JPH01158001A - 架橋したポリスチレンおよびデキストランから誘導されたポリマーと、その製造方法と、生物起源の分子の分析と精製へのこのポリマーの応用 - Google Patents

架橋したポリスチレンおよびデキストランから誘導されたポリマーと、その製造方法と、生物起源の分子の分析と精製へのこのポリマーの応用

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JPH01158001A
JPH01158001A JP63207191A JP20719188A JPH01158001A JP H01158001 A JPH01158001 A JP H01158001A JP 63207191 A JP63207191 A JP 63207191A JP 20719188 A JP20719188 A JP 20719188A JP H01158001 A JPH01158001 A JP H01158001A
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Didier Letourneur
ディディエ　ルトゥルヌール
Colette Douzon
コレット　ドゥゾン
Veronique Migonney
ヴェロニック　ミゴネイ
Daniel A Muller
ダニエル　アンドレ　ミュレール
Marcel Jozefowicz
マルセル　ジョゼフォヴィッチ
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Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野　　　゛ 本発明は、クロマトグラフィーの支持体（担体）として
適したポリマーを変性させて得られるポリマーである架
橋したポリスチレンまたはデキストランからなる新規な
樹脂に関するものである。
本発明はさらに、このような樹脂の製造方法と、生物起
源の分子の分析と精製への応用、特にタンパク質の混合
物を分画する°ためのイオン交換クロマトグラフィーと
アフィニティークロマトグラフィーにおける固定相とし
ての応用にも関するものである。
また、本発明の上記樹脂゛はタンパク質、特にＳＬＥに
罹っている患者の血清中に存在する抗ＤＮＡ抗体や抗リ
ン脂質抗体と相互作用するため、狼癒性患者が産成する
様々のタイプの抗体を選択的に精製するのに応用できる
。
本発明のこの新規な樹脂は、ＤＮＡの化学的位置と所定
のリン脂質とをコピーする置換基を備えるとともに、ク
ロマトグラフィーの従来の支持体よりもはるかに大きな
イオン交換能を有するという特徴をもっている。この樹
脂は、従来と同様に、架橋したポリスチレンの場合には
粒子状であり、架橋したデキストランの場合にはゲル状
であり、その表面には下記の異なる成分が統計的に分布
されている。その成分とは、長さと化学的性質が異なる
複数のスペーサ用アームを介して、ポリスチレン繰り返
し単位またはデキストラン繰り返し単位にそれぞれ独立
に固定または結合された、プリン塩基、ピリミジン塩基
、ペントース、リン酸塩、リン脂質構成物である。これ
らの成分は高い置換率で置換させることができる。上記
の樹脂にはフォスフォリル基が存在しているので、イオ
ン交換クロマトグラフィーにおいて特に重要である。即
ち、本発明の樹脂は、これまで従来の固定相に多量に架
橋させることができなかったフォスフェート基を有する
ので、酸−塩基特性を持っており、従って、従来の支持
体とは大きく異なるイオン交換特性を有している。
さらに、架橋したポリスチレンをベースとした樹脂はベ
ースのポリマーの機械的耐性が優れているため、高速液
相クロマトグラフィー（Ｈ４Ｆ、Ｌ、　Ｃ１）で使用可
能であるという別の利点がある。
イオン交換クロマトグラフィー用に現在までに開発され
た支持体は、陽イオン性タンパク質（カルボキシメチル
基、スルフォプロピル基）または陰イオン性タンパク質
（アミノエチル基、ジエチルアミノエチル基）の交換を
可能にする基を有するように変性させた天然ポリマーを
ベースとしている場合が最も多い。しかし、これら支持
体はゲルであり、低圧でしか使用することができない。
このため、工業的スケールでの使用は極めて限定される
。実際、この支持体は機械的耐性が劣っているためにＨ
，Ｐ、Ｌ、Ｃ，での使用は限られ、それどころか禁止さ
れ、この結果、工業的な利点が制限されたり失われたり
する。
上記の欠点をなくすため、このような用途に向けて、架
橋させることにより優れた機械的特性、すなわち大きな
剛性をもたせた支持体が既に研究されている。これまで
に提案されたポリマーの中では、ポリアクリルアミド、
トリアクリルポリマー、ポリ　（ヒドロキシメチルメタ
クリレート）、ビニルポリマーを挙げることができる。
しかし、ベースとなるポリマーにイオン交換支持体とし
ての特性を与える目的で実施されてきた化学的変性は現
在でもしばしば実行が難しく、達成される置換率は一般
に小さ・い。
例えばジビニルベンゼンが約２％の割合で含まれた架橋
ポリスチレンをベースとした支持体は機械的耐性が優れ
ているが、親水性２が非常に大きいためにタンパク質の
クロマトグラフィーにおける使用は現在までのところ極
めて限定されていた。
このような支持体を生物起源の物質のイオン交換クロマ
トグラフィーに使用することができるようにするために
は、この支持体を疎水性にすると同時にイオン化可能な
繰り返し単位で大量に置換しなければならない。
発明が解決しようとする課題 本発明はこれら問題点を解決した疎水性の機能性ポリス
チレン（およびスチレンのコポリマー）を提供すること
にある。実際、本発明の樹脂は、２００バール近い圧力
下でも変化しないため、高速液体クロマトグラフィーの
溶離条件下で常に使用することができる。
問題点を解決するための手段 本発明の第１の対象は、架橋したスチレンあるいは架橋
したデキストランから誘導されるポリマーまたはコポリ
マーにおいて、 ベースとなるこのポリマーまたはコポリマーの鎖が下記
の種類ニ ーＺ−Ａ、、 −Ｚ−Ａ２、 Ｚ　　ＡＩ　　Ｚ’　　Ａ２、 Ｚ　　Ａｔ　　Ａ３　　Ａ２、 −Ｚ　　ＡＩ　　Ａ’４ （ここで、Ｚはスペーサ用鎖、 Ｚ”は結合鎖、 ＡＩはリン酸塩残基、 Ａ２はプリン塩基残基またはピリミジ ン塩基残基、 Ａ３は糖類の残基、 Ａ、は様々なリン脂質の極性構造中に 存在する分子の残基を表す） に属する互いに同一または異なる一つまたは複数の基に
よって置換されていることを特徴とするポリマーにある
。
上記スペーサ側鎖Ｚは、特に、以下の残基：（１）　　
　（ＣＨ２）。− （ここで、ｎは１〜６であり、必要に応じて少なくとも
１つのＨ基がＯＨ基によって置換されることによって親
水性にされている） （２）　　　３０２　　Ｎ　Ｈ（ＣＨ２）−一（ここで
、ｍは１〜６であり、残基−（ＣＨ２）−は必要に応じ
て少なくとも１つのＨ基がＯＨ基によって置換されるこ
とによって親水性にされている） （３）架橋デキストランの変性の場合には、ＣＨ２ＣＮ
Ｈ（ＣＨ２）ｑ− 闘 でもよい（ここで、ｑは１〜６であり、残基（ＣＨ２）
ｑ−は必要に応じて少なくとも１つのＨ基がＯＨ基によ
って置換されることによって親水性にされている） の中から選択される。
特に、このスペーサ側鎖Ｚとしては以下の残基ニーＣＨ
，−１−（ＣＨ２）２−１−（ＣＨ２）３−１Ｓ　Ｏ２
Ｎ　Ｈ（ＣＨ２）　２−１ −８Ｏ□−ＮＨ（ＣＨ２）３−１ −３Ｏ，−ＮＨ−ＣＨＯＨ−１ Ｓ　Ｏ２Ｎ　ＨＣＨ２ＣＨＯＨＣＨＯＨ−を挙げること
ができ、架橋したデキストランの変性の場合には、さら
に、下記： ＣＨ２ＣＮＨ（ＣＨ２）２− ■ でもよい。
上記の接続用鎮Ｚ°　は、−（ＣＨ２）、−鎮（ここで
、ｐは１〜６であり、この残基は必要に応じて少なくと
も１つのＨ基がＯＨ基によって置換されることによって
親水性にされている）で構成されている。
上記残基Ａ２は、例えば、アデニンやグアニンなどの主
要プリン塩基の残基のほか、シトシン、チミン、ウラシ
ルなどの主要ピリミジン塩基の残基を挙げることができ
る。
上記残基Ａ、は特に、　ＣＨ２−基がリン酸塩残基と結
合した糖類の残基を表す。例えば、ペントースの残基、
特に化学式： を有するＤ−リボース（または２−デオキシ−Ｄ−リボ
ース）の残基が挙げられる。
上記残基Ａ４は、特に、コリン、エタノールアミン、セ
リン、グリセロールまたはイノシトールのエステル化さ
れた分子を表す。
本発明により変性されるベースとなる２つのポリマーの
内の一方のポリマーはスチレンのホモポリマーまたはコ
ポリマーであり、これは、１００重量部に対して、５０
〜１００重量部のスチレン（これはα−メチルスチレン
等の必要に応じて置換されたスチレンでもよい）によっ
て構成されるペースモノマーと、０〜５０重量部の少な
くとも一つの共重合可能なエチレン性不飽和モノマーと
を含む混合物から得られるポリマーであると定義するこ
とができる。上記の少なくとも一つのエチレン性不飽和
モノマーは、特に、アクリル系モノマーである低級アル
キルアクリレート、低級アルキルメタクリレート、低級
アルコキシアクリレート、アクリロニトリノペアクリル
アミド、低級ヒドロキシアルキルアクリレート、低級ヒ
ドロキシアルキルメタクリレート、アクリル酸、メタク
リル酸の中から選択される。さらに、スチレンのこれら
ポリマーは架橋している。すなわち、上記の出発原料モ
ノマー１００重量部に対して、ジビニルベンゼン等のポ
リビニルベンゼンの中から選択された公知の架橋用モノ
マーが５重量部以下の割合で添加されている。
本発明では、従来から支持体として用いられているスチ
レンのホモポリマーを使用するのが好ましい。本発明で
使用した支持体は、最大限５重量％、さらに好ましくは
２重量％の比率の少なくとも１種の架橋用モノマー、例
えばジビニルベンゼンで架橋されたポリスチレンであり
、このポリスチレンは寸法が約５０μｍの球の形態であ
る。
説明を簡単にするため、以下の記述ではスチレンのホモ
ポリマーとコポリマーを「ポリスチレン」と表記するこ
とにする。
本発明によるポリスチレン鎮の置換は、主としてフェニ
ル核のパラの位置で行われる。
さらに、本発明によれば、架橋に関与しない各フェニル
基は、先に定義した置換基をもつことができる。
本発明による変性した架橋ポリマーは架橋デキストラン
、例えば一部分がカルボキシメチル基によって置換され
たデキストランでもよい。本発明では、エピクロルヒド
リンによって架橋したデキストランを使用することがで
きる。
本発明の他の対象は、架橋ポリスチレンまたは架橋デキ
ストランから誘導される先に定義したようなポリマーの
製造方法にある。この製造方法の特徴は、ベースとなる
架橋ポリマーまたはコポリ。
マー（ポリスチレンまたはデキストラン）に、１段階ま
たは複数の段階で、残基−Ｚ−ＯＨを固定するか、また
は、スチレンのポ゛リマーまたはコポリマーの場合には
、残基−Ｚ−Ｘ　（ただし、Ｘはハロゲン原子を表し、
Ｚは上記で定義されたものを表す）を固定し、次に、 （１）　　残基−Ｚ−Ｘを固定した場合には、このよう
に変性したポリスチレンをプリン塩基またはピリミジン
塩基と反応させて置換基−Ｚ　　Ａ２を形成し、 （ＩＩ）　　残基−Ｚ−ＯＨを固定した場合には、（Ｈ
ａ）　　このように変性したポリマーまたはコポリマー
を燐酸化して置換基−Ｚ−Ａ、を形成し、次に、 （ｉ）　　置換基−Ｚ−Ａ、−Ｚ’−Ａ２を形成したい
場合には、残基−Ｚ　　Ａｔを、化学式：で表されるプ
リン塩基と反応させるか、または化学式： で表される変性したピリミジン塩基と反応させ、 （ｉｉ）置換基−Ｚ　　ＡＩ　　Ａ３　　Ａ２を形成し
たい場合には、残基−Ｚ−Ａ、を、プリン塩基の窒素９
またはピリミジン塩基の窒素１を糖類の炭素１″　と結
合させた結果として得られる式−Ａ３　　Ａ２のヌクレ
オシドと反応させ、（ｉｉｉ　）置換基−Ｚ　　ＡＩ　
　Ａ４を形成したい場合には、残基−Ｚ−Ａ、を様々な
リン脂質の極性構造内の分子と反応させ、 （ＩＩｂ）　　置換基−Ｚ　　Ａ、　Ａｓ　　Ａ２を直
接形成したい場合には、このように変性したポリマーま
たはコポリマーを、式：Ａ、　　Ａ３　　Ａ２のモノリ
ン酸塩ヌクレオシドと反応させ、（ＩＩｃ）　　置換基
−Ｚ−Ａ、−Ｚ′−Ａ２を形成したい場合には、このよ
うに変性したポリマーまたはコポリマーを、化学式： で表され、化学式（Ｉ）の変性したプリン塩基を燐酸化
させることにより得られる変換後のプリン塩基と反応さ
せるか、または、化学式： で表され、化学式（ＩＩ）の変性したピリミジン塩基を
燐酸化させることにより得られる変性後のピリミジン塩
基と反応させ、さらに、（ＩＩｄ）　　置換基−Ｚ−Ａ
、−Ａ４を形成したい場合には、このように変性したポ
リマーまたはコポリマーを燐酸化したＡ４残基と反応さ
せる点にある。
出発原料のポリマーとして架橋したポリスチレンを使用
する場合には、 １）　最初に、塩化第二スズの存在下でこのポリスチレ
ンをハロメチルメチルエーテルと反応させることによっ
て、出発材料のポリスチレンに先ずＣＨ２Ｘ基を固定す
るか、 ２）　または、上記のようにして得られた樹脂、すなわ
ち−ＣＨ２−Ｘ基によって変性した樹脂を相変換触媒の
存在下で酢酸カリウムと反応させ、次に、得られたアセ
テートを濃縮水酸化カリウムによって加水分解すること
によって、出発材料のポリスチレンに先ず−ＣＨ２−Ｏ
Ｈ基を固定するか、 ３）　さらには、　ＣＨ２Ｘ基を有するように変性した
樹脂を、相変換触媒の存在下で、シアヌル酸ナトリウム
と反応させることによって置換基−ＣＨ２−Ｃ＝Ｎを生
成させ、 次に、このように変性したポリスチレンをアルコール媒
体中で塩酸と反応させて置換基−ＣＨ２−Ｃ０ＯＨを生
成させ、 次に、ジボランで還元して、置換基−ＣＨ２−ＣＨ２０
Ｈを生成させることによって、出発材料のポリスチレン
に−ＣＨ２−ＣＨ，−ＯＨ基を先ず固定するか、 ４）　　−ＣＨ２−Ｘ基を有する上記樹脂にアルキルマ
ロネートを縮合させて置換基： （ただし、Ｒはアルキル残基である） を生成させ、 次に、得られたジエステル基を加水分解してシアジッド
基とし、このシアジッド基を酸性媒体中で脱カルボキシ
ル化して置換基−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ０ＯＨを生成させ
、 次に、ジボランで還元して置換基−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＨ
２−ＯＨを生成させることによって、出発材料のポリス
チレンに−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ基を先ず固定する
か、 ５）　出発材料の上記ポリマーにクロロスルホン酸を反
応させて置換基−３Ｏ２Ｃ１を生成させ、次に、この置
換基にエタノールアミンまたはプロパツールアミンを反
応させることによって、出発材料のポリスチレンに−３
０２ＮＨ（ＣＨ２）２−ＯＨ基または一３Ｏａ　　ＮＨ
（ＣＨ２）３　０Ｈ基を先ず固定するか、 ６）　出発材料のポリマーにクロロスルホン酸を反応さ
せて置換基−３Ｏ２Ｃ１を生成させ、次に、この置換基
に３−アミノ−１，２−プロパンジオールを反応させる
ことによって、出発原料のポリスチレンに−３０２ＮＨ
ＣＨ２−ＣＨｏＨ−ＣＨ２０Ｈ基を先ず固定する。
出発原料のポリマーとして、架橋デキストランを使用す
る場合には、それをチオニルノ＼ロゲンと反応させ、次
に、化学式ＯＨ（ＣＨ２）−ＮＨ２のアミンと反応させ
るか、カップリング剤を用いてこのヒドロキシルアミン
を縮合させることにより、架橋デキストランに−ＮＨ−
（ＣＨ２）９−ＯＨ基（ただし、ｑは１〜６）を先ず固
定することができる。
上記の燐酸化反応は、メチルジクロロフォスフ５エート
、亜リン酸またはオキシ塩化リン、特にオキシ塩化リン
を用いて行うことが望ましい。
化学式（Ｉ）または（Ｉｔ）におけるＺｏが−ＣＨ２Ｃ
Ｈ２−である変性した塩基を製造する場合には、相変換
触媒の存在下で上記塩基をエチレンカーボネートと反応
させる。
上記残基−Ｚ−Ａ、と化学式（１）または（ＩＩ）の変
性した塩基との反応は、カップリング剤、例えばＮ、　
Ｎ’　　−ジシクロヘキシルカルボジイミド（Ｄ、Ｃ，
Ｃ，１，）を用いて行うことができる。
また、化学式（Ｉ　ａ）または（Ｉ［ａ）の変性した塩
基は、化学式（Ｉ　ａ）または（Ｉ［ａ）に対応する塩
基を、ＰＯＣｌ、を用いて燐酸化し、次いで、カップリ
ング剤、例えばり、　Ｃ，Ｃ０Ｉ、を用いて置換基−Ｚ
−ＯＨに化学式（Ｉ）または（ＩＩ）の上記塩基を縮合
することにより製造する。
本発明のさらに他の対象は、架橋ポリスチレンまたは架
橋デキストランから誘導される先に定義したようなポリ
マーを、特にタンパク質の混合物を分画するためのイオ
ン交換クロマトグラフィーにおける固定相としての応用
と、例えば狼癒性患者によって産成された様々のタイプ
の抗体（抗ＤＮＡ抗体、循環抗凝固抗体、抗リン脂質抗
体）を選択的に精製するためのアフィニティークロマト
グラフィーにおける固定相としての応用にある。
上記のアフィニティークロマトグラフィーまたはイオン
交換クロマトグラフィーによる精製には、酵素、補酵素
または基質とみなされるＤＮＡ、ＲＮＡおよびヌクレオ
チドが認められる酵素複合体、の精製と、各種血漿抽出
物から得られる血液凝固因子の精製も含まれる。
本発明のさらに他の対象は、血液凝固過程に介在するタ
ンパク質などの生物起源の分子の精製、または、ＲＩＡ
、ＥＬＩＳＡ、電気泳動、一次元または二次元免疫電気
泳動、等電集束法などの生物学的分析システムにおける
分子の精製への、上記のような架橋スチレンまたは架橋
したデキストランから誘導されたポリマーの応用にある
。この例としては、例えば、各種タイプの狼瘡抗体（ル
ープス（ｌｕｐｉｑｕｅ＞抗体〉の定量、特に循環性抗
凝血物質および／または抗リン脂質物質の定量を挙げる
ことができる。
本発明をさらに明瞭にするために、以下、実施例で説明
する。実施例Ａ−Ｈは、本発明の樹脂の製造過程におけ
る各種の変性した中間ポリスチレン樹脂の製造方法に関
するものである。実施例１〜７は、本発明の各種の樹脂
の製造方法に関するものであり、製造した各樹脂の微量
分析結果は実施例６の前の第３表に示されている。実施
例８〜１４は、本発明の樹脂の様々な使用法を示してい
る。
実施例Ａ ポリ（パラクロロメチル　スチレン）の製造ニーＣＨ２
−ＣＨ− −ＣＨ２−ＣＨ− Ｈ２Ｃ１ ２５０ｍ１！　（４０００ミリグラム当量）のＣＨ２Ｃ
ｌ２を撹拌しながらその中に４時間かけて２４．５　ｇ
　（２３５ミリグラム当量）のポリスチレン（フル力（
ＦｔｌＬＫＡ）　社）を導入する。０℃で、４５ｄ（６
００ミリグラム当量）のＣＩ　ＣＨ２０ＣＨ３と、Ｌｏ
ｒｎｌ（８５ミリグラム当量）の３ｎ［：１．とを添加
し、室温で２時間半撹拌を続ける。続いて濾過操作を行
い、樹脂をＣＨ２Ｃ１□中に分散させ、次に３ＮのＭＣ
Ｉ　（１／４）　／ジオキサン（３／４）の混合物、ジ
オキサンの量を順番に増加させた複数のジオキサン／Ｈ
２０混合物、メタノール、ＣＨ２Ｃｌ２に分散させる。
収率は８０％を越える。
この樹脂ＰＳ−ＣＨ２ＣＩは多くの反応のベースとして
用いられる。
（注）＊製造された樹脂の塩素の比率は、ブチルアミン
を用いた加水分解によって遊離した塩素イオンを定量す
ることによって決定した。
この定量は、分散液を酸性にした後、銀の指示電極を用
い硝酸銀溶液によって実行する。
実施例Ｂ ポリ　（パラクロロスルフォニル　スチレン）の製造： 〔第１段階〕 −ＣＨ２−ＣＨ− −ＣＨ２−ＣＨ− Ｏ３Ｈ 〔第２段階〕 −ＣＨ２−ＣＨ− ０３Ｈ −ＣＨ２−ＣＨ− ０２Ｃ１ 以下の記述では、記号ＰＳでパラの位置が置換されたポ
リスチレンを表すことにする。
１２５ｒｎ！！（２０００ミリグラム当量）のＣＨ２Ｃ
１２を撹拌しながらその中に室温で４時間かけて２．６
ｇ（２５ミリグラム当量）のポリスチレン（フル力社）
を導入する。次に、ＨＳ　Ｏ，ＣＩを１５ｍｊ２（２２
５ミリグラム当量）添加し、１−時間撹拌を続ける。Ｃ
Ｈ２Ｃ１ａを用いて濾過し、次にアセトンとＣＨ２Ｃｌ
２を用いて濾過する。得られた生成物を直ちに使用して
、エタノールアミン、プロパツールアミン、または３−
アミノ−１，２−プロパンジオールと反応させる。
全収率は約８０％である。
第２表 （注）　＊　製造された樹脂の塩素の割合は、ブチルア
ミンを用いた加水分解によって遊離した塩素イオンを定
量することによって決定された。定量は、分散液を酸性
にした後、硝酸銀溶液を用い銀指示電極によって実行す
る。
実施例Ｃ ポリ　（パラヒドロキシメチル　スチレン）の製造： 〔第１段階〕 ＰＳ−ＣＨ２Ｃ１＋　　ＣＨ，Ｃ００Ｋ（注）＊Ｃ，Ｔ
、Ｐ、は、塩化トリカブリリルメチルアンモニウムから
なる相変換触媒。
〔第２段階〕 ＰＳ　　ＣＨａ　　ＯＣＣＨ３＋　　ＫＯＨ日 （注）＊Ｃ，Ｔ、Ｐ、　　は、塩化トリカプリリルメチ
ルアンモニウムからなる相変換触媒。
７０ｍ１（６２０ミリグラム当量）のＣ６Ｈ４Ｃ１２を
撹拌しながらその中に１時間かけて１０ｇ　（５５ミリ
グラム当量）のＰＳ−ＣＨ２Ｃｌを導入する。水３０−
に溶解させた１５ｇ（ＤＣＨ３ＣＯＯＫと触媒３ｍｆと
を添加し、フラスコを８５〜９０℃の油浴中に約３０時
量大れる。次に、このフラスコ内に、水１５ｍＩ！に溶
解させた１５ｇのＫＯＨと触媒１ｒｄとを同時に添加し
てやはり同じ温度で４５時間放置する。次に水で濾過し
、次いでテトラヒドロフランの濃度が徐々に大きくなる
複数のＨ２０／テトラヒドロフラン混合物、メタノール
、ＣＨ２Ｃｌ２を用いて濾過する。
不均一相での反応にもかかわらず、反応はほぼ完全に行
われる。
実施例Ｄ ポリ　（パラカルボキシメチル　スチレン）の製造： Ｐ　Ｓ　　ＣＨ２Ｃ＝　Ｎ　　＋　　ＮａＣ１＋ ＰＳ　　ＣＨ２Ｃ０ＯＨ＋　　ＮＨａ （注）＊Ｃ，Ｔ、Ｐ、は（（Ｃ４Ｈ９）４Ｎ”、−３０
４Ｈ］からなる相変換触媒。
第１段階では、加熱状態で５０ｍｊ！のＮ、Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド中に３．５ｇのＮａＣミＮを溶解させ、
５ｇ（２６ミリグラム当量）のＰＳ−ＣＨ２Ｃ１と、５
０ｍＩ！のＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミドと、１．２ｇ
（３，５ミリグラム当量）の（（Ｃ４Ｈ９）４Ｎ”。
−Ｓ　Ｏａ　Ｈ）とを添加し、２４時間８０℃に保つ。
次に、Ｈ２Ｏ、ジオキサン、メタノール、ＣＨ２Ｃｌ２
を用いた従来の洗浄を行って濾過し、形成された樹脂を
乾燥させる。この樹脂はポリ　（パラシアノメチルスチ
レン）ＰＳ−ＣＨ２Ｇ＝＝Ｎである。
第２段階では、２ｇ（１１ミ！７グラム当量）のＰＳ　
　ＣＨ２Ｃ＝Ｎと、濃縮ＨＣＩ　（３７，５ｍり　／エ
タノール（１２，５ｒｎｌ）の混合物をガラス製アンプ
ルに導入して密封する。このアンプルを撹拌状態で３０
時間１１０℃に維持する。次に、やはり撹拌状態で４時
間室温にする。（氷浴内に入れて）アンプルを開け、新
たに室温で４時間撹拌する。得られた生成物を水とメタ
ノールの混合物中に投入する。次にメタノールを用いて
徐々に濾過し、生成物を１０数時間、５Ｎのソーダ中に
分散させておく。
水で濾過し、次に１Ｏ−２Ｎのソーダ中で濾過する。
さらに水で濾過する（Ｐ　Ｓ　　ＣＨ２ＣＯＯＮａが得
られる）。ここで生成物を３ＮのＨＣＩ　（５０）　／
ジオキサン（５０）の混合物中に１０数時間、分散させ
、Ｈ２０、ジオキサン、メタ／−／ｌ／、ＣＨ２Ｃ１゜
を用いて濾過する。
実施例Ｅ ポリ　（パラカルボキシエチル　スチレン）の製造： ／ＣＯＯＣ２Ｈｓ ＰＳ　　ＣＨ２Ｃｌ　　＋　　ＣＨ２ ＼Ｃ００Ｃ２Ｈｓ ＼ＣＯＯＮａ 加熱状態で５０ｄのＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド中に
５ｇのＣＯ２に２を溶解させ、次に、１ｇの硫酸テトラ
ブチルアンモニウムと、２ｇ（１１ミリグラム当量）の
ＰＳ−ＣＨ，ＣＩと、１５ｒｄ（１００ミリグラム当量
）の（ＣＯＯＣ２Ｈａ）　２　ＣＨ２を８５℃で２４時
間かけて添加する。次に、水、テトラヒドロフラン、メ
タノーノペＣＨ２Ｃｌ２を用いて濾過する。
次に、得られたジエステル１ｇを１５艷のエタノール中
で２時間撹拌する。５ＮのＮａＯＨを５０−添加し、１
５時間撹拌する。水で濾過した後、この樹脂を５ＮのＨ
Ｃｌ　１００ｍｊ！中に１１０℃で２４時間かけて分散
させる。次に、Ｈ２０、ジオキサン、メタノ−）ぺＣＨ
２Ｃｌ□を用いて濾過する。
実施例Ｆ１ 化合物ＰＳ　　（ＣＨ２）　、Ｉ　ＣＨ２０Ｈ（ＩＩ＝
１または２）の製造： 各Ｂ２Ｈ６＋３Ｈ２＋３ＰＳ　（ＣＨ２）　ｌ、Ｃ○Ｏ
Ｈ→　３ＰＳ　（ＣＨ２）　ｌ、ＣＨ２０Ｈ＋Ｂ　（Ｏ
Ｈ）３（ただし、ｎは１または２） この第１の方法ではテトラヒドロフラン中に市販のＢ　
２　Ｈｅを溶解させたモル溶液を用い、０℃で上記の２
つの反応を９５％まで行わせる。
あらかじめ完全に乾燥させた後、０．８　ｇ　（３，５
ミリグラム当量）のＰＳ　　（ＣＨ２）−Ｃ００Ｈ（た
だし、ｎは１または２）を３５−の無水テトラヒドロフ
ラン中に３０分かけて導入する。次に、フラスコを一５
℃と一１０℃の浴に１時量大れる。次に、温度を維持し
たまま注射器を用いて同じ浴にゆっくりとＢ　２　Ｈ６
／テトラヒドロフランの混合物を１モル注入する。１時
間撹拌する。フラスコを６時間３５℃に保ち、次に約３
０時間室温にする。最後にＩ２０　（５０）　／テトラ
ヒドロフラン（５０）の混合物を添加し、水で濾過し、
次に溶液（ＩＮのＭＣＩ、ジオキサン）中で１５時間撹
拌する。濾過し、ＩＮのＮａＯＨ中に分散させ、次に１
０−’Ｎ０ＮａＯＨ中に約４０時間かけて複数回分散さ
せ、水メタノール、ＣＨ２Ｃｌ□を用いて濾過する。
実施例Ｆ２ 化合物ＰＳ−（ＣＨ２）、−ＣＨ２０Ｈ（７１＝１また
は２）の製造： （Ｉ＞　３ＮａＢＨ＜　　＋　　４８Ｆ３→　２　Ｂ２
Ｈ６＋　　３ＮａＢ　Ｆ４（ＩＩ）　′ＡＢ２Ｈｓ　　
＋　３　Ｈ２＋３ＰＳ　（ＣＨ２）　ｈＣＯＯＨ →３ＰＳ−（ＣＨ２）　ｌ、−ＣＨ２０Ｈ＋Ｂ（ＯＨ）
。
（ただし、ｎは１または２） この第２の方法では、上記樹脂ｐｓ−（ＣＨ２）。
ＣＨ２０Ｈ（ただし、ｎは１または２）の存在下で、反
応式（１）と（ＩＩ）に従って、その場で水素化ホウ素
ナトリウム（Ｎａ　Ｂ　Ｈ４）を三フッ化ホウ素と２−
メトキシエチルエーテル（ジグリム）との混合物と反応
させてジボランを製造する必要がある。
よく乾燥した樹脂１ｇ（４ミ！Ｊグラム当量）をジグリ
ム２０ｍ１中に１時間かけて分散させる。ガラス壜を用
いて、１ｇのＮａＢＨ４を２５ｍ１！のジグリム（４，
７ミリグラム当量）中に溶解させて調製した溶液を４．
５ｍｌ！導入する。次に、［：０．７５ｍ！！の（ＢＦ
３゜（Ｃ２Ｈ５）　　Ｏ）　、１．２５ｍ１のジグリム
〕の溶液をゆっくりと注入する。次に、アンプルを用い
て、Ｉ２０　（５０）　／ジグリム（５０）の混合物を
ゆっくりと添加する。全体を水２０〇−中に投入する。
水、ジオキサン、メタノーノペＣＨ２Ｃｌ２を用いて濾
過する。
実施例Ｇ ポリ　（パラ−Ｎ−ヒドロキシエチルスルファミド　ス
チレン）とポリ　（パラ−Ｎ−ヒドロキシプロピルスル
ファミド　スチレン）の製造：ｐｓ−ｓｏ□Ｃ１＋Ｈ２
Ｎ　　（ＣＨ２）−ＯＨ−→ＰＳ　　ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ
２）、、　ＯＨ＋　ＨＣＩ （ただし、ｎは２または３） ５０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中に５．１ｇ　（２０ミリグラ
ム当量）のＰＳ−３Ｏ２Ｃ１を１時間かけて導入する。
エタノールアミン２８ｒｄ（４５０ミリグラム当量）ま
たはプロパツールアミン３５ｍ１！（４５０ミリグラム
当量）を５０℃にして２４時間かけて添加する。次にＣ
Ｈ２Ｃｌ□を用いて濾過し、水を用いて濾過する。得ら
れた生成物を２ＮのＨＣＩ　（１／４）　／Ｈ２０（３
／４）の混合物中で２時間撹拌する。水、テトラヒドロ
フラン、ＣＨ２Ｃｌ２中で濾過し、次いで撹拌する。
収率は９０％を越える。　　　′ 実施例Ｈ ポリ（パラ−Ｎ−ジヒドロキシ−１，２−プロピルスル
ファミド　スチレン）の製造二ＰＳ　　５Ｏ２Ｃ１＋ Ｈ２Ｎ−ＣＨ，−ＣＨｏＨ−ＣＨ２０Ｈ−”Ｐ　Ｓ　　
Ｓ　Ｏ２Ｎ　Ｈ−ＣＨ２ＣＨＯＨ−ＣＨ２０Ｈ＋　　Ｈ
ＣＩ ４ｇ（１６ミリーグラム当量）のＰ　Ｓ　−Ｓ　０２Ｃ
１＋１０ｒｒｔｌ！のＣＨ２Ｃ１，＋　８　ｍｌ（１３
０ミリグラム当量）の３−アミノ−１，２−プロパンジ
オールを室温で１時間かけて導入し、次に５０℃で５時
間撹拌し、最後に室温で２時間撹拌する。次に、ＣＨ２
ＣＩ２と水を用いて濾過する。２時間ＭＣＩ　（０，３
Ｎ　’）中で撹拌し、水とＣＨ２Ｃ１２を用いて濾過す
る。
実施例１ ヒドロキシル化した樹脂の燐酸化反応：ＰＳ　　５０２
　　ＮＨ（ＣＨ２）ｈ　ＯＨ■ →ＰＳ−３ｏ。−ＮＨ−（ＣＨ２）　ｌ、−０−Ｐ−Ｏ
ＨＯＨ （ただし、ｎは２または３） 一→ＰＳ−３ｏ□−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２−習 Ｐ　Ｓ　　（ＣＨ２）　−ＯＨ 置 ・・・・−一・・・・・“”ＰＳ−（ＣＨ２）、−０−
Ｐ−０）（ＯＨ （ただし、ｍは１．２．３） Ａ、メチルジクロロフォスフェートを用いた燐酸化反応 メチルジクロロフォスフェートをピリジンと反応させ、
次に、これらをアルコールと反応させることがジェイ、
スマート（Ｊ、ＳＭ［ＩＲＴ）　　とジェイ、カトゥリ
ン（Ｊ、　ＣＡＴＬＩＮ）によって「テトラヘドロンレ
ターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ）　
　Ｊ第５８号、５０８１〜５０８２ページ（１９７０年
）に記載され、また、エム。
ルピンシュタイン（Ｍ、　Ｒ１１ＢＩＮＳＴＥＩＮ）と
アー、バチョルニク（Ａ、ＰＡＴＣＨＯＲＮＩＫ）によ
って「テトラヘドロンレターズ」第３１巻、２１０７〜
２１１０ページ（１９７５年）に記載されている。第１
段階ではＮ−メチルピリジニウムジクロロフォスフェー
トが形成させ、この生成物を次にアルコールと反応させ
る。
この方法は、この実施例の冒頭に記載した２種類の樹脂
に対して適用された。
５０ｍ１の無水ピリジンと５−（５０ミリグラム当量）
のメチルジクロロフォスフェートを０℃に３０分放置す
る。選択されたヒドロキシル化した樹脂２　ｇ（約１０
ミリグラム当量）を撹拌しながら室温で２４時間かけて
投入する。次に、全体を　４００　ｍｌの１０％Ｃ０５
ＨＮａ中に撹拌しながら４時間かけて投入する。濾過後
、得られた生成物をＨＣＩ（ＩＮ）中に分散させ、次に
濾過し、水、ジオキサンおよびＣＨ２Ｃｌ２中で撹拌す
る。
Ｂ、亜リン酸を用いた燐酸化 この方法の原理は、エイチ、タカク、ワイ、シマダ、エ
イチ、オカがｒＣｈｅｍ、　Ｐｈａｒ＋ｎ、Ｂｕｌｌ　
Ｊ第２１巻、第８号、１８４４〜１８４５ページ（１９
７３年）に発表した論文に記載されている。この方法に
よると、燐酸化剤として亜リン酸を用いる。反応は２段
階に分けることができる。まず最初に、亜リン酸Ｈ３Ｐ
Ｏ３を塩化水銀ＨｇＣｌ２の存在下でＮ−メチルイミダ
ゾールと反応させてＮ−フォスフォリルーＮ゛　−メチ
ルイミダゾール塩を形成する。次にこの塩をアルコール
と反応させて置換されたフォスフェートを形成する。す
なわち、 この方法は、この実施例の冒頭に記載した２種類の樹脂
に対して適用された。
１５ａｌｌ！（１８０ミリグラム当量）のＮ−メチルイ
ミダゾールと、４．１ｇ　（１５ミリグラム当量）のＨ
ｇＣＬ２と、１．５　ｇ　（１５ミリグラム当量）のＨ
ａＰ０３をフラスコで８０℃に２時間放置する。次いで
、８０℃で、ヒドロキシル化した樹脂２ｇ（約１０ミリ
グラム当量）を２４時間かけて添加する。水で濾過し、
全体を４００ｍ１の飽和したナトリウムジカルボネート
中に投入する。水、ジオキサン、メタノーノペＣＨ２Ｃ
１２を用いて濾過する。
Ｃ，オキシ塩化リンを用いた燐酸化 反応は以下のように表される。
■ ＣＩ　　　　　　　　　　　高 この方法は、この実施例の冒頭に記載した３種類の樹脂
に対して適用された。
１ｇ（５ミリグラム当量）のヒドロキシル化した樹脂を
１０ｍｊ！のＰＯ（ＯＣＨ３）ｓと１．５ｇ　（１０ミ
リグラム当量）のＰ　０Ｃ１３に混合する。全体を２４
時間６０℃に維持し、次に水中に投入してテトラヒドロ
フラン、メタノール、ＣＨ２Ｃｌ、を用いて洗浄する。
ポリ　（ヒドロキシエチル　スチレン）がそのフォスフ
ォリル化化合物に変性したものが得られた。
所望の基： Ｈ ＰＳ　　（ＣＨ２）２　０　　Ｐ−〇Ｈの比率は樹脂重
量の７８％であった。
実施例２ ＣａＣ１ｚの入った保存容器でよく乾燥させたフラスコ
中に２０ｍｊ！の無水ジメチルスルフオキシドを入れ、
これに２ｇ（１０，６ミリグラム当量）のｐｓ−ＣＨ２
Ｃ１を導入する。３０ｒｄ！のジメチルスルフオキシド
中に加熱して溶解させた２、１ｇ　（１９ミリグラム当
量）のウラシルと、４．５ｇのＣ０３Ｋ　２と、８〇−
のジメチルスルフオキシドを添加する。フラスコをアル
ゴン雲囲気中で１０時間４０℃に保つ。溶液を６００ｍ
ｊ！の氷水中に投入し、２時間撹拌する。水、テトラヒ
ドロフランの濃度を徐々に大きくした複数のＨ２０／テ
トラヒドロフラン混合物、メタノール、ＣＨ２Ｃ１２を
用いて濾過する。
ポリスチレンの置換率は５９％である。
上記の場合と同様に、ジメチルスルフオキシド中且つカ
リウムカルボネートの存在下で、上記樹脂Ｐ　Ｓ　　Ｃ
Ｈ２Ｃ１にシトシン、チミン、アデニン、グアニンを固
定してそれぞれ以下のように変性した樹脂を得た。ポリ
スチレンの置換率はそれぞれ５３％、３９％、７４％、
８９％である。
５−ＣＨ２ ＰＳ−ＣＨ２ また、水酸化カリウムの存在下でオルトジクロロベンゼ
ン中で反応を行わせることにより、アデニンをＰＳ−Ｃ
Ｈ２Ｃ１に固定した。
実施例３ Ｈ 樹脂Ｐ　Ｓ　　（ＣＨ２）　２−Ｏ−Ｐ−ＯＨ諺 へ。□、）ヵよ　　　。
無水Ｎ、　Ｎ−ジメチルホルムアルデヒド中で相変換触
媒Ｃ（Ｃ４Ｈ９）４Ｎ■ｅＢｒ〕の存在下で選択した塩
基をエチレンカルボネートと反応させることによりＮ−
ヒドロキシエチル化塩基を調製する。
結晶化により純粋な生成物が容易に得られる。
このＮ−ヒドロキシエチル化塩基は、Ｎ、Ｎ−ジメチル
ホルムアルデヒド中でＮ、　Ｎ”　−ジシクロヘキシル
カルボジイミド（Ｄ、Ｃ３Ｃ０Ｉ、　）を用いさせるこ
とが可能である。Ｄ、　Ｃ１Ｃ１１，の反応機構は以下
の通りである。
Ｈ 一→Ｒ−Ｐ−０−Ｒ” ■ 上記のＮ、　Ｎ″　−ジシクロヘキシル化物は、加熱す
るとＮ、　Ｎ−ジメチルホルムアルデヒドとエタノール
に無制限に溶解する。
塩基としてアデニンを用いるときには、反応式は以下の
ようになる。
Ｈ２ ■ ＣＨ２−ＣＨ２ し Ｈ２ ヒドロキシエチルアデニン） Ｈ２ ポリスチレンに対して「ヒドロキシエチルフォスフェー
ト　ヒドロキシエチルアデニン」が１ミリダラム当量／
ｇ　（すなわち３９重量％）置換したちのを用いて縮合
することによって、０．９ミ’Ｊグラム当量／ｇ　（す
なわち２２重量％）の［ヒドロキシエチルフォスフェー
ト」置換ができる。
塩基としてシトシンを用いるときには、以下の化学式： ％式％ のＮ、１−ヒドロキシエチルシトシンをまず調製する。
ポリスチレンを「ヒドロキシエチルフォスフェート　ヒ
ドロキシエチルアデニン」で０．９５ミリグラム当量／
ｇ　（すなわち３４重量％）置換した（ｉ）Ｈ ＰＳ−（ＣＨ２）’２−Ｏ−Ｐ−ＯＨ と縮合さると、上記Ｎ、Ｌ−ヒドロキシエチルシトシン
を「ヒドロキシエチルフォスフェート」で１．３　　ミ
リグラム当量／ｇ　（すなわち３０重量％）置換するこ
とができる。
塩基としてチミンを用いるときには、以下の化学式： ％式％ のＮ、　　１−ヒドロキシエチルチミンをまず調製する
。
このＮ、１−ヒドロキシエチルチミンをυ Ｐ　Ｓ　　　（ＣＨ２）　２−Ｏ−Ｐ−ＯＨ闘 と縮合させると、１．８ミリグラム当量／ｇ　（すなわ
ち４２重１％）「ヒドロキシエチルフォスフェート」で
置換することによって、ポリスチレンを０゜６８ミリグ
ラム当量／ｇ　（すなわち１９重量％）「ヒドロキシエ
チルフォスフェート　ヒドロキシエチルアデニン」の置
換率することができる。
実施例４ ポリ（ハラヒドロキシエチルスチレン）へのヒドロキシ
ルフォスフェート塩基の固定十　塩基−（，８２ＣＨ２
０Ｐ　　ＯＨ−→刊 塩基がアデニンのときには、以下の化学式％式％ エートをまず調製する。
そのためには、ＰＯＣｌ３を用いてＮ−９，ヒドロキシ
エチルアデニンを燐酸化し、次に、得られた生成物を実
施例３のようにしてＮ、　Ｎ’　　−ジシクロヘキシル
カルボジイミドを用いてポリ　（ヒドロキシエチルスチ
レン）と縮合させる。
このようにして、フォスフオシエステルとアデニンを含
む分子の１．０３ミリグラム当量／ｇ　（ＰまたはＮの
同定分析）、すなわち４０重量％が置換される。この樹
脂の残りは、ヒドロキシエチル基および／またはヒドロ
キシメチル基によって置換されたポリスチレン、または
非置換ポリスチレンによって構成されている。
実施例５ 下記の樹脂の製造： Ｈ２ ノシンの固定 この樹脂（２，５ミリグラム当量）を１８ｒｒｔｌ！の
り０Ｍ。
Ｆ、中で膨張させる。その後、アデノシン１．３ｇと水
１０ｍ１！を添加する。フラスコを２時間半１０５℃に
維持する。真空中で２回蒸発させ、無水り０Ｍ、Ｆ。
中に再び分散させた後、７ｇのり、　Ｃ０Ｃ０１，を５
〇−のり、Ｍ、Ｆ、とともに添加して全体を１８時間１
１０℃に放置する。樹脂をり０Ｍ、　Ｆ、　　と加熱し
たメタノールで連続的に洗浄する。
アデノシンを縮合すると０．３４ミリグラム当量／ｇ（
すなわち１６．３％）置換され、２．５４ミ！Ｊグラム
当量／ｇ（５８％）がポリ　（ヒドロキシエチルフォス
フェート）スチレンになる。
Ｂ：　ＰＳ　　（ＣＨ２）２　０Ｈへのアデノシンの固
定 実施例５Ａと同様の操作を行い０．４ｇ（２，４ミリグ
ラム当量）の樹脂を０．９　ｇ　（２，６ミリグラム当
量）のアデノシンモノフォスフェートと接触させる。
するとフォスフェート基、糖類、塩基の比率が同じで置
換率が８％になる。樹脂の残りはヒドロキシル繰り返し
単位で構成されている。
／ 実施例６ リン脂質の成分の固定 ＰＳ　　ＣＨ２ＣＨ２０Ｐ　　ＯＣＨ２−■ ７　ＣＨ５ −ＣＨ，−Ｎ”−ＣＨ。
＼ＣＨｓ ａ）第１の方法 エイチ、ジェイ、ルカス（）ｌ、　Ｊ、ＬＵＣＵＳ）他
がｒＪＡｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓａｃ、第７２巻、５４９１ペ
ージ（１９５０年）に記載しているように、ＰＣｌ３が
エチレングリコールと反応すると２−クロロ−１，３−
２−ジオキサフォスフオランが形成される。無水ベンゼ
ン中で酸化させると、２−クロロ−２−オキソ−１゜３
−２−ジオキサフォスフオランが得られる。
次に、この化合物をジクロロメタン中で一１０℃でヒド
ロキシエチルポリスチレンと縮合させると、以下の繰り
返し単位が得られる。
このリングは、Ｔ、ＨｏＦ、の２０％トリメチルアミン
溶液中で開環する。従って、１ミリグラム当量／ｇすな
わち３２％）の置換体が得られる。
ｂ）第２の方法 ブロモエタノールをオキシ塩化リンで燐酸化することに
よって得られるブロモメチルジクロロフォスフェートヲ
ポリ　（ヒドロキシエチル　スチレン）と縮合すること
によって同じポリマーが作れる。この方法で得られた燐
酸化ポリマーを、次にトリメチルアミン溶液によって置
換することによって１．８ミＩＪグラム当量／ｇ　（す
なわち樹脂の５６重量％）の置換体が得られる。
ＣＨ ＰＳ　　ＣＨ２ＣＨａ　　ＯＰ　　ＯＣＨ２−上記樹脂
（５，５ミ！Ｊグラム当量）を３０ｍ１のＮ、　Ｎ”−
ジメチルホルムアミド（Ｄ、　Ｍ、Ｆ、）中で１時間膨
張させる。その後、５ｒｎｌの水に溶解させた１ｇのフ
ォスフォセリンを添加する。この分散液を２時間１００
℃に維持する。真空中で２回蒸発さ雇、無水り、　Ｍ、
Ｆ、中に再び分散させた後、１０ｇのり。
Ｃ１Ｃ，１，を２０ｒｎｌの無水り、　Ｍ、Ｆ、ととも
に添加する。全体を１８時間１１０℃に放置した後、樹
脂をり。
Ｍ、Ｆ、と加熱したメタノールで連続的に洗浄する。
フォスフォセリンの縮合により１．６ミリグラム当量／
ｇ（’Ｊンと窒素に対して同じ分析）、すなわち樹脂の
５０重量％が置換される。
実施例７ 燐酸化されたカルボキシメチル・セファデックス（Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘ：登録商標）樹脂の製造ベースとなるセフ
ァデックス樹脂の化学構造は以下の通りである。
■ Ｍ−ＯＨ ＣＨ この樹脂は、多分散度が小さなデキストランをエピクロ
ルヒドリンを用いて架橋させることによって得られる。
この樹脂は、本実施例ではカルボキシメチル基によって
一部分が置換された状態で使用される。
第１段階ニ アミノヒドロキシル化カルボキシメチル樹脂「セファデ
ックス」■の調製 操作モードＡ： 出発樹脂の酸塩化物の形成と、そのヒドロキシル化アミ
ンへの縮合 ４ミリグラムＣ０ＯＨ当量／ｇまで架橋したカルボキシ
メチル「セファデックス」■（ファルマシア（Ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ）社ＨＯｇ（以下ＣＭセファデックスと表記
する）をベンゼン１５０ｍＡ’中で膨張させる（溶液１
）。４．５ｍＮの塩化チオニルをベンゼン５０ｍ１！に
溶解させる（溶液２）。溶液２をゆっくりと溶液１に添
加する。反応媒体の温度を徐々に５０〜７０℃に上げる
。反応は２４時間継続する。生成物を濾過し、水分を含
まないベンゼンで素早く洗浄し、次に脱水する。
次に、以下の反応式に従ってエタノールアミンの縮合を
実施する。
塩素の約４０ミリグラム当量に相当する１０ｇのＣＭ「
セファデックス」の酸塩化物を１５０−のピリジン中に
分散させる。酸塩化物基に対して３モル（すなわち７−
）過剰なエタノールアミンを反応媒体（樹脂＋ピリジン
）に雄加し、温度を徐々に７０℃に上げる。すなわち、
３５〜４０℃に１時間維持し、続いて２４時間７２℃で
加熱する。生成物を水で濾過−し、ゆすぎ、水で洗浄し
て残留塩化物を加水分解させ、エタノールの濃度が増加
する複数のＨ２０／エタノール溶液で洗浄し、真空中で
脱水し、５０℃にて重量が一定になるまで乾燥させる。
操作モードＢ： Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１゜２−ジヒ
ドロキルイン（ＥＥＤＱ）へツカツブリングと、ヒドロ
キシル化されたアミンの固定 １段階： ＥＥＤＱへのカップリング ０゛０ １０ｇの架橋したＣＭｒセファデックス」を７０ｍＩ！
の水の中に分散させる。ｐＨはＩＮのＨＣＩを添加する
ことによって３に調節する。ここで２０ｇのＥＥＤＱ溶
液（これは約８０ミリグラム当量に相当する）をゆっく
りと１５０ｒｎｌのエタノール中に添加する。
反応媒体は、室温で３０分間撹拌したままにしておかな
くてはならない。
第２段階： アミンの固定 υ ８０ミリグラム当量のエタノールアミンを上記反応媒体
（樹脂−Ｈ２Ｏ−ＥｔＯＨ−ＥＥＤＱ）に極めてゆっく
りと添加する。このとき、各添加操作の間にｐＨを安定
させる制御を行う。ｐＨは、反応の全期間を通じて、す
なわち２０時間の間、室温でほぼ９．３に維持する。
生成物を濾過し、エタノールの濃度が（１００％まで）
増加する複数のＨ２０／ＥｔＯＨ混合物で洗浄し、次に
メタノールで洗浄し、次に真空中で脱水し、５０℃にて
重量が一定になるまで乾燥させる。
上記２つの操作モードでは、他のヒドロキシル化された
アミン、例えばプロパツールアミンやヘキサノールアミ
ンと反応させることができる。この場合、スペーサ用ア
ームは異なる。
第２段階： 表記名称の化合物の調製（実施例ＩＣと類似の燐酸化） １０ｇのアミノヒドロキシル化した乾燥ＣＭｒセファデ
ックス」　（４ミリグラム当量／ｇ）をトリメチルフォ
スフェートＰＯ（ＯＣＨ３）３中に分散させる。この樹
脂を室温で１〜２時間溶媒中で膨張させる。次に、オキ
シ塩化リンＰＯＣ１３（４５ミリグラム当量）を樹脂−
溶媒からなる媒体に添加する。全体を６０℃に加熱し、
１８時間反応させる。燐酸化された生成物を数−の水を
添加することによって加水分解する。この生成物を濾過
し、Ｈ２０／ジオキサンの混合物を濃度（１）／　（２
）にし、次には（２）／　（１）にしたものを用いて洗
浄し、次に純粋なジオキサンとメタノールを用いて洗浄
する。得られた生成物を脱水し、真空中で５０℃にて乾
燥させる。
実施例８ この実施例では、第１図に示した滴定曲線を説明する。
この滴定曲線は、実施例Ｆ２’（スペーサ用アームの固
定）と実施例１　（燐酸化）と同様にして得られた樹脂
： （フォスフェート基の置換率６０％）に対して得られた
ものである。滴定試薬はソーダである。この樹脂をイオ
ン交換支持体として使用する場合の最適条件を決めるｐ
Ｈ領域はｐｔ１７の近傍であることがわかる。この条件
では、この樹脂がタンパク質を変性の危険性なしにうま
く分離することができる。
実施例９ この実施例は、実施例８の樹脂をクロマトグラフィーの
支持体として応用した場合である。
第２図〜第６図は、実施例８の樹脂を高速液体クロマト
グラフィーシステムにおいて２５０Ｘ４ｍｍのステンレ
ス製カラム内で用いて得られたクロマトグラムである。
タンパク質の溶離は、ｐＨが５の０．１６モルクエン酸
緩衝液、または、ｐ）ｌが７，６の０．０５モルトリス
緩衝液中になされ、その流量は０．１〜０、２ｍｌ？／
分である。
第６図かられかるように、この樹脂を用いると、特に、
高速液体クロマトグラフィーによってミオグロビンとシ
トクロムＣとからなる混合物を分離することができる。
実施例１０ この実施例は、実施例Ｆ２（スペーサ用アームの固定）
と実施例１　（燐酸化）と同様にして得られた樹脂： ＰＳ−（ＣＨ２）２−０−Ｐ−ＯＨ 島 （フォスフェート基の置換率７０％）を特異免疫吸着剤
として応用した場合である。
第７図は、ループス（狼癒性）血清の循環性抗凝血物質
（Ａ、Ｃ１Ｃ０）がフォスフェート基を有する樹脂に吸
着する様子を示している。曲線上には、縦軸方向にセフ
ァリン−カオリン（Ｔ、Ｃ０に、）の時間が秒単位で示
されζ横軸方向には緩衝液中の血清の濃度が示されてい
る。
Ａ、Ｃ，Ｃ６に起因する凝血時間の伸びは、ループス血
清を前もって上記の樹脂で培養した場合にはもはや存在
しない。従って、この曲線はヒトの正常な血清の曲線と
同じになる。
さらに、ファー（ＦＡＲＲ）テストによって測定したこ
の血清の抗ＤＮＡ抗体の割合が変化しなかったことは、
Ａ、　ＣＯＣｌがこの樹脂に極めて特殊な方法で吸着し
ていることを示している。
実施例１１ この実施例は、実施例１０と同様にして得られる樹脂： ＰＳ　−（ＣＨ２）　２　０　　Ｐ　　ＯＨＯＨ （フォスフェート基の置換率３０％）を特異免疫吸着剤
として応用した場合である。
第８図は、フォスフェート基をもつ樹脂に対するループ
ス血清のＩｇＧ抗ＤＮＡの吸着等温曲線を示している。
曲線上には、縦軸方向に平衡状態で樹脂に吸収されたＩ
ｇＧ抗ＤＮＡのモル濃度が示され、横軸方向には血清中
に分散された様々な量のポリマーに対するループス血清
内の同じＩｇＧの濃度が示されている。
実施例工２ この実施例は、ＤＮＡの転写に必要とされるＲＮＡ−ポ
リメラーゼＢ因子の精製のために、実施例１０と同様に
して得られる樹脂： 言 （フォスフェート基の置換率６４％）をアフィニティー
クロマトグラフィーの固定相に応用した場合である。
この実施例では、ｐＨ７，９の５０ミ’）モルのトリス
（Ｔｒｉｓ）　−ＨＣｌと５０ミリモルのＫＣＩからな
る緩衝液中に溶液としてアデノウィルス−２の主要遅延
プロモータのＵＥＦ転写因子と他の生物的ポリマーとを
含む細胞抽出物を、予め同じ緩衝液中で平衡させた上記
樹脂３００μｌからなるクロマトグラフィー用カラムに
４℃で通した。
ｐＨ７，９の５０ミリモルのトリス−ＭＣＩと１モルの
ＫＣＩからなる緩衝液を用いた溶離によって、高純度の
ＵＥＦ因子が得られる。この因子のキャラクテリゼーシ
ョンは以下の２つの方法で実行される。
（１）　　ポリアクリルアミドのゲル電気泳動。この操
作によって精製されたＵＥＦ因子の存在がわかる。
（２）ヴイー、モンコリン（Ｖ、　Ｍｏｎｃｏｌｌｉｎ
）他によってｌＥｍｂｏ　Ｊｏｕｒｎａｌ、第５巻、２
５７７〜２５８４ページ（１９８６年）に記載された方
法に従ってＵＥＦ因子の生物学的活性を明らかにする。
本実施例は、上記樹脂が特にＵＥＦ因子を固定し、初期
の細胞抽出物中に存在している他の転写複合体成分は固
定しないことを示すと同時に、この樹脂をアフィニティ
ークロマトグラフィーに応用して生物起源のポリマーを
精製できる可能性を示している。
実施例１３ この実施例は、実施例１０と同様にして得られる燐酸化
されたポリスチレンを特異免疫吸着剤として応用した場
合である。
第９図は、異なる割合でフォスフェート基が置換したフ
ォスフォリル化されたポリスチレンに対するループス血
清の抗ＤＮＡ抗体の吸着の様□子を４つの血清濃度につ
いて表している。
得られた結果から、抗ＤＮＡ抗体がこのタイプの樹脂に
吸着するに当たって最適のフォスフェートの割合（約３
０％）が存在していることがわかる。
実施例１４ この実施例は、合成されたポリマーを抗体定量のための
支持体として応用した場合である。
この実施例では、実施例１０と同様にして得られた樹脂
（置換率５８％、６４％、７１％）を４℃で３種類の血
漿とともに３０分培養する。第１はヒトの正常な血漿で
ある。第２は循環性抗凝血物質剤（Ａ。
Ｃ１Ｃ，）を含むループス血漿である。最後は抗ＤＮＡ
抗体を含むループス血漿である。
遠心分離後、上澄みを除去してポリマーを０．１モルの
ホウ酸塩緩衝液−０，２％のウシのアルブミン（ＢＳＡ
）血清（ｐＨ＝　８．４）で洗浄し、樹脂にヨウ素１２
５で標識されたヒトの抗１’ｃ抗体の溶液を添加する。
４℃で４時間撹拌した後、先はどと同じ洗浄操作を実行
する。その後、樹脂をガンマ線カウンタ内に入れる。
樹脂に固定されたヒトの抗Ｆｃ抗体の量は、ループス血
漿を培養した場合よりも特にＡ、　Ｃ１Ｃ９を含む場合
に多い（第１０図）。これは、ループス抗体が特に分画
Ｐａｂによって吸収され、分画Ｐｃが自由状態で残され
ることをはっきりと示している。
従って、特異的に固定される抗体を直接に定量すること
ができる。さらに、ＳＬＥ患者の血漿中に存在している
抗体の定量を、これら樹脂を用いて実施することができ
る。
【図面の簡単な説明】
第１図は、実施例８における樹脂： ＰＳ　　　（ＣＨ２）２　０　　Ｐ　　ＯＨ具 （フォスフェート基の置換率６０％）に対して得られる
滴定曲線を示すグラフである。 第２図〜第６図は、実施例８の樹脂を高速液体クロマト
グラフィーシステムにおいて２５０Ｘ４ｍｍのステンレ
ス製カラム内で用いて得られた下記の各クロマトグラム
である： 第２図：ｐ）Ｉ＝５の０．１６モルクエン酸系緩衝液中
のシトクロムＣ０流量は０．２ｍｌ／分、溶離時間は７
．９６分。 第３図：ｐ１１＝７．６の０．０５モルトリス緩衝液と
０〜２モルのＮａＣ１中のシトクロムＣ０流量は０．１
ｍｌ／分、溶離時間は６８．３８分。 第４図：ｐＨ＝５の０．１６モルクエン酸塩緩衝液中の
りボヌクレアーゼ。流量は０．２−／分、溶離時間は８
．５３分。 第５図：ｐＨ＝５の０．１６モルのクエン酸塩緩衝液と
２モルのＮａＣ１中のアルブミン。流量は０．ｌｒｄ／
分、溶離時間は１８．５分。 第６図：ｐＨ＝７．６の０．０５モルのトリス緩衝液と
０〜２モルのＮａＣ１中のシトクロムＣ＋ミオグロビン
。流量は０．１ｍｆｆ１／分、溶離時間はミオグロビン
に対して１４．１２分、シトクロムＣに対して７１．０
６分。 第７図は、実施例１０にふける、ループス血清の循環性
抗凝血物質（Ａ、Ｃ，Ｃ０）がフォスフェート基を有す
る樹脂に吸着する様子を示すグラフである。 ム：ルーブス血清 Δ：本発明の樹脂で培養したループス血清＋：正常なヒ
トの血清 第８図は、実施例１１におけるフォスフェート基をもつ
樹脂に対するループス血清のＩｇＧ抗ＤＮＡの吸着等温
曲線を示すグラフである。 ・：血清１１につきポリマ−３之２ ム：血清１１につきポリマー　５４ｇ 第９図は、実施例１３における異なる割合でフォスフェ
ート基が置換したフォスフォリル化されたポリスチレン
に対するループス血清の抗ＤＮＡ抗体の吸着の様子を４
つの血清濃度について表すグラフである。 横軸：フォスフェート基の置換率（％）縦軸：吸着され
た抗ＤＮＡ抗体の割合（％）０２１００％血清 ◆：８０％血清 腸：６０％血清 Ｘ：　４０％血清 第１０図は、実施例１４における、樹脂に固定されたヒ
トの抗Ｐｃ抗体の量を示すグラフである。 縦軸は、吸着された抗ＦｃＩｇＧの割合筒：フォスフエ
ート基７１％の樹脂 口：フォスフェート基５８％の樹脂 ：フォスフェート基６４％の樹脂

Claims (32)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）スチレンまたはデキストランの架橋したポリマー
    またはコポリマーから誘導されるポリマーであって、ベ
    ースとなる上記ポリマーまたはコポリマーの鎖が、以下
    の種類： −Ｚ−Ａ＿１、 −Ｚ−Ａ＿２、 −Ｚ−Ａ＿１−Ｚ’−Ａ＿２、 −Ｚ−Ａ＿１−Ａ＿３−Ａ＿２、 −Ｚ−Ａ＿１−Ａ＿４ （ここで、Ｚはスペーサ用鎖を表し、 Ｚ’は結合鎖を表し、 Ａ＿１はリン酸塩残基を表し、 Ａ＿２はプリン塩基残基またはピリミジ ン塩基残基を表し、 Ａ＿３は糖類の残基を表し、 Ａ＿４は各種リン脂質の極性構造中に存 在する分子の残基を表す） に属する互いに同一または異なる一つまたは複数の基に
    よって置換されていることを特徴とするポリマー。
  2. （２）上記Ｚが、以下の残基： （ａ）−（ＣＨ＿２）＿ｎ− （ただし、ｎは１〜６であり、必要に応 じて少なくとも１つのＨ基がＯＨ基によ って置換されることによって親水性にさ れている） （ｂ）−ＳＯ＿２−ＮＨ−（ＣＨ＿２）＿ｍ−（ｍは１
    〜６であり、残基−（ＣＨ＿２）＿ｍ−は必要に応じて
    少なくとも１つのＨ基 がＯＨ基によって置換されることによっ て親水性にされている） （ｃ）架橋デキストランの変性の場合には、▲数式、化
    学式、表等があります▼ でもよい、（ただしｑは１〜６であり、 残基−（ＣＨ＿２）＿ｑ−は必要に応じて少なくとも１
    つのＨ基がＯＨ基によって置換 されることによって親水性にされている） の中から選択されることを特徴とする請求項１に記載の
    ポリマー。
  3. （３）上記Ｚが、以下の残基： −ＣＨ＿２−、−（ＣＨ＿２）＿２−、−（ＣＨ＿２）
    ＿３−、−ＳＯ＿２−ＮＨ−（ＣＨ＿２）＿２−、 −ＳＯ＿２−ＮＨ−（ＣＨ＿２）＿３−、 −ＳＯ＿２−ＮＨ−ＣＨＯＨ−、 −ＳＯ＿２−ＮＨ−ＣＨ＿２−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−の
    中から選択され、架橋デキストランの変性の場合には▲
    数式、化学式、表等があります▼ でもよいことを特徴とする請求項２に記載のポリマー。
  4. （４）上記Ｚ’が残基−（ＣＨ＿２）＿ｐ−（ただしｐ
    は１〜６であり、この残基は必要に応じて少なくとも１
    つのＨ基がＯＨ基によって置換されることによって親水
    性にされている）を表すことを特徴とする請求項１〜３
    のいずれか一項に記載のポリマ。
  5. （５）上記Ａ＿２が、アデニンとグアニンの中から選択
    されたプリン塩基の残基、またはシトシン、チミン、ウ
    ラシルの中から選択されたピリミジン塩基の残基を表す
    ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の
    ポリマー。
  6. （６）上記Ａ＿３が、ペントースの残基、特にＤ−リボ
    ースまたは２−デオキシ−Ｄ−リボースの−ＣＨ＿２−
    基が上記リン酸塩残基と結合したものの残基を表すこと
    を特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリ
    マー。
  7. （７）上記Ａ＿４が、コリン、エタノールアミン、セリ
    ーン、グリセロール、またはイノシトールをエステル化
    した分子を表すことを特徴とする請求項１〜６のいずれ
    か一項に記載のポリマー。
  8. （８）ベースとなる上記ポリマーがスチレンが架橋した
    ポリマーまたはコポリマーであり、ポリスチレンの鎖の
    置換がフェニル核のパラの位置でなされることを特徴と
    する請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリマー。
  9. （９）ベースとなる上記ポリマーがスチレンが架橋した
    ポリマーまたはコポリマーであり、この架橋に関与しな
    い各フェニル基が請求項１に定義した置換基を有してい
    てもよいことを特徴とする請求項１〜８のいずれか一項
    に記載のポリマー。
  10. （１０）ベースとなる上記ポリマーがスチレンが架橋し
    たポリマーまたはコポリマーであり、このポリマーがジ
    ビニルベンゼン等の少なくとも１種の架橋用モノマーと
    最大限５重量％まで架橋していることを特徴とする請求
    項１〜９のいずれか一項に記載のポリマー。
  11. （１１）寸法が約５０μｍの球の形態をしたベースとな
    るポリマーの変性によって得られることを特徴とする請
    求項１〜１０のいずれか一項に記載のポリマー。
  12. （１２）エピクロルヒドリンによって架橋したデキスト
    ランの変性によって得られ、このデキストランは必要に
    応じてカルボキシメチル置換基を有することを特徴とす
    る請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリマー。
  13. （１３）スチレンが架橋した（コ）ポリマーまたは架橋
    したデキストランから誘導される請求項１〜１２のいず
    れか１項に定義したポリマーの製造方法であって、ベー
    スとなる架橋したポリマーまたはコポリマー（ポリスチ
    レンまたはデキストラン）に、１段階または複数の段階
    で、残基−Ｚ−ＯＨを固定するか、または、スチレンの
    ポリマーまたはコポリマーの場合には、残基−Ｚ−Ｘ（
    ただし、Ｘはハロゲン原子を表し、Ｚは請求項１で定義
    されたものを表す）を固定し、次に、 （ I ）残基−Ｚ−Ｘを固定した場合には、このように
    変性したポリスチレンをプリン塩基またはピリミジン塩
    基と反応させて置換基−Ｚ−Ａ＿２を形成し、 （II）残基−Ｚ−ＯＨを固定した場合には、（IIａ）こ
    のように変性したポリマーまたはコポリマーの燐酸化に
    よって置換基−Ｚ−Ａ＿１を形成し、次に、 置換基−Ｚ−Ａ＿１−Ｚ’−Ａ＿２を形成する場合には
    、残基−Ｚ−Ａ＿１を、化学式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で表される変性したプリン塩基と反応させるか、または
    、化学式： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） で表される変性したピリミジン塩基と反応させ、 置換基−Ｚ−Ａ＿１−Ａ＿３−Ａ＿２を形成する場合に
    は、残基−Ｚ−Ａ＿１を、プリン塩基の窒素９またはピ
    リミジン塩基の窒素１を糖類の炭素１’と結合させた結
    果として得られる式−Ａ＿３−Ａ＿２のヌクレオシドと
    反応させ、置換基−Ｚ−Ａ＿１−Ａ＿４を形成する場合
    には、残基−Ｚ−Ａ＿１を各種リン脂質の極性構造内の
    分子と反応させ、 （IIｂ）置換基−Ｚ−Ａ＿１−Ａ＿３−Ａ＿２を直接形
    成する場合には、上記の変性ポリマーまたはコポリマー
    を、式Ａ＿１−Ａ＿３−Ａ＿２のヌクレオシドモノリン
    酸塩と反応させ、 （IIｃ）置換基−Ｚ−Ａ＿１−Ｚ’−Ａ＿２を形成する
    場合には、上記の変性ポリマーまたはコポリマーを、上
    記化学式（ I ）の変性したプリン塩基を燐酸化するこ
    とにより得られる化学式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ａ） で表さる変換後のプリン塩基と反応させるか、または、
    上記化学式（II）の変性したピリミジン塩基を燐酸化す
    ることにより得られる化学式： ▲数式、化学式、表等があります▼（IIａ） で表される変換したピリミジン塩基と反応させ、 （IIｄ）置換基−Ｚ−Ａ＿１−Ａ＿４を形成する場合に
    は、上記の変性したポリマーまたはコポリマーを燐酸化
    したＡ＿４残基と反応させる、ことを特徴とする方法。
  14. （１４）出発原料のポリマーとして架橋したポリスチレ
    ンを使用し、塩化第二スズの存在下でこのポリスチレン
    をハロメチルメチルエーテルと反応させることによって
    このポリスチレンに先ず−ＣＨ＿２−Ｘ基を固定するこ
    とを特徴とする請求項１３に記載の方法。
  15. （１５）出発原料のポリマーとして架橋したポリスチレ
    ンを使用し、請求項１３に記載の方法により得られた樹
    脂を相変換触媒の存在下で酢酸カリウムと反応させ、次
    に、得られたアセテートを濃縮水酸化カリウムによって
    加水分解することによって、このポリスチレンに先ず−
    ＣＨ＿２−ＯＨ基を固定することを特徴とする請求項１
    ３に記載の方法。
  16. （１６）出発原料のポリマーとして架橋したポリスチレ
    ンを使用し、このポリスチレンに、以下の方法によって
    先ず−ＣＨ＿２−ＣＨ＿２−ＯＨ基を固定することを特
    徴とする請求項１３に記載の方法：（ａ）請求項１３に
    記載の方法により得られた樹脂を相変換触媒の存在下で
    シアヌル酸ナトリウムと反応させることによって置換基
    −ＣＨ＿２−Ｃ≡Ｎを生成させ、 （ｂ）次に、このように変性したポリスチレンをアルコ
    ール媒体中で塩酸と反応させて置換基−ＣＨ＿２−ＣＯ
    ＯＨを生成させ、 （ｃ）次に、ジボランで還元して置換基−ＣＨ＿２−Ｃ
    Ｈ＿２−ＯＨを生成させる。
  17. （１７）出発原料のポリマーとして架橋したポリスチレ
    ンを使用し、このポリスチレンに以下の方法を用いて先
    ず−ＣＨ＿２−ＣＨ＿２−ＣＨ＿２−ＯＨ基を固定する
    ことを特徴とする請求項１３に記載の方法：（ａ）請求
    項１３に記載の方法により得られた樹脂にアルキルマロ
    ネートを縮合させて置換基： ▲数式、化学式、表等があります▼ （ただし、Ｒはアルキル残基である） を生成させ、 （ｂ）次に、得られたジエステル基を加水分解してジア
    シッド基とし、このジアシッド基を酸性媒体中で脱カル
    ボキシル反応をさせて−ＣＨ＿２−ＣＨ＿２−ＣＯＯＨ
    置換体とし、 （ｃ）次に、ジボランで還元して、−ＣＨ＿２−ＣＨ＿
    ２−ＣＨ＿２−ＯＨ置換体にする。
  18. （１８）出発原料のポリマーとして架橋したポリスチレ
    ンを使用し、このポリスチレンに以下の方法で−ＳＯ＿
    ２−ＮＨ−（ＣＨ＿２）＿２−ＯＨ基または−ＳＯ＿２
    −ＮＨ−（ＣＨ＿２）＿３−ＯＨ基を先ず固定すること
    を特徴とする請求項１３に記載の方法：（ａ）出発材料
    の上記ポリマーにクロロスルホン酸を反応させて−ＳＯ
    ＿２Ｃｌ置換体を生成させ、（ｂ）次に、エタノールア
    ミンまたはプロパノールアミンをこの置換基に反応させ
    る。
  19. （１９）出発原料のポリマーとして架橋したポリスチレ
    ンを使用し、このポリスチレンに以下の方法によって先
    ず−ＳＯ＿２−ＮＨ−ＣＨ＿２−ＣＨＯＨ−ＣＨ＿２Ｏ
    Ｈ基を固定することを特徴とする請求項１３に記載の方
    法： （ａ）出発原料のポリマーにクロロスルホン酸を反応さ
    せて−ＳＯ＿２Ｃｌ置換体を生成させ、（ｂ）次に、３
    −アミノ−１，２−プロパンジオールをこの置換基に反
    応させる。
  20. （２０）出発原料のポリマーとして、架橋デキストラン
    または一部分がカルボキシメチル基で置換された架橋デ
    キストランを使用し、この架橋デキストランをチオニル
    ハロゲンと反応させ、次に、化学式ＯＨ−（ＣＨ＿２）
    ＿ｑ−ＮＨ＿２のアミンと反応させるか、または、カッ
    プリング剤を用いてこのヒドロキシル化アミンと縮合さ
    せることにより、上記の置換架橋デキストランに−ＮＨ
    −（ＣＨ＿２）＿ｑ−ＯＨ基（ただし、ｑは１〜６）を
    先ず固定することを特徴とする請求項１３に記載の方法
    。
  21. （２１）上記燐酸化反応を、メチルジクロロフォスフェ
    ート、亜リン酸またはオキシ塩化リンを用いて行うこと
    を特徴とする請求項１３〜２０のいずれか一項に記載の
    方法。
  22. （２２）相変換触媒の存在下で、上記塩基をエチレンカ
    ルボネートと反応させることにより、上記化学式（ I
    ）または（II）においてＺ’が−ＣＨ＿２−ＣＨ＿２−
    である変性した塩基を製造することを特徴とする請求項
    １３〜２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. （２３）Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド等
    のカップリング剤を用いて化学式（ I ）または（II）
    の変性した塩基に上記残基−Ｚ−Ａ＿１を反応させるこ
    とを特徴とする請求項１３〜２２のいずれか一項に記載
    の方法。
  24. （２４）化学式（ I ）または（II）に対応する塩基を
    ＰＯＣｌ＿３を用いて燐酸化し、次いで、Ｎ，Ｎ’−ジ
    シクロヘキシルカルボジイミド等のカップリング剤を用
    いて上記の化学式（ I ａ）または（IIａ）の塩基を−
    Ｚ−ＯＨ置換体と縮合することによって化学式（ I ａ
    ）または（IIａ）の変性した塩基を製造することを特徴
    とする請求項１３〜２２のいずれか一項に記載の方法。
  25. （２５）請求項１〜１２のいずれか一項に定義されたス
    チレンまたはデキシトランの架橋したポリマーまたはコ
    ポリマーから誘導されるポリマーを用いたイオン交換ク
    ロマトグラフィー用固定相。
  26. （２６）請求項１〜１２のいずれか一項に定義されたス
    チレンまたはデキシトランの架橋したポリマーまたはコ
    ポリマーから誘導されるポリマーを用いたアフィニティ
    ークロマトグラフィー用固定相。
  27. （２７）狼瘡性患者の産成する互いに異なるタイプの抗
    体を選択的に精製するための請求項２６に記載のアフィ
    ニティークロマトグラフィー用固定相。
  28. （２８）酵素、補酵素または基質としてＤＮＡ、ＲＮＡ
    およびヌクレオチドが認められる酵素複合体を精製する
    ための請求項２５または２６に記載のイオン交換クロマ
    トグラフィー用またはアフィニティークロマトグラフィ
    ー用固定相。
  29. （２９）多種の血漿抽出物から血液凝固因子を精製する
    ための請求項２５または２６に記載のイオン交換クロマ
    トグラフィー用またはアフィニティークロマトグラフィ
    ー用固定相。
  30. （３０）請求項１〜１２のいずれか一項に定義されたス
    チレンまたはデキシトランの架橋したポリマーまたはコ
    ポリマーから誘導されるポリマーを用いることを特徴と
    する血液凝固過程に介在するタンパク質等の生物起源の
    分子の精製・分離方法。
  31. （３１）請求項１〜１２のいずれか一項に定義されたス
    チレンまたはデキシトランの架橋したポリマーまたはコ
    ポリマーから誘導されるポリマーを用いることを特徴と
    するＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ、電気泳動、一次元または二次
    元免疫電気泳動、等電集束法等の生物学的分析システム
    。
  32. （３２）ループス抗体の様々なタイプの定量、循環性抗
    凝血物質の定量および／または抗リン脂質物質の定量に
    用いることを特徴とする請求項３０に記載の精製・分離
    方法。
JP63207191A 1987-08-21 1988-08-20 架橋したポリスチレンおよびデキストランから誘導されたポリマーと、その製造方法と、生物起源の分子の分析と精製へのこのポリマーの応用 Pending JPH01158001A (ja)

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