JPH01187086A - 酵素固定化用担体とその酵素固定化方法および酵素脱着方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は酵素固定化用担体および当該担体に酵素を固定
化する方法さらに使用済酵素を担体から脱着する方法に
関するものである。

〈従来の技術〉 酵素反応は特に食品、医薬品製造の分野で工業的に利用
されているが、旧来の溶液状酵素を用いる回分式では、
反応後に酵素を失活させることなく生成物と分離するこ
とが困難なため、回収再利用ができず不経済であること
から、種々の方法にて酵素を不溶性の担体に固定化する
研究が盛んに行われており、既に実用化されている例も
ある。

イオン交換樹脂はこのような酵素固定化用の不溶性担体
として良く用いられ、通常イオン結合および吸着法によ
り酵素を固定化するが、次のような問題点がある。

例えばポリフェノール系の陰イオン交換樹脂であるデュ
オライトＡ７に吸着固定化する方法（特開昭４９−８０
１６０）では、疎水性に基づく吸着が強いので酵素が脱
着しに（＜、使用することにより失活した酵素を脱着し
て担体を再使用することが困難である。

一方、主としてイオン結合を利用して固定化した場合に
は一般に吸着力が弱いために反応中に酵素が離脱するこ
とが多く、例えばスチレン−ジビニルベンゼン系陰イオ
ン交換樹脂ではイオン交換基に活性水素を含まない担体
を用いる方法（特開昭６ｌ−１５６９０）では、樹脂担
体に酵素を吸着固定化した後、さらに多価アルデヒドで
酵素間を架橋して吸着力の弱い点を補強しているが十分
ではない。

また多価アルデヒドを用いて担体と酵素間を直接架橋し
固定化する方法ではアミン基を含むセルロース、５ｅｐ
ｈａｒｏｓｅ　％ポリアクリルアミド等、種々の担体に
ついて検討されており、この方法は酵素の離脱がなく固
定化法としては優れているものの、使用済酵素の脱着が
可能で繰り返し使用に適した担体とその脱着法が見出さ
れていない。

く本発明が解決しようとする問題点〉 本発明は固定化した酵素が反応中に離脱することな（使
用酵素の安定ｐＨおよび温度範囲において、長期間に渡
り高い活性を維持し、かつ一定期間使用した後には容易
に酵素を脱着することができ、繰り返し使用に耐える十
分な物理的および化学的強度を有する担体およびその酵
素固定化方法さらに使用済酵素の脱着方法を提供するこ
とを目的とする。

く問題点を解決するための手段〉 前述の目的を達成するために本発明者等は鋭意研究を行
った結果、担体として不飽和カルボン酸グリシジルエス
テルの重合物で、イオン交換基としてエタノールアミン
等の第一アミンを付加した担体を用いて製造した固定化
酵素が長期間安定して高い活性を維持し、またグルタル
アルデヒドを介在させることにより前記交換基に強固に
酵素を結合させることができ、さらに温アルカリ溶液に
より容易に酵素を脱着することができ、担体が繰り返し
使用可能であることを見出し本発明を完成した。

すなわち本発明の第一発明は巨大網状構造を有する塩基
性陰イオン交換樹脂の母体が、不飽和カルボン酸グリシ
ジルエステルの重合物であり、イオン交換基として第一
アミンを有することを特徴とする酵素固定化用担体であ
り、本発明の第二発明は前記酵素固定化用担体に酵素を
固定化するにあたり、第一アミンからなるイオン交換基
にグルタルアルデヒドを架橋剤として介在させて酵素を
結合させることを特徴とする酵素固定化方法であり、本
発明の第三発明は上述のごとくして得た固定化酵素を使
用した後、当該固定化酵素に温アルカリ溶液を接触させ
て酵素を脱着することを特徴とする酵素脱着方法である
。

く作用〉 前述したごとく弱塩基性陰イオン交換樹脂に酵素を吸着
させた固定化酵素は酵素の吸着が弱く反応中に離脱する
ため、後述する実施例で示すごとく短期間で急激に活性
が低下し、また酵素を吸着させた後グルタルアルデヒド
で酵素間を架橋してもその効果は十分ではない、それに
対して第一アミンを有するイオン交換樹脂担体と酵素間
をグルタルアルデヒドで架橋して製造したものは酵素反
応中に酵素の離脱がなく長期間高い活性を維持できる。

しかしながら酵素反応中に酵素の離脱がなく、長期間高
い活性を維持できても、使用後に酵素の脱着が可能で担
体が繰り返し使用可能でなければ経済的に不利である。

後述する実施例で示したごとくイオン交換樹脂の母体と
して一般的なスチレン−ジビニルベンゼン系の母体に第
一アミンを導入したものの場合は固定化した酵素の脱着
が十分でないため、脱着後再び固定化したときの活性が
低下する。この原因はスチレン−ジビニルベンゼンの共
重合体が極めて疎水性であるために酵素固定化時にイオ
ン結合と同時に、酵素が疎水性に基づく吸着を生じてい
るためと考えられた。

この問題を解決するために鋭意検討を行った結果、不飽
和カルボン酸グリシジルエステルのポリマーに第一アミ
ンを付加した巨大網状構造を有する担体を用い、担体の
官能基と酵素間をグルタルアルデヒドで架橋して得られ
る固定化酵素が温アルカリ溶液によって容易に脱着され
ることを見出した。本担体は（１）式に例示した反応式
によってモノマーおよび架橋剤の親水性に加えて交換基
導入反応時にエポキシ環が開裂し、一方に交換基が付加
するとともに他方にアルコール性水酸基が生成すること
から極めて親水性の高いポリマーであり、そのため前述
したような酵素の疎水性吸着が起こりにくいと考えられ
る。

本発明に用いる担体としては、不飽和カルボン酸グリシ
ジルエステルの重合物からなり、イオン交換基として第
一アミンを有する巨大網状構造を有する塩基性陰イオン
交換樹脂であって、好ましくはメタアクリル酸グリシジ
ルエステルまたはアクリル酸グリシジルエステル、クロ
トン酸グリシジルエステル等に、架橋剤としてジメタア
クリル酸エチレングリコール、ジメタアクリル酸ポリエ
チレングリコール等を重合反応させて得た母体に官能基
としてエタノールアミンまたはプロパノールアミンを付
加したものである。

巨大網状構造を有する母体の物理的構造としては平均粒
子径０．２〜１鶴で、細孔径が１００〜２゜０００人、
細孔容積が０．５〜１．５　ｍ　ｌ　／　ｇ程度のもの
が用いられる。

本発明で使用する酵素としては特に限定はなく、加水分
解酵素、転移酵素、酸化還元酵素、異性化酵素等が挙げ
られ、特にグルコアミラーゼ、α−アミラーゼ、プロテ
アーゼ、サイクロデキストリングルカットランスフアー
ゼ、オキシダーゼ、イソメラーゼ等が好適である。

次に酵素の固定化法について説明すると、まず当該担体
をｐＨ緩衝液を用いて使用酵素の安定ｐＨに緩衝化し、
次いで同緩衝液に溶解した０、　５〜１０％濃度のグル
タルアルデヒド溶液と４〜４０℃にて０．５〜２時間接
触させ、その後緩衝液で過剰のグルタルアルデヒドを洗
い流す。このようにして調整した担体と酵素溶液とを１
時間以上、好ましくは２〜５時間接触させて酵素を固定
化した後、過剰の酵素を緩衝液で洗い流すことにより得
ることができる。酵素の使用量は使用する酵素によって
異なるが蛋白として０．５〜５０■−蛋白／ｍ７！−担
体の範囲が適当である。

上述のような担体の第一アミンにグルタルアルデヒドを
架橋剤として介在させて酵素を結合する反応は（２）式
および（３）式のごと（例示される。

担体−ＮＨｔ＋０ＨＣ−（ＣＨｚ）　ａ−ＣＨＯ−→担
体−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＬ）　５−ＣＨＯ・・・・・（２）
担体−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨｚ）　５−ＣＨＯ＋酵素−→担
体−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨｚ）　３−ＣＩ＝Ｎ−酵素・・−
（３）当該担体とグルタルアルデヒドあるいは酵素溶液
との接触方法としてはバッチ法でもカラムに充填して上
向流あるいは下向流にて通液して実施しても良い。

次に上記のようにして製造した固定化酵素を一定期間使
用して、活性の低下した酵素を脱着する方法について説
明すると、まず反応に使用した固定化酵素を水洗してそ
の後０．５〜ｌＯ％濃度、特に好ましくは２〜５％のア
ルカリ溶液、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム
、炭酸ナトリウム溶液と４０〜７０℃にて０．５時間以
上、好ましくは１〜３時間接触させて酵素蛋白をグルタ
ルアルデヒドとともに脱着し、担体を水洗する。

以後は前述した方法で担体の緩衝化、グルタルアルデヒ
ド処理を実施し、酵素溶液と接触させて再固定化し目的
の反応に使用する。このようにして担体を繰り返し使用
することができる。脱着の際のアルカリ溶液との接触方
法ｉバッチ法でも担体をカラムに充填し通液して実施し
ても良い。

く効果〉 以上説明したごと（、本発明の担体は担体と酵素間をグ
ルタルアルデヒドを架橋剤として介在させて固定化する
方法に用いる担体として好適であり、初期の活性が高く
、かつ酵素反応中に酵素の離脱がないため長期間に渡っ
て高い活性を維持できるばかりでなく、温アルカリ溶液
によって使用済酵素が容易に脱着できる。従って旧来の
バッチ反応に比べて酵素の使用量が極めて少なく、担体
も繰り返し使用できるため経済的メリットは非常に大き
い。

以下に本発明を実施例をもってさらに詳しく説明する。

なお本発明はその要旨を超えない限り以下の実施例に限
定されるものではない。

実施例１　（固定化担体の製造法） メタアクリル酸グリシジル２００　ｇ、ジメタアクリル
酸エチレングリコール５０ｇ、過Ｍ化ベンゾイル２ｇお
よびトルエン２５０ｇの混合溶液をポリビニルアルコー
ル２ｇを溶解した水１，０００　ｍ　ｌに加えた。この
混合液を攪拌しながら６０℃で４時間反応し重合させた
。冷却後生成物を濾過洗浄し、６０℃で１６時間真空乾
燥し、２０５ｇの白色不透明の球状樹脂を得た。

得られた球状樹脂１００ｇをエタノールアミン５００ｍ
ｊｊ中に加え、１１０〜１２０℃で６時間攪拌して反応
させた。冷却後生成物を濾過洗浄し、６０℃で１６時間
真空乾燥し１１７ｇの生成物を得た。

この樹脂の粒径は、１００〜５００μｍであり、水銀ポ
ロシメーター法で測定した細孔容積は１．１２　ｍ　Ａ
！　／　ｇ乾燥樹脂であり、細孔直径１００Å以上の細
孔に基づ（比表面積は５３．３ｒｒｒ／ｇ乾燥樹脂であ
った。

実施例２ 実施例１で得た担体にグルコアミラーゼを固定化した例
につ、いて述べる。

まず担体５０ｍｊ！をカラムに充填し、４％濃度の水酸
化ナトリウム溶液２５９ｍｊ！を５０℃にて通液した後
イオン交換水にて洗浄する０次いで０゜１Ｍ−酢酸・酢
酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，０）約１，０００ｍｊｔ
を通液して緩衝化した後、担体をカラムからビーカーに
取り出し、同緩衝液に溶解した５％グルタルアルデヒド
溶液１００ｍ６を加えて攪拌しながら１時間反応させ、
その後グラスフィルターにて固液分離し、さらに緩衝液
にて過剰のグルタルアルデヒドを洗浄する。

上記の方法で調整した担体２ｇ−ｗｅｔをビーカーに取
り、緩衝液５．７　ｍ　Ｉｔとグルコアミラーゼ溶液０
．３ｍｌ１（蛋白量として２６ｗ／ｇ−ｗｅ　ｔ添加）
とを加え、攪拌しながら２時間反応させて酵素を固定化
し、その後グラスフィルターにて固液分離し、さらに過
剰の酵素を緩衝液にて洗浄してグルコアミラーゼ固定化
酵素を得る。

このようにして得た固定化酵素は湿潤担体１ｇ・ｗｅｔ
あたり２２■の蛋白が固定化されていた。

この固定化酵素を内径１０鶴のジャケット付きカラムに
充填し、ｐＨ５，０の緩衝液に溶解した１０％マルトー
ス液を５０℃にて通液した０通液の流速は基質マルトー
スのグルコースへの転換率が９９％になるように初期に
設定し、以後も同一流速にて連続通液してグルコースへ
の転換率の経口変化を測定した。

また比較のために前述と同じ酵素量を用い、下記ＡＳＢ
、Ｃの３種の異なる方法で調整した固定化酵素をカラム
に充填し、１０％マルトース液を通液してグルコースへ
の転換率の経日変化を測定した。

Ａ：母体がスチレンとジビニルベンゼンの共重合体で交
換基として第三アミンを有する市販樹脂を緩衝化し、酵
素液を加えて１時間攪拌して吸着させて得た。

Ｂ：Ａの方法で得られた固定化酵素に、さらに緩衝液に
溶解した０、５％のグルタルアルデヒド溶液を加えて、
３時間攪拌しながら酵素間を架橋して得た。

Ｃ：母体がスチレンとジビニルベンゼンの共重合体で交
換基として第一アミンを有するものを合成し、本発明の
担体と全く同じ条件で担体と酵素間をグルタルアルデヒ
ドで架橋して固定化した。

その結果、通液開始時にグルコースへの転換率が９９％
を達成し得る流速は固定化酵素Ａが５Ｖ−２，３（ｈ−
烏）、Ｂが５Ｖ＝２．５　（ｈ−’）　、Ｃが５Ｖ−３
，２（ｈ−’）であるのに対し、本発明の固定化酵素の
場合には５Ｖ−３，８（ｈ−’）と大きく、すなわち初
期の活性が非常に高く、かつ固定化酵素のライフの指標
である活性半減期（グルコースへの転換率が４９．５％
に低下するまでの通液日数）は第１図に示したごとく固
定化酵素Ａ、Ｂがそれぞれ１２日間、２５日間であるの
に対して本発明の固定化酵素は６８日と極めて優れた性
能を示した。

次に本発明の固定化酵素の脱着方法について説明すると
、本発明の固定化酵素２ｇ−ｗｅｔをビーカーに取り、
４％の水酸化ナトリウム溶液１５ｍＩＶを加えて５０℃
にて２時間攪拌し、その後グラスフィルターで固液分離
し、さらに水洗して脱着した酵素蛋白を洗い出す、この
ようにして脱着した担体に前述の方法で酵素を再固定化
する。

比較例として上記の固定化酵素Ｃについても全く同じ条
件で脱着、再固定化を実施した。

脱着試験の結果、本発明の固定化酵素の場合蛋白脱着率
が９８％とほぼ完全に酵素が脱着し、再固定化時の固定
化率も８５％と第１回目の８８％とほぼ同じであるのに
対して、固定化酵素Ｃは固定化法が同じであるのに１１
．３％と脱着率が非常に低く、また再固定化率も２９．
６％と第１回目の４９．６％に比べて低下が大きく脱着
が困難であった。

また本発明の固定化酵素については再固定化後の通液試
験を実施したが、第１図に示したごとく活性半減期も６
６日と第１回目とほぼ同じ性能が得られた。

さらに本発明の固定化酵素は少なくとも２回〜７回の脱
着、再固定化についても第１回目の固定化酵素とほぼ同
様の初期活性を維持できることが確認されている。

実施例３ 実施例１で得た担体に実施例２と同様な方法で、ただし
ｐ　Ｈ６，０の酢酸・酢酸ナトリウム緩衝液を用い、グ
ルタルアルデヒドを結合した担体２ｇ・ｗｅｔに０．６
ｍ１（蛋白量として４０ｍｇ／ｇ−Ｗａｔ添加）のタカ
アミラーゼ酵素液を加えて固定化した。このようにして
得られる固定化酵素は１ｇあたり１８．３■の蛋白が固
定化されていた。

基質として分岐デキストリンにサイクロデキストリング
ルカットランスフアーゼを添加して調整した下記の糖組
成の分岐サイクロデキストリン生成反応液を基質として
、１０％濃度、５０℃にて上記固定化酵素を充填したカ
ラムに通液した。このタカアミラーゼ固定化酵素を用い
る反応の主目的はβ−サイクロデキストリン（以下β−
ＣＤと表す）のオリゴ糖への分解であるが、酵素反応が
強過ぎると一部分分岐ＣＤをも分解してしまうため、通
液方法としては反応液中にβ−ＣＤが１〜２％分解され
ずに残るように通液流速を適宜変更し、処理流速の低下
を調べた。

分岐ＣＤ反応液の糖組成 デキストリン７５６．２％ 分岐ＣＤ　　：　　９．０％ α−ＣＤ　　：１５．６％ β−ＣＤ　　：１７．６％ ｒ−ＣＤ　　：　　２．６％ 比較例としては母体がスチレンとジビニルベンゼンの共
重合体で交換基として第三アミンを有する市販樹脂を担
体として用い、実施例２の固定化酵素ＡＳＢと同様な固
定化法でタカアミラーゼを固定化したものについて通液
を実施した。

その結果第２図に示したごとく、タカアミラーゼの５０
℃における熱安定性が十分でないためにいずれも活性半
減期は十分ではないものの、比較例の固定化酵素に比べ
、本発明の固定化酵素は通液開始時の流速すなわち初期
の活性が高く、また活性半減期（通液流速が開始時の半
分になるまで）も長く相対的には非常に優れていた。

また実施例２と同様の方法で脱着、再固定化して得られ
る本発明の固定化酵素は第２図に示したごとく第１回目
と全く同等の初期活性および安定性を示した。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例２における固定化グルコアミラーゼの通
液ライフ試験の結果を示すグラフであり、縦軸にグルコ
ース生成率、横軸に通液日数を示し、また第２図は実施
例３における固定化タカアミラーゼの通液ライフ試験の
結果を示すグラフであり、縦軸に通液流速、横軸に通液
日数を示す。 手続補正書（自発） 昭和６３年６月１５日 特許庁長官　　小・川　邦　夫　殿 １、事件の表示 昭和６３年特許願第８５２３号 ２、発明の名称 酵素固定化用担体とその酵素固定化方法および酵素脱着
方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住　所　　東京都中央区日本橋小伝馬町１７番１７号峰
沢ビル４階 名称　　　食品産業バイオリアクターシステム技術研究
組合 代表者　　　中　川　　赳 ４ｏ代理人〒１１３ 置、８１２−５１５１ 明細書の下記事項を訂正願います。 １、特許請求の範囲を別紙のとおり訂正する。 ２、第１０頁２行目〜３行目に「官能基としてエタノー
ルアミンまたはプロパノールアミンを付加したものであ
る。」とあるのを「エタノールアミン、プロパノールア
ミン、アンモニア等を付加して、第一アミンを官能基と
して形成させたものである。」と訂正する。 ３、第１３頁７行目に「メタアクリル酸グリシジル」と
あるのを「メタアクリル酸グリシジルエステル」と訂正
する。 以上 特許請求の範囲 １．巨大網状構造を有する塩基性陰イオン交換樹脂の母
体が、不飽和カルボン酸グリシジルエステルの重合物で
あり、イオン交換基として第一アミンを有することを特
徴とする酵素固定化担体。 ２、塩基性陰イオン交換樹脂の母体が、メタアクリル酸
グリシジルエステルまたはアクリル酸グリシジルエステ
ルあるいはクロトン酸グリシジルエステルと、架橋剤で
あるジメタアクリル酸エチレングリコールあるいはジメ
タアクリル酸ポリエチレングリコールの共重合物である
請求１工Ｕの酵素固定化用担体。 ３、巨大網状構造を有する塩基性陰イオン交換樹脂の母
体が、不飽和カルボン酸グリシジルエステルの重合物で
あり、イオン交換基として第一アミンを有する酵素固定
化用担体に酵素を固定化するにあたり、前記第一アミン
にグルタルアルデヒドを架橋剤として介在させて酵素を
結合させたことを特徴とする酵素固定化方法。 ４、塩基性陰イオン交換樹脂の母体が、メタアクリル酸
グリシジルエステルまたはアクリル酸グリシジルエステ
ルあるいはフロント酸グリシジルエステルと、架橋剤で
あるジメタアクリル酸エチレングリコールあるいはジメ
タアクリル酸ポリエチレングリコールの共重合物であ工
鼠水ｍの酵素固定化方法。 ５、巨大網状構造を有する塩基性陰イオン交換樹脂の母
体が、不飽和カルボン酸グリシジルエステルの重合物で
あり、イオン交換基として第一アミンををする酵素固定
化用担体の前記第一アミンにグルタルアルデヒドを架橋
剤として介在させて酵素を結合した固定化酵素を一定期
間使用した後、当該固定化酵素に温アルカリ溶液を接触
させることを特徴とする酵素脱着方法。 ６、塩基性陰イオン交換樹脂の母体が、メタアクリル酸
グリシジルエステルまたはアクリル酸グリシジルエステ
ルあるいはクロトン酸グリシジルエステルと、架橋剤で
あるジメタアクリル酸エチレングリコールあるいはジメ
タアクリル酸ポリエチレングリコールの共重合物であ圭
鼠水１１星豊の酵素脱着方法。 ７、温アルカリ溶液が、温度４０ないし７０℃で、濃度
０．５ないし１０重量％の水酸化ナトリウム溶液または
水酸化カリウム溶液または炭酸ナトリウム溶液である＠
）　５または蕾ＩＪ工６記載の酵素脱着方法。 手続補正書（自発） 平成１年３月３１日 特許庁長官　　吉　１）文　毅　殿 １、事件の表示 昭和６３年特許願第８５２３号 ２、発明の名称 酵素固定化用担体とその酵素固定化方法および酵素脱着
方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住　所　、東京都中央区日本橋小伝馬町１７番１７号峰
沢ビル４階 名　称　　食品産業バイオリアクターシステム技術研究
組合 代表者　　　中　川　　赳 ４、代理人〒１１３ 明細書の下記事項を訂正願います。 １．特許請求の範囲を別紙のとおり訂正する。 ２、第６頁１２行目、第７頁３行目、第７頁６行目、第
７真下から２行〜下から１行目、第８頁９行目、第８真
下から３行目、第９頁下から６行目、第１０頁３行目、
第１１頁６行目、第１６頁８行目に「第一アミン」とあ
るのを「第一級アミン」と訂正する。 ３、第１５真下から１行目、第１９真下から５行目に「
第三アミン」とあるのを「第三級アミン」と訂正する。 以上 特許請求の範囲 １、巨大網状構造を有する塩基性陰イオン交換樹脂の母
体が、不飽和カルボン酸グリシジルエステルの重合物で
あり、イオン交換基として第一１級、アミンを有するこ
とを特徴とする酵素固定化担体。 ２、塩基性陰イオン交換樹脂の母体が、メタアクリル酸
グリシジルエステルまたはアクリル酸グリシジルエステ
ルあるいはクロトン酸グリシジルエステルと、架橋剤で
あるジメタアクリル酸エチレングリコールあるいはジメ
タアクリル酸ポリエチレングリコールの共重合物である
請求項１記戦の酵素固定化用担体。 ３、巨大網状構造を有する塩基性陰イオン交換樹脂の母
体が、不飽和カルボン酸グリシジルエステルの重合物で
あり、イオン交換基として第−栽、アミンを有する酵素
固定化用担体に酵素を固定化するにあたり、前記第−嫌
アミンにグルタルアルデヒドを架橋剤として介在させて
酵素を結合させたことを特徴とする酵素固定化方法。 ４、塩基性陰イオン交換樹脂の母体が、メタアクリル酸
グリシジルエステルまたはアクリル酸グリシジルエステ
ルあるいはフロント酸グリシジルエステルと、架橋剤で
あるジメタアクリル酸エチレングリコールあるいはジメ
タアクリル酸ポリエチレングリコールの共重合物である
請求項３記載の酵素固定化方法。 ５、巨大網状構造を有する塩基性陰イオン交換樹脂の母
体が、不飽和カルボン酸グリシジルエステルの重合物で
あり、イオン交換基として第−数７ミンを有する酵素固
定化用担体の前記第−巌アミンにグルタルアルデヒドを
架橋剤として介在させて酵素を結合した固定化酵素を一
定期間使用した後、当該固定化酵素に温アルカリ溶液を
接触させることを特徴とする酵素肌着方法。 ６、塩基性陰イオン交換樹脂の母体が、メタアクリル酸
グリシジルエステルまたはアクリル酸グリシジルエステ
ルあるいはクロトン酸グリシジルエステルと、架橋剤で
あるジメタアクリル酸エチレングリコールあるいはジメ
タアクリル酸ポリエチレングリコールの共重合物である
請求項５記載の酵素脱着方法。 ７、温アルカリ溶液が、温度４０ないし７０’Ｃで、濃
度０．５ないし１０重量％の水酸化ナトリウム溶液また
は水酸化カリウム溶液または炭酸ナトリウム溶液である
請求項５または請求項６記載の酵素脱着方法。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、巨大網状構造を有する塩基性陰イオン交換樹脂の母
   体が、不飽和カルボン酸グリシジルエステルの重合物で
   あり、イオン交換基として第一アミンを有することを特
   徴とする酵素固定化用担体。 ２、塩基性陰イオン交換樹脂の母体が、メタアクリル酸
   グリシジルエステルまたはアクリル酸グリシジルエステ
   ルあるいはクロトン酸グリシジルエステルと、架橋剤で
   あるジメタアクリル酸エチレングリコールあるいはジメ
   タアクリル酸ポリエチレングリコールの共重合物であり
   、イオン交換基としてエタノールアミンまたはプロパノ
   ールアミンを付加した特許請求の範囲第１項記載の酵素
   固定化用担体。 ３、巨大網状構造を有する塩基性陰イオン交換樹脂の母
   体が、不飽和カルボン酸グリシジルエステルの重合物で
   あり、イオン交換基として第一アミンを有する酵素固定
   化用担体に酵素を固定化するにあたり、前記第一アミン
   にグルタルアルデヒドを架橋剤として介在させて酵素を
   結合させたことを特徴とする酵素固定化方法。 ４、塩基性陰イオン交換樹脂の母体が、メタアクリル酸
   グリシジルエステルまたはアクリル酸グリシジルエステ
   ルあるいはクロトン酸グリシジルエステルと、架橋剤で
   あるジメタアクリル酸エチレングリコールあるいはジメ
   タアクリル酸ポリエチレングリコールの共重合物であり
   、イオン交換基としてエタノールアミンまたはプロパノ
   ールアミンを付加した特許請求の範囲第３項記載の酵素
   固定化方法。 ５、巨大網状構造を有する塩基性陰イオン交換樹脂の母
   体が、不飽和カルボン酸グリシジルエステルの重合物で
   あり、イオン交換基として第一アミンを有する酵素固定
   化用担体の前記第一アミンにグルタルアルデヒドを架橋
   剤として介在させて酵素を結合した固定化酵素を一定期
   間使用した後、当該固定化酵素に温アルカリ溶液を接触
   させることを特徴とする酵素脱着方法。 ６、塩基性陰イオン交換樹脂の母体が、メタアクリル酸
   グリシジルエステルまたはアクリル酸グリシジルエステ
   ルあるいはクロトン酸グリシジルエステルと、架橋剤で
   あるジメタアクリル酸エチレングリコールあるいはジメ
   タアクリル酸ポリエチレングリコールの共重合物であり
   、イオン交換基としてエタノールアミンまたはプロパノ
   ールアミンを付加した特許請求の範囲第５項記載の酵素
   脱着方法。 ７、温アルカリ溶液が、温度４０ないし７０℃で、濃度
   ０．５ないし１０重量％の水酸化ナトリウム溶液または
   水酸化カリウム溶液または炭酸ナトリウム溶液である特
   許請求の範囲第５項または第６項記載の酵素脱着方法。