JPH02167299A

JPH02167299A - 棘皮動物由来の抗腫瘍性物質並びにその製造法

Info

Publication number: JPH02167299A
Application number: JP1284258A
Authority: JP
Inventors: Takuma Sasaki; 琢磨佐々木; Hisao Kamiya; 久男神谷
Original assignee: Nippon Suisan Kaisha Ltd; Suntory Ltd
Current assignee: Suntory Ltd; Nissui Corp
Priority date: 1989-10-31
Filing date: 1989-10-31
Publication date: 1990-06-27
Also published as: JPH054398B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は抗腫瘍性物質並びにその製造法に関し、更に詳
しくは練成動物の生殖巣以外の内臓の水性溶媒抽出物で
ある新規な抗腫瘍性物質並びにその製造法に関するもの
である。

天然物質からの非細胞毒性の癌化学療法剤として抗腫瘍
性多糖が１９６４年頃より注目されるようになり、笹か
らのパンフォリン又はサルノコシカケ、シイタケ、シロ
キクラゲ、ウラジロコウヤクタケ、チャヒラタケ等の担
子菌類熱水抽出エキス、細菌類、酵母類、地衣類からの
多糖類等が細胞毒に起因せずに顕著な抗腫瘍性を示すこ
とが報告されている。

本発明者らも非細胞毒性の癌化学療法剤の開発を企画し
て研究を行い、一連の高等植物および微生物からの多糖
類が宿主介在性抗腫瘍性を示すことを発見した。しかし
ながら、それらは抗癌スペクトルが狭く、臨床的利用に
は限界があるので、より広い抗癌スペクトルを有し、か
つ強力な非細胞毒性抗腫瘍剤を求めて検索し、対象とし
て海洋生物に注目して研究した結果、軟体動物から得ら
れる高分子画分が抗腫瘍性を有することを確かめ、先に
特許出願したく特開昭５２−１２２６１２号〉。

本発明者らはさらに海洋生物の抗腫瘍性物質について研
究した結果、鯨皮動物の生殖巣以外の内臓から得られる
高分子画分はさらに優れた抗腫瘍性を有することを見出
し、本発明を完成した。

従って、本発明は、軟度動物の生殖巣以外の内臓から得
られる新規な抗腫瘍性物質並びにその製造法を提供する
ものである。

本発明の抗腫瘍性物質は、例えば練成動物の生殖巣以外
の内臓の微細化物を水性溶媒で抽出し、この抽出液を限
外濾過、ゲル濾過、透析、有機溶媒沈澱、イオン交換樹
脂処理、塩析及び電気泳動からなる群から選ばれた一つ
以上の処理に付して分子ｆｆｋ　１０．０００以上の両
分を採取することにより製造される。

練成動物には、二ホンウミシダ（Ｃｏｍａｎｔｈｕｓｊ
ａｐｏｎｉｃａ）等が属する有柄類、ヒトデ（Ａｓｔｅ
ｒｉａｓａｍｕｒｅｎｓｉｓ）、クモヒトデ（Ｏｐｈｉ
ｏｐｌｏｃｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）等が属する星形類
、ムラサキウニ（Ａｎｔｈｏｃｉｄａｒｉｓ　ｃｒａｓ
ｓｉｐｓｉｎａ）、マナマコ（Ｓｔｉｃｈｏｐｕｓ　ｊ
ａｐｏｎｉｃｕｓ）等が属するウリ型類の３亜門があり
、本発明では、当該物質を含むものは何れをも原料とし
て使用できるが、就中ムラサキウニが特に好ましい。

これらの練成動物のうち、ウニ類、ナマシ類は食用に供
されているが、特にウニ類はその生殖巣のみが、生食或
は加工用として利用され、生殖巣を採取した残りの殻（
ランタンを含む）および内臓は廃棄されるか、せいぜい
磯釣り等の餌（コマセ）として利用されているにすぎな
い。本発明の物質は、ウニの生殖巣以外の内臓に含有さ
れるので、ウニを原料とした場合には上記の廃棄物利用
という点から見ても産業的意味を持つものである。

本発明により、親友動物から抗腫瘍性物質を得るには、
まず練成動物の生殖巣以外の内臓をワーリング・ブレン
ダー、超音波処理等によって破砕して微細化物とする。

次いでこの微細化物を水性溶媒で抽出する。水性溶媒と
しては、水、各種塩類溶液、あるいは低級アルコール、
アセトン、ジオキサン等の有機溶媒と水との混合溶媒が
使用される。抽出は通常低温ないし室温で行われる。抽
出液は遠心分離、濾過等によって非水溶性区分と分離し
た後、限外濾過、ゲル濾過、透析等によって脱塩し、必
要があれば限外濾過、減圧濃縮等によって濃縮する。

上記のごとくして得られた抽出物はさらに分子量分画し
て分子ｆｆｉ　１０．０００以上の両分を採取する。

その方法としては、例えば超遠心分離、限外濾過、ゲル
濾過、イオン交換体処理、透析、塩析、溶媒沈澱、電気
泳動など高分子複合蛋白質類の分画に使用される方法を
使用することができる。

上記の方法により練成動物の生殖巣以外の内臓から水性
溶液によって抽出され、分画、精製されたものは溶液状
態あるいは乾燥状態に調整し、保存することができる。

斯くして得られる本発明の抗腫瘍性物質は次のような物
性を有する。

■分子量（分子篩による）１０、０００以上 ■塩基性、酸性、中性の区別弱酸性（ｐＨ５〜６） ■物質の色淡黄色 ■比旋光度Ｃａ）　：、０：　Ｏ（Ｃ＝０．１％、　Ｏ，ＩＮ　Ｎ
ａ０Ｈ）■元素分析値炭素：約３８〜５２％、水素：約５〜８％、窒素：約８
〜１２％ ■蛋白質、糖含量蛋白質：約６３〜８１％、ａ：約６〜１７％■赤外線吸
収スペクトル３４００〜３２ＧＱｃｍ　−’　、　２９２Ｑ〜２９６
０ｃｍ　−’、　１６５０ｃｍ　−’付近および１５４
０〜１５２０ｃｍ−’ｌこ特性吸収を有する。

本発明抗腫瘍性物質は、後記実施例に示す如く、その一
定量を、ＩＣＲ系マウスに移植したザルコーマ１８０腫
瘍に対して局所注射したところ、平均腫瘍抑制率は６５
．８％（最高８９．５％）、腫瘍完全退縮数は最高３／
４という驚くべき抗腫瘍性を示した。

上記のように本発明の物質はいずれも温血動物、たとえ
ば人、家畜、家禽、犬、猫、ウサギ、ラット、マウスな
どの各種の腫瘍特に治療の困難性が指摘されている固型
腫瘍に対してすぐれた抑制作用を示す。

マウスに移植したザルコーマ１８０腫ｉ、５Ｎ−３６腫
瘍、ＭＭ−４６腫瘍、ＣＣＭ腺癌、ＮＴＦＩｌＩｌ網細
胞肉腫、エールリッヒ腫瘍などの発育は、本物質を腫瘍
細胞移植前、移植後あるいは移植と同時に腫瘍内、腹腔
内、静脈内もしくは皮下に、あるいは経口的に１回もし
くは繰り返して、１回当りの投与量が約ｌ〜１．０００
＋ｎｇ　／　ｋｇとなるように投与することにより顕著
に抑制された。

本物質の毒性はきわめて低く、たとえば急性毒性試験に
おいてマウスあるいはラットに経口投与および腹腔内投
与した時のＬＤ５０値はそれぞれ５ｇ／ｋｇ以上、２ｇ
／ｋｇ以上であり、人に対しても安全に反復投与するこ
とができる。

投与方法としては腫瘍治療における一般的な方法を適用
できる。それは腫瘍内、皮下、静脈内もしくは必要に応
じて筋肉内への注射、経口投与、直腸内への投与および
外用剤として塗布、点滴などが可能である。投与量およ
び投与スケジュールは患者および腫瘍の種類、症状など
を勘案して適宜選択でき、一般には一回約０．２〜２．
０００ｍｇ／　ｋｇ体重を１日１〜６回投与するのが好
ましい。特に注射剤の場合、１日当り１〜２．０００ｍ
ｇ　／　ｋｇ程度、好ましくは３〜５００ｍｇ／ｋｇ程
度がよい。

本物質は他の抗腫瘍剤と併用することもできる。

免疫学的効果の増強をもたらすような併用は特に効果的
である。

本発明の抗腫瘍物質は、上述の如くそれ自体医薬品とし
て使用できるが、更にこれを分画して使用することもで
きる。

次に実施例を挙げて説明する。

実施例１キクムラサキウニより生殖巣以外の内１１１１．０６ｋ
ｇ（湿重量〉を集め、これに０℃の生理°食塩水ＩＯ倍
量を加え、氷冷しつつワーリング・ブレンダーにより４
分間攪拌してから１分間攪拌を中止し、さらに４分間攪
拌して抽出を行なった。

抽出液を冷却遠心分離機により１６，０ＯＯＧ　（０℃
）で２０分間遠心分離して得た土浦液を、ダイアフロー
（ＤＩＡＦＬＯ）　Ｐ　Ｍ　−１０により限外濾過して
ｍ１ｉＬ、濾過されなかった分子量１０．０００以上の
区分を凍結乾燥し、５ｇの粉末（ＳＵ−２００）を得た
。この物質の物理化学的性質は下記の如くである。

（１）元素分析値炭素二５０．７０％、水素二ア、２２％、窒素：８．５
６％（２）分子量（分子篩による〉１０、０００以上（３）旋光度［α）　：０：　０　（Ｃ＝０．１％、　Ｏ，ＩＮ　Ｎ
ａ０Ｈ）（４）紫外線吸収スペクトル第１図参照（５）赤外線吸収スペクトル第２図参照（６）酸性、中性、アルカリ性の区別弱酸性（ｐ）１５〜６）（７）物質の色淡黄色（８）蛋白質、糖含量蛋白質＋６３．８％、糖二６．７％実施例２キクムラサキウニより生殖巣以外の内１３１１．０６ｋ
ｇ（湿重量、）を集め、これに０℃の生理食塩水１０倍
量を加え、氷冷しつつワーリング・ブレンダーにより４
分間攪拌してから１分間攪拌を中止し、さらに４分間攪
拌して抽出を行なった。

抽出液を冷却式遠心分離機により１６．０ＯＯＧ　（０
℃）で２０分間遠心分離して得た土浦液を、ダイアフロ
ーＰＭ−１０により限外濾過して濃縮し、濾過されなか
った分子１　ｔｏ、　０００以上の区分を凍結乾燥して
５Ｕ−２００の粉末５ｇを得た。

この粉末を少量の０．ＯＩＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７，
５）に溶解し、同じ溶液で緩衝化した７００ｍ１のＤＥ
！ＡＢセファローズ（ＳＢＰ）ＩＡＲＯ３Ｂ）　ＣＬ　
−６Ｂ　、（ファルマシアジャパンＫＫ製）を充填した
カラム（直径５ｃｍ。

長さ３５ｃｍ）に吸着させ、次いで０．０１ＭＩＪン酸
緩衝液（ｐＨ７，５）で溶出される画分を分取し、これ
をＶＩＳＫＩＮＧ　ＣＯＭＰＡＮＹ製シームＬｚスセル
ｏ−スｆｓ−ブを用い、蒸留水（４℃）に対して４８時
間透析してから凍結乾燥し７２３ｍｇの乾燥粉末（ＳＵ
−２１０と称す）を得る。この物質の物理化学的性質お
よび生物化学的性質は下記の如くである。

（１）元素分析値炭素：５１．１５％、水素二ア、２９％、窒素：８．０
３％（２）分子量（分子篩による〉１０、０００以上（３）旋光度［α］’：、０：　０　　（Ｃ＝０．１％、　０．　Ｉ
Ｎ　Ｎａ０Ｈ）（４）紫外線吸収スペクトル λ号ｍａＯＨ：２　Ｂ　４　ｎｍ（５）赤外線吸収スペクトル第３図参照（６）蛋白質、糖含量蛋白質：６５．５％、糖＝７．５％（７）物質の色淡黄色（８）抗腫瘍活性実施例３参照画分５Ｏ−２１０を溶出した後、０．０７Ｍ　ＮａＣｌ
２を含む同緩衝液で溶出せる区分を分取し、上記と同様
な処理により６８７　ｍｇの乾燥粉末（ＳＵ−２２０と
称す）を得る。この物質の物理化学的性質および生物化
学的性質は下記の如くである。

（１）元素分析値炭素：３Ｂ、３８％、水素：５Ｊ２％、窒素：１０．３
０％（２）分子量（分子篩による）１０００ｔ）ＪＪ上（３）旋光度Ｃａ〕二〇：　Ｏ（Ｃ＝０．１％、　Ｏ，ＩＮ　Ｎａ０
Ｈ）（４）紫外線吸収スペクトル λ　二：、１ｌａＯＨ、２８０ｎｍ（５）赤外線吸収スペクトル第４図参照（６）蛋白質、糖含量蛋白質：６３．７％、糖：８．４％（７）物質の色淡黄色（８）抗腫瘍活性実施例３参照画分５Ｕ−２２０を溶出した後、０．２ＨＭ　ＮａＣ１
を含む同緩衝液で溶出せる画分を分取し、上記と同様な
処理により１．３０８ｍｇの乾燥粉末（ＳＵ−２３０と
称す）を得る。この物質の物理化学的性質および生物化
学的性質は下記の如くである。

（１）元素分析値炭素：４３．５７％、水素：５．９１％、窒素：１１．
２３％（２）分子量（分子篩による）１０、０００以上（３）旋光度Ｃ’ｒ）　、ｏ、　０　（Ｃ＝０．１％、Ｑ、ＩＮ　Ｎ
ａ［］１（）（４）紫外線吸収スペクトル λ　二：Ｘ””：　　２　８　２　　（ｓｈ）、　　　
２　８　９　　（ｓｈ）ｎｍ（５）赤外線吸収スペクト
ル第５図参照（６）蛋白質、糖含量蛋白質：８０．４％、糖＋１６．６％（７）物質の色淡黄色（８）抗腫瘍活性実施例３参照画分５Ｕ−２３０を溶出した後、１．００Ｍ　−１ａｃ
Ｑを含む同緩衝液で溶出せる画分を分取し、上記と同様
な処理により４９９ｍｇの乾燥粉末（ＳＵ−２４０と称
す）を得る。この物質の物理化学的性質および生物化学
的性質は下記の如くである。

（１）元素分析値炭素：４３．３４％、水素：５．９９％、窒素：９．３
３％（２）分子量〈分子篩による〉１０、０００以上（３）旋光度〔ａ〕：ｏ、　０　（Ｃ＝０．１％、　０．１Ｎ　Ｎａ
０Ｈ）（４）紫外線吸収スペクトル λ号、ＮａｏＭ、　２８６ｎｍ（５）赤外線吸収スペクトル第６図参照（６）蛋白質、糖含量蛋白質ニア２．０％、糖：８．６％（７）物質の色淡黄色（８）抗腫瘍活性実施例３参照なお、５Ｕ−２００をＤＲＡＢセファローズカラムに付
したときの溶出パターンを第７図に示した。

実施例３体重的２３ｇのＩｃＲ系マウスの右鼠径部皮下に２Ｘ１
０’個のザルコーマ１８０腫瘍細胞を移植し、移植後４
．６．８日目に１日１回、３日間実施例１および実施例
４で得た画分５Ｕ−２１０，５Ｕ−２２０，５Ｕ−２３
０，５Ｕ−２４０を腫瘍内に投与した。移植後３５５日
目腫瘍結節を摘出してその重量を測定し、無投与対照群
のそれと比較して腫瘍阻止率を算出した。

なお試料は注射用蒸留水に懸濁もしくは溶解して投与し
た。各検体の腫瘍阻止率を第１表に示す。

以下余白第１表実施例４直接細胞毒性の検討は、マウス由来Ｓ−１８０肉腫細胞
培養系（細胞数３Ｘ１０’）に各試料を加え４０時間後
の殺細胞能を算出したがｉｎ　ｖｉｖ。

において抗腫瘍性を示した両分はいずれも１ｎｖｉｔｒ
ｏにおいてＳ−１８０肉腫細胞に対して０．１ｍｇ　／
　ｍｉ！の濃度でも平均４０％程度の弱い細胞増殖抑制
効果を示したにすぎなかった。

注ｌ）阻止率（％）対照区腫瘍部平増重量処理区腫瘍部平増重量対照区腫瘍部平増重量 ×１００実施例５画分ＳＵ−２３０１ｇを注射用蒸留水（もしくは生理食
塩水）　１．０００ｍ１に溶解、濾過し、濾液を５０　
Ｏｄずつアンプルに分注、溶閉後常法により加熱滅菌す
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は５Ｕ−２００の紫外線吸収スペクトル、第２図
は５Ｕ−２００、第３図は５Ｕ−２１０、第４図は５Ｕ
−２２０，第５図は５Ｕ−２３０、第６図は５Ｕ−２４
０の各赤外線吸収スペクトル、第７図は５Ｕ−２００を
ＯＦ！ＡＨセファローズカラムに付したときの溶出パタ
ーンを示す。以上

Claims

【特許請求の範囲】１、棘皮動物の生殖巣以外の内臓の水性溶媒抽出物で、
次の物性、（１）分子量（分子篩による）１０，０００以上（２）塩基性、酸性、中性の区別弱酸性（ｐＨ５〜６）（３）物質の色淡黄色（４）比旋光度〔α〕＿Ｄ＾２＾０：０（Ｃ＝０．１％、０．１ＮＮａ
ＯＨ）（５）元素分析値炭素：約３８〜５２％、水素：約５〜８％、窒素：約８
〜１２％（６）蛋白質、糖含量蛋白質：約６３〜８１％、糖：約６〜１７％（７）赤外
線吸収スペクトル３４００〜３２００ｃｍ＾−＾１、２９２０〜２９６０
ｃｍ＾−＾１、１６５０ｃｍ＾−＾１付近および１５４
０〜１５２０ｃｍ＾−＾１に特性吸収を有する。を有する抗腫瘍性物質。２、棘皮動物の生殖巣以外の内臓の微細化物を水性溶媒
で抽出し、この抽出液を限外濾過、ゲル濾過、透析、有
機溶媒沈澱、イオン交換樹脂処理、塩析、電気泳動から
なる群から選ばれた一つ以上の処理に付して分子量１０
，０００以上の画分を採取することを特徴とする抗腫瘍
性物質の製造法。