JP7601560B2 - 強化されたアンチエイジング化粧品組成物 - Google Patents

Description

本発明は、（Ａ）１．０５～８倍、好ましくは１．１～４倍、より好ましくは１．２～２倍の濃縮度を有する濃縮カバノキ樹液と、（Ｂ）ポリペプチド、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、レチナール、パルミチン酸レチニル、トコフェロール、ユビキノン及びアデノシンから選択される１つ又は２つ以上の物質とを含む、強化されたアンチエイジング化粧品組成物に関する。

カバノキはカバノキ科の落葉樹であり、現在世界中に約１００種が存在し、主に北部温帯及び冷温帯に分布している。その中でも、中国には約２９種が存在し、主に北東部、北西部及び南西部に分布している。カバノキの木は主に、人の干渉がほとんどなく、産業汚染のない人里離れた山岳地帯で成長している。カバノキ樹液（バーチジュースとも呼ばれる）は、切断されたカバノキ樹皮又は穴を開けた幹からの新鮮な樹液である。これは無色又は淡黄色で、沈殿物も不純物もなく、淡いカバノキの芳香がある。カバノキ樹液は、糖、アミノ酸、ビタミン、ビオチン、サイトカイニン、微量ミネラル元素、芳香油、ベツリン及びサポニンなどの多数の化合物を含有し、優れたスキンケア及びアンチエイジング効果を有する。

皮膚の老化は、身体を保護及び調節する皮膚の能力の低下を意味し、したがって、内部及び外部環境の変化に適応できず、皮膚の色及び状態などの全体的な外観のいくらかの変化を示し、その結果、皮膚の弾力性の低下又は消失、皮膚のたるみ、しわの増加、乾燥肌、菲薄化、容易な落屑、かゆみ、くすんだ肌色、つやのなさ、ならびに濃い斑点及びいぼの併発をもたらす。人口の高齢化及び生活水準の継続的な改善に伴い、消費者の抗しわに対する意識は高まり続けており、ますます多くの消費者が、若い外観を維持するための化粧品を使用したがっている。統計によると、アンチエイジング化粧品は、中国の化粧品市場で最も成長が早く、最も有望なカテゴリーになっている。

一態様では、本発明は、強化されたアンチエイジング化粧品組成物における、（Ａ）濃縮カバノキ樹液と（Ｂ）ポリペプチド、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、レチナール、パルミチン酸レチニル、トコフェロール、ユビキノン及びアデノシンから選択される１つ又は２つ以上の物質の組み合わせであって、濃縮カバノキ樹液が１．０５～８倍、好ましくは１．１～４倍、より好ましくは１．２～２倍の濃縮度を有する組み合わせの使用に関する。

別の態様では、本発明は、（Ａ）１．０５～８倍、好ましくは１．１～４倍、より好ましくは１．２～２倍の濃縮度を有する濃縮カバノキ樹液と、（Ｂ）ポリペプチド、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、レチナール、パルミチン酸レチニル、トコフェロール、ユビキノン及びアデノシンから選択される１つ又は２つ以上の物質とを含む、強化されたアンチエイジング化粧品組成物を提供する。

本発明によるアンチエイジング化粧品組成物は、細胞外マトリックス中のＩ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、ＶＩＩ型、ＸＶＩＩ型コラーゲン、エラスチン及びラミニンの合成を促進し、マトリックスメタロプロテイナーゼＭＭＰ－１の発現を低下させ、ヒアルロン酸の産生を促進し、表皮、真皮、及び真皮－表皮接合部の構造的完全性及び機能性を強化し、皮膚の弾力性を改善し、しわを減らすと同時に、皮膚のバリアを改善し、経表皮水分蒸散量（ｔｒａｎｓｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｗａｔｅｒ ｌｏｓｓ）を減らし、抗炎症及び鎮静化の効果を有し、それによって有意なアンチエイジング、特に抗しわ効果をもたらすことができる。

アンチエイジング化粧品組成物は、さらに添加される水を含まないが、組成物の成分の各々に本質的に含まれる水分を排除しない。

好ましい実施形態では、アンチエイジング化粧品組成物が、ＥＤＴＡ塩、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム及びグルコン酸等などのキレート剤を含まない。

本発明に関与するカバノキ樹液は、ベタラアルバ（Ｂｅｔａｌａａｌｂａ）、ヨーロッパダケカンバ（Ｂｅｔｕｌａ ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ）、ベチュラ・ペンデュラ（Ｂｅｔｕｌａ Ｐｅｎｄｕｌａ）及びシラカンバ（Ｂｅｔｕｌａ ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ）の４つの変種を含むカバノキ科（Ｂｅｔｕｌａｃｅａｅ）カバノキ属（Ｂｅｔｕｌａ）から得られる。カバノキ樹液は、雪が溶け始めてから木が葉を出すまで、カバノキの木の幹の基部に人工的に穴を開けて、ここから回収することによって得られる沈殿物も不純物もない無色透明で栄養価の高いカバノキ樹液である。カバノキ樹液は市販されており、そのまま使用されており（この場合、これはまた非濃縮カバノキ樹液、又はカバノキ樹液原液とも呼ばれる）、例えば、Ｄａｘｉｎｇａｎｌｉｎｇ Ｃｈａｏｙｕｅ Ｗｉｌｄ Ｂｅｒｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄから購入することができる。

本発明で使用される濃縮カバノキ樹液は、上記の市販のカバノキ樹液原液製品を濃縮することによって得られる。加熱濃縮、低温及び真空濃縮、ならびに膜濃縮等などの濃縮方法は、当技術分野で知られている。本発明では、濃縮が、好ましくは低温凍結濃縮又は膜濃縮プロセスによって行われる。例えば、市販のカバノキ樹液原液製品を低温乾燥装置に導入し、－４０～－７０℃に冷却し、低温及び真空濃縮プロセスのために０．１～３０Ｐａに真空引きして、１．０５～８倍の濃縮度を有する濃縮カバノキ樹液を得る。

本発明者らは、驚くべきことに、非濃縮カバノキ樹液原液と比較して、１．０５～８倍、好ましくは１．１～４倍、より好ましくは１．２～２倍の濃縮度を有するカバノキ樹液濃縮物とポリペプチド、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、レチナール、パルミチン酸レチニル、トコフェロール、ユビキノン及び／又はアデノシンの組み合わせが、化粧品組成物のアンチエイジング、特に抗しわ効果を有意に改善することができることを発見した。これは、濃縮カバノキ樹液とポリペプチド、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、レチナール、パルミチン酸レチニル、トコフェロール、ユビキノン及び／又はアデノシンの組み合わせが相乗効果をもたらすことを示している。

（Ａ）濃縮カバノキ樹液の含有量は、アンチエイジング化粧品組成物の総重量基準で約１８～９８重量％、好ましくは約２０～９５重量％、より好ましくは約２２～９２重量％、最も好ましくは約３０～９０重量％である。

成分（Ｂ）中のポリペプチドは、マトリックスタンパク質、特にコラーゲンの合成を促進することができる当技術分野で既知のものであり、エラスチン、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン及びフィブロネクチンの産生を増加させて抗しわ効果を提供することもできる。本発明で使用することができるポリペプチドの例としては、それだけに限らないが、ジペプチド－２、ジペプチド－４、トリペプチド－１、テトラペプチド－２１、ペンタペプチド－３、ヘキサペプチド－３、ヘキサペプチド－８、ヘキサペプチド－９、ヘキサペプチド－１０、パルミトイルジペプチド－５、パルミトイルジペプチド－７、パルミトイルトリペプチド－１、パルミトイルトリペプチド－５、パルミトイルテトラペプチド－３、パルミトイルテトラペプチド－７、パルミトイルペンタペプチド－３、パルミトイルペンタペプチド－４、パルミトイルヘキサペプチド－６、パルミトイルオリゴペプチド、アセチルテトラペプチド－３、アセチルテトラペプチド－５、アセチルテトラペプチド－９、アセチルペンタペプチド－３、アセチルヘキサペプチド－３、アセチルヘキサペプチド－８、アセチルオクタペプチド－１、カルノシン、銅ペプチド、オリゴペプチド－１、ミリストイルペンタペプチド－１１、ジペプチドジアミノブチロイルベンジルアミドジアセタート、デカルボキシカルノシンＨＣＬ、及びこれらの任意の組み合わせ、好ましくはパルミトイルトリペプチド－５、パルミトイルテトラペプチド－７、アセチルヘキサペプチド－３、ジペプチドジアミノブチロイルベンジルアミドジアセタート、パルミトイルオリゴペプチド、ヘキサペプチド－９、及びこれらの任意の組み合わせが挙げられる。ポリペプチドは、好ましくはパルミトイルトリペプチド－５、パルミトイルテトラペプチド－７、アセチルヘキサペプチド－３、ジペプチドジアミノブチロイルベンジルアミドジアセタート、パルミトイルオリゴペプチド、ヘキサペプチド－９、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。上記の物質は全て市販されている。

成分（Ｂ）中のヒアルロン酸ナトリウムの例としては、それだけに限らないが、高分子量ヒアルロン酸ナトリウム（１８００～２２００ＫＤａ）、中分子量ヒアルロン酸ナトリウム（１０００～１８００ＫＤａ）、低分子量ヒアルロン酸ナトリウム（１０～１０００ＫＤａ）、加水分解ヒアルロン酸ナトリウム（１～１０ＫＤａ）、及びアセチル化ヒアルロン酸ナトリウムの１つ又は複数が挙げられる。ヒアルロン酸ナトリウムは、当技術分野で既知の方法によって調製することができ、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムは、最初に、発酵法によって植物由来培地（ペプトン、グルコース等）から調製される。ヒアルロン酸ナトリウムも、例えばＨｕａｘｉ Ｆｕｒｕｉｄａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄから市販されている。

成分（Ｂ）中のレチノール、レチナール、パルミチン酸レチニル、トコフェロール、ユビキノン及びアデノシンも当技術分野で既知の成分であり、全て市販されている。

成分（Ｂ）の含有量は、アンチエイジング化粧品組成物の総重量基準で約０．００５～１０重量％、好ましくは約０．０１～８重量％、より好ましくは約０．１～６重量％、最も好ましくは約０．５～５重量％である。

上述の成分（Ａ）及び（Ｂ）に加えて、アンチエイジング化粧品組成物は、場合により（Ｃ）スキンケア化粧品で一般的に使用される成分を含んでもよい。例としては、それだけに限らないが、ビヒクル、有効成分、及び賦形剤が挙げられる。これらの成分は全て当技術分野で既知であり、当業者は必要に応じて成分（Ｃ）の種類及び量を選択することができる。例えば、成分（Ｃ）の含有量は、典型的にはアンチエイジング化粧品組成物の総重量基準で約０～７０重量％である。

ビヒクルは、希釈剤、分散剤、及び担体などの当技術分野で既知のものである。例としては、それだけに限らないが、エタノール、ジプロピレングリコール、及びブタンジオールが挙げられる。化粧品組成物中のビヒクルの含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｃ）の総重量基準で０．５～２０％である。

有効成分は、当技術分野で既知のものである。例としては、それだけに限らないが、皮膚軟化剤、保湿剤、及び他の抗しわ有効成分が挙げられる。

皮膚軟化剤の例としては、それだけに限らないが、オリーブ油、マカダミアナッツ油、スイートアーモンド油、グレープシード油、アボカド油、コーン油、ゴマ油、大豆油、ピーナッツ油、メドウフォーム種子油、ベニバナ種子油、イヌバラ（Ｒｏｓａ ｃａｎｉｎａ）果実油、アルガニア・スピノサ（Ａｒｇａｎｉａ ｓｐｉｎｏｓａ）核油、ホホバ（Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）種子油、ヒマワリ種子油、オオミテングヤシ（Ｍａｕｒｉｔｉａ ｆｌｅｘｕｏｓａ）果実油、スクアラン、パルミチン酸エチルヘキシル、ミリスチン酸イソプロピル、水素化ポリイソブチレン、イソセタン、イソドデカン、炭酸ジエチルヘキシル、炭酸ジオクチル、ラウロイルサルコシンイソプロピル、イソノナン酸イソノニル、水素化ポリデセン、トリエチルヘキサノイン、ヘキサン酸セチルエチル、ビス－ジエトキシジグリコールシクロヘキサン１，４－ジカルボキシラート、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、エルカ酸オレイル、オクチルドデカノールミリスタート、オクチルドデカノール、ポリジメチルシロキサン、オクチルポリメチルシロキサン、セチルジメチコン、シクロペンタジメチルシロキサンなどが挙げられる。固体皮膚軟化剤の例としては、それだけに限らないが、セチルアルコール、ステアリルアルコール、セテアリルアルコール、ベヘニルアルコール、スクアリルアルコール、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、蜜蝋、カンデリラ蝋、カルナウバ蝋、ラノリン、オゾケライト、ホホバ種子ワックス、パラフィンワックス、ミクロクリスタリンワックス、水添コメヌカロウ、水添ココグリセリル、ベヘン酸／エイコサン二酸グリセリル、ミリスチン酸ミリスチル、ビス－ジグリセリルポリアシルアジパート－２、ブチロスパーマム・パーキー（ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ ｐａｒｋｉｉ）（シアバター）、及びアストロカリウムムルムル（ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｍｕｒｕｍｕｒｕ）種子脂の１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中の皮膚軟化剤の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｃ）の総重量基準で１～５０％である。

保湿剤の例としては、それだけに限らないが、グリセロール、ジグリセロール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３－プロパンジオール、１，２－ペンタンジオール、ポリエチレングリコール－８、ポリエチレングリコール－３２、メチルグルセス－１０、メチルグルセス－２０、ＰＥＧ／ＰＰＧ－１７／６コポリマー、グリセレス－７、グリセレス－２６、グリセリルグルコシド、ＰＰＧ－１０メチルグルコースエーテル、ＰＰＧ－２０メチルグルコースエーテル、ＰＥＧ／ＰＰＧ／ポリブチレングリコール－８／５／３グリセロール、スクロース、トレハロース、ラムノース、マンノース、ラフィノース、ベタイン、エリスリトール、キシリトール、尿素、乳酸グリセレス－５、ヒアルロン酸ナトリウム、加水分解ヒアルロン酸ナトリウム、アセチル化ヒアルロン酸ナトリウム、ポリグルタミン酸ナトリウム、加水分解スクレロチウムガム、プルラン、トレメラム（ｔｒｅｍｅｌｌａｍ）、及びタマリンド（ｔａｍａｒｉｎｄｕｓ ｉｎｄｉｃａ）種子多糖体の１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中の保湿剤の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｃ）の総重量基準で１～３０％である。

他の抗しわ有効成分の例としては、それだけに限らないが、加水分解コラーゲン、加水分解エラスチン、酵母エキス、オリザノール、テトラヒドロクルクミン、エラグ酸、乳清タンパク質、サリチロイルフィトスフィンゴシン、シリマリン、セリシン、トコフェリルリン酸ナトリウム、アラントイン、リボ核酸（ＲＮＡ）、ブドウ（Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ）種子抽出物、プロテカルプス（Ｐｔｅｒｏｃａｒｐｕｓ ｍａｒｓｕｐｉｕｍ）樹皮抽出物、チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）ポリフェノール、ワイン抽出物、リンゴ種子抽出物、ヨーロッパブナ（Ｆａｇｕｓ ｓｙｌｖａｔｉｃａ）芽抽出物、アフリカバオバブ（Ａｄａｎｓｏｎｉａ ｄｉｇｉｔａｔａ）抽出物、アルテミア（Ａｒｔｅｍｉａ）抽出物、イリス・フロレンティナ（Ｉｒｉｓ ｆｌｏｒｅｎｔｉｎａ）根抽出物、ヘスペリジン、ジンセノシド、タンジン（Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）抽出物、ニコチンアミド、ウルソール酸、リコペン、コーヒーノキ（Ｃｏｆｆｅａ ａｒａｂｉｃａ）抽出物、乳酸、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、メマツヨイグサ（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ ｂｉｅｎｎｉｓ）油、セラミド、ジパルミトイルヒドロキシプロリン、ヒドロキシステアリン酸、サリチル酸、エルゴチオネイン、リゾレシチン、リポ酸、グリコーゲン、レスベラトロール、フェルラ酸、ビフィズス菌培養溶解緩衝液及び乳酸球菌培養溶解緩衝液の１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中の他の抗しわ有効成分の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｃ）の総重量基準で０．０１～１０％である。

賦形剤の例としては、それだけに限らないが、乳化剤、増粘剤、防腐剤、及び芳香剤等が挙げられる。

乳化剤の例としては、それだけに限らないが、オリーブ油脂肪酸セテアリル、オリーブ油脂肪酸ソルビタン、ポリソルベート－６０、ポリソルベート－８０、セスキステアリン酸メチルグルコース、セスキステアリン酸ＰＥＧ－２０メチルグルコース、ＰＥＧ－４０硬化ヒマシ油、ＰＰＧ－２６－ブテス－２６、ステアリン酸ＰＥＧ－４ポリグリセリル－２、ＰＥＧ－６０硬化ヒマシ油、ステアレス－２、ステアレス－２１、ＰＰＧ－１３－デシルテトラデセス－２４、セテアリルグルコシド、ステアリン酸ＰＥＧ－１００、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸グリセリルＳＥ、ココグルコシド、セテアレス－２５、ステアリン酸ＰＥＧ－４０、ジステアリン酸ポリグリセリル－３メチルグルコース、クエン酸ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸ポリグリセリル－１０、ミリスチン酸ポリグリセリル－１０、ジオレイン酸ポリグリセリル－１０、ラウリン酸ポリグリセリル－１０、イソステアリン酸ポリグリセリル－１０、オレイン酸ポリグリセリル－１０、ジイソステアリン酸ポリグリセリル－１０、ラウリン酸ポリグリセリル－６、ミリスチン酸ポリグリセリル－６、ステアリン酸スクロース、及びポリステアリン酸スクロースの１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中の乳化剤の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｃ）の総重量基準で０．５～１０％である。

増粘剤の例としては、それだけに限らないが、カルボマー、アクリレート及びその誘導体、キサンタンガム、アラビアガム、ポリエチレングリコール－１４Ｍ、ポリエチレングリコール－９０Ｍ、スクシニル多糖、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ならびにヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの高分子ポリマーの１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中の増粘剤の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｃ）の総重量基準で０．１～１０％である。

防腐剤の例としては、それだけに限らないが、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、フェノキシエタノール、ベンジルアルコール、フェニルエタノール、ビス（ヒドロキシメチル）イミダゾリジニル尿素、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、クロルフェネシン（ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｅｓｉｎ）、デヒドロ酢酸ナトリウム、カプリルヒドロキサム酸、１，２－ヘキサンジオール、１，２－ペンタンジオール、ｐ－ヒドロキシアセトフェノン、カプリリルグリコール、カプリル酸グリセリル、ウンデシレン酸グリセリル、カプリル酸ソルビタン、エチルヘキシルグリセロール、及びシャクヤク根抽出物の１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中の防腐剤の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｃ）の総重量基準で０．０１～２％である。

本発明によるアンチエイジング化粧品組成物は、当技術分野で既知の適切な方法のいずれかによって調製することができる。例えば、溶解タンク、乳化ポット、分散機、移送ポンプ等などの化粧品の分野で一般的に使用される装置を使用して組成物を調製することができる。調製中、水溶性物質を水相溶解ケトルに装入し、油溶性物質を油相溶解ケトルに装入し、２つのケトルをそれぞれ約８０℃に加熱する；凝集した原材料の場合、分散機を使用して事前に分散させることができる。溶解が完了したら、油相と水相を乳化ポットに移し、約５～１５分間均質化及び乳化する。乳化が完了したら、バルクを室温まで冷却し、場合により芳香剤、防腐剤などを添加し、必要に応じて製品のｐＨを調整する。

上記の調製方法は、剤形の要件に応じて変更又は調整することができる。アンチエイジング化粧品組成物は、軟膏、クリーム、ローション、エッセンス等などの種々の製品形態に調製することができる。

例
本発明を、例を参照して、さらに以下で詳細に説明する。しかしながら、これらの例及び比較例は、本発明を具体的に説明するためにのみ使用され、いかなる形でも本発明の添付の特許請求の範囲を限定するものと理解されるべきではない。

例１：組成物Ａ、Ａ１、Ｂ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｃ、Ｃ１、Ｃ２、Ｄ、Ｄ１、Ｄ２、Ｅ、Ｅ１、Ｅ２、Ｆ、Ｆ１、Ｆ２、Ｊの調製
上記組成物の具体的な配合は以下の通りとした：

上記組成物を以下のように調製した：
１．Ｄａｘｉｎｇａｎｌｉｎｇ Ｃｈａｏｙｕｅ Ｗｉｌｄ Ｂｅｒｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した新鮮なカバノキ樹液（ベチュラ・バルバ（Ｂｅｔｕｌａ Ｂｌｂａ）樹液）原液を、低温乾燥装置に導入し、－６５℃に冷却し、０．１Ｐａに真空引きし、１．２倍、４倍及び９倍の程度まで濃縮した。
２．原材料１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０及び／又は１１を混合して、対応する組成物を得た。

例２：アンチエイジング関連遺伝子の発現に対する組成物Ａ、Ａ１、Ｂ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｃ、Ｃ１、Ｃ２、Ｄ、Ｄ１、Ｄ２、Ｅ、Ｅ１、Ｅ２、Ｆ、Ｆ１、Ｆ２、Ｊの効果
この例では、アンチエイジング関連遺伝子の発現に対する上記組成物Ａ、Ａ１、Ｂ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｃ、Ｃ１、Ｃ２、Ｄ、Ｄ１、Ｄ２、Ｅ、Ｅ１、Ｅ２、Ｆ、Ｆ１、Ｆ２、Ｊの効果を試験し、比較した。
実験機器：蛍光定量ＰＣＲ（Ｒｏｃｈｅ）、クリーンベンチ（Ｓｕ Ｊｉｎｇ）、ＣＯ_２インキュベーター（Ｂｉｎｄｅｒ）、マイクロプレートリーダー（ＢＩＯ－ＴＥＫ）、マイクロオシレーター。
実験試薬及び材料：ヒト初代線維芽細胞、６ウェルプレート、線維芽細胞用培養培地、ＲＮＡ抽出キット、逆転写キット、Ｔｒｉｚｏｌ溶解緩衝液等。

線維芽細胞に基づく遺伝子発現の分析ステップは以下の通りであった：
（１）接種：細胞を６ウェル培養プレートに５Ｅ５細胞／ウェルの密度で接種し、５％ＣＯ_２を含むインキュベーターで、３７℃で一晩インキュベートした；
（２）投与：６ウェル培養プレートの細胞播種率が約６０％に達したら、各群の試験物質を添加し、試験物質の各群に６複製ウェルを提供した；
（３）試料回収：５％ＣＯ_２を含むインキュベーターに、３７℃で２４時間接種した後、培養培地を廃棄し、各ウェルに１ｍＬのＴｒｉｚｏｌを添加し、細胞を溶解した後、試料を回収した；
（４）ＰＣＲ検出：ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡに逆転写し、蛍光定量ＰＣＲによって検出した；
（５）分析：２^{－ΔΔＣＴ}法を使用して結果を計算し、Ｔ検定法を統計分析に使用した。

試験結果を以下の表に示した。

結果は、ブランク対照Ｊと比較して、他の全ての組成物がＩ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲン、エラスチン及びラミニンの遺伝子発現レベルを改善することができることを示し、カバノキ樹液、濃縮カバノキ樹液、パルミトイルトリペプチド－５、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、トコフェロール及び／又はユビキノンを含む組成物が、一定の抗しわ効果を有することを示した。しかしながら、組成物Ｂ２、Ｃ２、Ｄ２、Ｅ２及びＦ２と組成物Ａ１、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及びＦの結果をそれぞれ比較することによって、１．２倍濃縮カバノキ樹液とパルミトイルトリペプチド－５、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、トコフェロール又はユビキノンの組み合わせが、各タンパク質の遺伝子発現レベルを有意に増加させることが明確に分かり、相乗効果をもたらすことを完全に示した；特に、組成物Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｃ２、Ｄ２、Ｅ２及びＦ２と組成物Ｂ１、Ｃ１、Ｄ１、Ｅ１、及びＦ１の結果を比較することによって、非濃縮カバノキ樹液と比較して、濃縮カバノキ樹液とポリペプチド、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、トコフェロール又はユビキノンの組み合わせが、化粧品組成物の抗しわ効果を有意に改善し、濃縮カバノキ樹液は約１．０５～８倍、好ましくは約１．１～４倍の濃縮度を有することが明確に分かる。

例３：アンチエイジング関連タンパク質の発現に対する組成物Ｇ、Ｇ１及びＧ２の効果
この例では、アンチエイジング関連タンパク質の発現に対する組成物Ｇ、Ｇ１及びＧ２の効果を試験し、比較した。
実験機器：クリーンベンチ（Ｓｕ Ｊｉｎｇ）、免疫洗浄マイクロプレートウォッシャー（ＢＩＯ－ＲＡＤ）、マイクロプレートリーダー（ＢＩＯ－ＴＥＫ）、ＣＯ_２インキュベーター（Ｂｉｎｄｅｒ）
実験試薬及び材料：ヒト初代線維芽細胞、１２ウェル培養プレート、線維芽細胞用培養培地、様々な指標用のＥＬＩＳＡキット等。

実験方法：
（１）接種：細胞を１２ウェル培養プレートに２Ｅ５／ウェルの密度で接種し、５％ＣＯ_２を含むインキュベーターで、３７℃でインキュベートし、培地を２日毎に交換した；
（２）投与：細胞融合が再び６０％超に達したら、各群の試験物質を添加し、試験物質の各群に６複製ウェルを提供した；
（３）試料回収：５％ＣＯ_２を含むインキュベーターに、３７℃で４８時間接種した後、培養培地を廃棄し、各ウェルに１ｍＬのＴｒｉｚｏｌを添加し、細胞を溶解した後、試料を回収した；
（４）検出：指標はＥＬＩＳＡキットの決定方法に従って決定した。
（５）分析：Ｔ検定法を統計分析に使用した。

試験結果を以下の表に示した。

結果は、アデノシン単独と比較して、カバノキ樹液又は１．２倍濃縮カバノキ樹液とアデノシンを含む組成物Ｇ１及びＧ２が、繊維芽細胞におけるアンチエイジング関連タンパク質の発現レベルを有意に増加させることを示し、カバノキ樹液又は濃縮カバノキ樹液とアデノシンが相乗効果をもたらすことを示した。さらに、Ｇ１とＧ２を比較すると、濃縮カバノキ樹液が、カバノキ樹液原液よりもポリペプチドに対して有意に高い相乗効果を有することが分かる。

例４：組成物Ｈ、Ｈ１、Ｈ２及びＪ１の調製
Ｈ：パルミトイルトリペプチド－５
Ｈ１：カバノキ樹液原液＋パルミトイルトリペプチド－５
Ｈ２：１．２倍濃縮カバノキ樹液＋パルミトイルトリペプチド－５
Ｊ１：ブランク対照（水ベース、カバノキ樹液なし、ペプチドなし）

上記組成物の配合を以下に示した：

上記組成物を以下のように調製した：
１．油相：原材料６、８、９、１０、１１、１３、１４、１５及び１６を油相ポットに添加し、８０℃に加熱し、溶解し、よく混合した；
２．原材料４、１７及び１９を室温でよく混合した；
３．原材料１２、１８及び２１を室温でよく混合した；
４．水相：原材料１、２、３、５及び７を８０℃に加熱し、ステップ２からの混合物を添加し、溶解し、よく混合した；
５．乳化：水相と油相を乳化タンクに添加し、８０℃に保持し、３０００ｒｐｍで５分間均質化及び乳化し、乳化が完了したら、原材料２０を添加した；
６．攪拌しながら４０℃に冷却する際、原材料２２及びステップ３からの混合物を添加し、よく攪拌し、排出して組成物の各々を得た。

例５：光老化３Ｄ全層皮膚モデルに対する組成物Ｈ、Ｈ１、Ｈ２及びＪ１の効果
この例では、光老化３Ｄ全層皮膚モデルに対する上記のフェイスクリーム組成物Ｈ、Ｈ１、Ｈ２及びＪ１の効果を試験し、比較した。
実験機器：クリーンベンチ（Ｓｕ Ｊｉｎｇ）、ＣＯ_２インキュベーター（Ｂｉｎｄｅｒ）、ＵＶＡ及びＵＶＢ照射器、マイクロプレートリーダー（ＢＩＯ－ＴＥＫ）、凍結ミクロトーム（Ｌｅｉｃａ）。
実験試薬及び材料：３Ｄ全層皮膚モデル（実験室で自作）、様々な指標用のＥＬＩＳＡ試験キット、ＭＴＴキット等。

実験手順は以下の通りとした：
（１）３Ｄ全層皮膚モデルの構築：３Ｄ全層皮膚モデルを、ケラチノサイト及び線維芽細胞を使用して構築した；
（２）モデリング及び投与：モデルが工場を出るとき、すなわち０日目に、ＳＳＵＶ照射処理（ＵＶＡ：３０Ｊ／ｃｍ^２；ＵＶＢ：５０ｍＪ／ｃｍ^２）を毎日行い、次いで、一定量の試料を対応するモデルの表面に施用した；モデル対照では、モデル培養培地のみを施用し、試験物質の各群に６複製ウェルを提供し、１日１回、合計４日間施用を行った；
（３）試料回収及び検出：モデリング及び投与後、培養培地を回収し、ＥＬＩＳＡキットを使用してＭＭＰ１を決定した；各群から３つのモデルを取得し、ＭＴＴキットを使用してモデル生存率を決定し、残りの３つのモデルを組織固定及びＩＨＣ染色に供して、表皮と真皮との間の接合部のＩＶ型コラーゲン含有量を決定した；
（４）分析：Ｔ検定法を統計分析に使用した。

試験結果を以下の表に示した。

結果は、組成物Ｈと比較して、組成物Ｈ１及びＨ２がＦｕｌＫｕｔｉｓの組織活力を有意に増加させ、表皮と真皮との間の接合部でＩＶ型コラーゲンの発現を促進しながら、細胞外マトリックスのＭＭＰ－１の発現を有意に減少させることを示し、カバノキ樹液又は濃縮カバノキ樹液とポリペプチドの組み合わせが抗しわ効果を有意に改善することができることを完全に示し、これらが有意な相乗効果をもたらすことを示した。さらに、Ｈ１をＨ２と比較すると、濃縮カバノキ樹液が、カバノキ樹液原液よりもポリペプチドに対して有意に高い相乗効果を有することが分かる。

例６：ヒト皮膚形態に対する組成物Ｈ及びＨ２の効果
この例では、組成物Ｈ及びＨ２を２週間及び４週間使用した後の、対象の左右の目尻のしわの変化、ならびに頬の水分及びＴＥＷＬの変化を試験し、それによって組成物Ｈ及びＨ２をその抗しわ効果、皮膚水分量及び皮膚バリア機能改善について評価するために、しわグレード１～５の対象を選択した。

顔半分対照試験法を使用して、対象を製品を使用する前と製品を２週間及び４週間使用した後で以下の通り試験した：
１）Ｐｒｉｍｏｓを使用して対象の左右の目尻を撮影し、ソフトウェアを使用して、しわの量、しわの面積、しわの深さ等を含むしわのパラメータを計算した；
２）Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒを使用して、左右の頬の皮膚水分量を試験した；
３）Ｔｅｗａｍｅｔｅｒを使用して、左右の頬の経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ値）を試験した。

朝と晩に洗顔した後、ローションの使用後に、適切な量の試験試料を左右の顔（目の周りの領域を含む）に施用した。元々のスキンケアの習慣を試験を通して維持し、対象が以前使用していたフェイスクリームのみを試験試料に置き換えた。

使用した試験機器は以下であった：
Ｐｒｉｍｏｓ（Ｃａｎｆｉｅｌｄ、米国）
皮膚水分テスターＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（Ｃｏｕｒａｇｅ＆Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）
ＴＥＷＬテスターＴｅｗａｍｅｔｅｒ（Ｃｏｕｒａｇｅ＆Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）

対象：以下の基準を満たす対象を選択する：
１）しわレベルの標準写真に従って、しわグレード１～５の対象をピックアップし、しわは疾患によって引き起こされたものではなかった；
２）試験部位は、結果に影響する可能性のある皮膚処置、美容及びその他の試験を受けていない；
３）過去１か月間にホルモン剤及び免疫抑制剤を使用していない者；
４）現在又は過去３か月間に試験部位で他の臨床試験に参加していない者；

これらのうち、以下のいずれかを満たす者は除外する：
１）妊娠中又は授乳中の女性；
２）重度の全身性疾患、免疫不全又は自己免疫疾患のある人；
３）過去１週間に抗ヒスタミン薬を使用した者、又は過去１か月に免疫抑制剤を使用した者；
４）過去２か月間に試験部位で抗炎症薬を使用した者；
５）インスリン依存性糖尿病の患者；
６）治療中の呼吸器疾患がある患者；
７）アレルギー、アレルギー性皮膚炎等がある人、皮膚疾患の病歴がある者；
８）皮膚科治療を受けている者；
９）大きな面積の痣、傷、白斑、色素性母斑、ケロイド、及び試験領域での試験に影響を及ぼすその他の皮膚特性を有する者。

その他の要件：
１）試験中、試験に影響を及ぼす可能性のある他の製品の使用は禁止を禁止した；
２）試験中、同じ顔の固定設備及び方法を使用した；
３）試験環境、試験時間及び試験場所は以下の通り：
１）試験領域には、目尻、額及び頬が含まれていた；試験前に、対象はフェイスクリームを使用して洗顔し、化粧紙で拭いた；
２）標準的な部屋に２０分間座り、水及び飲料を飲まず、試験領域を露出し、リラックスし、試験領域に触れないようにした；
３）左右の目尻を製品施用領域とブランク対照領域にランダムに分割して統計的バランスを確保した；
４）試験時には、同じ顔の固定設備及び固定方法を使用し、Ｐｒｉｍｏｓの説明書に従って、製品の使用前ならびに製品を２週間及び４週間使用した後の対象の左右の目尻のしわの写真を収集し、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ及びＴｅｗａｍｅｔｅｒをそれぞれ使用して、対象の頬の両側の水分及びＴＥＷＬ値を試験した。

対象の数：３９人が登録し、５人が途中でやめ、合計３４人の活動的対象となり、平均年齢は４５．５±８．５歳であった。試験結果は以下の通りであった。
（１）しわの量

しわの量を使用して目尻のしわの量を特徴付け、値が高いほどしわが多くなり、逆もまた同様であった。Ｈ２の使用後、しわの量は徐々に減少し、しわの量は４週間で有意に減少した（ｐ＜０．０１）。使用前と比較して、Ｈを４週間使用した後、しわの面積に有意な差はなかった（Ｐ＞０．０５）。４週間の使用後、Ｈ２とＨの差は極めて有意であり（ｐ＜０．０１）、Ｈ２が皮膚のしわを減らす効果を有することを示した。
（２）しわの深さ

しわの深さを使用して目尻のしわの深さを特徴付け、値が高いほどしわが深くなり、逆もまた同様であった。Ｈ２の使用後、しわの深さは徐々に減少し、しわの深さは４週間で有意に減少した（ｐ＜０．０１）。使用前と比較して、Ｈを４週間使用した後、しわの深さに有意な差はなかった（Ｐ＞０．０５）。４週間の使用後、Ｈ２とＨの差は極めて有意であり（ｐ＜０．０１）、Ｈ２が皮膚のしわを減らす効果を有することを示した。
（２）しわの面積

しわの面積を使用して目尻のしわの総面積を特徴付け、値が高いほどしわが多くなり、逆もまた同様であった。Ｈ２の使用後、しわの面積は徐々に減少し、しわの面積は４週間で有意に減少した（ｐ＜０．０１）。使用前と比較して、Ｈを４週間使用した後、しわの面積に有意な差はなかった（Ｐ＞０．０５）。４週間の使用後、Ｈ２とＨの差は極めて有意であり（ｐ＜０．０１）、Ｈ２が皮膚のしわを減らす効果を有することを示した。
４）水分量

水分量を使用して皮膚の角質層の水分量を特徴付け、値が高いほど、皮膚水分量が高くなり、逆もまた同様であった。Ｈ２の使用後、皮膚水分量は徐々に増加し、増加は４週間で極めて有意であった（ｐ＜０．０１）。使用前と比較して、Ｈを４週間使用した後、皮膚水分量に有意な差はなかった（Ｐ＞０．０５）。４週間の使用後、Ｈ２とＨの差は極めて有意であり（ｐ＜０．０１）、Ｈ２が皮膚水分量を増加させる効果を有することを示した。
（５）ＴＥＷＬ

ＴＥＷＬを使用して皮膚のバリア機能を特徴付け、値が高いほど、皮膚バリア機能が悪く、逆もまた同様であった。Ｈ２の使用後、ＴＥＷＬ値は徐々に減少し、減少は４週間で有意であった（ｐ＜０．０５）。使用前と比較して、Ｈを４週間使用した後、ＴＥＷＬ値に有意な差はなかった（Ｐ＞０．０５）。４週間の使用後、Ｈ２とＨの差は極めて有意であり（ｐ＜０．０１）、Ｈ２が皮膚バリア機能を修復する効果を有することを示した。

抗しわアイクリーム組成物を以下のように調製した：
１．油相：原材料１、３、４及び５を油相ポットに添加し、８０℃に加熱し、溶解し、よく混合した；
２．原材料６、７、９、１０及び１１を室温でよく混合した；
３．水相：原材料２を８０℃に加熱し、ステップ３からの混合物を添加し、溶解し、よく混合した；
４．乳化：水相と油相を乳化タンクに添加し、８０℃に保持し、３０００ｒｐｍで５分間均質化及び乳化し、乳化が完了したら、原材料１２を添加した；
５．原材料８を添加し、攪拌しながら４０℃に冷却し、ステップ２からの混合物を添加し、よく攪拌し、排出して抗しわアイクリーム組成物を得た。

顔半分対照試験法を使用して、２０人の対象を製品を使用する前と製品を４週間使用した後で以下の通り試験した：
１）Ｐｒｉｍｏｓを使用して対象の左右の目尻を撮影し、ソフトウェアを使用して、しわの量、しわの面積、しわの深さ等を含むしわのパラメータを計算した；
２）Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒを使用して、左右の目尻の皮膚水分量を試験した；

結果は、２０人のうち１８人の対象が、目尻の皮膚水分量が有意に増加し、このうち１６人が有意に浅く軽いしわ、しわ面積の減少、及びしわの量の減少を示した。

抗しわミルク組成物を以下のように調製した：
１．油相：原材料４、５、６、７、１０、１２、１３及び１４を油相ポットに添加し、８０℃に加熱し、溶解し、よく混合した；
２．原材料１、２、８、９、１７及び１９を室温でよく混合した；
３．原材料３、１８及び２０を室温でよく混合した；
４．水相：ステップ２からの混合物を８０℃に加熱し、ステップ３からの混合物を添加し、溶解し、よく混合した；
５．乳化：水相と油相を乳化タンクに添加し、８０℃に保持し、３０００ｒｐｍで５分間均質化及び乳化し、乳化が完了したら、原材料１６を添加した；
６．原材料８を添加し、攪拌しながら４０℃に冷却し、原材料１１、１２及び１５を添加し、よく攪拌し、排出して抗しわエマルジョン組成物を得た。

１９人の対象を上記のローション組成物で４週間処置し、使用について主観的評価を行った。その中で、１８人が皮膚水分量の有意な増加及び滑らかで繊細で弾力のある皮膚を報告し；１５人がほうれい線及び目のしわの有意な改善を報告した。

Claims (8)

1. アンチエイジング化粧品組成物における、（Ａ）濃縮カバノキ樹液と（Ｂ）パルミトイルトリペプチド－５、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、レチナール、パルミチン酸レチニル、トコフェロール、ユビキノン及びアデノシンから選択される１つ又は２つ以上の物質の組み合わせであって、前記濃縮カバノキ樹液が１．２～４倍の濃縮度を有し、成分（Ａ）濃縮カバノキ樹液の含有量が化粧品組成物の総重量基準で１８～９８重量％であり、成分（Ｂ）の含有量が化粧品組成物の総重量基準で０．００５～１０重量％である、組み合わせの使用。
2. 濃縮カバノキ樹液が１．２～２倍の濃縮度を有する、請求項１に記載の使用。
3. 以下を含むアンチエイジング化粧品組成物：
   （Ａ）１．２～４倍の濃縮度を有する濃縮カバノキ樹液；及び
   （Ｂ）パルミトイルトリペプチド－５、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、レチナール、パルミチン酸レチニル、トコフェロール、ユビキノン及びアデノシンから選択される１つ又は２つ以上の物質
   であって、成分（Ａ）濃縮カバノキ樹液の含有量が化粧品組成物の総重量基準で１８～９８重量％であり、成分（Ｂ）の含有量が化粧品組成物の総重量基準で０．００５～１０重量％である、アンチエイジング化粧品組成物。
4. 濃縮カバノキ樹液が１．２～２倍の濃縮度を有する、請求項３に記載のアンチエイジング化粧品組成物。
5. 成分（Ｂ）の含有量が、化粧品組成物の総重量基準で０．０１～８重量％である、請求項３に記載のアンチエイジング化粧品組成物。
6. 成分（Ｂ）の含有量が、化粧品組成物の総重量基準で０．１～６重量％である、請求項５に記載のアンチエイジング化粧品組成物。
7. 成分（Ｂ）の含有量が、化粧品組成物の総重量基準で０．５～５重量％である、請求項６に記載のアンチエイジング化粧品組成物。
8. さらに添加される水を含まない、請求項３～７のいずれかに記載のアンチエイジング化粧品組成物。