JPH0273801A - 選択的にｏ―アシル化されたグリコサミノグリカン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は選択的に０−アシル化されたグリコサミノグリ
カン、それらの製造方法、それらを含有する薬剤組成物
及び治療におけるその使用に係る。

「グリコサミノグリカンＪなる用語は、ウロン酸（Ｄ−
グルクロン酸またはＬ−イズロン＃）とアミノ糖との連
鎖から構成され該アミノ糖がグルコサミンまたはガラク
トサミンから成る物質を意味する。

天然起源のグリコサミノグリカンは、１→４または１→
３結合によって結合されたウロン酸サブユニット（グル
クロン酸丈たはイズロン酸）とアミノ糖サブユニット（
グルコサミンまたはガラクトサミン）とによって形成さ
れた三糖ユニット連鎖の多少とも均質な混合物から構成
されている。

グリコサミノグリカンにおいて、ヒドロキシル基は種々
の官能基、特に硫酸基によって置換されており、アミノ
糖のアミノ基は［１１０基及び／またはアセチル基によ
って置換されている。

本発明で考察するグリコサミノグリカンは６種類の物質
、即ち、ヘパリン、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸
Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ１特別にデルマタン硫酸と呼
ばれるコンドロイチン硫酸Ｂ、及びヒアルロン酸を含む
、これらの特徴は、以下の式（＾）及び（Ｂ）で示され
る２つの三糖基本構造、即ち、基本構造（八） 〔式中、Ｒは５Ｏ１−基及び／またはアセチル基を示し
、記号）はカルボキシル基が環平面の下方（イズロン酸
ユニット）または環平面の上方（グルクロン酸ユニット
）に存在することを示す〕を有するか、または、基本構
造（Ｂ） を有することである。

上記の基本構造（＾）をもつグリコサミノグリカンは、
ヘパリン型グリコサミノグリカン（まなはＧＡＧ）と指
称され、ヘパリン及びヘパラン硫酸を包含し、上記の基
本構造（Ｂ）をもつグリコサミノグリカンは、コンドロ
イチン硫酸型ＧＡＧと指称され、コンドロイチン硫酸Ａ
及びＣ並びにデルマタン硫酸を包含する。

ヒアルロン酸は、基本構造（Ｂ）においてガラクトサミ
ンがグルコサミンによって置換された構造を有する。

上記のごとく、ヘパリン型ＧＡＧにおいてもコンドロイ
チン硫酸型ＧＡＧにおいても、ｎ個の三糖ユニットの多
少とも高い割合のヒドロキシル基が硫酸エステルの形態
で存在する。

従ってヘパリンは、上記基本構造（＾）においてｎカ月
〜８０の変数であり、ｎ個のユニットのうちの多数のユ
ニットにおいてＲが５Ｏ１−であり残りのユニットにお
いてＲがアセチル基であり、グルコサミンの６位のＯＨ
基及びウロン酸の２位のＯＨ基が多数の種において硫酸
化され、グルコサミンの３位のＯＨ基は少数の種だけに
おいて硫酸化され、ウロン酸の３位のＯＨが実質的に非
硫酸化であり、該ウロン酸が多数の種においてイズロン
酸であるような構造を有する。

基本構造（＾）を有する物質はまた、Ｎａｇａｓａｗａ
　Ｋｌｉ　Ｔｎｏｕｅ　Ｙ、、Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　
Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。

＾ｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、１９８０、ｖｏｌ、　
８、ｐｐ、２９１〜２９４に記載のごとく調製され得る
Ｎ−アセチル化Ｎ−説硫酸ヘバリンを含む、このヘパリ
ンは、式（＾）において式中のＲがアセチル基を示す構
造を有する。

ヘパリンはまた、構造（＾）においてｎが３〜１５の変
数であり且つ同じ化学的プロフィルをもつ構造を有する
種を含む、これらの種は、公知方法（例えば米国特許第
４，６９２，４３５号）による分別（ｆｒａｃ−ｔｉｏ
ｎｎｅｍｅｎｔ）によって単離され、低分子量（ｂ、ｐ
、ｍ）ヘパリンと指称される。

分別によって得られた低分子量ヘパリンと本質的に等し
い分子分布及び生物特性を有する低分子量ヘパリンは、
以下の方法でヘパリンをフラグメントに分割することに
よって調製された。

Ｎ−硫酸グルコサミンサブユニットを攻撃することによ
って分子を切断して６位の第一ヒドロキシルに任意に硫
酸化された２、５−アンヒドロマンニトール末端 Ｃ）１２０８ を与える亜硝酸解重合及び還元方法（例えば欧州特許第
３７，３１９号または米国特許第４，６８６，２８８号
）＃−ウロン酸サブユニットを攻撃することによって分
子を切断して任意に２−硫酸化された不飽和α−βウロ
ン酸末端 ＯＨ を与える酵素解重合方法（例えば欧州特許第２４４゜２
３５号及び第２４４，２３６号）またはアルカリ性解重
合方法（例えば欧州特許第４０，１４４号）。

−「天然Ｊ末端を維持した状態で酸化によって分子を切
断する酸化性解重合方法（例えば米国特許第４２８１，
１０８号及び欧州特許第１２１，０６７号）。

天然ヘパリンとは異なる分子分布と特定の生物特性とを
有する別の低分子量ヘパリンは、天然ヘパリンを過ヨウ
素酸酸化し次いでβ脱離または酸加水分解による解重合
を行なうことによって調製できる。過ヨウ素酸酸化は２
位及び３位の炭素間で非硫酸化ウロン酸基本単位を切断
する。かかる基本単位は、種々の血液凝固セリン−プロ
テアーゼの血漿阻害因子たるアンチトロンビン■（＾Ｔ
ｌ）との結合部位に存在し、アンチトロンビン■の活性
は補因子として作用するヘパリンによって顕著に促進さ
れる。従って過ヨウ素酸酸化によって＾Ｔｉ１ｌとの結
合部位が欠失した物質、即ち抗血液凝固活性を実質的に
喪失した物質が生じる。

この種の低分子量ヘパリンは特に以下の段階を含む方法
によって得られる。

最終濃度０．５〜５％（ｗ／ν）のヘパリン水溶液と最
終濃度０．５〜１％（ＩＩｌ／ｖ）の過ヨウ素酸の塩と
を、光を遮断して、　ｐ）１４．５〜６．５、好ましく
はｐｌ（５、温度０〜１０℃で約１５〜４８時間反応さ
せることによってヘパリンを調節酸化する、 得られたヘパリン鎖に炭酸ナトリウム（ｓｏｕｄｅ）の
ごとき強塩基を添加し、ｐＨ約１１以上、特に１１〜１
２の間、好ましくは１１．２〜１１．６、特に約１１．
５で鎖を解重合する、 還元剤を用いて解重合フラグメントを還元し、必要な場
合未反応還元剤を除去する、 次いで、ヘパリンフラグメントを溶解させない溶媒を用
いて沈降させ、還元されたヘパリンフラグメントを回収
する、 一先に単離された沈降物を水に再溶解し形成された沈降
物を回収することによって得られた水溶液を無機塩の存
在下にアルコールを用いて分別し所望フラグメントを単
離する。

これらの低分子量ヘパリンは、次式（Ｃ）＝４７ 〔式中、■は６〜１５の変数、ｎ個のユニットの約９０
％以上においてＲは８０２−基、残りのユニットにおい
てＲはアセチル基、グルコサミンの３位のＯＲ基は硫酸
化され、グルコサミンの６位のＯＨ基は７０％の種にお
いて硫酸化されている〕で示される。更に、少なくとも
２つのこの低分子量ヘパリン鎖に対して１つの割合のイ
ズロン酸基本単位が、式で示される２位の炭素と３位の
炭素との間で開いた非硫酸化ウロン酸（Ｄ−グルクロン
酸またはＬ−イズロン酸）基本単位で置換されている。

かかる低分子量ヘパリンは、＾Ｔｌ１ｒ結合部位の欠失
した均質な分子量のフラグメント混合物を得るために、
公知技術を用いゲル濾過によって更に分別され得る。

ヘパリン型のその他のグリコサミノグリカンは、式（＾
）または（Ｃ）において、式中のウロン酸に保有された
カルボキシル官能基が、例えばフランス特許第２，１５
９，７２４号に記載のごとくカルボジイミド型の縮合剤
の存在下にアルコール縮合によってエステル化されるか
または弱塩基の存在下にハロゲン化アルキルによるカル
ボキシルのアルキル化によってエステル化された構造の
ＧＡＧから構成されている。

同様に、コンドロイチン硫酸型のグリコサミノグリカン
は、式（Ｂ）において、式中のウロン酸のカルボキシル
官能基が、例えば弱塩基の存在下にハロゲン化アルキル
によるカルボキシルのアルキル化によってエステル化さ
れた構造のグリコサミノグリカンから成る。

ヒアルロン酸に対するかかるエステルの製造は欧州特許
第２１５，４５３号に記載されており、第四アンモニウ
ム塩の形態のヒアルロン酸を触媒の存在下にアルコール
によって処理するかまたはエステル化剤によって処理す
る。

ヘパラン硫酸は前出の式（＾）において、式中のｎが１
〜８０の変数、多数の種においてＲがアセチル基であり
少数の種において８０３−であるような構造によって示
される。また、大多数の種においてグルコサミンの６位
の０■基が硫酸化されており、多数の種においてウロン
酸はグルクロン酸である。

コンドロイチン硫酸Ａ及びＣは前出の式（Ｂ）において
、式中のｎが１〜８０の変数、グルコサミンの４−ＯＨ
基及び６−ＯＨ基が夫々硫酸化された構造によって示さ
れる。多数の種においてウロン酸はグルクロン酸である
。

デルマタン［１はコンドロイチン硫酸Ａと実質的に等し
い構造を有するが多数の種においてウロン酸サブユニッ
トがイズロン酸である。

前記式（Ｂ）において式中のｎが１〜２０の変数である
構造で示されるデルマタン硫酸のフラグメントは、ＦＲ
ＡＮＳＳＯＮ　Ｌ、＾、　＆　ＣＡＲＬＳＴＥＤＴ　１
．、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ　。

Ｒｅｓ　、、３６（１９７４）、３４９〜３５８に記載
のごとく、過ヨウ素酸酸化を行ない次いでホウ水素化ナ
トリウムによる還元と酸加水分解とを行なう処理によっ
て得られる。

グリコサミノグリカンは多くの生物活性を有する。特に
種々の血漿タンパク質を介して作用する血液凝固因子に
対する活性が重要である。ヘパリンに関する文献からは
、ヘパリンまたはいくつかのヘパリン誘導体は、抗血液
凝固活性の有無にかかわらず、血管壁の平滑筋細胞の増
殖を調節する活性を有すること（ＧＵＹＴＯＮ等、Ｃ１
ｒｃ、　Ｒｅｓ、、　４６（１９８０）、６２５〜６３
４）、また転移性播種メカニズムに関与する酵素たるヘ
バラナーゼの阻害活性を有すること（欧州特許出願第２
５４，０６７号）が知られている。更に、グリコサミノ
グリカンは広義の硫酸化多糖類のグループに所属し、そ
のいくつかは多少の程度の抗ウィルス活性（ＢＡＢ＾等
、＾ｌｊｉＩ６ｉｃｒｏｂＡｇｅｎＬｓＣｈｅ論ｏｔｈ
ｅｒ、３２（１９８８）、３３７〜３３９）、特に抗＋
１１Ｖ（ヒト免疫不全ウィルス）活性（ＢＡ［ｌ八等、
Ｐｒｏｃ　。

Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、、８５（１９８８）、
６１３２〜６１３６）を示した。

本文中の以下の記載においてＧＡＧなる用語は、抽出、
半合成もしくは合成によって得られるような天然構造の
グリコサミノグリカン、またはアシル化反応によって選
択的に０−アシル化されたＧＡＧを得る前にカルボキシ
ル官能基またはアミノ官能基が化学的に修飾された構造
のグリコサミノグリカンを意味する。

これらのＧＡＧの薬理学的活性は極めて重要であるが、
天然のＧＡＧは半減期が比較的短いので反復投与を要す
るという欠点をもつ。この欠点は、血管血栓症の予防及
び治療にヘパリンの低分子量誘導体を皮下注射し投与頻
度を毎日１回の注射に減らすことによって成る程度緩和
される。

しかしながら、持続作用を有する誘導体を調製し、これ
によって物質の作用持続時間を延長し同時に投与頻度を
減らすことができれば極めて有利であろう。

また、Ｎ−アセチル化Ｎ−説硫酸化ヘバリン誘導体のご
とき抗血液凝固性のない持続性誘導体も重要である。こ
の誘導体は前述したように、転移性播種現象に関与する
酵素ヘバラナーゼの阻害活性を有する。

薬物動態学的改良を得るように変性されたグリコサミノ
グリカン誘導体、特にウロン酸のカルボキシル官能基ま
たはヒドロキシル官能基のエステルが文献に多数記載さ
れている。

特に、任意に縮合剤の存在下にアルコールまたはハロゲ
ン化誘導体によって不活性溶媒中で第四アンモニウム塩
の形態で処理されたヘパリンのカルボキシル官能基の部
分エステル化または完全エステル化が利用されている（
フランス特許第２．１５９７２４号及び欧州特許第４４
　、２２８号）、また、触媒の存在下のアルコールによ
るエステル化またはエステル化剤との反応によって得ら
れたヒアルロン酸誘導体も文献に記載されている（欧州
特許第２１６，４５３号）。

更に、ＧＡＧの第−及び第二のヒドロキシル官能基をエ
ステル化するための種々の手段が文献に記載されている
。

刊行物Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｒｅｓ、２５Ｂ（１９４７）、
４７２〜４７６は、４つの糖ユニットあたり１モルのア
セチル基に対応するヘパリンのアセチル誘導体を記載し
ている。

生成物はアセトン中でヘパリンにケテンを作用させて調
製される。この刊行物では、得られる物質が０−アセチ
ル化誘導体であると明記しているが、カルボキシル基の
存在下ではケテンが無水物を与えることは公知である（
Ｊ、　Ｍａｒｃｈ、＾ｄｖａｎｃｅｄ　０ｒＨａｎｉｃ
　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、　Ｍｅｃ
ｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｊ、　Ｗ
ｉｌｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ　Ｅｄｓ、　１９８５、
ｐｐ。

６８６〜６８７　：　ｒカルボン酸はケテンと共に無水
物を生成し、酢酸無水物はこの方法で工業的に製造され
る（１４ｉｔｈ　ｋｅｔｅｎｅｓ、　ｃａｒｂｏｘｙｌ
ｉｃ　ａｃｉｄｓ　ｇｉｖｅ　ａｎｈｙ−ｄｒｉｄｅｓ
　ａｎｄ　ａｃｅｔｉｃ　ａｎｈｙｄｒｉｄｅ　ｉｓ　
ｐｒｅｐａｒｅｄ　１ｎ−ｄｕｓｔｒｉａｌｌｙ　ｉｎ
　ｔｈｉｓ　ｍａｎｎｅｒ）。

Ｃ１１，＝Ｃ＝Ｏ＋ＣＩＩ、−ＣＯＯＩＩ→ＣＨ，−Ｃ
＝　０（１−ＣＯＣＨ，”）。

従ってこの刊行物は実際には、ウロン酸のＣ０〇−基と
ケテンに由来のアセチル基との間で混合無水物に結合し
た０−アセチル基を含むヘパリンを記載している。従っ
てこの物質が水に不安定であることも明らかであろう。

フランス特許第２，１００，７３５号は、ヘパリンと無
毒性の有８１Ｍ、特に４−クロロフェノキシイソ酪酸、
４−クロロフェノキシ酢酸、コリン酸、ニコチン酸、ピ
リジル酢酸、Ｎ−オキシ−ピリジル酢酸またはリルイン
酸との加水分解可能な部分エステルを記載している。該
特許に記載の製造方法の特徴は、ヘパリンの第四塩とカ
ルボジイミドによって活性化された酸とを反応させ、０
−アシル誘導体だけでなく０−アシルイソ尿素エステル
誘導体の形態の安定な副生物が多量に生じることである
。更に、この種の反応は無水物を有利に生成し、酸官能
基とヘパリンのヒドロキシル官能基との間の分子間反応
が生じ易い。

日本特許第７４１０４８５３３号は、コンドロイチン硫
酸と持続的活性を有する置換または未置換の芳香族、ア
リール脂肪族または複素環酸との０−エステル誘導体を
記載している。該特許に記載の製造力法の特徴は、コン
ドロイチン硫酸と酸塩化物とを反応させ二次反応として
Ｎ−アシル化を生じさせることである。

一〇特許第８３７００１５０号は、ＣＡＧの種々の官能
基特にヒドロキシルを使用して調製された医薬のプレド
ラッグ（ｐｒｏｄｒｏｇｕｅｓ）全般、特にコンドロイ
チン硫酸とペニシリンＶとの０−エステルを記載してい
る。この物質の調製はカルボジイミドを介して行なわれ
、従って前記の二次反応を含む。

欧州特許第４６ｔ、８２８号は、ヘパリンと生物医薬材
料にグラフト重合されて長時間のアンチトロンビン活性
を与える不飽和酸特にアクリル酸またはメタクリル酸と
の０−エステルを記載している。このグラフト重合は、
血液と接触する前記材料の表面と該エステルとのα−β
不飽和結合の処で共有結合によって行なわれる。該特許
によれば、α−β不飽和の０−エステルは、ヘパリンと
α−β不飽和カルボン酸の塩化物または無水物との反応
によつて調製される。また該特許の記載では、反応体と
してα−β不飽和酸の塩化物または無水物を無差別に使
用しており、その結果得られたヘパリンの０−エステル
の型に関しては明記されていない。

欧州特許第２５６，８８０号は、トランスメンブラン透
過性の高い誘導体を得るために、ホルムアミド及びピリ
ジン中で酸塩化物と反応させて行なうヘパリンまたは低
分子量ヘパリンのエステル化を記載している。この方法
で得られる誘導体は部分膜フランス特許３，０６６８は
ホルムアミド及びとリジン中の無水酢酸の作用によるＮ
−モノメチルへパリナミドのアセチル化を記載している
。出発物質は、アミド基によって置換されたカルボキシ
ル官能基を含むヘパリン誘導体である。

アセチル化に使用される方法は、有機媒体に可溶な塩を
使用しない。このため、アセチル化反応は正確にコント
ロールできないのでアセチル化効率が極めてよくない。

更に、遮断されていないカルボキシル官能基を有するヘ
パリンに該方法を使用すると、ヘパリンのカルボキシル
基と酢酸無水物との間で多量の混合無水物が形成され、
不要なこの副生物が媒体から除去されない。

日本特許第５１２８６０２号は、ホルムアミド中の酸無
水物の作用によるヘパリンのアシル化を記載している。

使用された方法において、ヘパリンは有機媒体に可溶な
塩の形態でない。従ってアシル化反応を正確にコントロ
ールできないのでアセチル化効率が低い、更に、記載の
方法では媒体中に反応副生物たる混合無水物が存在する
。

上記のごとき現状に鑑み、十分な再現性をもつ方法によ
って十分に特定された生成物を得ることが重要である。

さて、第３又は第４アンモニウム塩のように有機溶媒に
可溶性のＣＡＧの塩を非プロトン性極性有機溶媒中で無
水カルボン酸と反応させることにより、使用されるＧＡ
Ｃのカルボキシル又はアミノ官能基を変えずに遊離ヒド
ロキシルを選択的にアシル化できることが知見された。

ＧＡＧを有機溶媒に可溶性の塩の形態で使用すると、ア
シル化反応を高精度で制御できるという利点がある。更
に、アシル化率は容易に変調可能であり、残りの分子を
変化させずにアシル化率を増加することができる。

具体的には、二糖単位当たり０．１〜３個のアシル基、
特に０．５〜２個のアシル基に相当するアシル化率を得
ることができる。

また、他のＮ−アシル化誘導体は形成されず、カルボキ
シル官能基のレベルに無水物が形成される場合に弱塩基
を使用すると、無水物を容易に遊離酸に再変換できるこ
とも知見された。

有利なことに、本発明の方法によるＣＡＧの選択的アシ
ル化は、生物学的活性を場合によっては非常に高度に変
調することができる。

最後に、こうして得られた０−アシル化ＧＡＧは従来よ
りも長時間の薬理活性を有することが知見されな。

従って、本発明の一目的は、次式■： （式中、Ｇは式： ０に で表される（ａｏ）基、又は式： で表される（ｄ）基、又は過ヨウ素酸酸化とそれに続く
β脱離もしくは酸性加水分解後に存在するような（ｃ）
基もしくは（ｄ）基の残基を表し、＾はＲ＋基、Ｒ，−
（ｃ）基、Ｒ，−（ｄ）基、式：で表される（ｂ）基を
表し、Ｕは式： で表される（ｅ）基、式： で表される（ｅ）基、又は過ヨウ素酸酸化とそれに続く
β脱離もしくは酸性加水分解後に存在するような（ｃ）
基もしくは（ｄ）基の残基を表し、Ｂは０−Ｒ基、（ａ
）−ＯＲ，基、（ａ’　）−ＯＲ，基、（ｂ）−ＯＲ，
基、式：で表される（ｆ）基、式： で表される（ｇ）基、又は過ヨウ素酸酸化とそれに続く
β脱離もしくは酸性加水分解後に存在するような（ｃ）
基もしくは（ｄ）基の残基がまだ結合している（ａ）基
、（ａｏ）基もしくは（ｂ）基を表し、Ｒ１はＨｌＳＯ
ｌ−又はアシルを表し、アシルは、・炭素原子数１〜１
８のアルカノイル基、炭素原子数３〜７のシクロアルキ
ル基、−場合によって１又は複数の、炭素原子数１〜１
４のアルキル基、ハロゲン原子、Ｎｏ２基、もしくはｏ
ｃｎ、基により置換されたフェニル基、炭素原子数４〜
１６の脂肪族不飽和炭化水素基により置換された炭素原
子数２〜３のアルカノイル基、 ・場合によって１又は複数の、炭素原子数１〜４のアル
キル基、ハロゲン原子、ＮＯ２基もしくは０ＣＩ（。

基により置換されたベンゾイル基、 ・シクロアルキル（３−７Ｃ）カルボニル基から選択さ
れる非α−β不飽和カルボン酸又はジカルボン酸の残基
であり、Ｒ２はＳＯココ−び／又はアセチル基を表し、
但しＲ１がアセチル基を表すとき、Ｎ−アセチルグルコ
サミンの割合はヘパリンの割合以下であり、Ｒコは水素
原子、炭素原子数１〜１０、好ましくは炭素原子数１〜
４のアルキル基、炭素原子数７〜１２のフェニルアルキ
ル基、又はアルカリもしくはアルカリ土類金属カチオン
を表し、ｎは１〜８０の整数であり、Ｒ１がアシルのと
き、その割合は二糖単位当たり少なくとも０．１〜３、
好ましくは０．５〜２個のアシル基に相当する）に対応
する選択的に０−アシル化されたグリコサミノグリカン
、及び医薬上許容可能なそれらの塩を提供することであ
る。

本発明の好適態様において、選択されるグリコサミノグ
リカンはヘパリン型のグリコサミノグリカンであり、例
えばヘパリン、分別、半合成又は合成により得られるヘ
パリン誘導体、ヘパラン硫酸、及び分別、半合成又は合
成により得られるヘパラン硫酸誘導体である。

本発明の選択的に０−アシル化されたこの型のグリコサ
ミノグリカンは、次式■： （式中、＾は式（１）で定義した意味を有し、Ｒ１はＨ
及び／又はＳＯ３−及び／又は式（１）で定義したよう
なアシル基を表し、Ｒ２はＳＯ３−及び／又はアセチル
基を表し、但しＲ１がアセデル基を表すとき、ドアセチ
ルグルコサミンの割合はヘパリンの割合以下であり、Ｒ
３は水素原子、炭素原子数１〜１０、好ましくは炭素原
子数１〜４のアルキル基、炭素原子数７〜１２の置換ア
ルキル基、又はアルカリもしくはアルカリ土類金属カチ
オンを表し、Ｂは（ａ）−ＯＲ，基、（ｆ）基（但しく
ａ）及び（ｆ）は式（＋）で定義した意味を有する）、
ＯＲ，基、又は過ヨウ素酸酸化とそれに続くβ脱離もし
くは酸性加水分解後に存在するよう〜６７ な（ｃ）基もしくは（ｄ）基の残基がまだ結合している
（ａ）基を表し、■は１〜８０の整数である）に対応す
る。

本発明の化合物の好適類Ｈａは式ＩＴ：（ｆ）基（但し
く、）及び＜ｎは式（１）で定義した意味を有する）、
ＯＲ，基、又は過ヨウ素酸酸化とそれに続くβ脱離もし
くは酸性加水分解後に存在するような（ｃ）基もしくは
（ｄ）基の残基がまだ結合している（ａ）基を表し、ｎ
は１〜８０の整数であり、但し＾が８１、Ｒ，−（ｃ）
基又はＲ，−（ｄ）基を表し且つＢがＯ−Ｒ，基を表す
とき、ｎは１〜１６の整数である）の化合物である。

本発明の化合物の別の好適類ｎｂは式■：（式中、＾は
式（１）で定義した意味を有し、Ｒ１はＩ！及び／又は
５Ｏ１−及び／又は式（１）で定義したようなアシル基
を表し、Ｒ２はＳＯ３−及び／又はアセチル基を表し、
但しＲ１がアセチル基を表すとき、Ｎ−アセチルグルコ
サミンの割合はヘパリンの割合以下であり、Ｒコは水素
原子、炭素原子数１〜１０、好まアルカリ土類金属カチ
オンを表し、Ｂは（ａ）−ＯＲ，基、（式中、＾は式Ｉ
で定義した意味を有し、Ｒ１はＨ及び／又は５Ｏｆｆ−
及び／又はアシルを表し、アシルは、炭素原子数４〜１
８のアルカノイル基、・−炭素原子数３〜７のシクロア
ルキル基、−場合によって１又は複数の、炭素原子数１
〜１４のアルキル基、ハロゲン原子、Ｎ０２基もしくは
ＯＣＲ，基により置換されたフェニル基、炭素原子数４
〜１６の脂肪族不飽和炭化水素基により置換された炭素
原子数２又は３のアルカノイル基、 ・場合によって１又は複数の、炭素原子数１〜４のアル
キル基、ハロゲン原子、Ｎｏ２基もしくは０ＣＨｚ基に
より置換されたベンゾイル基、 ・シクロアルキル＜３−７Ｃ）カルボニル基から選択さ
れる非α−β不飽和カルボン酸又はジカルボン酸の残基
であり、Ｒ２は５Ｏ１−及び／又はアセチル基を表し、
但しＲ３がアセチル基を表すとき、Ｎ−アセチルグルコ
サミンの割合はヘパリンの割合以下であり、Ｒ３は水素
原子、炭素原子数１〜１０、好ましくは炭素原子数１〜
４のアルキル基、炭素原子数７〜１２のフェニルアルキ
ル基、又はアルカリもしくはアルカリ土類金属カチオン
を表し、■は１〜８０の整数であり、Ｒ１がアシルのと
き、その割合は二糖単位当たり少なくとも０．５〜２個
のアシル基、好ましくは１個のアシル基に相当する）の
化合物に対応する。

本発明の有利な化合物は、Ｒ１が水素原子又はアルカリ
もしくはアルカリ土類金属カチオンを表すような（Ｉｌ
ａ）及び（ＩＩｂ）類に属する化合物である。

有利な化合物の他の群は、Ｒ３が炭素原子数１〜な（Ｕ
　ａ）及び（Ｉｌｂ）類に属する化合物に対応する。

本発明の好適態様によると、１ｏｏｏｏダルトン未満の
分子量を有するヘパリンフラグメントの混合物、特に２
０００〜７０００ダルトンの平均分子量を有するヘパリ
ンフラグメントの混合物、約４５００ダルトンの平均分
子量を有するヘパリンフラグメントの混合物、更には約
２５００ダルトンの平均分子量を有するヘパリンフラグ
メントの混合物を使用する。

これらの混合物を得るためには、例えばヨーロッパ特許
第３７３１９号に記載されているような亜硝酸解重合法
を使用すると有利である０本発明の選択的に０−アシル
化されたグリコサミノグリカンは、次式■・ （式中、＾は式（【）で定義したようにＲ，基、Ｒ，−
（ｃ）基又はＲ１−（ｄ）基を表し、Ｒ，はＨｌ及び／
又はＳＯ２及び／又は式（１）で定義したようなアシル
基を表し、Ｒ２は一５Ｏ５−１及び／又はアセチル基を
表し、但しＲ，がアセチル基を表すとき、Ｎ〜ルアセチ
ルグルコサミン割合はヘパリンの割合以下であり、Ｒ１
は水素原子、及び／又は炭素原子数１〜１０、好ましく
は炭素原子数１〜４のアルキル基、炭素原子数７〜１２
のフェニルアルキル基、又はアルカリもしくはアルカリ
土類金属カチオンを表し、ｎは３〜１２の整数である）
により表される。

本発明の好適化合物は、Ｒ，が炭素原子数４〜１０のア
ルカノイル基であるような式（Ｉ［ｌ）の化合物に対応
する。

１００００ダルＩ・ン未満の分子量を有するヘパリンフ
ラグメントの混合物を得るためには、例えばヨーロッパ
特許第２４４２３５号及び２４４２３６号に記載されて
いるような酵素解重合法、又はヨーロッパ特許第４０１
４４号に記載されているようなアルカリ解重合法も使用
することができる。

この場合、本発明の選択的に０−アシル化されたグリコ
サミノグリカンは、次式■： （式中、Ｒ１はＨｌ及び／又は５０３−１及び／又は式
（１）で定義したようなアシル基を表し、Ｒ２はＳＯ３
Ｘ及び／又はアセチル基を表し、但しＲ６がアセチル基
を表すとき、Ｎ−アセチルグルコサミンの割合はヘパリ
ンの割合以下であり、　Ｒ３は水素原子、及び／又は炭
素原子数１〜１０、好ましくは炭素原子数１〜４のアル
キル基、又は炭素原子数７〜１２のフェニルアルキル基
、又はアルカリもしくはアルカリ土類金属カチオンを表
し、Ｂは式（１）で定義したような（ａ）−ＯＲ１基、
又はＯＲ，を表し、ｎは２〜２０の整数である）により
表される。

式（ＩＶ）の化合物のうち、有利な化合物はＲ１が炭素
原子数４〜１０のアルカノイル基であるような化合物で
ある。

本発明の他の有利な態様によると、分子量に関する限り
均質なヘパリンフラグメントの混合物、合成により得ら
れ、分子量及び官能化（ｆｏｎｃｔｉｏｎ−ｎａｌｉｓ
ａｔｉｏｎ）に関する限り均質なヘパリンフラグメント
の混合物を使用することができる。

本発明の別の有利な態様によると、アンチトロンビン■
（ＡＴＩ［［）との結合部位をもたないヘパリン誘導体
をグリコサミノグリカンとして選択することができ、例
えばＥ、　５ａｃｌ＋ｅ他、Ｔｈｒｏｍｂ、　Ｒｅｓ、
、　２５（１９８２）、　ｐｐ、　４４２−４５８に記
載されているようにセファロース樹脂−ＡＴＩ［ｌを担
体とするアフィニティクロマＩ・グラフィ又はイオン交
換クロマトグラフィを利用することにより、＾Ｔｌ１ｌ
結合部位を含むオリゴ糖鎖を除去するようにヘパリン鎖
を予め分別しておくか、又は例えば過ヨウ素酸解重合と
それに続くβ脱離もしくは酸性加水分解によりこれらの
部位を予め欠失させておく。

このような化合物は、次式■： 数である）に対応し得る。

特に有利な化合物は、上述のように過ヨウ素酸酸化に続
きアルカリ性β脱離、還元及び分別を行う方法により調
製される化合物から得られる。これらの化合物は次式■
・ （式中、＾はｔｔ＋−（ｃ）基、Ｒ１−（ｄ）基、又は
過ヨウ素酸酸化とそれに続くβ脱離もしくは酸性加水分
解後に存在するような（ｅ）基もしくは（ｄ）基の残基
を表し、Ｂは（ａ）−０Ｊ、又は過ヨウ素酸化とそれに
続くβ脱離もしくは酸性加水分解後に存在するような（
ｃ）基もしくは（ｄ）基の残基が丈だ結合している（ａ
）基を表し、Ｒ１は弐Ｎ）で定義した意味を有し、Ｒ２
は５Ｏ３−１又はアセチル基を表し、５０３−の割合は
約９０％であり、Ｒ１は水素原子又はアルカリもしくは
アルカリ土類金属カチオンを表し、ｎは１〜８０の整（
式中、＾はＲ４基、Ｒ，−（ｃ）基、Ｒ１−（ｄ）基、
又は過ヨウ素酸酸化とそれに続くβ脱離後に存在するよ
うな（ｃ）基スは（ｄ＞基の残基を表し、Ｕは式：で表
される基、又は少なくとも２個の鎖に対して１個の基の
割合で存在し、式： で表される、２位及び３位の炭素間が開いた非硫酸ウロ
ン酸（Ｄ−グルクロン酸又はＬ−イズロン酸）を表し、
Ｂは（ａ）−ＯＲ１基、ＯＲ，基、又は過ヨウ素酸酸化
とそれに続くβ脱離後に存在するような（ｃ）基又は（
ｄ）基の残基がまだ結合している（ａ）基を表し、Ｒ１
は式（Ｉ）に定義した意味を有し、Ｒ２は５Ｏ１−１又
はアセチル基を表し、ＳＯ３−の割合は約９０％以上で
あり、Ｒ１は水素原子又はアルカリもしくはアルカリ土
類金属カチオンを表し、口は２〜１８の整数である）に
対応する。

式■に対応する有利な化合物は、大多数の分子種でｎが
７〜１５の整数となるような化合物である。

式■及び■に対応する有利な化合物、特に式■に対応し
、大多数の分子種でｎが７〜１５の整数であるような化
合物は、Ｒ＋が炭素原子数２〜１０、有利には４〜１０
、好ましくは４又は６のアルカノイル基であるような化
合物である。

式■に対応する他の好適な化合物は、ゲル濾過により得
られ、ｎが２〜１２の整数であるような、分子量に関す
る限り均質な化合物の混合物である。

＾ＴＩ［との結合部位をもたず、従って、抗凝血活性を
もたないヘパリン構造の化合物のうちで、有利な化合物
の類は次式■。

（式中、＾は式（ｒ）で定義したように６１基、Ｒ＋−
（ｃ）基、又はＲビ（ｄ）基を表し、Ｒ１は炭素原子数
２〜１８のアルカノイル基を表し、Ｒ３は水素原子又は
アルカリもしくはアルカリ土類金属カチオンを表し、Ｂ
は式（１）で定義したような（ａ）−ＯＲ１基、又はＯ
Ｒ。

基を表し、ｎは１〜８０の整数である）に対応する、選
択的に０−アシル化されたト脱硫酸Ｎ−アセチル化ヘパ
リン誘導体に対応する。

本発明の別の有利な態様によると、選択されるグリコサ
ミノグリカンはコンドロイチン硫酸型、即ちコンドロイ
チン４−及び６〜硫酸、デルマタン硫酸、並びにそれら
のフラグメントである。

本発明の選択的に０−アシル化されたこの型のグリコサ
ミノグリカンは次式■： （式中、＾は式（１）に定義した意味を有し、Ｒ３は■
及び／又は５０３−及び／又は式（１）で定義したよう
なアシル基を表し、Ｒ１は水素原子、炭素原子数１〜１
０、好ましくは炭素原子数１〜４のアルキル基、炭素原
子数７〜１２のフェニルアルキル基、又はアルカリもし
くはアルカリ土類金属カチオンを表し、Ｂは式（１）で
定義したような（ｂ）−ＯＲ，基もしくは（ｇ）基、Ｏ
Ｒ，基、又は過ヨウ素酸酸化とそれに続くβ脱離もしく
は酸性加水分解後に存在するような（ｃ）基もしくは（
ｄ）基の残基がまだ結合されている（ｂ）基を表し、ｎ
は１〜８０の整数である）により表される。

式（■）の化合物のうちで有利な類は、Ｒ３が水素原子
又はアルカリもしくはアルカリ土類金属カチオンを表す
ような化合物に対応する。

式（■）の他の有利な化合物はＲ１が炭素原子数１〜１
０、好ましくは炭素原子数１〜４のアルキル基、又は炭
素原子数７〜１２のフェニルアルキル基を表すような化
合物である。

式（■）の化合物の他の有利な類は、Ｒ，が炭素原子数
４〜１０のアルカノイル基であるような化合物に対応す
る。

本発明は、選択的に０−アシル化されたグリコサミノグ
リカンの製造方法にも係る。

本発明の方法は、グリコサミノグリカンを有機溶媒に可
溶性の塩に変換すること、及びアシル化反応以前にこの
グリコサミノグリカン上に存在するＮ０Ｒ２又はＣ０Ｏ
Ｒ，官能基を変えずに、このグリコサミノグリカンの一
級及び二級ヒドロキシル基を選択的にアシル化すること
が可能なアシル化剤によりこの塩を処理することを特徴
とするものであり、反応は非プロトン性極性溶媒中で触
媒の存在下且つアシル化時に遊離した酸を捕獲し得る塩
基の存在下Ｏ〜１００℃の温度で行う。

次にエタノールのように水に混和性の溶媒に場合によっ
ては無機塩のような沈澱助剤を加え、この溶媒を使用し
て本発明の生成物を沈澱させる。

沈澱を水に溶解させることにより０−アシル化グリコサ
ミノグリカンを単離し、有利には弱塩基の存在下で透析
する。

有利には本発明の方法は、次の段階、即ち（１）次式■
： （式中、Ｇｏは式： で表される（ａ）０基、式： で表される（ｃ）０基、式： で表される（ａ’）’基、又は式： で表される（ｄ）０基、又は過ヨウ素酸酸化とそれに続
くβ脱離もしくは酸性加水分解後に存在するような（ｃ
）０基もしくは（ｄ）０基の残基を表し、＾０はＲ，Ｏ
基、Ｒ１’−（ｅ）’基、Ｒ，’−（ｄ）’基、式：で
表される（ｂ）０基を表し、ｕｏは式・で表される（ｅ
）０基、又は過ヨウ素酸酸化とそれに続くβ脱離もしく
は酸性加水分解後に存在するような（ｃ）０基もしくは
（ｄ）０基の残基を表し、Ｂｏは０Ｒ１０基、（ａ）’
−０Ｒ１’基、（ａ’）−ＯＲ，’基、（ｂ）’−ＯＲ
，’基、式： で表される（８）０基、又は過ヨウ素酸酸化とそれに続
くβ脱離もしくは酸性加水分解後に存在するような（ｃ
〉０基もしくは（ｄ〉０基の残基がまだ結合している（
ａ）０基、（ａ’）’基もしくはくｂ）０基を表し、Ｒ
，０はＨ又はＳＯ３−を表し、Ｒ２は５Ｏ３−５又はア
セチル基を表し、但しＲ，がアセチル基を表すとき、ト
アセチルグルコザミンの割合はヘパリンの割合以下であ
り、Ｒ１は水素原子、炭素原子数１〜ＩＯのアルキル基
、炭素原子数７〜１２のフェニルアルキル基、又はアル
カリもしくはアルカリ土類金属カチオンを表し、ｎは１
〜８０の整数である）で表されるグリコサミノグリカン
を、該グリコサミノグリカンの非プロトン性極性有機溶
媒に可溶性の塩に変換する段階と、 （２）この塩を該非プロトン性極性有機溶媒中で触媒量
のピリジン又はジアルキルアミノピリジンとプロトン受
容体との存在下で、式： ％式％ （式中、アシルは式（１）で定義した意味を有する）の
無水物により処理する段階と、 （３）こうして得られた生成物を酢酸ナトリウムのエタ
ノール溶液の作用により沈澱させる段階と、（４）こう
して得られた沈澱を水に溶解させ、弱塩基の存在下で透
析することにより、選択的に０−アシル化されたグリコ
サミノグリカンを単離し、場合によってこうして得られ
た選択的に０−アシル化されたグリコサミノグリカンの
ナトリウム塩を他の医薬上許容可能な塩に変換する段階
とに従って実施される。

本発明の方法の有利な態様によると、段階（１）で使用
されるグリコサミノグリカンは、ヘパリン、１．０００
０ダルトン未満の分子１を有するヘパリンフラグメント
の混合物、２０００〜７０００ダルトンの平均分子量を
存するヘパリンフラグメントの混合物、約４５００ダル
トンの平均分子量を有するヘパリンフラグメントの混合
物、約２５００ダルトンの平均分子量を有するヘパリン
フラグメントの混合物、分子量に関する限り均質なヘパ
リンフラグメントの混合物、合成により得られ、分子量
及び官能化に関する限り均質なヘパリンフラグメントか
ら構成される群から選択される６ 本発明の方法の別の有利な態様によると、段階（１）で
使用されるグリコサミノグリカンはアンチトロンビン■
との結合部位をもたないヘパリン、ヘパリンフラクショ
ン（画分）又はフラグメント（断片）である。

本発明の方法の段階（１，）で使用されるグリコサミノ
グリカンは、更に有利には、デルマタン硫酸とそのフラ
グメント、又はコンドロイチン４−及び６−１に酸とそ
れらのフラグメントから構成される群から選択され得る
。

有利には、本発明の方法の段階（１）で使用されるグリ
コサミノグリカンの塩は第３アミン塩（特にトリブチル
アンモニウム塩）、又は第４アンモニウム塩（特にテト
ラブチルアンモニウム塩）である。

本発明の方法の他の有利な態様によると、段階（２）で
使用される無水物は、炭素原子数２〜１０、有利には４
〜１０、好ましくは炭素原子数４又は６の無水アルカン
酸である。

本発明の方法の段階（２）を行う非プロトン性極性溶媒
は、有利にはジメチルホルムアミド、ヘキサメチルホス
ホロトリアミド、ピリジン、又はこれらの溶媒の相互間
又はジクロロメタンとの混合物から構成される群から選
択され、触媒はピリジン及びジメチルアミノピリジンの
ようなアミンにより構成される群から選択される。

酸性度を中和するために使用される塩基は、ピリジン（
同時に溶媒、触媒及び塩基として機能し得る）、トリエ
チルアミン又はトリブチルアミンであり得る。

有利には、段階（４）で実施される透析は、無水物のよ
うな二次生成物が生成された場合にこれを除去するため
に重炭酸ナトリウムのような弱塩基の存在下で実施され
る。

有利には、反応温度及び時間は所望のアシル化率の関数
として夫々Ｏ℃〜１００℃、特にｏ℃〜５０’Ｃ５有利
には室温で例えば１〜２４時間の範囲であり得る。

選択的に０−アシル化された本発明の化合物はｉｎ］途
且で長時間持続する活性を有する。例えばこれらの化合
物が＾ＴＩ［Ｉとの結合部位を有するヘパリン型の化合
物であり、従ってアンチトロンビン活性を発揮し得る場
合、この活性は選択的な０−アシル化を受けていない同
一の化合物に比較して著しく長時間持続される。

本発明の選択的に０−アシル化されたヘパリン誘導体の
うちで＾ＴＩ［［どの結合部位をもたないものは実際に
抗凝血活性を欠くが、このような部位をもつものももた
ないものも、更に、以下に例示するような種々の生物学
的活性を有する。

平滑筋細胞の増殖の阻害。これは血管形成、静脈及び動
脈架橋及び移植（ｐｏｎＬａｇｅｓ　ｅｔ　ｇｒｅｆｆ
ｅｓｖｃｉｎｅｕｘ　ｅＬ　ａｒＬ６ｒｉｅｌｓ）、臓
器移植、特に心臓移植のような手術で再発狭窄症を避け
るために特に有利である。

転移性播種（ｄｉｓｓ６ｍｉｎａＬｉｏｎｓ　ｍ６ｔａ
ｓｔａｓｉｑｕｅｓ）に関与する酵素であるヘパラナー
ゼ及びヘパリチナーゼの阻害。

特にレトロウィルス、特に各種の旧Ｖ（ヒト免疫不全症
ウィルス）に対する抗ウイルス特性。これはＡＩＤＳの
治療に非常に有利である。

白血球エラスターゼの阻害、エラスターゼインヒビター
の循環率の増加、及び■型コラーゲンとフィブロネクチ
ンとの合成の選択的阻害の特性。

これは気腫のようにエラスターゼ−抗エラスターゼ系の
不均衡に伴う疾患の治療、及び動脈硬化症や糖尿病のよ
うに結合組織の変性疾患の治療に非常に有利である。

従って、本発明の選択的に０−アシル化されたグリコサ
ミノグリカンは、多数の適応症で非常に有利な医薬の有
効成分を構成し得る。

従って、本発明は、医薬上許容可能なビヒクル（基剤）
と共に、有効成分として有効量の少なくとも１種の本発
明の０−アシル化グリコサミノグリカンを含有すること
を特徴とする医薬組成物にも係る。

有利には、選択的に０−アシル化されたグリコサミノグ
リカンはナトリウム塩、マグネシウム塩又はカルシウム
塩のような医薬上許容可能な塩の形態である。

本発明の有利な態様によると、医薬組成物は医薬ビヒク
ルが経口投与に適しており、組成物が背低抗性のカプセ
ル、錠剤もしくはタブレット、ビル、又は飲用溶液の形
態であり、カプセル、タブレット又はピルの場合、有利
には服用単位当たり５０ｚｙ〜５ｇ、好ましくは１００
〜１０００ｚ、ｙ、飲用溶液の場合、１０〜１５０ｘＨ
の有効成分を含有する該組成物を例えば１日に１〜３回
投与し、又は、これらの組成物は静脈内、筋肉内又は皮
下経路で投与されるように無菌又は滅菌可能な注射溶液
の形態であり、該注射溶液は皮下注射の場合、有利には
５０〜２０゜ｚｇ／ｘｉの選択的に０−アシル化された
グリコサミノグリカンを含有しており、静脈内注射又は
潅流の場合、２０〜２００ｚｇ７ｍｌの選択的に０−ア
シル化されたグリコサミノグリカンを含有していること
を特徴とする。

これらの投与間隔はひとつの指標にすぎず、投与量は疾
患の状態及び医薬に対する個体の反応性を考慮して臨床
医により算定されなければならない。

本発明は、グリコサミノグリカンが関与し得る種々の生
理学的系における構造／活性関係の研究のための比較研
究で基準として使用され得る、生物学的試薬としての本
発明の選択的に０−アシル化されたグリコサミノグリカ
ンにも係る。

−９６〜 非制限的な以下の実施例を参考に、本発明を説明する。

水（５００ｍｌ’）中に溶解したヘパリンのナトリウム
塩（Ｌｏｇ）を、カチオン交換樹脂製カラム（Ｄｏｗｅ
ｘ　５０Ｗｘ４、Ｈ゛の形態）内を浸透させる。得られ
た溶液を水酸化テトラブチルアンモニウムで中和する。

凍結乾燥後、ヘパリンのテトラブチルアンモニウム塩（
１９，５５ｇ）を得る。

ｂ）乙（±及１ 無水ジメチルホルムアミド（５ｍＮ）に１．０５ＦＩの
ヘパリン酸テトラブチルアンモニウムを溶解する。０℃
に冷却後、無水酢酸（１ｍ１；　１０．４６ｍｍｏｌｅ
ｓ）、次いでＩ・リエチルアミン（１，４５ｍＮ　；　
１０．４６ｎ＋ｎ＋ｏｌｅｓ）とジメチルアミノピリジ
ン（６４Ｂ　；　０．５ｍｍｏｌｅ）とを滴下して加え
る。混合物を２４時間室温に放置する。水（５ｗ１１）
を加えた後、溶液を７２時間蒸留水で透析する。テトラ
ブチルアンモニウム塩を０℃でＨ３の形態のＤｏｗｅｘ
　５０１１１脂を通過させてナトリウム塩に変え、その
後ＩＮのソーダで中和する。凍結乾燥後、選択的にＯ−
アセチル化した０゜４９．のヘパリン酸ナトリウムを得
る。このヘパリン酸ナトリウムは以下の特徴を有する。

硫酸基／カルボキシル基比：２．２８ｍｅｑ／ｇ（出発
生成物：　２．２０鴫ｅｑ／ｇ）。

ＡＰＴＴ力価＋　９１　ｉｕ／ｌ＊ｇ。

コＣＮＭＲスペクトル（メタノール５１．６ｐｐ閣、内
標準）。

２３．４ｐｐ輪でシグナル：　ＣＨ３−Ｃｏ−０−のＣ
Ｈ。

−２４，５ｐｐ輸でシグナル（低）　：　ＣＨ，−ＣＯ
−Ｎｉｌ−のＣＨ。

（出発生成物と同一） ＮＭＲスペクトルは、三糖１単位につき約２つのアセチ
ル基の存在を示す。

２：ヘパリンのトリブチルアンモニウム塩■ ヘパリンのナトリウム塩（１０ｇ）を水（５００ｍｊり
で溶解し、次いでカチオン交換樹脂製カラム（Ｄｏｗｅ
ｘ５０　ｗ　ｘ　４、Ｈ゛の形態）内を浸透させる。１
０％の１〜リブチルアミンを含むエタノール溶液を加え
て、溶液を中和する。エーテルで洗浄し凍結乾燥させた
後に、ヘパリンのトリブチルアンモニウム塩（１４，７
７ｇ）を得る。

ｂ）　　７丸±及１ 前記塩（４ｇ）を含む０℃に冷却した無水ジメチルホル
ムアミド（５０＋＊１）溶液に、ジメチルアミノピリジ
ン（２５０ｍｇ＞、無水酢酸（３，９ｎ１）及びトリブ
チルアミン（９，７ｍ１）を加える。室温で２４時間放
置した復水（１，５ｍ１）を加える。次いで混合物を酢
酸ナトリウム飽和エタノール溶液に注入する。エタノー
ルで洗浄した後、沈澱物を水中で溶解し、その後５％の
重炭酸塩水溶液次いで水で透析する。凍結乾燥後、０−
アセチル化ヘパリン酸ナトリウム（１，８１ｇ）を得る
。

赤外スペクトルは、１７３０ｃｍ−’で強いエステル帯
を示す。

けん化後、生成物は以下の特性を示す。

硫酸基／カルボキシル基；　２．３８ｍｅｑ／ｇ（出発
生成物：　２．４０ｍｅｑ／ｇ）。

ＡＰＴＴ力価：　８５ｉｕ／Ｂ。

ヘパリンのテトラブチルアンモニウム塩（０，５８ｇ）
を、ピリジンとジメチルホルムアミドとの混合物（１／
１　；　ｖ／ｖ）（ＩＯｍＮ＞で溶解する。無水酢酸（
０，５ｍ＆’）を加え、次いで混合物を室温に放置する
。２４時間後、酢酸ナトリウム水溶液（ＩＭ、１５ｍ１
）を加え、次いで混合物を０℃に冷却したエタノール（
８０ｍｌ）に注入する。遠心分離後、沈澱物を水＜１０
ｍ１）で再度溶解し、その後エタノール（１６０ｍｆ）
次いで酢酸ナトリウム水溶液（１Ｍ、１Ｏ硫酸’）を加
える。その後沈澱物を水で溶解（ｒｅｐｒｉｓ）、凍結
乾燥させて、０−アセチル化ヘパリン（０，２２ｇ）を
得る。

実施例１に記載の方法で得たヘパリン酸テトラブチルア
ンモニウム（１，８５ｇ）を含む０℃に冷却したジメチ
ルホルムアミド溶液（１０ｍｌ’）に、無水プロピオン
酸（２，７ｄ）、次いでトリエチルアミン（２，９ｍｌ
’）とジメチルアミノピリジン（１２８ｍｇ）とを滴下
して加える。１時間、２時間、４時間、８時間及び２４
時間後に、反応混合物の一部を抽出し、同量の水で希釈
し、蒸留水に２４時間透析する。得られた生成物をＤｏ
ｗｅｘ　５０Ｈ’樹脂を通過させソーダで中和した後に
凍結乾燥させると、以下の特性を示す。

内標準として３，３．３−　トリメチルシリルプロピオ
ナート（ＴＳＰ）を含む水中で生成物のプロトンＮＭＲ
スペクトルを記録した。ＮＭＲスペクトルは、約１．１
ｐｐ−及び約２．４ｐ、翔で各々ＣＩ、−Ｃ）ｌ、−Ｃ
Ｏ−０の残基Ｃ１ｌ、とＣＬとの特性シグナルを、約３
ｐｐｍ及び約５ｐｐｍで配糖体骨格（ｓｑｕｅｌｅＬｔ
ｅ　ｏｓｉｄｉｑｕｅ）のプロトンの特性シグナルを示
す。

１時間処理した生成物と２４時間反応させた生成物との
間のプロピオニルと骨格との間のシグナル乾燥の後に、
ナトリウム塩の形態でのＯ−ブチリの強さの比較は、反
応時間の影響を示している。

即ち、骨格のプロトンのシグナルの低減が観察され、こ
のことは置換率の増加を示している。

炭素のスペクトル（メタノール５１．１３ｐｐｍ、内１
準ンは、約１０．８ｐｐｉｓ及び約３０ｐｐｍで、プロ
ピオン酸エステルのＣ８，及びＣＬ基の特性シグナルを
示している。

５：０−ブ　１ル　ヘパ１ンＩＣｌ９４０の製 ＾）　ヘパ１ンの−１・−ブ　ル　ンモニウム　の用 実施例１に記載の方法で得たヘパリンのテトラブチルア
ンモニウム塩（０，５５ｇ）を含むジメチルホルムアミ
ド溶液（５ｓＮ＞に、無水酪酸とジメチルアミノピリジ
ンとを０℃で加える。室温に放置して２４時間後に水（
５ｓＮ’）を加え、次いで反応混合物を蒸留水に対して
７２時間透析する。Ｄｏｗｅｘ　５０１（”上での交換
（１：ｃｈａｎｇｅ’）、ソーダによる中和及び凍結ル
化ヘパリン（０，３２ｇ）を得る。

硫酸基／カルボキシル基比：　２．１５　ｓｅｑ／ｇ（
出発生成物：　２．２０　ｍｅｑ／ｇ）。

へＰＴＴ力価：　５９　ｉｕ７ｍｇ。

プロトンのＮＭＲスペクトル（ＴＳＰ、内標準）は、０
．９ｐｐ蒙、　１．６ｐｐｍ及び２．４ｐｐｍで、ＣＨ
，−ＣＩＩ□−ＣＨ，−ＣＯ−０のＣＨ，−ｅｌ＋２基
の特徴を表すシグナルの存在を、３ｐｐｍ及び６ｐｐ−
で配糖体骨格の特徴を表すシグナルの存在を示している
。

ＮＭＲスペクトルの分析は、三糖１単位当たり約１個の
ブチリル基の存在を示している。

Ｂ　ヘパ１ンのｌ−１プ　ルアンモニウム　の実施例２
に記載の方法で得たヘパリン酸トリブチルアミン（４１
１）を含む０℃に冷却したジメチルホルムアミド溶液（
５０ｍＮ＞に、ジメチルアミノピリジン（０，２５ｇ）
、無水酪酸（６，７ｍ１）及びトリブチルアミン（９，
７ｍ１）を加える。反応混合物を室温で２４時間放置す
る。水（１，５ｓＮ）を加え、３０分後に酢酸ナトリウ
ム飽和エタノール溶液（２５０ｍ／）を加える。次いで
沈澱物を３回エタノールで洗浄し、その後５％の重炭酸
塩溶液次いで水で透析する。凍結乾燥後、０−ブチリル
化ヘパリンのナトリウム塩＜２．１ｇ）を得る。

ＡＰＴＴ力価：　２９　ｉｕ／ｍｇ。

エステルを０℃で２時間０６５Ｍのソーダでけん化した
後に得られた生成物は、２．３６論ｅｑ／Ｈの硫酸基／
カルボキシル基比（出発生成物中で２．４０　ｍｅｑ／
ｇ）を示す。

■ 実施例１に記載の方法で得たヘパリンのテトラブチルア
ンモニウム塩（０，５５ｇ）を含むジメチルホルムアミ
ド溶液（５ｓＮ）に、無水カプロン酸（１社、６ａｎｏ
ｌｅｓ）、トリエチルアミン（０，８４ｍ１．６ａｎｏ
ｌｅｓ）及びジメチルアミノピリジンを０℃で加える。

室温で２４時間放置した後、水（５ｓＮ）を加え、その
後反応混合物を５％の重炭酸塩溶液で７２時間、次いで
蒸留水で透析する。Ｄｏｗｅｘ　５０　Ｈ’上での交換
、ソーダによる中和及び凍結乾燥後、ナトリウム塩の形
態での０−ヘキサノイル化ヘパリン（０、３０ｇ）を得
る。　ＡＰＴＴ力価：　　２５　：ｕ／ｍｇプロトンの
ＮＭＲスペクトル（ＴＳＰ、内標準）は、０．８ｐｐ輸
、　１．２ｐｐ論、　１．５ｐｐＩ１１及び２．３ｐｐ
ｍで、Ｃｒ４゜（ＣＨ２）ＩＩ−ＣＯ−０−のＣＨ，−
ＣＩ＋２の特徴を表すシグナルを示す。

Ｂ）ヘパリンのトリブ　ルアンモニウム　の用 実施例２に記載の方法で得たヘパリン酸トリブチルアン
モニウム（４ｇ）を含む０℃に冷却したジメチルホルム
アミド溶液（５０ｄ）に、ジメチルアミノピリジン（０
，２５ｇ）、ｌ・リブチルアミン（９，７ｍ１）及び無
水ヘキサン酸（１０，６ａ／）を加える。２０℃で２４
時時間−た後、水（１，５ｍｌ’）、次いで酢酸ナトリ
ウム飽和エタノール溶液を加える。エタノールでの洗浄
、透析及び凍結乾燥後、０−ヘキサノイル化ヘパリン（
２，５ｇ）を得る。

実施例２に記載の方法で得たヘパリン酸トリブチルアン
モニウム（４ｇ）を含む０℃に冷却したジメチルホルム
アミド溶液（５０ｓＮ）に、ジメチルアミノピリジン（
０，２５ｇ）、無水オクタン酸（１２，１鴎！）及びト
リブチルアミン（９，７鴎！）を加える。室温に２４時
間放置した後、水（１，５ｍ１）を加え、３０分後に酢
酸ナトリウム飽和エタノール溶液を加える。２０％のエ
タノール溶液次いで蒸留水での透析及び限外ｒ過の後に
、生成物をＤｏｗｅｘ　５０　Ｈ’上を通過させてカチ
オン交換を行い、その後ソーダで中和する。

凍結乾燥後、０−オクタノイル化ヘパリン（２，５ｇ）
を得る。

８：０−−　ノイル　ヘパリンＩＣ１９４３の■ ＾）　ヘパリンのテトラブ　ルアンモニウム塩の仇月 実施例１に記載の方法で得たヘパリンのテトラブチルア
ンモニウム塩（０，５５ｇ）を含むジメチルホルムアミ
ド溶液（５社）に、無水カプリン酸（１鴎！、６ｍｗｏ
ｌｅｓ）、トリエチルアミン（０，８４ｓＮ、６ｍｍｏ
ｌｅｓ）及びジメチルアミノピリジンを０℃で加える。

室温に２４時間放置した後、水（５ａ／）を加え、次い
で反応混合物を７２時間５％の重炭酸塩溶液で透析しそ
の後蒸留水で透析する。Ｄｏｗｅｘ　５０　Ｉｆ“上で
の交換、ソーダによる中和及び凍結乾燥後、ナトリウム
塩の形態での○−デカノイル化ヘパリン（０，３０，）
を得る。

プロトンのＮＮＲスペク）・ル（ＴＳＰ、内標準）は、
０．８ｐｐｍ、　１．２ｐｐ蒙、　１．５ｐｐｍ及び２
．４ｐ、翔でＣＬ−（ＣＬ）Ｉ１−ＣＯ−Ｏ−のＣｌ、
とＣＨ，どの特徴を表すシグナルを示す。

Ｂ）ヘパ１ンのトリゾ　ルアンモニウム塩の用 実施例２に記載の方法で得たヘパリン酸トリブチルアン
モニウム（４ｇ）を含む０℃に冷却したジメチルホルム
アミド溶液（５０ｍＮ’）に、ジメチルアミノピリジン
（０，２５ｇ）、無水デカン酸（１３，３ｇを２０ｓＮ
のジメチルホルムアミド中に溶解）及びトリブチルアミ
ン（９，７ｍｌ’）を加える。室温で２４時間放置した
復水（１，５ｍｊりを加え、その後酢酸ナトリウム飽和
エタノール溶液を加える。沈澱物をジメチルスルホキシ
ド中で溶解し、次いで水、重炭酸ナトリウムで透析し、
その後再度水で透析する。

凍結乾燥後、Ｏ−デカメイル化ヘパリン（２、３８ｇ）
を得る。

９：０−　し　イル　ヘパリンＩＣ２０１３のヘパリン
のトリブチルアンモニウム塩（３ｇ）及びＮ、Ｎ−ジメ
チルアミノピリジン（２４４ｍｇ＞を、無水ジメチルホ
ルムアミド（５０ｓＮ）中で溶解する。０℃に冷却後、
Ｐｌｕｓｑｕｅｌ　ｌｅｃ等（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ
、１９８８，４４．２４７１−２４７６）の方法に基づ
き合成した無水オレイン酸（２１ｇ＞を含むジクロルメ
タン溶液（２０ｓＮ）を、次いでトリブチルアミン（９
，５ａ／）を滴下して加える。

２４時間反応させ、０℃に冷却した後、５％の重炭酸ナ
トリウム（１０ｓＮ）を導入し、１時間後に酢酸ナトリ
ウム飽和アルコール溶液を導入する。無水エタノールで
の洗浄及びジメチルスルホキシド−水（４／１　；　ｖ
／ｖ、７５０ａ１）の混合物中での可溶化後、１０％の
エタノール水溶液で２日間透析し、次いで３日間水で透
析する。凍結乾燥及びＤＭＦ中で再び可溶化した凍結乾
燥物のエチルエーテル中での沈澱後、オレオイル化ヘパ
リンのナトリウム塩を単離する。オレイン酸含量は１．
４４μ＋＊ｏｌｅ／ｍｇ（定量はＤｕｃｏｍｂｅ　Ｈ，
等（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ、１９６
３，８８．７）の方法に基づく）である。

１０：０−ベンゾイル　ヘパリンＩＣ１，９４４の■ 実施例２に記載の方法で得たヘパリンのテトラブチルア
ンモニウム塩を、０−デカノイル化ヘパリンの調製（実
施例８）の際に述べた条件に基づき、無水安息香酸でベ
ンゾイル化する。

得られた生成物の炭素のＮＭＲスペクトルは、ベンゾイ
ル基の特徴を表すシグナルを１３１ｐｐｍ＋、　１３２
ｐｐ＋＊及び１３６ｐｐｍで示す。

生成物はｉｎ　ｖｉｔｒｏで血液凝固防止活性を有さな
Ｐｌｕｓｑｕｅｌ　ｌｅｅ等（ＴｅＬｒａｈｅｄｒｏｎ
、１９８８，４４，２４７１２４７りの方法に基づき無
水３−シクロペンチルプロピオン酸を調製する。臭化テ
トラブチルアンモニウム（１５ｍｍ＋ｏｌｅｓ）、２０
％ソーダ（６０＋ｎ１）及びジクロルメタン（８０ｍｌ
）を含む一１０℃に冷却した混合物に、撹拌しながら、
３−シクロペンチルプロピオン酸（２３ｍＮ、１５０Ｉ
Ｉ＋ｍｏｌｅｓ）を含むジクロルメタン溶液（４００ｍ
Ｎ）を加えた後に、デカンテーション、５％の重炭酸す
トリウム及び水での洗浄並びにオイルでの濃ｊ１（９６
％）を行い、この無水３−シクロペンチルプロピオン酸
を得る。赤外線特性周波数（ｆｒ＆ｑｕｅｎｃｅｓ　ｃ
ａｒａｃｔ＆ｒｉｓＬｉｑｕｅｓ　ｅｎ　ｉｎｆｒａ−
ｒｏｕｇｅ）は１８００．１７４５，１０４０ｃｍ−’
である。

ヘパリンのトリブチルアンモニウム塩（４ｇ）及びＮト
ジメチルアミノビリジン（２５３＋ｍｇ）を無水ジメチ
ルポルムアミド（４０ｍｌ＞中で溶解する。０℃に冷却
後、無水３−シクロペンチルプロピオン酸（ｌ１ｇ＞、
次いでトリブチルアミン（９，８＋＊ｌ）を滴下して加
える。室温で２４時間反応させて０℃に冷却した後に水
（１ｍｌ）を加え、１時間後に酢酸すｌ・リウム飽和ア
ルコール溶液を加える。無水エタノールでの洗浄後、沈
澱物を５％の重炭酸ナトリウムで２４時間透析し、次い
で３日間水で透析する。凍結乾燥後、そのナトリウム塩
の形態での○−３−シクロペンチル１０ピオニル化ヘパ
リン（２，６４ｇ）を得る。

Ｄ、０中の炭素のＮＮＩ＋スペクトル（メタノール５１
．６ｐｐ転内標準）は、２７．４ｐｐｍ、　３３．ｌｐ
ｐｍ、　３４．６ｐｐａ＋３５．９ｐｐ−及び４１．７
ｐｐ鋤で、Ｏ−シクロペンチル１０ピオニル基の特徴を
表すシグナルを示す。

硫酸基／カルボキシル基比：２．２゜ 分子量の小さいこのヘパリン（以後ＣＹ　２１６と称す
る）は、ヨーロッパ特許第１８１２５２号明細書に記載
の如く、部分的な亜硝酸の解重合及びアルコール分別（
ｆｒａｃｔｉｏｎｎｅｍｅｎｔ）により得られる。

＾）ＣＹ２１６の一トープ　ルアンモニウム　の用 ＣＹ　２１８のナトリウム塩〈１ｇ）をＤｏｗｅｘ　５
０　Ｈ”樹脂カラムを通過させてテトラブチルアンモニ
ウム塩に変え、その後水酸化テトラブチルアンモニウム
で中和する。

このようにして得た塩（１，７ｇ）を５０℃で３時間真
空乾燥させ、次いで無水ジメチルホルムアミド（１０ｍ
ｆ）中で溶解する。０℃に冷却後、無水酢酸（１，７＋
ｓｊ＋）を、その後トリエチルアミン（２，４ｍ１１）
及びジメチルアミノピリジン（１０２ｍｇ）を滴下して
加える。２０時間の反応の後に、水で溶離する５６ｐｈ
ａｄｅｘＧ−２５カラム上で生成物のクロマトグラフを
行う。

ナトリウム塩への変換及び凍結乾燥の後に、０アセチル
化ＣＹ　２１６（０，８９ｇ）を得る。

炭素のＮＨＲスペクトル（メタノール５１．６ｐｐｍ、
内標準）は、酢酸基の特徴を表すシグナルを２３ｐｐ翰
で示している。

約２４．５ｐｐ輪でのＣ１，−ＣＯ−ＮＨ−のＣＨ２の
シグナルは、出発生成物のシグナルと同一である。

ＴｉｊＬ酸基／カルボキシル基比は、２．０９　ｍｅｑ
／ｇ（出発生成物は２．０５　＋＊ｅｑ／ｇ）である。

ＡＰＴＴ力価：　１８　ｉｕ／＋ｇ 抗Ｘａ力価：　２０５　ｕ／Ｂ（定量はＹｉｎ等（Ｊ、
　Ｌａｂ。

Ｃｌ１ｎ、　Ｈｅｄ、、１９７３，８１，２９８−３１
０）の方法に基づく）。

Ｂ）　　ＣＹ　２１６のＩ・リブ　ルアンモニウム塩の
ＣＹ　２１６のナトリウム塩をＤｏｗｅｘ　５０　Ｈ”
樹脂のカラムを通過させてトリブチルアンモニウム塩に
変え、その後ヘパリンの際に記載の如く、トリブチルア
ミンで中和する。エーテル洗浄、凍結乾燥及び真空乾燥
器での乾燥後に、ＣＹ　２１６のトリブチルアンモニウ
ム塩を得る６ 前記塩（４ｇ）及びＮ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（
２８８ｍｇ）をジメチルホルムアミド中で溶解する。

０℃に冷却後、無水酢酸（４，４ｍｌ’）を、次いでト
リブチルアミン（１１，２ｍｌ）を滴下して加える。２
４時間室温に放置し、０℃に冷却した後、水（１，７ｍ
１）を加え、１時間後に酢酸ナトリウム飽和アルコール
溶液を加える。沈澱物をエタノールで洗浄し、発熱物質
を有さない水（ｅａｕ　ａｐｙｒｏｇ＆ｎｅ）で可溶化
し、５％の重炭酸塩で３６時間、次いで水で３日間透析
する。凍結乾燥後、ナトリウム塩の形態でのアセチル化
ＣＹ　２１．６（１，４ｇ）を得る。

Ｄ２０中での炭素のＮＯＲスペクトル（メタノール５１
．６　ｐｐｍ、内標準）は、アセチル基の特徴を表すシ
グナルを２３ｐｐｍで示している。

硫酸基／カルボキシル基比　２，０７゜実施例１２に記
載の方法で得たＣＹ　２１．６のトリブチルアンモニウ
ム塩（４ｇ）及びＮ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２
８ｈ＋ｇ）を、無水ジメチルホルムアミド（４０Ｉ１１
）中で溶解し、０℃に冷却後、無水酪酸（７，６８ｍ１
＞を、次いでトリブチルアミン（１１，２ｍ１）を滴下
して加える。室温で２４時間反応させて０℃に冷却した
後、水（１，７ｍｆ）を加え、１時間後に酢酸ナトリウ
ム飽和アルコール溶液を加える。エタノールでの洗浄、
発熱物質を有さない水での可溶化、５％の重炭酸ナトリ
ウムでの３６時間透析、次いで水での３日間透析の後に
凍結乾燥させて、０−ブチリル化ＣＹ　２１６（２，１
４ｇ）をナトリウム塩の形態で分離する。

Ｄ２０中での炭素のＮＯＲスペクトル〈メタノール５１
．６ｐｐ（内標準）は、１５．６ｐｐ＋＊、　２０．５
ｐｐ−及び３９．４ｐｐ−で０−ブチリル基の特徴を表
すシグナルを示している。

硫酸基／カルボキシル基比：　２．０８゜実施例１２に
記載の方法で得たＣＹ　２１６のトリブチルアンモニウ
ム塩（４ｇ）及びＮ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２
８８ｍｇ）をジメチルホルムアミド（４０＋＊ｉり中で
溶解する。０℃に冷却後、無水カプロン酸＜１０．８ｍ
ｌ＞及びトリブチルアミン（１１，２＋１）を滴下して
加える。室温で２４時間反応させて０℃に冷却した後に
、水（１，７ｍｊ’）を加え、１時間後に酢酸すｌ〜リ
ウム飽和アルコール溶液を加える。無水エタノールでの
洗浄、発熱物質を有さない水での可溶化、５％の重炭酸
ナトリウムでの３６時間透析次いで水での３日間透析の
後に凍結乾燥させて、〇−カプロイル化ＣＹ　２１６（
２，５ｇ）をナトリウム塩の形態で分離する。

Ｄ２０中での炭素のＮＯＲスペクトル（メタノール５１
．６ｐｐｍ、内標準）は、１５．９ｐｐｍ、　２４．２
ｐｐｍ、　２６．４ｐｐ翰、　３３．ｌｐｐｍ及び３６
．４ｐｐ−で、カプロイル基の特徴を表すシグナルを示
す。

硫酸基／カルボキシル基比：　２．０８゜実施例１２に
記載の方法で得た°ＣＹ　２１６のトリブチルアンモニ
ウム塩（４ｇ）及びＮ、Ｎ−ジメチルアミノビリジン（
２８８１１１１＞を、ジメチルホルム、アミド（４０ｍ
ｌ）中で溶解する。０℃に冷却後、無水力グリル酸（１
４ｍｌ）次いでトリブチルアミン（１１，２＋１）を滴
下して加える。室温で２４時間反応させて０℃に冷却し
た後に、水＜１．７ｍｌ’）を加え、１時間後に酢酸す
Ｉ・リウム飽和アルコール溶液を加える。無水エタノー
ルでの洗浄、発熱物質を有さない水での可溶化、５％の
重炭酸塩での３６時間透析次いで水での３日間透析を行
い、凍結乾燥させた後に、ナトリウム塩の形態での０−
オクタノイル化ＣＹ　２１６（１，７６ｇ）を得る。

ｄ’　ＤＮＳＯ中の炭素のＮＭＲスベク１ヘル（メタノ
ール５１．８ｐｐｍ、内標準）は、１６．８ｐｐｍ、　
２５．０ｐｐｍ、　２７．３１１ｐＬ　３０．９ｐｐｍ
、　３ｌ−４１１１）ＩＩＩ、　３４．ｌｐｐｍ及び３
８．４ｐｐｍでカプリロイル基の特徴を表すシグナルを
示す。

硫酸基／カルボキシル基比：　２．０７゜実施例１６：
　　　量の　さい（量　４５００ダ実施例１２に記載の
方法で形成したＣＹ　２１６のトリブチルアンモニウム
塩（４ｇ）とＮ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２８８
ｍｇ）とをジメチルホルムアミド（４０ｍｌ）に溶解す
る。０℃に冷却した後、無水デカン酸（１５，３ｍ１）
の無水ジメチルポルムアミド（１０翰ｌ）溶液を滴下し
、次いでトリブチルアミン（ｌ］、２ｍ１）を滴下する
。室温で２４時間反応させ且つ０℃に冷却した後、水（
１，７ｍ１）を加え、次いで１時間後に酢酸ナトリウム
の飽和アルコール溶液を加える。無水エタノールで洗浄
し、発熱物質を除去した水（ｅａｕａｐｙｒｏＨａｎｅ
）中に再懸濁させた後、５％重炭酸ナトリウムに対して
２日間、１０％ＮａＣｌに対して２日間、且つ水に対し
て５日間透析する。凍結乾燥すると０デカノイル化ＣＹ
−２１６がすｌ〜リウム塩の形態で単離される（２．７
６ｇ）。

０２０中の炭素のＮＭＲスペクトル（５１，６ｐｐ−の
メタノールを内部標準とする）は、１６　、４１１　ｐ
鋼、２２．３ｐｐ…、２５、ｌｐｐｍ、　２９．２ｐｐ
ｍ、　３１．９ｐｐｍ、　３４．４ｐｐ−及び３６５ｐ
ｐｍでデカノイル基に特徴的なシグナルを示す。

硫酸／カルボキシルの比は２．１３である。

この低分子量ヘパリンは、欧州特許ＥＰ　３７３１９に
記載の方法に従い部分的亜硝酸解重合によって製造した
。これを以後ＣＹ　２２２と称する。このＣＹ２２２の
ナトリウム塩をＤｏｗｅｘ　５０　Ｈ’樹脂のカラムに
通し、次いでトリブチルアミンで中和することによって
、トリブチルアンモニウム塩に変換する。

凍結乾燥後に得られた塩（１，５ｇ＞をジメチルホルム
アミド（５１）に溶解し、次いで０℃に冷却した後、無
水酢酸（１，３５ｍ１）を滴下し、更にトリエチルアミ
ン（２１）及びジメチルアミノピリジン（８５＋＊ｇ）
を滴下する。１８時間反応させた後、水（２０ｍｌ）を
加え、この混合物を蒸留水に対して３日間透析する。ナ
トリウム塩に変換し且つ凍結乾燥すると、０−アセチル
化ＣＹ　２２２が得られる（０．８６ｇ）。

この生成物は硫酸／カルボキシルの比カ月、９８ｍｅｑ
／ｇである（出発物質は１．９７ｍｅｑ／ｇ）。

この生成物の炭素のＮＭＲスペクトル（５１，６ｐ、−
のメタノールを内部標準とする）は、２３ｐｐｍで０−
アセチルの特徴を表すシグナルを示す。出発物質と得ら
れた生成物との間でＮ−アセチルのシグナル（約２４．
５ｐｐｍ）の強度を比較すると、アセチル化が選択的に
生起したことがわかる。

＾ＰＴＴ力価：　８ｉｕ／ｍｓ 抗Ｘａ力価：　１９１ｕ／ｍｇ（Ｊ、Ｌａｂ、Ｃｌ１ｎ
、Ｍｅｄ、、１９７３゜８１．２９８−３１０に記載の
Ｙｉｎ等の定量）ｌ／　ヨウ　　によるヘパリン　の Ｃｏｄｅｘ定量で１５７ｉｕ／ａ＋ｇの力価を示し且−
）　Ｙｉｎ等の抗Ｘａ因子定量で１５５ｕ／ｍｇの力価
を示すナトリウム塩形態の注射用ブタ粘液ヘパリン１０
ｇを、脱塩水２５０＋ｍ　Ｉ中に４℃で溶解する。この
溶液のｐＨを濃塩酸で５．０に調整する。メタ過ヨウ素
酸ナトリウム（Ｈａｌｏ、、分子量：２１３．８９）１
０ｇを脱塩水２５０ｍ１に４℃で溶解した水溶液を、ゆ
っくり撹拌しながら加える。全体のｐＨを濃塩酸で５．
０に調整する。この溶液を＋４℃の低温室内で暗所に２
４時間放置する。

２／　　゛ヨウ　　塩の、− 前記反応溶液を３つの透析管Ｎ０ＪＡＸ　４０″（多孔
度３〜４，０ＯＯＤａ）に分配し、脱塩流水に対して１
５時間透析する。

３／　　　　　　での　　ム 透析後に得られた溶液７８０ｍ１に１６１１のＩＯＮソ
ーダを加え、この混合物を室温（約１８〜２１”Ｃ）で
３時間撹拌する。

４／１反 次いで、５００Ｂの水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ
＜、分子量：３７．８３）を加え、この溶液を室温で更
に４時間撹拌する。濃塩酸でｐＨを４に調整する。１５
分撹拌した後、ｐＨを濃縮ソーダで７に調整する。

得られた溶液８２０ｍ１に１６．４．のＮａＣ１と１２
７０ｍ　ｌのエタノールとを順次加える。これを３時間
静置し、その後２，５００回転／分で２０分間遠心分離
処理する。

沈澱物を回収し、純粋エタノール２００１中に再懸濁さ
せ、Ｕｌｔｒａ−ＴｕｒａｘＩ′で粉砕し、最後に磁製
ブフナー漏斗で沢過して回収する。得られた物質を真空
下４０℃で５時間乾燥させる。

その結果８．９ｇの生成物が得られる。

５／７胚ジニ紀Ｌ１ 前記８．９ｇの生成物を約１２０ｍ　ｌの脱塩水に室温
で溶解する。　１．７８．のＮａＣｌを加え、該溶液の
ｄを塩酸によって３．５に下げる。溶液の量を、脱塩水
の添加によって１７８ｍ１に調整する。　１５１ｍ１の
純粋エタノールを撹拌下で加える。添加後も１５分間撹
拌し続け、その後室温で１０時間靜１する。

形成された沈澱物を、２，５００回転７分で２０分間の
遠心分離により回収する。これを１５０１の純粋エタノ
ール中に再懸濁させ、Ｌｌｌｔｒａ−４ｕｒｒａｘ”で
粉砕し、磁製ブフナーで枦遇して回収し、純粋エタノー
ル３００ｍ　ｌで洗浄し、最後に真空下４０℃で２４時
間乾燥させる。

その結果、下記の特性をもつ生成物ＩＣ１７７２が白色
粉末形態で５ｇ得られる： ＳＯ−＋　　３．５５ｍｅｑ／ｇ ＣＯＯ−：　１．５４ｍｅｑ／ｇ Ｓ＋Ｃ：　　５．０９＋＊ｅｑ／ｇ Ｓ／Ｃ：　　２．３１ｍｅｑ／ｇ この生成物はドアセチルグルコサミンを実質的に含んで
いない（炭素のスペクトルで約２４．５ｐｐ−にシグナ
ルを示さない）。

Ｃｏｄｅｘ力価　：　１ｌｉｕ／ｍｇ ＾ＰＴτ力価　　：　　９ｉｕ／ｍｇ 抗Ｘａ力価　：　１２ｉｕ／Ｂ ステップ＾）で得た生成物をＤｏｗｅｘ　５０　Ｈ’樹
脂に通し、且つ水酸化テトラブチルアンモニウムで中和
することによって、テトラブチルアンモニウム塩に変換
する。９．５ｇのナトリウム塩から１８ｇのテトラブチ
ルアンモニウム塩が得られる。

このようにして得た塩６ｇのジメチルホルムアミド（５
５ｍｌ）溶液を０℃に冷却し、これに無水酢酸（６，２
ｍｌ；６５．６ｍｍｏｌｅｓ）、トリエチルアミン（９
悄１；６５．５ｍｍｏｌｅｓ）及びジメチルアミノピリ
ジン（４０３Ｂ　；３．３＋＠ｍｏｌｅｓ）を順次加え
る。２４時間後に、酢酸ナトリウムの飽和エタノール溶
液（２５０ｍ’ｌ　）を加える。

遠心分離にか（）、沈澱物をエタノールで洗浄し、固形
物をＳ＆ｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２５で脱塩処理し、次いで
１２５〜 Ｄｏｗｅｘ　５０　Ｈ”でイオン交換処理し、その後ソ
ーダで中和する。凍結乾燥後に生成物ＩＣ１９２４が得
られる（３ｇ＞。

この生成物は下記の特性を有する： 硫酸／カルボキシルの比；　２．２８ｍｅｑ／ｇ。

炭素のＮＭＲスペクトル（５１，６ｐｐｍのメタノール
を内部標準とする）は、この生成物が０−アセチル化し
たことを明白に示す。出発物質と同様に、約５６ｐｐｍ
ではドアセチルグルコサミンのＣ２の特徴を表すシグナ
ルが全く存在しない。

実施例１８の方法で形成したｆｃ　１７７２のテトラブ
チルアンモニウム塩６ｇを、アセチル化の場合と同じ方
法で無水酪酸によりブチリル化する。下記の特性をもつ
生成物ＩＣ１９２５が得られる（２．９６ｇ）　：硫酸
／カルボキシルの比：　２．３１ｗｅｑ／ｇ。

’Ｃ−ＮＮＲスペクトル（５１，６ｐｐｍのメタノール
を内部標準とする）は、１５．６ｐｐｍ、２０．４ｐｐ
鎮及び３８．４ｐｐｍにブチル基を表すシグナルを有す
る。

実施例１２の方法で形成したＩＣ１７７２のテトラブチ
ルアンモニウム塩６ｇをアセチル化の場合と同じ方法で
無水ヘキサン酸により処理する。下記の特性を有する生
成物ＩＣ１９２６が得られる（３ｇ）　：硫酸／カルボ
キシルの比：　２．２０ｍｅｑ／ｇ。

炭素のＮＭＲスペクトル（５１，６ｐｐ−のメタノール
を内部標準とする）は、１５．５ｐｐ論、２３．９ｐｐ
ｍ、２６．２ｐｐ＋ｍ、３２．７ｐｐｍ及び３６．ｌｐ
ｐｍでヘキシル基のＣＢ、及びＣＯ，の特徴たるシグナ
ルを示す。

プロトンのＮＭＲスペクトルは、二糖単位当たり約１つ
のヘキシル基が存在することを示す。

及１匝吐：アン　トロンビンＩＩＩに　　る実施例１２
で説明した抗血液凝固活性をもたないフラグメントの混
合物をゲル濾過によって種々の成分に分別する。その結
果、分子量の観点から見て等質な複数のフラクションが
得られる。これらのフラクションの分子量は７７００．
６５００．５８００．５３００．４９８０．４４００．
３９００．３４００．２６００．１８６０及び１２１０
である。

ツー　シ　ンのエスール　の　　　・ 分子１２６００のフラクション（０，２０ｇ）をトリブ
チルアンモニウム塩に変換し、次いで凍結乾燥処理し且
つ乾燥させる（０．３４ｇ）。この生成物をＤＭＦ（２
ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した後、ジメチルアミノピ
リジン（１８ｍｇ）、無水酪酸（０，４９ｍ１）及びト
リブチルアミン（０，７ｍ１）を順次加える。室温で２
４時間後に重炭酸ナトリウム（５％溶液１ｍ１）を加え
、次いで２時間後にこの混合物を５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ
２５カラム（１１）でクロマトグラフィーにかけて０．
２Ｎ塩化ナトリウムにより溶離する。得られた生成物を
脱塩し凍結乾燥処理すると、明るい薄茶色の粉末が得ら
れる（０．２４ｇ）。

残りのフラクションも同様に処理して対応する物質を形
成し、ＩＲ分析にかけると、１７３４ｃｍ−’でエステ
ルバンドの存在が検出される。これらの物質の硫酸化率
（硫酸／カルボキシルの比）はアシル化後も変わらない
。

１２Ｌ」２１ユＩ元− この値は、物質をブタノール−硫酸混合物でブタノーリ
シスし、次いでクロロホルムによりブチルエステルを抽
出し、水で洗浄して過剰ブタノールを除去し、その後で
気相クロマトグラフィーにかけて測定する。

ムの製造と同じ条件で形成したデルマタン硫酸のテトラ
ブチルアンモニウム塩（０，９１ｇ）のジメチルホルム
アミド（２０ｓ＋　Ｉ　）溶液を０℃に冷却し、これに
無水酢酸（１，３５ｍ１　；１４．２ｍｍｏｌｅｓ）を
滴下し、更にトリエチルアミン（１，９７鯛Ｉ　；１４
．２ｍｎｏｌｅｓ）及びジメチルアミノピリジン（０，
７ｍｍｏｌｅｓ）を滴下する。室温で２４時間後に水（
４０ｍ　ｌ　）を加え、次いで７２時間透析する。０℃
でＤｏｗｅｘ　５０　Ｈ’カラムに通し、次いでソーダ
で中和してナトリウム塩を得る。これを凍結乾燥処理す
ると、薄茶色の粉末が得られる（０．５２ｇ）。

この０−アセチル化デルマタン硫酸は下記の特性を有す
る： 硫酸／カルボキシル比が０．９９ｔｍｅｑ／ｇである（
出発物質は１．０５ｍｅｑ／ｇ）　。

コＣ−ＮＭＲスペクトル（５１，６１１１１１１のメタ
ノールを内部標準とする）では、 ２５．２ｐｐ−でＣ１１，−Ｃｏ−Ｎ）ｌ−のＣＨ３の
シグナルが見られ（出発物質と同じ）、 ２３．０ｐｐｍでＣＩ、−Ｃｏ−０のＣＩ＋、のシグナ
ルが見られる。

デルマタン硫酸のテトラブチルアンモニウム塩（１ｇ）
とＮ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１１０端ｇ）とを
無水ジメチルポルムアミドに溶解する。無水コハク酸（
３９６ｍｇ）及びトリブチルアミン（０，９４陪Ｉ）を
加えた後、該媒質を無水条件下６０℃で２時間インキュ
ベー１・する。冷却し、水（２ｍｌ）を加えた後、酢酸
ナトリウムで飽和した冷アルコール溶液で沈澱処理する
。沈澱物をエタノールで洗浄し、発熱物質を除去した水
に溶解し、その後５％重炭酸ナトリウムに対して３６時
間透析し、更に水に対して３日間透析する。凍結乾燥処
理するとＯ−スクシニル化デルマタン硫酸がナトリウム
塩の形態で得られる（０．８３１１Ｉｇ＞。

赤外スペクトル（ＫＢｒ）は１７３０ｃｍ−’及び＋４
２０ｃＦａでカルボキシル基に特徴的な周波数（波の数
）を示す。

０．０中の炭素のＮＭＲスペクトル（５１，６ｐｐｍの
メタノールを内部標準とする）は、３３ｐｐ輸、３４．
５ｐｐｍ及び１８３．６ｐｐｍでスクシニル基の特徴的
シグナルを示し、且つ出発物質の場合と同様に２５．３
ｐｐｍでアセトアミド基のメチルの特徴的シグナルを示
す。

硫酸／カルボキシル比は０．５１である。

ＮａＨａｓａｗａ及びＩｎｏｕｅの方法（Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ　ＣａｒｂｏｈｙｄｒＣｈｅｍ、Ｖｏｌ、ＶＩｒｌ、
ｐ、２９１−２９４）でヘパリンをＮ−脱硫酸処理しく
Ｎ−ｄｅｓｕｌｆａＬ６ｅ）、次いでドアセチル化する
。

これをＤｏｍｅに５０　Ｈ”樹脂に通し、次いでトリブ
チルアミンのエタノール溶液で中和して、ｌ・リブチル
アンモニウム塩（１ｇ）を得る。

凍結乾燥処理し且つ乾燥させた後、この塩をジメチルホ
ルムアミド（１０陪Ｉ）に溶解し、０℃に冷却して、無
水酪酸〈２１）、トリブチルアミン（２ａ　Ｉ　）及び
ジメチルアミノピリジン（６５＋ａｇ）を加える。２４
時間後に水（５１）を加え、この混合物を５％重炭酸ナ
トリウム溶液及び水に対して順次透析する。

Ｄｏｖａｅｘ　５（ｌ　Ｈ“に通し、ソーダで中和する
と、Ｎ−アセチル化０−ブチリル化ヘパリンのナトリウ
ム塩が得られる。

炭素のＮＭＲスペクトル（５１，６ｐｐｍのメタノール
を内部標準とする）４ま、２４．６ｐｐｍでＮ−アセチ
ルの特徴的シグナルを示し、且つ１６ｐｐ蹟、２０ｐｐ
ｍ及び３８ｐｐｍで酪酸エステルに特徴的なシグナルを
示す。

部分的にト脱硫酸し且つＮ−アセチル化したヘパリンを
用いてこの実験を繰り返せば、部分的Ｈ−説硫酸Ｎ−ア
セチル化０−ブチリル化生成物を得ることができる。

タン［６のテトラブチルアンモニウム塩（０，８ｇ）を
、ジメチルアミノピリジン（７６ｍｇ）、無水酢酸（１
，２ｍ１）及びトリエチルアミン（１，７ｍ１）の添加
によってアセチル化する。この混合物を１時間８０℃に
加熱する。

室温まで冷却した後、水（０，４５ｍ１＞を加え、次い
で０．３Ｍ酢酸ナトリウムのエタノール（１００ｍｌ）
溶液を加える。遠心分離にかけた後、沈澱物を水に溶解
し、蒸留水に対して透析する。Ｄｏｗｅｘ　５０　Ｈ’
カラムでイオン交換処理し、次いでソーダで中和してナ
トリウム塩を得る。凍結乾燥処理すると過アセチル化デ
ルマタン硫酸が得られる（０．５１ｇ）。

この生成物は硫酸／カルボキシル比が１．０７ｍｅｑ／
ｇであり（出発物質は１．０５ａ＋ｅｑ／ｇ）、二糖単
位当たり約３つのアセチル基を有する。

ヘパリン酸テトラブチルアンモニウム（１８）のジメチ
ルホルムアミド＜１０ｍ　ｌ　）溶液に臭化ベンジル（
０，１７ｍ１）を加える。室温で２４時間後に、酢酸テ
トラブチルアンモニウム（２２０ｍｇ）を加える。２４
時間後に、形成されたベンジルエステルのアセチル化を
行う。そのためには、ジメチルアミノピリジン（５７＋
ａｇ）を導入し、次いでトリエチルアミン（１，３ｍ１
）及び無水酢酸（０，９ｍ１）を加える。

室温に戻した後、この反応混合物を２４時間撹拌する。

水を加え、酢酸ナトリウムの飽和エタノール溶液で生成
物を沈澱させる。蒸留水に対して透析した後、Ｄｏｗｅ
ｘ　５０　Ｈ”に通し、ソーダで中和し且つ凍結乾燥処
理すると、０−アセチル化ヘパリンベンジルエステルの
すトリウム塩が得られる（０．５７ｇ）。

この生成物は硫酸／カルボキシル比が３．６＋＊ｅｑ／
ｇである（非ベンジル化出発物質は２．２０ｍｅｑ／ｇ
）　−炭素のスペクトル（５１，６ｐｐ−のメタノール
を内部標準とする）は２３．３ｐｐｍ（０−アセチル）
及び１３１．６ｐｐｍ（ベンジル）でシグナルを示す。

約２４．５ｐｐｍでのＣ１３−Ｃｏ−Ｎ１（のＣ１１，
のシグナルは出発物質のシグナルと同じである。

凍結乾燥すると、０−アセチル化デルマタン硫酸のベン
ジルエステルが得られる（０．６３ｇ）。

デルマタン硫酸のテトラブチルアンモニウム塩（１ｇ）
を無水ジメチルポルムアミド（１５ｍｌ）中に溶解する
。この溶液を０℃に冷却した後、臭化ベンジル（０，２
５＋ａｌ）を加え、室温で２４時間静置する。

酢酸テトラブチルアンモニウム（０，３２ｇ）を加え、
室温で２４時間後にアセチル化を行う。

無水酢酸（１，５ｍ１）を導入し、次いでトリエチルア
ミン（２，２ｍ１）及びジメチルアミノピリジン（９６
ｍ＋１１）を加える。２４時間後に水（０，６ｍ１）を
加え、これに酢酸ナトリウムの飽和エタノール溶液を加
えて生成物を沈澱させる。

得られた生成物を１０％塩化ナトリウム及び水に対して
順次透析する。

実施例２のヘパリン酸トリブチルアンモニウムの製造方
法と同じ条件で製造したデルマタン硫酸のトリブチルア
ンモニウム塩（２ｇ）と、Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリ
ジン（２２０ｍｇ）とを無水ジメチルホルムアミド（２
５ｍ　ｌ　）中に溶解する。０℃に冷却した後、無水醋
酸（５，９ｍ１）を滴下し、次いでトリブチルアミン（
８、６ｍ　ｌ　）を滴下する。２４時間インキュベート
し、０℃に冷却した後、水（１ｍｌ）を加える。酢酸す
ｌ・リウムの飽和冷アルコール溶液で沈澱処理する。

沈澱物をエタノールで洗浄し、発熱物質を除去した水に
溶解し、５％重炭酸ナトリウムに対して３６時間透析し
、次いで水に対して３日間透析する。

凍結乾燥処理すると、０−ブチリル化デルマタン硫酸が
ナトリウム塩の形態で得られる（１．３ｇ）。

Ｄ２０中の炭素のＮ１４Ｒスペクトル（５１，６ｐｐｌ
Ｒのメタノールを内部標準とする）は１５．６ｐｐｍ、
２０．５ｐｐ＋ｎ及び３８．４ｐｐｍにブチリル基を表
すシグナルを有し、且つ２５．２ｐｐｍで出発物質と同
様にアセトアミド基のメチルを表すシグナルを示す。

硫酸／カルボキシル比は１．０５である。

デルマタン硫酸のトリブチルアンモニウム塩（２！＋）
とＮ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２２０翰ｇ＞とを
無水ジメチルホルムアミド（２５ｍ　ｌ　＞中に溶解す
る。０℃に冷却した後、無水ヘキサン１（９，４ｍ１）
及びトリブチルアミン（８，６ＩＩＩｌ）を順次滴下す
る。室温で２４時間後に０℃に冷却し、水（１１）を加
え、酢酸ナトリウムの飽和冷アルコール溶液で沈澱処理
する。

沈澱物を無水エタノールで洗浄し、発熱物質を除去した
水に溶解し、５％重炭酸す１〜リウムに対して３６時間
透析し、次いで水に対して３日間透析する。凍結乾燥処
理すると０−ヘキサノイル化デルマタン硫酸のナトリウ
ム塩が得られる（１ｇ）。

Ｄ２０中の炭素のＮＭＲスペクトル（５１，６ｐｐｍの
メタノールを内部標準とする）は１５．９ｐｐｍ、２４
．２ｐｐ＋ｎ、２６．５ｐｐｍ、３３．ｌｐｐｍ及び３
６．４ｐｐａ＋で０−ヘキサノイル基の特徴たるシグナ
ルを示し、且つ２５．２ｐｐｍで出発物質と同様にアセ
トアミド基のメチルの特徴たるシグナルを示す。

硫酸／カルボキシル比は１．０２である。

本発明の方法を仏画特許ＦＲ２１００７３５及び欧州特
許ＥＰ　２５６８８０の方法と比較した。特に、本発明
の方法で製造したヘパリン酢酸エステル（実施例１のＩ
Ｃ１９３８）の特性を、ＦＲ２１００７３５に記載の操
作条件で形成したヘパリン酢酸エステル（物質Ａ）、並
びにＥＰ　２５６８８０の実施例３及び４に記載の操作
条件で形成したヘパリン酢酸エステル（物質Ｂ及びＣ）
の特性と比較した。

（ａ）　　撫ｊ］ソ０１０Ｌ ヘパリン酸テトラブチルアンモニウム（１ｇ）の無水ジ
メチルホルムアミド（１０ｍｌ）溶液に、ジシクロへキ
シルカルボジイミド（４，２ｇ）のジメチルホルムアミ
ド（１５＋＊ｌ）溶液と酢酸（１，１６ｍ１＞のジメチ
ルホルムアミド（２５ｍ　ｌ　＞溶液とを１４℃で４５
分かけて滴下する。

室温で２４時間後に前記反応混合物を濾過し、真空下で
濃縮する。残留物をエーテル中に再懸濁させる。Ｆ遇し
洗浄した後、沈澱物を蒸留水に対して透析する。　Ｄｏ
ｗｅｘ　　Ｈ”樹脂のカラムに通し、ソーダで中和する
とナトリウム塩が得られる。このようにして、物質Ａが
０．４９３ｇ得られる。

この操作を４℃で４８時間という条件でも行った。

（ｂ）　　Ｂ　びＣの　ロ ホルムアミドとピリジンとの混合物中でヘパリンを塩化
アセチルでアセチル化することによって物質Ｂ及びＣを
製造した。この操作は、塩化アセチルを物質Ｂの場合に
は２ｍｌ、物質Ｃの場合には４０−１使用して、欧州特
許ＥＰ　２５６８８０の実施例３及び４に記載の条件で
行う。次いで、酢酸エステルを水にとり、塩化ナトリウ
ムに対して透析する。

（Ｃ）ＩＬＬ 得られた物質の特性を表１に示す。各実験で出発物質と
して使用したヘパリンの特性も比較の基準として示した
。

ドロキシル基を選択的にアセチル化せしめるから表　１ 麦へＰＴＴ力価とＹｉｎ及びＦｓｓｌｅｒ力価はｉｎ　
ｖｉｔｒｏで測定。

これらの結果から明らかなように、いずれの物質もへＰ
ＴＴ力価及びＹＨ力価が出発ヘパリンより小さく、特に
物質Ａ、Ｂ及びＣではその差が激しいが、生成物ＩＣ１
９３８だけは出発ヘパリンとほぼ同等の硫酸／カルボキ
シル比を保持している。これは、本発明の方法がヘパリ
ンの官能基に作用せずにヒである。このことは、これら
の物質の化学的分析で確認される。

物質ＩＣ１９３８、Ａ、Ｂ及びＣを炭素のＮＭＲ分析に
かけた（５１．６ｐｐｍのメタノールが内部標準）。こ
れらの物質及び出発ヘパリンのスペクトルは下記のよう
に添付図面に示した。

第１図：出発ヘパリン 第２図＋　ＩＣ１９３８ 第３図：反応後２４時間の物質Ａ 第４図：反応後４８時間の物質Ａ 第５図：物質Ｂ 第６図：物質Ｃ 結果は下記の通りである。

１、物質ＩＣ１９３８は炭素スペクトル中に下記のシグ
ナルを有する（第２図）。

ＣＩ＋、−ＣＯ−０のＣ１，に対応する２３．４ｐｐ謡
のシグナル、及び 出発ヘパリンのスペクトルに見られるものと同じＣＨ，
−Ｃｏ−ＮＨのＣＨ，に対応する２４．４ｐｐ餉のシグ
ナル。

これらのシグナルは、アミノ基及びカルボキシル基が保
持され且つヒドロキシル基が選択的にアセチル化された
ことを意味する。

２、物質Ａを炭素の８８８分光で分析した結果、２４時
間後及び４８時間に大半゛が形成される（第３図及び第
４図参照）この物質は、ヘパリンのイソ尿素誘導体であ
ることが判明−した、この誘導体は、ジシクロへキシル
カルボジイミドの使用に起因して、カルボキシル基が下
記の基 で置換されている。実際、２８ｐｐｍ、３４ｐｐｍ、５
４ｐｐｍ及び１５６ｐｐｍ辺には前記基の炭素原子に対
応する大きなシグナルが見られるが、２３ｐｐｍ辺のＣ
Ｈ，−ＣＯ−０のＣＨ３に対応するシグナルは極めて小
さい。

このように、この方法ではアセチル化が選択的には生起
せず、カルボキシル基が変化する。そのため、硫酸／カ
ルボキシル比が増加する。

３、物質Ｂは炭素スペクトル中に下記のシグナルを有す
る（第３図参照）： Ｃ１１，−ＣＯ−０のＣ１１３に対応する２３　、１　
ｐｐ輸のシグナル、及び ＣＨ３−Ｃ０−ＮＨのＣＨ，に対応する２４．８ｐｐ＋
ｍのシグナル。

これは、出発ヘパリン及びＩＣ１９３８のシグナルより
明らかに強い。

これらのシグナルは、０−アセチル化だけでなく強度の
ドアセチル化も生起したことを示す。従って、使用した
アセチル化方法は選択的ではなく、部分的Ｎ−説硫酸化
とそれに次ぐアミンのアセチル化とを生起させ、そのた
め硫酸／カルボキシル比も低下している。

４、　　　Ｃは　　スペクトル　に　−のシグナルＬＸ
ｉｉ： ＣＩ、−Ｃｏ−０のＣＩ＋、に対応する２２ｐｐｍのシ
グナル、及び 出発ヘパリン及びＩＣ１９３８より明らかに強いＣＩ、
−Ｃｏ−ＮｉｌのＣ１１，に対応する２４ｐｐ−のシグ
ナル。

従って、物質Ｂの場合と同様に、０−アセチル化及びＮ
−アセチル化が同時に生起したことがわかる。

Ｎ−説′ｒＬＭが物質Ｂより大規模であるため、硫酸７
／カルボキシル比が著しく低下している。

１、標準範囲と比較したｉｎ　ｖｉＬｒｏ力価の評価こ
の測定は、ヒト血漿を［感作カオリンセファリン時間（
Ｌｅａｐｓ　ｄｅ　ｃ／：ｐｈａｌｉｎｅ　ｋａｏｌｉ
ｎ　５ｅｎｓｉｂｉｌｉｓ’）Ｊと称するテスト（フラ
ンス、＾ｓｎｉａｒｅＤｉａｇｏ−ｎｏｓｔｉｃａ　Ｓ
Ｌａｇｏ）にかけることによって行つた。結果を下記の
表２に示す。

壺−２ ＩＣ１９４０＝実施例５に樅って製造した０−ブチリル
化ヘパリン。

ＩＣ１９４１＝実施例６に従って製造した０−ヘキサノ
イル化ヘパリン。

ＩＣ１９４３＝実施例８に従って製造した０−デカノイ
ル化ヘパリン。

これらの結果が示すように、本発明の選択的０〜アシル
化生成物はｉｎ　ｖｉｔｒｏ力価がヘパリンより小さく
、抗血液凝固活性がアシル化＠（ｃｈａｔｎｅ］４７ ａｃｙｌａｎｔｅ）の長さの増加に伴って低下する。

２、ヒト血液に関する本発明の物質のｉｎ　ｖｉｔｒｏ
抗血液凝固活性 この試験は、本発明の物質の用量を２回ｇ／＋ｌ及び４
回ｇ／ｍｌにしてヒト血液５１に対して行う。被検物質
の代わりにＮａＣｌの等張溶液を用いて各物質毎に対照
試験も実施する。血液を室温で３０分間インキュベート
した後、３０００回転／分で２０分間遠心分離処理する
。血小板が除去された血漿をデカンデージョンにかけ、
下記の試験を行う。

”ｔｅｍｐｓ　ｄｅ　ｃＩ！ｐｈａｌｉｎｅ　ｋａｏｌ
ｉｎ　５ｅｎｓｉｂｉｌｉｓ６”（フランス、＾５ｎｉ
ａｒｅ、　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ　Ｓｔａｇｏ）と称
するキットを用いるＴＣＫ　（カオリンセファリン時間
）、及び ＨｅｐｔｅｓＬ’（ＵＳ＾、Ｓｔ　　Ｌｏｕｉｓ、旧ｒ
ｍａｃｈｅｍ）。

結果を下記の表３に示す、但し、これらの結果は３回の
試験の平均である。

に３ これらの結果がら明らがなように、物質ＩＣ１９４０及
びＩＣ１９４１は前記２つの試験方法のいずれでも血液
凝固時間を共用がせる効果を示す、この時間の長さは用
量に比例している。

これに対し物質ＩＣ１９４３は、これらのｉｎ　ｖｉｔ
ｒ。

法では、血液凝固時間を増加させる作用を殆ど示さなか
った。

３、ヒト血液に関するトロンボ上ラス１〜グラフによる
本発明の生成物のｉｎ　ｖｉｔｒｏ血液凝固活性の測定 前記試験と同様に、本発明の生成物をヒト血液５−１に
対して２ｕｇ／鰺１及び４ｐｇ／ｍｌの用呈で使用し、
且つ被検物質の代わりにＮａＣＩの等張溶液を用いて各
生成物毎に対照管を形成する。

室温で３０分間インキュベートした後、ヘリゲ（ｌｅｌ
ｌｉＩ？ｅ）のト・ロンボエラストグラフを用いて、０
．１ｍｌの０．０５８Ｍ　ＣａＣ１□によりカルシウム
沈着処理した（ｒｅｃａｌｃｉｆｉｅ）０．２５ｍ１の
血液に関するトロンボエラストグラフを作図する。

結果を下記の表４に示す。

、！Ｌ４ ★ｒ＝反応時間。

ｋ＝２０ｍｍの振幅に対応する凝血時間ａ−×＝最大振
幅 ＩＰＴ＝　１ｎｃＮｃｅ　ｄｅ　ｐｏＬｅｎＬｉｅ）　
ｔｈｒｏｍｂｏｄｙｎａｍｉ−ｕｅ これらの結果から明らかなように、ＩＣ１９４０及びＩ
Ｃ１９４１はｒ＋ｋを増加させ、ａｔａｘ及びＩＰＴを
低下させる。これは、凝血低下作用の向上を意味する。

この凝血低下作用は、使用量及びアシル鎖の長さに応じ
て増加する。

ＩＣ１９４３はこの試験では前記パラメーターに余り影
響を与えていない。

Ｂ　／　ｉｎ　ｖｉｖｏの　　　　　　・′１、ウサギ
体内における（静脈注射）本発明の生成物のｉｎ　ｖｒ
ｖｏ抗血液凝固活性の測定：試験は雄ニューシーラント
ウサギを用いて行った。生成物を注射する前に、耳の中
央の動脈から血液を採取する。

次いで、ＮａＣｌ等張溶液５１中に被検物質２５ｍｇを
溶解した溶液を、耳の周縁の静脈に注射する。

生成物を注射する前に採取した血液と、注射後６時間、
２４時間、４８時間及び９６時間の時点で採取した血液
とをＴＣＫテスト及びＨｅｐｔｅｓｔＲにかける。

結果を第７図及び第８図に示す。これらの結果では、血
液凝固活性の持続時間が明らかに延びており、この時間
はアシル化鎖の長さに伴って増加している。

実際、生成物ｆｃ　１９４０の血液凝固活性は注射後６
時間経過してもまだ健在であり、ＩＣ１９４１の場合は
注射後２４時間でもまだ明白に観察され、ＩＣ１９４３
の場きはこの活性持続時間が注射後９６時間にも及ぶ。

２、トロンボエラストグラフによる本発明の生成物のｉ
ｎ　ｖｉｖｏ血液凝固活性の測定被検物質を前記試験と
同様に（ＮａＣ１等張溶液５１中２５６）静脈注射する
。ヘリゲの１−ロンボエラストグラフを用いて、注射前
、注射後６時間５２４時間、４８時間及び９６時間に採
取した血液試料０　、２５ｍ　ｌに関するトロンボエラ
ストグラフを作図する。血液凝固活性が注射後９６時間
を超えても存続する場合には、更に採血を行う。

結果を表５．６及び７に示す。

氏５：釉恢瑠實　：　ＩＣ１９４０ ｔ（７：耘彼杓賀　：　ＩＣ１９４３ Ｌ６：＊−線趨喰　：　ＩＣ１９４１ ＝１５に れらの結果では、いずれの物質の場合にも注射後６時間
でｒ＋ｋが大幅に増加し、ＩＰＴが低下している。これ
は、凝血低下作用の時間が延びていることを意味する。

この時間は物質ＩＣ１９４１の場合には注射後２４時間
に及び、物質ＩＣ１９４３の場合には注射後９６時間経
過してもまだ測定できる。

以上の結果から明らかなように、これらの物質はいずれ
もｉｎ　ｖｉｖｏで強力な抗血液凝固活性を示し、この
活性が時間的に長く存続し、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ試験では
余り又は全く活性を示さなかったＩｃ　１９４３がｉｎ
　ｖｉｖｏ試験では極めて大きな活性を示す。

３、実施例１２．１３及び１４の方法で夫々製造した物
質ＩＣ１９４５、ＩＣ１９５７及びＩＣ１９５８の抗血
液凝固活性もウサギ体内でｉｎ　ｖｉｖｏ試験にかけた
。

物質ＩＣ１９５７及びＩＣ１９５８を静脈注射及び皮下
注射した場合には、長時間にわたる薬物動力学効果（ｐ
ｈａｒｍａｃｏｃｉｎ６ｔｉｑｕｅ）が観察された。

Ｃ／）ＩＩＶ−１びＩＩＩＶ−２ウイルス　　ｉｎ　ｖ
ｉｔｒｏモールにＪＩＬ々Ａ目り 本発明に従って製造した物質を、Ｒ，Ｐａｕｗｅｌｓ他
、ＪＪｉｒｏｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９８７．１６，１
７１−１８５に記載のようなＨＩＶ−１及び１（ＩＶ−
２ウイルス阻害ｉｎ　ｖｉｔｒｏモデルで試験した。

被検物質はいずれも、細胞毒性の全くない用量で活性を
示した。特に、物質ＩＣ１９２５及びＩＣ１９２６の活
性は出発物質の活性を上回っていた。

Ｄ／　ム　　　　　　　ｉｎ　ｖｉｔｒｏモールに　°
４艷 融合細胞（ｓｙｎｃｉｔｉａ＞は多数の核をもつ巨大な
細胞であって、正常な１４９７８球と感染した１４９７
８球との融合によって形成される。

本発明の物質は、ＭＯＬＴ４細胞（正常な１４９７８球
）とＨＵＴ−７８／ＩＩＴＬＶ　１１１６、Ｉ［ｌｌ胞
（ヒ１−ＭＡ胞系（７）ｒ５染Ｌり１４９７８球）との
同時培養モデルで試験した。

このモデルでは、総ての被検物質が細胞毒性の全くない
用量で活性を示した。特に、物質■Ｃ１９２４、ＩＣ１
９２５及びＩＣ１９２Ｂは出発物質より活性が大きいこ
とが判明した。

エンベロープを有し且つＲＮＡ又はＲＮＡをゲノムとす
る種々のウィルス（ｖｉｒｕｓ　ｅｎｖｅｌｏｐｐ６ｓ
　？ｒ＾ＤＮ　ｏｕａ　ＡＲＮ）の阻害に関する本発明
の物質の活性を、特に下記のウィルスに関して調べた： ｎ５ｖ−ｉ及びＦＩＳＶ−２ウイルス（単純ヘルペスウ
ィルスＩ及び２、ＲＮＡをゲノムとするウイルスン、Ｒ
ＮＡをゲノムとするＶＳＶ　（水庖性口内炎ウィルス）
、 ＲＮＡをゲノムとするシンドビスウイルス。

被検物質はいずれも細胞毒性のない用量で、これらのウ
ィルスの阻害に関する活性を示した。特に、物質ＩＣ１
９２４、ＩＣ１９２５及びＩＣ１９２６はＶＳＶ及びシ
ンドビスウイルスに対して出発物質より遥かに大きい活
性を示した。

Ｆ／　　　　　　　　　　１ｎｖｉｖｏモデルにお番る
髭１ ラットを用いて、平滑筋細胞増殖阻害ｉｎ　ｖｉｖ。

モデルで本発明の物質を試験した（＾、ｌ’１．Ｃ１ｏ
ｗｅｓ及びＭ、Ｈ，Ｃｌｏｗｅｓ、Ｌａｂｏｒ、Ｉｎｖ
ｅｓＬｉｇ、、１９８５．５２（６）、６１２６１６に
記載のようなカテーテルバルーンのモデルを使用）。

被検物質は総て活性を示した。特に、物質ＩＣ１９２４
、ＩＣ１９２５及びＩＣ１９２６の活性は出発物質の活
性より大きかった。

【図面の簡単な説明】

第１図は出発物質として用いたヘパリンの、第２図は実
施例１で製造したＯ−アセチル化ヘパリン（ＩＣ１９３
８）の、第３図（２４時間反応）及び第４図（４８時間
反応）はＦＲ２１００７３５に従って製造したヘパリン
酢酸エステル（物質＾）の、第５図及び第６図はＥＰ２
５６８８０に従って製造したヘパリン酢酸エステル（夫
々物質Ｂ及びＣ）の”　Ｃ−ＮＭＲスペクトルであり、
第７＝１５９− 図及び第８図は本発明の生成物のｉｎ　ｖｉｖｏ抗血液
凝固活性に関するＴＣＫテスト（第７図）及びＲｅｐｒ
ｅｓｓ’（第８図）の結果を示すグラフである。 手続補正書 手続補正寵 平成元年１０月２０日

Claims (38)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記式（ I ）で表わされる、選択的にＯ−アシ
   ル化されたグリコサミノグリカン、ならびにこれらの薬
   剤上許容し得る塩： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ［式中、 Ｇは、式： （ａ）▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ａ）、または、 式： （ａ′）▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ａ′）、または、式： （ｂ）▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｂ）を表わし、 Ｕは、式： （ｃ）▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｃ）、または、 式： （ｄ）▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｄ）、または、残基（ｃ）もしくは残基（ｄ）
   を過ヨウ素酸酸化してからβ−脱離もしくは酸加水分解
   した後の残基を表わし、 Ａは、Ｒ＿１基、残基Ｒ＿１−（ｃ）、残基Ｒ＿１−（
   ｄ）、式： （ｅ）▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｅ）、または、残基（ｃ）もしくは残基（ｄ）
   を過ヨウ素酸酸化してからβ−脱離もしくは酸加水分解
   した後の残基を表わし、 Ｂは、Ｏ−Ｒ＿１基、残基（ａ）−ＯＲ＿１、残基（ａ
   ′）−ＯＲ＿１、残基（ｂ）−ＯＲ＿１、式： （ｆ）▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｆ）、または、式： （ｇ）▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｇ）を表わすか、あるいは、 Ｂは、（ｃ）もしくは（ｄ）を過ヨウ素酸酸化してから
   β−脱離もしくは酸加水分解した後に存在するような残
   基が結合している残基（ａ）、残基（ａ′）もしくは残
   基（ｂ）を表わし、 Ｒ＿１は、Ｈ、ＳＯ＿３＾−または、アシル（ここで、
   アシルは、α，β−不飽和でないカルボン酸またはジカ
   ルボン酸の残基であつて、炭素原子１〜１８個のアルカ
   ノイル基、または、炭素原子２〜３個の置換アルカノイ
   ル基（ただし、炭素原子３〜７個のシクロアルキル基、
   または、炭素原子１〜１４個のアルキル基、ハロゲン原
   子、ＮＯ＿２基もしくはＯＣＨ＿３基の１個以上により
   置換されていてもよいフェニル基、または、炭素原子４
   〜１６個の不飽和脂肪族炭化水素基によつて置換されて
   いる）、または、炭素原子１〜４個のアルキル基、ハロ
   ゲン原子、ＮＯ＿２基もしくはＯＣＨ＿３基の１個以上
   により置換されていてもよいベンゾイル基、または、シ
   クロアルキル（Ｃ＿３＿−＿７）カルボニル基の中から
   選択される）を表わし、 Ｒ＿２は、ＳＯ＿３＾−および／またはアセチル基（た
   だし、Ｒ＿１がアセチル基を表わす場合、Ｎ−アセチル
   グルコサミンの割合は多くともヘパリンの場合と等しい
   ）を表わし、 Ｒ＿３は、水素原子、炭素原子１〜１０個、好ましくは
   炭素原子１〜４個のアルキル基、炭素原子７〜１２個の
   フェニルアルキル基、または、アルカリ金属もしくはア
   ルカリ土類金属のカチオンを表わし、 ｎは、１〜８０の整数である。 ただし、Ｒ＿１は、二糖単位当たり少なくとも０．１〜
   ３個のアシル基、好ましくは０．５〜２個のアシル基の
   割合でアシル基を表わす］。
2. （２）式II： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） ［式中、 Ａは、請求項１記載の意味を有しており、 Ｒ＿１は、Ｈおよび／またはＳＯ＿３＾−および／また
   は式（ I ）で定義したようなアシル基を表わし、Ｒ＿
   ２は、ＳＯ＿３＾−および／またはアセチル基（ただし
   、Ｒ＿１がアセチル基を表わす場合、Ｎ−アセチルグル
   コサミンの割合は多くともヘパリンの場合と等しい）を
   表わし、 Ｒ＿３は、水素原子、炭素原子１〜１０個、好ましくは
   炭素原子１〜４個のアルキル基、炭素原子７〜１２個の
   フェニルアルキル基、または、アルカリ金属もしくはア
   ルカリ土類金属のカチオンを表わし、 Ｂは、（ａ）−ＯＲ＿１、（ｆ）｛ただし、（ａ）およ
   び（ｆ）は請求項１で定義した通り｝、ＯＲ＿１、また
   は、（ｃ）もしくは（ｄ）を過ヨウ素酸酸化してからβ
   −脱離もしくは酸加水分解した後に存在するような残基
   が結合している残基（ａ）を表わし、ｎは、１〜８０の
   整数であるが、ＡがＲ＿１、残基Ｒ＿１−（ｃ）または
   残基Ｒ＿１−（ｄ）を表わし、かつＢがＯ−Ｒ＿１、残
   基（ａ）−ＯＲ＿１または残基（ｂ）−ＯＲ＿１を表わ
   す場合には、ｎが１〜１６の整数である］で表わされる
   ことを特徴とする、請求項１記載の選択的にＯ−アシル
   化されたグリコサミノグリカン。
3. （３）式II： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） ［式中、Ａ、Ｂ、Ｒ＿１、Ｒ＿２およびｎは請求項２記
   載の意味を有しており、Ｒ＿３は水素原子またはアルカ
   リ金属もしくはアルカリ土類金属のカチオンを表わす］
   で表わされることを特徴とする、請求項２記載の選択的
   にＯ−アシル化されたグリコサミノグリカン。
4. （４）式II： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） ［式中、Ａ、Ｂ、Ｒ＿１、Ｒ＿２およびｎは請求項２記
   載の意味を有しており、Ｒ＿３は炭素原子１〜１０個、
   好ましくは炭素原子１〜４個のアルキル基、または炭素
   原子７〜１２個のフェニルアルキル基を表わす］で表わ
   されることを特徴とする、請求項２記載の選択的にＯ−
   アシル化されたグリコサミノグリカン。
5. （５）式II： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） ［式中、 Ａは、請求項１記載の意味を有しており、 Ｒ＿１は、Ｈ、および／またはＳＯ＿３＾−、および／
   またはアシル基（ここで、アシルは、α，β−不飽和で
   ないカルボン酸またはジカルボン酸の残基であつて、炭
   素原子４〜１８個のアルカノイル基、または、炭素原子
   ２個もしくは３個の置換アルカノイル基（ただし、炭素
   原子３〜７個のシクロアルキル基、または、炭素原子１
   〜１４個のアルキル基、ハロゲン原子、ＮＯ＿２基もし
   くはＯＣＨ＿３基の１個以上により置換されていてもよ
   いフェニル基、または、炭素原子４〜１６個の不飽和脂
   肪族炭化水素基によつて置換されている）、または、炭
   素原子１〜４個のアルキル基、ハロゲン原子、ＮＯ＿２
   基もしくはＯＣＨ＿３基の１個以上により置換されてい
   てもよいベンゾイル基、または、シクロアルキル（Ｃ＿
   ３＿−＿７）カルボニル基の中から選択される）を表わ
   し、 Ｒ＿２は、ＳＯ＿３＾−および／またはアセチル基（た
   だし、Ｒ＿１がアセチル基を表わす場合、Ｎ−アセチル
   グルコサミンの割合は多くともヘパリンの場合と等しい
   ）を表わし、 Ｒ＿３は、水素原子、炭素原子１〜１０個、好ましくは
   炭素原子１〜４個のアルキル基、炭素原子７〜１２個の
   フェニルアルキル基、または、アルカリ金属もしくはア
   ルカリ土類金属のカチオンを表わし、 ｎは、１〜８０の整数である。 ただし、Ｒ＿１は、二糖単位当たり少なくとも０．５〜
   ２個のアシル基、好ましくは１個のアシル基の割合でア
   シル基を表わす］で表わされることを特徴とする、請求
   項１記載の選択的にＯ−アシル化されたグリコサミノグ
   リカン。
6. （６）式II： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） ［式中、Ａ、Ｂ、Ｒ＿１、Ｒ＿２およびｎは請求項５記
   載の意味を有しており、Ｒ＿３は水素原子またはアルカ
   リ金属もしくはアルカリ土類金属のカチオンを表わす］
   で表わされることを特徴とする、請求項５記載の選択的
   にＯ−アシル化されたグリコサミノグリカン。
7. （７）式II： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） ［式中、Ａ、Ｂ、Ｒ＿１、Ｒ＿２およびｎは請求項５記
   載の意味を有しており、Ｒ＿３は炭素原子１〜１０個、
   好ましくは炭素原子１〜４個のアルキル基、または炭素
   原子７〜１２個のフェニルアルキル基を表わす］で表わ
   されることを特徴とする、請求項５記載の選択的にＯ−
   アシル化されたグリコサミノグリカン。
8. （８）グリコサミノグリカンが、１０，０００ダルトン
   未満の分子量を有するヘパリン断片混合物、２，０００
   〜７，０００ダルトンの平均分子量を有するヘパリン断
   片混合物、約４，５００ダルトンの平均分子量を有する
   ヘパリン断片混合物、約２，５００ダルトンの平均分子
   量を有するヘパリン断片混合物、分子量に関して均質な
   ヘパリン断片混合物、および合成によって得られる分子
   量と官能性に関して均質なヘパリン断片より成る群の中
   から選択され、アシル基が二糖単位当たり少なくとも０
   ．１〜３個のアシル基、好ましくは０．５〜２個のアシ
   ル基の割合であることを特徴とする、請求項１〜４のい
   ずれか一項に記載の選択的にＯ−アシル化されたグリコ
   サミノグリカン。
9. （９）グリコサミノグリカンがヘパリンであり、アシル
   基が二糖単位当たり少なくとも０．５〜２個のアシル基
   、好ましくは１個のアシル基の割合であることを特徴と
   する、請求項５〜７のいずれかに記載の選択的にＯ−ア
   シル化されたグリコサミノグリカン。
10. （１０）式III： ▲数式、化学式、表等があります▼（III） ［式中、 Ａは、請求項１で定義したＲ＿１、Ｒ＿１−（ｃ）また
    はＲ＿１−（ｄ）を表わし、 Ｒ＿１は、Ｈ、および／またはＳＯ＿３＾−、および／
    または請求項１で定義したアシル基を表わし、Ｒ＿２は
    、ＳＯ＿３＾−および／またはアセチル基（ただし、Ｒ
    ＿１がアセチル基を表わす場合、Ｎ−アセチルグルコサ
    ミンの割合は多くともヘパリンの場合と等しい）を表わ
    し、 Ｒ＿３は、水素原子、および／または炭素原子１〜１０
    個、好ましくは炭素原子１〜４個のアルキル基、または
    炭素原子７〜１２個のフェニルアルキル基、またはアル
    カリ金属もしくはアルカリ土類金属のカチオンを表わし
    、 ｎは、３〜１２の整数である］で表わされることを特徴
    とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の選択的に
    Ｏ−アシル化されたグリコサミノグリカン。
11. （１１）式IV： ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） ［式中、 Ｒ＿１は、Ｈ、および／またはＳＯ＿３＾−、および／
    または請求項１で定義したアシル基を表わし、Ｒ＿２は
    、ＳＯ＿３＾−および／またはアセチル基（ただし、Ｒ
    ＿１がアセチル基を表わす場合、Ｎ−アセチルグルコサ
    ミンの割合は多くともヘパリンの場合と等しい）を表わ
    し、 Ｒ＿３は、水素原子、および／または炭素原子１〜１０
    個、好ましくは炭素原子１〜４個のアルキル基、または
    炭素原子７〜１２個のフェニルアルキル基、またはアル
    カリ金属もしくはアルカリ土類金属のカチオンを表わし
    、 Ｂは、請求項１で定義した（ａ）−ＯＲ＿１、またはＯ
    Ｒ＿１を表わし、 ｎは、２〜２０の整数である］で表わされることを特徴
    とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の選択的に
    Ｏ−アシル化されたグリコサミノグリカン。
12. （１２）グリコサミノグリカンが、ヘパリン、またはア
    ンチトロンビンIIIに対する結合部位を欠如したヘパリ
    ン画分もしくはヘパリン断片から選択されていることを
    特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の選択
    的にＯ−アシル化されたグリコサミノグリカン。
13. （１３）式Ｖ： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ） ［式中、 Ａは、Ｒ＿１−（ｃ）、Ｒ＿１−（ｄ）、または、（ｃ
    ）もしくは（ｄ）を過ヨウ素酸酸化してからβ−脱離も
    しくは酸加水分解した後の残基を表わし、 Ｂは、（ａ）−ＯＲ＿１、または、（ｃ）もしくは（ｄ
    ）を過ヨウ素酸酸化してからβ−脱離もしくは酸加水分
    解した後に存在するような残基が結合してい　　　る残
    基（ａ）を表わし、 Ｒ＿１は、請求項１記載の意味を有しており、Ｒ＿２は
    、ＳＯ＿３＾−またはアセチル基を表わし（ただし、Ｓ
    Ｏ＿３＾−の割合は約９０％である）、Ｒ＿３は、水素
    原子またはアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属のカ
    チオンを表わし、 ｎは、１〜８０の整数である］で表わされることを特徴
    とする、請求項１、２、５および１２のいずれか一項に
    記載の選択的にＯ−アシル化されたグリコサミノグリカ
    ン。
14. （１４）式VI： ▲数式、化学式、表等があります▼（VI） ［式中、 Ａは、Ｒ＿１、Ｒ＿１−（ｃ）、Ｒ＿１−（ｄ）、また
    は（ｃ）もしくは（ｄ）を過ヨウ素酸酸化してからβ−
    脱離した後の残基を表わし、 Ｕは、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ の残基、または、少なくとも２個の鎖に対して１個の糖
    単位の割合の、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる２位の炭素と３位の炭素との間で開環した
    硫酸化されてないウロン酸（Ｄ−グルクロン酸またはＬ
    −イズロン酸）を表わし、 Ｂは、（ａ）−ＯＲ＿１、ＯＲ＿１、または、（ｃ）も
    しくは（ｄ）を過ヨウ素酸酸化してからβ−脱離した後
    に存在するような残基が結合している残基（ａ）を表わ
    し、 Ｒ＿１は、請求項１記載の意味を有しており、Ｒ＿２は
    、ＳＯ＿３＾−またはアセチル基を表わし（ただし、Ｓ
    Ｏ＿３＾−の割合は少なくとも約９０％である）、 Ｒ＿３は、水素原子またはアルカリ金属もしくはアルカ
    リ土類金属のカチオンを表わし、ｎは、２〜１８の整数
    である］で表わされることを特徴とする、請求項１、２
    、５および１２のいずれか一項に記載の選択的にＯ−ア
    シル化されたグリコサミノグリカン。
15. （１５）式VI［式中、ｎは大部分の分子種に対して７〜
    １５の整数であり、Ｒ＿１は炭素原子２〜１０個、有利
    には４〜１０個、好ましくは炭素原子４個または６個の
    アルカノイル基である］で表わされることを特徴とする
    、請求項１、２、５および１２のいずれか一項に記載の
    選択的にＯ−アシル化されたグリコサミノグリカン。
16. （１６）ｎが２〜１２の整数であり、分子量に関して均
    質な断片の混合物で構成されていることを特徴とする、
    請求項１４または１５に記載の選択的にＯ−アシル化さ
    れたグリコサミノグリカン。
17. （１７）式VII： ▲数式、化学式、表等があります▼（VII） Ａは、式 I に対して定義したＲ＿１、Ｒ＿１−（ｃ）
    またはＲ＿１−（ｄ）を表わし、 Ｒ＿１は、炭素原子２〜１８個のアルカノイル基を表わ
    し、 Ｒ＿３は、水素原子またはアルカリ金属もしくはアルカ
    リ土類金属のカチオンを表わし、Ｂは、式 I に対して
    定義した（ａ）−ＯＲ＿１、またはＯＲ＿１を表わし、 ｎは、１〜８０の整数である］で表わされることを特徴
    とする、請求項１、２、５および１２のいずれか一項に
    記載の選択的にＯ−アシル化されたグリコサミノグリカ
    ン。
18. （１８）式VIII： ▲数式、化学式、表等があります▼（VIII） ［式中、 Ａは、請求項１記載の意味を有しており、 Ｒ＿１は、Ｈおよび／またはＳＯ＿３＾−および／また
    は請求項１で定義したアシル基を表わし、Ｒ＿３は、水
    素原子、炭素原子１〜１０個、好ましくは炭素原子１〜
    ４個のアルキル基、炭素原子７〜１２個のフェニルアル
    キル基、またはアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属
    のカチオンを表わし、Ｂは、式 I に対して定義した（
    ｂ）−ＯＲ＿１もしくは（ｇ）、またはＯＲ＿１、また
    は（ｃ）もしくは（ｄ）を過ヨウ素酸酸化してからβ−
    脱離もしくは酸加水分解した後に存在するような残基が
    結合している残基（ｂ）を表わし、 ｎは、１〜８０の整数である］で表わされることを特徴
    とする、請求項１記載の選択的にＯ−アシル化されたグ
    リコサミノグリカン。
19. （１９）式VIII： ▲数式、化学式、表等があります▼（VIII） ［式中、 Ａ、Ｂ、Ｒ＿１およびｎは請求項１８記載の意味を有し
    ており、 Ｒ＿３は、水素原子またはアルカリ金属もしくはアルカ
    リ土類金属のカチオンを表わす］で表わされることを特
    徴とする、請求項１８記載の選択的にＯ−アシル化され
    たグリコサミノグリカン。
20. （２０）式VIII： ▲数式、化学式、表等があります▼（VIII） ［式中、 Ａ、Ｂ、Ｒ＿１およびｎは、請求項１８記載の意味を有
    しており、 Ｒ＿３は、炭素原子１〜１０個、好ましくは炭素原子１
    〜４個のアルキル基、または炭素原子７〜１２個のフェ
    ニルアルキル基を表わす］で表わされることを特徴とす
    る、請求項１８記載の選択的にＯ−アシル化されたグリ
    コサミノグリカン。
21. （２１）グリコサミノグリカンが、デルマタン硫酸およ
    びその断片、ならびにコンドロイチン４−硫酸および６
    −硫酸およびそれらの断片より成る群の中から選択され
    ており、アシル基が二糖単位当たり少なくとも０．１〜
    ３個のアシル基、好ましくは０．５〜２個のアシル基の
    割合であることを特徴とする、請求項１、１８、１９お
    よび２０のいずれか一項に記載の選択的にＯ−アシル化
    されたグリコサミノグリカン。
22. （２２）Ｒ＿１が炭素原子４〜１０個のアルカノイル基
    である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の選択的
    にＯ−アシル化されたグリコサミノグリカン。
23. （２３）請求項１〜２２のいずれか一項に記載の選択的
    にＯ−アシル化されたグリコサミノグリカンの製造方法
    であって、 （Ａ）式IX： ▲数式、化学式、表等があります▼（IX） ［式中、 Ｇ＾・は、式： （ａ）＾・▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ａ）＾・、または、式： （ａ′）＾・▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ａ′）＾・、または、 式： （ｂ）＾・▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｂ）＾・を表わし、 Ｕ＾・は、式： （ｃ）＾・▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｃ）＾・または、式： （ｄ）＾・▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｄ）＾・、または、残基（ｃ）＾・もしくは残
    基（ｄ）＾・を過ヨウ素酸酸化してからβ−脱離もしく
    は酸加水分解した後の残基を表わし、 Ａ＾・は、Ｒ＿１＾・基、残基Ｒ＿１＾・−（ｃ）＾・
    、残基Ｒ＿１＾・−（ｄ）＾・、式： （ｅ）＾・▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｅ）＾・、または、残基（ｃ）＾・もしくは残
    基（ｄ）＾・を過ヨウ素酸酸化してからβ−脱離もしく
    は酸加水分解した後の残基を表わし、 Ｂ＾・は、ＯＲ＿１＾・基、残基（ａ）＾・−ＯＲ＿１
    ＾・、残基（ａ′）＾・−ＯＲ＿１＾・、残基（ｂ）＾
    ・−ＯＲ＿１＾・、式： （ｆ）＾・▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｆ）＾・、または、式： （ｇ）＾・▲数式、化学式、表等があります▼ の残基（ｇ）＾・を表わすか、あるいは、 Ｂは、（ｃ）＾・もしくは（ｄ）＾・を過ヨウ素酸酸化
    してからβ−脱離もしくは酸加水分解した後に存在する
    ような残基が結合している残基（ａ）＾・、残基（ａ′
    ）＾・もしくは残基（ｂ）＾・を表わし、Ｒ＿１＾・は
    、ＨまたはＳＯ＿３＾−を表わし、Ｒ＿２は、ＳＯ＿３
    ＾−またはアセチル基（ただし、Ｒ＿１がアセチル基を
    表わす場合、Ｎ−アセチルグルコサミンの割合は多くと
    もヘパリンの場合と等しい）を表わし、 Ｒ＿３は、水素原子、炭素原子１〜１０個のアルキル基
    、炭素原子７〜１２個のフェニルアルキル基、または、
    アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属のカチオンを表
    わし、 ｎは、１〜８０の整数である］で表わされるグリコサミ
    ノグリカンを、このグリコサミノグリカンの、極性で非
    プロトン性の有機溶剤に可溶な塩に変換し、 （Ｂ）前記の極性で非プロトン性の有機溶剤中で、触媒
    量のピリジンまたはジアルキルアミノピリジンおよびプ
    ロトン受容体を存在させて、前記塩を、アシル−Ｏ−ア
    シル （式中、アシルは請求項１で定義した通りである）の無
    水物で処理し、 （Ｃ）得られた生成物を、エタノール中で酢酸ナトリウ
    ム溶液の作用によつて沈澱させ、（Ｄ）得られた沈澱を
    水に溶解させ、透析して、選択的にＯ−アシル化された
    グリコサミノグリカンを単離し、場合により、得られた
    選択的にＯ−アシル化されたグリコサミノグリカンのナ
    トリウム塩を薬剤上許容し得る他の塩に変換する ことからなる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の
    選択的にＯ−アシル化されたグリコサミノグリカンの製
    造方法。
24. （２４）ステップＡで使用するグリコサミノグリカンを
    、ヘパリン、１０，０００ダルトン未満の分子量を有す
    るヘパリン断片混合物、２，０００〜７，０００ダル約
    ４，５００ダルトンの平均分子量を有するヘパリン断片
    混合物、約２，５００ダルトンの平均分子量を有するヘ
    パリン断片混合物、分子量に関して均質なヘパリン断片
    混合物、および合成によって得られる分子量と官能性に
    関して均質なヘパリン断片より成る群の中から選択する
    ことを特徴とする、請求項２３記載の方法。
25. （２５）ステップＡで使用するグリコサミノグリカンが
    、ヘパリン、またはアンチトロンビンIIIに対する結合
    部位を欠如したヘパリン画分もしくはヘパリン断片であ
    ることを特徴とする、請求項２３記載の方法。
26. （２６）ステップＡで使用するグリコサミノグリカンを
    、デルマタン硫酸およびその断片、ならびにコンドロイ
    チン４−硫酸および６−硫酸およびそれらの断片より成
    る群の中から選択することを特徴とする、請求項２３記
    載の方法。
27. （２７）ステップＡのグリコサミノグリカンが、第三級
    アミンの塩、特にトリブチルアミンの塩、または第四級
    アンモニウムの塩、特にテトラブチルアンモニウムの塩
    であることを特徴とする、請求項２３〜２６のいずれか
    一項に記載の方法。
28. （２８）ステップＢで使用する無水物が、炭素原子を２
    〜１０個、有利には４〜１０個、好ましくは炭素原子を
    ４個または６個含有するアルカン酸の無水物であること
    を特徴とする、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載
    の方法。
29. （２９）ステップＢを、ジメチルホルムアミド、ヘキサ
    メチルホスホロトリアミド、ピリジン、これらの溶剤の
    混合物、または前記の溶剤とジクロロメタンとの混合物
    より成る群の中から選択された極性で非プロトン性の溶
    剤中で実施することを特徴とする、請求項２３〜２８の
    いずれか一項に記載の方法。
30. （３０）ステップＢで、プロトン受容体として、ピリジ
    ン、トリエチルアミンおよびトリブチルアミンより成る
    群の中から選択された塩基を使用することを特徴とする
    、請求項２３〜２９のいずれか一項に記載の方法。
31. （３１）ステップＤの透析を弱塩基の存在下で実施する
    ことを特徴とする、請求項２３〜３０のいずれか一項に
    記載の方法。
32. （３２）ステップＢを、０℃から１００℃まで、特に５
    ０℃から１００℃までの温度で実施することを特徴とす
    る、請求項２３〜３１のいずれか一項に記載の方法。
33. （３３）製薬基剤と共に、活性成分として、請求項１〜
    ２２のいずれか一項に記載の選択的にＯ−アシル化され
    たグリコサミノグリカンの少なくとも１種を有効量で含
    有することを特徴とする薬剤組成物。
34. （３４）選択的にＯ−アシル化されたグリコサミノグリ
    カンが、ナトリウム、マグネシウムまたはカルシウムの
    塩のような薬剤上許容し得る塩の形態であることを特徴
    とする請求項３３記載の薬剤組成物。
35. （３５）製薬基剤が経口投与に適したものであり、組成
    物が耐胃性カプセル、錠剤もしくは丸剤の形態、または
    飲用溶液の形態であつて、有利には単位投与形態当たり
    ５０ｍｇ〜５ｇの活性成分を含んでおり、好ましくはカ
    プセル、錠剤もしくは丸剤は１００〜１０００ｍｇ、飲
    用溶液は１０〜１５０ｍｇの活性成分を含んでいること
    を特徴とする、請求項３３または３４記載の薬剤組成物
    。
36. （３６）組成物が静脈内投与、筋肉内投与または皮下投
    与用の、無菌または滅菌可能な注射用溶液の形態であり
    、この溶液が、皮下注射用の場合は選択的にＯ−アシル
    化されたグリコサミノグリカンを５０〜２００ｍｇ／ｍ
    ｌ含有し、または静脈内もしくは潅注用の場合は選択的
    にＯ−アシル化されたグリコサミノグリカンを２０〜２
    ００ｍｇ／ｍｌ含有することを特徴とする、請求項３３
    または３４記載の薬剤組成物。
37. （３７）ウィルスエンベロープに起因する疾患の治療ま
    たは予防用である、請求項３３〜３６のいずれか一項に
    記載の薬剤組成物。
38. （３８）ＡＩＤＳなどのようなレトロウィルスに起因す
    る疾患の治療または予防用である、請求項３６記載の薬
    剤組成物。