JPH02111747A

JPH02111747A - 炭素１３標識５‐アミノレブリン酸及びその誘導体の製造方法

Info

Publication number: JPH02111747A
Application number: JP63263877A
Authority: JP
Inventors: Masahiro Kajiwara; 正宏梶原
Original assignee: Nippon Steel Chemical Co Ltd
Current assignee: Nippon Steel Chemical and Materials Co Ltd
Priority date: 1988-10-21
Filing date: 1988-10-21
Publication date: 1990-04-24

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］この発明は、炭素１３で標識された５−アミノレブリン
酸及びその誘導体の製造方法及びこれを原料とするヘム
前駆体ボルホビリノーゲンの製造方法に関する。これら
の化合物は、生合成や代謝の研究あるいは診断のために
有用である。

［従来の技術］高磁場ＦＴ−ＮＭＲの進歩により、炭素１３で標識され
た化合物が有機化学や生化学における種々の問題の解決
のために広く適用されるようになってきた。これは、高
磁場ＦＴ−ＮＭＲを使用することにより、生合成経路等
の研究において極めて重要な炭素１３（Ｃ）で標識され
た化合物の１３０標識位置をこの１３Ｃ標識化合物を分
解することなく決定することができるからである。また
、このような１３Ｃ標識化合物のいくつかは既に市販さ
れてはいるが、非常に高価であるばかりでなく、その種
類も限られている。

ところで、５−アミノレブリン酸（ＡＬＡ）は、ヘム前
駆体ポルホビリノーゲン（ＰＢＧ）を経由してヘムやク
ロロフィルあるいはビタミン８１２を合成する際の中間
体となり、また、除草剤としても有用であることが報告
されている。そして、このＡＬＡについては、その５位
の炭素が１３ｃで標識された化合物（［５−１３Ｃ１−
ＡＬＡ）が市販品として入手できるが、これは［２−１
３ＣＩマロン酸エチルエステルあるいはエチル−４−オ
キソブチレートから合成されており、この方法が実験室
的規模にのみ適した合成法であることから極めて高価で
ある。

そこで、本発明者らは、［２−１３Ｃｌ酢酸ナトリウム
からブロム酢酸エチルを経由して［２−１３ＣＩＡ　Ｌ
Ａを合成する方法を完成し報告した（Ｊ、　Ａ、　Ｃ，
Ｓ。

、　９６：２６．　ｐ８０６９−８０８０（Ｄｅｃ、　
２５．１９７４）。この方法は、出発物質として１３Ｃ
で標識された酢酸ナトリウムを使用するのであり、この
１３Ｃ標識酢酸ナトリウムが固体であることからその取
扱が容易であっで、人口に使用されているために比較的
安価であるという利点がある。

しかしながら、この１３ｃ標識酢酸ナトリウムを出発物
質として１３Ｃで標識されたＡＬＡを合成する方法につ
いては、この［２−１３ＣＩＡ　Ｌ　Ａを合成する方法
以外には報告されていない。

［発明が解決しようとする課題］そこで、本発明者は、１３Ｃ標識酢酸ナトリウムを出発
原料としてＡＬＡの任意の位置が１３ｃで標識された１
３ｃ標識ＡＬＡを合成することができれば、生化学の研
究の発展に役立つところが大きいという観点から鋭意研
究を重ねた結果、１位及び／又は２位が１３ｃで標識さ
れた酢酸ナトリウムを使用して目的を達成し得ることを
見出し、本発明に到達した。

従って、本発明の目的は、１位及び／又は２位が１３ｃ
で標識された酢酸ナトリウムを出発原料として、任意の
位置が１３０で標識されたＡＬＡを製造する方法を提供
することにある。

［課題を解決するための手段］すなわち、本発明は、１位及び／又は２位が炭素１３で
標識された酢酸ナトリウムを出発原料とし、この炭素１
３標識酢酸ナトリウムから誘導されるブロム酢酸エチル
、メルドラム酸又はフタルグリシン化合物を中間体とし
て５−アミノレブリン酸を合成する１、３．４又は５位
の少くとも１つの炭素が炭素１３で標識された５−アミ
ノレブリン酸又はその誘導体の製造方法である。また、
本発明は、このようにして合成された１、３．４又は５
位の少くとも１つの炭素が炭素１３で標識された５−ア
ミノレブリン酸を使用し、これを脱水酵素で縮合させで
ポルホビリノーゲンを合成する少くとも２つの炭素が炭
素１３で標識されたポルホビリノーゲンの製造方法であ
る。

以下、本発明の製造方法を第１図及び第２図に示す製造
工程に基いて詳細に説明する。

第１図は１３Ｃ，１識ＡＬＡの製造方法を示すもので、
例えば［１−１３ＣＩＡ　Ｌ、Ａ　（１ａ）は次のよう
にして合成される。

すなわち、［１−１３Ｃ］酢酸ナトリウム（２ａ）を臭
素と臭化ベンゾイルで処理し、これに無水エタノールを
加えて反応させると［１−１３Ｃ］ブロモ酢酸エチル（
３ａ）が得られる。また、この（ｔ−１３ｃ１ブロモ酢
％エチル（３ａ）は（１−１３ＣＩ酢酸ナトリウム（２
ａ）を酸分解してｊｑられる（１−１３ＣＩ酢酸からも
高収率で（ｑることができる。

この【１−１３Ｃ１ブロモ酢ｌエチル（３ａ）は、１，
２−ジメトキシエタン中で水酸化ナトリウムを使用し、
室温で数日間エチルフタルイミドアセトアセテート（１
１）と反応させると、高収率で（１−１３ｃ）エチル−
３−エトキシカルボニル− 工一ト（１２ａ）を与える。

このジエステル（１２ａ）は、氷酢酸と濃塩酸の１：１
混合物で半日程度処理することにより、目的の［１−１
３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ　（ｌａ）を高収率テ与エル。

また、上記と同様にして［２−１３Ｃ］酢酸ナトリウム
（２ｂ）から［２−１３ＣＩブロモ酢酸エチル（３ｂ）
を合成し、上記の（１−１３ｃｌブロモ酢酸エチル（３
ａ）をこの［２−１３ＣＩブロモ酢酸エチル（３ｂ）に
買換えて上記と同様の反応を行うことにより、［２−１
３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ（１ｂ）を高収率で合成することがで
きる。

さらに、　［４−１３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ　（ｌｄ）と［５
−１３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ（１ｅ）の合成は以下の方法で行
うことができる。

すなわち、無水フタル酸（８）と上記［１−１３Ｃ］ブ
ロム酢酸エチル（３ａ）から合成される［１−１３Ｃ］
グリシン（９ａ）とを１６５℃で１５分間程度の条件で
反応させることにより［１−１−１３ＣＡフタロイルグ
リシン（６ａ）を合成する。なお、この［１−１３ＣＡ
Ｎ−フタロイルグリシン（６ａ）は、フタルイミドカリ
ウム（４）とｔｌ−１３ｃｌブロモ酢酸エチル（３ａ）
との反応によっても合成される。ざらに、このようにし
て合成された［１−１−１３ＣＡフタロイルグリシン（
６ａ）を塩化チオニルで処理すれば、容易に［１−１３
ＣＩフタルイミドアセチルクロライド（７ａ）が得られ
る。

そして、この［１−１３ＣＩフタルイミドアセチルクロ
ライド（７ａ）をジクロロメタンとピリジンの混合溶媒
中で２．２−ジメチル−４，６−シオキソー１，３−ジ
オン（メルドラム酸、１０）と反応させ、乾燥エタノー
ルで処理することにより、高収率でβ−ケトエステル（
ｌｌｂ）が得られる。なお、上記メルドラム酸（１０）
は、公知の方法により、酢酸す１ヘリウム（２）からブ
ロモ酊１　（１３）を経る合成経路により容易に合成さ
れる。

さらに、このβ−ケトエステル（ｌｌｂ）をブロモ酢酸
エチル（３）と水素化ナトリウムで処理した後、酸で加
水分解することにより、目的の［４−１３ＣＩＡＬＡ（
ｌｄ）が得られる。

同様に、　［５−１３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ　（ｌｅ）も［２
−１３ＣＩフタルイミドアセデルクロライド（７ｂ）を
経由する合成経路で上記と同様に合成される。

［３−１３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ　（ｌｃ）も［２−１３ＣＩ
酢酸ナトリウム（２ｂ）から［２−１３ＣＩブロモ酢酸
（１３ａ）を経て合成される［２−１３ＣＩメルドラム
Ｍ（１０ａ）を経由する合成経路で上記と同様に合成さ
れる。

以上、いずれか１つの炭素が１３０で標識されたＡＬＡ
の製造方法を説明したが、２つ以上の炭素が１３Ｃで標
識されたＡＬＡも上記と同様な方法で製造することがで
きる。例えば、［１，２−１３ＣＩＡ　ＬＡ　（ｉｆ）
は［１，２−１３Ｃｌ酢酸ナトリウム（２Ｃ）から［１
，２−１３Ｃｌブ［コモ酢酸エチル（３Ｃ）を経て化合
物（１２）を経由して合成される。

また、［４，５−１３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ　（１１１１）は
上記［１，２−１３Ｃｌ酢酸す１−リウム（２Ｃ）から
［１，２−１３Ｃｌブロモ酢酸エチル（３Ｃ）あるいは
［１，２−１３Ｃｌグリシン（９Ｃ）を合成し、化合物
（７）　、（１１）及び（１２）を経由して合成される
。

ざらに、［３，４，５−１３ＣＩＡ　ＬＡ　（ｌｈ）は
、上記［１゜２−１３Ｃ］フタルイミドアセチルクロラ
イド（７）と［２−１３Ｃ］メルドラム１（１０ａ）か
ら化合物（１１）及び（１２）を経由して合成される。

また、１３Ｃで標識されたＡＬＡの誘導体としては種々
のものがあるが、代表的には塩酸塩、ナトリウム塩等の
塩、メチルエステル等のエステル、酸塩か物等の酸ハラ
イド、アミド等が挙げられ、これらは公知の方法により
容易にｆｌＪ造することができる。

次に、第２図は、ＡＬＡからポルホビリノーゲン（ＰＢ
Ｇ）を製造するＷＪｉ造工程を示すもので、第１図に示
す方法で得られた１つの炭素が１３０で標識されたＡＬ
Ａを使用し、２つの炭素が１３０で標識された１３ｃ標
識ＰＢＧの合成例を示すものである。

例えば、第２図に示すように、［５−１３Ｃ］Ａ　Ｌ　
Ａ（１ｅ）をＡＬＡＩＩＲ水酵素（ＡＬＡ−Ｄ又はＰＢ
Ｇ　５ｙｎｔｈａｓｅ）で縮合させると、ピロール環の
２位の炭素とアミノ基に隣接する炭素の２つが１３Ｃで
標識されたＰＢ　Ｇ　（２０ｅ）が得られる。

また、第２図に示すように、上記［５−１３ＣＩＡ　Ｌ
Ａ（ｌｅ）に代えて［３−１３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ　（ｌｃ
）を使用すルト、ピロール環の４位の炭素とピロール環
の３位に結合する炭素の２つが１３ｃで標識されたＰＢ
Ｇ（２０ｃ）が１りられる。

同様に、他の位置の炭素が１３ｃで標識されたＡＬ　Ａ
　（ｌａ）、（１ｂ）又は（１ｄ）を使用することによ
り、それぞれ対応する部位の炭素が１３Ｃで標識された
ＰＢＧが得られる。また、２つの炭素が１３ｃで標識さ
れたＡＬＡを使用すれば、４つの炭素が１３Ｃで標識さ
れたＰＢＧが得られ、ざらに、３つの炭素が１３Ｃで標
識されたＡＬＡを使用すれば、６つの炭素が１３ｃで標
識されたＰＢＧが１９られる。

このようにして製造されたＰＢＧは、例えば鉛中毒の診
断薬等として有用である。

［実施例］以下、実施例及び参考例に基いて、本発明方法を具体的
に説明する。

実施例１１．２−ジメトキシエタン７戒中にエチルフタルイミド
アセトアセテート（１１）８４７．７ｍｇ（３，３１ｍ
ｍｏｌ）を溶解し、この溶液を１．２−ジメトキシエタ
ン７ｄと水素化ナトリウム（パラフィン中６０％）１５
４　、　Ｏｍｆｆ（３，８５ｍ　ｍｏｆ）の懸濁液中に
添７ＪＯし、アルゴン雰囲気下に室温で１時間攪拌した
。その後、この懸濁液中に乾燥１，２−ジメトキシエタ
ン５威中に（１−１３ＣＩブロモ酢Ｉエチル（３ａ）　
６４７　ｍｌ　（３，８５ｍ　ｍｏｌ）を溶解して得ら
れた溶液を加え、室温で１日間攪拌し、得られた反応混
合物を１Ｎ−塩酸で中和し、エーテルで抽出した。得ら
れた有機相を飽和食塩水で洗浄し、乾燥剤で乾燥し、溶
媒を留去して無色針状結晶の（１−１３ｃｌエチル−３
−エトキシカルボニル−５−フタルイミドレブリネート
（１２ａ）１．２５ｇ（収率８９．．７％）を得た。

このものの融点、　ト１−ＮＭＲ１”’Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒ
１１Ｒ及びＭＳを測定した結果を以下に示す。

融点ニア１〜７４℃ １ｔｌ−ＮＨＲ（ＣＤＣ１３）：１．２５　＆　１．３
３．２．９５．４．１８　＆　４．２９．４．１９．４
．８３．７．８３１）ｐｍＪＲ（ＫＢｒ）　：　１７２
３ｃｍ−１８３（ｍ／Ｚ）：　３６２（Ｈ）次に、このようにして得られたジエステル（１２ａ）を
氷酢酸−濃塩酸（１：１）混合液１５Ｉｄ！中に溶解し
、アルゴン雰囲気中で１日間加熱還流した。反応終了後
、反応混合物中の溶媒を留去し、得られた茶色の残漬粉
末を水２ＯｒｒＩｉ中に溶解し、過剰の塩化水素を留去
した。得られた残漬物を再び水４０威中に溶解し、フタ
ル酸を除去するために酢酸エチル１５０ｍで３回洗浄し
た。このようにして得られた水相を濃縮し、残漬物をイ
オン交換樹脂で精製し、凍結乾燥し、ざらにエタノール
／エーテル溶媒で再結晶し、無色針状結晶の［１−１３
Ｃ］５−アミルリプリン酸ハイドロクロライド（ｌａ）
１．２５ｇ（収率７１％）を得た。

このものの融点、’Ｈ−ＮＭＲ１”’Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒ及
びＩＲを測定した結果を以下に示す。

融点＝１４６〜１４９℃ ＩＲ（ＫＢｒ）　：３４３０ｃｙｔ−１実施例２（１−１３０１グリシン（９ａ）　（９９％ａｒｏｍ　
１３Ｃ）　１　、０　’Ｊ（１３，１ｍ　ｍｏｌ）と無
水フタルＭ１．９５ｇ（１３，１ｍｍｏｆ）の混合物を
それが融解しそして再び固化するまで１５０〜１７０℃
で１０分間加熱し、得られた生成物を水で再結晶し、乾
燥して無色針状結晶の［１−１３Ｃ］フタルイミド酢１
（６ａ）２．６４ｇ（収率９７．５％）を１ｑだ。

このものの融点、’Ｈ−ＮＭＲ１”’Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒｌ
ＩＲ及びＭＳを測定した結果を以下に示１゜融点：１９
１〜１９４℃ ＩＲ（ＫＢｒ）：１７２０．１７７５ｃｍ−１１４３（
ｍ／ｚ）：　２０Ｂ（Ｈ）このようにして得られた（１−１３Ｃ］フタルイミド酢
ｍ　（６ａ）　２　、６４　’Ｊ　（１２，８ｍ　ｍｏ
ｌ）を塩化チオニル１２ｄ（６１，８ｍ　ｍｏｌ）中に
溶解し、６０℃で４時間加熱速流し、その後過剰の塩化
チオニルを除去した。得られた淡黄色固体をベンゼン中
に溶解し、このベンゼンを留去することによって塩化チ
オニルを完全に除去し、淡黄色結晶の［１−１３ＣＩフ
タルイミドアセチルクロライド（７ａ）２．９１　ｇ（
収率９９．２％）を得た。’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２＞
測定結果は４．８０．７．７８　ｐｐｍであった。

次に、ジクロロメタン１ｍ１とピリジン２威の混合溶媒
中にメルドラム駿（２０）１　、９５　ｇ（１３，５ｍ
ｍｏｆ）を溶解し、この溶液中に０℃でアルゴン雰囲気
下に１．５時間かけて上記［１−１３Ｃ］フタルイミド
アセチルクロライド（７ａ）２．９１９　（１３，Ｏｍ
　ｍ。

１）のジクロロメタン２ｄ溶液を滴下し、ざらに攪拌下
に室温で１．５時間反応させた。反応終了後、得られた
反応生成物を６Ｎ−塩酸と飽和食塩水で洗浄し、乾燥剤
で乾燥し、溶媒を留去した。得られた粘性オイルを無水
エタノール１００ｍ１中で３時間還流し、その後過剰の
エタノールを留去した。

残漬物をジクロロメタン１００ｍ１で希釈し、飽和重曹
水と飽和食塩水で洗浄し、乾燥剤で乾燥した後溶媒を留
去し、得られた粗生成物をエタノールで再結晶し、無色
針状結晶の（３ｊ３ｃｌエチルフタルイミドアセトアセ
テート（ｌｌｂ）２．３３ｇ（収率６５，４％）を得た
。

このものの融点、　Ｈ−ＮＭＲｌ”’Ｃ−ＮＭＲ１１Ｒ
及びＭＳを測定した結果を以下に示す。

融点＝１０９〜１１１℃ １１１−ＮＨＲ（ＣＤＣＩ　３　）：１．２９　、３，
５０、４．２２、４．６２、７．７７ｐｍＩＲ（ＫＢｒ）　：１７２２．１７４５ｃｍ−’Ｈ３（
ｍ／ｚ）：　　２７６（Ｈ）このようにして得られた上記［３−１３ＣＩエチルフタ
ルイミドアセトアセテート（１１ｂ）　２．３３Ｓｊ（
８，４３ｍ　ｍｏｌ）を１，２−ジメトキシエタン２Ｏ
ｄ中に溶解し、得られた溶液を水素化ナトリウム（パラ
フィン中６０％）　４２０．０ｍｇ（１０，５ｍ　ｍｏ
ｌ）の１．２−ジメトキシメタン５威懸濁液中に攪拌下
Ｏ℃で添加し、その後アルゴン雰囲気下に室温で１時間
攪拌した。ざらに、得られたこの懸濁液中にブロム酢ｆ
ｆ、エチル（３）　１　、７６　ｇ（１０，５ｍ　ｍｏ
ｌ）の１．２−ジメトキシエタン５ｍｉ溶液を添加し、
室温で攪拌下に２日間反応させた。反応終了後、得られ
た反応混合物を１Ｎ−塩酸で中和し、エーテルで抽出し
、オレンジ色のエーテル層を飽和食塩水で洗浄し、乾燥
剤で乾燥して溶媒を留去し、粗生成物の［４−１３０１
エヂルー３−エトキシカルボニル−５−７タルイミドレ
ブリネート（１２ｄ）を得た。この粗生成物（１２ｄ）
は精製することなくそのまま次の反応に使用した。

上記粗生成物（１２ｄ）を氷酢酸−濃塩酸（１：１）混
合溶液２０ｒｄ！中に溶解し、アルゴン雰囲気中１２０
′Ｃで一夜加熱還流した。反応終了後、反応混合物中の
溶媒を留去し、得られた茶色の残渣を水５０威中に溶解
し、フタル酸を除去するために酢酸エチル１５０ｄで３
回洗浄した。このようにして（ワられだ水層を濃縮し、
残漬物をイオン交換樹脂で精製し、凍結乾燥し、ざらに
エタノール／エーテル溶媒で再結晶し、無色針状結晶の
［４−１３Ｃ］５−アミル−プリン酸ハイドロクロライ
ド（ｌｄ）３９１　。

ｏｍｙ＜収率２７．５％）を得た。

このものの融点、　Ｈ−ＮＭＲｌ”’Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒ及
びＩＲを測定した結果を以下に示す。

融点：１４６〜１４９℃ ＩＲ（ＫＢｒ）　：３４３０ｃｍ” 実施例３［２−１３Ｃ］ブロモ酢酸（２ｂ）　１　、４７３　ｇ
（１０，６ｍｎｏｔ）の水溶液１．５ｍｌに炭酸ナトリ
ウム０．５８ｇ（５，４ｍ　ｍｏｌ）を加えた後、シア
ン化ナトリウム０、６０ｇ（１２，３ｍ　ｍｏｌ）の水
溶液１．５戒を水冷下に滴下し、湯浴中で４０分間反応
させた。その後、−旦室温に戻した後、水酸化ナトリウ
ム０゜５ｇを加え、湯浴中で２時間加熱した。ざらに、
この溶液に塩化カルシウム０．８ｇの水溶液を加えた後
、室温で２日間反応させた。反応終了後、生成物を濾別
し、水洗、乾燥した後、エーテルを加え、ざらに１２Ｎ
−塩酸１．０威を加えた後、エーテル抽出をした。１ｑ
られたエーテル層を乾燥後、溶媒を留去し、粗生成物の
［２−１３ｃｌマ［１ン酸０゜４４＝１　（収率４０．
３％）を得た。

次に、上記［２−１３ＣＩマロン酸を無水酢酸０．−５
ｄとＳ硫酸０．０５戒の混合液中に懸濁させ、氷冷下に
無水アセトン０．４ｄを滴下し、室温で１時間反応させ
た。反応終了後、析出した結晶を濾別し、得られた粗結
晶を０．５Ｎ−ＩＡ酸２ｒｒ１１で洗浄し、水洗してア
セトン／エーテル／ｎ−ヘキサンの混合溶媒で再結晶し
、無色ａｉ状結晶の［２−１３Ｃｌメルドラム！（１０
ａ）　０．３１１　ｇ（収率５０．６％）ヲ得た。

このものの融点、　ト１−ＮＭＲ１”’Ｃ−ＮＩＶｔＲ
及びＩＲを測定した結果を以下に示す。

融点＝９２〜９５℃ １Ｈ−ＮＨＲ（ＣＤＣｌ２）：３．８２．１．７９　ｐ
ｐｍ１３Ｃ−ＮＨＲ（ＣＤＣｌ２　）：　３６．１５　
（２−１３Ｃ）　ｐｐｍＩＲ：　１７９０．１７５０Ｃ
ｍ−’ 次に、上記［２−１３Ｃ］メルドラム酸（１０ａ）を使
用し、上記［１−１３ＣＩＡ　ＬＡ　−Ｈ（ｊ！　（ｌ
ａ）と同様にして［３−１３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ　−ＨＣ，
１！を合成した。

中間生成物及び［３−１３Ｃ］Ａ　Ｌ　Ａ・）−１ｃ、
ｌ！について融点、　ト１−ＮＭＲ１”’Ｃ−ＮＭＲ１
ＩＲ及びＭＳを測定した。結果を以下に示す。

［２−１３Ｃ］エチルフタルイミドアセトアセテート（
ｌｌａ）鮪−Ｎ）ｆＲ（ＣＤＣｌ２）：１．３１．３．５８．４
．２４．４，７６．７，８８＆　７．７５　ｐｐｍ１３Ｃ−ＮＨＲ（ＣＤＣ１３）：　４６．９０　（２−
１３Ｃ）　ｐｐｍ（３−１３Ｃ］エチル−３−エトキシ
カルボニル−５−フタルイミドレブリネート（１２ｃ） ’ＩＩ−ＮＨＲ（ＣＤＣｌ２）：１．２６．１．３５．
２．９４．３．０２．４．１５．４．１６．４．２８．
４．７３．４．９４．７．８８＆　７．７４　ｐｐｍ１３Ｃ−ＮＨＲ（ＣＤＣｌ２　）：　５２．０５　（３
−１３Ｃ）　ｐＤｍ［３−１３ＣＩＡ　ＬＡ−ＨＣ，ｌ
！　（ｌｃ）　（収ｆｉ１．２８５９、化合物（１０ａ
）からの収率２７．３％）融点：１４１℃ １ｔｌ−ＮＨＲ（Ｄ２０）：２．７０．２．８９．２．
８９．４．１２　ｐｐｍ１３Ｃ−Ｎ）ＩＲ（Ｄ　２０）
　二　３６．８　（３−１３Ｃ）　　ｌ）ｌ）ｍＩＲ（
ＫＢｒ）　：３４３０ｃｍ−１実施例４［２−１３ＣＩグリシンを使用した以外は実施例２と同
様ニＬ／　Ｔ　［５−１３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ−ＨＣｆｌ　
’ＦＡ’＃ｔ、−。コノものの　Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２０）
は４７．ａｐｐｍであった。

なお、［２−１３Ｃ］ブロム酢酸エチル（３ｂ）を使用
した以外は実施例１と同様にして（２−１３ｃｌΔＬＡ
・ＨＣ，ｌ！　（ｌｂ）を得た。このものの融点は１４
８℃、１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２０）は３１　、６　ｐｐｍ
、　　Ｉ　Ｒ（ＫＢｒ）は３４３０ｃｍ−’であった。

参考例１　：　　［２−１３ＣＩブロム酢酸エチル（３
ｂ）の合成丸底フラスコ中に安息香１１　、１　ｇ（９，０ｍ　ｍ
ｏｆ）と［２−１３Ｃ］酢酸ナトリウム（２ｂ）８２０
７１ｆ（１０ｍ　ｍ。

）とを仕込み、ざらに臭化ベンゾイル７．５ｄ（６４ｍ
　ｍｏｌ）を加え、１２０℃で５時間加熱下に反応させ
た。生成したアセチルブロマイドを受器に蒸留し、この
受器中に一７８℃で５分間乾燥臭素２゜６ｄ（５０ｍ　
ｍｏｌ）を導入した。この臭素導入終了後、反応混合物
を室温で数分間攪拌し、さらに５時間還流した。反応混
合物を室温まで冷却した後、過剰の臭素を窒素がスブロ
ーによって除去し、次いで一７８℃で１０分間かけて乾
燥エタノール２゜４７２（４０ｍ　ｍｏｌ）を加え、室
温で１２時間攪拌下に反応させた。反応生成物を飽和重
曹水１０ｒＩＩＩｌで中和し、エーテル３０ｄで３回抽
出し、得られたエーテル層（９０威）を１０威の水で２
回洗浄し、乾燥剤で乾燥し、エーテルを留去して淡黄色
オイル状の［２−１３Ｃ］ブロム酢ｆ、エチル（３ｂ）
９９１　ｍｙ　（収率５９．３％）を得た。

このものの　ト１−ＮＭＲ１”’Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒ及び１
Ｒを測定した。結果を以下に示す。

１１１−Ｎ１（Ｒ（ＣＤＣｌ２）：１．３５．３．１５
．４．２０　ｐｐｍ１３Ｃ−ＮＨＲ（ＣＤＣｌ２）：２
５．９　（２−１３Ｃ）　Ｉ）ｌ）ＩＩＩＩＲ（ＫＢｒ
）　：１７３５ｃｍ参考例２　二［１−１３Ｃｌブロム酢酸エチル（３ａ）
の合成［１−１３ＣＩ酢酸ナトリウム（２ａ）を使用し、上記
参考例１と同様にして調製した。得られた［１−１３Ｃ
］ブロム酢酸エチル（３ａ）の１Ｈ−ＮＭＲ１１３Ｃ−
ＮＭＲ及びＩＲを測定した。結果を以下に示ず。

’Ｈ−ＮＨＲ（ＣＤＣｌ２　）：１．３５．３．７７．
４．２０　ｐｐｍ１３Ｃ−Ｎｌ’１Ｒ（ＣＤＣｌ２）：
　１Ｂ７．２　（１−１３Ｃ）　ｐｐｍＩＲ：　１７３
５ｃｍ−’ 参考例３　：　　［２−１３ＣＩエチルフタルイミドア
ゼテート（５ｂ）の合成ジメチルホルムアミド７．６ｄ中で［２−１３Ｃ］ブロ
ム酢！エチル（３ｂ）９３９ｍｇ（５，５９ｍ　ｍｏｌ
）とフタルイミドカリウム（４）　１　、　１５　ｇ（
６，２２ｍ　ｍｏｌ）とを３時間速流下に反応させ、得
られた反応混合物を１５ｄのクロロホルムで４回抽出し
、クロロホルム層（６０ｍ１＞を０．ＩＮ＝水酸化ナト
リウム溶液１０ｄで中和し、１５ｍｌ１の水で２回洗浄
し、乾燥剤で乾燥し、溶媒を留去して得られた粗生成物
をエタノールで再結晶し、無色針状結晶の（２ｊ３ｃｌ
エチルフタルイミドアセテート（５ｂ）９７５ｔｑｔ　
（収率７５．０％）を得た。得られた［２−１３ＣＩエ
ヂルフタルイミドアセテート（５ｂ）の　Ｈ−ＮＭＲ，
”’Ｃ−ＮＭＲ，ＩＲ及びＭＳを測定した。結果を以下
に示す。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：１７７Ｂ、１７３２．１７２０Ｃｍ
−’Ｈ８（ｍ／ｚ）：　２３４（）ｌ　　）参考例４　
：　　［２−１３ＣＩグリシン（９ｂ）の合成上記参考
例３で得られた［２−１３ＣＩエチルフタルイミドアセ
テート（５ｂ）　２５０ｍ！ｊ（１，０７ｍ　ｍｏｌ）
を６Ｎ−塩酸６．２５ｄ中に溶解し、５時間速流下に反
応させた。反応混合物を同量の水で希釈し、１０ｍの酢
酸エチルで３回洗浄し、水層を留去して得られた残漬物
をイオン交換樹脂で精製し、白色粉末状の［２−１３Ｃ
Ｉグリシン（９ｂ）　１０８ｍｇ（収率９０．０％）を
得た。得られた［２−１３Ｃ］グリシン（９ｂ）の’Ｈ
−ＮＭＲ，”’Ｃ−ＮＭＲ，ＩＲ及びＭＳを測定した。

結果を以下に示す。

ＩＲ（にＢｒ）　：３１００．１６００Ｃｍ−１８３（
ｍ／Ｚ）ニア６（Ｈ’　）実施例５５ｍＭＭＲチューブの中に内部標準としてジオキサンを
含有する重水中に１３０標識ＡＩ−Ａを溶解した溶液０
．１ｄを仕込み、この１３Ｃ標識ＡＬＡ溶液中に０．５
Ｈ−燐酸ナトリウム緩衝液０．０５１ｎｆ！と同量の硫
酸亜鉛（１ｍＭ）−ジチオトレイトール（１００ｍ）ｌ
）とを添加し、さらに５−アミル−プリン酸脱水酵素０
．３ｍｌを加えて急速に攪拌し、この混合物を培養して
酵素反応を行った。

ここで使用した５−アミル−プリン酸脱水酵素は、ヒト
末梢血液（ｈｕｍａｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏ
ｏｄ）から単離されたもので、生成酵素はＧｒａｎｉｃ
ｋ　Ｈａｕｚｅｒａｌｌ法で分析したところ１２．６ｕ
ｎｉｔｓ／ｍｇの比活性を有するものであった。

この酵素反応においては、ＪＥＯＬ−ＧＸ−４００スペ
クトロメーターを使用し、１００．４Ｈ１ｌｚで５ｍＭ
ＭＲチューブ内の燐酸ナトリウム緩衝液（ＤＩ　６．８
）におＧプるプロトンデカップリング１３Ｃ−Ｎ　Ｍ　
Ｒスペクトルが測定された。これらのスペクトルは、パ
ルス幅５．５μ５（４５°パルス）とスペクトル幅２５
０００ｔｌｚを使用して２０℃で測定された。

重水の内部ロックが用いられ、そしてケミカルシフトは
ジオキサン（６７，４１）ｌ）ｍ）を内部基準として測
定した。

１３Ｃ標識ＡＬＡとして［５−１３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ　（
ｌｅ）を使用したとき、ピロール環の２位の炭素とアミ
ノ基に隣接する炭素の２つが１３Ｇで標識されたＰＢＧ
（２０ｅ）が生成する。これは、第２図（ａ）　、（ｂ
）に示すように、［５−１３ＣＩＡ　ＬＡのシグナル（
δ＝４７．８　ｐｐｍ）が経時的に減少し、それにつれ
てＰＢＧに帰属する２つのシグナル（δ＝３５．５　ｐ
ｐｍ及びδ＝１１７．２　ｐｐｌＯ）が増加していくこ
とで確認された。

また、［３−１３ＣＩＡ　Ｌ　Ａ　（ｌｃ）を使用した
とき、ピロール環の３位の炭素とピロール環の４位に結
合する炭素の２つが１３Ｃで標識されたＰＢＧ（２０ｃ
）が生成していることが上記と同様に第３図（ａ）　、
（ｂ）のシグナルの経時的変化によって確認された。

［発明の効果］本発明によれば、１位及び／又は２位が１３０で標識さ
れた酢酸ナトリウムを出発原料として、５−アミノレブ
リン酸の少くとも１つの任意の位置が１３０で標識され
た５−アミノレブリン酸及びその誘導体を製造すること
ができ、また、この１３Ｃ標識５−アミノレブリン酸を
使用して少くとも２つの炭素が１３Ｃで標識された種々
のポルホビリノーゲンを製造することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は１位及び／又は２位が１３０で標識された酢酸
ナトリウムから任意の位置が１３０で標識された５−ア
ミノレブリン酸を合成する合成経路を示すチャート、第
２図（ａ）　、（ｂ）　ハ［５−１３Ｃ］５−７ミルブ
リン酸から１３０標識ポルホビリノーゲンを合成する合
成経路を示すチャートとその時の経時変化を示す１３Ｃ
−ＮＭＲスペクトル、第３図（ａ）、（ｂ）は［３−１
３Ｃ］５−アミノレブリン酸から１３０標識ポルホビリ
ノーゲンを合成する合成経路を示すチャートとその時の
経時変化を示す１３Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトルである。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）１位及び／又は２位が炭素１３で標識された酢酸
ナトリウムを出発原料とし、この炭素１３標識酢酸ナト
リウムから誘導されるブロム酢酸エチル、メルドラム酸
又はフタルグリシン化合物を中間体として５−アミノレ
ブリン酸を合成することを特徴とする１、３、４又は５
位の少くとも１つの炭素が炭素１３で標識された５−ア
ミノレブリン酸又はその誘導体の製造方法。
（２）１位及び／又は２位が炭素１３で標識された酢酸
ナトリウムを出発原料とし、この炭素１３標識酢酸ナト
リウムから誘導されるブロム酢酸エチル、メルドラム酸
又はフタルグリシン化合物を中間体として１、３、４又
は５位の少くとも１つの炭素が炭素１３で標識された炭
素１３標識５−アミノレブリン酸又はその塩を合成し、
これを脱水酵素で縮合させてポルホビリノーゲンを合成
することを特徴とする少くとも２つの炭素が炭素１３で
標識されたポルホビリノーゲンの製造方法。