JPH0134559B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は酵素洗剤組成物に関する。特に本発明
は、脂肪分解酵素を含有する酵素洗剤組成物に関
する。 酵素洗剤組成物は当業界で公知である。洗剤組
成物の配合用に多種類の酵素が提案されている
が、主としてプロテアーゼ及びアミラーゼが注目
されている。リパーゼも洗剤組成物用酵素として
考えられているが、一般的洗剤組成物用リパーゼ
に直接係る従来技術は比較的少ない。BP1372034
には、シユードモナス・スタツツエリ
（Pseudomonas stutzeri）ATCC19.154のような
シユードモナス（Pseudomonas）属の微生物よ
り産生されたリパーゼを、特定のノニオン洗剤活
性物質と任意成分として特定のアニオン洗剤活性
化合物を含む衣類浸漬用洗剤組成物中に使用する
旨が開示されている。しかしながら、“任意のか
つ何れの洗剤組成物に脂肪分解酵素を添加して
も、（記載した如く）酵素活性及び洗浄効率の点
で満足かつ許容され得る洗剤組成物が得られる訳
ではない”ことが明らかであつた。洗剤組成物の
各種成分が脂肪分解酵素に対してマイナスの影響
を示すことが知見された。 BP1442418及び1442419には二段階洗濯方法が
記載されている。該方法は、リパーゼ含有液に浸
漬させる工程とその後の洗剤含有洗浄液で洗濯す
る工程とから成る。 BP1442419に記載の発明においては、“リパー
ゼ含有液”はクレームされた１種もしくはそれ以
上のリパーゼと水溶性ホウ酸ナトリウム塩
（borax salt）とから構成されている。所要によ
り慣用の洗浄性界面活性剤またはビルダーを含有
させても良い旨が記載されているが、界面活性剤
またはビルダーの存在下での有効性は立証されて
いない。BP1442418の“リパーゼ含有液”は、ク
レームされた１種もしくはそれ以上のリパーゼと
ホウ酸トナリウムとCa²⁺もしくはMg²⁺イオンと
から構成されている。界面活性剤も記載されてい
るが、界面活性剤溶液における有効性を示す証拠
は提示されていない。Ca²⁺及び／又はMg²⁺イオ
ンと結合するビルダーはこれらの予洗液から明白
に排除されている。何れにしても、上記した両発
明に記載の洗濯方法では別個に調製された２種の
材料が必要であり、実用性に乏しい。 Journal of Applied Biochemistry ２
（1980）、p.218〜229のAndreeらの文献には、洗
剤成分としてのリパーゼに関する研究報告が記載
されている。試験した２種の市販のリパーゼ（膵
リパーゼとリゾプスリパーゼ）は典型的な洗浄性
アニオン及びノニオン界面活性剤の混合物を含む
活性系の溶液中で不安定であるとの結論が記載さ
れている。リパーゼはアニオン洗剤の存在下で不
活性化され、その程度は膵リパーゼがリゾプス
（Rhizopus）リパーゼよりやや小さいと推定され
ると記載されている。Andreeらは更に、試験し
たリパーゼよりノニオン洗剤調製物の洗浄作用が
改善されるが、前記改善は洗剤調製物中のノニオ
ン活性物質の濃度増加に伴う旨の結論を下してい
る。 最近公開されたEP013064には、洗剤添加剤と
してフサリウム・オキシスポルム（Fusarium
oxysporum）由来のリパーゼを使用する旨が記
載されている。この明細書に例示されている洗剤
組成物はノニオン洗剤とアニオン洗剤の混合物、
或いはノニオン洗剤のみから成る。 上記したように、何れの従来技術も、洗剤組成
物に特定のリパーゼを使用すること或にはリパー
ゼを配合させるために特定の洗剤組成物及び／又
は洗濯系（wash regimes）を調製することを教
示しているに過ぎない。 本発明の目的は、リパーゼを配合させることに
より全体的な洗浄性能が改善されるとともに洗浄
力が大きく改善されるリパーゼ含有洗剤組成物を
提供することにある。 本発明者らは、アニオン洗剤活性物質とノニオ
ン洗剤活性物質を含む洗剤組成物中に或る種のリ
パーゼを配合（inclusion）させると洗浄力が全
体的に向上することを知見した。 従来技術とは対照的に、本発明により提供され
るリパーゼ含有洗浄組成物ではより低温でも通常
通りに洗濯を実施することができる。従つて、洗
浄組成物を特別に注意深く選択したり、特定の洗
濯或いは浸漬工程を行わずに、またはリパーゼ含
有組成物で衣類を長期間に処理しなくても、リパ
ーゼの利点が得られる。 本発明で使用され得るリパーゼには、シユード
モナス・フルオレツセンス（Pseudomonas
fluorescens）IAM1057より産生されたリパーゼ
の抗体と正の免疫学的交差反応（positive
immunological cross−reaction）を示すリパー
ゼが包含される。このリパーゼ及びその精製方法
については、1978年２月24日付で公開された特開
昭53−20487号公報に記載されている。このリパ
ーゼは、商品名リパーゼＰ“Amano”として天野
製薬(株)より市販されている（以下、これを
“Amano−Ｐ”と略記する）。本発明のリパーゼ
は、オクテルロニー（Acta.Med.Scan.、133、
p.76−79（1950））により標準的な公知の免疫拡散
法に従つて、Amano−Ｐ抗体と正の免疫学的交
差反応を示すものでなければならない。 抗血清は次のようにして作成される。 等容量の0.1mg／ml抗原と（完全もしくは不完
全）フロイントアジユバントをエマルジヨンが得
られるまで混合する。下記の順序でエマルジヨン
サンプル２mlを２羽の雌家兎に注入した。 ０日目：完全フロイントアジユバント中抗原 ４日目：完全フロイントアジユバント中抗原 32日目：不完全フロイントアジユバント中抗原 60日目：不完全フロイントアジユバント中抗原ブ
ースター 所要の抗体を含む血清を、67日目の採血した凝
固血液を遠心して得た。 抗−Amano−Ｐ−リパーゼ抗血清の力価は、
オクテルロニー法に従つて抗原及び抗血清を系列
希釈しながら沈降反応を観察することにより決定
される。抗血清の５希釈度は、0.1mg／mlの抗原
濃度で目に見える沈降物を生ずる希釈度である。 上記した如くAmano−Ｐ抗体と正の免疫学的
交差反応を示すリパーゼが全て、本発明のリパー
ゼである。リパーゼの典型的な例が、Amano−
Ｐリパーゼ、シユードモナス・フラギ
（Pseudomonas fragi）FERM p1339由来のリパ
ーゼ（商品名Amano−Ｂ）、シユードモナス・ニ
トロレダクエンス変種リポリテイカム
（Pseudomonas nitroreducens var.
lipolyticum）FERM p1338由来のリパーゼ（商
品名Amano−CES）、クロモバクター・ビスコス
ム（Chromobacter viscosum）例えばクロモバ
クター・ビスコスム変種リポリテイカム
（Chromobacter viscosum var.lipolyticum）
NRRLB3673由来のリパーゼ（東洋醸造(株)より市
販）、クロモバクター・ビスコスム
（Chromobacter viscosum）リパーゼ（米国の
US Biochemical Corp.及びオランダのDiosynth
Co.より市販）、並びにシユードモナス・グラジオ
リ（Pseudomonas gladioli）由来のリパーゼで
ある。 本発明の好ましいリパーゼは、東洋醸造(株)より
市販されているクロモバクター・ビスコスム変種
リポリテイカム（Chromobacter viscosum
var.lipolyticum）NRRLB3673由来のリパーゼ或
いはシユードモナス・グラジオリ
（Pseudomonas gladioli）由来のリパーゼの抗体
と正の免疫学的交差反応を示すものである。 上記した好ましいリパーゼとしては、Amano
−Ｐ、Amano−Ｂ、Amano−CES、東洋醸造(株)
より市販されているクロモバクター・ビスコスム
（Chromobacter viscosum）例えばクロモバクタ
ー・ビスコスム変種リポリテイカム
（Chromobacter viscosum var.lipolyticum）
NRRLB3673由来のリパーゼ、米国のUS
Biochemical Corp.及びオランダのDiosynth Co.
より市販されているクロモバクター・ビスコスム
（Chromobacter viscosum）リパーゼ並びにシユ
ードモナス・グラジオリ（Pseudomonas
gladioli）由来のリパーゼが例示される。 本発明のリパーゼは洗剤組成物中に配合され、
その配合量は最終洗剤組成物が100〜0.005LU／
mg、好ましくは25〜0.05LU／mgの脂肪分解酵素
活性を有する量である。 リパーゼ単位（LU）は、30℃、PH＝9.0の条件
下で１分間あたりに1μmolの滴定可能な脂肪酸を
生ずるリパーゼの量である。なお、基質は５ｍ
molのトリス緩衝剤中に13ｍmol−Ca²⁺及び20ｍ
mol−NaClの存在下でオリーブ油33wt％及びア
ラビアゴム3.3wt％を含むエマルジヨンである。 勿論、上記リパーゼの混合物も使用可能であ
る。リパーゼは未精製物のままでも、また例えば
フエニルセフアロース充填カラム法の如き公知の
吸着法により精製した精製物も使用されうる。 本発明のリパーゼを配合する洗剤組成物は、洗
剤活性物質として少なくとも１種のノニオン合成
洗剤活性物質と少なくとも１種のアニオン合成洗
剤活性物質との混合物を含む。何れの種類の洗剤
活性化合物も当業者には公知であり、その適切な
例がSchwartz、Perry及びBerch著“Surface−
Active Agents and Detergents”、vol.
（1949）及びvol.（1958）並びにSchick著
“Nonionic Surfactant”vol.（1967）に詳しく
記載されている。 アニオン洗剤に対するノニオン洗剤の一般的な
重量比は12：１〜１：12であり、好ましくは８：
１〜１：８、より好ましくは４：１〜１：４であ
る。 洗剤組成物中に占めるノニオン洗剤活性物質と
アニオン洗剤活性物質の総量は１〜30重量％であ
り、通常２〜20重量％、好ましくは６〜16重量％
である。 他の種類の洗剤、例えば石けん、カチオン洗剤
及び双イオン洗剤を配合してもよい。 洗剤組成物が更に、慣用の洗剤成分を慣用量含
んでいてもよい。これら成分がビルダーでも非ビ
ルダーでもよく、無リンタイプ（即ちリン含有ビ
ルダーを含まないもの）でもよい。従つて、組成
物は１〜45重量％、好ましくは５〜30重量％の１
種もしくはそれ以上の有機及び／又は無機ビルダ
ーを含み得る。典型的な前記ビルダーとして、オ
ルトー、ピローおよびトリポリリン酸のアルカリ
金属塩、アルカリ金属炭酸塩が例示され、これら
ビルダーを単独で或いはカルサイト、アルカリ金
属クエン酸塩、アルカリ金属ニトリロトリ酢酸
塩、カルボキシメチルオキシコハク酸塩、ゼオラ
イト、ポリアセタールカルボン酸塩等と混合して
用いてもよい。更に組成物が１〜35重量％の漂白
剤または漂白剤とその活性剤から成る漂白系を含
んでいてもよい。この点に関して、本発明のリパ
ーゼは、本発明以外の他のリパーゼに比べて組成
物中に存在する漂白剤もしくは漂白系により受け
る影響がかなり少ないという驚くべき知見も得ら
れた。 組成物が、発泡剤、消泡剤、腐食防止剤、汚れ
浮遊剤（Soil−suspending agents）、金属イオン
封鎖剤、汚れ再付着防止剤、香料、着色剤、酵素
安定化剤、漂白剤等を含んでいてもよい。また組
成物がリパーゼ以外の酵素、例えばプロテアー
ゼ、アミラーゼ、オキシダーゼ及びセルラーゼを
含んでいてもよい。この点に関して、本発明のリ
パーゼの場合クリーンなモデルシステムにおいて
プロテアーゼの存在下ではその活性が急速に消失
するが、洗濯機内の実際の洗濯条件下ではプロテ
アーゼの存在下でもリパーゼによる実質的な作用
が得られるという驚くべき知見が得られた。 本発明の組成物は任意の所望の形態、例えば粉
末、棒、ペースト、液体等の形態で調製され得
る。 前記したように、本発明の組成物は全体的に優
れた洗浄作用、特により低温でその作用を示す。
従来リパーゼは特殊な条件下で特定の効果しか示
さないと考えられていたのに対して、本発明のリ
パーゼを配合した洗剤組成物では前記したように
全体的に優れた洗浄性能を示すことは驚くべきこ
とである。 以下、本発明を実施例に基いて更に説明する。 実施例 １ 次の粒状洗剤組成物を用いて、各種リパーゼに
よる洗濯実験を行つた。 重量部 ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム 6.5 C₁₄−C₁₅第１級アルコールとエチレンオキサイド
11モルとの縮合物 2.0 ステアリン酸ナトリウム 2.5 トリポリリン酸ナトリウム 16.0 オルトリン酸トリナトリウム 5.0 ケイ酸ナトリウム 10.0 汚れ浮遊剤 1.0 螢光物質 0.2 染 料 0.001 硫酸ナトリウム 24.0 水 6.0 Amano−Ｐ、ムコール・ミーヘイ（Mucor
miehei）より産生されたリパーゼであるSP225
（Novo Industri Ａ／Ｓ）及びムコール・ミーヘ
イ（Mucor miechei）より産生されたリパーゼ
であるEsterase MM（Gist−Brocades）の各種
リパーゼをテストした。 以下の条件下で洗濯実験を行つた。 洗濯温度及び時間：30℃で30分間 水硬度：8゜GH モニター：無機顔料、タンパク、オリーブ油もし
くはパーム油を含む混合物で汚したコツトンク
ロス及び所望のクロス／液体比を与えるクロス
の存在下 リパーゼ濃度：15LU／ml クロス／液体比：１：６ 組成物用量：６ｇ／ 汚す（soil）／洗濯サイクルを４回繰り返し
た。４回目の洗濯後、クロスの反射率及びクロス
上に残留する脂肪質物質のパーセンテージを測定
した。反射率は光路中にUVフイルターを設置し
反射計を用いて460nｍで測定した。乾燥させた
クロスを石油エーテルで抽出し、溶媒を留出後、
残存した脂肪質物質（fatty matter）の量（％
FM）を測定した。 結果は次の通りである。 【表】 上記結果から、本発明のリパーゼ（Amano−
Ｐ）が他の２種の従来のリパーゼよりも優れてい
ることが明らかである。 実施例 ２ 実施例１のAmano−Ｐの代りにDiosynthを使
用しても同様の結果が得られた。 実施例 ３ ３％TAED、８％過ホウ酸ナトリウム１水和
物及び0.3％Dequest （ジエチレントリアミンペンタメチルホスフオネ
ート）を含む漂白剤含有洗剤組成物における各種
リパーゼ（５ｇ／）のリパーゼ安定性を、
22゜GHの水中、30℃で比較した。調製物の残部は
実施例８と同じであつた。Savinase 或いは他のタンパク分解酵素は存在させなかつ
た。 【表】 【表】 ＊ 極めて長時間
漂白剤含有洗剤組成物において本発明のリパー
ゼが明らかに安定であることが示された。 実施例 ４ 実施例５の洗剤組成物（ベース粉末）に任意に
漂白系及び／又はタンパク分解酵素を含有させ
て、クリーンな洗濯液におけるリパーゼの安定性
をテストした。水硬度は22゜GHであつた。 次の結果が得られた。 【表】 漂白剤含有洗剤組成物における本発明のリパー
ゼの安定性が確認された。これらのクリーンな洗
剤液におけるタンパク分解作用に対するリパーゼ
の感応性も示された。 実施例 ５ 強漂白剤（６／12；TAED／過ホウ酸塩）及
び多量のタンパク分解酵素（Savinase；30GU／
ml）の存在下でのAmano−Ｐの性能を洗濯機を
用いてテストした。使用した組成物及び洗濯条件
は実施例１と同じであつた。 ４回目の洗濯後に得られた結果は次の通りであ
る。 【表】 上記結果から、 (1) Savinase（又は漂白剤）はR^* ₄₆₀に対して大
きな影響を及ぼすが、％FMに対する影響は殆
んど皆無あつた； (2) 実施例４で示した如くクリーンな洗剤液中で
はリパーゼはSavinaseに対して感応するのに
対して、これらのより現実的な実地の洗濯実験
ではリパーゼはSavinase／漂白剤（30GU／
ml）／（６／12 TAED／過ホウ酸塩１水和
物）と同等である（ただし、幾分抑制され
る）； ことが知見された。 実施例 ６ 実施例１と同様にして、リパーゼAmano−Ｐ
とEP0130064に従つてフサリウム・オキシスポル
ム（Fusarium oxysporum）より産生されたリ
パーゼとを比較した。コツトンクロス及びポリエ
ステル繊維製クロスについてテストした。クロス
をパーム油、タンパク及び無機顔料の混合物で汚
した。硬度8゜GH、22゜GHの水を用いた。 得られた結果は次の通りである。 【表】 【表】 EP0130064のリパーゼの脂肪分解活性は
90LU／mgであり、タンパク分解活性は120GU／
mgであつた。Amano−Ｐでは検出され得る程の
タンパク分解活性は示さなかつた。フサリウム
（Fusarium）由来のリパーゼの％FMに対する影
響は無視できる程小さいが、R^* ₄₆₀に対する影響
は多大であつた。しかしながら、この事実は、実
施例５（粉末＋Savinase対末＋リパーゼ）を比較
すればこのリパーゼサンプルにおけるタンパク分
解活性から容易に説明がつくことである。 実施例 ７ 実施例１と同様にして、リパーゼAmano−Ｐ、
同じメーカーから市販の他の本発明範囲外のリパ
ーゼAmano CE、本発明の他のリパーゼAmano
Ｂ及びAmano CESを比較した。 【表】 Amano CEリパーゼのリパーゼ活性は17LU／
mgであり、タンパク分解活性は16GU／mgであ
る。Amano−Ｐ、Amano−Ｂ及びAmano−
CESは同等のLU／mg活性を示すが、何れも検出
できる程のタンパク分解活性は示さない。
Amano CEがR^* ₄₆₀に対して良好な結果を示すが
％FMに対する影響が小さいことは、その悪化し
た（contaminated）タンパク分解活性から説明
付けられる。 実施例 ８ 洗濯過程での漂白剤及びタンパク分解酵素との
相溶性を示すために、次の粒状洗剤組成物を用い
て洗濯実験を行つた。 重量部 ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム 8.5 C₁₂−C₁₅第１級アルコールとエチレンオキサイド
７モルとの縮合物 4.0 硬化菜種油ナトリウム石けん 1.5 トリリン酸ナトリウム 33.0 炭酸ナトリウム 5.0 ケイ酸ナトリウム 6.0 硫酸ナトリウム 20.0 水 9.0 螢光物質、汚れ浮遊剤、染料、香料 少量 過ホウ酸ナトリウム 12.0 テトラアセチルエチレンジアミン 2.0 （TAED）（顆粒） タンパク分解酵素（Savinase；Novo製） 0.4 以下の条件下で洗濯実験を行つた。洗濯機に汚
れた洗濯物3.5Kgを投入した。 洗濯温度及び時間：30℃で30分間 水硬度：8゜GH、22゜GH リパーゼ濃度：15LU／ml 組成物用量：3.5ｇ／ ４回目の洗濯後に得られた結果は次の通りであ
る。 【表】 実施例 ９ 実施例４に示した如くタンパク分解酵素に対す
る耐性の異なる本発明のリパーゼを用いて、実施
例８と同様な実験を行つた。リパーゼ濃度は
5LU／mlであつた。コツトンクロスを用いてテス
トした。 【表】 30分間洗濯後の洗濯液中の残留活性は次の通り
である。 Amano−Ｐ 36％ 東洋醸造 55％ Diosynth 60％ 実施例４と詳細に比較すると、本実施例で使用
したより現実的な実地の洗濯条件下では、本発明
のリパーゼの洗剤製品中に存在するSavinaseの
如きプロテアーゼによる作用に対する感応性は実
質的に少ない。 実施例 10 洗剤組成物４ｇ／及びリパーゼ1LU／mlを用
いて、実施例１のテストを繰り返した。得られた
結果は次の通りである。 【表】 【表】 実施例 11 ５ｇ／の実施例８の洗剤組成物（水硬度
22゜GH）または４ｇ／の実施例１の洗剤組成物
（水硬度8゜GH）を用いて、実施例１と同様にして
洗濯実験を行つた。1LU／ml及び3LU／mlのリパ
ーゼを使用した。ポリエステル／コツトン混紡ク
ロス（Ｐ／Ｃ）または予洗コツトンクロス
（PWC）を使用した。 結果は次の通りである。 実施例８の組成物を用いた場合 【表】 実施例１の組成物を用いた場合 【表】 実施例 12 硬度8゜GHの水において４ｇ／の実施例１の
組成物または硬度22゜GHの水において５ｇ／の
実施例８の組成物を用いて、実施例１を各種温度
で繰返した。 得られた結果は次の通りである。 【表】 実施例 13 実施例１と同様にして、次の洗剤組成物をテス
トした。 Ａ：９％ アニオン洗剤 １％ ノニオン洗剤 21.5％ トリポリリン酸ナトリウム ７％ 過ホウ酸ナトリウム 0.6％ Savinase（タンパク分解酵素） 残部 硫酸ナトリウム＋少量成分 Ｂ：９％ アニオン洗剤 ４％ ノニオン洗剤 28％ ゼオライト 4.5％ ニトロトリアセテート 5.5％ 過ホウ酸ナトリウム 3.5％ テトラアセチルエチレンジアミン 0.5％ Savinase 残部 硫酸ナトリウム＋少量成分 Ｃ：５％ アニオン洗剤 ４％ ノニオン洗剤 １％ 石けん 30％ ゼオライト ３％ アクリル酸−無水マレイン酸共重合体 7.5％ 過ホウ酸ナトリウム ３％ テトラアセチルエチレンジアミン 残部 硫酸ナトリウム＋少量成分 Ｄ：８％ アニオン合成洗剤 ４％ ノニオン合成洗剤 ４％ 石けん 35％ 炭酸ナトリウム 20％ 粉末カルサイト ６％ 過ホウ酸ナトリウム ２％ テトラアセチルエチレンジアミン 0.5％ Savinase 残部 硫酸ナトリウム＋少量成分 次の結果が得られた。 【表】 【表】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ アニオン洗剤活性化合物とノニオン洗剤活性
   化合物の混合物と酵素とから成る洗剤組成物であ
   つて、前記酵素が微生物シユードモナス・フルオ
   レツセンス（Pseudomonas fluorescens）
   IAM1057より産生されたリパーゼの抗体と正の
   免疫学的交差反応を示すリパーゼであることを特
   徴とする組成物。 ２ リパーゼが、クロモバクター・ビスコスム変
   種リポリテイカム（Chromobacter viscosum
   var.lipolyticum）NRRLB3673またはシユードモ
   ナス・グラジオリ（Pseudomonas gladioli）由
   来のリパーゼの抗体と正の免疫学的交差反応を示
   す特許請求の範囲第１項に記載の組成物。 ３ 正の免疫学的交差反応を示すリパーゼがシユ
   ードモナス（Pseudomonas）属又はクロモバク
   ター（Chromobacter）属由来のリパーゼである
   特許請求の範囲第１項または第２項に記載の組成
   物。 ４ リパーゼがシユードモナス・フルオレツセン
   ス（Pseudomonas fluorescens）、シユードモナ
   ス・フラギ（Pseudomonas fragi）、シユードモ
   ナス・ニトロレダクエンス変種リポリテイカム
   （Pseudomonas nitroreducens var.
   lipolyticum）、シユードモナス・グラジオリ
   （Pseudomonas gladioli）及びクロモバクター・
   ビスコスム（Chromobacter viscosum）由来の
   リパーゼである特許請求の範囲第３項に記載の組
   成物。 ５ 最終組成物が0.005〜100LU（リパーゼ単
   位）／mgの脂肪分解酵素活性を有する量のリパー
   ゼを含む特許請求の範囲第１項から第４項のいず
   れかに記載の組成物。 ６ 更に漂白剤を含む特許請求の範囲第１項から
   第５項のいずれかに記載の組成物。 ７ 更にタンパク分解酵素を含む特許請求の範囲
   第１項から第６項のいずれかに記載の組成物。