JPH01265890A - 新規抗生物質ｓｆ２５８２ｃ物質及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は新規抗生物質ＳＦ２５８２Ｃ物質およびその製
造法に関する。

さらに詳しくは抗腫瘍作用を有する新規抗生物１ｓＦ２
５８２ｃ物質、およびストレプトミセス属に属する微生
物によるＳＦ２５８２Ｃ物質の製造法に関するものであ
る。

従来の技術および発明か解決しようとする課題従来、数
多くの抗腫瘍抗生物質が報告され、そのうちのいくつか
のものは制癌剤として実用化されている。しかし癌の化
学療法の分野における解決されていない問題はいまだ多
く残されている。本発明は、新規かつ有用な抗腫瘍抗生
物質を得ることを目的とする。

課題を解決するための手段 本発明者らは、先にストレプトミセス属に属する特定の
菌株を培養することにより９強い抗腫瘍作用を有する物
質が培養液中に生産、蓄積されることを見い出し、その
有効物質を採取することに成功いＳＦ２５８２Ａおよび
Ｂ物質と命名し特許出願を行なった（特願昭６２−２９
７４７６）。

本発明者らはこれと同一菌株の培養液中に他の新規な有
効物質か生産されていることを見い出し。

該物質を単離しＳＦ２５８２Ｃ物質と命名した。

本発明は上記の知見に基づいて完Ｉ＃、されたものであ
る。

本発明にかかるＳＦ２５８２Ｃ物質は下記の特性を有す
る。

（１）外観：橙色の結晶性粉末 （２）融点：＞２４０℃ （３）元素分析値：Ｃ５９，２４％、８　５．１２％。

Ｎ　　７，９８％ （４）分子式：Ｃ２６Ｈ２７Ｎ３Ｏ９ ＋ （５）マススペクトル：　ＥＴ−ＭＳ　ｍ／ｚ　５２５
（Ｍ　）（６）比旋光度：［ａ］Ｄ−５４°（ｃ　Ｏ，
１，メ９ノール） （７）紫外部吸収スペクトル：第１図に示すλｍａｘ　
ｎｍ（Ｅ　（汽）メタノール溶液中：２０８（８４５Ｌ
２４５肩（４５０）、２９７（４７３）、３３６（６９
０）。

（８）光外部吸収スペクトル：第２図に示す。

（９）ＩＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ　、ＤＭＳ
Ｏ−ｄ　ｅ）第３図に示す。

ｎｏ％”ｃ　　ＮＭＲスペクトル（１，００ＭＨｚ、Ｄ
ＭＳＯ−ｄｅ）第４図に示す。

δ（ｐｐｍｃ　１９８．１（ｓ）、１６９．５（ｓＬ１
５９．６（ｓ）。

１５０．５（ｓ）、１４９．３（ｓ）、１４３．１（ｓ
）、１３９．９（ｓ）。

１３９．２（ｓ）、　１３６．５（ｓ）、　１３１．４
（ｓ）、　１２５．３（ｓ）。

１２３．４（ｓ）、１２０．０（ｓ）、１−１４．５（
ｓ）、１１１．４（ｄ）。

１０’５．９（ｄ）、　　９８．２（ｄ）、　　７０．
１．（ｓ）、　　６２．６（ｔ）。

６１．３（ｑＬ　６１．１（ｑ）、　　５６．１（ｑ）
、　　５４．１（ｔ）。

５２．８（ｑ）、　　４２．５（ｄ）、　　２０．３（
ｑ）（１１）溶解性：ピリジン、ジメチルスルホキサイ
ドに易溶、メタノールにわずかに溶け、クロロホルム、
ヘキサン、酢酸エチル、水に難溶。

（１２）薄層クロマトグラフィー（シリカゲル；メルク
社製） 展開溶媒　　　　　　　　Ｒ「 り１１７ｕホルム−メタノール（１０：　１　）　０．
３８トルエン−アセトン（１：　１）　　　　０．６２
（１３）呈色反応：陽性；１０％硫酸試薬、レミュー試
薬、グレイグーリーバツク試薬、モリブデン−硫酸試薬 陰性；ニンヒドリン試薬 以上述べた理化学的性状から本物質はインドール骨格を
有する抗生物質と考えられる。そこで上記の理化学的性
状と類似する化合物としてＣＣ−１０６５ＩＤ、Ｇ、Ｍ
ａｒＬｉｎら：、■、Δｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　３４゜
１．１１９−１１２５（１９８１）］が知られているが
、ＳＦ２５８２Ｃ物質はＣＣ−１０６５と理化学的性状
が明らかに異なり新規抗生物質であることか確認された
。

本発明に使用されるｉ’ｉ規抗生物質ＳＦ２５８２Ｃ物
質の生産菌の一例としては、神奈川県相模原市の土壌か
ら新たに分離されたＳＦ２５８２株がある。

ＳＦ２５８２株の菌学的性状は下記の通りである。

１、形態 基土菌糸は長く伸長し、よく分岐する。気菌糸はスター
チ寒天、オートミール寒天、シュクロース・硝酸塩寒天
等で着生し、胞子形成も豊富である。

気菌糸の分岐は単純分岐であり、車軸分岐は見られない
。気菌糸先端の胞子連鎖は主にらせん状（ｃｌｏｓｅｄ
　５ｐｉｒａｌ）である。電子顕微鏡による観察では、
胞子は円筒型で、０．７〜０．９Ｘ１．０〜１．４μｍ
の犬ぎさを有し１表面は平滑であり９通常２０胞子前後
連鎖する。胞子のう、運動性胞子、菌核なとは観察され
ない。

■、各種培地上の生育状態 ＳＦ２５８２株の各種培地」二の生育状態は第１表に示
す通りである。色の記載について（）内に示す標準はコ
ンテイナー・コーポレーション・オブ０アメリカ（Ｃｏ
ｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆＡｍｅ
ｒｉｃａ）社製の１カラー・ハーモニイ争マニアル（Ｃ
ｏｌｏｒ　ｌｌａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）Ｊに記載
のものを用いた。観察は２８°Ｃで１４〜２１日間培養
後に行った。

■．生理的性質 （１）生育温度範囲：イースト・麦芽寒天において１５
〜３８℃の温度範囲で生育し，２６〜３Ｏ°Ｃで良好に
生育する。

（２）ゼラチンの液化：陽性 （３）スターチの加水分解：陽性 （４）硝酸塩の還元：陰性 （５）脱脂乳のペプトン化：陽性 脱脂乳の凝固：陰性 （６）耐塩性ニア％Ｎ　ａ　Ｃ　ｌ含有培地では生育す
るが。

１０％以上では生育しない。

（７）メラニン様色素の生成：陰性 ■．炭素源の利用性（ＩＳＰ　　Ｎｏ．９培地使用）（
１）利用する＝Ｄーグルコース、グリセロール、Ｄ−キ
シロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−
７ラクトース、ｍｙｏ−イノシトール、Ｌ−ラムノース （２）利用しない：シュクロース （３）利用が疑わしい：ラフィノース ■．細胞壁組成 ベラカー（Ｂｅｃｋｅｒ）らの方法（Ａｐｐｌ、　ｌ’
１ｉｃｒｏｂｉｏｌ。

１３：　２３６．１９６５）ニより分析した結果、細１
包壁組ｒＩｉ、成分中のソアミノピメリン酸はＬＬ型で
あった。

以」二の性状よ１１，ＳＦ２５８２株は放線菌の弓コで
ストレプトミセス属に属すると考えるの力ｆ妥当である
。本発明者らはＳＦ２５８２株を又トレフ。

）ミセＸ・ｊ−人ピ−・ＳＦ２５８２（Ｓｔｒｅ　−ｐ
ｔｏ＋ｎｙｃｅｓ　　ｓｐ、ＳＦ２５８２）と称するこ
とにした。なお、ＳＦ２５８２株（よ工業１支谷ｊ院微
生物工業技術研究所に、＠工研菌寄第９６７２号（ＦＥ
ＲＭ　　Ｐ−９６７２）としで受託されている。

ＳＦ２５８２株は他の放線菌に見られるよう１こ。

その性状が変化しやす（・。例えｔｉ’ｔｓＦ２５８２
株の、またはこの株に由来する突然変異株（自然発生ま
たは誘発性）、形質接合体または遺イ云子岨換え体であ
っても、ＳＦ２５８２Ｃ物質を生産するものは全て本発
明に使用出来る。本発明のブチ法で１よ。

前記の菌を通常の微生物が利用しうる栄養物を含有する
培地で培養する。栄養源として（土、従来放線菌の培養
に利用されている公知のものが使用でとる。例えば、炭
素源として、グルコース、水あめ。

デキストリン、澱粉、糖みつ、動・植物油等を使用しう
る。また窒素源として、大豆粉、小麦胚芽、コーンステ
イープリカー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキ
ス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用しろ
る。その他、必要に応じ、ナトリウム、カリウム、カル
シウム、マグネシウム、コバルト。

塩素、燐酸、硫酸、およびその他のイオンを生成するこ
とができる無機塩類を添加することは有効である。また
菌の発育を助け、ＳＦ２５８２Ｃ物質の生産を促進する
ような有機および無機物を適当に添加することかできる
。

培養法としては、好気的条件での培養法、特に深部培養
法が最も適している。培養に適当な温度は２６〜３Ｏ℃
であるが、多くの場合、２８°Ｃ付近で培養する。ＳＦ
２５８２Ｃ物質の生産は培地や培養条件により異なるが
、振とう培養、タンク培養とも通常２〜７日の間でその
蓄積が最高に達する。培養中のＳＦ２５８２Ｃ物質の蓄
積量が最高になった時に培養を停止し、培養液から目的
物質を単離精製する。

本発明によって得られるＳＦ２５８２Ｃ物質の培養物か
らの採取に当たっては、その性状を利用した通常の分離
手段１例えば、濾過、溶剤抽出法、吸着または分配カラ
ムクロマト法、ゲル濾過法、透析法、沈澱法等を単独で
または適宜組み合わせて抽出精製することができる。例
えば、ＳＦ２５８２Ｃ物質は、培養菌体中からはアセト
ン−水またはメタノール−水で抽出される。また、水と
混ざらない有機溶剤９例えば、ブタノール、酢酸エチル
等で抽出すればＳＦ２５８２Ｇ物質は有機溶剤層に抽出
される。ＳＦ２５８２Ｇ物質をさらに精製するには、シ
リカゲルくフコ−デルＣ−２００，和光純薬工業社製等
）、アルミナ等の吸着剤やセファデックスＬｌｌ−２０
（ファルマシア社製）等を用いるクロマトグラフィーを
行うとよい。

実施例 以下に本発明の実施例を示すが、これらは単なる一例で
あって本発明を限定するものではなし）。

ここに例示しなかった多くの変法あるいは修飾手段を用
いうろことは勿論のことである。

実施例１ 種培地としで、スターチ１．０％、グルコース１．０％
、小麦胚芽１．０％、ファーマメディア１．０％、スタ
ミ７−ル（サラポロビール社製）０．２％、大豆粉１．
０％、塩化ナトリウム０．２％、燐酸水素二カリウム０
．２％、硫酸マグネシウム０．０５％の組成からなる培
地を用いた。

また、生産培地としで、水あめ５．０％、グルテンミー
ル０．５％、大豆粉１．０％、肉エキス０．５％、スタ
ミ７−ル０．２％、硫酸マグネシウム（７水塩）０．１
％、塩化ナトリウム０．２％、塩化コバルト（６水塩）
　０．００１％の組成からなる培地を用いた。

なお、殺菌前のｐｌｌは９種培地はｐｌｌ７．０に、ま
た生産培地はｐＨ［３，５に調整して使用した。

前記の種培地２０ｍりを分注した１００ｍ＋！容三角フ
ラスコを１２０°Ｃで３Ｏ分間殺菌し、これにストレプ
トミセス・エスピー・ＳＦ２５８２株（ＦＥＲＭ　Ｐ−
９６７２）の斜面寒天培養の２〜３白金耳を接種し、２
８°Ｃで３日間振どう培養し、第１種培養とした。

次いで１種培地８０　＋ｎ　（ｌを分注した５００ｍ１
容三角フラスコを１２０°Ｃで３Ｏ分間殺菌し、前記第
１種培養２．４ｍρを接種し、２８℃で１日間振どう培
養し、これを第２種培養とした。さらに種培地１１を分
注した５１！容三角フラスコを１２０°Ｃで３Ｏ分間殺
菌し、第２種培地３Ｏ　＋０１を接種し、２８℃で１日
間振どう培養し、これを第３種培養とした。

予め１２０　’Ｃで３Ｏ分間殺菌した２００１の生産培
地を含む３ＯＯＮ容タンク５基に、前記の第３種培養を
各々２りずつ接種し、２８°Ｃで５日間通気（１００１
１１７分）、撹はん（初期１１００ｒｐ、培養２４時間
以降１３Ｏｒｐｍに上げる）培養した。

培養終了後、濾過助剤として珪藻土を加えて濾過し菌体
を含む固形物を得た。

実施例２ 実施例１で得られた菌体を含む固形物を６０％アセトン
水３５０１！にて活性成分を抽出した。得られた抽出液
を減圧濃縮して１００りの水溶液とし、これに酢酸エチ
ル１００１を加え活性成分を抽出した。酢酸エチル溶液
を）威圧濃縮することにより２２２ｇの油状物質を得た
。これにｎ−ヘキサン１りを加え、ヘキサン可溶成分を
除いた後、不溶成分を乾燥させて９６ｇの油状物質を得
た。次にこの油状物質を３４のシリカゲルカラム（ワコ
ーデルＣ−２００）に付し、クロロホルム４ρで洗った
後、クロロホルム−メタノール（５０：１）の混合溶媒
で展開すると５００ｍρ分画で分画Ｎｏ、１２−１．６
にＳＦ２５８２Ｃ物質を含む活性画分が得られた。これ
を集めて濃縮すると黄橙色の結晶が析出した。これを濾
別後、乾燥するとＳＦ２５８２Ｃ物質の粗結晶が９２０
＋ｎｇ得られた。

さらにこの粗結晶９２０ｍｇをクロロホルム−メタノー
ル（５：　１）の混合溶媒で再結晶を２回くり返すこと
によりＳＦ２５８２Ｃ物質の橙色結晶が４５０ｍｇ得ら
れた。

発明の効果 第２表はＳＦ２５８２Ｃ物質の各種腫瘍細胞に対する■
Ｃ３ｏ（５０％阻害濃度）を示した。■Ｃ５゜は薬剤添
加後、３７℃５％ＣＯ２下で７２時間培養し培養終了後
ＳＦ２５８２Ｃ物質の各種腫瘍細胞に対する障害性を測
定し、プロビット法にて算出した。また本物質はマウス
を用いた急性毒性試験において２００ｍｇ／ｋｇ（ｉ、
ｐ、）の投与量で死亡例を認めなかった。従って本発明
の新規抗生物質ＳＦ２５８２Ｃ物質は各種腫瘍細胞に対
して細胞障害性を有し抗腫瘍剤としての有用性が期待さ
れる。

＝１６− 第２表　ＳＦ２５８２Ｃ物質の細胞障害性

【図面の簡単な説明】

第１図はＳＦ２５８２Ｃ物質のメタノール溶液中での紫
外部吸収スペクトルを示す。 第２図はＳＦ２５８２Ｃ物質の臭化カリウム銑中での赤
外部吸収スペクトルを示す。 第３図はＳＦ２５８２Ｃ物質の重ジメチルスルホキシド
中での４００ＭＨｚ　　’ＨＮＭＲスペクトルを示す。 第４図はＳＦ２５８２Ｃ物質の重ジメチルスルホキシド
中での１００ＭＨｚ　　１３ＣＮ　Ｍ　Ｒスペクトルを
示す。 区 一一一 塚

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の特性を有する新規抗生物質ＳＦ２５８２Ｃ物
   質 （１）外観：橙色の結晶性粉末 （２）融点：＞２４０℃ （３）元素分析値：Ｃ５９．２４％、Ｈ５．１２％、Ｎ
   ７．９８％ （４）分子式：Ｃ＿２＿６Ｈ＿２＿７Ｎ＿３Ｏ＿９ （５）マススペクトル：ＥＩ−ＭＳｍ／ｚ５２５（Ｍ＾
   ＋） （６）比旋光度：［α］＾２＾２＿Ｄ−５４°（ｃ０．
   １、メタノール） （７）紫外部吸収スペクトル：第１図に示すλｍａｘ　
   ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）メタノール溶液中：２
   ０８（８４５）、２４５肩（４５０）、２９７（４７３
   ）、３３６（６９０）、４３２（９３） （８）赤外部吸収スペクトル：第２図に示す （９）＾１ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、ＤＭＳ
   Ｏ−ｄ＿６）：第３図に示す。 （１０）＾１＾３ＣＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ、
   ＤＭＳＯ−ｄ＿６）：第４図に示す。 δ（ｐｐｍ）：１９８．１（ｓ）、１６９．５（ｓ）、
   １５９．６（ｓ）、１５０．５（ｓ）、１４９．３（ｓ
   ）、１４３．１（ｓ）、１３９．９（ｓ）、１３９．２
   （ｓ）、１３６．５（ｓ）、１３１．４（ｓ）、１２５
   ．３（ｓ）、１２３．４（ｓ）、１２０．０（ｓ）、１
   １４．５（ｓ）、１１１．４（ｄ）、１０５．９（ｄ）
   、９８．２（ｄ）、７０．１（ｓ）、６２．６（ｔ）、
   ６１．３（ｑ）、６１．１（ｑ）、５６．１（ｑ）、５
   ４．１（ｔ）、５２．８（ｑ）、４２．５（ｄ）、２０
   ．３（ｑ）（１１）溶解性：ピリジン、ジメチルスルホ
   キサイドに易溶、メタノールにわずかに溶け、 クロロホルム、ヘキサン、酢酸エチル、水に難溶。 （１２）薄層クロマトグラフィ一（シリカゲル；メルク
   社製） 展開溶媒　Ｒｆ クロロホルム−メタノール（１０：１）０．３８トルエ
   ン−アセトン（１：１）０．６２（１３）呈色反応：陽
   性；１０％硫酸試薬、レミュー試薬、グレイグ−リーバ
   ック試薬、モリブデン−硫酸試薬 陰性；ニンヒドリン試薬 ２、ストレプトミセス属に属するＳＦ２５８２Ｃ物質生
   産菌を培養し、その培養物からＳＦ２５８２Ｃ物質を採
   取することを特徴とする新規抗生物質ＳＦ２５８２Ｃ物
   質の製造法。