JPH01114757A - ラテックス凝集反応を検出する診断用試験スライドの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 この発明は、体液中の微量物質を免疫化学的反応を利用
して効率的に測定するための診断用試験スライドの製造
方法に関するものである。

〈従来の技術〉 抗原−抗体反応を利用した免疫化学的方法により、体液
（血液、尿等）中の微量物質を高感度に測定する方法は
、臨床検査の分野において特に有用性かあるので、最近
注目を集めている。

この免疫化学的方法は、−段重には抗原−抗体反応（抗
原あるいは抗体が感作されたポリスチレンラテックス粒
子と、検体中に含有される抗体あるいは抗原との間に生
じる抗原−抗体反応）によって生成するラテックス粒子
の凝集塊を肉眼で観察し、またはその凝集塊の濁度を分
光装百で測定することによって検体中に含有される微量
物質の濃度を測定する方法である。

その中でもスライド型試験板上で、ラテックス試薬と検
体とを一定時間混合しで放置した後、ラテックス粒子の
凝集状態を観察することにより該微量物質を検出する方
法は、試薬か安価でしかも迅速に検出できるため免疫血
清検査室等で汎用されている。

〈発明か解決しようとする問題点〉 しかし、この免疫化学的反応を単にスライド上でラテ・
ンクス試薬と検体とを滴下・混合しで行なうのでは、操
作が煩雑であるばかりでなく、試薬の一定量を精確に滴
下することが困難であるため得られる検査結果が不精確
となる欠点があった。

このような欠点を改良するために、特開昭５９−１００
８６３号公報のように、予めラテックス試薬を塗布した
診断用試験スライド及びその製造方法か開発されたが、
この発明を実施するには、特殊加工した試験紙（スライ
ド）が必要であり、更に塗布したラテックス試薬を固定
させるために凍結乾燥をしなければならず、従って製造
工程が煩雑であり、コストも高くなる欠点があった。

本発明者等は、スライド上にラテックス試薬を固定する
際の条件を種々検討した結果、コラーゲンまたは必要に
応じてコラーゲン及び塘頚の存在下にラテックス試薬を
乾燥させれば、乾燥温度が例えば室温であっても感度の
高い診断用試験スライドを製造することができることを
知り本発明を完成した。

〈問題を解決するための手段〉 すなわちこの発明は、スライドの表面に、次に記載する
（Ａ）及び（Ｂ）、更に必要に応じて（Ｃ）を付着させ
た後乾燥することによって、ラテックス試薬を安定化さ
せ、凍結乾燥等の特殊な乾燥方法によらなくでも簡単・
安価に製造できる診断用試験スライドの製造方法を提供
することを目的として開発したものである。

（Ａ）抗原または抗体を感作させたラテックス試薬 （Ｂ）コラーゲン分解物 （Ｃ）糖類 本発明において、ラテックス試薬とは抗原または抗体を
ポリスチレンラテックス等の懺粒子に感作させたものを
いう。

本願発明に使用するコラーゲン分解物は、ラテックス試
薬を安定化させ、スライド上にラテックス試薬ヲ固定す
る作用を有する。

コラーゲン分解物は分子量が１０万以下のものが、スラ
イドに付着させたときの乾燥性、検体を滴下したときの
溶解性、スライド板への親和性、測定値への影響、保存
安定性等に特に適している。１０万以上の分子が混在し
たコラーゲン分解物を使用すると、スライド上に検体を
添加したとき、ラテックス試薬の溶解′ｉが悪くなるの
で、迅速性を必要とするスライド凝集反応の測定系には
好ましくない影響を与える。

本願発明に使用するコラーゲン分解物の使用量は、スラ
イド上に付着（塗布）させるときの濃度が５〜５０重量
％の範囲である。

本願発明に使用する糖類は、はぼコラーゲンと同様な目
的で使用され、具体的には蔗糖、乳糖、デキストリシ等
が適しており、その使用量はスライド上に付Ｍ（塗布）
させるときの濃度で１〜５重量％である。

本願発明に使用するスライドの材質は特に限定しないか
、従来のガラス製試験板より紙製の試験板の方か、洗浄
工程を省くことかでき、焼却等の処理によりウィルス等
の院内感染を回避することができ便利である。

本願発明に使用する抗原または抗体を感作させたラテッ
クス試薬（粒子）の作製方法は、従来公知の方法による
。

本願発明に係る抗原または抗体のラテックス試薬、コラ
ーゲン分解物、糖類等をスライドに付着させるには、通
常はこれらの溶液（混合物）を塗布した債、室温に放置
しで乾燥させる方法が採られるか、この方法に限定され
るものではない。

スライドを乾燥させる温度は、抗原を感作させた場合で
も、また抗体（ポリクローナル抗体、またはモノクロー
ナル抗体）を感作させた場合でも６０°Ｃ以下か望まし
い。８０’Ｃ以上で乾燥するとコラーゲン分解物か熱に
より変性されラテックス試薬の溶解性か悪くなりかつ測
定系に好ましくない影響を与える２乾燥に用する時間は
、２５〜６０　′Ｇでは１５〜２４時間、８０℃で約０
．５時間である。

本願発明により製造された診断用試験スライドは、血液
尿等の体液中に含有されでいる微量物質、すなわちベブ
タイトホルモン類、ステロイドホルモン類、蛋白質等の
広範囲の微量物質の検出・測定に利用できる。

〈実施例］〉 （１）ヒトフィブリン分解産物（以下ＦＤＰという）検
出用スライドの製造 ＦＤＰの抗ＦＤＰ抗体感作ラテックス試薬は次の方法に
より調製した。

すなわち、Ｆ（ａｂ′）２のグリシン緩衝溶液（濃度１
ｍｇ／ｍｎ）１０ｍ（ｌへ、平均粒系０゜２２ｕｍのポ
リスチレンラテックス（ダウ・ケミカル社製、固形分濃
度、１０重盪％）ｌｒｎβを加え、室温で、６０分攪拌
した後、２〜４°Ｃの冷却下に１７０００ｒｐｍ、１０
分間遠心分Ｍを行なう。分離した抗ＦＤＰ抗体感作ラテ
ックス粒子を牛血清アルブミン溶液（濃ｇ：ｏ、２重量
％）５ｍβに懸濁し、室温で３０分間攪拌した後、２〜
４℃の冷却下に１７０００ｒｐｍ、１０分間遠心分Ｍを
行なう。分離した感作ラッテクス粒子をグリシン緩衝液
５ｍβに懸濁し、感作ラッテクス粒子濃度か２重量％と
なるようにする０次にこれにコラーゲン分解物溶液（濃
度：２５重量％）５ｍβを添加し、感作ラテツクス粒子
濃度が１重量％の抗ＦＤＰ抗体感作ラテックス試薬とす
る。

得られたラテックス試薬をスライド型試験板（紙）へ１
回の使用量分（５０±３μρ）だけ精確に塗布し、−晩
室温で自然乾燥してＦＤＰ模出用（診断用試験）スライ
ドを得た。

（２）ＦＤＰ検出用スライドの試験側 前記ＦＤＰＳ出用スライドの表面にＦＤＰの検体５０μ
ρを添加し、ラッテクス試薬とよく混合し、２分間放置
して観察したところ、ＦＤＰｌｕｑ　／　ｍβの濃度で
凝集反応を示した。

（３）前記ＦＤＰ検出用スライドを室温及び３７℃で６
週間保存しでも検出感度は低下しなかった。

〈実施例２〉 （１）リウマチ因子検出用スライドの製造ヒトグロブリ
ン−グリシン緩衝液（γグロブリン濃度１０ｍｑ／ｍＡ
、ｐＨ９，６）１０ｍＡへ、平均粒系０．３３ｕｍのポ
リスチレンラテックス（ダウ・ケミカル社製、固形分濃
度、１０重１％）１ｍｌを加え、６０℃で、３０分間加
温した債、２〜４°Ｃの冷却下に１７０００ｒｐｍ、１
０分間遠心分離を行なう。分離した熱変性γグロブリン
感作ラテツクス粒子を０．２重量％の牛血清アルブミン
を含むグリシン緩衝液（ｐＨ９，６）５ｍｌに懸濁し、
室温で３ｏ分間攪拌した後、２〜４℃の冷却下に１７０
００ｒｐｍ、１０分間遠心分Ｍを行なう０分離した感作
ラッテクス粒子をグリシン緩衝液（ｐＨ９，６）５ｍｌ
に懸濁し、リウマチ因子検出用感作ラッテクス粒子濃度
が２重量％となるようにする０次に、これにコラーゲン
分解物溶液（Ｊ度、１０重量％）５ｍρを添加し、感作
ラテツクス粒子濃度が１重量％のリウマチ因子検出用ラ
テックス試薬を調製する。

得られたラテックス試薬をスライド型試験板（紙）へ１
回の使用量分（５０±３日β）だけ精確に塗布し、−晩
室温で自然乾燥してリウマチ因子検出用（診断用試験）
スライドを得た。

（２）リウマチ因子検出用スライドの試験側前記リウマ
チ因子検出用スライドの表面リウマチの検体５０ｕβを
添加し、ラッテクス試薬とよく混合し、２分間放置して
観察したところ、ＷＨＯ単位１０ＩＵ／ｍβの存在で凝
集反応を示した。

（３）前記リウマチ因子検出用スライドを室温及び３７
℃で６週間保存しても検出感度は低下しなかった。

〈発明の効果〉 以上のように、この発明に係る診断用試験スライドの製
造方法によれば、抗原または抗体のラテックス試薬ヘコ
ラーゲン分解物を添加するだけで、特殊なスライド及び
特殊な乾燥工程を必要とせず、しかも検出効率の高い診
断用試験スライドを簡単かつ安価に製造することかでき
るという効果を有する。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）スライドの表面に、次に記載する（Ａ）及び（Ｂ
   ）、更に必要に応じて（Ｃ）を付着させた後乾燥するこ
   とを特徴とする診断用試験スライドの製造方法。 （Ａ）抗原または抗体を感作させたラテックス試薬 （Ｂ）コラーゲン分解物 （Ｃ）糖類
2. （２）コラーゲン分解物の分子量が、１０万以下である
   特許請求の範囲第１項記載の診断用試験スライドの製造
   方法。