JPH01104165A - 安定なα−1,6−グルコシダーゼの生産法 - Google Patents
安定なα−1,6−グルコシダーゼの生産法Info
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- JPH01104165A JPH01104165A JP62262300A JP26230087A JPH01104165A JP H01104165 A JPH01104165 A JP H01104165A JP 62262300 A JP62262300 A JP 62262300A JP 26230087 A JP26230087 A JP 26230087A JP H01104165 A JPH01104165 A JP H01104165A
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Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は安定なα−1,6−グルコシダーゼの生産法に
関するものである。
関するものである。
(従来の技術)
α−1,6−グルコシダーゼは澱粉またはその派生物中
のα−1,6−グルコシド結合あるいは(および)プル
ランのα−1,6−グルコシド結合などを加水分解する
酵素の総称であり、その基質特異性の差からプルラナー
ゼ、あるいはインアミラーゼと呼ばれる酵素がある。
のα−1,6−グルコシド結合あるいは(および)プル
ランのα−1,6−グルコシド結合などを加水分解する
酵素の総称であり、その基質特異性の差からプルラナー
ゼ、あるいはインアミラーゼと呼ばれる酵素がある。
α−1,sニゲルコシ7゛−ゼはβ−アミラーゼと:j
i井川し用、澱粉からマルトースを収量よく製造す、″
るのに使用したり、また、酵素法による澱粉からのグル
コースの製造において、グルコアミラーゼと併mして、
グルコースを増収する目的に使用されている。
i井川し用、澱粉からマルトースを収量よく製造す、″
るのに使用したり、また、酵素法による澱粉からのグル
コースの製造において、グルコアミラーゼと併mして、
グルコースを増収する目的に使用されている。
(発lす1が解決しようとする問題点)α−1,6−グ
ルコシダーゼは、バシルス属、クレブシラ属、シュード
モナス属など、種々の細菌や、ストレプトマイセス属な
どの放線菌により生産されることが知られているが、一
部の微生物の生産するものを除き、一般に、耐酸性や耐
熱性に劣ることが問題であった。特に、本酵素をグルコ
アミラーゼと併用する場合、グルコアミラーゼは、工業
的には、pll、i〜5、温度約60℃で2〜3日間使
用されるため、このような酸性と高温で長時間、活性を
保持できるプルラナーゼは少なく、これまで、パシルス
・アシドプルリティカス(Ilacillus aci
dopullulyticus)のプルラナーゼが知ら
れているのみである(特公昭62−25036 はか)
。
ルコシダーゼは、バシルス属、クレブシラ属、シュード
モナス属など、種々の細菌や、ストレプトマイセス属な
どの放線菌により生産されることが知られているが、一
部の微生物の生産するものを除き、一般に、耐酸性や耐
熱性に劣ることが問題であった。特に、本酵素をグルコ
アミラーゼと併用する場合、グルコアミラーゼは、工業
的には、pll、i〜5、温度約60℃で2〜3日間使
用されるため、このような酸性と高温で長時間、活性を
保持できるプルラナーゼは少なく、これまで、パシルス
・アシドプルリティカス(Ilacillus aci
dopullulyticus)のプルラナーゼが知ら
れているのみである(特公昭62−25036 はか)
。
シダーゼの安定化法について、鋭意、研究を行ってきた
結果、α−1,6−グルコシダーゼを生産する微生物を
、アルミニウム塩を含む培地で培養すると、安定性の向
上したα−1,6−グルコシダーゼが得られることを認
めた。本発明はこの知見に基づいてなされたものである
。
結果、α−1,6−グルコシダーゼを生産する微生物を
、アルミニウム塩を含む培地で培養すると、安定性の向
上したα−1,6−グルコシダーゼが得られることを認
めた。本発明はこの知見に基づいてなされたものである
。
すなわち、本発明は、α−1,6−グルコシダーゼを生
産する微生物をアルミニウム塩を含む培地で培養するこ
とを特徴とする安定なα−1,6−グルコシダーゼの生
産法に関するものである。
産する微生物をアルミニウム塩を含む培地で培養するこ
とを特徴とする安定なα−1,6−グルコシダーゼの生
産法に関するものである。
以下に、本発明の内容を更に具体的に説明する。
本発明において使用されるアルミニウム塩としては、例
えば、塩化アルミニウム、硫酸アルミニラ、硫酸アルミ
ニウムアンモニウム、硝酸アルミニウム、硫酸アルミニ
ウム カリウムなどの無機酸塩のほか、酢酸アルミニウ
ム、乳酸アルミニウムなどの有機酸塩など、通常、水溶
性の塩が挙げられるが、水酸化アルミニウム、燐酸アル
ミニ(ニウムなど水に不溶性または難溶性の塩も使用す
る”ことができる。
えば、塩化アルミニウム、硫酸アルミニラ、硫酸アルミ
ニウムアンモニウム、硝酸アルミニウム、硫酸アルミニ
ウム カリウムなどの無機酸塩のほか、酢酸アルミニウ
ム、乳酸アルミニウムなどの有機酸塩など、通常、水溶
性の塩が挙げられるが、水酸化アルミニウム、燐酸アル
ミニ(ニウムなど水に不溶性または難溶性の塩も使用す
る”ことができる。
(発明の効果)
アルミニウム塩として、例えば、塩化アルミニウムや硫
酸アルミニウムアンモニウムを使用する場合、培地に添
加される濃度は、通常、1X10−’ 〜lXl0−’
モ、ル、望ましくは、lXl0−’〜5XIO−’モル
程Ifである。例えば、バシルス・ズプチルスの生産す
るプルラナーゼについて、1XIO−’モルの塩化アル
ミニウムを添加した)’7Ti地で培養して得られる酵
素は無添加の培地から得られる酵素に比べ、最Jpnと
して、2〜3°C高(、対照酵素を、5%プルランを基
質として、り+14.5、温度60℃で作用させたとき
、1時間以内に失活してしまうのに対し、アルミニラl
−塩の存在下で培養して得られた酵素は少なくとも3日
間活性を保持した。本発明はバシルス属、クレプシラ属
などの細菌、ストレプトマイセス属放線菌など、種々の
微生物の生産するα−1,6−グルコシダーゼに適用す
ることができる。例えば、α−ズブチリス(Bacil
lus 5ubLilis)、バシルス・セレウス・ヴ
アリエークス・ミコイデス(Bacilluscere
us var、Bcoides)などは好適な微生物で
あるが、本発明はこれらの微生物だけに限定されるもの
でない。
酸アルミニウムアンモニウムを使用する場合、培地に添
加される濃度は、通常、1X10−’ 〜lXl0−’
モ、ル、望ましくは、lXl0−’〜5XIO−’モル
程Ifである。例えば、バシルス・ズプチルスの生産す
るプルラナーゼについて、1XIO−’モルの塩化アル
ミニウムを添加した)’7Ti地で培養して得られる酵
素は無添加の培地から得られる酵素に比べ、最Jpnと
して、2〜3°C高(、対照酵素を、5%プルランを基
質として、り+14.5、温度60℃で作用させたとき
、1時間以内に失活してしまうのに対し、アルミニラl
−塩の存在下で培養して得られた酵素は少なくとも3日
間活性を保持した。本発明はバシルス属、クレプシラ属
などの細菌、ストレプトマイセス属放線菌など、種々の
微生物の生産するα−1,6−グルコシダーゼに適用す
ることができる。例えば、α−ズブチリス(Bacil
lus 5ubLilis)、バシルス・セレウス・ヴ
アリエークス・ミコイデス(Bacilluscere
us var、Bcoides)などは好適な微生物で
あるが、本発明はこれらの微生物だけに限定されるもの
でない。
以下に、実施例により本発明の詳細な説明する。
実施例 1
コーン・ステイープ・リカーlO%、乳糖2%、燐酸二
カリ0.3%、硫酸マグネシウム(7水塩)0.1%、
硝酸ナトリウム0.25%、ライ−7600,3%、硫
酸銅5X10−’M、塩化マンガフ2.5X10−”M
、塩化力/l/ シ’7ム1x10−3M、硫酸亜鉛l
Xl0−’M%硫酸鉄l×10−’Mからなる培地(p
H7)を基本培地とし、これに塩化アルミニウムを5X
10−’〜1x10−’M不添加た培地20Illlを
200m1容三角フラスコに入れ、常法により殺菌後、
パシルスズブチリスTυ(Bacillus 5ubt
ilis TU)F E RMar’ −ファンチュー
ブに入れ蒸溜水に対し一夜透析したもの・を酵素液とし
て使用した。
カリ0.3%、硫酸マグネシウム(7水塩)0.1%、
硝酸ナトリウム0.25%、ライ−7600,3%、硫
酸銅5X10−’M、塩化マンガフ2.5X10−”M
、塩化力/l/ シ’7ム1x10−3M、硫酸亜鉛l
Xl0−’M%硫酸鉄l×10−’Mからなる培地(p
H7)を基本培地とし、これに塩化アルミニウムを5X
10−’〜1x10−’M不添加た培地20Illlを
200m1容三角フラスコに入れ、常法により殺菌後、
パシルスズブチリスTυ(Bacillus 5ubt
ilis TU)F E RMar’ −ファンチュー
ブに入れ蒸溜水に対し一夜透析したもの・を酵素液とし
て使用した。
各酵素液0.05単位を、プルラン5%、酢酸緩衝液(
pH14,5)O,OIM、塩化カルシウム0.01M
、全1d1ml−からなる反応液で、60℃で反応させ
た。■、5.20および66時間目に一定量をとり、生
成した還元糖(マルトトリオース)をソモギー・ネルラ
ン法により、グルコースとして定量した。得られた結果
を第1表に示す。
pH14,5)O,OIM、塩化カルシウム0.01M
、全1d1ml−からなる反応液で、60℃で反応させ
た。■、5.20および66時間目に一定量をとり、生
成した還元糖(マルトトリオース)をソモギー・ネルラ
ン法により、グルコースとして定量した。得られた結果
を第1表に示す。
第 1 表
培地に添加した 生成還元糖(mg/m1)AIC
1a濃度(M) 1 5 20 66(時
間)0 4.21 5.46 5.47 6.
115XIO−’ 4.73 5.87 6.1
8 6.607.5XIO−Ii5.37 7.27
7.41 7.63IXIO−’ 5.12 6
.7’9 7.36 8.14表から明らかなように、
塩化アルミニウムを、7.5X 10−’ 〜IX 1
0−’M不添加た培地でのようにして測定した。
1a濃度(M) 1 5 20 66(時
間)0 4.21 5.46 5.47 6.
115XIO−’ 4.73 5.87 6.1
8 6.607.5XIO−Ii5.37 7.27
7.41 7.63IXIO−’ 5.12 6
.7’9 7.36 8.14表から明らかなように、
塩化アルミニウムを、7.5X 10−’ 〜IX 1
0−’M不添加た培地でのようにして測定した。
0.1M酢酸緩衝液に溶解した2%プルラン液(all
5.0)0.5mlに適当itの酵素液を加え、蒸留
水で全ff11m1とし、40℃で反応させる。この条
件下で、1分間に1マイクロモルのグルコースに相当す
る還元力を生成する酵素量を1単位とした。
5.0)0.5mlに適当itの酵素液を加え、蒸留
水で全ff11m1とし、40℃で反応させる。この条
件下で、1分間に1マイクロモルのグルコースに相当す
る還元力を生成する酵素量を1単位とした。
実施例2
実施例1において、塩化アルミニウムの代わりに、硫酸
アルミニウムアンモニウムを添加した培地を使用し、実
施例1と同様にして酵素を調製し、これを用いてプルラ
ンの糖化を行った。得られた結果を第2表に示す。
アルミニウムアンモニウムを添加した培地を使用し、実
施例1と同様にして酵素を調製し、これを用いてプルラ
ンの糖化を行った。得られた結果を第2表に示す。
表から明らかなように、硫酸アルミニウムアンモニウム
を添加した培地で培養した酵素は、無添加の培地で培養
して得られる酵素よりも、安定性に優れていることがわ
かる。
を添加した培地で培養した酵素は、無添加の培地で培養
して得られる酵素よりも、安定性に優れていることがわ
かる。
第 2 表
0 2.824.615.74
3X 1G−’ 2.137.227.54実施例
3
3
Claims (1)
- α−1,6−グルコシダーゼを生産する微生物をアルミ
ニウム塩を含む培地で培養することを特徴とする安定な
α−1,6−グルコシダーゼの生産法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62262300A JPH01104165A (ja) | 1987-10-16 | 1987-10-16 | 安定なα−1,6−グルコシダーゼの生産法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62262300A JPH01104165A (ja) | 1987-10-16 | 1987-10-16 | 安定なα−1,6−グルコシダーゼの生産法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH01104165A true JPH01104165A (ja) | 1989-04-21 |
JPH0246195B2 JPH0246195B2 (ja) | 1990-10-15 |
Family
ID=17373870
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP62262300A Granted JPH01104165A (ja) | 1987-10-16 | 1987-10-16 | 安定なα−1,6−グルコシダーゼの生産法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH01104165A (ja) |
-
1987
- 1987-10-16 JP JP62262300A patent/JPH01104165A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0246195B2 (ja) | 1990-10-15 |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
EXPY | Cancellation because of completion of term |