JPH0216992A - β−グルコシド結合を持つ二糖類の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、β−グルコシド結合を持つ二糖類の製造方法
に関する。

［従来の技術］ 最近、各種の二糖類が開発されているが、二糖類の中で
β−グルコシド結合を持つ二糖類はほとんど開発されて
いない。二糖類の中で、セロビオースはセルロースのア
セチル化分解物を脱アセチルすることにより合成するこ
とは可能であるが、その生産性から、試薬用途以外で使
用できないのが現実である。

また、β−グルコシド結合を持つヘテロニ糖類は、天然
にも余り存在しておらず、有効な合成法も確立していな
い。

［発明が解決しようとする課題］ 従来、セロビオースの合成法としては、セルロースのア
セチル化分解しか方法がなく、試薬用途以外、例えば食
品分野などへの応用は考えられなかった。また、β−グ
ルコシド結合を持つペテロ二糖類は、有効な合成法もな
く、少量を合成することも困難であった。

β−グルコシド結合を持つ二糖類は、人間は資化できな
いため、ノンカロリーの食品素材としての用途が期待さ
れているが、その大量生産の方法が確立されていないた
め、実用化されていないのが現実である。

本発明は、β−グルコシド結合を持つ二糖類の新しい合
成法に関し、本発明によって得られる二糖類を食品素材
としての応用を可能にすることを目的とする。

［課題を解決するための手段］ そこで本発明者らは、β−グルコシド結合を持つ二糖類
を効率よく製造する方法を開発すべく検討を重ねた結果
、セロビオースホスホリラーゼを触媒とした反応により
β−グルコシド結合を持つ二糖類が生成することを見い
だし、本発明を完成した。

本発明を以下に示す。

本発明は、セロビオースホスホリラーゼの存在下にα−
Ｄ−グルコース−１−リン酸と単糖類を反応させること
を特徴とするβ−グルコシド結合を持つ二糖類の製造法
に関する。

本発明において基質として用いる！＃糖類に制限はない
が、通常はＤ−グルコースとＤ−キシロースが用いられ
、前者より得られる二糖類がセロビオースであり、後者
を用いて得られる二糖類が４−〇−β−Ｄ−グルコピラ
ノシルーＤ−キシロースである。

次に、セロビオースホスホリラーゼとしては、いかなる
起源のものを用いても構わないが、セルビブリオ・ギル
バス（Ｃｅｌｌｖｉｂｒｊｏ　ｇｉｌｖｕｓ）由来のセ
ロビオースポスホリラーゼを用いることが好ましい。

セロビオースホスホリラーゼは、精製して用いることも
可能であるが、セルビブリオ・ギルバスのアセトン処理
菌体をセロビオースホスホリラーゼとして用いる方法が
より好ましい。ここで該菌体のアセトンＩＡ埋の方法を
例示すると、集菌したセルビブリオ・ギルバスの菌体を
、−１０℃以下の低温アセトン中に分散させ、３０分〜
２時間攪拌した後、濾過し、さらに菌体をアセトンで洗
浄し、次いでエーテルで洗浄した後、風乾させる方法が
好ましい。

また、上記の処理で製造したアセトン処理菌体は、セロ
ビオースホスホリラーゼの他に、ホスホグルコムターゼ
活性を有しているので、該アセトン処理菌体にエタノー
ル処理を施して、ホスホグルコムターゼ活性を除いたも
のを、セロビオースホスホリラーゼとして用いることが
好ましい。

上記エタノール処理の方法は、例えば０〜ｌＯ℃の２０
〜８０％エタノール中にアセトン処理菌体を分散し、ｌ
Ｏ分〜１時間処理を行うことが好ましい。

本発明によりβ−グルコシド結合を持つ二糖類を製造す
るための反応条件については、α−Ｄ−グルコース−１
−リン酸０．０１〜２モル、好ましくは０．０３〜０．
３モルと！＃精糖類、Ｏ１〜２モル、好ましくは０．０
３〜０．３モルを、セロビオースホスホリラーゼ（前記
アセトン処理菌体を用いる場合、菌体濃度０．１〜１０
％、好ましくは１〜５％）の存在下にｐＨ５〜８、好ま
しくは５．５〜７．８で２０〜６０℃、好ましくは２５
〜５０℃の温度にて反応させればよい。

［実施例］ 次に、本発明の実施例を示す。

調製例 セロビオースホスホリラーゼの調製 バクトドリブトン０．５％、酵母エキス０，５％。

塩化ナトリウム０．５％、リン酸二カリウム０．２％、
カルボキシメチルセルロース０．５％の組成の培地で、
３０℃において、セルビブリオ・ギルバスを４８時間培
養を行い、遠心分離によって培養菌体を集菌した。得ら
れた菌体を一２０℃のアセトン中に分散させ、１時間攪
拌を行った後、ガラスフィルターでン濾過し、さらに菌
体を一２０℃のアセトンで洗浄した。再び一２０℃のエ
ーテルで洗浄した後、風乾させてセルビブリオ・ギルバ
スのアセトン処理乾燥菌体を得た。

実施例１ 調製例の方法で得たアセトン処理菌体を用い、ｐｌ＋７
．０の０．１モルトリス緩衝液中で、菌体５％。

α−Ｄ−グルコース−１−リン酸０．１モル、グルコー
ス０．１モル、　Ｍｇｆ：１１２５ミリモルの濃度の反
応液を３７℃で２４０８間反応させ、反応後ベーパーク
ロマトグラフィーによりセロビオースの生成を確認した
。

実施例２ 実施例１のグルコース０．１モルを、キシロース０．１
モルに変えて、実施例１と同様の反応を行った結果、二
糖類の生成が確認された。

実施例３ 実施例１の菌体な、調製例の処理で得た菌体なさらに５
０％エタノール中に分散させ、４℃で３０分間処理した
ものに変えて、実施例１と同様の反応を行った結果、実
施例１よりも多量のセロビオースの生成が確認された。

実施例４ 実施例３のグルコース０．１モルを、キシロース０．１
モルに変えて、実施例３と同様の反応を行った結果、実
施例２よりも多量の二糖類の生成が確認された。

実施例５ 実施例４の反応条件において、二糖類の生成の経時変化
を測定した結果、第１図に示すように、５０時間後に約
６０％の転換率を示した。

実施例６ 実施例４の反応条件で得た二糖類を、活性炭カラムクロ
マトグラフィーによりエタノールの濃度勾配をかけて単
離精製し、キシロース６ｇから出発して二糖類４．４　
ｇ　（収率３５％）を得た。

実施例７ 実施例６で得られた二糖類にα−グルコシダーゼを作用
させても分解しなかったが、β−グルコシダーゼを作用
させた結果、等モルのグルコースとキシロースに分解し
た。また、この二糖類のアセチル化物のプロトンＮＭＲ
の測定を行った。この結果を第１表に示す。

第　　１　　表 ＋ｌ−Ｘ１　　　　　　　　　５ Ｈ−Ｘ２　　　　　　　　　４ Ｉｔ−Ｘ３　　　　　　　　　５ ＩＩ　−Ｘ　４　　　　　　　　　３ Ｈ−Ｘ５ａ　　　　　　　　　３ ＩＩ−Ｘ５ｅ　　　　　　　　　４ ＩＩ　−Ｇ　１　　　　　　　　　４ ＩＩ　−Ｇ　２　　　　　　　　　４ Ｈ−Ｇ３　　　　　　　　　５ Ｈ−Ｇ４　　　　　　　　　５ ＩＩ　−Ｇ　５　　　　　　　　　３ ＩＩ　−Ｇ　６　　　　　　　　　４ ＩＩ　−Ｇ　６　’　　　　　　　　４６７　　　　　
　　　　ＪＸｌ、Ｘ２ ９４　　　　　　　　　ＪＸ２　　Ｘ３１７　　　　　
　　　　ＪＸ３　　ｘａ８６　　　　　　　　　ＪＸ４
　　Ｘ５ａ５０　　　　　　　　　ＪＸ４．ｘｓａ０２
　　　　　　　　ＪＸ５ａ、Ｘ６ｅ５７ＪＧ１．Ｇ２ ９１　　　　　　　　　ＪＧ２　０３ １７　　　　　　　　　Ｊａ＋　　Ｇ４０７　　　　　
　　　　Ｊａａ　　Ｇ３７０　　　　　　　　ＪＧＳ　
Ｇ６ １０　　　　　　　　　ＪＧＳ　　０６’２９　　　　
　　　　　Ｊａａ、ａａＩこの結果より、本化合物は４
−０−β−Ｄ−グルコピラノシルーＤ−キシロースであ
ることが判明した。本化合物は下記に示す構造式で表さ
れる。

変化を示すものである。

代 理 人

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）セロビオースホスホリラーゼの存在下に、α−Ｄ
   −グルコース−１−リン酸と単糖類を反応させることを
   特徴とするβ−グルコシド結合を持つ二糖類の製造法。
2. （２）セロビオースホスホリラーゼが、セルビブリオ・
   ギルバス（￥Ｃｅｌｌｖｉｂｒｉｏ￥　￥ｇｉｌｖｕｓ
   ￥）由来の酵素である請求項１記載の製造法。