DE4001098A1 - Traegergebundene dialkoxyphosphorverbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung - Google Patents
Traegergebundene dialkoxyphosphorverbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendungInfo
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Description
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind trägergebun
dene Dialkoxyphosphorverbindungen, insbesondere trägerge
bundene Alkylphosphate und Alkylphosphonate, Verfahren zu
ihrer Herstellung und ihre Verwendungen.
Di- oder Trialkylphosphate sind Substanzen, die unter
anderem verwendet worden sind, um phospholipid-umhüllte
Viren zu inaktivieren, wobei man von der Annahme ausging,
daß diese Phosphorverbindungen die Membran dieser Viren
zerstören. So beschreibt beispielsweise die EP-A-01 31 740
Verfahren zur Herstellung von proteinhaltigen Zubereitun
gen, die praktisch frei sind von phospholipid-haltigen
Viren, bei dem die Zubereitungen ausreichend lange mit
einer wirksamen Menge von Di- oder Trialkylphosphaten in
Berührung gebracht werden. Dieses Verfahren ist auf die
verschiedensten biologischen Flüssigkeiten anwendbar, ins
besondere jedoch zur Entfernung von Viren in Blut- und
Plasmapräparaten, in denen die Proteine nicht oder nur
möglichst geringfügig denaturiert werden sollen. Gerade
bei derartigen Verfahren ist es jedoch nötig, an
schließend die Di- oder Trialkylphosphate wieder aus der
Lösung zu entfernen, was mit erheblichem Aufwand und meist
auch erheblichen Verlusten an Proteinen verbunden ist.
Die Erfindung hat sich somit zunächst die Aufgabe ge
stellt, Di- und Trialkylphosphate aus biologischen Flüs
sigkeiten, insbesondere aus proteinhaltigen biologischen
Flüssigkeiten abzutrennen, ohne dabei die Proteine zu
denaturieren und relativ hohe Ausbeuteverluste an Pro
teinen in Kauf nehmen zu müssen.
Es wurde jetzt gefunden, daß diese Aufgabe überraschend
einfach gelöst werden kann durch trägergebundene Dialk
oxyphosphorverbindungen, nämlich Alkylphosphate und Al
kylphosphonate der allgemeinen Formel I
Tr-Spac(-O)nPO(-OAlk)₂ (I)
in der Tr einen inerten Träger, Spac einen Spacer, n die
Zahlen 0 und 1 und Alk Alkylgruppen mit 1 bis 10 Kohlen
stoffatomen bedeuten.
Als Träger kommen insbesondere anorganische oder organi
sche Festkörper oder Gele in Frage, welche durch kova
lente Bindungen mit einem Spacer verknüpft werden können.
Als anorganische Träger kommen beispielsweise in Frage
Gläser, Kieselsäuren, Aluminiumhydroxide und sonstige
inerte anorganische Träger, wie sie auch für trägergebun
dene Enzyme zur Anwendung kommen. Als organische Träger
kommen wiederum alle üblicherweise eingesetzten inerten
Träger in Frage insbesondere vernetzte und unvernetzte
polymere Kohlehydrate, wie Oellulosen, Dextrane, Agaro
sen, Polyacrylate und Copolymerisate. Besonders bevorzugt
sind SepharoseR, Sephacel, FractogelR und SephadexR, und
deren bereits aktivierte Abkömmlinge, die bereits einen
Spacer enthalten, wie z. B. Brom-acetamido-alkyl-derivate,
CNBr-Sepharose oder O-Bromacetyl-N-Hydroxy-Succinimid.
Als Spacer werden im allgemeinen geradkettige Alkylgrup
pen gewählt mit 2 bis 8 Kohlenstoffatomen, die an beiden
Enden kovalente Bindungen eingehen können. Besonders
bevorzugt werden Spacer mit 6 Kohlenstoffatomen; darüber
hinaus können auch alle übrigen bekannten Spacer einge
setzt werden, die insbesondere für trägergebundene Enzyme
entwickelt worden sind.
Die Alkylgruppen der Phosphorverbindungen können je nach
Verwendungszweck zwischen 1 und 10 Kohlenstoffatomen auf
weisen. Bevorzugt werden solche mit 3 bis 6 Kohlenstoff
atomen. Für die Entfernung von Viren mit einer Phospho
lipidhülle, wie Hepatitis B hat sich insbesondere eine
Kettenlänge von 4 Kohlenstoffatomen besonders bewährt.
Ein Verfahren zur Entfernung von Viren aus biologischen
Flüssigkeiten ist von der Anmelderin als Patentanmeldung
mit gleichem Anmeldetag beim DPA eingereicht worden.
Die weiteren Untersuchungen dieser neuen trägergebundenen
Dialkoxyphosphorverbindungen hat ergeben, daß durch Vari
ationen des Trägers, des Spacers und der Länge der Alkyl
gruppen durchaus unterschiedliche Ergebnisse erzielt
werden können. So ist einerseits darauf zu achten, daß
der Träger nicht nur gegenüber den Proteinen inert ist,
sondern auch nicht dazu neigt, diese unverhältnismäßig
hoch zu adsorbieren, wodurch es zu unerwünschten Verlu
sten kommen kann. Das gleiche gilt für die Länge des
Spacers. Zur Auf- und Abtrennung von lipophilen Substan
zen können vielfach schon sehr kurze Spacer ausreichen.
Insbesondere um die Phospholipidhülle von Hepatitis B
Viren zu zerstören, ist eine Mindestlänge des Spacers er
forderlich. Zu lange Spacer wiederum führen zu geringerer
Effizienz der trägergebundenen Dialkoxyphosphorverbin
dungen. Für diesen Zweck haben sich daher Spacer-Längen
von 6 Kohlenstoffatomen als optimal erwiesen.
Die kovalente Kupplung des Phosphoratoms mit dem Spacer
kann unter Zuhilfenahme übliche Kupplungsreagentien er
folgen, wie beispielsweise Oxiranen, Epoxiden, Carbodi
imiden. Während bei der Verwendung von Di- und Trialkyl
phosphaten nach dem Stand der Technik bisher nur Ester
der Phosphorsäure zur Anwendung gekommen sind, können
erfindungsgemäß auch die Alkylphosphonate über einen
Spacer an Träger gebunden werden. Diese trägergebundenen
Alkylphosphonate weisen ebenfalls hervorragende Eigen
schaften auf bezüglich der Auf- und Abtrennung von lipo
philen Substanzen sowie der Inaktivierung und der Ent
fernung von Viren mit einer Phospholipidhülle.
Es hat sich weiterhin gezeigt, daß es mit Hilfe der trä
gergebundenen Dialkoxyphosphorverbindungen möglich ist,
aus biologischen Flüssigkeiten mit hoher Effizienz Viren
zu entfernen, ohne die gewünschten Proteine zu denatu
rieren. Bei Auswahl geeigneter Träger und Spacer ist es
sogar möglich, die Ausbeuteverluste an gewünschten Pro
teinen extrem gering zu halten. Weiterhin wurde gefunden,
daß es mit Hilfe der erfindungsgemäßen trägergebundenen
Dialkoxyphosphorverbindungen möglich ist, lipophile Sub
stanzen von hydrophilen Substanzen abzutrennen und sogar
Substanzen mit gradueller Abstufung der Lipophilität
chromatographisch aufzutrennen, so daß mit ihnen neue
Formen der Affinitätschromatographie möglich sind.
Zur Herstellung der Di-n-butyl aktivierten Matrix wird
zunächst beispielhaft N-ethyl-N′-(3-dimethyl-aminopro
pyl) -carbodiimid Hydrochlorid oder auch N-cyclo-hexyl-
N′-2-(4′-methylmorpholinium)-ethyl carbodiimid-p-Toluol
sulfonat mit Di-n-butylphosphat in einem geeigneten
Lösungsmittel, z. B. 1,2 Dimethoxy-Ethan bei 0-8°C umge
setzt. Die Kopplung an die Gel-Matrix, die entweder eine
Hydroxyl- oder eine Amino-Gruppe als funktionelle Gruppe
enthält, wird durch Einrühren der jeweiligen Gelmatrix
bei pH 6,0-7,0 unter ständigem weiteren Rühren bei 4°C
erreicht. Die oftmals zu beobachtende pH-Absenkung in der
ersten Stunde wird vorzugsweise verhindert durch Zugabe
von Thionyl- oder Sulfurylchlorid (SOCl2, SO2Cl2) in
Gegenwart von Pyridin. Das Reaktionsgemisch wird unter
ständiger Kontrolle des pH-Wertes für weitere 3 Stunden
bei einem pH-Wert von 6,0 und einer Temperatur von 4°C
gerührt. Das so erhaltene Produkt wird bei derselben
Temperatur ausgiebig mit 0,1 M NaOH, dann mit Wasser und
anschließend mit 0,1 M HCl gewaschen. Organische Lösungs
mittel, wie 1,4-Dioxan, Ethylen-Glykole, Aceton etc.
werden durch extensives Waschen mit Wasser bei 4°C oder
durch Dialyse entfernt.
Um den Spacerarm zu verlängern und je nach den experi
mentellen Erfordernissen variabel zu halten, wird durch
Carbodiimid-Kupplung die freie Amino- oder Hydroxyl-Grup
pe, z. B. an der Sepharose (Agarose-Bett) oder Dextran
gelen (Sephadex) sowie vernetzten (cross-linked) Dextran-
Gelen, z. B. Sephacryl, Fractogel entsprechend verlängert.
Die Matrix enthält einen Spacerarm von 6-CH2-Gruppen, am
freien endständigen Ende eine primäre Aminogruppe, welche
dann mit dem entsprechenden Carbodiimid (EDC) gekoppelt
wird, so daß die Di-n-butylphosphat-Gruppe frei und end
ständig vorliegt.
Eine vorzugsweise Ausführung zur Herstellung der akti
vierten Agarose oder eines Dextrangeles besteht in der
üblichen Form der CNBr-aktivierten Matrizen und deren an
schließendem Umsatz mit 1,4 bis 1,10 Di-aminen nach der
Cyanbromid-Methode.
Überraschenderweise wurde nunmehr gefunden, daß bei Aga
rose-Gelen im Durchschnitt 20 µmol Di-n-butylphosphat pro
gl geschwollenem Gel kovalent gebunden sind, während bei
Dextrangelen im Durchschnitt 0,1 bis 0,15 mmol Di-n-butyl
phosphat-Gruppen pro gl hydratisiertem Gel gefunden wur
den. Für vernetzte Dextrangele, z. B. Sephacryl, wurden
im Durchschnitt 0,12 mmol Di-n-butylphosphat-Gruppen pro
g geschwollenem Gel bestimmt.
Eine weitere Möglichkeit zur kovalenten Bindung von Di-n-
butylphosphat an eine Säulenmatrix liefert die Reaktion
von epoxy-aktivierten Agarose-Gelen oder Dextranen mit
Di-n-butylphosphat. Zu diesem Zwecke werden Agarose- oder
Dextrangele mit 1,4- bis -(2,3-epoxypropoxy-)-butan umge
setzt. Dabei werden, wie bekannt, freie Oxiran-Gruppen
mit hydroxylgruppen-haltigen Reagenzien umgesetzt. Durch
Reaktion der freien Oxiran-Gruppierung mit Di-n-butyl
phosphat entsteht die durch Di-n-butylphosphat-Gruppen
beladene, erfindungsgemäß gewünschte neue Säulenmatrix
zur Inaktivierung von PL-Viren. Für Agarose-Gele wurde
eine kovalente Besetzungsdichte von 25 µmol pro g
hydratisiertem Gel bestimmt. Die entsprechende Bestimmung
für nicht-vernetztes Dextrangel ergaben Werte zwischen
80 und 150 µmol pro g, für Fractogel im Durchschnitt von
10-100 µmol und für Sephacryl im Durchschnitt 90 µmol
pro g geschwollenem Gel.
Zur quantitativen Bestimmung der reaktiven Di-n-butyl
phosphat-Gruppe wird das Gel zunächst hydrolisiert, an
schließend mit konzentrierter Salzsäure erwärmt und die
freie Phosphorsäure titrimetrisch bestimmt.
Eine andere Methode zu quantitativen Bestimmung der Di-n-
butylphosphat-Gruppe besteht in der Hydrolyse durch Natri
ummethylat in Methanol mit anschließender Absenkung des
pH-Wertes durch Salzsäure und Bestimmung der Phosphor
säure als auch des freigesetzten Diamins (NH2-(CH2)n-NH2)
durch Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC).
In den nachfolgenden Beispielen sind einige bevorzugte
Ausführungsformen der erfindungsgemäßen trägergebundenen
Dialkoxyphosphorverbindungen bei ihrer Herstellung und
ihrer Verwendung beschrieben:
21,0 g Di-n-butylphosphat werden in 100 ml 1,2-Dimeth
oxyethan bei 4°C gelöst. Unter stetigem Rühren werden
18,0 g N-ethyl-N′-(3-dimethyl-aminopropyl) carbodiimid,
das in 75 bis 100 ml Wasser gelöst ist, tropfenweise zu
der Lösung gegeben, bis eine Konzentration von 0,1 mol/l
Carbodiimid erreicht ist. Der pH-Wert wird auf pH 5,1 bis
5,5 konstant gehalten. Die milchige Suspension wird mit
1,4-Dioxan (10% w/w) versetzt, um die Löslichkeit von
Di-n-butylphosphat zu erhöhen.
Es empfiehlt sich, das Gel, z. B. Fractogel, Agarose oder
Sephadex unter kräftigem Rühren, vorzugsweise in einem
Volumenverhältnis von Flüssigkeit (Suspension) zu Gel wie
2 : 1 (4°C, pH 5,5-6,0, maximal 6,0) mit Thionylchlorid
in Pyridin (Gewichtsverhältnis 1 : 1) zu versetzen, um
den pH-Wert während der Kupplungsreaktion möglichst kon
stant auf pH = 6,0 zu halten. Die Lösung von Di-n-butyl
phosphat und N-ethyl-N′-(3-dimethyl-aminopropyl) carbo
diimid wird dann unter stetem Rühren tropfenweise zur
Suspension zugegeben. Der beobachtbare pH-Abfall wird in
den ersten 30 Minuten durch Pyridin/SOCl2 korrigiert
(pH = 6,0, 4°C). Die Reaktion ist nach vier Stunden bei
4°C beendet.
Um aktivierte Sepharose 6 B mit einem hydrophoben Spacer
arm an (CH2) 4 herzustellen, verfährt man wie unter 1
beschrieben, läßt jedoch zuerst das Gel mit z. B. 1,4 bis
(2,3-epoxypropyloxy) butan, bei 20°C mit einem 10%igen
(w/w) Überschuß des Epoxides reagieren. Die Aufarbeitung
gestaltet sich ebenso wie unter 1 ausgeführt.
Im Unterschied zum mehr hydrophoben Spacerarm liegt in
diesem Fall ein Gemisch von hydrophilen in hydrophoben
Bereichen innerhalb des Spacerarms vor:
Die Verlängerung der (CH2)n-Gruppe kann u. a. durch Kon
densation mit n-Dialkyl-diolen geschehen, die am Ende
eine Epoxy-Gruppe enthalten. Die Beladungsdichte liegt
bei einer Kettenlänge von n = 6 bei 120 µmol/g geschwol
lenem Gel im Fall von Sephadex G 100, oder 25 bis
30 µmol/g geschwollenem Gel bei Sepharose 6 B und 15 bis
18 µmol/g geschwollenem Gel bei Fractogel.
Eine Erhöhung der Beladung um das fünffache, bis zu
150 µmol/g geschwollenem Gel kann durch Hinzunahme des
Kupplungsreagenzes erreicht werden.
Das Gel wird in einer Bowl-Zentrifuge oder in einer RC5B
(Dupont) bei 2000 UpM abzentrifugiert, und der Überstand
verworfen. Der Rückstand wird mehrmals mit destilliertem
Wasser gewaschen, abgenutscht und anschließend lyophi
lisiert.
Die Beladungsdichte des Gels mit dem Ligand einschließ
lich der Di-n-butylphosphat-Gruppe wurde durch Titration
der o-Phosphorsäure nach Hydrolyse mit konzentrierter
Salzsäure bestimmt. Alternativ dazu ist auch eine direkte
Bestimmung durch HPLC-Chromatographie (Bondepak I 75,
isotaktisch) des mit Di-n-butylphosphat beladenen Spacer
arms, z. B. Tr-Spac(-O)nPO(OC4H9)2 möglich.
Die Beladungsdichte liegt bei Sephadex G 100 oder
Agarose-Gelen in der Größenordnung von 25 µmol/g hydra
tisiertem Gel oder 25 µmol/g hydratisiertem Gel im Falle
von Agarose A 1,5 m. Fractogel-Präparationen haben im
Durchschnitt eine Beladungsdichte von 25 bis 30 µmol/g
geschwollenem Gel.
168 g Phosphoroxychlorid und 175 g n-Butanol (p.a) werden
in einem 1 Liter Rundkolben mit Rückflußkühler und Ther
mometer gemischt und mittels eines Heizpilzes auf 130 bis
140°C erwärmt. Die entstehende Salzsäure wird mit NaOH
aufgefangen. Die Reaktion ist nach 1 1/2 bis 2 Stunden
beendet. Der Kolbeninhalt wird im Vakuum bei 0,8 bis 1,0
T fraktioniert und die entsprechende Fraktion bei Kp 95
bis 97°C und 1,5 T aufgefangen und redestilliert.
Kp : 93-95°C / 1,5 T. Die Ausbeute beträgt ca. 190 g
entsprechend 80%.
Erwähnenswert ist, daß durch entsprechende Variation der
Molverhältnisse auch das n-Butylphosphorsäure-dichlorid
(Kp : 130°C, 760 T) erhalten werden kann.
Die CNBT aktivierte Agarose 2B wird wie unter 2 be
schrieben mit einem entsprechenden Spacerarm, z. B. mit
1,4-(2,3-epoxybutoxy)-Butan versehen und anschließend in
1 Liter Pyridin unter stetem Rühren die molare Menge von
Di-n-butylphosphorsäurechlorid gelöst und 22,6 g Dicyc
lohexylcarbodiimid hinzugesetzt werden. Nach 60 Stunden
bei 35°C wird vom Dicyclohexylharnstoff abfiltriert,
zunächst mit reichlich Wasser, dann mit reichlich Ether
gewaschen und anschließend mit 2 Liter 0,01 M Kalium
Phosphat-Pufferlösung vom pH 7,5 und 20°C gewaschen. Das
so hergestellte Gel bzw. die Gelmatrix wird in 0,001 M
Kalium-Phosphat-Pufferlösung bei pH 7,5 und 4°C in Gegen
wart von Natriumazid aufbewahrt.
Zu einer eisgekühlten Lösung von 15,0 g Phosphortrichlo
rid in 100 ml Benzol (Toluol) wird unter stetem Rühren
innerhalb von 3 Stunden eine Mischung von 24,5 g Di
methylanilin und 22 g n-Butylakohol zugetropft. Unter
Fortsetzen des Rührens werden nach weiteren 20 Minuten
12 g n-Butylalkohol (p.a.) in derselben Weise zugetropft.
Die Reaktionsmischung läßt man über Nacht bei 20°C
stehen, fügt 75 ml Wasser hinzu und wäscht die Benzol-
(Toluol-) Phase im Scheidetrichter mehrmals mit 50 ml
H2O, dann mit 5 M Ammoniak und anschließend mit 500 ml
Wasser aus. Nach dem Trocknen über wasserfreiem Natrium
sulfat bzw. Molekularsieben wird das Benzol (Toluol) im
Vakuum abgezogen. Das im Rückstand verbliebene Öl wird im
Hochvakuum bei 10-2 T und 70°C unter Stickstoffatmosphäre
destilliert. Zur Destillation wird das Produkt zunächst
mit Ammoniakgas gesättigt und in Gegenwart von 1% N-
methyl-morpholin destilliert. Das Di-n-butylphosphonat
destilliert bei 78°und 10-1 T über. 15 g Di-n-butyl
phosphonat werden in 100 ml Tetrachlorkohlenstoff gelöst
und bei -20°C langsam eine 1,0N Lösung von Chlor in
Tetrachlorkohlenstoff hinzugegeben. Es wird unter stetem
Rühren bei -20°C trockenes Stickstoffgas eingeleitet bis
keine Salzsäure mehr entweicht. Nach Verdampfen des Tetra
chlorkohlenstoffs bei 20°C destilliert das Säurechlorid
als hellgelbe Flüssigkeit bei 0,5 T über. Es wird sofort
in die Kopplungsreaktion eingesetzt.
2,5 g Di-n-butylphosphorsäurechlorid werden in 50 ml
Pyridin (90%) unter stetem Rühren bei 40°C in Gegenwart
von 6-Chlorhexanol und 10 ml Tri-butylamin gelöst. Unter
stetem Rühren und Herabsetzung der Temperatur auf 20°C
wird 1 g Gel (Fractogel, Sepharose 6B) eingerührt, und
der Brei 60 Stunden bei 20°C stehen gelassen. Danach wird
das Gel auf einer Nutsche mit mindestens 1 Liter Wasser
gewaschen, danach mit 2 Liter 0,001 M Kalium-Phosphat-
Pufferlösung bei pH 7,5 gespült. Das fertige Gel mit der
Phosphorsäure-Matrix wird in Gegenwart von Natriumazid in
0,001 M Kalium-Phosphat-Pufferlösung bei 4°C aufbewahrt.
Eine Mischung von 25 g 1,8-Chloroctan und 25,5 g Tri-n-
butylphosphit werden für 6 Stunden auf 100°C erhitzt.
Anschließend wird bei 150 bis 160°C und 10 T destilliert
und das übergehende 1-Chloroctyl-di-n-butylphosphonat in
70%iger Ausbeute aufgefangen.
Der Ester wird in 25 ml Pyridin (90%) in Gegenwart von
1 g Fractogel (Agarose 6B) bei 20°C unter stetem Rühren
an das Gel gekoppelt. Die Mischung wird 60 Stunden ste
hengelassen und anschließend auf der Nutsche mit 1 Liter
Wasser, dann mit 2 Litern 0,01 M Di-Kaliumhydrogenphosphat
bei pH 7,5 gewaschen. Das Gel wird in 0,001 M Di-Kalium
hydrogenphosphat bei pH 7,5 in Gegenwart von Natriumazid
bei 4°C aufbewahrt.
5 l Fractogel, beladen mit chemisch fixiertem Dibutyl
phosphat (50-1000 µmol/ml) werden in 0,15 mol/l NaCl
suspendiert und in eine Chromatographiesäule gefüllt, so
daß die Höhe des Gelbettes etwa gleich groß ist wie der
Durchmesser der Säule.
5 l Human-Citrat-Plasma werden filtriert (Porengröße
1 µm) und mit Herpes-Simplex-Viren (HSV) versetzt.
Das Plasma passiert anschließend bei Raumtemperatur das
Gelbett im Verlauf von 8 Stunden.
Danach ist kein virulentes HSV mehr nachweisbar.
Eine Chromatographiesäule mit Dibutylphosphat-beladenem
Fractogel wird vorbereitet wie unter 1 beschrieben.
50 l einer Faktor VIII-haltigen Lösung, die 120 µmol/l
NaCl, 10 mmol/l Na3-Citrat, 1 mmol/l CaCl2 und 120 mmol/l
Glycin enthält, werden filtriert (1 µm) und wie unter 1
mit HSV versetzt. Die Faktor VIII-Lösung passiert das
Gelbett im Verlaufe von 12 Stunden bei Raumtemperatur.
Danach ist kein virulentes HSV mehr nachweisbar.
Die im 1-Phasentest bestimmte Faktor VIII-Aktivität wird
durch diese Behandlung nicht beeinträchtigt.
5 l Fractogel, an dessen Oberfläche Dibutylphosphonat
über Spacer chemisch fixiert wurde (50-1000 µmol/ml
werden in einer temperierbaren Chromatographie-Säule
vorbereitet wie unter 1 beschrieben. Das Gelbett wir
mittels eines Ultrathermostaten auf +30°C gehalten.
5 l Human-Citrat-Plasma werden filtriert (Porengröße
1 µm) und mit Polioviren versetzt.
Das Plasma passiert anschließend das Gelbett im Verlaufe
von 6 Std. bei +30°C.
Danach ist kein virulentes Polio-Virus mehr nachweisbar.
5 l Dibutylphosphat-beladenes Fractogel werden vorbe
reitet wie unter 1.
50 l Human-Citrat Plasma werden filtriert (Porengröße
1 µm) und mit HSV versetzt.
Das Plasma passiert anschließend das Gelbett im Verlaufe
von 24 Std. bei Raumtemperatur.
Danach ist kein virulentes HSV mehr nachweisbar.
Claims (6)
1. Trägergebundene Dialkoxyphosphorverbindungen der all
gemeinen Formel I
Tr-Spac(-O)n-PO(OAlk)₂ (I)in der Tr einen inerten Träger, Spac einen Spacer, n
die Zahlen 0 und 1 und Alk Alkylgruppen mit 1 bis 10
Kohlenstoffatomen bedeuten.
2. Trägergebundene Dialkoxyphosphorverbindungen gemäß
Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als inerter
Träger anorganische oder organische Festkörper oder
Gele verwendet werden, welche durch kovalente Bindun
gen mit einem Spacer verknüpft werden können.
3. Trägergebundene Dialkoxyphosphorverbindungen gemäß
Anspruch 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, daß als
Spacer geradkettige Alkylgruppen mit 3 bis 8 Kohlen
stoffatomen verwendet werden, die an beiden Enden ko
valent gebunden sind.
4. Trägergebundene Dialkoxyphosphorverbindungen gemäß
einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet,
daß die Alkylgruppen geradkettig sind und 3 bis 6
Kohlenstoffatome aufweisen.
5. Verfahren zur Herstellung von trägergebundenen Dialk
oxyphosphorverbindungen der allgemeinen Formel I, in
der Tr einen inerten Träger, Spac einen Spacer, n die
Zahlen 0 und 1 und Alk Alkylgruppen mit 1 bis 10 Koh
lenstoffatomen bedeuten, dadurch gekennzeichnet, daß
zunächst der Träger mit einem Ende des Spacers umge
setzt wird und dann das zweite Ende des Spacers mit
einer Dialkoxyphosphorverbindung verknüpft wird.
6. Verwendung von trägergebundenen Dialkoxyphosphorver
bindungen der allgemeinen Formel I zur Auftrennung
und/oder Abtrennung von lipophilen Komponenten einer
Lösung, insbesondere zur Inaktivierung und/oder Ent
fernung von Viren, insbesondere phospholipid-umhüll
ten Viren aus biologischen Flüssigkeiten, insbeson
dere proteinhaltigen Lösungen.
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