CN115998640B

CN115998640B - 一种抗糖组合物、精华液以及生产方法

Info

Publication number: CN115998640B
Application number: CN202211351969.4A
Authority: CN
Inventors: 曾小微; 胡敏青; 陈爽; 凌沛学; 亓金亮; 顾泽芸
Original assignee: Shandong Meimei Pharmaceutical Co ltd; Meiye Biomedical Co ltd
Current assignee: Shandong Meimei Pharmaceutical Co ltd; Meiye Biomedical Co ltd
Priority date: 2022-10-31
Filing date: 2022-10-31
Publication date: 2023-08-22
Anticipated expiration: 2042-10-31
Also published as: CN115998640A

Abstract

本发明属于日化新材料领域，公开了一种抗糖组合物，包括0.1～2重量份的HA60、0.1～2重量份的Quintescine IS抗氧化二聚肽。该抗糖组合物具有优异的抗糖效果。同时，本发明还公开了一种精华液。

Description

一种抗糖组合物、精华液以及生产方法

技术领域

本发明涉及日化新材料领域，具体为一种抗糖组合物、精华液。

背景技术

CN112618468A公开了一种高效抗糖精华液及其制备方法，包括肌肽、α-硫辛酸、精氨酸PCA、生物素、烟酰胺、昆诺阿藜籽提取物、夹竹桃多糖、仙人掌种子油。

CN114288216A公开了一种抗氧化抗糖化组合物，包含以下组分：水解透明质酸钠、抗坏血酸磷酸酯镁、富勒烯、脱羧肌肽盐酸盐、欧洲酸樱桃花提取物、丹参提取物、分散剂、稳定剂和水。

可见透明质酸、多肽都是具有抗糖作用的有效成分。

晚期糖基化终末产物(AGEs)指还原性糖(如葡萄糖)上的羰基与蛋白质、脂质或核酸等大分子上的游离氨基之间所生成的加成物。目前解决方案通过抗糖化剂代替蛋白质与糖反应，竞争性地与糖基化蛋白结合，阻碍糖基化反应，从而避免AGEs的生成；

所以，本案解决的技术问题是：如何进一步提高抗糖精华液的抗糖活性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗糖组合物，该抗糖组合物具有优异的抗糖效果。

同时，本发明还公开了一种精华液。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种抗糖组合物，包括0.1～2重量份的HA60、0.1～2重量份的Quintescine IS抗氧化二聚肽。

HA60为一种全分子量的透明质酸；可见CN113512134A,其重均分子量范围为0.2万～150万，分子量分散系数Mw/Mn在5以上；HA60由山东贯天下生物科技有限公司提供。

在上述的抗糖组合物中，还包括0.1～2重量份的多肽，所述多肽为肌肽、乙酰肌肽、脱羧肌肽、棕榈酰肌肽中的一种或多种。

在上述的抗糖组合物中，还包括0.05～1重量份的多糖，所述多糖为铁皮石斛多糖、黄芪多糖、夹竹桃花多糖中的一种或多种。

同时，本发明还公开了一种抗糖精华液，含有1～2％的如上任一所述的抗糖组合物。

在上述的抗糖精华液中，所述抗糖精华液的配方为：

水至100％；

甘草酸二钾0.05％；

尿囊素0.1％；

EDTA二钠0.03％；

1,3-丙二醇5％；

氢化卵磷脂0.1％；

黄原胶0.05％；

甘油聚醚-26 2％；

聚乙二醇-8 0.5％；

三甲基戊二醇/己二酸/甘油交联聚合物2％；

抗糖组合物1～2％；

1,2-己二醇1％；

对羟基苯乙酮0.4％；

聚丙烯酸酯-13/聚异丁烯/聚山梨醇酯-20/水/山梨坦异硬脂酸酯0.7％；

环五聚二甲基硅氧烷/环己硅氧烷2％；

最后，本发明还公开一种如上所述的抗糖精华液的生产方法，包括如下步骤：

步骤1：清洁并消毒所需设备，准确称量配方中各组分原料，用干净消毒好的器皿盛放备用。

步骤2：将原料1～10加入水锅中，搅拌升温至80～85℃，搅拌至完全溶解。

步骤3：将原料11～12加入水锅中，搅拌至完全溶解。

步骤4：将水锅料体抽入主锅，搅拌均匀后，开启降温。

步骤5：降温至45℃，加入原料14～15(预先分散均匀)，均质至完全均匀。

步骤6：将原料13加入主锅，搅拌至完全均匀。

步骤7：取样检测各项理化指标，合格后过滤出料。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本案的抗糖组合物含HA60，HA60为山东贯天下生物科技有限公司提供的一种全分子透明质酸钠。目前，透明质酸产品主要集中在单一分子量分布的透明质酸，分子量分布宽度较窄，且质量参差不齐。因此，现有的方法想要获得较宽分子量分布的透明质酸钠，需将各分子量段的透明质酸钠进行混合复配，然而，不同分子量的透明质酸钠产品之间的黏度等性能差异较大，直接混合获得的产物均匀性很难保证。现有技术中还提供了一些物理、化学或生物类的透明质酸钠降解方法，然而现有的降解方法处理后的透明质酸钠分子量分布并不均匀，稳定性也较差，难以进一步提升透明质酸钠产品的质量。

而HA60通过对不同分子量的透明质酸钠精心筛选以及高效的制备方法，获得的高品质全分子量分布透明质酸钠，是一款均匀性好、稳定性高且为全分子量分布的高质量透明质酸钠，具备优越的智能补水保湿、抗炎及细胞保护等活性。HA60制备工艺所制备的全分子量分布透明质酸钠与同比例普通透明质酸钠相比，有更好的保湿、抗炎、促进细胞修复等功效。

此外，与普通明质酸钠相比，全分子透明质酸钠HA60还能够竞争性地与糖基化蛋白结合，能显著抑制人原代真皮成纤维细胞中乙二醛诱导的糖基化终产物CML的表达，从根源上避免糖化，达到抗糖化功效。本案主要针对这部分功效进行实验验证。

Quintescine IS抗氧化二聚肽是一种由人工合成的拟谷胱甘肽的肽二聚体，其Quintescine IS有良好的抗氧化性并能保护DNA，同时对抗糖基化带来的损伤具有较好的修复作用。

两者协同作用，可以有效的提高抗糖效果。

附图说明

图1是空白组的抗糖化细胞免疫荧光显微镜图(空白对照NT如图1所示)；

图2是乙二醛空白组的抗糖化细胞免疫荧光显微镜图(乙二醛-0.5mM如图2所示)；

图3是阳性组的抗糖化细胞免疫荧光显微镜图(乙二醛+AG-0.1mM如图3所示)；

图4是试验样1的抗糖化细胞免疫荧光显微镜图(试验样1如图4所示)；

图5是试验样2的抗糖化细胞免疫荧光显微镜图(试验样2如图5所示)；

图6是试验样3的抗糖化细胞免疫荧光显微镜图(试验样3如图6所示)；

图7是对比样1的抗糖化细胞免疫荧光显微镜图(对比样1如图7所示)；

图8是对比样2的抗糖化细胞免疫荧光显微镜图(对比样2如图8所示)；

图9是对比样3的抗糖化细胞免疫荧光显微镜图(对比样3如图9所示)；

图10是对比样4的抗糖化细胞免疫荧光显微镜图(对比样4如图10所示)；

图11是各样品的CML表达量；

图12是实施例1的对人原代真皮成纤维细胞活力的影响。

具体实施方式

基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

在进行阐述本发明的方案之前，先阐述各原料的来源：

HA60：山东贯天下生物科技有限公司；产品专利：CN113512134A一种全分子量分布的透明质酸钠及其制备方法和应用；

Quintescine IS抗氧化二聚肽：亚什兰(中国)投资有限公司，产品专利：EP1799188B1 Use of peptides as an antioxidant agent for the preparation of acosmetic and/or pharmaceutical composition；

实施例1

一种抗糖组合物，包括1重量份的HA60、1重量份的Quintescine IS抗氧化二聚肽。

实施例2

一种抗糖组合物，包括0.2重量份的HA60、1.8重量份的Quintescine IS抗氧化二聚肽。

实施例3

一种抗糖组合物，包括0.5重量份的HA60、1.5重量份的Quintescine IS抗氧化二聚肽。

实施例4

一种抗糖组合物，包括1.5重量份的HA60、0.5重量份的Quintescine IS抗氧化二聚肽。

实施例5

一种抗糖组合物，包括1重量份的HA60、1重量份的Quintescine IS抗氧化二聚肽、1重量份的乙酰肌肽、0.1重量份的黄芪多糖。

实施例6

一种抗糖组合物，包括1重量份的HA60、1重量份的Quintescine IS抗氧化二聚肽、2重量份的棕榈酰肌肽、0.3重量份的夹竹桃花多糖。

对比例1

一种抗糖组合物，包括1重量份的HA60、1重量份的肌肽。

对比例2

一种抗糖组合物，包括1重量份的HA60、1重量份的乙酰肌肽。

对比例3

一种抗糖组合物，包括1重量份的HA60、1重量份的棕榈酰肌肽。

对比例4

一种抗糖组合物，包括1重量份的透明质酸钠、1重量份的Quintescine IS抗氧化二聚肽。

实施例7

一种抗糖精华液，包括如下配方，参考表1；

表1配方表

性能测试

测试项目1：

糖基化是一种非酶化学反应，蛋白质与羰基化合物(葡萄糖果糖和乙二醛等)发生非酶糖基化反应，最终可形成一系列不可逆的糖基化终产物(acvanced glycosylationend products，AGEs)，AGEs可与蛋白质发生交联改变蛋白质的生理活性引起一系列病理生理改变(1.Pageon,H.；Techer,M.P.；Asselineau,D.,Reconstructed skin modified byglycation of the dermal equivalent as a model for skin aging and itspotential use to evaluate anti-glycation molecules.Exp Gerontol 2008,43(6),584-8)。这些修饰同时影响细胞外和细胞内的蛋白质，导致细胞和组织功能障碍，从而加速皮肤的老化过程。羧甲基赖氨酸(Carboxymetyl lysin，CML)是晚期糖基化终末产物代表之一，实验中采用乙二醛诱导人皮肤原代成纤维细胞糖基化，氨基胍作为阳性对照，采用免疫荧光染色法对CML的表达进行定量分析(2.Andre,A.；Wdzieczak-Bakala,J.；Toure,A.K.；Stien,D.；Eparvier,V.,A ethod to quantify intracellular glycation in dermalfibroblasts using liquid chromatography coupled to fluorescence detection-Application to the selection of deglycation compounds of dermatologicalinterest.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2018,1100～1101,100～105.；3.Khmaladze,I.；Osterlund,C.；Smiljanic,S.；Hrapovic,N.；Lafon-Kolb,V.；Amini,N.；Xi,L.；Fabre,S.,A novel multifunctional skin care formulation with aunique blend of antipollution,rightening and antiaging active complexes.JCosmet Dermatol 2020,19(6),415～1425)。

1实验材料和试剂

人原代真皮成纤维细胞和培养基购自于Cell Technology公司；青霉素-链霉素-两性霉素B溶液购自于Bioind，DPBS购自于Gibco公司，CCK试剂购自于同仁生物(Cat#∶40203ES80)；96孔细胞培养板采购自Thermo公司；CML抗体购自于Abcam公司，Alexa568Donkey Anti-Mouse lgG购自Invitrogen公司，牛血清白蛋白BSA购自于碧云天，乙二醛购自于Adamas公司，氨基胍(Aladdin，A151036)。

2实验方法

2.1抗糖化细胞免疫荧光实验

将细胞从瓶中消化后接种到已经加入细胞爬片的24孔板中，每孔50000个细胞。48h后，采用0.5mM乙二醛处理细胞诱导糖化反应，同时设乙二醛空白组(NT)，阳性对照组(乙二醛+0.1mM氨基胍)和试验样1(乙二醛+0.2％实施例1)、试验样2(乙二醛+0.2％实施例5)、试验样3(乙二醛+0.2％实施例6)、对比样1(乙二醛+0.2％对比例1)、对比样2(乙二醛+0.2％对比例2)、对比样3(乙二醛+0.2％对比例3)、对比样4(乙二醛+0.2％对比例4)，处理细胞48h。实验结束时PBS冲洗一次，用多聚甲醛(PFA)固定后，进行CML荧光染色。染色当天，细胞用2.5％BSA封闭1h，然后用一抗CML(1∶100)室温孵育2h，之后加二抗Alexa568Donkey Anti-Mouse lgG(1∶1000)室温孵育1h，最后采用水性封片剂封片。荧光显微镜拍摄荧光图像，使用ImageJ对图像进行量化分析。

测试结果如下图1～11和表2。图1～10中，CML荧光染色(红色)，细胞核(蓝色)。图11中示出了CML表达量。

图12示出了不同浓度下的实施例1的样品对于对人原代真皮成纤维细胞活力的影响，图12的横坐标是样品浓度(将抗糖组合物稀释至去离子水中，横坐标为抗糖组合物在溶液中的浓度)，纵坐标是细胞活性值。

表2

由此可知，0.2％的抗糖组合物相比对比例1-4，其能显著抑制人原代真皮成纤维细胞中乙二醛诱导的糖基化终产物CML的表达，具有抗糖化功效。

通过试验样和对比例1-3的对比可知，普通的多肽和HA60的配合并不理想；虽然其他多肽也有和本案Quintescine IS抗氧化二聚肽部分重合的功能，但是其协同效果远不及Quintescine IS抗氧化二聚肽。

通过试验样和对比例4的对比可以得知，普通的透明质酸钠和Quintescine IS抗氧化二聚肽也无法达到更优的抗糖的效果。

基于此可以得知，采用HA60和Quintescine IS抗氧化二聚肽的配合，能够实现抗糖效果的最优化。

Claims

1.一种抗糖组合物，其特征在于，包括0.1~2重量份的HA60、0.1~2重量份的Quintescine IS抗氧化二聚肽；

所述HA60是由山东贯天下生物科技有限公司提供的全分子透明质酸钠，HA60的重均分子量范围为0.2万~150万，分子量分散系数Mw/Mn在5以上。

2.根据权利要求1所述的抗糖组合物，其特征在于，还包括0.1~2重量份的多肽，所述多肽为肌肽、乙酰肌肽、脱羧肌肽、棕榈酰肌肽中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的抗糖组合物，其特征在于，还包括0.05~1重量份的多糖，所述多糖为铁皮石斛多糖或黄芪多糖。

4.一种抗糖精华液，其特征在于，含有1~2wt%的如权利要求1-3任一所述的抗糖组合物。

5.根据权利要求4所述的抗糖精华液，其特征在于，所述抗糖精华液的组成为：

水添加至抗糖精华液的总量为100wt%；

甘草酸二钾 0.05wt%；

尿囊素 0.1wt%；

EDTA 二钠 0.03wt%；

1,3-丙二醇 5wt%；

氢化卵磷脂 0.1wt%；

黄原胶 0.05wt%；

甘油聚醚-26 2wt%；

聚乙二醇-8 0.5wt%；

三甲基戊二醇/己二酸/甘油交联聚合物 2wt%；

抗糖组合物1~2wt%；

1,2-己二醇 1wt%;

对羟基苯乙酮 0.4wt%；

聚丙烯酸酯-13/聚异丁烯/聚山梨醇酯-20 /水/山梨坦异硬脂酸酯 0.7wt%；

环五聚二甲基硅氧烷/环己硅氧烷 2wt%。

6.一种如权利要求5所述的抗糖精华液的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：清洁并消毒所需设备，准确称量配方中各组分原料，用干净消毒好的器皿盛放备用；

步骤2：将水、甘草酸二钾、尿囊素、EDTA 二钠、1,3-丙二醇、氢化卵磷脂、黄原胶、甘油聚醚-26、聚乙二醇-8、三甲基戊二醇/己二酸/甘油交联聚合物加入水锅中，搅拌升温至80~85℃，搅拌至完全溶解；

步骤3：将原料抗糖组合物、1,2-己二醇加入水锅中，搅拌至完全溶解；

步骤4：将水锅料体抽入主锅，搅拌均匀后，开启降温；

步骤5：降温至45℃，加入预先分散均匀的聚丙烯酸酯-13/聚异丁烯/聚山梨醇酯-20 /水/山梨坦异硬脂酸酯、环五聚二甲基硅氧烷/环己硅氧烷，均质至完全均匀；

步骤6：将对羟基苯乙酮加入主锅，搅拌至完全均匀；

步骤7：取样检测各项理化指标，合格后过滤出料。