＡ　）の区分に含
まれる。
上記の形態は、Ｉ　’Ｓ　Ｐ　Ａ　４およびツアペック
の溶液寒天培地上で最もよく観察される。成熟した胞子
鎖は通常、１つの鎖当り約１０個の胞子を含有する。胞
子の形状は球形〜楕円形であり、主に楕円形である。胞
子の大きさは、Ｖ　１ｃｋｅｒｓ　ＩｍａｇｅＳｐｌｉ
ｔｔｉｎｇ　Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ　Ｅｙｅｐｉｅｃｅ　
を用いてｂＪ視光顕微鏡で決定した。胞子の大きさは、
長さ０．９３〜１．８５μＭ１幅０．６２〜１．３０μ
Ｍの範囲内である。平均旧な大きさは１．２８μＭＸ０
．９４μＭである。胞子の表面の状態は滑らかであった
。
生理学的性状 細胞全体を加水分解して分析すると、ＬＬ−１）ＡＩ）
（ジアミノピメリン酸）が存在しており、メソーアイン
マーは存在しないことが分った。細胞全体を加水分解し
て糖分析すると、グルコース、マンノースおよびリボー
スが存在することが分った。
これは、■型の細胞壁およびＮＣ（即ち、非特徴的）糖
型（１バージ−の十びき“同」ユ、参照）てあることを
表わす。細胞壁の主成分が上記の組み合わせであること
から、ストレプトマイセス属であることが分る。
Ａ３３８６８の炭素利用型は次の如くである。
Ｌ−アラビノース　Ｄ−グルコース、セロビオース、Ｄ
−デルクトース、Ｄ−ガラクトース、ｉ−イノシトーノ
ペ　ラクトース、Ｄ−マルトース、Ｄ−リホース、サリ
シン、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、コハク酸
ナトリウムおよびＤ−キシロースは全て生育に利用され
る。Ｄ−アラビノース、メリビオース、Ｄ−マンニトー
ル、Ｄ−ラフィノース、Ｌ−ラムノースおよびスクロー
スは生育を支持しない。
培養菌Ａ３３８６８は、ゼラチンを液化し、デンプンを
加水分解する。硝酸塩を還元しない。本培養菌は脱脂乳
を加水分解しないし、ペプトン化もしない。
培養菌Ａ　５　：３８６８はＮａＣｇに７％まで耐性で
あり、１０〜３７°の温度で生育する、Ａ３３８６８は
、トリプトン−酵母抽出プロス（１”’ＦＡＩ）中でな
らひにペプトン−酵母抽出−鉄寒天培地（ＩＳＰＡ６）
およびチロシン罪人培地（ＩＳＰＡ７）のスラント上で
生育させた場合、メラノイド色素を産生ずる。
棟決定 Ａ３３８６８の培養上、形態学上および生理学上の性状
を類似の種についての出版物中の記載と比較した。スト
レプトマイセス属の１４棟か培養菌Ａ３３８６８と非常
に良く似ていたので詳しく研究した。２種をＡ３３８６
８に最も似た種として選別した。その２棟とは、ストレ
プトマイセス―ラヘンドポリ７　ｘ　（Ｓ　ｔｒｅｐＬ
ｏｍｙｃｅｓ　Ｉ　ａｖｃｎｄｏ［ｏｌ　ｉａｃ　。
Ｅ、Ｂ、Ｓｈｉｒｌｉｎｇ　、　ｅＬ　ａｌ、、同上、
ｐ、３３９）およびストレプトマイセス会ルリダス（Ｓ
　ｔ　ｒｅｐｔｏｍｙｃｃｓｌｕｒｉｄｕｓ、　Ｅ、Ｂ
、　Ｓｈｉｒｌｉｎｇ、　ｅｔ　ａｌ、、向上、Ｉ）、
１４２）である。
上記の２棟の菌は下記の如く文献中で報告されている。
赤（Ｒ）色糸、レナナクリアベルチ（１（Ａ）の芽胞柄
形態、滑らかな（Ｓｍ）胞子表面、メラノイド色素を産
生。更に、炭素利用型および他の性状はＡ３３８６８に
非常に似てｌ、）る。両種とも、細菌名の公認リストＣ
Ｖ、Ｂ、Ｄ、　Ｓｋｅｒｍａｎ　ｅｔ　ａｌ、。
１ｎＬｅｒｎ、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍ
ａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、３Ｑ（１）。
２２５−４２０（１９８０））　　中で認められてし）
る。
培養菌Ａ３３８６８を上記２種の菌と更番こ比較した結
果を示す。
Ｓ、ラベンドポリアエ：この菌はＡ３３８６８と共通し
た性状を多数有している。相異点は殆んと゛無いか、Ｓ
、ルリダスと本発明使用菌との相異点よりも多い。一般
的な形態、色素産生、可溶性色素の欠如、メラノイド色
素の産生、胞子集合色、胞子表面状態および炭素利用は
全てＡ３３８６８と類似している。Ｓ、ラベンドポリア
エはＡ　５３８６８に比・＼て、より長い胞子鎖および
より多くの螺旋状芽胞柄を有し、フルクトース利用か欠
如しており、ツアペック溶液寒天培地中での生育かより
少ない点において異なっている。
Ｓ、ルリダス：この菌は、培養掌上、形態学上および生
理学上Ａ３３８６８に類似してＧする。Ｓ、／レリタス
も本発明使用菌も共に、赤（Ｒ）色糸てあり、特徴的な
色素を欠如しており、滑らかな胞子表面の同じ（どちら
もＲＡ）芽胞柄形態を有し、メラノイド色素を産生じ、
類似の炭素利用型を有している。上記２種の類似点およ
び相異点を第■表に要約する。第■表および第■表に、
Ａ３３８６８と５．ルリダスのより詳細な比較を示す。
第■表 類似点 好気性胞子の集合色（Ｒ） 炭素利用型 培養上の性状 特徴的色素を産生ぜず メラノイド色素産生 形態（ＲＡ） 可溶性色素を産生ぜず 胞子鎖の長さく１０〜５０） 胞子の形状 胞子表面の状態 デンプン加水分解 相異点 セラチンｌ佼化 ＮａＣ１耐性 硝酸還元 脱脂乳還元 フルクトース利用 第■表 培養菌Ａ３３８６８およびＳ、ルリダスによるｍ＝利用
せす、ＮＤ−試験せず、 →−利用、±−利用可否不明 （以下余日） 第■表 ＮＤ＝試験せず 上記の比較から、Ａ３３８６８はＳ、ルリダスに非常に
類似していることが分る。従って、本培養菌Ａ３３８６
８は、ストレプトマイセス・ルリダス（Ｋｒａｓｉｌｎ
ｉｋｏｖ　、　Ｋｏｒｅｎｙａｋｏ　、　Ｍｅｋｓ　ｉ
ｎａ　、　Ｖａｌｅｄｉｎｓｋａｙａａｎｄ　Ｖｅｓｅ
ｌｏｖ　）　Ｗａｋｓｍａｎ　ｌ　９５１として分類さ
れる。
このように分類したのは、出版物中の記載との比較に基
いたものであり、直接実験的に比較したのではない。
Ａ３３８６８因子Ａの製造に有用な本菌株ストレプトマ
イセス・ルリダスはノーサン・リーショナル・リサーチ
−センター（Ｎｏ　ｒｃｈｅｒｎ　ＲｅｇｉｏｎａｌＲ
ｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ、　Ｕ、　Ｓ、Ｄｅｐａ
ｒＬｔｎｅｎｔ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ。
ＡｇｒｉｃｕｌＬｕｒａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　５ｅｒ
ｖｉｃｅ、　Ｐｅｏｒｉａ、　ｌ１ｉｎｏｉｓ。
６１６０４）　に寄託され、保荏菌株となっており、寄
託番号ＮｋｋＬ１５１０１の下に誰でもそこから入手で
きる。
他の微生物と同様に、Ａ３３８６８因子Ａ生産菌株であ
るストレプトマイセス・ルリダスＮＲＲＬ１５１０１の
性状は変化させられる。例えは、ＮＲＲＬ１５１０１株
の変性体、組み替え体および変異体は、紫外線、Ｘ線、
高周波、放射線および化学物質などの種々の既知変異源
で処理して得るこ七かできる。Ａ５３・８６８因子Ａを
生産するストレプトマイセス・ルリダスＮＲＲＬ１５１
０１の天然および誘尋される変性体、変異体および組み
替え体を使用し得る。
ストレフトマイセス・ル＋）　タスＮＲＲＬ　１５１０
１を生育させるのに用いる培養培地は、多数の培地のう
ちのいづれでもよい。しがし、製造上の経済性、最適収
率および生成物単離の容易さの点からある特定の培養培
地が好ましい。こうして、例えは、大量発酵に好ましい
炭素源は可溶性デンプンであるが、クルコース、デンプ
ン、デキストリン、グリセリン等も用い得る。好ましい
窒素源は、カゼインの膵液消化物であるが、酵素で加水
分解されたカゼイン、大豆粉の酵素的消化物、酸加水分
解カゼインなども有用である。グリシンおよびロイシン
で培地を強化するのも有益である。
培養培地に添加し得る栄養無機塩は、カルシウム、カリ
ウ、ム、アンモニウム、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン
酸塩などのイオンを生じ得る可溶性塩である。
本菌株を生育させるのに必要な必須微量成分も培養培地
に加えなけれはならない。この微量成分は、培地の他の
成分中に不純物として菌が生育するのに必要且つ充分な
量だけ通常は存在する。
発泡か問題になる場合は、ポリプロピレングリコールな
との消泡剤を大量発酵培地に少量（例えば、０．２ｍｌ
／ｌ）加える必要がある。
実質量のＡ３３８６８因子Ａを製造するためには、タン
ク内での深部通気発酵が好ましい。少量のＡ５３″８６
８因子Ａは振盪フラスコ培養により得ることができる。
抗生物質製造に際して、大型のタンクに胞子型の微生物
を接種することに一般的に関連した時間的遅れがあるの
で、成長期にある接種菌を用いるのが好ましい。この成
長期にある接種菌は、少量の培養培地に微生物の胞子体
または菌糸体フラグメントを接種して新鮮で成長の活発
な微生物培養物を得ることにより製造する。
得られる成長期の接種物を大型タンクに移入する。
Ａ３３８６８因子Ａ生産菌は約１０°ないし約３７℃で
生育し得る。Ａ３３８６８因子Ａの生産に最も適した温
度はおよそ２８〜３０℃である。
深部通気培養方法で通常みられるように、殺菌した空気
を培養培地全体に導入する。Ａ３３８６８因子Ａを効率
よく生産するために、溶存酸素濃度は空気飽和量の３０
％以上（３０℃および大気圧において）に維持しなけれ
ばならない。
タンクで発酵させる場合は、発酵培地のｐＨをおよそ６
．５〜７．４の範囲内に維持するのが好ましく、例えは
、水酸化ナトリウムまたは塩酸などの適当量を添加する
ことにより行い得る。
Ａ３３８６８因子Ａの生産は、発酵中に、菌糸体の固ま
りの抽出物またはブロスの試料について、ある抗生物質
に感受性であることか知られている微生物に対する抗生
物質活性を調べることによって追跡できる。この抗生物
質を試験するのに有用な測定用微生物の１つにマイクロ
コツカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　Ｉｕｔ
ｅｕｓ　）がある。この生物検定は、悪天プレート上で
ペーパー・ディスク測定法により実施するのが好ましい
。
深部通気発酵の条件下で上記の如く生産したのち、Ａ３
３８６８因子Ａを発酵分野で公知の方法により発酵培地
から回収し得る。Ａ３３８６８因子Ａ生産菌を発酵させ
る間に生じる抗生物質活性は一般にブロス中に存在する
。従って、Ａ３３８６８因子Ａを最も良く回収するには
、菌糸体の固まりを除去するために先ず濾過する。この
濾過したブロスを種々の技法で精製してＡ３３８６８複
合体を得ることかできる。好ましい方法としては、炭素
カラムで吸着し、溶出してＡ３３８６８複合体を得る方
法などが挙げられる。
Ａ３３８６８複合体を更に精製し分離して特にＡ３３８
６８因子Ａを得るには、更に吸着および抽出方法を行う
。Ａ３３８６８複合体とＡ３３８６８因子Ａを精製する
のに有用な吸着物質としては、１）多孔重合体（Ｄｉａ
ｉｏｎ　ｌ−１Ｐ−２０）、２）　５ｅｐｈａｄｅｘ　
Ａ２５およびＧ−５０、Ｂｌｏ−Ｇｅ１　ｌ’　−２お
よびＰ−１０，３）陰イオン交換樹脂＝ａ）強塩基性：
ポリスチレン、Ｊ３ｉｏ　−Ｒａｄ　ＡＧ　ｌ　ｋ　２
　、１３ｉｏ−Ｒｅｘ。
１）ｏｗｅｘ　ｌおよび２　、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ　Ｉ
　ＲＡ　４００　、４０１゜４１０、ｂ）中等度塩基性
：エポキシポリアミンＢｉｏ−Ｒｅｘ　５およびＤｕｏ
Ｊｉｔｅ　Ａ　３　Ｑ　Ｂ　、　ｃ）弱塩基性：ポリス
チレンまたはフェノール性ポリアミンＢ＋。
−Ｒａｄ　Ａ　Ｇ　３　、　Ｄｕｏｌｉｔｅ　Ａ−５、
Ａ−７、ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＩＲＡ　６８．ＪＲ−４５
，ＩＲ−４Ｂ、４）シリカゲル、５）フロリシル、６）
多孔性吸着剤（ＸＡＤ−２おヨヒ４）、７）逆相樹脂、
シリカゲル／Ｃ１８およびシリカゲル／Ｃ８，８）炭素
、ｇ）ＤＥＡＥ　セルローズ、Ｊ）ＥＡＥ　　５ｅｐｈ
ａｄｅｘ、　１０）　　ポリアミド、１１）アルミナな
らひに１２）微結晶セル９−ズなどが挙げられる。供給
源は、Ｂｉｏ−ＲａｄおよびＢｌｏ−Ｇｅ１樹脂は１ｓ
ｉｏ　Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　、　Ｒｉｃ
ｌｌｍｏｎｄ　、ＣＡがら、１ＸＩｎｂｃｒｌｉｔｅ　
１６よひＸＡｌ）樹脂はＲｏｈｍ　ａｎｄ　ｌ−１ａｓ
ｓＣｏ　、　Ｐｂ１ｌａｄｃｌｐｈｉａ　、　Ｐ　Ａか
ら、Ｄｕｏｌｉｔｅ樹脂は１）ｉａｍｏｎｄ　Ｓｈａｍ
ｒｏｃｋ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、Ｒｅｄｗｏｏｄ　
Ｃ１ｔｙ。
ＣＡから、Ｓ　ｅｐｂａｄｅｘ樹脂はＰｈａｒｍａｃｉ
ａ　Ｆｉｎｅ　０ｈｅｔｎｉ（２ＵｓＡ　Ｂ　、　Ｕｐ
ｐｓａｌａ　、　Ｓｗｅｄｅｎから、Ｄｏｗｃｘ樹脂は
ＤｏｗＣｈｃｍｉｃａｌ　Ｑ）、、　Ｍｉｄｌａｎｄ、
　Ｍ　Ｉから、Ｄｉａｉｏｇは三菱化成工業株式会社、
東京、日本から、ＸＡＤ樹脂、シリカゲル／Ｃ１８およ
Ｕ’ｉリカゲ／ｌ／　／　ＣｓはＥ、Ｍｅｒｃｋ。
ＤａｒｍｓｔａｄＬ　、　Ｇｅｒｍａｎｙからそれぞれ
得た。
式Ｚａの化合物は、ペプタイド合成の常法により式１の
化合物から製造される。この方法は、１方のカルボキシ
ル官能基と他方のアミノ官能基を反応させることにより
、アミノ酸またはペプタイドの断片を縮合させてアミド
結合を製造することを包含する。縮合を効率良く達成す
るためには、１）本反応に直接関与しない反応性官能基
金てを適当な保護基を用いて不活化しておくことおよび
２）縮合するべきカルボキシル官能基を適当に活性化し
て縮合を進行させることが好ましい。この際、所望のベ
プタイド生成物か得られるような特異的保護基を利用す
るだけでなく、反応工程および反応条件の両方に注意し
て選択するようにする。本発明化合物を製造するのに用
い、特に選択された保護基および／または活性化された
官能基を有する各々のアミノ酸は、ペプタイド技術で公
知の技法を用いて製造する。
式２ａで表わされる化合物を合成する各段階において、
保護基を選別した組合わせで用いる。この特定の組合せ
により最も円滑に機能することになる。他の組合せを用
いても、おそらく成功の程度は減少するか、式２ａの化
合物の合成は行われる。従って、例えは、ベンジルオキ
シカルボニル（ＣＢｚ）、【−ブチルオキシカルボニル
（ＢＯＣ）、ｔ−アミルオキシカルボニル（ＡＯＣ）、
Ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル（ＭＢＯＣ）ア
ダマンナルオキシカルボニル（ＡｄＯＣ）　　およびイ
ソホルニルオキシ力ルボニルをアミン保護基として式２
ａの化合物の合成に用い得る。ベンジル（Ｂ　７．β）
かチロシル残基のヒドロキシ保護基として一般的に用い
られるが、Ｐ−ニトロベンジル（１’ＮＢ）、Ｐ−メト
キシベンジル（１）ＭＢ）などの他の基も用い得る。
式２ａの化合物を製造するのに用いるカルボキシ保護基
は、例えば、メチノペエチノヘペンジル、１）−ニトロ
ヘンジノペＰ−メトキシベンジル、２゜２．２−トリク
ロロエチルなどの代表的エステル形成基のいづれでもよ
い。
式２ａの化合物を製造する際における適当に保護された
Ｎ−保護アミノ酸またはペブタイド断片と適当に保護さ
れたカルボキシ−保護アミノ酸またはペプタイド断片と
の縮合は、アミノ酸またはノ ペプタイド断片の遊離カルボキシル官能基を縮合反応に
対して活性化することによって実施される。
これは、幾つかのよく知られた技法のいづれかを用いて
遂行し得る。このような活性化の技法の１つに、カルボ
キシル官能基の混合酸無水物への変換がある。上記遊離
カルボキシル官能基は、他の酸、普通はカルボン酸の誘
導体（カルボン酸塩化物など）と反応させることにより
活性化する。混合酸無水物を形成するのに用いる酸塩化
物としてハ、エチルクロロホルメート、フェニルクロロ
ホルメート、５ｅｃ−ブチルクロロホルメート、インブ
チルクロロホルメート、ピバロイルクロライドなどか例
示される。インブチルクロロポルメートが好ましい。
縮合反応を実施するためにカルボキシル官能基を活性化
する他の方法には、その活性なエステル誘導体へ変換す
る方法がある。このような活性エステルとして、例えは
、２，４．５−トリクロロフェニルエステル、ペンタク
ロロフェニルエステル、Ｐ−ニトロフェニルエステルな
どが挙ケラレる。
他の利用し得る縮合法としては、よく知られているアジ
ド縮合法かある。
式２ａで表わされる化合物の製造に用いる合成工程中の
ある特定の時機に、選別した保護基の開裂か必要である
。ペプタイド合成に習熟した化学者ならば、代表的保護
基から、生成物の選択的開裂を遂行してアミノ酸または
ペグタイド断片上に存在する１種またはそれ以上、但し
全数を超えない範囲で保護基を除去し得るという点で適
当な保護基を容易に選別し得る。この技法はペプタイド
分野ではよく知られている。選択的開裂に利用できる技
法についての更に充分な論述は文献中に見られるＣ　５
ｃｈｒｏｄｅｒ　ａｎｄ　Ｌｕｂｋｅ、　Ｔｈｅ　Ｐｅ
ｐｔｉｄｅｓ　。
Ｖｏｌｕｍｅ　Ｉ、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　
、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　（１ｇ　６５　）、特に、７２
〜７５頁の表を参照〕。
カルボキシル保護基の開裂はアルカリ性けん化により遂
行し得る。保護されたカルボキシル基の脱エステル化に
は、一般的に、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水
酸化リチウムなどの水酸化アルカリ金属を通常用いた比
較的強アルカリ性の条件を用いる。けん化を実施する本
反応条件は当該分野でよく知られている。カルボキシル
保護基は例えば、パラジウム−炭素などの触媒の存在下
に水素化するなどの接触還元によっても除去し得る。
更に、カルボキシル保護基かＰ〜ニトロベンジルまたは
２，２．２−）リクロロエチルである場合は、脱保護化
は亜鉛と塩酸の存在下に還元することにより遂行し得る
。
アミン保護基は、保護されたアミノ酸またはペプタイド
をギ酸、トリフルオロ酢酸（Ｔ　Ｆ　Ａ　）、ｐ−）ル
エンスルホン酸（ＴＳＡ）、ベンゼンスルホン酸（Ｂ　
ＳＡ　）、ナフタレンスルホン酸なとの酸で処理して、
各々の酸付加塩生成物を形成することにより開裂する。
アミノ保護基の開裂は、保護されたアミノ酸またはペプ
タイドをＨＢ　ｒまたはＨＣＩと酢酸の混合物で処理し
て、対応する臭イし水素酸または塩酸付加塩を製造する
ことＧこよっても遂行し得る。用いる特定の方法また（
ま試薬（ま特定の脱保護反応に関与する物質の化学的ま
た（ま物理的性状に依存する。
ｎか０てありＺか水素である式２の化合物、Ｈ−ＬＡＰ
Ｐ化合物は特に有用な中間体である。この化合物は式１
の化合物からグリシル基を除去することにより製造され
る。グリシル基Ｃマロイシン・アミノペプチダーゼ（ｎ
ａｐ）またｃ′！選択的酸カロ水分解により選択的に除
去され、Ｈ−ＬＡＰＰ中間体を得る。
式２ａの化合物を製造する一般的工程番よ次のように図
示し得る。本工程中、記号（−ＡＡＪｃｉアミノ酸残基
を表わし、ＧＬＡＰＰはＡ３３８６８因子Ａを表わす。
（以下余白） ａｐ ＧＬＡＰＰ　　−一一−−−−−−→　）ｌ　−ＬＡ　
１）　１）（ＡＡ）１−ＧＬＡＰＰ　　　　　（ＡＡ）
２−（ＡＡ）’−ＬＡＰＰ式２ａで表わされる化合物を
上記工程で製造する際に、意図する最終産物のＬ　Ａ　
ｌ’　Ｐ基をＣ−末端反応物質として有する化合物を用
いるのか好ましい。
式２の代表的化合物を以下に例示する。
Ａｌａ　−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰ。
′ｌ″ｙｒ　　−Ａｌａ　　−Ｇｌｙ−ＬＡＰＩ’。
Ａｌｇ−Ｇｌ’γ−！、Ａ　Ｐ　Ｐ。
Ｔｙ　ｒ　−Ａｒｇ　−Ｇｌ　ｙ　−ＬＡＰ　Ｐ。
Ｎｖａ　−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰ。
−１−ｙ　ｒ　−Ｎｖａ　−Ｇｌ　ｙ　−ＬＡ　Ｐ　Ｐ
ｌＶａｊ　−Ｇｌ　ｙ　−ＬＡＰ）’。
Ｔｙｒ　−ｖａｌ　−Ｇｌ　ｙ　−ＬＡＰＰ。
Ｎｌ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−ＬＡＰ　Ｐ Ｔｙｒ−Ｎｌｅ　−Ｇｊｙ　−ＬＡｉ’ＰＬｅｕ−Ｇｌ
ｙ−ＬＡＰＰ Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＬＡＰＰ ｌ　１ｅ　−Ｇ１　ｙ　−ＬＡＰＰ ＧＪ　ｙ　−１１ｅ　−ＧＪ　ｙ　−ＬＡＰＰ。
Ａｌ　ａ　−Ｇｌ　ｙ　−ＬＡＰ　Ｐ Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰ Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰ Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＬＡＰＰ ｌｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＬＡＰＰ Ｌｙｓ−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰ Ｐｒｏ　−ＧＪｙ　−ＬＡ１’Ｐ ”ｉ’ｈｒ　−Ｇｌ　ｙ　−ＬＡＰＰ ’Ｉ”ｒｐ　−ＬＡＰＩ’１ Ｖａｌ　−Ａｌａ　−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰＳｅｒ　−Ａ
ｌａ−Ｇｌｙ−ＬＡＰＰ Ｎｌｅ　−Ａｌａ　−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰ　　−ＭｅＬ
−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰ。
Ｔｙｒ　−Ｍｅｔ　−ＧＪｙ−ＬＡＰＰ。
Ｐｈｅ−Ｍｅｔ　−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰＬｅｕ−Ｍｅｔ
−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰ ｌｌｅ　−１ｖｉｅｔ　−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰＶａｌ　
−ｙｉｅｔ　−Ｇｌ　ｙ　−ＬＡＰＰＳｅｒ　−ＩＶＩ
ｅｔ　−Ｇｌ　ｙ　−ＬＡＰＰＡｌａ　−ＬＡＰＰ Ｔｙｒ　−ＬＡＮＰ Ｎｌｅ　　−ＬＡＰＰ Ｈｓｅ　−ＬＡＰＰ Ａｌａ　−Ｖａｌ　　−ＬＡＰＰ Ｃｙｓ　−ＬＡＰＰ Ｃｙｓ　−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰ （−Ｉｓｅ　−Ｇｌ　ｙ　−ＬＡＰＰ Ｖａ　ｌ　−Ｇｌ　ｙ　−ＬＡＰ　Ｐ Ｇｌｙ　−Ｌｅｕ　−ＬＡＰＰ Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　−ＬＡＰＰ Ｇｌ　ｙ　−Ｎｌ　ｅ　−ＬＡＰＰ ｐＨｅ　−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰ Ｇｌ　ｙ　　−Ｈｓｅ　　−ＬＡＰＰ Ｎｖａ　−Ｇｌｙ　−ＬＡＰＰ Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−ＬＡＰＰＳ　　ｔ Ｇ１γ−Ｇｌｙ−ＬＡＰＰ。
Ｖａｌ　−ＬＡ）’Ｐ１ １１ｅ　−ＬＡＰＰ。
Ａｒｇ−ＬＡＰＰ。
Ａｓｐ−ＬＡＰＰ。
Ｇｌｙ　−Ａｓｘ　−ＬＡＰＰ。
Ｇｉｎ　−ＬＡＰＰ Ｇｌｕ　−ＬＡＰＰ Ｇｌ　ｘ　　−Ｇｌ　ｙ　　−ＬＡＰ　Ｐ。
Ｌｅｕ　−ＬＡＰＰ Ｎｖａ　−ＬＡＰＰ。
Ｐｈｅ　−ＬＡＰＰ Ｓｅｔ　−ＬＡｋ’　Ｐなど。
本発明は、更に、式１，２および３で表わされる化合物
を含有する組成物およびそれらにより免疫系を調節する
方法に関する。式３て表わされる化合物は当該分野にお
いて公知である〔例えは、Ｈｅｎｄｌｉｎ　ｅｔ　ａｌ
ｌ、　５ｃｉｅｎｃｅ　１６６．１２２（１９６９）参
照〕か、その免疫調節作用については、これまでに知ら
れていなかった。Ｒおよび技が水素である式３の化合物
は抗生物質ホスホマイシンである。
式１．，２および３で表わされる化合物は免疫調節活性
を荷しており、このことは、化合物のマクロファージ活
性化能を調べる生体外系および生体内系試験ならびに実
験的細胞内感染症の動物における生体内試験により示さ
れる。式１および式２で表わされる化合物は上記方法で
好ましい結果を示す。関連のホスホン酸抗生物質である
アラホスフィンおよびホスミドマイシンは、上記の生体
外系試験において免疫調節活性を示さなかった。
式１，２または３で表わされる化合物のマクロファージ
活性化能は公知の方法に従って測定した。
第１法は、生体外系における化合物のネスミ・マクロフ
ァージを活性化する能力を測定する方法である。腹腔内
のマクロファージを標的細胞の添加と同時に式１，２ま
たは３の化合物にさらした。
このように処理したマクロファージのＩｆｉ　ｌｊＡ細
胞に対する毒性をトリパンブルー法（ｃｒｙｐａｎ　ｂ
ｌｕｅｅｎｕｍｅｒａｔ　１ｏｎ）で４８時間後に測定
した。本組成物を介したマクロファージの活性化にょる
Ｐ８１５細胞の増殖阻害の割合（％）を、緩衝液にさら
したマクロファージの存在下で生育させたＰ８１５細胞
の場合との比較で計算した。本方法による試験結果を第
１表および第■表に提示する。
第１表 式１の化合物によるマクロファージを介した腫瘍細胞に
対する毒性の誘起 ＮＴ−試験せす 第■表 ホスホマイシンによるマクロファージを第２法は、本組
成物で処理したマウスから腹腔内洗浄により３．５また
は１０日後に腹腔内のマクロファージを採取し、プラス
チック上に固着させて精製する方法である。１６闘の簡
（ｗｅｌｌ）に約４×１０個のマクロファージを入れ、
ここに、４×１０４個のＰ８１５細胞を牛胎児血清２０
％を補ったＲｏｓｗｅｌｌ　Ｐａｒｋ　Ｍｅｍｏｒｉａ
ｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　１６４０培地２ｍｌに混ぜた
ものを積層した。培地は全て５％のＣＯ３を混じた空気
を含む３７℃の湿った培養器中に保持し、細胞毒性は血
球計測器で勘定した生命力のある細胞の数に基いて４８
時時間区評価した。それぞれの群について３つづつの培
地を用意して、平均細胞数および標準偏差（Ｓ、Ｅ、）
を計算した。トリス緩衝化食塩水で処理した普通のＢＡ
Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスから採取した腹腔内マクロファー
ジは、上記の条件下において・、Ｐ８１５標的細胞の増
殖に影響を与えなかった。このことは、生命力のある細
胞数および白血球細胞のＤＮＡ合成により評価した。各
々の実験を開始するに際して、マクロファージと標的細
胞の比率はおよそ１ｏ：１であった。本組成物を介した
マクロファージの活性化によるＰ８１５細胞の増殖阻害
の割合（％）を、緩衝液で処理した動物から採取したマ
クロファージの存在下で生育させたＰ８１５細胞の場合
との比較で計算した。この試験結果を第■表に提供する
。
第■表 生体内系における式１の化合物を用いたまた、主たる細
胞免疫が活性化されたマクロファージによる細胞内感染
症に普通のおよび免疫低下の動物を感染させる試験にお
いて、式１，２および３で表わされる化合物は有効な免
疫調節剤であることを見出した。細胞内感染症は、 Ｊｖｉｙ’ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｔｕｂｅｒｃｕ
ｌｏｓｉｓ　。
Ｂｒｕｃｅｌｌａ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｌｙｐｈｉ、 Ｌｉ５ｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ　。
Ｈｉｓ【ｏｐｌａｓｍａ　　ｃａｐｓｕＪａｔｕｍ　。
Ｃａｎｄｉｄａ　　ａｌｂｉｃａｎｓ Ｃｈｌａｍｙｄｉａｅ Ｌｅｇｉｏｎｅ目状 Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ　　ｇｏｎｄｉｉ　。
Ｂｅ５ｎｏｉｔｉａ　　ｊｅｌｌｉｓｏｎｉＰｌａｓｍ
ｏｄｉｕｍ　　ｂｅｒｇｈｅｉ　。
Ｌｅ　ｉ　ｓｈｍａｎ　ｉａ　ｓ　ｉ　ｓおよびＨｅｒ
ｐｅｓ　　ｓｉｍｐｌｅｘ などの細菌、かび、リケッチア、原虫およびウィルスに
より起こり得る。
式１の化合物で前処理した場合、致死的なリステリ７−
モ／サイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔ
ｏｇｅｎｅｓ）ＥＧＤ感染症からマウスを保護するのに
非常に有効であった。本試験においては、５×１０５個
の生命力のあるリステリア・モノサイトゲネスＥＧＤの
細胞を含有する液０．１　ｍｌを尾の側静脈に投与して
感染させる５、３および１日前に、体重１８〜２０Ｑの
ＣＤ１マウスの腹腔内を被検化合物で前処理した。−被
検化合物はパイロジエンを含まない水に溶解して、その
０．２５ゴを腹腔内に投与した。
各試験濃度について、１０匹づつのマウスを用いた。対
照のマウス１０匹は、感染させる５、３および１日前に
パイロジエンを含まない水０．．，２５　ｍｌで腹腔内
処理した。マウスはおりに入れ、毎日水と餌を与え、マ
ウスの生存数を１４日間毎毎日計測した。１４日目に生
存しているマウスは全て生存期間１５日間とみなし、各
々の群について平均生存期間を計算した。処置群と対照
群との有意差は標準的ＩＴ”試験により決定した。
式１の化合物は、カブトガ三・溶解質テストにおいて、
菌体内毒素について陰性であり、標準的な寒天拡散試験
において、Ｌ、モノサイトゲネスＥＤＧに対して生体外
系における本質的抗菌活性を欠如していた。
リステリア・モノサイトゲネスに対する生体り系におけ
る試験結果を第■表に要約した。
第■表 マウスのリステリア・モノサイトゲネス感染症に対する
式１の化合物の・前処理による保護効果最下段を除き、
表中の数字は生存率を表わす。
木無処置対照群との有意差有り（１Ｔ′試験による）。
Ｐ＜０．０５ 才だ、式１の化合物で前処理した場合、致死的なカンジ
ダ・アルビカ７７．　（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａ
ｎｓ　）　Ａ２６感染症からマウスを保護するのに非常
に有効であった。本試験においては、５×１０個の生命
力のあるカンジダ・アルビカンスＡ２６の細胞を静脈投
与して感染させる５、３および１日前に、体重１８〜２
０ｇのＣＩＪ１マウスを被検化合物で腹腔内的または皮
下的に前処置した。被検化合物はパイロジエンを含まな
い水に溶解して、その０．２５ｍ１を投与した。各試験
濃度について、１０匹づつのマウスを用いた。１０匹の
マウスは、感染させる５、３および１日前にパイロジエ
ンを含まない水０．２５ｍ１”（腹腔内または皮下処理
して対照とした。被検化合物の免疫調節作用は、感染の
２４時間前に４００ｋにさらしたＸ線照射マウスまたは
感染の５，３および１日前に５０Ｍ５／／ｋＱのシクロ
ホスファミド５０１１１１７ｋＱで腹腔内処理したマウ
スにおいて研究した。マウスはおりに入れ、毎日水と餌
を与え、マウスの生存数を毎日計測した。感染の１８日
後に生存している普通のマウスは生存期間を１９日間と
みなした。感染の１２日後に生存シているＸ−照射また
はサイクロボスフアミド処理したマウスは、生存期間を
１３日間とみなし、各々の群について平均生存期間を計
算した。処置群と対照群との有意差は１Ｔ“試験により
決定した。式１の化合物は、標準的な寒天拡散試験にお
いて、Ｃ，アルビカンスＡ２６に対して生対外系におけ
る本質的抗かび活性を欠如していた。
カンジダ・アルビカンスに対する生体内糸における試験
結果を第ｖ〜■表に要約する。
第Ｖ表 普通のマウスにおけるカンジダ・アルビカンス感る）。
ｌゝ＜０．０５ 第■表 サイトホスファミド前処置マウスにおけるカンジダ・ア
ルビカンス感染症に対する式１の化合物前処置による保
護効果 る）。Ｐ＜０．０５ 第■表 Ｘ線照射マウスにおけるカンジダ・アルビカンス感染症
に対する式１の化合物前処置にょ米無処置対照群との有
意差有り（Ｎ　Ｔ　Ｗ試験による）。Ｐ＜０．０５ 式１，２および３で表わされる化合物は、免役不全を治
癒する必要がある対象に５いて冶痛を１」能にするので
、ヒトおよび動物の治療に有用である。結果として、式
１，２および３で表わされる化合物は釜数の治療上の用
途を有すると考えられる。本化合物は、細胞免役の治療
刺激を増加させたり補助したりすることにより体内の総
合免役（Ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ）を
補助するのに有用であると考えられる。このようにして
、本発明化合物は生体内系においてかびもしくはマイコ
プラズマによる感染症、結核またはらいなどの慢性の感
染症ならびに急性Ｓよび慢性のウィルス性感染症などの
疾患の治療に有用になる。適用する際には、式１，２お
よび３で表わされる免役調節化合物を１種または２種以
上の抗微生物剤または抗生物質と組合せて投与し得る。
このように組み合わせて予防的もしくは治療的に微生物
による感染症の制御および／または処置に用い得る。
更にまた、本化合物は、細胞性免疫が問題となる場合、
とりわけディ・ジョルジー症候群（先天性の胸腺欠如）
のような免疫欠如の場合には有用であると考えられる。
従って、本化合物は、全身性の狼療紅斑、変形関節炎な
どのように有害抗体か存在するある特定の自己免役疾患
において治療上有用である。また、新生物や臓器移植な
どのような免疫応答か通常以下である状態の治療におい
ても石川である。目的化合物の免疫調節上の有効１辻ヲ
投与すると、それ単独で、あるいは、外科的切除などの
他の治療方法と相まって、上記の状態（特に新生物）を
治療するのを補助する。
従って、本発明の一側面は、免疫系を調節する必要があ
る対象、ヒトや動物に、目的化合物のいづれかの免疫調
節上の有効量を、好ましくは医薬用担体と共に投与する
ことを特徴とする当該対象の免疫系を調節する方法であ
る。ここで用いた「調節」とは、本化合物か免疫系を普
通のバランスのとれた状態に維持させるという意味であ
る。本発明方法を実施するに当っては、式１，２または
３で表わされる化合物の有効量を感染したあるいは感染
する恐れのある温血動物に非経口的に投与する。
免疫系を調節するのに有効な投与量は、投与する化合物
、免疫系の応答を要する感染症の重症度ならびに動物の
年齢、体重および状態により変化する。しかし、非経口
的に保護するのに要する全投与量は、一般的に、約５〜
約１００　ｍｆ／／ｋ（ｊ、好ましくは、約１０〜約５
０ｎ１７ｋＱの範囲内である。
別の側面として、本発明は細胞内感染症を抑制するため
に免疫系を調節するのに有用な組成物に関する。この組
成物は、適当な賦形剤と共に式１才たは２で表わされる
化合物を含有する。組成物は、製剤分野で知られている
方法によって、非経口投与用に製剤化できる。
上記化合物を含有する有効な注射し得る組成物は、）冒
濁剤または溶剤の形を成している。適当な製剤を調製す
る際には、一般的に、遊離塩基よりも酸付加塩の方が水
溶性か高いことか知られている。同様に、塩基は中性ま
たは塩基性の溶液よりも希酸または酸性溶液に溶解する
。
溶剤の場合、本化合物は生理学的に許容し得る賦形剤に
溶解する。このような賦形剤は、適当な溶媒、要すれば
ベンジルアルコールなどの保存剤および緩衝剤を含有す
る。有用な溶媒としては、例えは、水、水性アルコール
類、グリコール類および炭酸ジエチルなどの炭酸エステ
ルか挙げられる。上記の水溶液に含まれる有機溶媒は、
一般的に５０容量％未満である。
注射し得る）け濁組放物は、賦形剤として、アジュバン
トと共にあるいは用いずに、液性の懸濁媒体を要する。
この）菌量媒体は、例えば、水性ポリビニルピロリドン
、植物性油もしくは高Ｍ製鉱浦などの不活性油または水
性カルボキシメチルセルローズなどでよい。
本化合物を懸濁組成物中に懸濁させておくために、適当
な生理学的に許容し得るアジュバントが必要である。ア
ジュバントは、カルホキジメチルセルローズ、ポリビニ
ルピロリドン、ゼラチンおよびアルジネートなどの濃化
剤の中から選択するとよい。多数の界面活性剤も懸濁剤
として有用である。レシチン、アルキルフェノール・ポ
リエチレンオキシド付加物、ナフタレンスルホネート、
アルキルベンゼンスルホネートおよびポリオキシエチレ
ン・ソルビタンエステルは有用な懸濁剤である。
液性懸濁媒体の親水性、濃度および表面張力に影響を与
える多くの物質は、個々の場合に応じて、注射し得る）
ひ濁剤の調製を援助し得る。例えは、シリコン、消泡剤
、ソルビトールおよび糖類なとは有用な懸濁剤となり得
る。
式１および２で表わされる化合物の製造をより充分に例
示するために、以下に実施例を提示する。
実施例１ ストレプトマイセス・ルリダスＮＲＲＬ１５１０１の凍
結乾燥沈澱を滅菌水１〜２ｄ中に溶解し、以下の組成を
有する寒天スラントに接種するのに用る。
肉エキス　　　　　　　　　　　　　０．０５グルコー
ス　　　　　　　　　　　　　１．２５コーン・スター
チ　　　　　　　　　０．５ポテト・テキストリン　　
　　　　　０．５酵母エキス　　　　　　　　　　　　
　０．０５カセインの酵素的加水分解物ａ）０．０３川
ｍ性肉ペプトンｂ）０．５ 廃糖蜜　　　　　　　　　　　　　　０．２５Ａｌ　ｇ
　Ｓ　Ｕ　４．７　　馬Ｌ）　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　０．０２５ツアペツクのミネラル
ストック′０．２脱イオン水　　　　　　　　　　　全
量を１４とする適量 ５ＮＮａＯＨで殺菌前のｐＨを７．５に調整。殺菌後の
ｐＨは６．８゜ ａ）ＮＺ７ミ７　Ａ　％Ｉ−Ｉｕｍｋｏ　５ｈｃｆｆ　
１ｃｌｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　。
Ｌｙｎｄｈｕｒｓｔ　、　Ｎ　Ｊｏ ｂ）ＯＰｖｉペプトン、Ａｍｂｅｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ、　Ｊｕｎｅａｕ　。
ＷＩ５３０３９゜ Ｃ）ツアペックのミネラルストックは下記の組成を有す
る。
ＫＣｆｉ　　　　　　　ｌ　９％ Ｍｇ５０４−７Ｈ２０１０％ ＦｅＳＯ４−７Ｈ２０２％（濃塩酸２ｄに溶解）脱イオ
ン水　　　全量を１４とする適量接種したスラントをお
よそ７〜１４日間３０℃で培養する。成熟したスラント
培養物を滅菌蒸留水Ｃ１０ｍ１）で被い、滅菌ピペット
で掻き出して胞子をほぐす。得られる胞子の懸濁液Ｑ、
５　ｍ８分を以下の組成を有する増殖用培地５０ｍ１に
接種するのに用いる。
クルコース　　　　　　　　　　　　　１．５ポテト・
テキストリン　　　　　　　２．０大豆粉　　　　　　
　　　　　　　　　１．５酵母エキス　　　　　　　　
　　　　０゜１コーン・ステープ・リカー　　　　　１
．ＯＣａ　Ｃ０３０−２ 冷水道水　　　　　　　　　　　全量を１４とする適量 ５ＮＮａＯＨで殺菌前のｐＨ約ｒ６ｉ’ｉこ１−整丁−
殺菌後のｐｌ（は６．５〜６．７゜ 」１記の接種した増殖用培地を２５０ｍ１容エーレンマ
イヤー・フラスコ中で、２インチ（５，０８ｃ７ｎ）の
円を描いて２５０　ｒＰｍで回る回転式振盪器上で約４
８時間３０℃で培養する。
増殖用培地での培養は、寒天−スラント培養物、欣体菫
素下で保持した培養物および凍結乾燥した培養物ペレッ
トで首尾よく開始した。
培養した増殖用培地（０，８〜２％ｖ／ｖ　）は、以下
の組成を有する生産培地５０ｍ／に接種するのに用いる
。
成　　　　分　　　　　　　　　　　　　量（％）可洛
性デンプン　　　　　　　　　　３．０カセインの膵液
消化物　　　　　　　１．０Ｍ　ｇ　Ｓ　０４・７　Ｈ
２００−０５に２ＨＰＯ４０，０５ モリフデン酸アンモニウム　　　　　０．０１Ｃａ　Ｃ
Ｏａ　　　　　　　　　　　　　　　Ｏ−２ツアペツク
のミネラルストックａ）　　ｏ、２（２ｍｌ／＃）脱イ
オン水　　　　　　　　　　　全量を１４とする適量 ａ）前記寒天スラント培地の脚注Ｃ）を参照接種した生
成培地を２５０ｍ１容のエーレンマイヤー・フラスコ中
で、２５ｏｒＰｍで回る２インチの回転式振盪器上で３
〜５日間３０℃で培養した。
Ｂ、Ａ３３８６８のタンク発酵 大量の接種物を得るために、培養した増殖用培地１０ｍ
１を前記党ように製造し、これを増殖用培地と同じ組成
を有する第２段階の増殖用成長培地４００　ｍｌに接種
するのに用いる。この第２段階の培地を２４容フラスコ
中で、２５０　ｒＰｍで回る２インチの回転式振盪器上
で４８時間３０℃で培養する。
このようにして培養した第２段階の増殖用培地（２ｅ）
を工程Ａで得たのと同じ組成を有する滅菌生産培地１０
０１に接種するのに用いる。この接種された生産培地を
１６５１！容の発酵タンク内でおよそ４〜６日間３０℃
で発酵させる。この発酵培地を汎用される振盪器で攪拌
し、大気圧で空気飽和量の３０％以上の溶存酸素濃度を
維持するに充分な速度で滅菌空気を導入する。
Ｃ１式１の化合物の分離 工程Ｂで記載したようにして得た発酵ブロス（２００ｍ
Ｊ）を沖過助剤（２％、　Ｈｙｆｌｏ、　Ｊｏｈｎｓ　
−Ｍａｎｖｉｌ　ｌｅ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｃｏｒｐ、
　）を用いて濾過した。
菌糸体は廃棄し、濾過したブロスを１６１のＤｉａｉｏ
ｎＨＰ−、）Ｑカラム（三菱化成工業）に吸着させた。
このカラムをアセトニトリルと水の混液（１：９）１５
０ｇで溶出して４４づつの分画で採取した。
式１の化合物の溶出液はＨＰＬＣ測定法で追跡した。こ
の測定法において、目的化合物は下記の条件下で１／４
″ｘ　３　Ｑ　ａｎ　Ｚｏｒｂａｘ　ＯＤ　Ｓ　（Ｄｕ
ｐｏｎｔ　、　１２μ）カラムから５．１分で溶出した
。
流速−２，９ｍｌ　７分 検出−２５４ｎｍ　テ（ＤＵＶ ｇ度＝０．．１６吸収ユニツト・フルスケール溶出溶媒
−０，１％　ＩＪン酸緩衝液に溶かした８％ＣＨ３ＣＮ
　、　ｐＨ＝　３ 所望の分画を減圧下に濃縮してアセトニトリルを除去し
、粗生成物１６７１７（ｉＩ度は少量を乾燥して重さを
測って決定した）を含有する水溶液を得た。
得られた水性粗生成物５０ｇ分を２４のＨｌ）　−２０
カラムにかけ、このカラムを１０％ＮａＣ１（４ｇ）を
含有する水で洗浄し、アセトニトリルと水の混液（１：
９）で溶出して２００ｍ１つつの分画で採取した。この
分画をＨＰＬＣ測定法で分析し、活性分画を合し、減圧
下に濃縮してアセトニトリルを除去し、粗生成物約１５
１ｉ’を含有する水性濃縮物を更に得た。
この水性濃縮物（８〜１０ｆ）または元のＨＰ−２０水
性机生成物の一部を、２１のＬＰ−１／ＣＩ８製造的逆
相Ｈｌ）　Ｌ　Ｃカラム（Ａｂｂｏｔｔ　ｅｔ　ａｌ。
アメリカ合衆国特許４，２８７，１２０（１９８１年９
月１日登録、実施例６〜７参照）に記載されたようにし
て製造）にかけた。カラムを水２１で洗浄したのち、ア
セトニトリルと水の溶液（５：９５）および０１％酢酸
（ｐＨ＝３）で１２０ｍ１１分にて浴出シて、Ｉ−Ｉ　
Ｐ　Ｌ　Ｃで測定して８０＃Ｉ１つつの分画を採取した
。溶出の過程は２５４　ｎｍのＵＶで追跡した。所望の
分画を合し、凍結乾燥して更に精製された生成物（２〜
４９）を得た。
この生成物を下記の様にして更に精製した。１ｇ分を］
、　ｌｃｖ　ＺｏｒｂａｘＯＤ　Ｓ　（１２μ）製造的
ＨＰ１、Ｃ逆相カラムのクロマトグラフィーに掛け、ア
セトニトリルと水の溶液（５：９５）および０．１％酢
酸（ｐＬｌ＝３）で５Ｑｍｌ１分の速度にて溶出し、２
５ｍ１つつの分画を採取した。溶出液は２５４ｎｒｎの
Ｕｖで追跡し、分画は２２５ｎｍのＨＰＬＣで分析した
。所望の分画を合し、乾固するまで凍結乾燥して精製物
２００〜５００〜を得た（８５〜９５％の純度）。
発酵ブロス２００１からの目的化合物の全収量は°５〜
６ｇであった。
この精製物質の菌体内毒素に関してカブトガニ・変形細
胞溶解１（ＬＡＬ）試験を行った。本テストが陽性の場
合は、物質をＺｅＬａ　Ｐｏｒ　ｆｉｌｃｅｒ　（Ａｒ
ｖｉＦ　　ＣＵＮＯ，Ｍｅｒｉｄｅｎ、ＣＴ　）を通し
て水中１ｍｙ　／　ｍｌで濾過して、菌体内毒素を除去
した。Ｐ液を凍結乾燥で乾固させて菌体内毒素を含まな
い精製された式１の化合物を合計３〜５．６ｇ得た。
菌体内毒素は、パイロジエンを含まない滅菌水の中に中
空繊維束透析（ｈｏｌｌｏｗ−ｆｉｂｅｒ　ｂｕｎｄｌ
ｅｄｉａｌｙｓｉｓ　）によっても除去した。得られる
物質（約５００〜）を水（５ｍｌ）に溶解して、この溶
液を、分子ｆｆ１５０００ダルトンで切った４４−繊維
５ｐｅｃｔｒａ　Ｐａｒ　Ｉ（Ｆ中空繊維束（Ｓｐｅｃ
ｔｒｕｍ　ＭｅｄｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ　、　
Ｉｎｃ、　、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　、　Ｎ　Ｙ　）によ
り連続的に循環させた。中空繊維束はパイロジエンを含
まない滅菌水３００ｄを満たしたＦｌｅａｋｅｒ中空繊
維東透析装置（Ｃｏｒｎｉｎｇ　Ｇｌａｓｓ　ｖＶｏｒ
ｋｓ　、　Ｃｏｒｎｉｎｇ。
ＮＹ）に装着した。濃縮物をＦＭＩポンプ（ｍ□ｄ２１
ＲＰ　、　Ｆｌｕｉｃｌ　Ｍｅｔｅｒｉｎｇ　Ｃｏ、、
　０ｙｓｔｅｒ　Ｂａｙ、　ＮＹ）を用いて１ｍ１１分
の速度で中空繊維束により連続的に循環させた。
０１式１の化合物の性状 形状：無色、非結晶 実験式：　Ｃ，、Ｈ２２Ｎ３０５Ｐ 分子量：約３０７ 元素分析： 実測値　　Ｃ１１Ｈ２１Ｎ３０．ＰＮａ試料■　試料■
　　　に基く計算値 炭素　４１．３２　３８．７４　　　　４０．１２水素
　　７，６１　　６．７８　　　　　６．４３窒素　１
１．５３　１２．４２　　　　１２．７６酸素　２４．
３８　　−　　　　　２４．３０リン−７，７０９，４
１ 灰分　１３．５８　−　　　　　− 才灰分はリン酸塩であることか分った。
ファスト−アトム・ボン／〜−ドメント・モードで測定
したＡ３３８６８因子Ａのマス・スペクトルは以下の如
くであった。
ｍ／Ｚ　　　ＨＲＭ　Ｓ　　　　　元素組成Ｍ＋Ｈ３０
８３０８−１３８１８Ｃ，□Ｈ２３Ｎ３０．１）１４３
　１４３・１１８７８　　　Ｃ７１−１，，５Ｎ２０１
３８　１３８・０３２４０Ｃ３■］９Ｎ０３Ｐ分子量−
３０７ 分子式−Ｃ１□Ｈ２□Ｎ３０．Ｐ ＫＢｒベレットによる赤外線吸収スペクトル（遊離酸）
は、次の周波数（ａｎ−’）ｌこおＧ）で顕著：な極大
吸収を示す。
３３６８．３３１２および３３００　（１１１広、強）
。
３０　’６３　（弱）、２９６６（中〜弱）、２８３３
（非常に弱）、２６６３（弱）、１６７１（強）。
１６２５（肩）、１５３６（強）　、　１４６　ｃ＋（
ｓＭ）。
１４４２（弱）、１３８６（中〜弱）、１３４０（非常
に弱）、１２７７（非常に弱）、１２４０（肩）、１２
０７（強）　、　１１５７　（ｕＨＶ番こ恒ｊ）。
１０６８（中）、１０４８（強）、９１８（弓」〜弱）
、７９７（中）、７７８（中）および６２５（弱）。
アミノ酸分析（５ＮＨＣ／で加水分解した試料）ニゲリ
シン　　　２．８　　　　３．２　　　　８７％ロイシ
ン　　２．８６　　　３．２　　　　８７％電気滴定（
６６％ジメチルホルムアミド水溶液−、）　：　ｐｋａ
は８．２（グリシルアミノ基）溶解性：水およびジメチ
ルスルホキシドに可溶、大部分の有機溶媒に不溶。
核磁気共鳴スペクトル（３６０ＭＨｚ装置、ＤＭＳ　（
Ｊ　−ｄ６　　に溶解した試料）１式１で表わされる構
造を示す。
実施例２ ＬＰ−１／Ｃ１８精製カラムの代りに以下の方法を用い
る以外は実施例１の方法を用いて式１の化合物を製造し
た。
１−Ｉ　Ｐ　−２０（７）段階（１８０〜２ｏｏｇ／２
ｏ。
ｅ発酵）で得た粗生成物をメタノール（６〜８１）中で
３０分間攪拌して濾過した。溶解しなかった固形物を再
びメタノール中で攪拌して濾過した。
２つのメタ／−ル抽出物を合して濃！６　（２ｇまで）
した。この濃縮物を１０倍量の酢酸エチルに加え、生成
する沈澱を戸去し、乾燥して粗生成物７２〜ｓｏｙを得
た。
上記の方法で得た生成物（１００ｇ）を水（４００〜５
００ｇ）に溶解し、濃ＮＨ４ＯＨを加えてｐｌ−ｔ　ｌ
　Ｑに調整した。得られた溶液を、２　ｌのイオン交換
カラム（酢酸型のＡＧｌ−Ｘ４．１００〜２００メツシ
ユ、Ｄｏｗｅｘ充填、水で洗浄）に２０ｍ１／分の速度
で加えた。このカラムを水（４１）で洗浄し、０．０２
５％氷酢酸で溶出して容量１１の分画を採取した。分画
を１　／　４　ｘ　１５ｚ　Ｚｏｒｂａｘ　ＯＤ５（６
μ）カラムにより７．５％アセトニトリルの０．１％リ
ン酸緩衝液（ｐＨ３）浴液で浴出する分析的ＨＰＬＣで
追跡した。所望の分画を合して濃縮し、凍結乾燥して更
に精製された生成物１５．５！７を得た（純度８０〜９
０％）。
この生成物を実施例１で示した如（Ｚｏｒｂａｘ　０Ｄ
Ｓ（１２μ）製造的）ＩＰＬｃで、但し、アセトニｌ−
ＩＪルと水の混液（５：　９５）および０．０２５％ペ
ンタフルオロプロピオン酸溶媒系で溶出して、更に精製
した。
実施例３ ｆ−１−Ｌ　Ａ　Ｐ　Ｐの製造 式１の化合物をｐＨ７，５、室温で２時間ロイシン・ア
ミノペプチダーゼ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃ
ｏ、　。
ＳＬ、　Ｌｏｕｉｓ　、　ＴｖｉＯ）と反応させて、Ｈ
ＰＬＣで追跡した。式１の化合物が充分に反応したら、
７．５％のＣｌ−１３ＣＮの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ３，５）溶液および水を用いたＺｏｒｂａｘ　ＯＤ　
Ｓカラムによるｉｔ　ｐ　ｔ　ｃで本反応を後処理し、
Ｎ−（１−メチレン−２−ホスホノエチル）ロイシンア
ミド〔Ｈ−ＬＡｉ’ｌ’〕ヲ得た。収率：２０％。
ＩＶＩ　−１−ＩＩｍ　／　Ｚ　＝　２５１分子量＝２
５０ 分子式−Ｃ９１１□９Ｎ２０４Ｐ 実施例４ 式１の化合物を標準方法に従ってアラニンとインブチル
クロロホルメートの混合酸無水物と反応させてＡＩａ−
Ｇｌｙ−ＬＡＰＰ　を得る。
実施例５ Ｔｒｐ　−ＬＡ　Ｐ　Ｐ　（７）製造 Ｈ−ＬＡＰＰを標準方法によりトリプトファンのベーヒ
ドロキシコハク酸イミドエステルと反応させてＴｒｐ　
−ＬＡ　Ｐ　Ｐ　を得る。
実施例６ １１ｅ−Ｇｌｙ−ＬＡＰＰ　の製造 Ａｌ　ａ　−Ｇｌｙ−Ｌ、ＡＰＰを標準方法に従ってイ
ソロイシンとインブチルクロロホルメートの混合酸無水
物と反応させてＩｌｅ　−Ｇｌｙ　−ＬＡｌ’Ｐを得る
。
実施例７ 式１の化合物（ＧＬＡＰ　Ｐ　）　ｌ　Ｑ　Ｑ■をピリ
ジン２、５　ｍｌに溶解し、無水酢酸１　ｍｌを加えて
室温で３時間撹拌した。これを窒素下に１　ｍｌまで濃
縮して水２ｍｌを加え、得られる溶液を冷凍し、凍結乾
燥して標記生成物１１５　ｕｔｙを得た。
ファスト−アトム・ボンバードメント・モードによるマ
ス・スペクトル分析： ｍ　／　Ｚ ｙｓ　」ｓ−ｓ　　ａ　ｓ　ｏ　　（モノアシル化を示
す）Ｍ＋、Ｎａ　　３７２ Ｍ＋、Ｋ　　ａｓｓ 分子量−３４９゜ 実施例８ チル類の製造 式１の化合物（ＧＬＡＰＰ）１００〜をメタノール３ｍ
ｌに浴解し、ＩＮ塩酸０．５　ｔｒｔｌを攪拌下に加え
、蒸留ジアゾメタンのジエチルエーテル１ｇ　液１　ｍ
ｌを攪拌下に徐々に加えた。この混液を３時間攪拌した
のち、−晩装置した。メタノールを窒素下に除去し、蒸
留水１０ｍｔ！を加え、得られた溶液を冷凍し、凍結乾
燥して式１においてに２およびに３がメチルであるかま
たはに２およびに３の一方がメチルで他方が水素である
化合物７５〜を得た。
ファスト−アトム・ボンバードメント・モードによるマ
ス・スペクトル分析： ｍ　／　Ｚ １％４＋Ｈ３３６ Ｍ＋４−ｉ　　３２２ 分子量（モノメチル体）　−３２１ 分子量（ジメチル体）＝３３５
【図面の簡単な説明】
第１図はＡ３３８６８因子Ａの赤外線吸収スペクトルを
示す。 特許出願人　　　イーライ・リリー・アント・カンパニ
ー代理人　弁理士岩崎光隆！肋４１名 ・冥 ：−−−、ニー、−１ ／／（Ｃ１２Ｐ　　２１１０２ Ｃ１２Ｒ１／４６５）　　　　　　　　　　　　　６７
６０−４Ｂ優先権主張　＠１９８３年２月１７日■米国
（ＵＳ）■４６７４１９ ０発　明　者　ロベルト・ニス・ゴルディーアメリカ合
衆国インディアナ州 インディアナポリス・イー７４番 プレース５１６６番地 つ発　明　者　ラルフ・エム・カスドナーアメリカ合衆
国インディアナ用 インディアナポリス・ウェブ・ ドライブ２４３番地 （７多発　明　者　ステファン・エイチ・ラルセンアメ
リカ合衆国インディアナ州 インディアナポリス・ペイサイ ド・サウス・ドライブ６４５９番地 ■発　明　者　ヤール・イー・オース アメリカ合衆国インディアナ用 グリーンフィニルド・オーク・ コート・アール・アール７　８０ ５番地

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 （１）式２ 〔式中、ｋｌは蛋白質中に通常存在する型のα−アミノ
    酸に特徴的な基、 １（２およびに３はそれぞれ水素またはＣ１−０３アル
    キル、Ｚは水素、Ｃ，−Ｃ６アルキ／ｌ／．　Ｃ，−Ｃ
    ６アルカノイル、フエニル−Ｃ１−０３アルキル、フェ
    ニル−（Ｘ）ｒｆｌ−Ｃ１−Ｃ３アルカノイルまたはア
    ミノ保護基、ｌ′は水素またはＣ１−Ｃ６アルキル、Ｘ
    は酸素または硫黄、 宜ｎは０またＣま１、 １１は０　、１　、２または３を表わす。 但し、ｋ２および技か共にアルキルである場合は、同じ
    基を表わすものとする。〕 で表わされる化合物およひその塩。 （２）式１ で表わされるＡ５３８６８因子Ａおよびその塩である特
    許請求の範囲（１）記載の化合物。 （３）塩が製薬上許容される塩である特許請求の範囲（
    １）または（２）記載の化合物。 （４）　ホスホン酸塩かモノナトリウム塩、ジナトリウ
    ム塩、モノアンモニウム塩、ジアンモニウム塩またはモ
    ノシクロヘキンルアンモニウム塩である特許請求の範囲
    （３）記載の化合物。 （５》　　アミン塩が塩酸塩である特許請求の範囲（３
    ）記載の化合物。 （６）ｎが０てありＺ　、Ｒおよびｋが水素である特許
    請求の範囲（１）記載の化合物。 （７）　ｎか１てありＺ、　ｌ／　、Ｒ１および１（２
    が水素でありｋかＣ１−Ｃ３アルキル基である特許請求
    の範囲（１）記載の化合物。 （８１ｉ（がメチルである特許請求の範囲（７）記載の
    化合物。 （９）　Ａ３３８６８因子Ａを製造するに際して、Ａ３
    ３８６８因子Ａを生産するストレプトマイセス・ルリダ
    スＮＲＲＬ　　１５１０１、その変異株またはそれらの
    組替え体を、同化し得る炭素源、窒素源およびｒＪｊＪ
    ｉ機塩を含有する培養培地中で深部通気発酵の条件下に
    て実質量の抗菌活性が得られるまで培養し、 要すれば、Ａ３３８６８因子Ａを採取し、要すれば、Ａ
    ３３８６８因子Ａをペプタイド合成における常法により
    反応させて式２ ％式％） 〔式中、ｋは蛋白質中に通常存在する型のび一アミノ酸
    に特徴的な基、 Ｒ２４ａよびに３はそれぞれ水素またはＣ１−０３アル
    キル、Ｚ：ま水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ア
    ルカノイル、フェニル−ＣＩ−０３アルキル、フェニル
    −（Ｘ）ｍ−Ｃ１−Ｃ３アルカノイルまたはアミノ保護
    基、Ｚ′は水素またはＣ１−０６アルキル、Ｘは酸素ま
    たは硫黄、 ｍは０または１、 ｎは０．１．２または３を表わす。 但し、ｋおよびＲ３が共にアルキルである場合は、同じ
    基を表わすものとする。〕 で表わされる化合物およびその塩を得ることを特徴とす
    る方法。 ｕＱ　　ストレプトマイセス・ルリクスＮ　ＩＬ　ＲＬ
    １５１０１を培養することを特徴とする特許請求の範囲
    （９）記載の方法。 ０υ　Ａ３３８６８因子Ａの採取工程を包含する特許請
    求の範囲（９）または００記載の方法。 ０４　　活性成分として式２ 〔式中、ｋｌは蛋白質中に通常存在する型のα−アミノ
    酸に特徴的な基、 ｋ２およびに３はそれぞれ水素またはＣ１−０３アルキ
    ル、Ｚは水素、ｃ、−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルカ
    ノイル、フェニル−ｃ、−Ｃ３アルキル、フェニル−（
    Ｘ）ｍ−Ｃ１−Ｃ３アルカノイルまたはアミノ保護基、
    Ｚ′は水素またはｃ、−Ｃ６アルキル、Ｘは酸素または
    硫黄、 ｍは０才たはｌ、 口は０，１．２または３を表わす。 但し、Ｒ２およびに３か共にアルキルである場合は、同
    じ基を表わすものとする。〕 で表わされる化合物またはその製薬上許容される塩の免
    疫虚部上の荷動量を、１種またはそれ以上の適当な医薬
    用担体と共に含有して成る免疫調節用医薬組成物。 ０４　　活性成分が式１ で表わされる化合物である特許請求の範囲０４記載の組
    成物。 α弔　活性成分として式２ 〔式中、ｋは蛋白質中に通常存在する型のび一アミノ酸
    に特徴的な基、 ｋ２およびに３はそれぞれ水素またはＣ１−Ｃ５アルキ
    ル、Ｚは水素、Ｃ１−６６アルキル、ｃｌ−６６アルカ
    ノイル、フェニル−Ｃ，−Ｃ３アルキノへ　フェニル−
    （Ｘ）ｍ−Ｃ，−Ｃ３アルカノイルまたはアミノ保護基
    、ｌ′は水素またはＣ，−Ｃ６アルキノペＸは酸素また
    は硫黄、 ｍはＯまたは１、 ｎは０，１．２または３を表わす。 但し、ｋ２およびに３が共にアルキルである場合は、同
    じ基を表わすものとする。〕 で表わされる化合物またはその製薬上許容される塩の免
    疫調節上の有効量を、１種またはそれ以上の適当な医薬
    用担体と共に含有して成る免疫調節用医薬組成物を免役
    調節が必要な対象に投与することを特徴とする当該対象
    における免疫系の調節方法。 ＯＱ　　活性成分か式１ で表わされる化合物である特許請求の範囲ａ→記載の方
    法。 ＯＱ　　活性成分として式３ 〔式中、ｋ２およびに３はそれぞれ水素またはｃｌ　’
    ３アルキルを表わす。〕 で表わされる化合物またはその製薬上許容される塩を含
    有する免疫調節剤として用いる医薬組成物。 αη　式３においてｌ（２およびｋが共に水素である特
    許請求の範囲αＱ記載の組成物。 （ト）微生物ストレプトマイセス・ルリダスＮ　ＲＲＬ
    　　１５１０１゜ Ｃ１９）Ａ５３８６８因子Ａを生産する微生物ストレプ
    トマイセス・ルリダスＮＲＲＬ　　１５１０１、その変
    異株またはそれらの組替え体。
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