JPH054399B2

JPH054399B2 -

Info

Publication number: JPH054399B2
Application number: JP1284259A
Authority: JP
Inventors: Takuma Sasaki; Hisao Kamya
Original assignee: Nippon Suisan Kaisha Ltd
Current assignee: Nissui Corp
Priority date: 1989-10-31
Filing date: 1989-10-31
Publication date: 1993-01-19
Also published as: JPH02167300A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は抗腫瘍性物質並びにその製造法に関
し、更に詳しくは棘皮動物の生殖巣の水性溶媒抽
出物である新規な抗腫瘍性物質並びにその製造法
に関するものである。天然物質からの非細胞毒性の癌化学療法剤とし
て抗腫瘍性多糖が1964年頃より注目されるように
なり、笹からのバンフオリン又はサルノコシカ
ケ、シイタケ、シロキクラゲ、ウラジロコウヤク
タケ、チヤヒラタケ等の担子菌類熱水抽出エキ
ス、細菌類、酵母類、地衣類からの多糖類等が細
胞毒に起因せずに顕著な抗腫瘍性を示すことが報
告されている。本発明者らも非細胞毒性の癌化学療法剤の開発
を企画して研究を行い、一連の高等植物および微
生物からの多糖類が宿主介在性抗腫瘍性を示すこ
とを発見した。しかしながら、それらは抗癌スペ
クトルが狭く、臨床的利用には限界があるので、
より広い抗癌スペクトルを有し、かつ強力な非細
胞毒性抗腫瘍剤を求めて検索し、対象として海洋
生物に注目して研究した結果、軟体動物から得ら
れる高分子画分が抗腫瘍性を有することを確か
め、先に特許出願した（特開昭52−122612号）。本発明者らはさらに海洋生物の抗腫瘍性物質に
ついて研究した結果、棘皮動物の生殖巣から得ら
れる高分子画分はさらに優れた抗腫瘍性を有する
ことを見出し、本発明を完成した。従つて、本発明は、棘皮動物の生殖巣から得ら
れる新規な抗腫瘍性物質並びにその製造法を提供
するものである。本発明の抗腫瘍性物質は、例えば棘皮動物の生
殖巣の微細化物を水性溶媒で抽出し、この抽出液
を限外濾過、ゲル濾過、透析、有機溶媒沈澱、イ
オン交換樹脂処理、塩析及び電気泳動からなる群
から選ばれた一つ以上の処理に付して分子量
10000以上の画分を採取することにより製造され
る。棘皮動物には、ニホンウミシダ（Comanthus
japonica）等が属する有柄類、ヒトデ
（Asteriasamurensis）、クモヒトデ
（Ophioplocus japonicus）等が属する星形類、
ムラサキウニ（Anthocidaris crassipsina）、マ
ナマコ（Stichopus japonicus）等が属するウリ
型類の３亜門があり、本発明では、当該物質を含
むものは何れをも原料として使用できるが、就中
ムラサキウニが特に好ましい。これらの棘皮動物のうち、ウニ類、ナマコ類は
食用に供されているが、特にウニ類はその生殖巣
のみが、生食或は加工用として利用され、生殖巣
を採取した残りの殻（ランタンを含む）および内
臓は廃棄されるか、せいぜい磯釣り等の餌（コマ
セ）として利用されているにすぎない。本発明の
物質は、ウニの生殖巣に含有される。本発明により、棘皮動物から抗腫瘍性物質を得
るには、まず棘皮動物の生殖巣をワーリング・ブ
レンダー、超音波処理等によつて破砕して微細化
物とする。次いでこの微細化物を水性溶媒で抽出する。水
性溶媒としては、水、各種塩類溶液、あるいは低
級アルコール、アセトン、ジオキサン等の有機溶
媒と水との混合溶媒が使用される。抽出は通常低
温ないし室温で行われる。抽出液は遠心分離、濾
過等によつて非水溶性区分と分離した後、限外濾
過、ゲル濾過、透析等によつて脱塩し、必要があ
れば限外濾過、減圧濃縮等によつて濃縮する。上記のごとくして得られた抽出物はさらに分子
量分画して分子量10000以上の画分を採取する。
その方法としては、例えば超遠心分離、限外濾
過、ゲル濾過、イオン交換体処理、透析、塩析、
溶媒沈澱、電気泳動など高分子複合蛋白質類の分
画に使用される方法を使用することができる。上記の方法により棘皮動物の生殖巣から水性溶
液によつて抽出され、分画、精製されたものは溶
液状態あるいは乾燥状態に調整し、保存すること
ができる。斯くして得られる本発明の抗腫瘍性物質には、
次の共通物性(A)及び固有物性(B)を有するSU−
300，SU−310，SU−320，SU−330及びSU−
340の５種存在する。 (A) 共通物性分子量（分子篩による） 10000以上塩基性、酸性、中性の区別弱酸性（PH５〜６）物質の色淡黄色比旋光度〔α〕²⁰ _D：０（Ｃ＝0.1％、0.1N NaOH）赤外線吸収スペクトル 3400〜3200cm^-1，2940〜2920cm^-1，1650〜
1660cm^-1および1540〜1530cm^-1に特性吸収を有す
る (B) 固有物性 SU−300：元素分析値炭素：約52％、水素：約７％、窒素：約５
％蛋白質、糖含量蛋白質：約44％、糖：約43％ SU−310：元素分析値炭素：約52％、水素：約７％、窒素：約４
％蛋白質、糖含量蛋白質：約21％、糖：約44％ SU−320：元素分析値炭素：約31％、水素：約６％、窒素：約８
％蛋白質、糖含量蛋白質：約29％、糖：約６％ SU−330：元素分析値炭素：約47％、水素：約７％、窒素：約12
％蛋白質、糖含量蛋白質：約78％、糖：約18％ SU−340：蛋白質、糖含量蛋白質：約５％以下、糖：約５％本発明抗腫瘍性物質は、後記実施例に示す如
く、その一定量を、ICR系マウスに移植したザル
コーマ180腫瘍に対して局所注射したところ、平
均腫瘍抑制率は43.4％（最高65.1％）という驚く
べき抗腫瘍性を示した。上記のように本発明の物質はいずれも温血動
物、たとえば人、家畜、家、犬、猫、ウサギ、
ラツト、マウスなどの各種の腫瘍特に治療の困難
性が指摘されている固型腫瘍に対してすぐれた抑
制作用を示す。マウスに移植したザルコーマ180腫瘍、SN−36
腫瘍、MM−46腫瘍、CCM線癌、NTF細網細胞
肉腫、エールリツヒ腫瘍などの発育は、本物質を
腫瘍細胞移植前、移植後あるいは移植と同時に腫
瘍内、腹腔内、静脈内もしくは皮下に、あるいは
経口的に１回もしくは繰り返して、１回当りの投
与量が約１〜1000mg／Kgとなるように投与するこ
とにより顕著に抑制された。本発明の毒性はきわめて低く、たとえば急性毒
性試験においてマウスあるいはラツトに経口投与
および腹腔内投与した時のLD₅₀値はそれぞれ
5g／Kg以上、2g／Kg以上であり、人に対しても
安全に反復投与することができる。投与方法としては腫瘍治療における一般的な方
法を適用できる。それは腫瘍内、皮下、静脈内も
しくは必要に応じて筋肉内への注射、経口投与、
直腸内への投与および外用剤として塗布、点滴な
どが可能である。投与量および投与スケジユール
は患者および腫瘍の種類、症状などを勘案して適
宜選択でき、一般には一回約0.2〜2000mg／Kg
体重を一日１〜６回投与するのが好ましい。特に
注射剤の場合、一日当り１〜2000mg／Kg程度、好
ましくは３〜500mg／Kg程度がよい。本物質は他の抗腫瘍剤と併用することもでき
る。免疫学的効果の増強をもたらすような併用は
特に効果的である。本発明の抗腫瘍物質は、上述の如くそれ自体医
薬品として使用できるが、更にこれを分画して使
用することもできる。次に実施例を挙げて説明する。実施例１キタムラサキウニの生殖巣800g（湿重量）を集
め、これに０℃の生理食塩水10倍量を加え、冷却
しつつワーリング・ブレンダーにより４分間攪拌
してから１分間攪拌を中止し、さらに４分間攪拌
して抽出を行なつた。抽出液を冷却遠心分離機に
より16000G（０℃）で20分間遠心分離して得た上
清液を、ダイアフロー（DIAFLO）PM−10によ
り限外濾過して濃縮し、濾過されなかつた分子量
10000以上の区分を凍結乾燥し、126.2ｇの粉末
（SU−300）を得た。この物質の物理化学的性質
は下記の如くである。 (1) 元素分析値炭素：51.77％、水素：7.12％、窒素：5.44％ (2) 分子量（分子篩による） 10000以上 (3) 旋光度〔α²⁰ _D：０（Ｃ＝0.1％、0.1N NaOH） (4) 紫外線吸収スペクトル第１図参照 (5) 赤外線吸収スペクトル第２図参照 (6) 酸性、アルカリ性、中性の区別弱酸性（PH５〜６） (7) 物質の色淡黄色 (8) 蛋白質、糖含量蛋白質：43.3％、糖：43.3％実施例２キタムラサキウニからの生殖巣800g（湿重量）
を集め、これに０℃の生理食塩水10倍量を加え、
氷冷しつつワーリング・ブレンダーにより４分間
攪拌してから１分間攪拌を中止し、さらに４分間
攪拌して抽出を行なつた。抽出液を冷却式遠心分離機により16000G（０
℃）で20分間遠心分離して得た上清液を、ダイア
フローPM−10により限外濾過して濃縮し、濾過
されなかつた分子量10000以上の区分を凍結乾燥
してSU−300の粉末126.2ｇを得た。この粉末8gを少量の0.01Mリン酸緩衝液（PH
7.5）に溶解し、同じ溶液で緩衝化した700mlの
DEAEセフアローズ（SEPHAROSE）CL−6B
（フアルマシアジヤパンKK製）を充填したカラ
ム（直径５cm、長さ35cm）に吸着させ、次いで
0.01Mリン酸緩衝液（PH7.5）に溶出される画分
を分取し、これをVISKING COMPANY製シー
ムレスセルロースチユーブを用い、蒸留水（４
℃）に対して48時間透析してから凍結乾燥し5.2
ｇの乾燥粉末（SU−310と称す）を得る。この物
質の物理化学的性質および生物化学的性質は下記
の如くである。 (1) 元素分析値炭素：52.20％、水素：7.29％、窒素：3.57％ (2) 分子量（分子篩による） 10000以上 (3) 旋光度〔α²⁰ _D：０（Ｃ＝0.1％、0.1N NaOH） (4) 紫外線吸収スペクトル特異吸収なし (5) 赤外線吸収スペクトル第３図参照 (6) 蛋白質、糖含量蛋白質：21.0％、糖：43.6％ (7) 物質の色淡黄色 (8) 抗腫瘍活性実施例３参照画分SU−310を溶出した後、0.07M NaClを含
む同緩衝液で溶出せる区分を分取し、上記と同様
な処理により0.2ｇの乾燥粉末（SU−320と称す）
を得る。この物質の物理化学的性質および生物化
学的性質は下記の如くである。 (1) 元素分析値炭素：30.99％、水素：6.21％、窒素：8.28％ (2) 分子量（分子篩による） 10000以上 (3) 旋光度〔α²⁰ _D：０（Ｃ＝0.1％、0.1N NaOH） (4) 紫外線吸収スペクトル λ^IN ^NaOH _nax：245，285nm（sh） (5) 赤外線吸収スペクトル第４図参照 (6) 蛋白質、糖含量蛋白質：28.5％、糖：5.5％ (7) 物質の色淡黄色 (8) 抗腫瘍活性実施例３参照画分SU−320を溶出した後、0.35M NaClを含
む同緩衝液で溶出せる画分を分取し、上記と同様
な処理により1.1ｇの乾燥粉末（SU−330と称す）
を得る。この物質の物理化学的性質および生物化
学的性質は下記の如くである。 (1) 元素分析値炭素：47.01％、水素：6.59％、窒素：11.79
％ (2) 分子量（分子篩による） 10000以上 (3) 旋光度〔α²⁰ _D：０（Ｃ＝0.1％、0.1N NaOH） (4) 紫外線吸収スペクトル λ^IN ^NaOH _nax：282，289nm (5) 赤外線吸収スペクトル第５図参照 (6) 蛋白質、糖含量蛋白質：77.9％、糖：18.3％ (7) 物質の色淡黄色 (8) 抗腫瘍活性実施例３参照画分SU−330を溶出した後、1M NaClを含む
同緩衝液で溶出せる画分を分取し、上記と同様な
処理により0.08ｇの乾燥粉末（SU−340と称す）
を得る。この物質の物理化学的性質および生物化
学的性質は下記の如くである。 (1) 分子量（分子篩による） 10000以上 (2) 旋光度〔α²⁰ _D：０（Ｃ＝0.1％、0.1N NaOH） (3) 紫外線吸収スペクトル λ^IN ^NaOH _nax：261nm (4) 赤外線吸収スペクトル第６図参照 (5) 蛋白質、糖含量蛋白質：5.0％以下、糖：5.0％ (7) 物質の色淡黄色 (8) 抗腫瘍活性実施例３参照実施例３体重約23gのICR系マウスの右鼠径部皮下に２
×10⁶個のザルコーマ180腫瘍細胞を移植し、移植
後４，６，８日目に１日１回、３日間実施例１お
よび実施例４で得た画分SU−310，SU−320，
SU−330，SU−340を腫瘍内に投与した。移植後
35日目の腫瘍結節を摘出してその重量を測定し、
無投与対照群のそれと比較して腫瘍阻止率を算出
した。なお試料は注射用蒸留水に懸濁もしくは溶解し
て投与した。各検体の腫瘍阻止率を第１表に示
す。

【表】対照区腫瘍部平均
重量
実施例４直接細胞毒性の検討は、マウス由来Ｓ−180肉
腫細胞培養系（細胞数３×10⁵）に各試料を加え
40時間後の殺細胞能を算出したがin vivoにおい
て抗腫瘍性を示した画分はいずれもin vitroにお
いてＳ−180肉腫細胞に対して0.1mg／mlの濃度で
も平均30％程度の弱い細胞増殖抑制効果を示した
にすぎなかつた。

【表】【図面の簡単な説明】

第１図はSU−300の紫外線吸収スペクトル、第
２図はSU−300、第３図はSU−310、第４図は
SU−320、第５図はSU−330、第６図はSU−340
の各赤外線吸収スペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１棘皮動物の生殖巣の水性溶媒抽出物で、次の
共通物性(A)及び固有物性(B)を有するSU−300，
SU−310，SU−320，SU−330及びSU−340から
選ばれる抗腫瘍性物質。 (A) 共通物性分子量（分子篩による） 10000以上塩基性、酸性、中性の区別弱酸性（PH５〜６）物質の色淡黄色比旋光度〔α〕²⁰ _D：０（Ｃ＝0.1％、0.1N NaOH）赤外線吸収スペクトル 3400〜3200cm^-1，2940〜2920cm^-1，1650〜
1660cm^-1および1540〜1530cm^-1に特性吸収を有す
る (B) 固有物性 SU−300：元素分析値炭素：約52％、水素：約７％、窒素：約５
％蛋白質、糖含量蛋白質：約44％、糖：約43％ SU−310：元素分析値炭素：約52％、水素：約７％、窒素：約４
％蛋白質、糖含量蛋白質：約21％、糖：約44％ SU−320：元素分析値炭素：約31％、水素：約６％、窒素：約８
％蛋白質、糖含量蛋白質：約29％、糖：約６％ SU−330：元素分析値炭素：約47％、水素：約７％、窒素：約12
％蛋白質、糖含量蛋白質：約78％、糖：約18％ SU−340：蛋白質、糖含量蛋白質：約５％以下、糖：約５％２棘皮動物の生殖巣の微細化物を水性溶媒で抽
出し、この抽出液を限外濾過、ゲル濾過、透析、
有機溶媒沈澱、イオン交換樹脂処理、塩析、電気
泳動からなる群から選ばれた一つ以上の処理に付
して分子量10000以上の画分を採取することを特
徴とする、次の共通物性(A)及び固有物性(B)を有す
るSU−300，SU−310，SU−320，SU−330及び
SU−340から選ばれる抗腫瘍性物質の製造法。 (A) 共通物性分子量（分子篩による） 10000以上塩基性、酸性、中性の区別弱酸性（PH５〜６）物質の色淡黄色比旋光度〔α〕²⁰ _D：０（Ｃ＝0.1％、0.1N NaOH）赤外線吸収スペクトル 3400〜3200cm^-1，2940〜2920cm^-1，1650〜
1660cm^-1および1540〜1530cm^-1に特性吸収を有す
る (B) 固有物性 SU−300：元素分析値炭素：約52％、水素：約７％、窒素：約５
％蛋白質、糖含量蛋白質：約44％、糖：約43％ SU−310：元素分析値炭素：約52％、水素：約７％、窒素：約４
％蛋白質、糖含量蛋白質：約21％、糖：約44％ SU−320：元素分析値炭素：約31％、水素：約６％、窒素：約８
％蛋白質、糖含量蛋白質：約29％、糖：約６％ SU−330：元素分析値炭素：約47％、水素：約７％、窒素：約12
％蛋白質、糖含量蛋白質：約78％、糖：約18％ SU−340：蛋白質、糖含量蛋白質：約５％以下、糖：約５％