CN112043621B - 一种具有抗衰效果的无防腐多肽组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有抗衰效果的无防腐多肽组合物，其是由下述质量百分比的原料制成的冻干粉剂：复合多肽1％～20％，重组人Ⅰ型胶原蛋白1％～20％，冻干保护剂60％～98％；其中复合多肽的质量百分比组成为：寡肽‑1 15％～30％、肌肽20％～30％、三肽‑1 5％～30％、五肽‑3 10％～55％。本发明多肽组合物对人皮肤成纤维细胞有显著促增殖作用，在高浓度下对Ⅰ型胶原蛋白基因表达有促进作用，在低浓度下对Ⅲ型胶原蛋白基因表达有促进作用，且最大程度保持了肽类原料的活性，同时不含防腐剂，避免了防腐剂对肽类组分活性和稳定性的影响。本发明多肽组合物可以根据要求加入到不同产品中，如水剂、乳霜、面膜、精华等，为产品提供抗衰效果。

Description

一种具有抗衰效果的无防腐多肽组合物

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种具有抗衰效果的无防腐多肽组合物及其制备方法。

背景技术

抗衰是化妆品行业长久不衰的热门话题。早期的抗衰产品，多以植物提取为主打功效成分，而近几年，以生物活性多肽为主要成分的抗衰产品越来越多的占据了美容市场。

生物活性多肽是指对生物机体的生命活动有益或者具有生理作用的肽类化合物。因其功效多样，安全性高，被认为是现今化妆品行业最热门的原料之一，在抗衰、美白、修复等领域有着广泛应用。

化妆品行业中常见的多肽/蛋白类原料种类繁多，不同的肽类，其生理学作用差异很大。例如六胜肽，主要是抑制神经信号传递，松弛肌肉，达到淡化动态皱纹的效果；寡肽主要作用是创伤愈合和修复等。对于多肽类原料来说，单一成分能达到的功效有限，但受制于成本、经济效益等因素的影响，护肤品行业的多肽类原料，少有多种肽类复合的组合物。

多肽属于蛋白类物质，其稳定性受多种因素影响，高温、表面活性剂、微生物、防腐剂、氧气等条件的存在很容易会让蛋白质结构改变丧失活性。一些活性较高的蛋白质，在水溶液中如保存条件不当可能会出现降解、失活等情况。而目前市面上的肽类原料，基本都是以稀释的水溶液形式保存，并且为了长期保存，在其中都不同程度添加了防腐剂。这样的条件下，从不同程度上影响到了肽类活性，也使得无法长期保证肽类的稳定性。

发明内容

本发明的目的是提供一种组分与人体同源，具有抗衰效果的无防腐多肽组合物，以改善市面上单一多肽成分的化妆品功效有限的问题。

针对上述目的，本发明所采用的具有抗衰效果的无防腐多肽组合物是由下述质量百分比的原料制成的冻干粉剂：

复合多肽1％～20％，重组人Ⅰ型胶原蛋白1％～20％，冻干保护剂60％～98％。

本发明的多肽组合物优选由下述质量百分比的原料制成的冻干粉剂：复合多肽10％～15％，重组人Ⅰ型胶原蛋白10％～15％，冻干保护剂70％～80％。

上述的复合多肽的质量百分比组成为：寡肽-1 15％～30％、肌肽20％～30％、三肽-1 5％～30％、五肽-3 10％～55％。

上述复合多肽的质量百分比优选为：寡肽-1 20％～30％、肌肽25％～30％、三肽-1 10％～25％、五肽-3 20％～45％。

上述重组人Ⅰ型胶原蛋白由410个氨基酸组成，其序列与人体Ⅰ型胶原蛋白序列一致，主要作用是在皮肤表面形成保护膜，防止水分散失，保护皮肤不受外界刺激；其制备方法见公布号CN106554410A、发明名称《一种重组人源胶原蛋白及其编码基因和制备方法》中记载。

上述寡肽-1是人体本身存在的多肽，其作用主要是促进皮肤微创修复，调节基底母细胞健康平衡。

上述肌肽是一种天然的内源性二肽，广泛存在于哺乳动物的大脑、肌肉和心脏，但随着年龄的增长肌肽含量逐渐减少。其主要作用是抗糖化、鳌合金属离子、清除自由基、延缓衰老细胞。

上述三肽-1的主要作用是能有效预防和淡化皱纹，能促进细胞外基质Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、弹性蛋白、结构糖蛋白，促进伤口恢复和组织更新重建。

上述五肽-3的主要作用是促进胶原蛋白生成，促进细胞增殖；增加皮肤弹性，使肌肤细腻、柔嫩、有光泽；

上述的冻干保护剂为甘露糖醇、右旋糖酐、海藻糖、葡萄糖中任意一种。

本发明多肽组合物的制备方法如下：

1、将复合多肽、重组人Ⅰ型胶原蛋白及冻干保护剂按照质量百分比加入原料总质量5～20倍的超纯水中，搅拌至固体完全溶解。

2、将步骤1得到的溶液在-50～-30℃下冷冻2～8h，然后抽真空，并升温至-30～-20℃，保持4～15h；继续升温至-20～-10℃，保持3～8h；再升温至-10～0℃，保持4～8h；继续升温至0～20℃，保持3～8h；最后升温至20～40℃，保持3～20h，得到冻干粉剂，即多肽组合物。

上述步骤2中，优选将步骤1得到的溶液在-50～-35℃下冷冻3～6h，然后抽真空，升温至-30～-20℃，保持5～10h；继续升温至-20～-10℃，保持4～7h；再升温至-10～0℃，保持6～8h；继续升温至0～20℃，保持4～7h；最后升温至20～40℃，保持6～15h。

本发明多肽组合物在使用时直接按照2％～10％的含量添加到水剂、乳霜、面膜、精华等中即可。

相对于现有产品，本发明的有益效果如下：

1、本发明通过将寡肽-1、肌肽、三肽-1、五肽-3四种多肽进行复合，充分将各自在保湿、修复、弹力、粗糙度、抗皱中所具有的优势发挥出来，测试数据显示所复合的效果均高于其中任意2～3种的复合效果，有效促进成纤维细胞增殖，促进胶原蛋白生成。实验结果显示，该多肽组合物对人皮肤成纤维细胞有显著促增殖作用，并且在高浓度下对Ⅰ型胶原蛋白基因(COLⅠ)表达有促进作用，在低浓度下对Ⅲ型胶原蛋白基因(COLⅢ)表达有促进作用。

2、冻干粉剂的剂型也最大程度的保持了肽类原料的活性，解决了在原料保存方面的难题。

3、本发明多肽组合物不含防腐剂，避免了防腐剂对多肽/蛋白类组分的活性和稳定性的影响。

4、本发明多肽组合物可以根据要求，按一定比例加入到不同产品中，包括但不限于水剂、乳霜、面膜、精华等，为产品提供抗衰效果。

附图说明

图1是实施例1样品在含有10％新生牛血清的高糖DMEM培养条件下对人皮肤成纤维细胞的增殖结果。

图2是实施例1样品选择两个浓度0.1％和0.05％进行PCR检测对Ⅰ型胶原蛋白基因(COLⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白基因(COLⅢ)的表达情况。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围不仅限于这些实施例。

实施例1

1、将0.20g寡肽-1、0.25g肌肽、0.25g三肽-1、0.3g五肽-3、1.0g重组人I型胶原蛋白、8g甘露糖醇加入90g超纯水中，搅拌至完全溶解。

2、将步骤1得到的溶液在-48℃下冷冻5h，然后抽真空，并升温至-20℃，保持8h；继续升温至-10℃，保持5h；再升温至0℃，保持6h；继续升温至20℃，保持5h；最后升温至40℃，保持8h，得到冻干粉剂，即多肽组合物。

将所得多肽组合物按照不同比例，添加在含有10％新生牛血清的高糖DMEM培养液中，对人皮肤成纤维细胞进行体外培养。48h后弃培养液，清洗，用细胞增殖检测试剂盒测试，记录450nm处吸光值，根据公式计算细胞相对活力，表征多肽组合物对人皮肤成纤维细胞增殖的影响，结果见图1。

将所得的多肽组合物按照不同比例，添加在含有10％新生牛血清的高糖DMEM培养液中，对人皮肤成纤维细胞进行体外培养。48h后弃培养液，清洗，裂解细胞。用试剂盒提取总RNA，反转录，使用实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白基因(COLⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白基因(COLⅢ)的表达情况，表征多肽组合物对胶原蛋白生成的影响，结果见图2。

由图1和图2的结果可见，该多肽组合物对人皮肤成纤维细胞有显著促增殖作用，并且在0.1％的高浓度下对Ⅰ型胶原蛋白基因(COLⅠ)表达有促进作用，在0.05％的低浓度下对Ⅲ型胶原蛋白基因(COLⅢ)表达有促进作用。

实施例2

1、将0.24g寡肽-1、0.24g肌肽、0.16g三肽-1、0.16g五肽-3、1.2g重组人I型胶原蛋白、8g甘露糖醇加入90g超纯水中，搅拌至完全溶解。

2、将步骤1得到的溶液在-50℃下冷冻6h，然后抽真空，升温至-30℃，保持10h；继续升温至-15℃，保持6h；再升温至0℃，保持6h；继续升温至20℃，保持7h；最后升温至40℃，保持8h，得到冻干粉剂，即多肽组合物。

将本施例制备的多肽组合物加入水剂中，制成抗皱紧致柔肤水，该柔肤水的具体组成如表1所示：

表1

上述柔肤水的具体制备方法如下：

1、按照表1中比例，依次称取A相的汉生胶、透明质酸钠、甘油、戊二醇，并搅拌使固体粉末分散均匀，然后加入水，并加热搅拌至料体粘稠，加入水持续搅拌至完全溶解。

2、依次称取B相原料至上一步的溶液中，搅拌至均一，冷却至45℃。

3、称取多肽组合物，加入至上述混合溶液中，常温搅拌至完全溶解，然后加入苯氧乙醇，搅拌均匀，制备成抗皱紧致柔肤水。

实施例3

1、将0.3g寡肽-1、0.25g肌肽、0.25g三肽-1、0.2g五肽-3、1.5g重组人I型胶原蛋白、7.5g甘露糖醇加入90g水中，搅拌至完全溶解。

2、将步骤1得到的溶液在-45℃下冷冻7h，然后抽真空，并升温至-25℃，保持6h；继续升温至-10℃，保持7h；再升温至0℃，保持8h；继续升温至20℃，保持6h；最后升温至35℃，保持8h，得到冻干粉剂，即多肽组合物。

将本施例制备的多肽组合物加入乳霜中，制成抗皱紧致乳液，该乳液的具体组成如表2所示：

表2

上述乳液的具体制备方法如下：

1、按照表1中比例，依次称取A相原料，并搅拌使固体粉末分散均匀，然后加入水加热至80℃持续搅拌至完全溶解。

2、依次称取B相原料，加热至80℃，搅拌至完全溶解。

3、将B相倒入A相，均质乳化。

4、称取C相原料，加入至上述乳液中，常温搅拌至完全溶解，加入D相原料搅拌均匀，制备成抗皱紧致乳液。

为了确定本发明多肽组合物中复合多肽的种类，发明人进行了大量的研究试验，具体试验如下：

将1g复合多肽、1.5g重组人I型胶原蛋白、7.5g甘露糖醇加入90g超纯水中，搅拌至完全溶解，所得溶液在-45℃下冷冻5h，然后抽真空，并升温至-20℃，保持8h；继续升温至-10℃，保持5h；再升温至0℃，保持6h；继续升温至20℃，保持5h；最后升温至35℃，保持6h，制备成1号至12号冻干粉，所述冻干粉中的复合多肽的质量百分比组成如下：

1号冻干粉：寡肽-1 50％、肌肽50％

2号冻干粉：寡肽-1 50％、三肽-1 50％

3号冻干粉：寡肽-1 50％、五肽-3 50％

4号冻干粉：肌肽50％、三肽-1 50％

5号冻干粉：肌肽50％、五肽-3 50％

6号冻干粉：三肽-1 50％、五肽-3 50％

7号冻干粉：寡肽-1 40％、肌肽30％、三肽-1 30％

8号冻干粉：寡肽-1 40％、肌肽30％、五肽-3 30％

9号冻干粉：寡肽-1 40％、三肽-1 30％、五肽-3 30％

10号冻干粉：寡肽-1 40％、五肽-3 30％、六肽-3 30％

11号冻干粉：肌肽40％、三肽-1 30％、五肽-3 30％

12号冻干粉：寡肽-1 30％、肌肽30％、三肽-1 20％、五肽-3 20％

将上述制备的冻干粉和溶媒液(纯净水)按质量比为1:9混合后进行功效类测试(保湿、修护紧致、改善弹性、改善粗糙度、祛皱)，保湿测试指标为皮肤角质层水分含量；皮肤经表皮水分流失率；皮肤弹性F3/F4值；皮肤紧致度测试指标为皮肤紧致度F4值；皮肤粗糙度测试指标为Sa值；祛皱测试指标为皮肤皱纹Ra值；测试仪器及其他详细说明见表3。30名受试者在试用各样品14天、28天后所得数据和指标详见表4。

表3仪器测量参数说明及相关设备

表4功效测试数据

由表4可见，1～6号通过两种多肽复合后测试数据分析可得五肽-3在保湿、抗皱方面较有优势，寡肽-1在修复方面较有优势，三肽-1在皮肤恢复皮肤弹性方面较有优势，肌肽在皮肤紧致、改善皮肤粗糙度方面较有优势，7～11号通过三种多肽复合后数据显示各方面均有提升，其中10号数据对比8号、9号数据均说明六肽-3与寡肽-1、五肽-3的复合效果均比肌肽与三肽-1与其复合效果稍弱。从抗衰所具有以上指征性指标数据可得12号冻干粉效果为最佳，7～11号冻干粉测试数据优于1～6号，可见以上所述的多肽复合是存在增效作用的。且当寡肽-1、肌肽、三肽-1、五肽-3四种复合时效果最为明显，因此，本发明选择寡肽-1、肌肽、三肽-1、五肽-3四种多肽进行复合，以使所得产品同时具体良好的保湿、修复、弹力、粗糙度、抗皱效果。

Claims (5)

1.一种具有抗衰效果的无防腐多肽组合物，其特征在于所述的多肽组合物是由下述质量百分比的原料制成的冻干粉剂：

复合多肽1%～20%，重组人Ⅰ型胶原蛋白1%～20%，冻干保护剂60%～98%；

上述的复合多肽的质量百分比组成为：寡肽-1 15%～30%、肌肽20%～30%、三肽-1 5%～30%、五肽-3 10%～55%；

所述的多肽组合物由下述方法制备得到：

（1）将复合多肽、重组人Ⅰ型胶原蛋白及冻干保护剂按照质量百分比加入原料总质量5～20倍的超纯水中，搅拌至固体完全溶解；

（2）将步骤（1）得到的溶液在-50～-30℃下冷冻2～8h，然后抽真空，并升温至-30～-20℃，保持4～15h；继续升温至-20～-10℃，保持3～8h；再升温至-10～0℃，保持4～8h；继续升温至0～20℃，保持3～8h；最后升温至20～40℃，保持3～20h，得到冻干粉剂，即多肽组合物。

2.根据权利要求1所述的具有抗衰效果的无防腐多肽组合物，其特征在于所述的多肽组合物是由下述质量百分比的原料制成的冻干粉剂：

复合多肽10%～15%，重组人Ⅰ型胶原蛋白10%～15%，冻干保护剂70%～80%。

3.根据权利要求1或2所述的具有抗衰效果的无防腐多肽组合物，其特征在于：所述复合多肽的质量百分比组成为：寡肽-1 20%～30%、肌肽25%～30%、三肽-1 10%～25%、五肽-320%～45%。

4.根据权利要求1或2所述的具有抗衰效果的无防腐多肽组合物，其特征在于：所述的冻干保护剂为甘露糖醇、右旋糖酐、海藻糖、葡萄糖中任意一种。

5.根据权利要求1所述的具有抗衰效果的无防腐多肽组合物，其特征在于：步骤（2）中，将步骤（1）得到的溶液在-50～-35℃下冷冻3～6h，然后抽真空，升温至-30～-20℃，保持5～10h；继续升温至-20～-10℃，保持4～7h；再升温至-10～0℃，保持6～8h；继续升温至0～20℃，保持4～7h；最后升温至20～40℃，保持6～15h。

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