JPS58148825A - 棘皮動物由来の抗腫瘍性物質並びにその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 し、さらに詳しくに韓皮動物の水性ｍＷ．抽出物でおる
倉埃な抗腫瘍性物質並びにその製造法に関するものであ
る。

天然物質からの非細胞−Ｉｓ性の癌化学療法剤として抗
腫瘍性物質が１９６４年頃エジ注エリれるようになり、
笹からのパンフォリン又はサルノコ／カク．ンイタク、
７０キクラゲ、ウラジロコウヤクタケ、チャヒラタケ等
の担子菌類熱水抽出エキス、細鉋類、酵母類、地衣類か
らの多糖類等が細胞毒に起因せずに顕著な抗腫瘍性を示
すことが報告されている。

本発明省らも非細胞毒性の癌化学療法剤の囲発ｒ企画し
て研光を行い、一連の鍋等植物及び倣生物からの多糖類
が宿王介在性抗＠ｗＪ性を示すこと奮発茫した。しかし
ながら、それらに抗癌スペクトルが狭く、臨床的利用に
は限界があるので、エリ広い仇怖スペクトルを有し、か
つ畑力な丼帷胞毒性抗裡場創を孝めて沃素し、ズ〕象と
して／ｇＪ陣生寄生物目して鎖式した結果、軟捧１ｊ物
刀・ら帰られる筒分子画分が抗腫瘍性を有することを確
かめ、先に有ト出顧した（峙囲昭５２ーｉ２２６１２ン
。

本弁明省らにさらに慇洋生物の抗腫瘍性物質について幼
児した結果、株皮＠物から優られる筒分子画分にさらに
凌れた抗腫場注？廟することを見出し、本発明を光取し
た。

従って、本発明は、韓皮動物から帰られる１１規な抗腫
瘍性物質並びにその製造法を提供するものである。

本発明の抗腫瘍性物質は、？ｌＪえは練成動物の微細化
物を水性ｍ媒で佃出し、この抽出液τ限外Ｃ過、ゲルｆ
′過、透析、有愼浴媒沈駅、イオン交換側ｎ＝処理、塩
析及び電気体動からなる群から選ばれた一つ以上の処理
に付して分子量１０、００３以上の一分を採取すること
によＶ製造される。

韓皮動物に汀、二ホンウミシダ（　ｅｏｍａｎｔｈｕｓ
ｊａｐｏｎｉｃａ　）等が属する有ｆｆｉＭ、ヒトデ（
Ａｓｔｅｒｉａｓａｍｕｒｅｎｓｉｓ　）　、クモヒト
デ（　Ｏｐｈｉｏｐｌｏｃｕｓ　ｊａｐｏｎｉ−ｃｕｓ
　）等が属する星形類、ムラサキウニ（Ａｎｔｈｏ−ｃ
ｉｄａｒｉｓ　ｃｒａｓｓｉｐｓｉｎａ　）　　、−ｖ
す一ｖ　：＋　（　Ｓｔｉｃｈｏｐｕｓｊａｐｏｎｉｃ
ｕｓ　）　　等が風すゐウリ型類の３叱門があり、本発
明では、当該物’Ｊ［を含むものは何れをも原料として
使用できるが、就中ムラサキウニが特に好筐しい。

こｎらの練成ｖＪ′ｖＩＪのうち、ウニ類、ナマコ類は
食用に供されているが、時ｈｃウニ類はその生殖巣のみ
が、生食或は力Ｕ上用として利用され、生殖巣を採取し
た残りの斂（ランタン會含む）シ・工び内ｉＩに発莱さ
ｎるか、せいぜい磯釣り等の１１４（コマセ）として利
用されているにすき゛ない。本発明のｍｉｉ、ウニの生
殖巣にも含有されるが、叙および内臓にもそれぞれ含有
されるので、ウニを原料とした場合には上記の廃棄物列
用という点から見ても産菓的重味を待つものでろゐ〇 本発明ＦＣより、韓反ＶＪ吻力・ら抗腫嚇注吻實を慢る
にに、１ず練反動物υ叡、生殖巣又はその他の内ｒ１．
にワーリングーフレンター、超音波処理等ＶＣよって破
砕して倣動化物とする。

次いでこの倣動化物を水注浴媒で抽出する。

水注磐啄としては、水、谷柚塩胡各液、あるいハ低級ア
ルコール、アセトン、ジオキサン等の廟愼浴媒と水との
混合ｍ媒が１更川される。抽出は通′ｇ低處ないし室温
で付われる。抽出′Ｑ、は遠心分離、Ｃ過等によって非
水浴性区分と分離した後、限外１過、ゲル１過、透析等
によって脱塩し、必費があれば限外１遇、減圧製編等に
工って濃縮する。

上記のごとくして優られた抽出物はさらに分子量分画し
て分子量１０，０００以上の両分を採取する。その方法
としては、例えば超遠心分離、限外１過、ゲルＣ過、イ
オン交愕体処理、透析、−析、耐媒沈殿、電気泳動など
篩分子複合鑞白實矩の分画に使用さｎる方法を使用する
ことができな。

上記の方法にＬ！ｌ１ｇＲ反動物から水性溶液Ｖこよっ
て抽出され、分画、精製されたものは溶液状昨あるいに
乾燥状態に調整し、抹存することができる。

貼くして帰られる本発明の抗層珊注物實は次の工うな物
性を七する。

■分子量（分子飾によるプ １０．０００以上 ■塩基性、敵性、中性の区別 弱酸性（ｐＨｓ〜６ン Ｑ）物置の巴 淡黄色 ■比旋光度 〔α）２０：ｏ（ｃ＝ｏ＋％、　０．］　ｈ　Ｎａ（Ｈ
）■〕 向当該仇報→注吻誓は、練反鯛物の１更用肺ｑにニジ、
次１こ示す物性を少しく異にするＯａ、　　Ｏ工９舟ら
れろも；ｖ　（５Ｕ−１００物實）■元素分析値 炭素：ｌ′）４５〜５５％、水素：杓７〜８チ窒索：ｆ
１９〜１０％ Ｘｆ！、）蛋白賃、糖含量 １ｔ　臼　實　　：　希タ　７　０　　％　、　　糖　
　：　約　　ｌ　　Ｏチロ生殖巣果以外の内臓より帰ら
れるもの（５Ｕ−２００？／ｌ負　） ■元素分析１旦 炭素：ｒｒ４ｓ〜５５％、水素：約７〜８％窒素；ｔ〕
８〜９％ ■蛋白質、糖含量 蛋白＊：約６０〜７０チ、糖：約６〜７チＣ１生噴果か
ら侮られるもの（５Ｏ−３００物實）■元素分析値 炭素：約４５〜５５チ、水素：約７〜８チ鴛素：豹５〜
６％ ■蛋白質、糖含量 蛋白貞：約４０〜５０％ 糖　：約４０〜５０％ 不弁明仇腫ｗＩ註吻買は、実り例に示す如く。

その一定ｉｉヲ、ＩＣ）Ｌ系マウスに移植したザルコー
マ１８０ａ砺に刈して局所圧射したところ、平均穐場仰
制４は９９．９％、雁ｊｔＩｈ完全退縮数はこという嶌
くべき抗腫−！Ｅを示した。

上記のように本発明の物質はいずれも混血動物、たとえ
ば人、家畜、家萬、大、横、ウサギ、ラット、マウスな
どの各棟の雁嬌荷に治療の困難性が指撤されている固型
腫瘍に対して丁ぐれた抑削作用全示す。

マウスに移植したサルコーマ１８０臘瘍、５Ｎ−３６肺
嚇、ＩｖＬＶ　−４６嘘嚇、Ｃ（、’Ｍ　＠癌、ＮＴｆ
’細＃３細胞３細胞肉輔ルリッヒ層珊などの発育は、本
′＠實全腫瘍細施移植前、移植後あるいは移植と同時に
軸弱内、腹粉内、静脈内もしくに皮下に、あるいに経口
的に１回もしくは繰り返して。

１回当りの投与量が約１〜１，０００ダ／にノとなるよ
うに投与することにより顕著に抑制さ１した。

本物貞のＩＩ性にきわめて低く、たとえば急性有性試練
においてマワスめるいにラットに経口投与お工び復粉内
投与した時のＬＤ５ｏ憧はそれぞ扛５　？／にノ以−ヒ
、２　ｔ／ｋｆ１以上であり、人に対しても安全に反復
投与することができる。

投与方法としては裡場旧僚における一般的な方法を通則
できる。−ｔＩＬに腫場内、皮下、静脈内！＋Ｌ＜は必
要にＬしじて肋間（ハ）へのび射、経口投与、＠場内へ
の投与および外用剤として塗布、点部などが口」ｂヒで
めろ。投与量および投与スケジュールは前者お工び願嚇
の種類、症状などを勘案して適宜適訳でさ、一般には一
回豹０．２〜２．０００〜／ｋｙ体重會１日１〜６回投
与するのが好フしい。待に注射剤の場合、１日当り１〜
２．０００＋ψ／ｋｙ程曳、好ましくは３〜５００■／
ｋｉ程度がよい。

本？！ｌ買は他の抗腫瘍剤と併用することもできるＯ完
投学的効果の壇毀ｒもたらすような併用は特に効果的で
ある。

本発明の抗腫劫吻買は、上述の如くそ几自体医業品とし
て便用できるが、更にこ７’Ｌを分画して使用すること
もできる。

次に実見？１ｊケ挙けて説明する。

実施例１ 生哨果を宮む全ての内臓を除去したムラサキウニの殻３
．２ｋｙ（直重ｔ）會チョッパーにかけて砕いてからマ
スコロイダーにょす倣粒化したものに、ＯＣの生理食塩
水１０倍ｍを加え、冷却ジャケットの付いたステンレス
容器内でポリトロンにエリ８分間攪拌抽出した。

抽出液全冷却式遠心分離＋Ｍにょｒ）１６．ｏｏｏＧ（
ＯＣ）で２０分遠心分離して？Ｉた上清液量。

ダイア７ｏ−（ＤＩＡ）’ＬＬＪ）ＰＭ−１０（７ミコ
：ｙｋｃｋｙ製）により臓外Ｃ遇して分子１ｉ１０．０
００以上の区分を優、凍結乾燥し２４．６ｉの乾燥粉末
（８０−１，００）を舟た。

かくして帰られたＳＵ−＋ｏｏｖＩＪ簀の理化学曲性ｔ
ｋ　ｉｚ次のとおりであり。

（１）元素分析１１Ｍ 炭素：５１．３４％、水素ニア、４３チ室索：９．７４
チ （２）分−ｔ−１１ＩＬ（分子師によ０）１０．０ＯＬ
＋以上 （３）比旋元曳 〔ｔｌ〕２０’、　　０　（Ｃ＝０．１　％　、　０．
Ｉ　Ｎへａｏｌ−１）（４）糸タト耐吸収スイクトル 第１図１照 （５）赤夕■悔吸収スペクトル 第２図１照 ｔ６＋　らヒＡ（注、　酸性　、　甲セト　シ）Ｌ≦乃
１ｊ弱叡性（ｐｆ−１ｓ〜６ン （７）物置の色 次黄色 （８）蛋日誓、糖會童 宙白貞ニア０．６チ、楯：１Ｏ，Ｓチ （９）抗腫劫瞭を占トＦ 実施例４参照 実施例２ ムラサキウニより生哨果以外の内臓１．０６にノ（直重
電）を集め、これｔ’ｃ　ｏ　ｃの生理食塩水１０倍ｔ
を加え、水乍しつつワーリング・ブレンダーｙｃより４
分間攪拌してから１分間攪拌を中止し、さらに４分間撹
拌して抽出を行なった。

抽出液を冷却遠心分離愼にＪ：！１）１６．０００Ｇ（
ＯＣ）で２０分間遠心分離して寿た上清ｇ、を、タイ７
７　ｏ　−ＰＡ４−１０　　Ｋ！　ｌ）ＩＭ外Ｐａして
濃縮し、１辿さｎなかった分子＠ｔｏ、ｏｏｏ以上の区
分を凍結乾燥し、５１ｉＬの松本（５Ｕ−２００）全優
た。この物質の物理化学的性貿は下記の如くである。

＋１）元素分析値 炭素：５０．７０％、水素ニア、２２％窒素：　　８．
５６チ （２）分子ｔ（分子帥による） １０．０００以上 （３）旋光度 ２０ 〔α〕　　、０（Ｃ＝０．１％、ｏ、ＩＮ　ＩＮａ（Ｊ
ｒ４　）（４）架外線吸収スペクトル 第３図膠照 （５）赤外糎吸収スペクトル 第４図参照 （６）酸性、中性、アルカ’Ｊ　ｆｆの区別弱酸性（１
）８５〜６） （７１物誓の芭 淡黄色 （８）粛臼負、楯含蓄 蛋臼貞：　６３．８％、楯：６．７チ 実施例３ ムラサキウニの生殖果８ＯＯ？（直重電）を渠め、こｎ
ＶこＯＣの生虐亥鳴水１０倍省を力臼え、冷却しつつワ
ーリング・プレンターにＬｖ４分間撹）ギしてから１分
間撹拌を甲止し、さらに４分１ｉ、１　ｆｆ押して抽出
ｒｈった。抽出Ｍを冷却遠心分潅蒙によす１６．す０Ｏ
Ｇ（ＱＣ）で２０分間遠心分隠して埼た上嘴液をタイア
フロ−Ｐ　ｔＶ−１０によ−ｖ限外１遇して襄帰し、１
遇されなかった分子−１ｌＯ，０００以上の区分を凍結
乾燥し、１２６．２７の粉末（５Ｕ−３００）を舟た。

この物質の物理化学的性買は１記の叩くである。

ｔｌ１７［：索分析イ直 炭素：　５１．７７％、水素：　７．１２チ窒素：５．
４４チ （２）分子１（分子量によるン １０、ＪＯ以上 （３）旋光度 〔α〕　：０（Ｃ＝０．１％、　０．Ｉ　Ｎ　Ｎａ（Ｊ
Ｈ）（４）紫外ｆ＃吸収スペクトル 第５図参照 （５）赤外線吸収スペクトル 第６図参照 （６）酸性、アルカリ注、中性の区別 弱酸性（９日５〜６） （７）物質の色 淡黄色 （８）虫白貞、楯含重 宙日貞：　４３．５チ、砧：　４３．３チ実ＩＭ例４ ５Ｅ泊果ゲ苫ひ全ての内≠を味去したムラサキウニＶ）
叡３．２ｘ）（湿電電ンｔチョッパーにかけて砕いてか
ら、マスコロイターレこより微粒化したも■に、ｏ　Ｃ
■主理食鴫水１０倍電を）ＪＤえ、市ム１ｊジャクノド
の付いたステンンス谷央内でボ１）　トＣｌンにエリ８
分間撹件佃出した。

抽出液？市却式遠七分咄慎によつ１６．０００Ｇ（ＯＣ
）で２０ガ遠七・分離してＩ＠た上嘴液を、−タイアフ
ロ−（１ＪＩＡＦＬｕ　）　ＰＮＮｉＯ２アミコｙＫＫ
％　）　ＩＣより城外ｆ２遇して分針１ｊｉｌＯ，００
０以上の区分ｋＮ、沫結転結乾燥４．６ノの乾燥粉末を
侮ｆ？−Ｏ このケ木τ少電の０．０］＋〜１リン酸緩衝液（ｐＨ７
，５）に浴解し、１５」じ浴液で緩備化した７００ｍｔ
　ｖＤＥＡＬＪセフ　７　ｏ−ズ（ＳＥＰＨＡＲ（ＪＳ
ｇ　）　ＣＬ−６８（ファルマ７アジャパンＫｔｔ、候
）’に充積したカシム（直住５ｃｒｎ、長さ３５αンに
吸看させ、次いでｕ、ｏ　Ｉ　Ｍ　’）ノ酸緩伽液で浴
出される画分を分取し、ダイアフローＰＭ−１０により
＠外１遇して濃動恢、１遇されない分子量１０．０００
以上の１分音ＶＩＳＫＩＮＧ　ＣＯＭＰＡＮＹ製シーム
レスセルロースチューブを用い、蒸貿水（４Ｃ）に対し
て４８時ｒｌｌ！ｌ透析した。遺析終了恢それぞれの区
分を凍結＃ｆＬ珠して８４１〜の乾課粉本（５Ｕ−１１
０と称す）ｋｆ’ｌする。この＠質の物理化学的注實及
び生物化学的性質に下記の如くである。

ｔｌ１元素分析値 炭素：　４　Ｌ４２チ　水素：６．７９囁電素：　　９
．８０チ （２）分子１１（分子量にＬ６） １０．０００以上 （３）旋光度 ［ａ］”　　：　　０　（（：：＝：Ｑ、ｌ　％　、　
０．１Ｎ　ｈａ（Ｊｒ、　）（４１索外縁吸収スペクト
ル λｔＮＮａＯＨ、ｚｓｓ、、。

（５）赤外線吸収スペタトル ｗＪ７図＃照 （６）蛋白買、Ｓ言重 宙臼貝：６９．２ｑｂ、糖：　１０．０％（７）物置Ｑ
色 吹遠色 （８）抗軸慟粘性 実施し１」７　参照 １ｆｆｌ１分５ｌｊ−ｔ１ｏを浴出した佐、次いで０．
０７ＭＮａＣｄ　　を含む同緩＃Ｉ液で浴出せろ区分を
分堆し、上記と同様な処理ｌＦＬ工Ｑ　１６０　ｍ９り
乾燥粉末（ＳＬｊ−１２０と称す）を帰な。Ｃの物置の
物理イ［字おけ買及び生物化学８’Ｊ　ａ　ｍは下６己
の如くであるＯｎ　７Ｉ：素分析＋ｌＪＬ 炭素：３６．４１％　水素：　５．１４％窒素：　１０
．０５％ （２１分子電（分子篩に工ゐう １０．０００以上 （３）炭π反 〔α］２０：　　０　　（Ｃ＝＝ｏ、ｔ　％　、　ｏ、
Ｉ　Ｎ　　ＮａＵｋｉ　　）（４）紮外綜吸収スペクト
ル （５）赤外（２）吸収スペクトル 第８図診照 （６）蛋白質、砧含誓 蛋白質：　４７．３チ、糖：５．２チ （７）物質の色 淡黄色 （８）抗腫＠活性 実施例７癖照 ５Ｕ−ｔ２ｏ１＠出した佐、０．２５　Ｍ　Ｎａ（Ｊ　
　’に含む同緩適液で浴出せる区分を分取し、−上記と
同様な処理により４５７ダの乾燥粉末（８［Ｊ−１３０
と称す）を優る。この物質の物理化学的性質及び生物化
学的性負は下記の如くである。

（１）元素分析値 炭素：　４４．３７％　水素：　６．０４　％望索：１
１．９６％ （２）分子１１ｔ（分子飾による） １０．０００以上 （３）旋光度 〔α〕ｏ　・０（Ｃ−０，ｌチ、０．ＩＮＮａ（ＪＨ）
（４）鈷外線吸収スペクトル λ１ＮＮａ０Ｈ２８２，２８９ｍｍ （５）赤外線吸収スペクトル 第９図８照 （６）蛋白質、糖含電 蛋白Ｗ　：　７７．６チ、糖：］４４．６％７）物質の
色 淡黄色 （８）仇腫場粘註 実力千巨１タリ　７　参照 ｍＯｓし−ｘ３ｏを浴出した佐、１．ｏＭへａ’ｌｅを
含む回緩膏ぞで俗出せる区分を分取し、上記とＩＬ」ｈ
　　な　’ａａｔこ　ｊｐ３４７／１ｌ１７＆Ｊ　乾す
軟扮　　末　（Ｓ［Ｊ−１，ｓ。

と部子）を帰る。こＣ／）吻貨の物理化学的「を貿及び
生物１１字的注誓は一１６ｃの如くであるつ（１）元素
分析値 炭素：４１．６８％　水素：５．６８チー４素：１０．
５６％ （２）分子讐（分子篩（てよる） ｌＵ、ｏｏＯ以ヒ （３１贋光曳 〔α）Ｄ　：　Ｏ（Ｃ＝０．１％、０．Ｉ　Ｎ　Ｎａ（
ＪＨ）（４）畜外ｋＭ吸収スペクトル λ１Ｎ”０Ｈ’、　２８１．５　（ｓｈ）、　　２８９
　（ｓｈ）ｍｍ（５）赤外線吸収スペクトル 第１０図診照 （６）蛋白質、抛含讐 蛋白質：３８．４チ、抛：６．９チ （７）吻＾の色 淡黄色 （８）抗腫場粘性 実施例７蚕照 なおδＵ−１ｏｏ　−ｑ　１）ＥＡＥセファロースカラ
ムにけしたときの浴出パターンを第１９図に示した。

実施）タリ　５ ムラサキウニエリ生殖巣以外の内臓１．０６に７（湿車
′ｔＩｉ）全染め、こ＃ＬＫＯＣの生理食塩水１０借閂
を加え、水冷しつつツーリング、ブレンターにより４分
闇攪件してから１分間撹拌を中止し、ざらＶ（４分ｉ口
）攪拌して抽出を行なった。

抽出液を〜却遠心分離慎によジ１６．００００（ＯＣ）
で２０分間遠心分離して慢た上清液を、タイアノローＰ
ｌνｌ−１０にＬ９限外Ｃ遇して横線し。

Ｗ−４遇されなかった分−ｊ’１ｉｌｏ、０００以上の
区分を凍結乾探して粉末５ｚケ舟た。

この粉本ゲ少菫の０．０　］　Ｎｉ　ＩＪン酸緩衝液（
ｐＨ７５）に俗所し、実施例４と＋ｃｒＪ　Ｕカラムに
吸着させ、次いでｏ、ｏ１Ｍリン歌緩＃液（ｐＨ７，５
）で磐田される画分を分取し、これをνｌ５ＫＩＮＵＣ
Ｕｌ〜ｉ　ｌ’　Ａ　ＩＮ＼製／−ムレスセルロースチ
ューブを用い、蒸留水（４Ｃ）に刑して４８時間透析し
てから保粕乾探し７２３〜の乾燥粉末（５Ｕ−２１０と
称丁）を帰る。この物質り物理化学的性質及び生物１ヒ
字的江□貞に下記の如くであり０ｆｉｌ　７［：索分析
１回 次系：　ｓ　１．１ｓ％　水素：　７．２９チ室索：　
　８．ｏ３％ （２）分子１ｉｔ（分子飾による） ］００．０００以 上３）旋光度 〔α］２００　（Ｃ＝ｏ、１％　、　０．Ｉ　Ｎ　Ｎａ
（Ｊｂ４　）（４）紫外線吸収スペクトル （５）赤外線吸収スペクトル 第１１図奈照 （６）蛋白貞、糖會讐 蛋白實；　６５．５チ、抛ニア、５チ （７）物質の色 淡黄色 （８）抗種場清性 実力例８＃照 画分５Ｕ−２１０ｉ％出した後、０．０７　Ｍ　ＮａＣ
１ｆｆｉ含む同緩衝液で俗出せる区分？分取し、上記と
間挿な処理に’ｃＬＱ６８７ｑの乾燥粉末（ＳＬ＋−２
２０と称す）を帰る。この物質の物理化学的性質及び生
物化字的注′ＪＭは下Ｑｔの如くである。

（１）元素分析値 炭素：　３８．３８チ　水素：　５．３２％室索：　１
０．３０％ （２）分子ｉｔ（分子ｄＫ！る） １０．０００　以−七 （３）脣丸曳 〔α〕、　　、　０　（ｅ＝（１，１％　、　０．Ｉ　
ＩＮ　Ｎａ（ＪＨ）（４）紫外線吸収スペクトル λＩＮＮ＆ＯＨ：２８ｏｏｒＴ。

（５１赤外紛吸収スペクトル 第１２図蚕照 （６）蛋白貞、砧＠電 粛白ｊ７：６３．７％、糖：８４％ （７）物質９色 炊黄色 （８）仇祿＠ｌ′ｉ！５性 央り例８＃照 自分さＬｉ　−２２０を俗出した後、１１．２５Ｍ１へ
ａ（ｌβを宮む１０」ｖｉ慟液で浴出せる自分を分取し
、上記とｌＯＪ’ＡｌｖＬ：ｆＭＦ　Ｌ　ｙ　１，３＋
１８＋＋ｙ）乾燥粉末（５Ｕ−２３０と柚子）を帰る。

この物質の物理化学的性λ及び生物化写８′ｊ性貿は一
トｉ己り如くである。

（１）元素分析値 炭素：　４３．５７チ　水素：５９１チ屋累：１１．２
３％ （２）分子′ｉｔ（分子飾による） １０．０００以上 （３１旋光度 〔α］コニ　０　（Ｃ＝０．１　％　、　０．１　Ｎ　
Ｎａ（Ｊｌ（）（４）紫外線吸収スペクトル λ１Ｎ　”０Ｈ−２８２（ｓｈ）　　　、　　２８９　
　（ｓｈ）ｎｍ（５）赤外線吸収スペクトル 第１３図診照 （６）蛋白員、糖含誓 蛋白−：８０．４％、樟：　１６．６％１７１　′９Ｊ
ＪＪの色 淡黄色 （８）抗腫鵜活性 実施例８＃照 画分５Ｕ−２３０ｆ　射出シタ彼、１．００　Ｍ　Ｎａ
（Ｊ　ｋ含む同緩衝液で俗出せる両分を分取し、上記と
同様な処理管コより４９９９の乾燥粉末（ＳＵ−２４０
と称す）を慢な。この物質の物理化学的性質及び生物イ
ヒ学的性＊は下記の如くである。

（１）元素分析憧 炭素：　４３．３４チ　水素：５．９９チ窒素：　　９
．３３％ （２）分子電（分子篩にぶる） １０．０００以上 （３）旋光度 〔α’：＋２０：　０　（Ｃ＝ｏ、１％　、　ｏ、ｌＮ
　ＮａＯＨ）（４）索外耐吸収スペクトル λｒＮ　ＮａＯＨ，２８６ｎｍ ｍａＸ　　　　　　’ （５）赤外線吸収スペクトル 第１４図参照 （６）蛋白′鹸、糖含量 蛋白′員Ｓ　７２．０チ、　砧；８．６チ（７）物質の
色 淡黄色 （８）抗腫場粘性 実歴ｍ」ｓ参照 なお、’５Ｕ−２００をＩＪＥＡＥセファローズカラム
にけしたときの醇出ノくターンを第２０図に示した０ 実施例６ ムラサキウニからの生殖巣８００）（直重１ｌｉ）を楽
め、これｖｃ　ｏ　ｃの生理食塩水１０倍！金別え、水
冷しつつワーリング・プレンダーにより４分間攪拌して
から１分間攪拌を中止し、さらに４分間攪拌して抽出を
行なった。

抽出液全冷却遠心分離機にエリ１６．００００（ＯＣ）
で２０分間遠七・分離して舟た上清液を、ダイアフロー
ＰＩＶＩ（０により限外ｆ’遇して濃縮し、１遇されな
かった分子１１０，０００以上の区分を凍結乾燥して粉
末１２６．２％を得た。

この粉末８？を中型の０．０１ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ
７，５）ｖｃｌ＠購し、実施例４と同じカラムに吸看さ
せ、次いで０．ＯＩＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で
浴出される画分を分取し、これをＶＩＳＫＩＮ（ｊ　Ｃ
ＬＪＭＰＡＮＹ　製シームｖ、＜　セルｏ　−スチュー
ブを用い、蒸留水（４Ｃ）に対して４８時間透析してか
ら弾結乾燥し＆２ｔの乾燥粉末（５ＩＪ−３１０と称す
）を侮る。この物質の物理化学的性質及び生物化学的性
質は下記の如くでめる０ （１）元素分析値 炭素：　５２．２０チ　水素ニア、２９％窒素：３．５
７チ （２）分子ｍ′（分子飾１′こよる） １０．０００以上 （３）旋光度 〔α］ｏ　、Ｏ＜　Ｃ＝ｏ、１％、　０．Ｉ　Ｎ　Ｎａ
（ＪＨ）（４）業外−吸収スベクトル 特典吸収なし く５）赤外（２）吸収スペクトル 第１５図参照 （６）蛋白誓、楯含蓄 鑞臼貞：　２１．０チ、　糖：　４３．６％（７）物質
の色 淡黄色 （８）抗禰−粘性 央り例９参照 画分５Ｕ−３ｔｏｉ溶出Ｌｉ＆、０．０７Ａ４　ＮａＣ
ｅを含む同緩衝准で俗出せる区分全分取し、−Ｆ記と同
殊な処理により０．２Ｌｔの乾燥粉末（ＳＵ−３２０と
称す）を侮る。この物質の物理化学的性質及び生物化学
的性買は下記の如くである０（１）元素分析値 炭素：　３０．９９チ　水素：　６．２１チｆｆｌ　素
　二　　　８．２　８　　％（２）分子ｔ（分子ｐＡに
よる） １０．０００以上 （３）旋光度 ［α］　ｏｏ−０（’−＝　＝Ｏ−１％　　＋　Ｏ−Ｉ
　Ｎ　Ｎａ０１（）（４）路外線吸収スペクトル λ１Ｎ”０Ｈ：２４５．　２８５ｎｍ（ｓｈ）（５）亦
外巌吸収スペクトル 第１６図参照 （６１ｍ白買１糖含量 蛋白＊：　２８．５％、　　１１ｓ：　５．５９６（７
）物質の色 淡黄色 （８）抗騰揚粘性 実施例９参照 画分５Ｕ−３２０’ｉｉ浴出り、７’ｎ後、０．３　ｓ
　Ｍ　ＮａＣｌ３　ｔ含む同緩衝液で溶出せる画分を分
取し、上記と同体な処理に工Ｑ１．ｌｆの乾燥粉末（５
Ｕ−３３０と椰子）を舟る０この物質のＷ理化学的性質
及び生物イし字的注買は１ｄピのＡ］＜である０（１１
冗素分析１直 炭素：　４７．　Ｏｔ％　　水素：　６．５９％室索：
　１１．７９％ （２）分子！（分子篩によめ） １０．０００以上 （３）旋光度 （α」ご：０　（ｅ−ｏ、ｔ％　、υＩＮ　ｈａＯＮ　
）（４）紫外線吸収スペクトル λ１Ｎ”０Ｈ：２８２　、　２８９　ｎｍ（５）赤外告
吸収スペクトル 第１７図番照 （６）蛋白質、砧言電 蛍日貞：　７７．９％、　＠　：　１８．３％（７す＝
ＪｉｊＱ色 吠黄色 （８）抗腫嚇師注 実施例９＃照 一分５Ｕ−３３０を浴出シタ後、１Ｍ　Ｎａ（Ｊ　　（
ｚ含む同緩衝液で溶出せる画分全分取し、上記と同様な
処理にエリ０．０８　ｉの乾燥粉末（ＳＯ−３４０と称
す）を帰る。この物質の物理化学的性質及び生物化学的
性負は下記の如くである。

（１１分子１（分子篩による） １０．０００以上 （２）旋光度 〔α）Ｄ、　ｏ　（Ｃ＝ｏ、１％　、　ｏ、ｔ　Ｎ　Ｎ
ａＯＨ）（４）路外線吸収スペクトル λＩＮ　ＮａＯＨ，・２６１ｎｍ （５）赤外−吸収スペクトル 第１８図診照 （６）蛋白質、楯含電 鑞Ｂ貞：５０％以下、　　楯：５．０チ（７１？！ｌ　
’ｊｊＯ色 淡黄色 （８）抗腫ｗＩ箔注 実施例９奈照 ２Ｘ］０６１固のザルコーマ１８０＠吻細胞を移植し、
棧＋１！恢４．６．８日目に１日１回、３日間実施約１
及び実施例４で得た画分５（Ｊ−ｔｏｏ、５ＬＪ−ｌ　
ｌ　ｏ　　、Ｓｕ−ｌ　ｚｏ　　、ＳＵ−ｌ　３　ｏ　
　、ＳＬ、１−１４０　　　　　を　出鉦　劫→　内に
投与した。移ｍ恢３５日目の呻４易結節を摘出１〜てそ
の市電？劇定し、無投与刈照併のそれと比較して軸場１
訂正率′ｊｒ真出した。

なＰ試料は注射用蒸留水に′＠濁もしくは溶解して投与
した。谷恢捧の棟＠阻止率を第１表に示ＴＯ 以下余白 第　１表 ａｌ） 対照区嘘ｗ１部平均重賞 実施例」８ 実施例７と同様な方法でマウスに移植したザルコーマ１
８０纏瘍細胞に対し、実施例７と同様な投与方法により
、実施例５で舟た画分５Ｕ−２１０，５Ｏ−２２０，５
Ｕ−２３０，５Ｕ−２４０ｆ腫瘍内投与した。実施例７
と同様な方法で橿＋Ｉｉｈ阻止＃ｉ−を算出した。谷検
体の腫４ｍ阻止率を第２表に示１７た〇第　２表 注１）夾り例７と同じ 央ａレリ９ 実施例７と１５」挿な方法でマウスに移植したザルコー
マ１８０腫場細胞に７４し、実施例７と同体な投与方法
により、実施例６で帰た画分５Ｕ−３１０，５Ｕ−３２
０，５Ｕ−３３０’ｒ１１！ａｍ内投与した。実施例７
と同様な方法で腫嚇阻止率を算出した〇台検体の腫瘍阻
止率を第３１！！に示す。

第３表 注１）夾ＩＭＶ１ｊ７に同じ 実施例１０ 直接＃Ｉ梱毒性の恢討に、マウス由来５−１ｓ。

肉禮細胞培誉系（細胞数３Ｘ１０５）に谷試料を加え４
０時■１後の殺細胞能を算出したがｉｎ　ｖｉｖ。

において抗腫嬌性を示した画分はいずれも１ｎｖｉｔｒ
ｏにおいてＳ−１８０肉練細胞に対して０．１〜／Ｎの
濃度でも島々５０％の弱い細胞増殖抑制幼果を示したに
すぎなかった。

実力ｒ？す１１ 画分５ＬＪ−１３０１５０ダ 乳楯　　　　　　　　　　　　４８９ ステアリン酸マグ子／ウム　　　　　２　ｍ９＃−１２
ｏｏ〜 以上を１カプセル当りの１とする。

上記の割合でｔｔ＊　ｔｒ　−１３０と乳糖とを混合し
打映したのち粉砕し、ステアリン酸マグネシウムを混ぜ
る。混合物をそれぞれ２号カプセルに兄事する。

実施例１２ 画分５Ｕ−１３０４００■ 乳糖　　　　　　　　　　　　　９５■）１）’ｅ−Ｌ
　（オキシプロピルセルローズ）　　　　５■Ｍ＋５０
０　ｔｒ９ 以上を１用曾早位とする。

上記の割合で三者？ｆ−混合したのち少量の水を加えて
■合壁で棉合、軽枚り、４１ｚ、燥して再び検校し、帥
過し、上６己の単位毎に分包する。

実施例１３ ｔａｌ　　画分８ＬＩ−ｚ３ｏ　　１ｆを注射用蒸溜水
（もしくに生理食塩水）１，００ＯｆｆｌＺに１１１遇
し、ｒｆｉ、を５００履ｌずつアンプルに分注、溶閉後
常法により加黙戚１する。

ｔｂｌ　　画分５Ｕ−１４０２７を注射用蒸溜水（もし
くは生理食塩水）ｌｏｏｍｔＶＣ浴解、１ｊ１過し、Ｉ
＋’液全２０ｍｔずつアノプルに分注、烙閉佐富６侵　
Ｖこ　よ　　リ　ツノＵｌ熱　　よｋ　ラ自　す　小　
。

−（ひ鵠　別　ｌ　　４ 画分５Ｕ−１２０１６０＋号 ソルビット　　　　　　　　　　２００　ｎタカルボキ
／メチルセルローズ　　　　　１０　１１１９ホリソル
ベート８０　　　　　　　３．２ｍ？バラオキ７簀息査
酸メチル　　　　　　４ｍ９バラオキ／安、ぐ、香酸フ
ロビル　　　　　０．４〜以上を旺射用蒸溜水に混合し
、全誓？４　ｍｌとする。

【図面の簡単な説明】

第１図は５Ｕ（００，第３図に５ｔＪ−ｚｏｏ、第５図
に５ＬＪ−３００の各路外線吸収スペクトル、第２図は
δＵ−１００、第４図に５ＩＪ−２００、第６図は５Ｌ
Ｉ−３００、第７図は５Ｕ−１１ｏ、第８図は５Ｕ−１
２０、糾９図に５ＬＪ−１３０，第１０図は５Ｕ−１４
０、第１１図１ＪＳＬＪ−１２０、第１２図は５Ｕ−２
２０、第１３図に５Ｕ−２３０、第１４図は５ＩＪ−２
４０、第１５図ば５Ｕ−３１０、第１６　図Ｂ　５Ｕ−
３２０，第１７図は５Ｕ−３３ｏ、Ｍ　ｌ　８１Ａｉｄ
　５Ｕ−３４０の各赤外線吸収スペクトル、第１９図ｔ
６５Ｕ−ｔｏｏ　ｆ、ｉ２０　図に５Ｕ−２００’ｉ　
Ｌ）ＥＡＥセファローズカラムに付したときの浴出パタ
ーンを示す。 以上 出願人　サン）１７−株式会社 １：蛋白Ｆｏｌ　ｉｎ−Ｌｏｗｒｙ　７５（ｌ　ｎｍ酬
−ウ；　　糖　Ｐｌ＋ｅｎｎ　Ｉ　−ＩＩ　ｃ；ｆｌ　
　’＋Ｑ（ｌ　ｏｎ＋ｌｌ −７うｊ／’１／、％ｔＩＦ４ｍ１．”Ｅ〕手続補正書
（自発） 昭和５７年９月　７８ 特許庁義盲　若　杉　和　夫　殿 １、事件Ｏ夛示 陥相５７４特軒−第３０２４２号 Ｌ　発明の名称 偉ＩＩＬ動物由来の抗腫瘍性物質並びＫその製造法ｓ、
　　ｗｉｔ−する看 事件との関係　　出願人 住　所　大阪斎北区量鳥浜２丁９１番４０号名　称　（
１９０）サントリー株式会社代ＷＲ者佐治敬三 住　所　東京都千代田区大手町２丁目６番２号名　称　
（４１８）日本水嵩株式会社 代ＩＩ省大口駿− ４、代思人 住　ＰｊＩＪＬ京都中央区日本−人形町１丁目３番６号
（〒１０３）５、補正命令の日付 自　　　　　発 ６、補正の対象 明細書の「発−の詳Ｉ＃Ｊなｍ１ｌＪ１２）欄７、　補
正の内容 （１）　　１ｊｊＪｉｉｉｉ書中、ｍｌｊｌ頁ｊ１１Ｇ
　〜１１行、総１４１１４４　ｈ　％篇１Ｂ頁纂１４行
、農１７頁ＪＩｌ！３〜４行、藤２２頁纂１５行および
繻２８頁Ｊｌ１行、 「ムラサキウニ」とあるを、 「中タムラナキウニ」と釘止する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　韓反動物の水性溶媒抽出物で、次の物性、■分子型
   （分子面ＶＣよるＪ ｉｏ、ｏｏｏ以上 ■塩基性、酸性、中性の区別 弱酸性（ｐ）Ｉ　５〜６） ■？！ｌ）Ｔの色 淡黄色 ■比旋光度 （ａ）Ｄ、　ｏ　（（、：＝Ｑ、１％、　０．Ｉ　Ｎ　
   Ｎａ０ｆ−１）を廟する抗纏秦注＠負。 ２　株皮動物の蚊の水性溶媒抽出物で、次の物性、 ■分子ｉｔ（分子面にょろり １０．０００以上 ■塩基性、酸性、中性の区別 ＠ば性（ｐＨｓ〜６　） ■物實の色 淡黄色 ■比旋光度 〔α〕９．０（Ｃ−０，１ｑｂ、ｏ、１ＮＮａＯ１（）
   ■元素分析値 炭素：豹４５〜５５チ、水素：約７〜８−窒素：約９〜
   １０％ ■蛋白質、楯含量 蛋白實：約７０チ、糖：約１ｏチ を有する特許請求の範囲第１墳紀載の抗腫−性＠質。 ３　軸支動物の生泊果以外の内臓の水性溶媒抽出物で、
   次の物性、 ■分子賃（分子面による） １０．０００以上 ■塩基性、酸性、中性の区別 弱酸性（ｐＨ５〜６） ■＠實の色 淡黄色 ■比旋光度 ［α］２０：　０　（Ｃ＝０．１　％　、　０．１Ｎ　
   ＮａＵＨ）■元素分析値 炭素：約４５〜５５％、水素：約７〜８％窒素二重８〜
   ９チ ■鑞白賞、糖含量 蛋白質：ｌ＋Ｊ６０〜７０％、糖：約６〜７係ｒ肩する
   特許請求の範囲第１項記載の抗圃場注物’ｉｉｉ、。 ４　株皮＊吻の生殖巣の水性磐媒抽出物で、仄の物性、 ■分子量（分子篩による） １０．０００以上 （２）塩基性、酸性、中性の区別 弱ｒレヒ性　（ｐ）１５〜６９ ■ｍ＊の色 険黄色 ■比旋光度 ［ａ］２０　：　　ｏ　　（Ｃ＝０　１％、０．１Ｎ　
   　Ｎａ０）Ｊ、）■元素分析憧 炭素：約４５〜５５チ、水素：約７〜８チ窒素：約５〜
   ６％ ■蛋白質、糖含量 蛋白實：約４０〜５０％ 楯　　：豹４０〜５０　チ を有する時計請求の範囲第１項記載の抗腫瘍性物質。 ５　株反動物の微細化物を水注靜媒で抽出し、この抽出
   液を限外濾過、ゲル１遇、透析、有愼俗媒沈殿、イオン
   交換樹脂処理、塩析、電気＃、ａからなる群から選ばれ
   た一つ以上の処理に付して分子１ｉ１０，０００以上の
   両分を採取することを特徴とする抗腫瘍性物質の製造法
   。