JPH01160482A - 新規なポリペプチド、その製法及び用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、プロウロキナーゼ（ウロキナーゼ前駆体）活
性を有する新規なポリペプチド、その製法及び疾患の制
御へのその用途に関する。

プラスミノゲンアクチベーターであるプロウロキ−１１
−−セ（ＰＵＫ　）は、「１本領つロキナーゼプラスミ
ノゲンアクチベータ−（５ＣＵＰＡ　）　Ｊ又は［腎プ
ラスミノゲンアクチベーター（ＫＰＡ）Ｊとも呼ばれ、
４１１個のアミノ酸から成る１不鎖ポリペプチドで、約
５４　ｋＤ　（キロダルトン）の分子量を有する。この
成熟プロウロキナーゼのアミノ酸配列゛を第１図に示す
（Ｚ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、３６５．１５３．１０４３．．１１５５　（
１９８２）参照）。このプロウロキナーゼから、Ｌｙｓ
　　−Ｐｈｅ　　結合を制限プロテアーゼで切断するこ
とにより２本鎖分子の高分子量ウロキナーゼ（ＨＵＫ）
が生成する。このものはプロウロキナーゼと同じ分子量
を有する。Ｌｙｓ１３５とＬｙＳ１３６の間でさらにプ
ロテアーゼ切断すると、約３５　ｋＤの分子量を有する
低分子量ウロキナーゼ（ＬＵＫ）が生成する。ＬＵＫは
ＨＵＫと同様に２本鎖分子である。すべての６つの形は
、ヒトの尿又はヒトの血清中に自然な形で検出された（
　Ｊ、　Ｂ１′ｏｌ、　Ｃｈ’ｅｍ。

２５７　、！１２７６　（１９８２）及び２６１．１２
６７（１９８６）参照）。

１本鎖の形も２本鎖の形もフィブリン溶解作変性し、適
用の際にしばしば生命を脅かす出血を生じさせる。１本
鎖の形だけが凝塊特異的で、小さい全身的溶解を示すに
すぎない。

本発明者らは、一般式 ％式％ （式中Ｒは水素原子、Ａｌａ又はＭｅｔ　、　ＰＵＫｌ
−１５５及びＰＵＫ１５７−４１１はプロウロキナーゼ
のアミノ酸１〜１５５及び１５７〜４１１、ＸはＡｌａ
　、　Ａｓｎ　。

Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｉｎ、Ｇｌｕ％Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉ
ｌｅ、Ｌｅｕ　。

Ｌｙｓ、ＭｅｔＳ　Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、
Ｔｒｐ、Ｔｒｙ又はＶａｌを意味する）で表わされるポ
リペプチドが、改善された性質を有し、酵素安定性であ
ることを見出した。

式Ｉのポリペプチドはアミノ酸３０２（Ａｓｎ、第１図
参照）においてグリコジル基を有しうる。

プロウロキナーゼのアミノ酸基１〜１５５及び１５７〜
４１１は第１図から明らかである。

本発明はさらに、式Ｉのポリペプチドのためにコード化
するＤＮＡ配列、ならびにこのＤＮＡ配列を含有するベ
クターに関する。

新規ポリペプチドは、既知の方法により遺伝子工学的に
製造することができる。ここに記載する構成のための出
発点はｃＤＮＡクローン（以下ｐＵ　２０と呼ぶ）で、
これはプロウロキナーゼのコード化配列及びさらに５′
−及び３′−非翻訳領域を包含する。コード化領域を含
みかつそれから蛋白質配列（第１図）が誘導されるｃＤ
ＮＡクローンの部分配列を、第２図に示す。成熟蛋白質
は、いわゆる「先導」配列の後のＳｅｔ’で始まりＬｅ
ｕ４１１の後で終る。

ｐＵ　２０はヒトグロウロキナーゼ産生腫瘍細胞株Ｄｅ
ｔｒｏｉｔ　５６２　（ＡＴＣＣ＆　ＣＣＬ　１３８　
）から得られた。すなわちこの細胞株からｍ−ＲＮＡを
分離し、そして２木調ｃＤＮＡに転写した。

このｃＤＮＡを市場で入手しうるクローニングベクター
ｐｕｃ１８中に挿入したのち、ｃＤＮＡライブラリーを
作成した。この場合に用いられる方法については、例え
ばマニアテイスら著「モレキュラー・クローニングＪ、
Ｃ３Ｈ−７’レスカ参照される。放射性標識されたオリ
ゴヌクレオチドゾンデを用いるこの種の遺伝子バンクの
「スクリーング」も、たびたび使用される方法で、文献
に記載されている。

ｐＵ２０のＤＮＡ配列の部分は、制限エンドヌクレアー
ゼを用いて容易に入手できる。これらの断片は、場合に
より化学的に合成されたオリゴヌクレオチド、アダプタ
ー又は遺伝子断片と結合して、新規ポリペプチドのため
にコード化するＤＮＡ配列をクローニングするために利
用することができる。この遺伝子断片又は合成りＮＡ配
列をクローニングベクター（例えば市販普通のプラスミ
ドｐＢＲ’３２２、ｐｕｃ１８及びｐｕｃ１９）の中に
組込むことは、既知の手段により行われる。

蛋白質の発現を可能にする適当な化学的に合成されたコ
ントロール領域又は微生物もしくはファージから分離さ
れたコントロール領域を、遺伝子又は遺伝子断片に供給
することもできる。

こうして得られる雑種プラスミドを適当な宿主微生物に
形質転換することも既知であり、文献に詳細に記載され
ている。この雑種プラスミドに、大腸菌のペリプラズム
中へのポリペプチドの分泌を可能にする相当するシグナ
ル配列を与えることもできる。

吐乳動物細胞培養物ならびに酵母又は昆虫細胞中での分
泌も同様の手段で行わせることができる。すなわちこの
場合は、真核性コントロール領域を用いなければならな
いことはもち論である。哺乳動物細胞中で発現させる場
合は、例えばウィルス性ＳＶ４０プロモーターのコント
ロール下に発現すべき外来遺伝子を定めるベクターを用
いることができる。この種のプラスミドは真核性の複製
起点を有しない。許容される噴孔動物細胞への形質転換
ののち、このプラスミドの複製をゲノム中に組込んで有
するクローンを分離する。同様にして、発現すべき遺伝
子を、真核性プロモーターのコントロール下にウシ乳頭
腫ウィルスを基礎とするベクター上でクローニングする
ことができる。この種の発現プラスミドは、２０〜１０
０の複製数で許容されるマウス繊維芽細胞株０１２７中
にエピゾームとじて残留する。

この真核性発現系は、その産生物を有効かつ多くは天然
の形で分泌させることができる利点を有する。さらにこ
れは、その産生物を翻訳後に修飾する能力を有する。

真核細胞中で発現させると、プロウロキナーゼはアミノ
酸３０２（Ａｓｎ）においてグリコシド側鎖をも有する
。微生物はグリコシド側鎖を合成することができない。

細菌中で発現されるたいていの蛋白質例えばプロウロキ
ナーゼは、そしてこれから本発明により導かれるポリペ
プチドも、細胞中で変性された封入体として得られ、蛋
白質化学的に巻戻さねばならない。さらに細菌は、イニ
シエーターアミノ酸のメチオニンを出来上った蛋白質か
ら脱離させることがしばしばできない。細菌中での発現
の際に末端メチオニンを脱離すること及び多くの場合封
入体の形成を防止することは、分泌系の使用により達成
できる。この系を用いる場合にはもち論、Ｎ末端は脱離
位置にとって重要なアミノ酸例えばアラニンをもしばし
ば有する。細菌中での発現は多くの問題を有するが、得
られる粗蛋白質を活性な酵素に再生することができる場
合には、こ遺伝子コードの変性により、異なるＤＮＡ配
列例えば化学的に合成されたプロウロキナーゼ遺伝子又
は異なるトリプレットを有するその一部を、新規ポリペ
プチドを発現させるために利用することも可能である。

新規な有効物質は動脈性及び静脈性の閉塞性疾患におけ
る血栓溶解のために使用することができ、ヒトプロウロ
キナーゼ建地して改善された性質を示す。

したがって、本発明の対象は、少なくとも１種の新規ポ
リペプチドを、所望により製剤上容認される賦形剤又は
結合剤中に含有する医薬である。

新規蛋白質は他のフィブリン溶解剤例えばウロキナーゼ
、ＴＰＡ　、ストレプトキナーゼ、これる。

本発明の他の態様を下記実施例により詳細に説明する。

実施例 １、ヒトプロウロキナーゼのためのｃＤＮＡクローンの
分離： プロウロキナーゼを産生ずるヒト腫瘍細胞株Ｄｅｔ、ｒ
ｏｉｔ５６２　（ＡＴＣＣ＆　ＣＣＬ　１３８　）を、
「イーグル最小必須」培地中で、ＮａＨＣＯｇ　３％、
胎児子ウシ血清１０％、アミノ酸１％、Ｈｅｐｅｓ　２
．４％、ｐＨ７，５と共に６７℃及び５％ＣＯ２雰囲気
中で合流するまで培養した。培地を傾しゃして除去し、
細胞を生理食塩水で洗浄し、溶解緩衝液（グアニジニウ
ムイソチオシアネート６Ｍ、（えん酸ナトリウム５　ｍ
Ｍ　（ｐＨ７）　、メルカプトエタノールＯ，ｆ　Ｍ　
、ザルコシル０．５％）中で溶解した。ＲＮＡを５．７
　Ｍ　ＣｓＣ１−クツションにより１００００ｏｙ’ｇ
で１夜沈降させた。ポリＡ−ＲＮＡを含有する分画をオ
リゴ（ｄＴ）−セルロース上での２回のアフイニテイク
ロマトグラフイにより分別した。

酵素ＡＭＶ−逆転トランスクリブターゼ及びオリゴ（ａ
Ｔ）１２−１８をスターターとして用いて、このボＩＪ
　Ａ　−ＲＮＡを１本鎖ｃＤＮＡ中に転写した。第２の
鎖の合成は大腸菌−ＤＮＡ−ポリメラーゼＩを用いて行
った。この２木調ｃＤＮＡに、酵素ターミナルトランス
フェラーゼを用いてそれぞれ５′−末端において約１０
〜２０　ｄｃ）−基を合成付加させた。制限エンドヌク
レアーゼＳｐｈ　ｉにより線状化され、そしてその５′
−末端において前記のように約１０〜２０　ｄＣ−基が
合成付加されている市販のプラスミドｐｕｃ１８を用い
て同様に操作した。両方のＤＮＡを相互に融合させ、こ
の雑種を大腸菌株ＨＢ１０１のコンピテントな細胞に形
質転換させた。このクローンを選択マーカーとしてのア
ンピシリン１００μｇ／ｍｌを含むＬＢ−板上に広げ、
コロニーをニトロセルロース上ニ移シタ。

フィルター上の細菌を複製させ、溶菌し、そして変性さ
れたＤＮＡをフィルターに固定した。

ＤＮＡ−合成装置（アプライド・バイオシステムズ製、
３８０Ａ型）を用いて、発表されたヒトプロウロキナー
ゼのＤＮＡ配列と相同性の４種の１７−オリゴヌクレオ
チドゾンデを製造した。これらのゾンデは下記の配列を
有する。

５’　ＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＡＴＡＧＣＡＴ　　３’５
’　ＡＡＣＣＡＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＴＣ６’５’　Ａ
ＣＣＡＴＧＣＡＣＴＣＴ’ＴＧＧＡＣ３’５’　ＴＧＣ
ＴＧＧＴＣＡＣＡＧＧＴＣＡＴ　　３’これらのオリゴ
ヌクレオチドゾンデを５′−末端においてγ−”Ｐ　−
ＡＴＰで標識し、ニトロセルロースフィルターを、６×
セツトの緩ｉ液（１×セツト＝　ＮａＣｌ　０．１５　
Ｍ、　　）リス−ＨＣｌ　（ｐＨ７，４）　ｏ、０１５
Ｍ、　ＥＤＴＡｏ、００１Ｍ）、ＳＤＳ　０゜１％及び
デキストラン硫酸塩１０％の中で４２℃で１夜振とうし
ながらゾンデと共に保温した。

フィルターを６×上セツト８ＤＳ１％中で４２６Ｃでよ
く洗浄したのち、このフィルターをＸ線フィルムと共に
照射し、そして配列相同性を有するクローンを調べた。

相同性クローンを分離して個別化した。

こうして分離されたクローンの１つはｐＵ　２０であっ
た。そのコード化領域及び隣接範囲の配列を第２図に示
す。

２、対照物質のプロウロキナーゼを発現させるための雑
種プラスミドの製造： 出発点はプラスミドｐＵ２０（実施例１）であった。こ
のものから制限されたＴａｇ　Ｉ／ＢａｍＨ１−消化に
よって、ヌクレオチド１６２〜１３２９のプロウロキナ
ーゼ遺伝子の断片を切断し、ゲル電気泳動により分離し
た（断片１）。プラスミドｐｕｃ　１８をＥｃｏＲｌ及
び５ａｉｌにより線状化し、これにより断片２を生成し
た。

この断片１及び２を、それぞれプロウロキナーゼの５′
−末端（３／４　）ならびに６′−末端（５／６）を再
び産生ずるオリゴヌクレオチドアダプター６／４及び５
／６と連結した。オリゴヌクレオチド３／４の使用によ
り、５′−末端においてＥｃｏＲｌ−切断位が欠失され
た。こうして第６図に示す雑種プラスミドｐＰＵＫが得
られ、このものはプロウロキナーゼ遺伝子を種々の発現
ベクター中に転移するための容易にクローニングしうる
Ｃ１ａ　Ｉ／　Ｓａｌ　Ｉ　　　ｒカセット」として利
用できるようにした。

’ＥｃｏＲＩ　　Ｃ１ａＩ ａｑｌ ａｍＨＩ Ｓａｌ（ 雑種プラスミドｐＰＴＪＫをＣ１ａｌ　Ｋより開裂し、
突出した５′−末端をＤＮＡポリメラーゼ■のフレノウ
断片及びｄＣＴＰ及びｄＧＴＰにより充填した。

エンドヌクレアーゼ５ａｌＩによる後切断及びゲル電気
泳動精製により、ウロキナーゼ遺伝子を有する断片が得
られた。この断片を、ＥｃｏＲＩにより開裂し、突出末
端を「ムング豆ヌクレアーゼを用いて製造業者の指示に
従って除去したのち、５ａｌＩにより切断した市販の発
現ベクター１）ＫＫ　２２＋−！＋　（ファルマシア注
文扁２７−４９５５−０１）に挿入した。断片の連結に
より、第４図に示す発現プラスミドｐＫＫ　２２３／Ｐ
ｔＴＫが得られた。

このプラスミドを、大腸菌株Ｋ　１２　ＪＭ　１０５　
（ファルマシア注文Ａ　２７１５５０−０１　）のコン
ピテントにした細胞内に形質転換した。この菌株は、普
通の生長条件下でプロウロキナーゼを複製する１ｂｃ−
リプレッサーを有するエピゾームＦ’ｉＱを含有する。

イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトシド（ＩＰＴＧ　
）の含量を対数的生長相において０．５　ｍＭにするこ
とにより、プロウロキナーゼ遺伝子の発現を誘発させた
。この場合プロウロキナーゼが細胞内で変性されていわ
ゆる「封入体」として得られた。このものは細菌の溶解
により精製することができ、これからプロウロキナーゼ
を蛋白質化学的に再生して精製することができる。

３、アミノ酸が１５６位で交換しているＰＵＫを発現す
るための雑種プラスミドの製造： 雑種プラスミド１）ＰＵＫ　（実施例２、第３図）をＢ
ａ１ｌにより完全に、モしてＥｃｏＲＩＫより部分的に
切断した。ベクターに含有される断片をゲル電気泳動に
より精製し、合成オリゴヌクレオチド８４／８５．８６
／８７又は８８／８９と連結した。

Ａｒｇ　−＋Ｌｙｓ Ｂａｌｌ　　　　　　　　　　　　１５６ｃｏＲＩ Ｂａｌ［１５６ ｃｏＲＩ Ｂａｌｌ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
５６Ｃ０ＲＩ こうして雑種プラスミドｐＰＵＫ　Ｌｙｓ　、　ｐＰＵ
ＫＧｉｎ及びｐＰＵＫ　Ｌｅｕが生成した（第５図、こ
の図中のＹは１５６位のＬｙｓ　、　Ｇｌｎ又はＬｅｕ
を意味する）。これらのＤＮＡ断片を用いて実施例２に
記載したと同様にして、゛大腸菌中で本発明のポリペプ
チドを遺伝子工学的に合成した。

４、大腸菌中で発現されたポリペプチドの精製及び再生
： 前記のポリペプチドを、標準法により大腸菌中で発現さ
せたのち、精製して再生した。

細胞ペレット（湿潤混合物１００ｇ）を、溶液（燐酸塩
緩衝液ｐＨ８，０の５０　ｍＭ、　ＥＤＴＡｌｏｍＭ、
　ＤＴＴ　１　ｍＭ及びツイーン８０のｏ、　ｏ　ｏ　
ｓ％）５００ｍＡ！中に移し、再懸濁させた。超音波で
溶解した細胞を遠心分離し、封入体を含有するペレット
を、燐酸塩緩衝液ｐＨ８，０の５０ｍＭ、ＮａＣ１１Ｍ
　、　ＤＴＴ　１　ｍＭ及びツイーン８０００．００５
％の溶液で洗浄した。

この洗浄された封入体を遠心分離しく１００００ｇで１
０分間）、６Ｍ−グアニジニウム塩酸塩に溶解した。こ
れは燐酸塩緩衝液ｐＨ８，０の５０鮨、ＤＴＴ　５　ｍ
Ｍ　、　ＥＤＴＡ　１　ｍＭ及びグアニジニウム塩酸塩
６Ｍの溶液２００　ｍｌ中で室温で３０分間攪拌するこ
とにより行った。不溶性蛋白質を遠心分離した。ＰＵＫ
変異体の再生はこの溶液を、燐酸塩緩衝液ｐＨ９，０の
５０ｍＭ、グアニジニウム塩酸塩１．５Ｍ、アルギニン
０．５　Ｍ、　ＧＳＨ１ｍＭ。

Ｇ５５Ｇ　０．１　ｍＭ　、　ＥＤＴＡ　１　ｍＭ及び
ツイーン８０のｏ、ｏｏｓ％の溶液中で、蛋白質濃度が
０．２〜０゜３１ｎ９７ｍｌとなるように希釈すること
により行った。

蛋白質の精製は、硫酸アンモニウム沈殿、アフイニテイ
クロマトグラフイ及びイオン交換クロマトグラフィによ
り行った。このためには再生溶液に硫酸アンモニウム（
４０〜７０％）を添加し、ペレットを燐酸塩５０ｍＭ、
グアニジニウム塩酸塩１Ｍ％ＮａＣ１０，Ｉ　Ｍ及びツ
イーン８０のｏ、　ｏ　ｏ　ｓ％の溶液に移し、Ｚｎ−
キレート（ファルマシア）−クロマトグラフィカラムの
上に載せ、前記の緩衝液中のＥＤＴＡ　５０　ｍＭを用
いて４℃で溶離させた。溶離した蛋白質を、燐酸塩１０
　ｍＭ、　ＮａＣ１１０ｍＭ及びツイーン８０００．０
０５％の溶液に対して４℃で透析し、Ｓ−セファロース
（ファルマシア）の上に載せた。ＰＵＫ変異体を燐酸塩
５０　ｍＭ、　ＮａＣ１４００ｍＭ及びツイーン８０の
ｏ、　ｏ　ｏ　ｓ％の溶液によりカラムから溶離させた
。

基質Ｓ−２４４４（カリガラス）を用いる直接のアミド
分解試験において、精製された蛋白質の比 １ｆｐＪ１４い活性は０．５〜１．５　Ｘ　１　［）’
Ｕ／■の範囲にある。

５、アミノ酸が１５６位で交換しているＰＵＫポリペプ
チドの強化されたグロテアーゼ抵抗性：プロウロキナー
ゼをＡｒｇ１５６の後方でトロンビン切断することによ
り、もはや活性化することができず、かつ凝塊の溶解に
もはや利用されない２本鎖分子が生成する。１５６位の
アミノ酸交換を有する前記のポリペプチドは、トロンビ
ンにより全（不活性化されないか又はきわめてわずかな
程度に不活性化されるにすぎない。

前記のポリペプチドを代表して、１５６位にグルタミン
又はロイシンを有する各分子について、この改善された
性質を説明する。

トロンビン不活性化試験を次のように実施した。プロウ
ロキナーゼ（又はその変異体）を６０００　Ｕ／ｍｌ！
に希釈しく燐酸塩ｐＨ６，７の５０ｍＭ。

ＮａＣ１３００ｍＭ、ツイーン８０の０，００５％）、
トロンビン（５Ｕ／ｒｎｌ　）と共に３７℃で保温した
。

１５分の間隔で一定割合を取出し、アミド分解試験で測
定した。

アミド分解試験においてプロウロキナーゼの活性は、ト
ロンビン単位が増大するにつれて低・下す、ることか示
された（第６図）。すなわち活性化プロウロキナーゼは
、トロンビン２Ｕ（曲線ａ）の添加の場合に保温時間１
５分後に、その出発活性の８６％を有し、３０分後に５
９％を有した。一方、トロンビン１０Ｕ（曲線ｂ）の添
加の場合は、同じ保温時間において出発活性の５０％な
らびに６６％が測定された。プロウロキナーゼをトロン
ビン無添加で同じ条件下で保温すると、１時間の期間に
わたり常に出発活性の１００％を示した。プロウロキナ
ーゼの代わりにＰＵＫ変異体（（）ｌｎ１５６又はＬｅ
ｕ１５６）をトロンビン不活性化試験に使用した。第６
図から明らかなように、この変異体はトロンビン５Ｕを
添加して３０分間保温したのち、出発活性の１００％を
有していた（曲線Ｃ）。プロウロ・キナーゼの１５６位
のアミノ酸交換（Ａｒｇ　　→Ｇｉｎ　）は、トロンビ
ンが変異体においてもはや蛋白質溶解活性を有せず、そ
して不活性な２本鎖物質を生成しないように作用する。

【図面の簡単な説明】

第１図は成熟プロウロキナーゼのアミノ酸配列を示し、
第２図は第１図のポリペプチド配列のためのｃＤＮＡク
ローンのコード化領域及び隣接範囲の配列を示し、第３
図及び第４図は対照物質としてのプロウロキナーゼの発
現用雑種プラスミドｐＫＫ　２２６／　ＰＵＫを製造す
るための工程図、第５図は１５６位のアミノ酸が交換し
ている本発明のポリウロキナーゼの発現用雑種プラスミ
ドｐＰＵＫＹを製造するための工程図、そして第６図は
本発明のポリペプチドの活性（血清半減期）を示すグラ
フである。 出願人　　　ビーニーニスエフ・アクチェンゲゼルシャ
フト代理人　弁理士率　　林　　正　　雄 １−　　　　ｆｉ　　　　Ｆ−”　　　　ｍ　　　　（
Ｌｌ　　　　／１１）−（りΦのト ｃａり９９９Ｃ９ｔＣ９Ｃり９ｃａ９Ｃ９Ｃ９９９ａ９
９ａＣ９９Ｃ（９９９９Ｃｔ９９ａ９Ｃ９９ｔ９９ｔａ
ＣｔＣｔＣタタタａＣ９ａＣ（９ａ９Ｃ９ａＣｔＣＣａ
ａａ９９Ｃａ９Ｃａａｔ９ａａＣｔｔＣａｔ１１２１　
−−−−−−−−−＋−−−−−−−−−＋−−−−−
−−−−＋−・ＣｔＣ９Ｃｔ９ａ９９ｔｔｔＣＣ９ｔＣ
９ｔｔａＣｔｔ９ａａ９ｔａ噸ＣｍｗΔｅｌ＋１ｎ１　
ｉｌｌ　＾ｒ＋ｕ：　ｚｌヨｔＣＣ９９ｔ９９ＣｔＣＣ
９９ＣタタＣ９９Ｃａ９ａｔＣ９Ｃ：りＣ９Ｃ９りａｃ
９ａａ９ａ９ａｃ３ｃａタタａＣＣａ９Ｃａに ａａ９ｔｔＣＣａｔＣ９ａａＣｔ９ｔ９ａＣｔ９ｔＣｔ
ａａａ−−−一−−−−＋−−−−−−−−−＋−−−
一−−−−−＋　　１８０ヨｔｔＣａａ９９ｔａ９Ｃｔ
ｔ９ａＣａＣｔ９ａＣａ９ａセ１１ｆ’：Ｉ　Ｉ−ＩＬ
Ｊコｌ　５７Ｍζ１コｙ６ｃｎｌ”ｈｅΔｅｒｑｒ＋＋
ｅｌ　　６１１乙ａｙ’ｓ　　　−ａＣＣｔＣＣｔｔ９
ｔａＣａＣａＣａ９９ｔｔ９ｔｔＣａｔ　９２ＧｌｙＧ
ｌｙＴｈｒＣｙｓすａｌｓｅｒＡｓｎＬｙｓＴｙｒＦＣ
ｔｔｔａａ９ＣＣｔＣＣＣ９ｔＣ９ｔ９ａＣａＣｔｔｔ
ａｔｃＬｙｓＰｈｅＧｌｙＧＬｙＧｌｎＨｉｓｃｙｓＧ
ｌｕＩ　１ｅ−ｆ−−＾■マー為１　・％Ｉ　％ｄ　％
＋　Ｉ　ｒ　ｌ　ｄｌ　＋　ｖ７−ｒ　１−どνｌ−一
一一「Ｉ＋Ｉ■３ａ９ａ９９ｔｔ９ｔａａ９ｔ９ａＣＣ
ａＣ９ｔｔ９ａＣ９９９ｔｔｔコｈｅＳｅｒＡｓｎＩｌ
ｅＨｉｓＴｒｐＣｙｓＡｓｎＣｙｓＰｒｏＬソｓ　　−
：ｔａｔｔＣａ９ｔｔｔｔｔ９９ａＣ９ａｔａＣｔＣＣ
ＣＣｔｔａＣＣ４ｓｐＬｙｓＳｅｙＬｙｓＴｈｒＣ３７
ｓＴｙｒＧｌｕＧｌｙＡｓｎＧｌｙ　　−十　ヤリコ”
　　５／６ イ呆うＭＬｐポト同　斡）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 Ｒ−ＰＵＫ＾１＾−＾１＾５＾５−Ｘ−ＰＵＫ＾１＾５
   ＾７＾−＾４＾１＾１（ I ）（式中Ｒは水素原子、Ａ
   ｌａ又はＭｅｔ、ＰＵＫ＾１＾−＾１＾５＾５及びＰＵ
   Ｋ＾１＾５＾７＾−＾４＾１＾１はプロウロキナーゼの
   アミノ酸１〜１５５及び１５７〜４１１、ＸはＡｌａ、
   Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈ
   ｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒ
   ｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｒｙ又はＶａｌを意味
   する）で表わされるポリペプチド。 ２、第１請求項に記載のポリペプチドのためにコード化
   するＤＮＡ配列。 ３、第１請求項に記載のポリペプチドのためにコード化
   する遺伝子配列を含有するベクター。 ４、第１請求項に記載のペプチド配列のためにコード化
   する遺伝子を宿主微生物中で発現させることを特徴とす
   る、第１請求項に記載のポリペプチドの遺伝子工学的製
   法。 ５、少なくとも１種の第１請求項に記載のポリペプチド
   を、所望により製剤上容認される賦形剤又は結合剤の中
   に含有する医薬。 ６、少なくとも１種の第１請求項に記載のポリペプチド
   と他のフィブリン溶解物質を含有する、第５請求項に記
   載の医薬。