JPH029899A - 新規ポリペプチド及びそれをコードするｄｎａ並びにそれらの製法 - Google Patents
新規ポリペプチド及びそれをコードするｄｎａ並びにそれらの製法Info
- Publication number
- JPH029899A JPH029899A JP3913488A JP3913488A JPH029899A JP H029899 A JPH029899 A JP H029899A JP 3913488 A JP3913488 A JP 3913488A JP 3913488 A JP3913488 A JP 3913488A JP H029899 A JPH029899 A JP H029899A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polypeptide
- formula
- amino acid
- dna
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 79
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 79
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 78
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 20
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 abstract description 16
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 abstract description 16
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 abstract description 14
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 abstract description 10
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 abstract description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 abstract description 5
- 108010052790 interleukin 1 precursor Proteins 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 abstract 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 abstract 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 54
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 51
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 12
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 11
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 9
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 8
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- PLVPPLCLBIEYEA-AATRIKPKSA-N (E)-3-(indol-3-yl)acrylic acid Chemical compound C1=CC=C2C(/C=C/C(=O)O)=CNC2=C1 PLVPPLCLBIEYEA-AATRIKPKSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241001131785 Escherichia coli HB101 Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PLVPPLCLBIEYEA-WAYWQWQTSA-N Indole-3-acrylic acid Natural products C1=CC=C2C(\C=C/C(=O)O)=CNC2=C1 PLVPPLCLBIEYEA-WAYWQWQTSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 2
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- -1 aliphatic alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 101001002634 Homo sapiens Interleukin-1 alpha Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000004125 Interleukin-1alpha Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- DGLRDKLJZLEJCY-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dodecahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O DGLRDKLJZLEJCY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 108010086652 phytohemagglutinin-P Proteins 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 description 1
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、α型ヒトインターロイキン１ボリベブチド並
びにそのＮ末端部及び／又はＣ末端部の部分欠失体の重
合体ポリペプチド、それをコードするＤＮＡ、及びそれ
らの製造法に関する．インターロイキン１は、生体内に
存在し多様な生物活性を有する生理活性ポリペプチドで
あり［Ｏｐｐｅｎｈｅ１ｍ， Ｊ．Ｊ．ら， ｒｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ， ７巻，４５頁． １
９８６年； Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．， Ｒｅｖ
ｉｅｗｓ ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ
ｓ， ６巻．５１頁， １９８４年ゴ、諸生体反応の
調節因子として重要な役割を担っている．ヒト インタ
ーロイキン１には、α型及びβ型の二穫類があり、いず
れも遺伝子組み換え技術を応用して製造され、上記の生
物活性等に基づいた医薬品としての適用が期待されてい
る．α型ヒト インターロイキン１ボリペプチドには、
そのＮ末端から第２番目のＳｅｔがＡｌａにかわってい
るポリペプチド（Ｍａｒｃｈ，Ｃ． Ｊ．ら， Ｎａｔ
ｕｒｅ， ３１５巻，６４１頁． １９８５年）及びＮ
末端から第３６番目のＡｓｎが脱アミド化され、Ａｓｐ
に変化したボリペプチドが知られている（Ｃａｍｅｒｏ
ｎ， Ｐ． Ｍ．ら， Ｊ． Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，
１６４巻，２３７頁， １９８６年； Ｗｌｎｇｆｉ
ｅｌｄ，Ｐ．ら，Ｅｕｒ．Ｊ．ＢＩｏｃｈｅｍ．， １
６５巻，５３７頁， １９８７年）．また、α型ヒト
インターロイキン１ボリベブチドの誘導体としては、そ
のＮ末端側の１〜１４個のアミノ酸及び／又はＣ末端側
の１〜４個のアミノ酸の欠失体など（ヨーロッパ公開特
許第０１８８９２０号）が知られている． 本発明者等は、α型ヒト インターロイキン１ボリペプ
チドの構造と生物活性との関係について鋭意研究を重ね
、該ポリペプチド或はその主要部ポリペプチドのＮ末端
に更にこのようなポリペプチドを付加させ、α型ヒト
インターロイキン１ボリベブチド或はその主要部ポリペ
プチドの高分子化前駆体ポリペプチドを作製した．具体
的には、例えばα型ヒトインターロイキン１の二量体ポ
リペブチドが挙げられる． 該二量体ポリペプチドは、生体に投与された時、体内滞
留時間の延長を認め、更に意外にも生体内の蛋白分解酵
素により部分的に分解を受けた場合に、二量体ポリペプ
チドそれ自身よりも強い生物活性が発揮されることから
徐効性医薬品としての有用性を見い出し、本発明を完成
するに至った．本発明は、下記の一般式で示されるアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドに関する． ［Ａ］ ２Ｌ− ［Ｂ］ − ［Ｃコｂ− ［
Ａ］ ｃ− ［Ｂ］ − ［Ｃ］ ｄ但し、上記
式中ａ， ｂ．ｃ及びｄは、それぞれ０又は１の整数を
意味し、式［Ａ］、［Ｂ］及び［Ｃ］で示されるポリペ
プチドのアミノ酸配列は次ぎのとおりである． Ｓｅｒ Ｗ ＰｒｏＰｈｅＳｅｒＰｈｅＬｅｕＳｅｒＡ
ｓｎＶａｌＬｙｓＴｙｒＡｓｎＰｈｅ［Ａ］ 式［Ａ］中のＷは、Ｓｅｒ又はＡｌａを意味する．Ｍｅ
ｔＡｒｇＩ１ｅＩｌｅＬｙｓＴｙｒＧ１ｕＰｈｅＩｌｅ
ＬｅｕＡｓｎＡｓｐＡｌａＬｅｕＡｓｎＧ１ｎＳｓｒＩ
ｌｅＩ１ｅＡｒｇＡ１ａ Ｘ ＡｓｐＧｌｎＴｙｒＬｅ
ｕＴｈｒＡｌａＡ１ａＡｌａＬｅｕＨ１ ｓＡｓｎＬｅ
ｕＡｓｐＧ１ｕＡ１ａＶａｌＬｙｓＰｈｅＡｓｐＭｅ
ｔＧ１ｙＡ１ａＴｙｒＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐ
ＡｓｐＡ１ａＬｙｓｌｌｅＴｈｒＶａｌＩ１ｅＬｅｕＡ
ｒｇＩ１ｅＳｅｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＬｅｕＴｙｒＶａ
ｌＴｈｒＡ１ａＧ１ｎＡｓｐＧ１ｕＡｓｐＧ１ｎＰｒｏ
ＶａｌＬｅｕＬｅｕＬｙｓＧ１ｕＭｅ ｔＰｒｏＧ１ｕ
Ｉ ｌｅＰｒｏＬｙｓＴｈｒＩｌｅＴｈｒＧ１ｙＳｅｒ
Ｇ１ｕＴｈｒＡｓｎＬｅｕＬｅｕＰｈｅＰｈｅＴｒｐＧ
１ｕＴｈｒＨｉｓＧ１ｙＴｈｒＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈ
ｅＴｈｒＳｅｒＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡｓｎＬｅｕ
ＰｈｅＩ１ａＡｌａＴｈｒＬｙｓＧ１ｎＡｓｐＴｙｒＴ
ｒｐＶａｌＣｙｓＬｅｕＡ１ａＧ１ｙＧ１ｙＰｒｏＰｒ
ｏＳｅｒｌｌｅＴｈｒ Ｙ ＰｈｅＧ１ｎｌｌｅＬｅ
ｕ
［ Ｂ ］式［Ｂ］中のＸはＡｓｎ又はＡｓｐを意味
し、ＹはＡｓｐ又はＴｙｒを窓昧する． ＧｌｕＡｓｎＧ１ｎＡ１ａ
［ Ｃ ］本発明の好ましいポリペプチドとしては
、下記第１表の式［ＩＩ］で示されるアミノ酸配列を有
するα型ヒトインターロイキン１の二量体ポリペブチド
（以下、単に二量体ポリペプチドと記す）及び第２表の
式［■］で示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド
が挙げられる． 第１表 ＳｅｒＳｅｒＰｒｏＰｈｅＳｅｒＰｈｅＬｅｕＳｅｒＡ
ｓｎＶａｌＬｙｓＴｙｒＡｓｎＰｈｅＭｅｔＡｒｇＩ１
ｅｌｌｅＬｙｓＴｙｒＧ１ｕＰｈｅＩ１ｅＬｅｕＡｓｎ
ＡｓｐＡ１ａＬｅｕＡｓｎＧ１ｎＳｅｒＩ１ｅＩｌｅＡ
ｒｇＡ１ａＡｓｎＡｓｐＧｌｎＴｙｒＬｅｕＴｈｒＡ１
ａＡ１ａＡ１ａＬｅｕＨｉ ｓＡｓｎＬｅｕＡｓｐＧ１
ｕＡｌａＶａ ＩＬｙｓＰｈｅＡｓｐＭｅ ｔＧ１ｙＡ
ｌａＴｙｒＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐＡｓｐＡ１
ａＬｙｓｌｌｅＴｈｒＶａｌ１１ｅＬｅｕＡｒｇｌｌｅ
ＳｅｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＬｅｕＴｙｒＶａｌＴｈｒＡ
ｌａＧ１ｎＡｓｐＧ１ｕＡｓｐＧｌｎＰｒｏＶａｌＬｅ
ｕＬｅｕＬｙｇＧ１ｕＭｅｔＰｒｏＧ１ｕＩｌｅＰｒｏ
ＬｙｓＴｈｒｌｌｅＴｈｒＧ１ｙｓｅｒＧ１ｕＴｈｒＡ
ｓｎＬｓｕＬｅｕＰｈｅＰｈｅＴｒｐＧ１ｕＴｈｒＨｉ
ｓＧｌｙＴｈｒＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈｅＴｈｒＳｅｒ
ＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡｓｎＬｅｕＰｈｅＩｌｅＡ
１ａＴｈｒＬｙｓＧｌｎＡｓｐＴｙｒＴｒｐＶａｌＣｙ
ｓＬｅｕＡｌａＧ１ｙＧｌｙＰｒｏＰｒｏＳｅｒＩｌｅ
ＴｈｒＡｓｐＰｈｅＧｌｎＩｌｅＬｅｕＧｌｕＡｓｎＧ
１ｎＡｌａＳｅｒＳｅｒＰｒｏＰｈｅｓｅｒＰｈｅＬｅ
ｕＳｅｒＡｓｎＶａｌＬｙｓＴｙｒＡｓｎＰｈｅＭｅｔ
ＡｒｇＩ１ｅＩｌｓＬｙｓＴｙｒＧｌｕＰｈｅｒｌｅＬ
ｅｕＡｓｎＡｓｐＡ１ａＬｅｕＡｓｎＧｌｎＳｅｒＩ１
ｅＩＬｅＡｒｇＡ１ａＡｓｎＡｓｐＧ１ｎＴｙｒＬｅｕ
ＴｈｒＡｌａＡ１ａＡ１ａＬｅｕＨｉｓＡｓｎＬｅｕＡ
ｓｐＧｌｕＡ１ａＶａｌＬｙｓＰｈｓＡｓｐＭｅｔＧｌ
ｙＡｌａＴｙｒＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐＡｓｐ
Ａ１ａＬｙｓＩ１ｅＴｈｒＶａｌｌｌｅＬｅｕＡｒｇＩ
１ｅＳｅｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＬｅｕＴｙｒＶａｌＴｈ
ｒＡ１ａＧ１ｎＡｓｐＧ１ｕＡｓｐＧ１ｎＰｒｏＶａｌ
ＬｅｕＬｅｕＬｙｓＧ１ｕＭｅｔＰｒｏＧ１ｕＩ１ｅＰ
ｒｏＬｙｓＴｈｒＩ１ｅＴｈｒＧ１ｙＳｅｒＧｌｕＴｈ
ｒＡｓｎＬｅｕＬｅｕＰｈｅＰｈｅＴｒｐＧ１ｕＴｈｒ
ＨｉｓＧ１ｙＴｈｒＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈｅＴｈｒＳ
ｅｒＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡｓｎＬｅｕＰｈｅＩ１
ｅＡｌａＴｈｒＬｙｓＧ１ｎＡｓｐＴｙｒＴｒｐＶａｌ
ｃｙｓＬｅｕＡ１ａＧ１ｙＧ１ｙＰｒｏＰｒｏＳａｒＩ
１ｅＴｈｒＡｓｐＰｈｅＧｌｎｌｌｅＬｅｕＧ１ｕＡｓ
ｎＧ１ｎＡ１ａ ［ ＩＩ ］第２表 ＭｅｔＡｒｇＩ１ｅＩ１ｅＬｙｓＴｙｒＧ１ｕＰｈｅＩ
１ｅＬｅｕＡｓｎＡｓｐＡ１ａＬｅｕＡｓｎＧｌｎＳｅ
ｒＩ１ｅＩｌｅＡｒｇＡｌａＡｓｎＡｓｐＧ１ｎＴｙｒ
ＬｅｕＴｈｒＡ１ａＡ１ａＡｌａＬｅｕＨ１ｓＡｓｎＬ
ｅｕＡｓｐＧ１ｕＡ１ａＶａｌＬｙｓＰｈｅＡｓｐＭｅ
ｔＧ１ｙＡ１ａＴｙｒＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐ
ＡｓｐＡ１ａＬｙｓｌｌｅＴｈｒＶａｌＩ１ｅＬｅｕＡ
ｒｇＩ１ｅＳｅｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＬｅｕＴｙｒＶａ
ｌＴｈｒＡ１ａＧｌｎＡｓｐＧｌｕＡｓｐＧｌｎＰｒｏ
ＶａｌＬｅｕＬｓｕＬｙｓＧｌｕＭｅｔＰｒｏＧ１ｕＩ
１ｅＰｒｏＬｙｓＴｈｒｌ１ｅＴｈｒＧｌｙＳｅｒＧ１
ｕＴｈｒＡｓｎＬｅｕＬｅｕＰｈｅＰｈｅＴｒｐＧ１ｕ
ＴｈｒＨｌｓＧ１ｙＴｈｒＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈｅＴ
ｈｒＳｅｒＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡｓｎＬｅｕＰｈ
ｅＩ１ｅＡｌａＴｈｒＬｙｓＧｌｎＡｓｐＴｙｒＴｒｐ
ＶａｌＣｙｓＬｅｕＡ１ａＧ１ｙＧ１ｙＰｒｏＰｒｏＳ
ｅｒＩｌｅＴｈｒＡｓｐＰｈｅＧ１ｎｌｌｅＬｅｕＭｅ
ｔＡｒｇＩｌｅＩＬｅＬｙｓＴｙｒＧ１ｕＰｈｅｒ１ｅ
ＬｅｕＡｓｎＡｓｐＡ１ａＬｅｕＡｓｎＧｌｎＳｅｒＩ
１ｅＩ１ｅＡｒｇＡ１ａＡｓｎＡｓｐＧ１ｎＴｙｒＬｅ
ｕＴｈｒＡｌａＡｌａＡ１ａＬｅｕＨｌｓＡｓｎＬｅｕ
ＡｓｐＧｌｕＡ１ａＶａｌＬｙｓＰｈｅＡｓｐＭｅｔＧ
１ｙＡ１ａＴｙｒＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐＡｓ
ｐＡｌａＬｙｓｒｌｅＴｈｒＶａｌＩ１ｅＬｅｕＡｒｇ
Ｉ１ｅＳｅｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＬａｕＴｙｒＶａｌＴ
ｈｒＡ１ａＧ１ｎＡｓｐＧ１ｕＡｓｐＧｌｎＰｒｏＶａ
ｌＬｅｕＬｅｕＬｙｓＧ１ｕＭｅｔＰｒｏＧ１ｕ１１ｅ
ＰｒｏＬｙｓＴｈｒＩ１ｅＴｈｒＧ１ｙＳｅｒＧ１ｕＴ
ｈｒＡｓｎＬａｕＬｅｕＰｈｅＰｈｅＴｒｐＧ１ｕＴｈ
ｒＨｉｓＧ１ｙＴｈｒＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈｅＴｈｒ
ＳｅｒＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡｓｎＬｅｕＰｈｅＩ
１ｅＡ１ａＴｈｒＬｙｓＧ１ｎＡｓｐＴｙｒＴｒｐＶａ
ｌＣｙｓＬｅｕＡ１ａＧ１ｙＧ１ｙＰｒｏＰｒｏＳａｒ
Ｉ１ａＴｈｒＡｓｐＰｈｅＧ１ｎＩ１ｅＬｅｕ
［ １ ］本
発明は、前記ポリペプチドの誘導体にも関する．該ポリ
ペプチドの誘導体とは、該ポリペブチドの鎖上の側鎖官
能基、Ｎ末端のアミノ基又はＣ末端のカルボキシル基を
利用して形成される誘導体を意味する．例えばカルボキ
シル基と脂肪族アルコールとのエステル類、第一もしく
は第ニアミンとの酸アミド類、アミノ基のＮ−アシル誘
導体、ヒドロキシル基のＯ−アシル誘導体、カルバモイ
ル基の水解体又はポリエチレングリコール等による修飾
体、更には該ポリペプチドのカルボキシル基又はアミノ
基等とで形成される塩、例えば水酸化ナトリウム、水酸
化カリウム、アルギニン、カフェイン、プロ力イン、塩
酸、グルコン酸等との塩が挙げられる． 本発明のポリペプチドの分子内Ｓ−Ｓ結合体及び分子間
Ｓ−Ｓ結合により形成される高分子体も本発明のポリペ
プチドに包含される． また、本発明のポリペプチドを遺伝子組み換え技術を応
用して製造する場合、その宿主細胞の種類或は培養産生
条件等により、Ｎ末端にＭｅｔが付加したポリペプチド
が得られる場合があり、このようなポリペプチドも本発
明のポリペプチドに包含される． 本発明は、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡに
も関する．そのＤＮＡの例としては、第１表の式［１１
で示されるアミノ酸配列を有する二旦体ポリペプチドを
コードするＤＮＡ、即ち下記第３表で掲げた式［ＩＩａ
］で示される塩基配列を有するＤＮＡ及びその縮重が挙
げられる．第３表 ５’ −ＴＣＡＴＣＡＣＣＴＴＴＴＡＧＣＴＴＣＣＴＧ
ＡＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＡＴＡＣＡＡＣＴＴＴＡＴＧＡ
ＧＧＡＴＣＡＴＣＡＡＡＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＴＣＣＴ
ＧＡＡＴＧＡＣＧＣＣＣＴＣＡＡＴＣＡＡＡＧＴＡＴＡ
ＡＴＴＣＧＡＧＣＣＡＡＴＧＡＴＣＡＧＴＡＣＣＴＣＡ
ＣＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡＴＴＡＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＡ
ＴＧＡＡＧＣＡＧＴＧＡＡＡＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧ
ＧＴＧＴＧＣＴＴＧＧＣＡＧＧＧＧＧＧＣＣＡＣＣＣＴ
ＣＴＡＴＣＡＣＴＴＡＣＴＴＴＣＡＧＡＴＡＣＴＧＧＡ
ＡＡＡＣＣＡＧＧＣＧＴＣＡＴＣＡＣＣＴＴＴＴＡＧＣ
ＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＡＡＧＣＡＧＴＧＡＡＡＴＴＴＧ
ＡＣＡＴＧＧＧＴＧＣＴＴＡＴＡＡＡＡＣＴＴＧＴＴＴ
ＡＴＴＧＣＣＡＣＡＡＡＧＣＡＡＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧ
ＴＧＴＧＣＴＴＧＧＣＡＧＧＧＧＧＧＣＣＡＣＣＣＴＣ
ＴＡＴＣＡＣＴＴＡＣＴＴＴＣＡＧＡＴＡＣＴＧＧＡＡ
ＡＡＣＣＡＧＧＣＧ−３゜
［ＩＩａ］本発明のポリペプチドをコードするＤＮ
Ａは、次ぎのようにして製造することができる．公知の
α型ヒト インターロイキン１或はそのＮ末端及び／又
はＣ末端のアミノ酸又はベブチド欠失体をコードするＤ
ＮＡを公知の方法、例えば前記ヨーロッパ公開特許第０
１８８９２０号に記載の方法や化学合成法を用いて作製
し、これを例えば適当な制限酵素を用いて該ポリペプチ
ドをコードする領域のＤＮＡ断片或はその部分断片を単
離し、これを化学合成オリゴデオキシヌクレオチド ア
ダプターを介して連結させることなどにより、本発明の
ＤＮＡを製造することができる．また、これらのＤＮＡ
を、例えばワングらの方法（Ｗａｎｇ， Ａ． Ｍ．ら
， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２２４巻， １４３１頁． １
９８７年）やクンケルらの点変異誘導法（Ｋｕｎｋｅ
ｌ ， Ｔ． Ａ．ら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚ
ｙｍｏ１、，１５４巻，３６７頁， １９８７年）に準
じて特定の箇所の塩基配列を変換させることにより、上
記本発明のＤＮＡの部分変異体を製造することができる
（本願出願人の昭和６３年２月３日付特許出ＩＩＩ参照
）． 上記のようにして製造したＤＮＡを当該技術分野で公知
の技術により適当な形質発現ベクターに適切な配列で挿
入し、これを導入して形質転換体を作製し、これを培養
することにより、本発明のポリペプチドを製造すること
ができる．更に詳しくは、例えば本発明のポリペプチド
をコードする塩基配列を有するＤＮＡの５゜末端（上流
側）に翻訳開始コドンＡＴＧを、かつ３゛末端（下流側
）には終止コドンを有するＤＮＡ断片を作製し、これを
適当なプロモーター及びＳＤ配列に続いて結合させ、更
にこれをベクターに挿入することにより本発明のポリペ
プチド生産用の形質発現ベクターを作製することができ
る．プロモーターとしては、例えばお駈、υ上、おＫ．
坦巴Ａ、坦ユＳ、ＰＬ， ＳＶ４０初期プロモーター等
が挙げられる．ベクターとしては、例えばプラスミド（
ｐＢＲ３２２等）、ファージ（λファージ誘導体等）、
ウイルス（ＳＶ４ ０等）、ランナウェイブラスミド等
が挙げられる．この本発明のポリペブチド生産用の形質
発現ベクターを適当な宿主、例えば大腸菌にコーエンら
の方法（Ｃｏｈｅｎ， Ｓ． Ｎ．ら， Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．， ＵＳＡ， ６９巻．
２１１０頁， １９７２年）に準じて導入することに
より形質転換体を得ることができる．次いで、この形質
転換体をそれに応じた適当な培養条件下で培養すること
により、目的とするポリペプチド或はそのＮ末端にＮｅ
ｔが結合したポリペプチドを製造することができる．こ
の培養物を、例えばリゾチ一ム消化と凍結融解、超音波
破砕、フレンチプレス等により破壊したのち、遠心分離
又はｒ遇することにより本発明のポリペプチド含有抽出
液を得ることができる．この抽出液を蛋白質精製の一最
的な精製法、例えば限外ｒ過、透析、電気泳動、塩析分
画、ゲル一過分画、イオン交換クロマトグラフィー、抗
体力ラムを用いるアフィニティーク口マトグラフイー等
の方法で精製することにより、本発明のポリペプチドを
得ることができる．また、このようにして得たポリペプ
チドを化学的に修飾することにより、本発明のポリペプ
チドの誘導体を得ることができる． 以下に、本発明のポリペプチドの典型的な例として、第
１表の式［■］で示されるアミノ酸配列を有する二量体
ポリペプチドについて述べる．試験例１ ペプ ′の 二量体ポリペプチドの分子量を、後記実施例１に記載の
二量体ポリペプチド生産菌（大腸菌ＨＢＩＯＩ／ＰＨＩ
ＰＤ２）の抽出液を用い、ＳＤＳ−ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動法及び抗ヒト インターロイキン１αウサ
ギ抗血清（大日本製薬：Ｃａｔ． Ｎｏ．ＫＥ−Ｃ １
０１ ）を用いるイムノブ口ツテイング法により測定し
た．分子量は、分子量既知蛋白標準品（Ｂｉｏ−Ｒａｄ
Ｌａｂｓ． ，米国）の移動度との対比により算出し
た．その結果、：該二量体ポリペプチドの分子量は約３
５±２ｋＤと求められた． 試験例２ 二量 ボリペプ ドのリンパ 二量体ポリペプチドのリンパ球活性化作用を、後記実施
例１に記載の二量体ポリペプチド生産菌（大腸菌ＨＢＩ
ＯＩ／ｐＨＩＰＤ２）の抽出液を用いて測定した．即ち
、該抽出液の２０μ１をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動法に付した．泳動終了後、該ゲルを５ｍｍ巾
に切り出し次いで各ゲルをｌｍｌの５％ウシ胎児血清を
含む組織培養用培地ＲＰＭ Ｉ１ ６ ４ ０ （Ｆｌ
ｏｗ Ｌａｂｓ． ，米ｒ５）中にて４℃で２４時間振
盪抽出することにより、ゲル中に含まれるポリペブチド
を抽出した．この各ゲル抽出液について、マウス胸腺細
胞を標的細胞とするリンパ球活性化作用を測定した． リンパ球活性化作用は、下記の方法に従って測定した．
組織培養用９６穴平底型プレートの各ウエルに１０μｇ
／ｍ ｌ濃度のフィトヘマグルチニンーＰ （Ｄｉｆｃ
ｏ Ｌａｂｓ． ，米国）の１００μｌ及びＣ３Ｈ／Ｈ
ｅマウスの胸線細胞懸濁液（２００万個／ｍ１）の１０
０μｌを注入し、これに上記ゲル抽出液の１０μｌを添
加した．細胞培養液には５％ウシ胎児血清含有ＲＰＭＩ
−１６４０培地を用いた．該プレートを５％炭酸ガス含
有湿気流中３７℃で３日間培養した．培養終了約１８時
間前に［３Ｈ］一チミジンの１μＣｉを添加し、細胞内
に収り込まれた［３Ｈ〕−チミジン量を計測した． その結果は図１に示すごとくであり、ＳＤＳ−ポリアク
リルアミド電気泳動による蛋白変性、即ち生物活性の減
弱を考慮せねばならないが、二量体ポリペプチドに相当
する位置には有意なリンパ球活性化作用は認められず、
分子量約２１〜１８ｋＤに相当する位置に強いリンパ球
活性化作用を認めた．この活性画分中に、上記抗ヒト
インターロイキンｌαウサギ抗血清と反応するポリペプ
チドの存在を確認したことがら、この活性は該二量体ポ
リペプチドの部分分解産物に由来するものであると結論
した． 尚、本明細書では記載の簡略化のために以下の略号を使
用７する． Ａ アデニン Ｃ シトシン Ｇ グアニン Ｔ チミン ＤＮＡ デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ 相補ＤＮＡ ＳＤ配列 シャイン・ダルガーノ配列ｋＤ
キロダルトン ＳＤＳ ラウリル硫酸ナトリウムＳ−Ｓ結合
ジスルフィド結合 ［３Ｈ］一チミジン トリチウム標識チミジン以下に実
施例及び参考例を挙げて本発明を更に具体的に説明する
． （以下余白） 実施ＰＡ１ 二量体ポリペブチドの製造 前記第１表の式［■］で示されるアミノ酸配列を有する
二景体ポリペブチドを以下の方法で製造した． （１〉形質発現プラスミドｐＨＩＰＤ２の構築参考例に
記載の形質発現プラスミドｐＨＩＰ８３８３ａから制限
酵素ＥｃｏＲＩとＳａｕ９６１による消化にて、α型ヒ
ト インターロイキン１ボリペプチドをコードする領域
の大部分を含むＤＮＡ断片（第４表に示した塩基配列の
第３９８〜７６９番目までに相当）を単離した．このＤ
ＮＡ断片をＥｃａ−Ｓａｕ断片という． このＥｃｏ−Ｓａｕ断片に、下記の化学合成オリゴヌク
レオチド アダプター［イ］（以下、合成ＤＮＡ［イ］
と記す）をＴ４ ＤＮＡリガーゼを用いて結合させた．
合成ＤＮＡ［イコとは、下記式［ａ］〜［ｄｌで示され
る４種類のＤＮＡ断片を、順次結合させて作製したＤＮ
Ａアダプターである．５’−ＧＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＡ
ＴＣＡＣＴＧＡＣＴＴＴＣＡＧＡＴ
［ａ］３゜一ＧＴＧＧＧＡＧＡＴＡＧＴＧＡＣＴＧＡ
ＡＡＧＴＣＴＡＴＧＡＣ５’ −ＡＣＴＧＧＡＡＡＡＣ
ＣＡＧＧＣＧＴＣＡＴＣＡＣＣＴＴＴＴＡＧ
［ｂｌ３’−ＣＴＡＧＴＡＧＴＴＴＡＴＧＣＴＴ
ＡＡここで得られたＤＮＡ断片を制限酵素ＥｃｏＲＩに
て消化処理し、余分に付加されたＤＮＡ断片を切断除去
することにより． Ｅｃｏ−Ｓａｕ断片に合成ＤＮＡ［
イ］が連結され、かつ両端が制限酵素ＥｃｏＲＩの粘着
末端を有するＤＮＡ断片を単離した．このＤＮＡ断片を
， Ｅｃｏ−ＩＬＬ断片という．別途に、前記形質発現
プラスミドＰＨＩＰ８３８３ａを制限酵素ＥｃｏＲＩに
て消化し、該プラスミド中に挿入されているα型ヒト
インターロイキン１ボリペプチドをコードする領域に一
箇所存在する切断認識部位で切断し、直鎖二本鎖ＤＮＡ
とした．このＤＮＡ断片を直鎖ｐＨＩＰ８３８３ａ−Ｄ
ＮＡ断片という．この直鎖ｐＨＩＰＨ３８３ａ−ＤＮＡ
断片と前記のＥｃｏ−ＩＬＬ断片をＴ４ ＤＮＡリガー
ゼを用いて結合させた．尚、このＥｃｏ−ＩＬＩ断片が
正しい方向に挿入されていることを、得られたブラスミ
ドを制限酵素ＨｐａＩと４υ、■にて消化し、二量体ポ
リペプチドをコードする全領域を含むＤＮＡ断片を単離
し、その塩基配列をＭ１３シークエンシングキット（宝
酒造）を用いて決定して確認した．第２図に、二量体ポ
リペプチド生産用の形質発現プラスミドの楕築工程を示
す．この形質発現プラスミドをＰＨＩＰＤ２と名付けた
．この形質発現ブラスミドｐＨＩＰＤ２を、下記の方法
に従って大腸菌ＨＢＩＯＩ株に導入し形質転換体を作製
した．即ち、大腸菌ＨＢＩＯＩ株をＬＢ培地［組成：１
％トリブトン、０．５％酵母エキス、１％塩化ナトリウ
ム（ｐＨ７． ５）コに接種し、３０゜Ｃで一夜培養し
た．その菌体懸濁液のｌｍｌを１００ｍｌのＬＢ培地に
接種し、濁度（波長６００ｎｍの吸光度）が約０．６に
達するまで、３０℃で培養した．この培養液を氷水中で
３０分間静置したのち、遠心分離にて菌体を採取した．
この菌体を５０ｍｌの５０ｍＭ塩化カルシウム液中に再
懸濁させ、氷水中で６０分間静置したのち、遠心分離に
て菌体を採取し２０％グリセリンを含む５０ｍＭ塩化カ
ルシウム液の１０ｍｌに懸濁させた．この懸濁液に上記
の形質発現ブラスミドｐＨＩＰＤ２を添加し、氷水中で
２０分間、室温で１０分間反応させたのち、ＬＢ培地を
添加して３７℃で６０分間振盪培養した．その菌体懸濁
液の一定量を、２５μｇ／ｍｌ濃度のアンピシリンを含
むＬＢ寒天平板（寒天濃度１．５％）に播き、３７゛Ｃ
で一夜培養し、アンピシリン耐性クローンを得た．この
アンビシリン耐性クローン、即ち形質転換体を大腸菌Ｈ
ＢＩＯＩ／ｐＨＩＰＤ２と名付け、二量体ポリペプチド
の生産菌とした． （２）二量体ポリペプチドの製造 第１項で得た二量体ポリペプチド生産菌（大腸菌ＨＢＩ
ＯＩ／ｐＨＩＰＤ２）を、ＬＢ培地にて３７゜Ｃで一夜
培養したのち、その菌体懸濁液のｌｍｌを１００ｍｌの
栄養培地［組成＝１．５％リン酸二ナトリウム・１２水
塩、０．３％リン酸一カリウム、０．１％塩化アンモニ
ウム、２ｍｇ／１ビタミンＢ１、０．５％カザミノ酸、
２ｍＭ硫酸マグネシウム、０．１ｍＭ塩化カルシウム、
１％トリプトン、０．５Ｘ酵母エキス、１％塩化ナトリ
ウム、０．４％グリセリンコに接種し、更にインドール
−３−アクリル酸を最終濃度２０μｇ／ｍｌになるよう
に添加したのち、更に３７℃で２４時間培養した．菌体
を遠心分離により採取し１００ｍｌの０．１％リゾチー
ム及び３０ｍＭ塩化ナトリウムを含む５０ｍＭ｝リス塩
酸緩衝液（ｐＨ８． ０）に懸濁させた．氷水中で３０
分間ｎ置したのちドライアイス／エタノール浴での凍結
と３７℃での融解を繰り返して菌体を破壊し、遠心分離
にて菌体残査等を除いた抽出液を得た．この抽出液につ
いて、マウス胸腺細胞を用いるリンパ球活性化作用の活
性を前記試験例２に記載の方法に従って測定した．その
結果、この抽出液の１００倍希釈液（最終希釈倍数）に
おける［３Ｈ］−チミジンの胸腺細胞への取り込み量は
、最大取り込み量の５０％以上の測定値を示した．この
抽出液を前記試験例１及び２に供した． 実施例２ Ｄ２８２ボリペブ ドの，造 前記の一般式 ［Ａ］ ＆− ［Ｂ］ − ［Ｃ］ ｂ− ［Ａ］ ｃ
− ［Ｂ］ − ［Ｃ］ ｄで示されるアミノ酸配列の
式中ａ− ｂ， ｃ及びｄが０であるボリーペブチド（
即ち［Ｂ］ − ［Ｂ］で示されるアミノ酸配列に対応
するポリペプチド二以下、Ｄ２８２ボリペプチドという
）を以下の方法で製造した．式［Ｂ］で示されるポリペ
プチドのアミノ酸配列は前記のとおりである．但し、Ｘ
［Ｂ］中のＸ及びＹは、それぞれＡｓｎ及びＡｓｐで
ある．（１）形質発現プラスミドＰＨＩＤ２Ｂ２の構築
実施例１に記載したＥｃｏ−Ｓａｕ断片に、下記の化学
合成オリゴヌクレオチドアダプター［口］（以下、合成
ＤＮＡ［口］と記す）をＴ４ ＤＮＡリガーゼを用いて
結合させた．合成ＤＮＡ ［ロコとは、下記式［ａｌと
［ｅｌで示される２種類のＤＮＡ断片を、連結させて作
製したＤＮＡアダプターである．ここで得られたＤＮＡ
断片を制限酵素ＥｃｏＲＩで消化処理し、余分に付加さ
れたＤＮＡ断片を切断除去することにより、Ｅｃｏ−Ｓ
ａｕ断片に合成ＤＮＡ［口］が連結され、かつ両端が制
限酵素ＥｃｏＲＩの粘着末端を有するＤＮＡ断片を単離
した．このＤＮＡ断片を， Ｅｃｏ−ＩＬＩ（２Ｂ２）
断片という．別途に、前記Ｅｃｏ−Ｓａｕ断片に、下記
の式［ハ］で示される化学合成オリゴヌクレオチドアダ
プターをＴ４ ＤＮＡリガーゼを用いて結合させた．但
し、式［ハ］の化学合成オリゴヌクレオチド アダプタ
ーとは、下記式［ｆ］、［ｇ］及び［ｈ］で示される３
種類のＤＮＡ断片を、順次結合させて作製したＤＮＡア
ダプターである（以下、合成ＤＮＡ［ハ］と記す）． ５’ −ＡＡＣＴＡＧＴＡＣＧＣＡＡＧＴＴＣＡＣ
［ｆコ３’−
ＴＴＧＡＴＣＡＴＧＣＧＴＴＣＡＡＧＴＧＣＡＴＴ５′
−ＧＴＡＡＡＡＧＧＡＧＧＴＴＴＡＡＡ
［ｇｌ３’−ＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡ
ＴＴＴＡＡＴＡＣ５’−ＴＴＡＴＧＡＧＧＡＴＣＡＴＣ
ＡＡＡＴＡＣＧ ［ｈ］３
’ 一ＴＣＣＴＡＧＴＡＧＴＴＴＡＴＧＣＴＴＡＡ更に
、得られたこの断片に、下記式で示される化学合成オリ
ゴヌクレオチド アダプター［二］をＴ４ ＤＮＡリガ
ーゼを用いて結合させた．この化学合成オリゴヌクレオ
チドアダプター［二］とは、下記式［ａ］と［１Ｆで示
される２種類のＤＮＡ断片を、結合させて作製したＤＮ
Ａアダプターである．５’−ＧＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＡ
ＴＣＡＣＴＧＡＣＴＴＴＣＡＧＡＴ
［ａ］３’−ＧＴＧＧＧＡＧＡＴＡＧＴＧＡＣＴＧＡ
ＡＡＧＴＣＴＡＴＧＡＣ５’ −ＡＣＴＧＴＧＡＴＧＡ
Ｃ
［ｉ］３’ −ＡＣＴＡＣＴＧＡＧＣＴ 得られたＤＮＡ断片をＨｐａ−Ｘｈｏ （１４１）断片
という．別途、参考例に記載の形質発現ブラスミドｐＨ
ＩＰ８３８３ａを制限酵素ＨＲＡＩとＸｈｏＩにて消化
し、α型ヒト インターロイキン１をコードするＤＮＡ
領域を含まずアンピシリン耐性遺伝子を含む大きなＤＮ
Ａ断片を単離した．このＤＮＡ断片をベクター（Ａｍｐ
）断片という．このベクター（Ａｍｐ）断片と上記のＨ
ｐａ−Ｘｈｏ （１４１）断片をＴ４ ＤＮＡリガーゼ
を用いて結合させることにより、１４１残基のアミノ酸
からなるα型ヒトインターロイキン１の欠失体ポリペプ
チド（第４表のアミノ酸番号第１２７〜２６７番目に対
応するポリペプチド）生産用の形質発現プラスミドｐＨ
ｒＤ１４１を構築した．この形質発現プラスミドｐＨＩ
Ｄ１４１を、制限酵素ＥｃｏＲＩにて消化し、該ブラス
ミド中に挿入されている上記欠失体ポリペプチドをコー
ドする領域に一箇所存在する切断認識部位で切断し、直
鎖二本鎖ＤＮＡとした．このＤＮＡ断片を直鎮ｐＨＩＤ
１４１−ＤＮＡ断片という．この直鎖ｐＨｒＤ１４１−
ＤＮＡ断片と先に作製したＥｃｏ−ＩＬＩ （２Ｂ２）
断片をＴ４ ＤＮＡリガーゼを用いて結合させた．尚、
このＥｃｏ−ＩＬＬ （２Ｂ２）断片が正しい方向に挿
入されていることを、実施例１に記載した方法と同様に
、得られたブラスミドを制限酵素｝｛ｐａＩとＸｈｏｒ
にて消化し、Ｄ２８２ボリペプチドをコードする全領域
を含むＤＮＡ断片を単離し、その塩基配列を決定して確
認した．第３図に、Ｄ２８２ボリペプチド生産用の形質
発現プラスミドの構築工程を示す．この形質発現ブラス
ミドをｐＨＩＤ２Ｂ２と名付けた． 更に、実施例１に記載の方法に従って大腸菌ＨＢＩＯＩ
株に導入し形質転換体を作製した．このＤ２８２ボリペ
プチド生産菌を、大腸菌ＨＢ１０１／ｐＨＩＤ２Ｂ２と
名付けた． （２）Ｄ２Ｂ２ポリペプチドの製造 第１項で得た生産菌（大腸菌ＨＢ１０１／ｐ｝］ＩＤ２
８２）を、実施例１に記載の方法に従ってＬＢ培地にて
３７゜Ｃで一夜培養したのち、更に前記実施例１に記載
の栄養培地に１％接種し、インドール−３−アクリル酸
存在下で３７℃で２４時間培養した．菌体を遠心分離に
より採取し１００ｍｌの０．１％リゾチーム及び３０ｍ
Ｍ塩化ナトリウムを含む５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ８． ０）に懸濁させた．氷水中で３０分間静置した
のちドライアイス／エタノール浴での凍結と３７℃での
融解を繰り返して菌体を破壊し、遠心分離にてＤ２８２
ボリペプチドを含む抽出液を得た． ９考例 プラスミドＨＩＰ８３８３ａの 築 ヒトインターロイキン１前駆体ポリペブチドをコードす
るクローン化ｃＤＮＡをヨーロッパ公開特許第０１８８
９２０号に記載の方法に従って単離した．このヒト イ
ンターロイキン１αｃＤＮＡが組み込まれた組み換え体
ブラスミドｐｔ−ｒＬ ４ （Ｆｕｒｕｔａｎｉ，Ｙ．
ら， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， １
３巻， ５８６９頁， １９８５年）から、制限酵素
Ｐｓｔｌによる消化にて、ｃＤＮＡ領域を切り出した．
このクローン化ｃＤＮＡから、制限酵素ＥｃｏＲＩとＢ
ｓｔＮＩにて消化し、第４表に示した塩基配列の第３９
８〜８０８番目までに相当するＤＮＡ断片を単離した．
このＤＮＡ断片に、下記の式［ホ］及び［へ］で示され
る二種類の化学合成オリゴヌクレオチドアダプターをＴ
４ ＤＮＡリガーゼを用いて結合させた．ここで得られ
たＤＮＡ断片を、ＳＤ−ＩＬＩ断片という．但し、式［
ホ］の化学合成オリゴヌクレオチドアダプターとは、下
記式［ｆ］、［ｇｌ及び［ｊｌ〜［１］で示される５種
類のＤＮＡ断片を、順次結合させて作製したＤＮＡアダ
プターである（以下、合成ＤＮＡ［ホ］と記す）． ５’−ＡＡＣＴＡＧＴＡＣＧＣＡＡＧＴＴＣＡＣ
［ｆ］３’−ＴＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣＧＴＴＣＡＡＧＴＧＣＡＴＴ３’−ＡＣＴＣＧＴ
ＴＡＣＡＣＴＴＴＡＴＧＴＴＧＡＡＡＴＡＣＴＣ５’−
ＴＧＡＧＧＡＴＣＡＴＣＡＡＡＴＡＣＧ
［１］３’−ＣＴＡＧＴＡＧＴＴＴＡ
ＴＧＣＴＴＡＡ式［ヘコの化学合成オリゴヌクレオチド
アダプターの塩基配列は、次の通りである．別途に、形
質発現ベクターｐＥＰ３０２ （Ｆｕｒｕｔａｎｉ，
Ｙ．ら， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，
１３巻， ５８６９頁， １９８５年）を、制限酵素力
咀ＩとＢａｍＨＩにて消化し、大腸菌トリブトフアンプ
ロモーター領域部分及びアンビシリン耐性遺伝子を含む
大きなＤＮＡ断片（以下、ベクター断片という）を単離
した．このベクター断片と上記のＳＤ−ＩＬＩ断片を、
Ｔ４ ＤＮＡリガーゼを用いて結合させることにより、
ヒト インターロイキン１ボリペプチド生産用の形質発
現プラスミドｐＨＩＰＨ３８３ａを構築した（第４図参
照）．（以下余白） 第４表 及びアミノ酸配列 ＭｅｔＡ１ａＬｙｓＶａｌＰｒｏＡｓｐＭｅｔＰｈｅＧ
１ｕＡｓｐＡＴＧＧＣＣＡＡＡＧＴＴＣＣＡＧＡＣＡＴ
ＧＴＴＴＧＡＡＧＡＣ （３０）ＬｅｕＬｙｓＡｓｎＣ
ｙｓＴｙｒＳｅ ｒＧ１ｕＡｓｎＧ１ｕＧ１ｕＣＴＧＡ
ＡＧＡＡＣＴＧＴＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＧＡＡＧＡ
Ａ（６０）ＡｓｐＳｅｒＳｅｒＳｅｒｌｌｅＡｓｐＨｉ
ｓＬｅｕｓｅｒＬｅｕＧＡＣＡＧＴＴＣＣＴＣＣＡＴ
ＴＧＡＴＣＡＴＣＴＧＴＣＴＣＴＧ （９０）ＡｓｎＧ
１ｎＬｙｓＳｅｒＰｈｅＴｙｒＨｉｓＶａｌＳｅｒＴｙ
ｒＡＡＴＣＡＧＡＡＡＴＣＣＴＴＣＴＡＴＣＡＴＧＴＡ
ＡＧＣＴＡＴ （１２０）ＧｌｙＰｒｏＬｅｕＨｉ ｓ
Ｇ１ｕＧｌｙｃｙｓＭｅ ｔＡｓｐＧ１ｎＧＧＣＣＣＡ
ＣＴＣＣＡＴＧＡＡＧＧＣＴＧＣＡＴＧＧＡＴＣＡＡ
（１５０）ＳｅｒＶａｌＳｅｒＬｅｕＳｅｒＩ１ｅＳｅ
ｒＧ１ｕＴｈｒＳｅｒＴＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＧＴ
ＡＴＣＴＣＴＧＡＡＡＣＣＴＣＴ （１８０）ＬｙｓＴ
ｈｒＳｅｒＬｙｓＬｓｕＴｈｒＰｈａＬｙｓＧｌｕＳｅ
ｒＡＡＡＡＣＡＴＣＣＡＡＧＣＴＴＡＣＣＴＴＣＡＡＧ
ＧＡＧＡＧＣ （２１０）ＭｅｔＶａｌＶａｌＶａｌＡ
ｌａＴｈｒＡｓｎＧ１ｙＬｙｓＶａｌＡＴＧＧＴＧＧＴ
ＡＧＴＡＧＣＡＡＣＣＡＡＣＧＧＧＡＡＧＧＴＴ （２
４ ０）ＬｅｕＬｙｓＬｙｓＡｒｇＡｒｇＬｅｕＳｅ
ｒＬｅｕｓｅ ｒＧｌｎＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＣＧ
ＧＴＴＧＡＧＴＴＴＡＡＧＣＣＡＡ （２７０）Ｓｅｒ
Ｉ１ｅＴｈｒＡｓｐＡｓｐＡｓｐＬｅｕＧ１ｕＡ１ａＩ
１ｅＴＣＣＡＴＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＧＡＣＣＴＧＧＡ
ＧＧＣＣＡＴＣ（３００）Ａ１ａＡｓｎＡｓｐＳｅｒＧ
１ｕＧ１ｕＧｌｕＩｌｅＩ１ｅＬｙｓＧＣＣＡＡＴＧＡ
ＣＴＣＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＡＴＣＡＴＣＡＡＧ（３３
０）ＰｒｏＡｒｇＳｅｒＳｅｒＰｒｏＰｈｅＳｅｒＰｈ
ａＬｅｕＳｅｒＣＣＴＡＧＧＴＣＡＴＣＡＣＣＴＴＴＴ
ＡＧＣＴＴＣＣＴＧＡＧＣ（３６０）ＡｓｎＶａｌＬｙ
ｓＴｙｒＡｓｎＰｈｅＭｅｔＡｒｇＩ１ｅＩｌｅＡＡＴ
ＧＴＧＡＡＡＴＡＣＡＡＣＴＴＴＡＴＧＡＧＧＡＴＣＡ
ＴＣ（３９０）ＬｙｓＴｙｒＧ１ｕＰｈｅＩ１ｅＬｅｕ
ＡｓｎＡｓｐＡｌａＬｅｕＡＡＡＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡ
ＴＣＣＴＧＡＡＴＧＡＣＧＣＣＣＴＣ（４２０）Ａｓｎ
Ｇ１ｎＳｅｒＩｌｅＩ１ｅＡｒｇＡｌａＡｓｎＡｓｐＧ
１ｎＡＡＴＣＡＡＡＧＴＡＴＡＡＴＴＣＧＡＧＣＣＡＡ
ＴＧＡＴＣＡＧ（４５０）ＴｙｒＬｅｕＴｈｒＡｌａＡ
１ａＡ１ａＬｓｕＨｉｓＡｓｎＬａｕＴＡＣＣＴＣＡＣ
ＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡＴＴＡＣＡＴＡＡＴＣＴＧ（４８
０）ＡｓｐＧ１ｕＡ１ａＶａｌＬｙｓＰｈｅＡｓｐＭｅ
ｔＧ１ｙＡ１ａＧＡＴＧＡＡＧＣＡＧＴＧＡＡＡＴＴＴ
ＧＡＣＡＴＧＧＧＴＧＣＴ（５１０）ＴｙｒＬｙｓＳｅ
ｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐＡｓｐＡｌａＬｙｓＩｌｅＴＡＴ
ＡＡＧＴＣＡＴＣＡＡＡＧＧＡＴＧＡＴＧＣＴＡＡＡＡ
ＴＴ（５４０）ＴｈｒＶａｌＩ１ｅＬｅｕＡｒｇｌｌｅ
ＳａｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＡＣＣＧＴＧＡＴＴＣＴＡＡ
ＧＡＡＴＣＴＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＡ（５７０）Ｌｅｕ
ＴｙｒＶａｌＴｈｒＡ１ａＧ１ｎＡｓｐＧ１ｕＡｓｐＧ
１ｎＴＴＧＴＡＴＧＴＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＴＧＡ
ＡＧＡＣＣＡＡ（６００）ＰｒｏＶａｌＬｅｕＬｅｕＬ
ｙｓＧｌｕＭｅｔＰｒｏＧ１ｕＩｌｅＣＣＡＧＴＧＣＴ
ＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＡＴＧＣＣＴＧＡＧＡＴＡ（６３
０）ＰｒｏＬｙｓＴｈｒＩ１ｅＴｈｒＧｌｙＳｅｒＧ１
ｕＴｈｒＡｓｎＣＣＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＣＡＧＧＴ
ＡＧＴＧＡＧＡＣＣＡＡＣ（６６０）ＬｅｕＬｅｕＰｈ
ｅＰｈｅＴｒｐＧｌｕＴｈｒＨｉ ｓＧ１ｙＴｈｒＣＴ
ＣＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧＧＡＡＡＣＴＣＡＣＧＧＣ
ＡＣＴ（６９０）ＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈｅＴｈｒＳｅ
ｒＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡＡＧＡＡＣＴＡＴＴＴＣ
ＡＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＣＣＡＴＣＣＡ（７２０）Ａｓ
ｎＬｅｕＰｈｅ Ｉ １ｅＡ１ａＴｈｒＬｙｓＧ１ｎＡ
ｓｐＴｙｒＡＡＣＴＴＧＴＴＴＡＴＴＧＣＣＡＣＡＡＡ
ＧＣＡＡＧＡＣＴＡＣ（７５０）ＴｒｐＶａｌＣｙｓＬ
ｅｕＡ１ａＧ１ｙＧ１ｙＰｒｏＰｒｏＳｅｒＴＧＧＧＴ
ＧＴＧＣＴＴＧＧＣＡＧＧＧＧＧＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴ
（７８０）ｒｌｅＴｈｒＡｓｐＰｈｅＧｌｎＩ１ｅＬｅ
ｕＧｌｕＡｓｎＧ１ｎＡＴＣＡＣＴＧＡＣＴＴＴＣＡＧ
ＡＴＡＣＴＧＧＡＡＡＡＣＣＡＧ（８１０）Ａ１ａ＊＊
＊ ＧＣＧＴＡＧ 数字は、アミノ酸番号を示す． 括弧内の数字は、塩基番号を示す． 零零零は、翻訳終止コドンを意味する．（以下余白）
びにそのＮ末端部及び／又はＣ末端部の部分欠失体の重
合体ポリペプチド、それをコードするＤＮＡ、及びそれ
らの製造法に関する．インターロイキン１は、生体内に
存在し多様な生物活性を有する生理活性ポリペプチドで
あり［Ｏｐｐｅｎｈｅ１ｍ， Ｊ．Ｊ．ら， ｒｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ， ７巻，４５頁． １
９８６年； Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．， Ｒｅｖ
ｉｅｗｓ ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ
ｓ， ６巻．５１頁， １９８４年ゴ、諸生体反応の
調節因子として重要な役割を担っている．ヒト インタ
ーロイキン１には、α型及びβ型の二穫類があり、いず
れも遺伝子組み換え技術を応用して製造され、上記の生
物活性等に基づいた医薬品としての適用が期待されてい
る．α型ヒト インターロイキン１ボリペプチドには、
そのＮ末端から第２番目のＳｅｔがＡｌａにかわってい
るポリペプチド（Ｍａｒｃｈ，Ｃ． Ｊ．ら， Ｎａｔ
ｕｒｅ， ３１５巻，６４１頁． １９８５年）及びＮ
末端から第３６番目のＡｓｎが脱アミド化され、Ａｓｐ
に変化したボリペプチドが知られている（Ｃａｍｅｒｏ
ｎ， Ｐ． Ｍ．ら， Ｊ． Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，
１６４巻，２３７頁， １９８６年； Ｗｌｎｇｆｉ
ｅｌｄ，Ｐ．ら，Ｅｕｒ．Ｊ．ＢＩｏｃｈｅｍ．， １
６５巻，５３７頁， １９８７年）．また、α型ヒト
インターロイキン１ボリベブチドの誘導体としては、そ
のＮ末端側の１〜１４個のアミノ酸及び／又はＣ末端側
の１〜４個のアミノ酸の欠失体など（ヨーロッパ公開特
許第０１８８９２０号）が知られている． 本発明者等は、α型ヒト インターロイキン１ボリペプ
チドの構造と生物活性との関係について鋭意研究を重ね
、該ポリペプチド或はその主要部ポリペプチドのＮ末端
に更にこのようなポリペプチドを付加させ、α型ヒト
インターロイキン１ボリベブチド或はその主要部ポリペ
プチドの高分子化前駆体ポリペプチドを作製した．具体
的には、例えばα型ヒトインターロイキン１の二量体ポ
リペブチドが挙げられる． 該二量体ポリペプチドは、生体に投与された時、体内滞
留時間の延長を認め、更に意外にも生体内の蛋白分解酵
素により部分的に分解を受けた場合に、二量体ポリペプ
チドそれ自身よりも強い生物活性が発揮されることから
徐効性医薬品としての有用性を見い出し、本発明を完成
するに至った．本発明は、下記の一般式で示されるアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドに関する． ［Ａ］ ２Ｌ− ［Ｂ］ − ［Ｃコｂ− ［
Ａ］ ｃ− ［Ｂ］ − ［Ｃ］ ｄ但し、上記
式中ａ， ｂ．ｃ及びｄは、それぞれ０又は１の整数を
意味し、式［Ａ］、［Ｂ］及び［Ｃ］で示されるポリペ
プチドのアミノ酸配列は次ぎのとおりである． Ｓｅｒ Ｗ ＰｒｏＰｈｅＳｅｒＰｈｅＬｅｕＳｅｒＡ
ｓｎＶａｌＬｙｓＴｙｒＡｓｎＰｈｅ［Ａ］ 式［Ａ］中のＷは、Ｓｅｒ又はＡｌａを意味する．Ｍｅ
ｔＡｒｇＩ１ｅＩｌｅＬｙｓＴｙｒＧ１ｕＰｈｅＩｌｅ
ＬｅｕＡｓｎＡｓｐＡｌａＬｅｕＡｓｎＧ１ｎＳｓｒＩ
ｌｅＩ１ｅＡｒｇＡ１ａ Ｘ ＡｓｐＧｌｎＴｙｒＬｅ
ｕＴｈｒＡｌａＡ１ａＡｌａＬｅｕＨ１ ｓＡｓｎＬｅ
ｕＡｓｐＧ１ｕＡ１ａＶａｌＬｙｓＰｈｅＡｓｐＭｅ
ｔＧ１ｙＡ１ａＴｙｒＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐ
ＡｓｐＡ１ａＬｙｓｌｌｅＴｈｒＶａｌＩ１ｅＬｅｕＡ
ｒｇＩ１ｅＳｅｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＬｅｕＴｙｒＶａ
ｌＴｈｒＡ１ａＧ１ｎＡｓｐＧ１ｕＡｓｐＧ１ｎＰｒｏ
ＶａｌＬｅｕＬｅｕＬｙｓＧ１ｕＭｅ ｔＰｒｏＧ１ｕ
Ｉ ｌｅＰｒｏＬｙｓＴｈｒＩｌｅＴｈｒＧ１ｙＳｅｒ
Ｇ１ｕＴｈｒＡｓｎＬｅｕＬｅｕＰｈｅＰｈｅＴｒｐＧ
１ｕＴｈｒＨｉｓＧ１ｙＴｈｒＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈ
ｅＴｈｒＳｅｒＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡｓｎＬｅｕ
ＰｈｅＩ１ａＡｌａＴｈｒＬｙｓＧ１ｎＡｓｐＴｙｒＴ
ｒｐＶａｌＣｙｓＬｅｕＡ１ａＧ１ｙＧ１ｙＰｒｏＰｒ
ｏＳｅｒｌｌｅＴｈｒ Ｙ ＰｈｅＧ１ｎｌｌｅＬｅ
ｕ
［ Ｂ ］式［Ｂ］中のＸはＡｓｎ又はＡｓｐを意味
し、ＹはＡｓｐ又はＴｙｒを窓昧する． ＧｌｕＡｓｎＧ１ｎＡ１ａ
［ Ｃ ］本発明の好ましいポリペプチドとしては
、下記第１表の式［ＩＩ］で示されるアミノ酸配列を有
するα型ヒトインターロイキン１の二量体ポリペブチド
（以下、単に二量体ポリペプチドと記す）及び第２表の
式［■］で示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド
が挙げられる． 第１表 ＳｅｒＳｅｒＰｒｏＰｈｅＳｅｒＰｈｅＬｅｕＳｅｒＡ
ｓｎＶａｌＬｙｓＴｙｒＡｓｎＰｈｅＭｅｔＡｒｇＩ１
ｅｌｌｅＬｙｓＴｙｒＧ１ｕＰｈｅＩ１ｅＬｅｕＡｓｎ
ＡｓｐＡ１ａＬｅｕＡｓｎＧ１ｎＳｅｒＩ１ｅＩｌｅＡ
ｒｇＡ１ａＡｓｎＡｓｐＧｌｎＴｙｒＬｅｕＴｈｒＡ１
ａＡ１ａＡ１ａＬｅｕＨｉ ｓＡｓｎＬｅｕＡｓｐＧ１
ｕＡｌａＶａ ＩＬｙｓＰｈｅＡｓｐＭｅ ｔＧ１ｙＡ
ｌａＴｙｒＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐＡｓｐＡ１
ａＬｙｓｌｌｅＴｈｒＶａｌ１１ｅＬｅｕＡｒｇｌｌｅ
ＳｅｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＬｅｕＴｙｒＶａｌＴｈｒＡ
ｌａＧ１ｎＡｓｐＧ１ｕＡｓｐＧｌｎＰｒｏＶａｌＬｅ
ｕＬｅｕＬｙｇＧ１ｕＭｅｔＰｒｏＧ１ｕＩｌｅＰｒｏ
ＬｙｓＴｈｒｌｌｅＴｈｒＧ１ｙｓｅｒＧ１ｕＴｈｒＡ
ｓｎＬｓｕＬｅｕＰｈｅＰｈｅＴｒｐＧ１ｕＴｈｒＨｉ
ｓＧｌｙＴｈｒＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈｅＴｈｒＳｅｒ
ＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡｓｎＬｅｕＰｈｅＩｌｅＡ
１ａＴｈｒＬｙｓＧｌｎＡｓｐＴｙｒＴｒｐＶａｌＣｙ
ｓＬｅｕＡｌａＧ１ｙＧｌｙＰｒｏＰｒｏＳｅｒＩｌｅ
ＴｈｒＡｓｐＰｈｅＧｌｎＩｌｅＬｅｕＧｌｕＡｓｎＧ
１ｎＡｌａＳｅｒＳｅｒＰｒｏＰｈｅｓｅｒＰｈｅＬｅ
ｕＳｅｒＡｓｎＶａｌＬｙｓＴｙｒＡｓｎＰｈｅＭｅｔ
ＡｒｇＩ１ｅＩｌｓＬｙｓＴｙｒＧｌｕＰｈｅｒｌｅＬ
ｅｕＡｓｎＡｓｐＡ１ａＬｅｕＡｓｎＧｌｎＳｅｒＩ１
ｅＩＬｅＡｒｇＡ１ａＡｓｎＡｓｐＧ１ｎＴｙｒＬｅｕ
ＴｈｒＡｌａＡ１ａＡ１ａＬｅｕＨｉｓＡｓｎＬｅｕＡ
ｓｐＧｌｕＡ１ａＶａｌＬｙｓＰｈｓＡｓｐＭｅｔＧｌ
ｙＡｌａＴｙｒＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐＡｓｐ
Ａ１ａＬｙｓＩ１ｅＴｈｒＶａｌｌｌｅＬｅｕＡｒｇＩ
１ｅＳｅｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＬｅｕＴｙｒＶａｌＴｈ
ｒＡ１ａＧ１ｎＡｓｐＧ１ｕＡｓｐＧ１ｎＰｒｏＶａｌ
ＬｅｕＬｅｕＬｙｓＧ１ｕＭｅｔＰｒｏＧ１ｕＩ１ｅＰ
ｒｏＬｙｓＴｈｒＩ１ｅＴｈｒＧ１ｙＳｅｒＧｌｕＴｈ
ｒＡｓｎＬｅｕＬｅｕＰｈｅＰｈｅＴｒｐＧ１ｕＴｈｒ
ＨｉｓＧ１ｙＴｈｒＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈｅＴｈｒＳ
ｅｒＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡｓｎＬｅｕＰｈｅＩ１
ｅＡｌａＴｈｒＬｙｓＧ１ｎＡｓｐＴｙｒＴｒｐＶａｌ
ｃｙｓＬｅｕＡ１ａＧ１ｙＧ１ｙＰｒｏＰｒｏＳａｒＩ
１ｅＴｈｒＡｓｐＰｈｅＧｌｎｌｌｅＬｅｕＧ１ｕＡｓ
ｎＧ１ｎＡ１ａ ［ ＩＩ ］第２表 ＭｅｔＡｒｇＩ１ｅＩ１ｅＬｙｓＴｙｒＧ１ｕＰｈｅＩ
１ｅＬｅｕＡｓｎＡｓｐＡ１ａＬｅｕＡｓｎＧｌｎＳｅ
ｒＩ１ｅＩｌｅＡｒｇＡｌａＡｓｎＡｓｐＧ１ｎＴｙｒ
ＬｅｕＴｈｒＡ１ａＡ１ａＡｌａＬｅｕＨ１ｓＡｓｎＬ
ｅｕＡｓｐＧ１ｕＡ１ａＶａｌＬｙｓＰｈｅＡｓｐＭｅ
ｔＧ１ｙＡ１ａＴｙｒＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐ
ＡｓｐＡ１ａＬｙｓｌｌｅＴｈｒＶａｌＩ１ｅＬｅｕＡ
ｒｇＩ１ｅＳｅｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＬｅｕＴｙｒＶａ
ｌＴｈｒＡ１ａＧｌｎＡｓｐＧｌｕＡｓｐＧｌｎＰｒｏ
ＶａｌＬｅｕＬｓｕＬｙｓＧｌｕＭｅｔＰｒｏＧ１ｕＩ
１ｅＰｒｏＬｙｓＴｈｒｌ１ｅＴｈｒＧｌｙＳｅｒＧ１
ｕＴｈｒＡｓｎＬｅｕＬｅｕＰｈｅＰｈｅＴｒｐＧ１ｕ
ＴｈｒＨｌｓＧ１ｙＴｈｒＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈｅＴ
ｈｒＳｅｒＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡｓｎＬｅｕＰｈ
ｅＩ１ｅＡｌａＴｈｒＬｙｓＧｌｎＡｓｐＴｙｒＴｒｐ
ＶａｌＣｙｓＬｅｕＡ１ａＧ１ｙＧ１ｙＰｒｏＰｒｏＳ
ｅｒＩｌｅＴｈｒＡｓｐＰｈｅＧ１ｎｌｌｅＬｅｕＭｅ
ｔＡｒｇＩｌｅＩＬｅＬｙｓＴｙｒＧ１ｕＰｈｅｒ１ｅ
ＬｅｕＡｓｎＡｓｐＡ１ａＬｅｕＡｓｎＧｌｎＳｅｒＩ
１ｅＩ１ｅＡｒｇＡ１ａＡｓｎＡｓｐＧ１ｎＴｙｒＬｅ
ｕＴｈｒＡｌａＡｌａＡ１ａＬｅｕＨｌｓＡｓｎＬｅｕ
ＡｓｐＧｌｕＡ１ａＶａｌＬｙｓＰｈｅＡｓｐＭｅｔＧ
１ｙＡ１ａＴｙｒＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐＡｓ
ｐＡｌａＬｙｓｒｌｅＴｈｒＶａｌＩ１ｅＬｅｕＡｒｇ
Ｉ１ｅＳｅｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＬａｕＴｙｒＶａｌＴ
ｈｒＡ１ａＧ１ｎＡｓｐＧ１ｕＡｓｐＧｌｎＰｒｏＶａ
ｌＬｅｕＬｅｕＬｙｓＧ１ｕＭｅｔＰｒｏＧ１ｕ１１ｅ
ＰｒｏＬｙｓＴｈｒＩ１ｅＴｈｒＧ１ｙＳｅｒＧ１ｕＴ
ｈｒＡｓｎＬａｕＬｅｕＰｈｅＰｈｅＴｒｐＧ１ｕＴｈ
ｒＨｉｓＧ１ｙＴｈｒＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈｅＴｈｒ
ＳｅｒＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡｓｎＬｅｕＰｈｅＩ
１ｅＡ１ａＴｈｒＬｙｓＧ１ｎＡｓｐＴｙｒＴｒｐＶａ
ｌＣｙｓＬｅｕＡ１ａＧ１ｙＧ１ｙＰｒｏＰｒｏＳａｒ
Ｉ１ａＴｈｒＡｓｐＰｈｅＧ１ｎＩ１ｅＬｅｕ
［ １ ］本
発明は、前記ポリペプチドの誘導体にも関する．該ポリ
ペプチドの誘導体とは、該ポリペブチドの鎖上の側鎖官
能基、Ｎ末端のアミノ基又はＣ末端のカルボキシル基を
利用して形成される誘導体を意味する．例えばカルボキ
シル基と脂肪族アルコールとのエステル類、第一もしく
は第ニアミンとの酸アミド類、アミノ基のＮ−アシル誘
導体、ヒドロキシル基のＯ−アシル誘導体、カルバモイ
ル基の水解体又はポリエチレングリコール等による修飾
体、更には該ポリペプチドのカルボキシル基又はアミノ
基等とで形成される塩、例えば水酸化ナトリウム、水酸
化カリウム、アルギニン、カフェイン、プロ力イン、塩
酸、グルコン酸等との塩が挙げられる． 本発明のポリペプチドの分子内Ｓ−Ｓ結合体及び分子間
Ｓ−Ｓ結合により形成される高分子体も本発明のポリペ
プチドに包含される． また、本発明のポリペプチドを遺伝子組み換え技術を応
用して製造する場合、その宿主細胞の種類或は培養産生
条件等により、Ｎ末端にＭｅｔが付加したポリペプチド
が得られる場合があり、このようなポリペプチドも本発
明のポリペプチドに包含される． 本発明は、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡに
も関する．そのＤＮＡの例としては、第１表の式［１１
で示されるアミノ酸配列を有する二旦体ポリペプチドを
コードするＤＮＡ、即ち下記第３表で掲げた式［ＩＩａ
］で示される塩基配列を有するＤＮＡ及びその縮重が挙
げられる．第３表 ５’ −ＴＣＡＴＣＡＣＣＴＴＴＴＡＧＣＴＴＣＣＴＧ
ＡＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＡＴＡＣＡＡＣＴＴＴＡＴＧＡ
ＧＧＡＴＣＡＴＣＡＡＡＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＴＣＣＴ
ＧＡＡＴＧＡＣＧＣＣＣＴＣＡＡＴＣＡＡＡＧＴＡＴＡ
ＡＴＴＣＧＡＧＣＣＡＡＴＧＡＴＣＡＧＴＡＣＣＴＣＡ
ＣＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡＴＴＡＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＡ
ＴＧＡＡＧＣＡＧＴＧＡＡＡＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧ
ＧＴＧＴＧＣＴＴＧＧＣＡＧＧＧＧＧＧＣＣＡＣＣＣＴ
ＣＴＡＴＣＡＣＴＴＡＣＴＴＴＣＡＧＡＴＡＣＴＧＧＡ
ＡＡＡＣＣＡＧＧＣＧＴＣＡＴＣＡＣＣＴＴＴＴＡＧＣ
ＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＡＡＧＣＡＧＴＧＡＡＡＴＴＴＧ
ＡＣＡＴＧＧＧＴＧＣＴＴＡＴＡＡＡＡＣＴＴＧＴＴＴ
ＡＴＴＧＣＣＡＣＡＡＡＧＣＡＡＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧ
ＴＧＴＧＣＴＴＧＧＣＡＧＧＧＧＧＧＣＣＡＣＣＣＴＣ
ＴＡＴＣＡＣＴＴＡＣＴＴＴＣＡＧＡＴＡＣＴＧＧＡＡ
ＡＡＣＣＡＧＧＣＧ−３゜
［ＩＩａ］本発明のポリペプチドをコードするＤＮ
Ａは、次ぎのようにして製造することができる．公知の
α型ヒト インターロイキン１或はそのＮ末端及び／又
はＣ末端のアミノ酸又はベブチド欠失体をコードするＤ
ＮＡを公知の方法、例えば前記ヨーロッパ公開特許第０
１８８９２０号に記載の方法や化学合成法を用いて作製
し、これを例えば適当な制限酵素を用いて該ポリペプチ
ドをコードする領域のＤＮＡ断片或はその部分断片を単
離し、これを化学合成オリゴデオキシヌクレオチド ア
ダプターを介して連結させることなどにより、本発明の
ＤＮＡを製造することができる．また、これらのＤＮＡ
を、例えばワングらの方法（Ｗａｎｇ， Ａ． Ｍ．ら
， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２２４巻， １４３１頁． １
９８７年）やクンケルらの点変異誘導法（Ｋｕｎｋｅ
ｌ ， Ｔ． Ａ．ら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚ
ｙｍｏ１、，１５４巻，３６７頁， １９８７年）に準
じて特定の箇所の塩基配列を変換させることにより、上
記本発明のＤＮＡの部分変異体を製造することができる
（本願出願人の昭和６３年２月３日付特許出ＩＩＩ参照
）． 上記のようにして製造したＤＮＡを当該技術分野で公知
の技術により適当な形質発現ベクターに適切な配列で挿
入し、これを導入して形質転換体を作製し、これを培養
することにより、本発明のポリペプチドを製造すること
ができる．更に詳しくは、例えば本発明のポリペプチド
をコードする塩基配列を有するＤＮＡの５゜末端（上流
側）に翻訳開始コドンＡＴＧを、かつ３゛末端（下流側
）には終止コドンを有するＤＮＡ断片を作製し、これを
適当なプロモーター及びＳＤ配列に続いて結合させ、更
にこれをベクターに挿入することにより本発明のポリペ
プチド生産用の形質発現ベクターを作製することができ
る．プロモーターとしては、例えばお駈、υ上、おＫ．
坦巴Ａ、坦ユＳ、ＰＬ， ＳＶ４０初期プロモーター等
が挙げられる．ベクターとしては、例えばプラスミド（
ｐＢＲ３２２等）、ファージ（λファージ誘導体等）、
ウイルス（ＳＶ４ ０等）、ランナウェイブラスミド等
が挙げられる．この本発明のポリペブチド生産用の形質
発現ベクターを適当な宿主、例えば大腸菌にコーエンら
の方法（Ｃｏｈｅｎ， Ｓ． Ｎ．ら， Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．， ＵＳＡ， ６９巻．
２１１０頁， １９７２年）に準じて導入することに
より形質転換体を得ることができる．次いで、この形質
転換体をそれに応じた適当な培養条件下で培養すること
により、目的とするポリペプチド或はそのＮ末端にＮｅ
ｔが結合したポリペプチドを製造することができる．こ
の培養物を、例えばリゾチ一ム消化と凍結融解、超音波
破砕、フレンチプレス等により破壊したのち、遠心分離
又はｒ遇することにより本発明のポリペプチド含有抽出
液を得ることができる．この抽出液を蛋白質精製の一最
的な精製法、例えば限外ｒ過、透析、電気泳動、塩析分
画、ゲル一過分画、イオン交換クロマトグラフィー、抗
体力ラムを用いるアフィニティーク口マトグラフイー等
の方法で精製することにより、本発明のポリペプチドを
得ることができる．また、このようにして得たポリペプ
チドを化学的に修飾することにより、本発明のポリペプ
チドの誘導体を得ることができる． 以下に、本発明のポリペプチドの典型的な例として、第
１表の式［■］で示されるアミノ酸配列を有する二量体
ポリペプチドについて述べる．試験例１ ペプ ′の 二量体ポリペプチドの分子量を、後記実施例１に記載の
二量体ポリペプチド生産菌（大腸菌ＨＢＩＯＩ／ＰＨＩ
ＰＤ２）の抽出液を用い、ＳＤＳ−ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動法及び抗ヒト インターロイキン１αウサ
ギ抗血清（大日本製薬：Ｃａｔ． Ｎｏ．ＫＥ−Ｃ １
０１ ）を用いるイムノブ口ツテイング法により測定し
た．分子量は、分子量既知蛋白標準品（Ｂｉｏ−Ｒａｄ
Ｌａｂｓ． ，米国）の移動度との対比により算出し
た．その結果、：該二量体ポリペプチドの分子量は約３
５±２ｋＤと求められた． 試験例２ 二量 ボリペプ ドのリンパ 二量体ポリペプチドのリンパ球活性化作用を、後記実施
例１に記載の二量体ポリペプチド生産菌（大腸菌ＨＢＩ
ＯＩ／ｐＨＩＰＤ２）の抽出液を用いて測定した．即ち
、該抽出液の２０μ１をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動法に付した．泳動終了後、該ゲルを５ｍｍ巾
に切り出し次いで各ゲルをｌｍｌの５％ウシ胎児血清を
含む組織培養用培地ＲＰＭ Ｉ１ ６ ４ ０ （Ｆｌ
ｏｗ Ｌａｂｓ． ，米ｒ５）中にて４℃で２４時間振
盪抽出することにより、ゲル中に含まれるポリペブチド
を抽出した．この各ゲル抽出液について、マウス胸腺細
胞を標的細胞とするリンパ球活性化作用を測定した． リンパ球活性化作用は、下記の方法に従って測定した．
組織培養用９６穴平底型プレートの各ウエルに１０μｇ
／ｍ ｌ濃度のフィトヘマグルチニンーＰ （Ｄｉｆｃ
ｏ Ｌａｂｓ． ，米国）の１００μｌ及びＣ３Ｈ／Ｈ
ｅマウスの胸線細胞懸濁液（２００万個／ｍ１）の１０
０μｌを注入し、これに上記ゲル抽出液の１０μｌを添
加した．細胞培養液には５％ウシ胎児血清含有ＲＰＭＩ
−１６４０培地を用いた．該プレートを５％炭酸ガス含
有湿気流中３７℃で３日間培養した．培養終了約１８時
間前に［３Ｈ］一チミジンの１μＣｉを添加し、細胞内
に収り込まれた［３Ｈ〕−チミジン量を計測した． その結果は図１に示すごとくであり、ＳＤＳ−ポリアク
リルアミド電気泳動による蛋白変性、即ち生物活性の減
弱を考慮せねばならないが、二量体ポリペプチドに相当
する位置には有意なリンパ球活性化作用は認められず、
分子量約２１〜１８ｋＤに相当する位置に強いリンパ球
活性化作用を認めた．この活性画分中に、上記抗ヒト
インターロイキンｌαウサギ抗血清と反応するポリペプ
チドの存在を確認したことがら、この活性は該二量体ポ
リペプチドの部分分解産物に由来するものであると結論
した． 尚、本明細書では記載の簡略化のために以下の略号を使
用７する． Ａ アデニン Ｃ シトシン Ｇ グアニン Ｔ チミン ＤＮＡ デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ 相補ＤＮＡ ＳＤ配列 シャイン・ダルガーノ配列ｋＤ
キロダルトン ＳＤＳ ラウリル硫酸ナトリウムＳ−Ｓ結合
ジスルフィド結合 ［３Ｈ］一チミジン トリチウム標識チミジン以下に実
施例及び参考例を挙げて本発明を更に具体的に説明する
． （以下余白） 実施ＰＡ１ 二量体ポリペブチドの製造 前記第１表の式［■］で示されるアミノ酸配列を有する
二景体ポリペブチドを以下の方法で製造した． （１〉形質発現プラスミドｐＨＩＰＤ２の構築参考例に
記載の形質発現プラスミドｐＨＩＰ８３８３ａから制限
酵素ＥｃｏＲＩとＳａｕ９６１による消化にて、α型ヒ
ト インターロイキン１ボリペプチドをコードする領域
の大部分を含むＤＮＡ断片（第４表に示した塩基配列の
第３９８〜７６９番目までに相当）を単離した．このＤ
ＮＡ断片をＥｃａ−Ｓａｕ断片という． このＥｃｏ−Ｓａｕ断片に、下記の化学合成オリゴヌク
レオチド アダプター［イ］（以下、合成ＤＮＡ［イ］
と記す）をＴ４ ＤＮＡリガーゼを用いて結合させた．
合成ＤＮＡ［イコとは、下記式［ａ］〜［ｄｌで示され
る４種類のＤＮＡ断片を、順次結合させて作製したＤＮ
Ａアダプターである．５’−ＧＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＡ
ＴＣＡＣＴＧＡＣＴＴＴＣＡＧＡＴ
［ａ］３゜一ＧＴＧＧＧＡＧＡＴＡＧＴＧＡＣＴＧＡ
ＡＡＧＴＣＴＡＴＧＡＣ５’ −ＡＣＴＧＧＡＡＡＡＣ
ＣＡＧＧＣＧＴＣＡＴＣＡＣＣＴＴＴＴＡＧ
［ｂｌ３’−ＣＴＡＧＴＡＧＴＴＴＡＴＧＣＴＴ
ＡＡここで得られたＤＮＡ断片を制限酵素ＥｃｏＲＩに
て消化処理し、余分に付加されたＤＮＡ断片を切断除去
することにより． Ｅｃｏ−Ｓａｕ断片に合成ＤＮＡ［
イ］が連結され、かつ両端が制限酵素ＥｃｏＲＩの粘着
末端を有するＤＮＡ断片を単離した．このＤＮＡ断片を
， Ｅｃｏ−ＩＬＬ断片という．別途に、前記形質発現
プラスミドＰＨＩＰ８３８３ａを制限酵素ＥｃｏＲＩに
て消化し、該プラスミド中に挿入されているα型ヒト
インターロイキン１ボリペプチドをコードする領域に一
箇所存在する切断認識部位で切断し、直鎖二本鎖ＤＮＡ
とした．このＤＮＡ断片を直鎖ｐＨＩＰ８３８３ａ−Ｄ
ＮＡ断片という．この直鎖ｐＨＩＰＨ３８３ａ−ＤＮＡ
断片と前記のＥｃｏ−ＩＬＬ断片をＴ４ ＤＮＡリガー
ゼを用いて結合させた．尚、このＥｃｏ−ＩＬＩ断片が
正しい方向に挿入されていることを、得られたブラスミ
ドを制限酵素ＨｐａＩと４υ、■にて消化し、二量体ポ
リペプチドをコードする全領域を含むＤＮＡ断片を単離
し、その塩基配列をＭ１３シークエンシングキット（宝
酒造）を用いて決定して確認した．第２図に、二量体ポ
リペプチド生産用の形質発現プラスミドの楕築工程を示
す．この形質発現プラスミドをＰＨＩＰＤ２と名付けた
．この形質発現ブラスミドｐＨＩＰＤ２を、下記の方法
に従って大腸菌ＨＢＩＯＩ株に導入し形質転換体を作製
した．即ち、大腸菌ＨＢＩＯＩ株をＬＢ培地［組成：１
％トリブトン、０．５％酵母エキス、１％塩化ナトリウ
ム（ｐＨ７． ５）コに接種し、３０゜Ｃで一夜培養し
た．その菌体懸濁液のｌｍｌを１００ｍｌのＬＢ培地に
接種し、濁度（波長６００ｎｍの吸光度）が約０．６に
達するまで、３０℃で培養した．この培養液を氷水中で
３０分間静置したのち、遠心分離にて菌体を採取した．
この菌体を５０ｍｌの５０ｍＭ塩化カルシウム液中に再
懸濁させ、氷水中で６０分間静置したのち、遠心分離に
て菌体を採取し２０％グリセリンを含む５０ｍＭ塩化カ
ルシウム液の１０ｍｌに懸濁させた．この懸濁液に上記
の形質発現ブラスミドｐＨＩＰＤ２を添加し、氷水中で
２０分間、室温で１０分間反応させたのち、ＬＢ培地を
添加して３７℃で６０分間振盪培養した．その菌体懸濁
液の一定量を、２５μｇ／ｍｌ濃度のアンピシリンを含
むＬＢ寒天平板（寒天濃度１．５％）に播き、３７゛Ｃ
で一夜培養し、アンピシリン耐性クローンを得た．この
アンビシリン耐性クローン、即ち形質転換体を大腸菌Ｈ
ＢＩＯＩ／ｐＨＩＰＤ２と名付け、二量体ポリペプチド
の生産菌とした． （２）二量体ポリペプチドの製造 第１項で得た二量体ポリペプチド生産菌（大腸菌ＨＢＩ
ＯＩ／ｐＨＩＰＤ２）を、ＬＢ培地にて３７゜Ｃで一夜
培養したのち、その菌体懸濁液のｌｍｌを１００ｍｌの
栄養培地［組成＝１．５％リン酸二ナトリウム・１２水
塩、０．３％リン酸一カリウム、０．１％塩化アンモニ
ウム、２ｍｇ／１ビタミンＢ１、０．５％カザミノ酸、
２ｍＭ硫酸マグネシウム、０．１ｍＭ塩化カルシウム、
１％トリプトン、０．５Ｘ酵母エキス、１％塩化ナトリ
ウム、０．４％グリセリンコに接種し、更にインドール
−３−アクリル酸を最終濃度２０μｇ／ｍｌになるよう
に添加したのち、更に３７℃で２４時間培養した．菌体
を遠心分離により採取し１００ｍｌの０．１％リゾチー
ム及び３０ｍＭ塩化ナトリウムを含む５０ｍＭ｝リス塩
酸緩衝液（ｐＨ８． ０）に懸濁させた．氷水中で３０
分間ｎ置したのちドライアイス／エタノール浴での凍結
と３７℃での融解を繰り返して菌体を破壊し、遠心分離
にて菌体残査等を除いた抽出液を得た．この抽出液につ
いて、マウス胸腺細胞を用いるリンパ球活性化作用の活
性を前記試験例２に記載の方法に従って測定した．その
結果、この抽出液の１００倍希釈液（最終希釈倍数）に
おける［３Ｈ］−チミジンの胸腺細胞への取り込み量は
、最大取り込み量の５０％以上の測定値を示した．この
抽出液を前記試験例１及び２に供した． 実施例２ Ｄ２８２ボリペブ ドの，造 前記の一般式 ［Ａ］ ＆− ［Ｂ］ − ［Ｃ］ ｂ− ［Ａ］ ｃ
− ［Ｂ］ − ［Ｃ］ ｄで示されるアミノ酸配列の
式中ａ− ｂ， ｃ及びｄが０であるボリーペブチド（
即ち［Ｂ］ − ［Ｂ］で示されるアミノ酸配列に対応
するポリペプチド二以下、Ｄ２８２ボリペプチドという
）を以下の方法で製造した．式［Ｂ］で示されるポリペ
プチドのアミノ酸配列は前記のとおりである．但し、Ｘ
［Ｂ］中のＸ及びＹは、それぞれＡｓｎ及びＡｓｐで
ある．（１）形質発現プラスミドＰＨＩＤ２Ｂ２の構築
実施例１に記載したＥｃｏ−Ｓａｕ断片に、下記の化学
合成オリゴヌクレオチドアダプター［口］（以下、合成
ＤＮＡ［口］と記す）をＴ４ ＤＮＡリガーゼを用いて
結合させた．合成ＤＮＡ ［ロコとは、下記式［ａｌと
［ｅｌで示される２種類のＤＮＡ断片を、連結させて作
製したＤＮＡアダプターである．ここで得られたＤＮＡ
断片を制限酵素ＥｃｏＲＩで消化処理し、余分に付加さ
れたＤＮＡ断片を切断除去することにより、Ｅｃｏ−Ｓ
ａｕ断片に合成ＤＮＡ［口］が連結され、かつ両端が制
限酵素ＥｃｏＲＩの粘着末端を有するＤＮＡ断片を単離
した．このＤＮＡ断片を， Ｅｃｏ−ＩＬＩ（２Ｂ２）
断片という．別途に、前記Ｅｃｏ−Ｓａｕ断片に、下記
の式［ハ］で示される化学合成オリゴヌクレオチドアダ
プターをＴ４ ＤＮＡリガーゼを用いて結合させた．但
し、式［ハ］の化学合成オリゴヌクレオチド アダプタ
ーとは、下記式［ｆ］、［ｇ］及び［ｈ］で示される３
種類のＤＮＡ断片を、順次結合させて作製したＤＮＡア
ダプターである（以下、合成ＤＮＡ［ハ］と記す）． ５’ −ＡＡＣＴＡＧＴＡＣＧＣＡＡＧＴＴＣＡＣ
［ｆコ３’−
ＴＴＧＡＴＣＡＴＧＣＧＴＴＣＡＡＧＴＧＣＡＴＴ５′
−ＧＴＡＡＡＡＧＧＡＧＧＴＴＴＡＡＡ
［ｇｌ３’−ＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡ
ＴＴＴＡＡＴＡＣ５’−ＴＴＡＴＧＡＧＧＡＴＣＡＴＣ
ＡＡＡＴＡＣＧ ［ｈ］３
’ 一ＴＣＣＴＡＧＴＡＧＴＴＴＡＴＧＣＴＴＡＡ更に
、得られたこの断片に、下記式で示される化学合成オリ
ゴヌクレオチド アダプター［二］をＴ４ ＤＮＡリガ
ーゼを用いて結合させた．この化学合成オリゴヌクレオ
チドアダプター［二］とは、下記式［ａ］と［１Ｆで示
される２種類のＤＮＡ断片を、結合させて作製したＤＮ
Ａアダプターである．５’−ＧＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＡ
ＴＣＡＣＴＧＡＣＴＴＴＣＡＧＡＴ
［ａ］３’−ＧＴＧＧＧＡＧＡＴＡＧＴＧＡＣＴＧＡ
ＡＡＧＴＣＴＡＴＧＡＣ５’ −ＡＣＴＧＴＧＡＴＧＡ
Ｃ
［ｉ］３’ −ＡＣＴＡＣＴＧＡＧＣＴ 得られたＤＮＡ断片をＨｐａ−Ｘｈｏ （１４１）断片
という．別途、参考例に記載の形質発現ブラスミドｐＨ
ＩＰ８３８３ａを制限酵素ＨＲＡＩとＸｈｏＩにて消化
し、α型ヒト インターロイキン１をコードするＤＮＡ
領域を含まずアンピシリン耐性遺伝子を含む大きなＤＮ
Ａ断片を単離した．このＤＮＡ断片をベクター（Ａｍｐ
）断片という．このベクター（Ａｍｐ）断片と上記のＨ
ｐａ−Ｘｈｏ （１４１）断片をＴ４ ＤＮＡリガーゼ
を用いて結合させることにより、１４１残基のアミノ酸
からなるα型ヒトインターロイキン１の欠失体ポリペプ
チド（第４表のアミノ酸番号第１２７〜２６７番目に対
応するポリペプチド）生産用の形質発現プラスミドｐＨ
ｒＤ１４１を構築した．この形質発現プラスミドｐＨＩ
Ｄ１４１を、制限酵素ＥｃｏＲＩにて消化し、該ブラス
ミド中に挿入されている上記欠失体ポリペプチドをコー
ドする領域に一箇所存在する切断認識部位で切断し、直
鎖二本鎖ＤＮＡとした．このＤＮＡ断片を直鎮ｐＨＩＤ
１４１−ＤＮＡ断片という．この直鎖ｐＨｒＤ１４１−
ＤＮＡ断片と先に作製したＥｃｏ−ＩＬＩ （２Ｂ２）
断片をＴ４ ＤＮＡリガーゼを用いて結合させた．尚、
このＥｃｏ−ＩＬＬ （２Ｂ２）断片が正しい方向に挿
入されていることを、実施例１に記載した方法と同様に
、得られたブラスミドを制限酵素｝｛ｐａＩとＸｈｏｒ
にて消化し、Ｄ２８２ボリペプチドをコードする全領域
を含むＤＮＡ断片を単離し、その塩基配列を決定して確
認した．第３図に、Ｄ２８２ボリペプチド生産用の形質
発現プラスミドの構築工程を示す．この形質発現ブラス
ミドをｐＨＩＤ２Ｂ２と名付けた． 更に、実施例１に記載の方法に従って大腸菌ＨＢＩＯＩ
株に導入し形質転換体を作製した．このＤ２８２ボリペ
プチド生産菌を、大腸菌ＨＢ１０１／ｐＨＩＤ２Ｂ２と
名付けた． （２）Ｄ２Ｂ２ポリペプチドの製造 第１項で得た生産菌（大腸菌ＨＢ１０１／ｐ｝］ＩＤ２
８２）を、実施例１に記載の方法に従ってＬＢ培地にて
３７゜Ｃで一夜培養したのち、更に前記実施例１に記載
の栄養培地に１％接種し、インドール−３−アクリル酸
存在下で３７℃で２４時間培養した．菌体を遠心分離に
より採取し１００ｍｌの０．１％リゾチーム及び３０ｍ
Ｍ塩化ナトリウムを含む５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ８． ０）に懸濁させた．氷水中で３０分間静置した
のちドライアイス／エタノール浴での凍結と３７℃での
融解を繰り返して菌体を破壊し、遠心分離にてＤ２８２
ボリペプチドを含む抽出液を得た． ９考例 プラスミドＨＩＰ８３８３ａの 築 ヒトインターロイキン１前駆体ポリペブチドをコードす
るクローン化ｃＤＮＡをヨーロッパ公開特許第０１８８
９２０号に記載の方法に従って単離した．このヒト イ
ンターロイキン１αｃＤＮＡが組み込まれた組み換え体
ブラスミドｐｔ−ｒＬ ４ （Ｆｕｒｕｔａｎｉ，Ｙ．
ら， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， １
３巻， ５８６９頁， １９８５年）から、制限酵素
Ｐｓｔｌによる消化にて、ｃＤＮＡ領域を切り出した．
このクローン化ｃＤＮＡから、制限酵素ＥｃｏＲＩとＢ
ｓｔＮＩにて消化し、第４表に示した塩基配列の第３９
８〜８０８番目までに相当するＤＮＡ断片を単離した．
このＤＮＡ断片に、下記の式［ホ］及び［へ］で示され
る二種類の化学合成オリゴヌクレオチドアダプターをＴ
４ ＤＮＡリガーゼを用いて結合させた．ここで得られ
たＤＮＡ断片を、ＳＤ−ＩＬＩ断片という．但し、式［
ホ］の化学合成オリゴヌクレオチドアダプターとは、下
記式［ｆ］、［ｇｌ及び［ｊｌ〜［１］で示される５種
類のＤＮＡ断片を、順次結合させて作製したＤＮＡアダ
プターである（以下、合成ＤＮＡ［ホ］と記す）． ５’−ＡＡＣＴＡＧＴＡＣＧＣＡＡＧＴＴＣＡＣ
［ｆ］３’−ＴＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣＧＴＴＣＡＡＧＴＧＣＡＴＴ３’−ＡＣＴＣＧＴ
ＴＡＣＡＣＴＴＴＡＴＧＴＴＧＡＡＡＴＡＣＴＣ５’−
ＴＧＡＧＧＡＴＣＡＴＣＡＡＡＴＡＣＧ
［１］３’−ＣＴＡＧＴＡＧＴＴＴＡ
ＴＧＣＴＴＡＡ式［ヘコの化学合成オリゴヌクレオチド
アダプターの塩基配列は、次の通りである．別途に、形
質発現ベクターｐＥＰ３０２ （Ｆｕｒｕｔａｎｉ，
Ｙ．ら， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，
１３巻， ５８６９頁， １９８５年）を、制限酵素力
咀ＩとＢａｍＨＩにて消化し、大腸菌トリブトフアンプ
ロモーター領域部分及びアンビシリン耐性遺伝子を含む
大きなＤＮＡ断片（以下、ベクター断片という）を単離
した．このベクター断片と上記のＳＤ−ＩＬＩ断片を、
Ｔ４ ＤＮＡリガーゼを用いて結合させることにより、
ヒト インターロイキン１ボリペプチド生産用の形質発
現プラスミドｐＨＩＰＨ３８３ａを構築した（第４図参
照）．（以下余白） 第４表 及びアミノ酸配列 ＭｅｔＡ１ａＬｙｓＶａｌＰｒｏＡｓｐＭｅｔＰｈｅＧ
１ｕＡｓｐＡＴＧＧＣＣＡＡＡＧＴＴＣＣＡＧＡＣＡＴ
ＧＴＴＴＧＡＡＧＡＣ （３０）ＬｅｕＬｙｓＡｓｎＣ
ｙｓＴｙｒＳｅ ｒＧ１ｕＡｓｎＧ１ｕＧ１ｕＣＴＧＡ
ＡＧＡＡＣＴＧＴＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＧＡＡＧＡ
Ａ（６０）ＡｓｐＳｅｒＳｅｒＳｅｒｌｌｅＡｓｐＨｉ
ｓＬｅｕｓｅｒＬｅｕＧＡＣＡＧＴＴＣＣＴＣＣＡＴ
ＴＧＡＴＣＡＴＣＴＧＴＣＴＣＴＧ （９０）ＡｓｎＧ
１ｎＬｙｓＳｅｒＰｈｅＴｙｒＨｉｓＶａｌＳｅｒＴｙ
ｒＡＡＴＣＡＧＡＡＡＴＣＣＴＴＣＴＡＴＣＡＴＧＴＡ
ＡＧＣＴＡＴ （１２０）ＧｌｙＰｒｏＬｅｕＨｉ ｓ
Ｇ１ｕＧｌｙｃｙｓＭｅ ｔＡｓｐＧ１ｎＧＧＣＣＣＡ
ＣＴＣＣＡＴＧＡＡＧＧＣＴＧＣＡＴＧＧＡＴＣＡＡ
（１５０）ＳｅｒＶａｌＳｅｒＬｅｕＳｅｒＩ１ｅＳｅ
ｒＧ１ｕＴｈｒＳｅｒＴＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＧＴ
ＡＴＣＴＣＴＧＡＡＡＣＣＴＣＴ （１８０）ＬｙｓＴ
ｈｒＳｅｒＬｙｓＬｓｕＴｈｒＰｈａＬｙｓＧｌｕＳｅ
ｒＡＡＡＡＣＡＴＣＣＡＡＧＣＴＴＡＣＣＴＴＣＡＡＧ
ＧＡＧＡＧＣ （２１０）ＭｅｔＶａｌＶａｌＶａｌＡ
ｌａＴｈｒＡｓｎＧ１ｙＬｙｓＶａｌＡＴＧＧＴＧＧＴ
ＡＧＴＡＧＣＡＡＣＣＡＡＣＧＧＧＡＡＧＧＴＴ （２
４ ０）ＬｅｕＬｙｓＬｙｓＡｒｇＡｒｇＬｅｕＳｅ
ｒＬｅｕｓｅ ｒＧｌｎＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＣＧ
ＧＴＴＧＡＧＴＴＴＡＡＧＣＣＡＡ （２７０）Ｓｅｒ
Ｉ１ｅＴｈｒＡｓｐＡｓｐＡｓｐＬｅｕＧ１ｕＡ１ａＩ
１ｅＴＣＣＡＴＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＧＡＣＣＴＧＧＡ
ＧＧＣＣＡＴＣ（３００）Ａ１ａＡｓｎＡｓｐＳｅｒＧ
１ｕＧ１ｕＧｌｕＩｌｅＩ１ｅＬｙｓＧＣＣＡＡＴＧＡ
ＣＴＣＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＡＴＣＡＴＣＡＡＧ（３３
０）ＰｒｏＡｒｇＳｅｒＳｅｒＰｒｏＰｈｅＳｅｒＰｈ
ａＬｅｕＳｅｒＣＣＴＡＧＧＴＣＡＴＣＡＣＣＴＴＴＴ
ＡＧＣＴＴＣＣＴＧＡＧＣ（３６０）ＡｓｎＶａｌＬｙ
ｓＴｙｒＡｓｎＰｈｅＭｅｔＡｒｇＩ１ｅＩｌｅＡＡＴ
ＧＴＧＡＡＡＴＡＣＡＡＣＴＴＴＡＴＧＡＧＧＡＴＣＡ
ＴＣ（３９０）ＬｙｓＴｙｒＧ１ｕＰｈｅＩ１ｅＬｅｕ
ＡｓｎＡｓｐＡｌａＬｅｕＡＡＡＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡ
ＴＣＣＴＧＡＡＴＧＡＣＧＣＣＣＴＣ（４２０）Ａｓｎ
Ｇ１ｎＳｅｒＩｌｅＩ１ｅＡｒｇＡｌａＡｓｎＡｓｐＧ
１ｎＡＡＴＣＡＡＡＧＴＡＴＡＡＴＴＣＧＡＧＣＣＡＡ
ＴＧＡＴＣＡＧ（４５０）ＴｙｒＬｅｕＴｈｒＡｌａＡ
１ａＡ１ａＬｓｕＨｉｓＡｓｎＬａｕＴＡＣＣＴＣＡＣ
ＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡＴＴＡＣＡＴＡＡＴＣＴＧ（４８
０）ＡｓｐＧ１ｕＡ１ａＶａｌＬｙｓＰｈｅＡｓｐＭｅ
ｔＧ１ｙＡ１ａＧＡＴＧＡＡＧＣＡＧＴＧＡＡＡＴＴＴ
ＧＡＣＡＴＧＧＧＴＧＣＴ（５１０）ＴｙｒＬｙｓＳｅ
ｒＳｅｒＬｙｓＡｓｐＡｓｐＡｌａＬｙｓＩｌｅＴＡＴ
ＡＡＧＴＣＡＴＣＡＡＡＧＧＡＴＧＡＴＧＣＴＡＡＡＡ
ＴＴ（５４０）ＴｈｒＶａｌＩ１ｅＬｅｕＡｒｇｌｌｅ
ＳａｒＬｙｓＴｈｒＧ１ｎＡＣＣＧＴＧＡＴＴＣＴＡＡ
ＧＡＡＴＣＴＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＡ（５７０）Ｌｅｕ
ＴｙｒＶａｌＴｈｒＡ１ａＧ１ｎＡｓｐＧ１ｕＡｓｐＧ
１ｎＴＴＧＴＡＴＧＴＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＴＧＡ
ＡＧＡＣＣＡＡ（６００）ＰｒｏＶａｌＬｅｕＬｅｕＬ
ｙｓＧｌｕＭｅｔＰｒｏＧ１ｕＩｌｅＣＣＡＧＴＧＣＴ
ＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＡＴＧＣＣＴＧＡＧＡＴＡ（６３
０）ＰｒｏＬｙｓＴｈｒＩ１ｅＴｈｒＧｌｙＳｅｒＧ１
ｕＴｈｒＡｓｎＣＣＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＣＡＧＧＴ
ＡＧＴＧＡＧＡＣＣＡＡＣ（６６０）ＬｅｕＬｅｕＰｈ
ｅＰｈｅＴｒｐＧｌｕＴｈｒＨｉ ｓＧ１ｙＴｈｒＣＴ
ＣＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧＧＡＡＡＣＴＣＡＣＧＧＣ
ＡＣＴ（６９０）ＬｙｓＡｓｎＴｙｒＰｈｅＴｈｒＳｅ
ｒＶａｌＡ１ａＨｉｓＰｒｏＡＡＧＡＡＣＴＡＴＴＴＣ
ＡＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＣＣＡＴＣＣＡ（７２０）Ａｓ
ｎＬｅｕＰｈｅ Ｉ １ｅＡ１ａＴｈｒＬｙｓＧ１ｎＡ
ｓｐＴｙｒＡＡＣＴＴＧＴＴＴＡＴＴＧＣＣＡＣＡＡＡ
ＧＣＡＡＧＡＣＴＡＣ（７５０）ＴｒｐＶａｌＣｙｓＬ
ｅｕＡ１ａＧ１ｙＧ１ｙＰｒｏＰｒｏＳｅｒＴＧＧＧＴ
ＧＴＧＣＴＴＧＧＣＡＧＧＧＧＧＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴ
（７８０）ｒｌｅＴｈｒＡｓｐＰｈｅＧｌｎＩ１ｅＬｅ
ｕＧｌｕＡｓｎＧ１ｎＡＴＣＡＣＴＧＡＣＴＴＴＣＡＧ
ＡＴＡＣＴＧＧＡＡＡＡＣＣＡＧ（８１０）Ａ１ａ＊＊
＊ ＧＣＧＴＡＧ 数字は、アミノ酸番号を示す． 括弧内の数字は、塩基番号を示す． 零零零は、翻訳終止コドンを意味する．（以下余白）
第１図は、二量体ポリペプチドのＳＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動による各分画のリンパ球活性化作用
の活性を示す． 第２図は、形質発現プラスミドｐ｝｛ＩＰＤ２の構築工
程を示す．図中の合成ＤＮＡ ［イ］は、実施例１に記
載した化学合成オリゴヌクレオチドアダプター［イコで
ある． 第３図は、形質発現プラスミドｐＨＩＤ２Ｂ２の構築工
程を示す．図中の合成ＤＮＡ［口］、［ハ］及び［ニコ
は、それぞれ実施例２に記載した化学合成オリゴヌクレ
オチドアダプター［ロコ、［ハ］及び［二］である． 第４図は、形質発現プラスミドｐＨＩＰＨ３８３ａの構
築工程を示す．図中の合成ＤＮＡ ［ホ］及び［へ］は
、参考例に記載した化学合成オリゴヌクレオチドアダプ
ター［ホ］及び［へ］である．特許出願人 大日本製薬
株式会社
アミドゲル電気泳動による各分画のリンパ球活性化作用
の活性を示す． 第２図は、形質発現プラスミドｐ｝｛ＩＰＤ２の構築工
程を示す．図中の合成ＤＮＡ ［イ］は、実施例１に記
載した化学合成オリゴヌクレオチドアダプター［イコで
ある． 第３図は、形質発現プラスミドｐＨＩＤ２Ｂ２の構築工
程を示す．図中の合成ＤＮＡ［口］、［ハ］及び［ニコ
は、それぞれ実施例２に記載した化学合成オリゴヌクレ
オチドアダプター［ロコ、［ハ］及び［二］である． 第４図は、形質発現プラスミドｐＨＩＰＨ３８３ａの構
築工程を示す．図中の合成ＤＮＡ ［ホ］及び［へ］は
、参考例に記載した化学合成オリゴヌクレオチドアダプ
ター［ホ］及び［へ］である．特許出願人 大日本製薬
株式会社
Claims (4)
- （１）下記の一般式で示されるアミノ酸配列を有するポ
リペプチド。 ［Ａ］ａ−［Ｂ］−［Ｃ］ｂ−［Ａ］ｃ−［Ｂ］−［Ｃ
］ｄ 但し、上記式中ａ、ｂ、ｃ及びｄは０又は１の整数を意
味し、 式［Ａ］、［Ｂ］及び［Ｃ］で示されるペプチドのアミ
ノ酸配列は、以下に示すとおりである。 式［Ａ］のアミノ酸配列： 【遺伝子配列があります】［Ａ］ 但し、式［Ａ］中のＷは、Ｓｅｒ又はＡｌａを意味する
。 式［Ｂ］のアミノ酸配列： 【遺伝子配列があります】［Ｂ］ 但し、式［Ｂ］中のＸは、Ａｓｎ又はＡｓｐを意味し、
ＹはＡｓｐ又はＴｙｒを意味する。 式［Ｃ］のアミノ酸配列： 【遺伝子配列があります】［Ｃ］ - （２）下記式［ I ］で示されるアミノ酸配列を有する
ポリペプチド。 【遺伝子配列があります】 【遺伝子配列があります】 【遺伝子配列があります】［ I ］ - （３）特許請求の範囲第１項又は第２項に記載のポリペ
プチドをコードするＤＮＡ。 - （４）特許請求の範囲第３項記載のＤＮＡを組み込んだ
ベクターにより形質転換された細胞を培養することを特
徴とする特許請求の範囲第１項又は第２項記載のポリペ
プチドの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3913488A JPH029899A (ja) | 1988-02-22 | 1988-02-22 | 新規ポリペプチド及びそれをコードするｄｎａ並びにそれらの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3913488A JPH029899A (ja) | 1988-02-22 | 1988-02-22 | 新規ポリペプチド及びそれをコードするｄｎａ並びにそれらの製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH029899A true JPH029899A (ja) | 1990-01-12 |
Family
ID=12544633
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3913488A Pending JPH029899A (ja) | 1988-02-22 | 1988-02-22 | 新規ポリペプチド及びそれをコードするｄｎａ並びにそれらの製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH029899A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5756675A (en) * | 1988-07-29 | 1998-05-26 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | IL-1α derivatives |
-
1988
- 1988-02-22 JP JP3913488A patent/JPH029899A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5756675A (en) * | 1988-07-29 | 1998-05-26 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | IL-1α derivatives |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3014007B2 (ja) | 組み換えヒト・インターロイキン―１インヒビターの生産 | |
| AU592196B2 (en) | Novel human TNF polypeptide mutants and DNAs encoding said mutants | |
| KR0139629B1 (ko) | 미니-프로인슐린, 이의 제조방법 및 용도 | |
| JPS60115528A (ja) | ヒトインタ―ロイキン―２蛋白質を含有する抗腫瘍用または免疫機能低下疾患治療用組成物 | |
| JPH06505631A (ja) | 巨核球刺激因子 | |
| EA005496B1 (ru) | Растворимый гетеродимерный рецептор цитокина | |
| JP2002504494A (ja) | マウス及びヒトエンドスタチンの生産方法 | |
| EP2995626A1 (en) | Fusion protein having dual-functions for inhibiting angiogenesis in tumour microenvironment and activating adaptive immune response and gene and use thereof | |
| JPH10262686A (ja) | ポリペプチド | |
| JP3011274B2 (ja) | 組み換え技術により産生した、３−デス−ヒドロキシ−シスタチンｃポリペプチドまたはその修飾物 | |
| WO1997017988A1 (en) | Type ix collagen and chimeras | |
| US20040009950A1 (en) | Secreted human proteins | |
| JPH029899A (ja) | 新規ポリペプチド及びそれをコードするｄｎａ並びにそれらの製法 | |
| JPH07502652A (ja) | シグナルペプチドを有さないスタフィロキナーゼの発現 | |
| JP2698976B2 (ja) | 新規ポリペプチド及びそれをコードするｄｎａ | |
| JPS6024187A (ja) | 改良プラスミドベクタ−およびその利用 | |
| JPH04500156A (ja) | 活性型ヒト好中球走化因子ポリペプチドの製造方法 | |
| JP2515975B2 (ja) | 抗腫瘍作用を有するポリペプチド | |
| JPH0649656B2 (ja) | 血小板減少症治療剤 | |
| JPH02485A (ja) | 新規なヒトインターロイキン４、該因子を発現させるための組換えベクター及びそのベクターにより形質転換された形質転換体 | |
| KR970001684B1 (ko) | 트롬빈 결합성 물질 및 그의 제조방법 | |
| JPH07119237B2 (ja) | ヒルジン変異体，その製造法及び抗凝血剤 | |
| JP3534434B2 (ja) | トロンボモジュリン類発現用シグナルペプチド | |
| JPS62201581A (ja) | 新規プラスミド、微生物細胞及びヒト免疫グロブリンＧ Ｆｃ領域蛋白質の製造方法 | |
| JPH0817712B2 (ja) | 新規ヒトｔｎｆポリペプチド変異体 |