JP7450793B2 - 新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ - Google Patents

新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ Download PDF

Info

Publication number
JP7450793B2
JP7450793B2 JP2023194056A JP2023194056A JP7450793B2 JP 7450793 B2 JP7450793 B2 JP 7450793B2 JP 2023194056 A JP2023194056 A JP 2023194056A JP 2023194056 A JP2023194056 A JP 2023194056A JP 7450793 B2 JP7450793 B2 JP 7450793B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
cells
formula
alginic acid
producing
alginate gel
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2023194056A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2024020393A (ja
Inventor
正司 古迫
勉 佐藤
智裕 鳴海
愼吾 佐藤
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mochida Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Mochida Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from PCT/JP2021/048567 external-priority patent/WO2022145420A1/ja
Application filed by Mochida Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Mochida Pharmaceutical Co Ltd
Publication of JP2024020393A publication Critical patent/JP2024020393A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7450793B2 publication Critical patent/JP7450793B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/04—Alginic acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/20—Material Coatings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/10—Hollow fibers or tubes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0676—Pancreatic cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0681—Cells of the genital tract; Non-germinal cells from gonads
    • C12N5/0682—Cells of the female genital tract, e.g. endometrium; Non-germinal cells from ovaries, e.g. ovarian follicle cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2511/00—Cells for large scale production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/30—Synthetic polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/50—Proteins
    • C12N2533/54—Collagen; Gelatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/70—Polysaccharides
    • C12N2533/74—Alginate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/70—Polysaccharides
    • C12N2533/78—Cellulose
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2537/00—Supports and/or coatings for cell culture characterised by physical or chemical treatment
    • C12N2537/10—Cross-linking
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0068—General culture methods using substrates

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)

Description

本発明は、抗体、生理活性物質等の生産用のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ、当該ファイバの製造方法、及び当該ファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造方法に関する。
これ迄に、動物細胞を用いた培養による、抗体、生理活性物質（例えば、インターフェロン、エリスロポエチン、ＩＬ－２（インターロイキン－２）、ＣＳＦ（コロニー刺激因子）、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）、等）等の種々の生産方法が知られていた。
抗体生産の場合、抗体産生細胞としては、ＣＨＯ細胞（チャイニーズハムスター卵巣由来）、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞等が宿主細胞として用いられ、とりわけ、ＣＨＯ細胞は、浮遊培養が可能な細胞であり、又細胞の増殖速度が速く、ＣＨＯ細胞の大量培養により、目的のタンパク質を大量生産することが容易なことから、抗体の製造に頻用されている。
近年、抗体医薬品の開発・製造において、抗体医薬品の安定生産、低コスト化への取組みが求められており、それらを達成するべく、より生産性の高い効率的な生産システム（例えば、連続生産方法、小規模生産設備による必要な量の抗体産生の為の新規な培養技術、等）の開発が注目されている。
抗体産生細胞の培養は、抗体産生細胞株をスピナーフラスコ等で細胞を起こした後に、培地組成・温度・攪拌条件・ガス交換・ｐＨ等の培養条件を制御しながら拡大培養を行い、最終的に数千から１万Ｌスケールの大規模な生産培養タンクにて培養が行われる。
抗体産生細胞を高密度で連続培養する場合、（１）細胞と培養液の分離方法、（２）効果的な酸素の供給方法、等が問題になる場合がある。（１）および（２）について、種々の改善が図られているものの、抗体を効率的に生産させるためには、他の種々の問題を解決することが必要とされている。
コア層に各種細胞が含まれ、シェル層がアルギン酸ゲルからなる、コア・シェル構造を有するアルギン酸ゲルファイバが知られている（特許文献１：国際公開第２０１１／０４６１０５号パンフレット、特許文献２：特開２０１６－７７２２９号公報）。
コア層に抗体産生細胞が含まれ、シェル層がアルギン酸ゲルからなる、コア・シェル構造を有するアルギン酸ゲルファイバが知られている（特許文献３：国際公開第２０２０／０３２２２１号パンフレット）。
中空部に各種細胞が含まれ、外殻層がアルギン酸ゲルである、アルギン酸ゲル中空ファイバが知られている（特許文献４：国際公開第２０１５／１７８４２７号パンフレット、特許文献５：特許第６６０１９３１号公報、特許文献６：特開２０１４－２３６６９８号公報）。
細胞（具体的には、ヒト皮膚線維芽細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）を含むアルギン酸ハイドロゲルファイバを、カチオン性水溶性ポリマーで表面が被覆されたナノ粒子を含む接着剤を用いて接着したバンドルが知られている（特許文献７：国際公開第２０１９／０７８２５１号パンフレット、特許文献８：国際公開第２０１９／１２３８８６号パンフレット）。
神経幹細胞又は神経幹細胞を含むアルギン酸ハイドロゲルファイバを、キトサンを用いてバンドル化した移植用神経束が知られている（特許文献９：特開２０１４－１３６１２８号公報）。
接着性細胞（具体的には、Ｃ２Ｃ１２細胞）、マイクロキャリア、及びゲル状の多糖類（具体的には、アルギン酸ゲル）を含む混合物がポリアミノ酸で被覆されている細胞構造体（例えば、シート状（板状）、ファイバー状（繊維状）、球状等が挙げられる）が知られている（特許文献１０：特開２０１９－０７５９９３号公報）。
細胞（２９３／ＧＦＰ細胞）が含まれるアルギン酸カルシウムマイクロファイバをポリ－Ｌ－リジンで被覆し、クエン酸ナトリウム溶液で溶解して得られた、管状ゲルが知られている（非特許文献１：ＰＡ－Ｌａｂ Ｃｈｉｐ， ２００８， ８， ｐｐ．１２５５－１２５７）。
アルギン酸の任意の１つ以上のカルボキシル基に、アミド結合及び２価のリンカーを介して環状アルキン基又はアジド基が導入された化学修飾アルギン酸誘導体が知られている（特許文献１１：国際公開第２０１９／２４０２１９号パンフレット、特許文献１２：国際公開第２０２１／１２５２５５号パンフレット）。
コア層に抗体産生細胞が含まれ、シェル層が化学修飾アルギン酸誘導体から形成される架橋アルギン酸ゲルからなる、コア・シェル構造を有するアルギン酸ゲルファイバが知られている（特許文献１３：国際公開第２０２１／１２５２７９号パンフレット）。
細胞（３Ｔ３およびＨｅＬａ細胞）が含まれるアルギン酸プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ａｌｇｉｎａｔｅ， ＰＧＡ）およびアルギン酸ナトリウム溶液から形成されるコア層を、アルギン酸ナトリウム溶液から形成されるシェル層で挟み込みこんだ、異方性カルシウムアルギネートハイドロゲルファイバーを、ポリ－Ｌ－リジンで被覆したマイクロファイバーが知られている（非特許文献２：Ｓｏｆｔ Ｍａｔｔｅｒ （２０１２）， ８（１１）， ｐｐ．３１２２－３１３０）。
特許文献１～１３及び非特許文献１、２には、本発明の抗体、生理活性物質等の生産用のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ、当該ゲルファイバの製造方法、及び当該ゲルファイバを用いる抗体等の製造方法が開示されていないし、示唆もされていない。
国際公開第２０１１／０４６１０５号パンフレット 特開２０１６－７７２２９号公報 国際公開第２０２０／０３２２２１号パンフレット 国際公開第２０１５／１７８４２７号パンフレット 特許第６６０１９３１号公報 特開２０１４－２３６６９８号公報 国際公開第２０１９／０７８２５１号パンフレット 国際公開第２０１９／１２３８８６号パンフレット 特開２０１４－１３６１２８号公報 特開２０１９－０７５９９３号公報 国際公開第２０１９／２４０２１９号パンフレット 国際公開第２０２１／１２５２５５号パンフレット 国際公開第２０２１／１２５２７９号パンフレット
PA-Lab Chip, 2008, 8, pp.1255-1257 Soft Matter, (2012), 8(11), pp.3122-3130
抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含んだアルギン酸ゲルファイバ、とりわけ、ファイバが分解することなく、長期間（例えば、７日以上、１４日以上、２８日以上等）に渡って細胞培養が可能となる、より実用的なアルギン酸ゲルファイバが求められていた。
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含み、後述の態様［１］に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルを、カチオン性ポリマーで被覆することにより形成される、抗体、生理活性物質等の生産用の新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバおよびその製造方法を見出した。又、当該ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いて、抗体、生理活性物質等の産生細胞の培養を行ったところ、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバが分解することなく、抗体、生理活性物質等を長期間連続して産生できることを見出し本発明を完成するに至った。
本発明により、新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ及び当該ゲルファイバを用いた、抗体、生理活性物質等の生産方法が提供される。いくつかの態様では、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞、後述の態様［１］に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体等が含まれる混合液を用いて作製される架橋アルギン酸ゲルを、カチオン性ポリマーで被覆することにより、長期間連続して抗体、生理活性物質等を産生できるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバが提供される。
後述の実施例から、抗体産生細胞（抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞）又は生理活性物質産生細胞（膵β細胞由来のＭＩＮ６細胞）、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体等が含まれる混合液を用いて形成される架橋アルギン酸ゲル（コア層とも言う）を、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリアリルアミン、ポリエチレンイミン、又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）のカチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層とも言う）で被覆することで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを作製することができ、当該ファイバを用いて培養したところ、長期間（後述の実施例において、最大４７日間）連続して、抗体またはインスリンが産生できることが分かった。本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞に適した環境を提供しており、当該ファイバのコア層で産生された抗体、生理活性物質等は、コア層、カチオン性ポリマー層を連続的に透過し、当該ファイバ外に放出される特徴を有する。
本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、抗体、生理活性物質等の生産に適した環境を提供する。コア層に封入されている抗体、生理活性物質等の産生細胞への物理的ストレスが少なく、封入した当該細胞が長期間に渡り抗体、生理活性物質等を産生し続けることが期待される。従って、このようなファイバを用いた抗体、生理活性物質等の製造方法は、抗体、生理活性物質等の生産効率を飛躍的に向上させることが期待できる。例えば、抗体生産の場合、大規模な培養タンクを要する抗体の浮遊培養とは異なり、小規模の生産設備にて抗体を製造することも期待される。少量・多種品目の抗体医薬品製造にも適した次世代型抗体医薬品の連続生産技術としても期待される。
ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの断面図である。 ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層とカチオン性ポリマー層との模式図である。 ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造過程の１つの態様を説明する模式図である。 ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの横断面である。コア層で産生された抗体、生理活性物質等、代謝物及び老廃物、並びに培養液（栄養源）及び酸素がカチオン性ポリマー層を透過することを説明する模式図である。 （実施例Ｆ２－Ｃ）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ２－Ａ－５－ｃ１）の培養前の写真である。 （実施例Ｆ２－Ｃ）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ２－Ａ－５－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例Ｆ３）で作製されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの蛍光顕微鏡での写真である。 （実施例Ｆ９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ９－３－ｃ３）の培養前の写真である。 （実施例Ｆ９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ９－３－ｃ３）の培養後の写真である。 （実施例Ｆ９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ９－２－ｃ２）の培養前の写真である。 （実施例Ｆ９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ９－２－ｃ２）の培養後の写真である。 （実施例Ｆ１６－Ａ）の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－１６Ａ）の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－１－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－２－ｃ１）の培養前の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－２－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－３－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－４－ｃ１）の培養前の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－４－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１８）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１８－１－ｃ１）の培養前の写真である。 （実施例ＦＩ－１８）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１８－１－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１８）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１８－２－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１８）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１８－３－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ１９－Ｇ１９）の培養前の写真である。 （実施例ＦＩ－１９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ１９－Ｇ１９）の培養後の写真である。
［具体的態様］
ここでは、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ、当該ファイバの製造方法、及び当該ファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造方法の具体的態様について説明する。より具体的には、以下の態様［１］～［７Ｃ－２］に記載の通りである。
［１］第１の態様は、次の通りである。式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルに包埋された抗体産生細胞又は生理活性物質産生細胞（本明細書中、「抗体、生理活性物質等を産生できる細胞」ともいう）を含むコア層と、前記コア層を被覆するカチオン性ポリマー層を含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。又は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と、下記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルとを含むコア層を、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）で被覆して得られる、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
［式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体］
下記式（Ｉ）：
Figure 0007450793000001
［式（Ｉ）中、（ＡＬＧ）は、アルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；Ａｋｎ－Ｌ１－（Ａｋｎは環状アルキン基を表し；－Ｌ１－は、環状アルキン基（Ａｋｎ）と結合する２価のリンカーである）は、下記表：
Figure 0007450793000002
Figure 0007450793000003
に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基である］で表される化学修飾アルギン酸誘導体。
［式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体］
下記式（ＩＩ）：
Figure 0007450793000004
［式（ＩＩ）中、（ＡＬＧ）はアルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ２－は、下記表：
Figure 0007450793000005
に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択されるリンカーを表わす］で表される化学修飾アルギン酸誘導体。
［１Ａ］第１Ａの態様は、次の通りである。コア層と、前記コア層の外側に配置されるカチオン性ポリマー層を含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバであって、前記コア層は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋が形成された架橋アルギン酸ゲルとを含み、前記カチオン性ポリマー層は、カチオン性ポリマーである、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、前記態様［１］に定義されたものと同じである。
［１－１－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体のＡｋｎ－Ｌ１－は、好ましくは、下記表：
Figure 0007450793000006
Figure 0007450793000007
に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基である。
［１－１－２］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体のＡｋｎ－Ｌ１－は、より好ましくは、下記表：
Figure 0007450793000008
Figure 0007450793000009
に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基である。
［１－１－３］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体のＡｋｎ－Ｌ１－は、更に好ましくは、下記部分構造式（各式中、破線右側は含まない）：
Figure 0007450793000010
からなる群より選択される基である。
［１－１－４］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体のＡｋｎ－Ｌ１－は、特に好ましくは、下記部分構造式（各式中、破線右側は含まない）：
Figure 0007450793000011
から選択される基である。
［１－１－５］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体のＡｋｎ－Ｌ１－は、下記表：
Figure 0007450793000012
に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基であり；
好ましくは、下記表：
Figure 0007450793000013
に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基であり；
より好ましくは、下記表：
Figure 0007450793000014
に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基であり；
更に好ましくは、下記部分構造式（各式中、破線右側は含まない）：
Figure 0007450793000015
から選択される基である。
［１－２－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の－Ｌ２－は、好ましくは、下記表：
Figure 0007450793000016
に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択される基である。
［１－２－２］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の－Ｌ２－は、より好ましくは、下記表：
Figure 0007450793000017
に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択される基である。
［１－２－３］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の－Ｌ２－は、更に好ましくは、下記部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）：
Figure 0007450793000018
からなる群より選択される基である。
［１－２－４］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の－Ｌ２－は、特に好ましくは、下記部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）：
Figure 0007450793000019
からなる群より選択される基である。
［１－２－５］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の－Ｌ２－は、下記表：
Figure 0007450793000020
に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択される基であり；
好ましくは、下記部分構造式（各式中、破線右側は含まない）：
Figure 0007450793000021
に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択される基であり；
より好ましくは、下記部分構造式（各式中、破線右側は含まない）：
Figure 0007450793000022
に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択される基であり；
更に好ましくは、下記部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）：
Figure 0007450793000023
からなる群より選択される基である。
［１－２Ａ］前記態様［１］～［１－２－５］に記載されたＡｋｎ、－Ｌ１－、－Ｌ２－の定義を適宜組み合わせた式（Ｉ）および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いることにより、本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層における、架橋アルギン酸ゲルの好ましい態様を任意に形成し得る。
［１Ｘ］第１Ｘの態様は、次の通りである。抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と、下記式（Ｉ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体及び下記式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋が形成された架橋アルギン酸ゲルとを含むコア層を、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）で被覆して得られる、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
［式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体］
下記式（Ｉ－Ａ）：
Figure 0007450793000024
［式（Ｉ－Ａ）中、（ＡＬＧ）はアルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ１Ａ－は、下記部分構造式：
Figure 0007450793000025
（式中、ｘ＝１～５０であり；
式中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、－Ｓ－、Ｃ３～８シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環、又は５～６員非芳香族複素環等の基で１～１５個、置換されていても良く；
式中の－ＣＨ２－の水素原子は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）、ヒドロキシＣ１－３アルキル基、Ｃ２－４アルカノイル基、－Ｓ－Ｃ１－３アルキル基、－ＳＯ２－Ｃ１－３アルキル基、フェニル基、ベンジル基、５～６員芳香族複素環、又は５～６員非芳香族複素環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
Ａｋｙは、環状アルキン基である）（式中、両端の破線外側は含まない）］で表される化学修飾アルギン酸誘導体。
［式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体］
下記式（ＩＩ－Ａ）：
Figure 0007450793000026
［式（ＩＩ－Ａ）中、（ＡＬＧ）はアルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ２Ａ－は、下記部分構造式：
Figure 0007450793000027
（式中、ｙ＝１～５０であり；
式中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、－Ｓ－、Ｃ３～８シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環、又は５～６員非芳香族複素環等の基で１～１５個、置換されていても良く；
式中の－ＣＨ２－の水素原子は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）、ヒドロキシＣ１－３アルキル基、Ｃ２－４アルカノイル基、－Ｓ－Ｃ１－３アルキル基、－ＳＯ２－Ｃ１－３アルキル基、フェニル基、ベンジル基、５～６員芳香族複素環、又は５～６員非芳香族複素環等の基で１～１０個、置換されていても良い）（式中、両端の破線外側は含まない）］で表される化学修飾アルギン酸誘導体。
［１Ｙ］第１Ｙの態様は、次の通りである。コア層と、前記コア層の外側に配置されるカチオン性ポリマー層を含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバであって、前記コア層は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と式（Ｉ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体及び式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋が形成された架橋アルギン酸ゲルとを含み、前記カチオン性ポリマー層は、カチオン性ポリマーである、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、前記態様［１Ｘ］に定義されたものと同じである。
［１Ｘ－１］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、式（Ｉ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体において、－Ｌ１Ａ－は、
好ましくは、ｘ＝２～４５であり、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、シクロヘキサン環、６員芳香族複素環、６員非芳香族複素環、ベンゼン環等の基で１～１５個、置換されていても良く、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－の水素原子は、水酸基、アミノ基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基で１～１０個、置換されていても良く；
より好ましくは、ｘ＝２～４５であり、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、シクロヘキサン環、ベンゼン環等の基で１～１５個、置換されていても良く；
更に好ましくは、ｘ＝２～４５であり、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、ベンゼン環等の基で１～１５個、置換されていても良く；
特に好ましくは、ｘ＝３～２５であり、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、ベンゼン環等の基で１～１５個、置換されていても良く；
最も好ましくは、ｘ＝３～１５であり、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、ベンゼン環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
具体的には、例えば、－Ｌ１Ａ－は、下記部分構造式：
Figure 0007450793000028
（各式中、両端の破線外側は含まない）から選ばれるリンカーであり；
より具体的には、－Ｌ１Ａ－は、下記部分構造式：
Figure 0007450793000029
（各式中、両端の破線外側は含まない）から選ばれるリンカーである。
［１Ｘ－２］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、式（Ｉ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体において、Ａｋｙは、
好ましくは、７～９員環状アルキン基（環状アルキン基の－ＣＨ２－の水素原子は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；環状アルキン基は、Ｃ３～８シクロアルキル環、ベンゼン環、又は５～６員芳香族複素環が１～３個縮環していてもよい）であり；
より好ましくは、８員環状アルキン基（環状アルキン基の－ＣＨ２－の水素原子は、ハロゲン原子、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；環状アルキン基は、シクロプロパン環、ベンゼン環、又は５員芳香族複素環が１～３個縮環していてもよい）であり；
更に好ましくは、下記部分構造式：
Figure 0007450793000030
（式中、両端の破線右側は含まない）から選択される基であり；
特に好ましくは、下記部分構造式：
Figure 0007450793000031
（式中、両端の破線右側は含まない）から選択される基であり；
最も好ましくは、下記部分構造式：
Figure 0007450793000032
（式中、両端の破線右側は含まない）から選択される基である。
［１Ｘ－３］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体において、－Ｌ２Ａ－は、
好ましくは、ｙ＝５～４０であり、－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、シクロヘキサン環、６員芳香族複素環、６員非芳香族複素環、ベンゼン環等の基で１～１５個、置換されていても良く、
－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－の水素原子は、水酸基、アミノ基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基で１～１０個、置換されていても良く；
より好ましくは、ｙ＝５～４０であり、－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、シクロヘキサン環、ベンゼン環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
更に好ましくは、ｙ＝５～４０であり、－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、ベンゼン環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
特に好ましくは、ｙ＝５～２０であり、－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、ベンゼン環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
最も好ましくは、ｙ＝５～１５であり、－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、ベンゼン環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
具体的には、例えば、－Ｌ２Ａ－は、下記部分構造式：
Figure 0007450793000033
（式中、両端の破線外側は含まない）から選ばれるリンカーであり；
より具体的には、－Ｌ２Ａ－は、下記部分構造式：
Figure 0007450793000034
（式中、両端の破線外側は含まない）から選ばれるリンカーである。
［１Ｘ－４］前記態様［１Ｘ］、［１Ｙ］、［１Ｘ－１］～［１Ｘ－３］に記載されたＡｋｙ、－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－の定義を適宜組み合わせた式（Ｉ－Ａ）および式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いることにより、本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層における、架橋アルギン酸ゲルの好ましい態様を任意に形成し得る。
［１－３］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、例えば、抗体（ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体等の各種のモノクローナル抗体）産生細胞、生理活性物質産生細胞、及び医薬品原料、化学原料、食品原料等として有用な各種の有用物質を産生できる細胞からなる群より選択される細胞である。
［１－３－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる、抗体を産生できる細胞（抗体産生細胞とも言う）は、ハイブリドーマまたは抗体発現ベクターにより形質転換された培養細胞であり、その宿主として用いられる培養細胞（宿主細胞）が、例えば、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、ＰＥＲＣ６細胞、ＹＢ２／０細胞、ＹＥ２／０細胞、１Ｒ９８３Ｆ細胞、Ｎａｍａｌｗａ細胞、Ｗｉｌ－２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、Ｍｏｌｔ－４細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、ＫＧＨ６細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞、Ｃ１２７細胞、ＪＣ細胞、ＬＡ７細胞、ＺＲ－４５－３０細胞、ｈＴＥＲＴ細胞、ＮＭ２Ｃ５細胞、ＵＡＣＣ－８１２細胞等からなる群から選択される細胞である。
［１－３－２］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体産生細胞は、好ましくは、その宿主細胞が、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、及びＰＥＲＣ６細胞からなる群から選択される細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、及びＮＳ０細胞からなる群から選択される細胞であり；更に好ましくは、ＣＨＯ細胞またはＣＨＯ細胞亜株である。
［１－３－２－１］前記態様［１－３－２］において、抗体産生細胞は、好ましくは、浮遊細胞または浮遊培養可能なように馴化された細胞または細胞亜株であり、このような細胞の好ましい例、より好ましい例、更に好ましい例は、前記態様［１－３－２］に記載の通りである。
［１－３－３］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体産生細胞は、例えば、その宿主細胞がＣＨＯ細胞である抗体産生ＣＨＯ細胞であり、例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等からなる群から選択されるＣＨＯ細胞であり；例えば、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、及び抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞からなる群から選択されるＣＨＯ細胞であり；例えば、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞である。
［１－３－４］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる生理活性物質を産生できる細胞（生理活性物質産生細胞とも言う）は、例えば、インスリン分泌細胞、膵島、膵島細胞、ドーパミン分泌細胞、脳下垂体細胞、成長ホルモン分泌細胞、副甲状腺細胞、神経成長因子分泌細胞、血液凝固因子分泌細胞、肝細胞、上皮小体細胞、エリスロポエチン分泌細胞、ノルエピネフリン分泌細胞、生理活性物質発現ベクター（遺伝子組換え細胞）等からなる群から選択される細胞である。
［１－３－５］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる生理活性物質産生細胞は、好ましくは、インスリン分泌細胞、膵島、及び膵島細胞からなる群から選択される細胞であり；より好ましくは、膵β細胞由来のＭＩＮ６細胞である。
［１－４］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができる成分としては、例えば、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、培地、培養液、コラーゲン溶液、メチルセルロース、スクロース溶液等からなる群から選択される成分である。
［１－４－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができる成分としては、好ましくは、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、培地、及び培養液からなる群から選択される成分である。
［１－５］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量は、例えば、約１００，０００Ｄａ～約３，０００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲である。
［１－６］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量は、例えば、約１００，０００Ｄａ～約３，０００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲である。
［１－７］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基（Ａｋｎ－Ｌ１－ＮＨ２基：Ａｋｎ－Ｌ１－は、前記態様［１］中の定義と同じである）の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１０ｍｏｌ％の範囲である。
［１－７Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基（Ａｋｙ－Ｌ１Ａ－ＮＨ２基：Ａｋｙ、－Ｌ１Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じである）の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１０ｍｏｌ％の範囲である。
［１－８］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基（Ｎ３－Ｌ２－ＮＨ２基：－Ｌ２－は、前記態様［１］中の定義と同じである）の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１５ｍｏｌ％の範囲である。
［１－８Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基（Ｎ３－Ｌ２Ａ－ＮＨ２基：－Ｌ２Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じである）の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１５ｍｏｌ％の範囲である。
［１－９］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量は、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約７００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲である。
［１－９－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量は、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは、約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲；より好ましくは、約７００，０００Ｄａ～約１，４００，０００Ｄａ、約８００，０００Ｄａ～約１，５００，０００Ｄａ、約１，４００，０００～約２，０００，０００Ｄａ、または約１，５００，０００～約２，５００，０００から選ばれる範囲である。
［１－９－２］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量は、好ましくは、約１，４００，０００～約２，０００，０００、又は約７００，０００ ～約１，４００，０００、又は約８００，０００～約１，５００，０００から選ばれる範囲であり；より好ましくは、約１，４００，０００～約２，０００，０００の範囲である。
［１－１０－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
［１－１０－１Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
［１－１０－２］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
［１－１０－２Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
［１－１０－３］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体と式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液の濃度は、例えば、約０．０２～約２．０重量％の範囲であり；好ましくは、約０．１～約２．０重量％の範囲であり；より好ましくは約０．１５～約１．５重量％の範囲である。
［１－１０－３Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体と式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液の濃度は、例えば、約０．０２～約２．０重量％の範囲であり；好ましくは、約０．１～約２．０重量％の範囲であり；より好ましくは約０．１５～約１．５重量％の範囲である。
［１－１０－４］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の濃度は、例えば、０～約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０～約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０～約１．７重量％の範囲である。
［１－１０－４－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の濃度(ＣＡＬＧ)は、例えば、０＜ＣＡＬＧ≦約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．７重量％の範囲である。
［１－１１－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度は、好ましくは約０．５～約２．０重量％であり；より好ましくは、約１．０重量％、約１．５重量％及び約２．０重量％から選ばれる濃度である。
［１－１１－１－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度（ＣＴＯＬ）は、例えば、０＜ＣＴＯＬ≦約２．０重量％であり；好ましくは約０．５～約２．０重量％；より好ましくは約１．０～約２．０重量％であり；更に好ましくは、約１．０重量％、約１．５重量％及び約２．０重量％から選ばれる濃度である。
［１－１１－１－１Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度（ＣＴＯＬ）は、例えば、０＜ＣＴＯＬ≦約２．０重量％であり；好ましくは約０．５～約２．０重量％；より好ましくは約１．０～約２．０重量％であり；更に好ましくは、約１．０重量％、約１．５重量％及び約２．０重量％から選ばれる濃度である。
［１－１１－２］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、好ましくは、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、および（約０．３４：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－２－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；好ましくは、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、および（約０．３４：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－２－１Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１ｘ（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；好ましくは、（Ｃ１ｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、および（約０．３４：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－３］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、好ましくは、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、および（約０．１７：約０．１７：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－３－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ＋Ｃ１Ｎ＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；好ましくは、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、および（約０．１７：約０．１７：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－３－１Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａｘ（重量％））、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎｘ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ＋Ｃ１Ｎｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；好ましくは、（Ｃ１Ａｘ：Ｃ１Ｎｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、および（約０．１７：約０．１７：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－４］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の混合溶液における、各誘導体の溶液の容量比（ｖ１、ｖ２）は、例えば、ｖ１＋ｖ２＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１＋ｖ２＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５である。
［１－１１－４Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の混合溶液における、各誘導体の溶液の容量比（ｖ１ｘ、ｖ２ｘ）は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５において、０＜ｖ１ｘ＜１５、０＜ｖ２ｘ＜１５である。
［１－１１－５］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、およびアルギン酸溶液の混合溶液における、各々の溶液の容量（ｖ１、ｖ２、ｖ３）の容量比は、例えば、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２：ｖ３）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５、０＜ｖ３＜１５である。
［１－１１－５Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、およびアルギン酸溶液の混合溶液における、各々の溶液の容量（ｖ１ｘ、ｖ２ｘ、ｖ３ｘ）の容量比は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ：ｖ３ｘ）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５において、０＜ｖ１ｘ＜１５、０＜ｖ２ｘ＜１５、０＜ｖ３ｘ＜１５である。
［１－１２］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルが、下記式（ＩＩＩ－Ｌ）：
Figure 0007450793000035

［式（ＩＩＩ－Ｌ）中、両端の－ＣＯＮＨ－及び－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；
－Ｘ－は、下記表：
Figure 0007450793000036
に記載された部分構造式の群から選択される環状基であり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｌ１－は、－Ｘ－が、（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、下記表：
Figure 0007450793000037
に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｌ１－は、－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、下記表：
Figure 0007450793000038
に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｌ２－は、前記態様［１］中の式（ＩＩ）の定義と同じである］で表わされる基を介した化学架橋を含むものである。
［１－１２－１］前記態様［１－１２］に記載の式（ＩＩＩ－Ｌ）において、－Ｌ１－は前記態様［１－１２］であって、好ましくは、－Ｘ－が、（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、下記表：
Figure 0007450793000039
に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、下記表：
Figure 0007450793000040
に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
より好ましくは、－Ｘ－が、（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、下記表：
Figure 0007450793000041
に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、下記表：
Figure 0007450793000042
に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
更に好ましくは、－Ｘ－が、（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、下記部分構造式：
Figure 0007450793000043
の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、下記部分構造式：
Figure 0007450793000044
の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
特に好ましくは、－Ｘ－が、（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、下記部分構造式：
Figure 0007450793000045
の２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、下記部分構造式：
Figure 0007450793000046
の２価のリンカーである（各式中、両端の破線外側は含まない）。
［１－１２－２］前記態様［１－１２］に記載の式（ＩＩＩ－Ｌ）において、好ましい、より好ましい、更に好ましい、特に好ましい－Ｌ２－は、各々、前記態様［１－２－１］～［１－２－４］に記載された定義と同じである。
［１－１２－３］前記態様［１－１２］において、式（ＩＩＩ－Ｌ）で表わされる基の－Ｌ２－Ｘ－Ｌ１－の好ましい組み合わせは、下記表の式：
Figure 0007450793000047
の群から選択される部分構造で示される通りであり（表中の－Ｌ１－は前記態様［１－１２－１］に記載の好ましい－Ｌ１－の定義と同じであり；－Ｌ２－は前記態様［１－２－１］に記載の好ましい－Ｌ２－の定義と同じであり；－Ｘ－は前記態様［１－１２］に記載の通りである）；
より好ましくは、－Ｌ２－Ｘ－Ｌ１－の組み合わせは、下記表の式：
Figure 0007450793000048
の群から選択される部分構造で示される通りであり（表中の－Ｌ１－は前記態様［１－１２－１］に記載のより好ましい－Ｌ１－の定義と同じであり；－Ｌ２－は前記態様［１－２－２］に記載のより好ましい－Ｌ２－の定義と同じであり；－Ｘ－は前記態様［１－１２］に記載の通りである）；
更に好ましくは、－Ｌ２－Ｘ－Ｌ１－の組み合わせは、下記表の式：
Figure 0007450793000049
の群から選択される部分構造で示される通りであり（表中の－Ｌ１－は前記態様［１－１２－１］に記載の更に好ましい－Ｌ１－の定義と同じであり；－Ｌ２－は前記態様［１－２－３］に記載の更に好ましい－Ｌ２－の定義と同じであり；－Ｘ－は前記態様［１－１２］に記載の通りである）；
特に好ましくは、－Ｌ２－Ｘ－Ｌ１－の組み合わせは、下記表の式：
Figure 0007450793000050
の群から選択される部分構造で示される通りである（表中の－Ｌ１－は前記態様［１－１２－１］に記載の特に好ましい－Ｌ１－の定義と同じであり；－Ｌ２－は前記態様［１－２－４］に記載の特に好ましい－Ｌ２－の定義と同じであり；－Ｘ－は前記態様［１－１２］に記載の通りである）。
［１－１２Ａ］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルが、前記態様［１－１２］に記載の式（ＩＩＩ－Ｌ）［式（ＩＩＩ－Ｌ）中、両端の－ＣＯＮＨ－及び－ＮＨＣＯ－、－Ｘ－は、前記態様［１－１２］中の定義と同じであり；－Ｌ１－は、－Ｘ－が（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、前記態様［１－１２］に記載の部分構造式（ＬＫ－１ａ）で表される基と同じであり；－Ｘ－が（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、前記態様［１－１２］に記載の部分構造式（ＬＫ－２－１）で表される基と同じであり；－Ｌ２－は、前記態様［１］に記載の部分構造式（ＬＮ－１）、（ＬＮ－３）及び（ＬＮ－５）から選ばれる基と同じである］で表わされる基を介した化学架橋を含むものである。
［１－１２Ａ－１］前記態様［１－１２Ａ］において、－Ｘ－が（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、好ましい、より好ましい、更に好ましい－Ｌ１－は、各々、前記態様［１－１２－１］に記載の部分構造式（ＬＫ－１ａ－１）、（ＬＫ－１ａ－２）、（ＬＫ－１ａ－３ａ）、（ＬＫ－１ａ－３ｂ）で表される基と同じであり；－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、好ましい、より好ましい、更に好ましい－Ｌ１－は、各々、前記態様［１－１２－１］に記載の部分構造式（ＬＫ－２－１）、（ＬＫ－２－２）、（ＬＫ－２－３）で表される基と同じであり；－Ｌ２－は、好ましくは前記態様［１－２－１］に記載の部分構造式（ＬＮ－１－１）、（ＬＮ－３－１）、（ＬＮ－５－１）で表される基と同じであり、より好ましくは前記態様［１－２－２］に記載の部分構造式（ＬＮ－１－２）、（ＬＮ－３－２）、（ＬＮ－５－２）で表される基と同じである、更に好ましくは前記態様［１－２－３］に記載の部分構造式（ＬＮ－１－３）、（ＬＮ－３－３ａ）、（ＬＮ－５－３ａ）で表される基と同じである。
［１－１２Ａ－２］前記態様［１－１２Ａ］において、式（ＩＩＩ－Ｌ）で表わされる基の－Ｌ２－Ｘ－Ｌ１－の好ましい、より好ましい、更に好ましい組み合わせは、下記表の式：
Figure 0007450793000051
の群から選択される部分構造で示される通りである（表中の－Ｌ１－、－Ｌ２－は、前記態様［１－１２Ａ－１］に記載の定義と同じであり；－Ｘ－は前記態様［１－１２］に記載の通りである）。
［１－１２Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルが、下記式（ＩＩＩ－Ｌｘ）：
Figure 0007450793000052
［式（ＩＩＩ－Ｌｘ）中、両端の－ＣＯＮＨ－及び－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；
－Ｌ１Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じであり；
－Ｌ２Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じであり；
－ＸＡ－は、下記部分構造式：
Figure 0007450793000053
（式中、Ｃ５－９シクロアルケン環中の－ＣＨ２－は、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、又は＝Ｃ（＝Ｏ）からなる群から選ばれる基で１～４個置換されていても良く；Ｃ５－９シクロアルケン環中の－ＣＨ２－の水素原子は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨＣ１－３アルキル基、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；Ｃ５－９シクロアルケン環に、Ｃ３－８シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環が１～３個縮環していてもよく；Ｃ５－９シクロアルケン環に、Ｃ３－８シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環が縮環している場合、－Ｌ１Ａ－は、当該Ｃ３－８シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環に置換しても良い）］で表される環状基（式中、両端の破線外側は含まない）を介して結合した架橋アルギン酸ゲル。
［１－１２Ｘ－１］前記態様［１－１２Ｘ］において、好ましい、より好ましい、更に好ましい、特に好ましい、最も好ましい－Ｌ１A－は、前記前記態様［１Ｘ－１］に記載の、－Ｌ１A－の定義と同じである。
［１－１２Ｘ－２］前記態様［１－１２Ｘ］において、好ましい、より好ましい、更に好ましい、特に好ましい、最も好ましい－Ｌ２A－は、前記前記態様［１Ｘ－３］に記載の、－Ｌ２A－の定義と同じである。
［１－１２Ｘ－３］前記態様［１－１２Ｘ］において、－ＸＡ－は好ましくは、下記部分構造式：
Figure 0007450793000054
の群から選択される環状基であり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
より好ましくは、下記部分構造式：
Figure 0007450793000055
の群から選択される環状基であり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
更に好ましくは、下記部分構造式：
Figure 0007450793000056
の群から選択される環状基である（各式中、両端の破線外側は含まない）。
［１－１２Ｘ－４］前記態様［１－１２Ｘ］～［１－１２Ｘ－３］に記載された、－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－、－ＸＡ－の定義を適宜組み合わせることで、架橋アルギン酸ゲルにおける式（ＩＩＩ－Ｌｘ）の好ましい態様を任意に形成し得る。
［１－１３］前記態様［１］又は［１Ａ］において、コア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルが、前記態様［１－１２］の式（ＩＩＩ－Ｌ）［式（ＩＩＩ－Ｌ）中、各定義は、態様［１－１２］の定義と同じである］又は前記態様［１－１２Ａ］の式（ＩＩＩ－Ｌ）［式（ＩＩＩ－Ｌ）中、各定義は、態様［１－１２Ａ］の定義と同じである］で表わされる基を介した化学架橋及び２価金属イオンを介したイオン架橋を含むものである。
［１－１３Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、コア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルが、前記態様［１－１２Ｘ］の式（ＩＩＩ－Ｌｘ）［式（ＩＩＩ－Ｌｘ）中、各定義は、態様［１－１２Ｘ］の定義と同じである］で表わされる基を介した化学架橋及び２価金属イオンを介したイオン架橋を含むものである。
［１－１３Ａ］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの、イオン架橋形成に用いられる２価金属イオンは、好ましくは、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、バリウムイオン、ストロンチウムイオン及び亜鉛イオンの群から選択される２価金属イオンであり；より好ましくは、カルシウムイオン、バリウムイオン又はストロンチウムイオンであり；更に好ましくは、カルシウムイオン又はバリウムイオンである。
［１－１４］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの、イオン架橋形成に用いられる２価金属イオンを含む水溶液は、塩化カルシウム水溶液、炭酸カルシウム水溶液、グルコン酸カルシウム水溶液、塩化バリウム水溶液、塩化ストロンチウム水溶液等からなる群から選択される２価金属イオンを含む水溶液を供給源とすることができ；好ましくは、塩化カルシウム水溶液又は塩化バリウム水溶液である。
［１－１５－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのカチオン性ポリマー層のカチオン性ポリマーは、ポリアミノ酸、塩基性多糖類、及び塩基性ポリマー等からなる群から選択されるカチオン性ポリマーである。
［１－１５－２］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのカチオン性ポリマー層のカチオン性ポリマーは、好ましくは、ポリアミノ酸である、ポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリ－Ｄ－オルニチン（ＰＤＯ）、ポリ－ＤＬ－オルニチン、ポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ポリ－ＤＬ－リジン、ポリ－Ｌ－アルギニン（ＰＬＡ）、ポリ－Ｄ－アルギニン（ＰＤＡ）、ポリ－ＤＬ－アルギニン、ポリ－Ｌ－ホモアルギニン（ＰＬＨＡ）、ポリ－Ｄ－ホモアルギニン（ＰＤＨＡ）、ポリ－ＤＬ－ホモアルギニン、ポリ－Ｌ－ヒスチジン（ＰＬＨ）、ポリ－Ｄ－ヒスチジン（ＰＤＨ）およびポリ－ＤＬ－ヒスチジンからなる群から選択されるカチオン性ポリマーであり；より好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチンまたはポリ－Ｌ－リジンであり；更に好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチンである。
［１－１５－３］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのカチオン性ポリマー層のカチオン性ポリマーは、キトサンである。
［１－１５－４］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのカチオン性ポリマー層のカチオン性ポリマーは、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリビニルアミン（ＰＶＡ）、ポリエチレンイミン、アリルアミン－ジアリルアミン共重合体、およびアリルアミン－マレイン酸共重合体からなる群から選択されるカチオン性ポリマーであり；好ましくは、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン、又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）であり；より好ましくは、ポリエチレンイミン又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）である。
［１－１６］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの外径は、例えば、約０．１～約２０００μｍ、約０．２μｍ～約２０００μｍ、約０．２～約１０００μｍ、約０．５～約１０００μｍ、約１～約１０００μｍ、約１０～約１０００μｍ、約２０～約１０００μｍ等の範囲である。
前記態様に記載されたＡｋｎ、－Ｌ１－、－Ｌ２－、Ｘの定義を適宜組み合わせた式（Ｉ）および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いることにより、前記態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層における、架橋アルギン酸ゲルの好ましい態様を任意に形成し得る。
前記態様に記載されたＡｋｙ、－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－、ＸＡの定義を適宜組み合わせた式（Ｉ－Ａ）および式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いることにより、前記態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層における、架橋アルギン酸ゲルの好ましい態様を任意に形成し得る。
［１－１７－１］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－１］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－１－５］の好ましいアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－１］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－２－５］の好ましいアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が、前記態様［１－３－１］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－１］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－１Ｂ］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－１］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－１－５］の好ましいアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－１］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－２－５］の好ましいアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が、態様［１Ｂ－３－１］～［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－１］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－２］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、より好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－２］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－１－５］のより好ましいアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－２］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－２－５］のより好ましいアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が前記態様［１－３－２］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］～［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－２Ｂ］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、より好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－２］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－１－５］のより好ましいアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－２］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－２－５］のより好ましいアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が態様［１Ｂ－３－２］～［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］～［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－３］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、更に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－３］に記載のアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－３］に記載のアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が前記態様［１－３－２］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］又は［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－３Ｂ］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、更に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－３］に記載のアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－３］に記載のアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が態様［１Ｂ－３－３］又は［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］又は［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－４］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、特に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－４］に記載のアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－４］に記載のアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞は抗体産生ＣＨＯ細胞であり；カチオン性ポリマー層が、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン、又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）から選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－５］前記態様［１－１７－１］～［１－１７－４］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの架橋アルギン酸ゲルは、前記態様［１－４］～［１－４－１］に記載されたいずれかの添加できる成分を含むものである。
前記態様に記載されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバにおける、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）の各要素を組み合わせることで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの好ましい態様を任意に形成し得る。
［１－１７Ｘ－１］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が、前記態様［１－３－１］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－１］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－１Ｂ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が、態様［１Ｂ－３－１］～［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－１］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－２］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、より好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載のより好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載のより好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載のより好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が前記態様［１－３－２］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］～［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－２Ｂ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、より好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載のより好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載のより好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載のより好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が態様［１Ｂ－３－２］～［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］～［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－３］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、更に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の更に好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の更に好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の更に好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が前記態様［１－３－２］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］又は［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－３Ｂ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、更に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の更に好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の更に好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の更に好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が態様［１Ｂ－３－３］又は［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］又は［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－４］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、特に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の特に好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の特に好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の特に好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞は抗体産生ＣＨＯ細胞であり；カチオン性ポリマー層が、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン、又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）から選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－５］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、最も好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の最も好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の最も好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の最も好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞は抗体産生ＣＨＯ細胞であり；カチオン性ポリマー層が、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン、又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）から選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－５－１］前記態様［１－１７Ｘ－５］において、式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体の－Ｌ１Ａ－は、具体的には、下記部分構造式：
Figure 0007450793000057
（各式中、両端の破線外側は含まない）から選択されるリンカーであり；
Ａｋｙは、具体的には、下記部分構造式：
Figure 0007450793000058
（式中、両端の破線右側は含まない）から選択される環状アルキン基であり；
式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体の－Ｌ２Ａ－は、具体的には、下記部分構造式：
Figure 0007450793000059
（式中、両端の破線外側は含まない）から選択されるリンカーである。
［１－１７Ｘ－６］前記態様［１－１７Ｘ－１］～［１－１７Ｘ－５－１］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの架橋アルギン酸ゲルは、前記態様［１－４］～［１－４－１］に記載されたいずれかの添加できる成分を含むものである。
前記態様に記載されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバにおける、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）の各要素を組み合わせることで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの好ましい態様を任意に形成し得る。
［１Ｂ－３］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、例えば、抗体（ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体等の各種のモノクローナル抗体又はそれらのバイスペシフィック抗体、低分子化抗体、糖鎖改変抗体等の各種の改変型抗体）産生細胞、生理活性物質（酵素、サイトカイン、ホルモン、血液凝固系因子、ワクチン等）産生細胞、医薬品原料、化学原料、食品原料等として有用な各種の有用物質を産生できる細胞が挙げられ；好ましくは、抗体産生細胞または生理活性物質産生細胞である。
［１Ｂ－３－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、抗体を産生するＢ細胞から得られたハイブリドーマ（抗体産生ハイブリドーマ）又は抗体発現ベクターにより形質転換された培養細胞（抗体産生遺伝子組換え細胞）である。
［１Ｂ－３－２］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、好ましくは、抗体を産生する遺伝子組換え動物細胞である。
［１Ｂ－３－３］前記態様［１Ｂ－３－２］において、宿主として用いられる動物細胞は、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株（ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＣＨＯ－ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ－ＤＸＢ１１細胞、又は糖鎖を改変させるように形質転換されたＣＨＯ細胞等）、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、ＰＥＲＣ６細胞、ＹＢ２／０細胞、ＹＥ２／０細胞、１Ｒ９８３Ｆ細胞、Ｎａｍａｌｗａ細胞、Ｗｉｌ－２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、Ｍｏｌｔ－４細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、ＫＧＨ６細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞、Ｃ１２７細胞、ＪＣ細胞、ＬＡ７細胞、ＺＲ－４５－３０細胞、ｈＴＥＲＴ細胞、ＮＭ２Ｃ５細胞、又はＵＡＣＣ－８１２細胞から選択される細胞である。
［１Ｂ－３－４］前記態様［１Ｂ－３－２］において、宿主として用いられる動物細胞は、好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、ＰＥＲＣ６細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、又はＣ１２７細胞から選択される細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、又はＢＨＫ細胞から選択される細胞であり；更に好ましくは、ＣＨＯ細胞またはＣＨＯ細胞亜株である。
［１Ｂ－３－５］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、好ましくは、その宿主細胞がＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、又はＮＳ０細胞から選択される細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞又はＣＨＯ細胞亜株である。
［１Ｂ－３－６］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、バイオ医薬品またはバイオ医薬品原料として用いられる抗体を産生する細胞である。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体産生細胞は、好ましくは、浮遊細胞または浮遊培養可能なように馴化された細胞または亜株である。
［１Ｂ－３－７］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、ムロモナブ－ＣＤ３、トラスツズマブ、リツキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、トシリズマブ、ベバシズマブ、アダリムマブ、セツキシマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、パニツムマブ、ウステキヌマブ、ゴリムマブ、カナキヌマブ、デノスマブ、オファツムマブ、ペルツズマブ、ナタリズマブ、ニボルマブ、アレムツズマブ、セクキヌマブ、ラムシルマブ、イピリムマブ、エボロクマブ、メポリズマブ、アリロクマブ、イキセキズマブ、ブロダルマブ、エロツズマブ、ペムブロリズマブ、サリルマブ、ベズロトクスマブ、ベリムマブ、ダラツムマブ、アベルマブ、デュピルマブ、アテゾリズマブ、エミシズマブ、グセルクマブ、デュルバルマブ、ベドリズマブ、ロモソズマブ、リサンキズマブ、ネシツムマブ、ラブリズマブ、ブロスマブ、イサツキシマブ、チルドラキズマブ、サトラリズマブ、ガルカネズマブ、ジヌツキシマブ、フレマネズマブ、エレヌマブ、カシリビマブ、イムデビマブ、アニフロルマブ、ソトロビマブ、オクレリズマブ、ナキシタマブ、アデュカヌマブ、タファシタマブ、マルジェツキシマブ、ガンテネルマブ、チラゴルマブ、クロバリマブ、ネモリズマブ、カツマクソマブ、プラモタマブ、ファリシマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、ブレンツキシマブ、イノツズマブ、ポラツズマブ、エンホルツマブ、サシツズマブ、ベランタマブ、ロンカスツキシマブ、チソツマブ、ダトポタマブ、パトリツマブ等の抗体を産生する細胞；モガムリズマブ、ベンラリズマブ、オビヌツズマブ、イネビリズマブ等の改変糖鎖を有する抗体を産生する細胞；ラニビズマブ、イダルシズマブ、ブリナツモマブ、ブロルシズマブ、アブシキシマブ、カプラシズマブ、セルトリズマブ等の抗体断片からなる低分子抗体を産生する細胞等から選択される細胞である。
［１Ｂ－３－８］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、抗体産生動物細胞であり、好ましくは、抗体産生ＣＨＯ細胞、抗体産生Ｓｐ２／０細胞又は抗体産生ＮＳ０細胞であり、より好ましくは、抗体産生ＣＨＯ細胞である。
［１Ｂ－３－９］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、好ましくは、その宿主細胞がＣＨＯ細胞である抗体産生ＣＨＯ細胞あり、例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ロモソズマブ産生ＣＨＯ細胞、リサンキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ネシツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ラブリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロスマブ産生ＣＨＯ細胞、イサツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チルドラキズマブ産生ＣＨＯ細胞、サトラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ガルカネズマブ産生ＣＨＯ細胞、ジヌツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、フレマネズマブ産生ＣＨＯ細胞、エレヌマブ産生ＣＨＯ細胞、カシリビマブ産生ＣＨＯ細胞、イムデビマブ産生ＣＨＯ細胞、アニフロルマブ産生ＣＨＯ細胞、ソトロビマブ産生ＣＨＯ細胞、オクレリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナキシタマブ産生ＣＨＯ細胞、アデュカヌマブ産生ＣＨＯ細胞、タファシタマブ産生ＣＨＯ細胞、マルジェツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞、イネビリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブリナツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アブシキシマブ産生ＣＨＯ細胞、カプラシズマブ産生ＣＨＯ細胞、又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞から選択される細胞であり；トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞から選択される細胞である。
［１Ｂ－３－１０］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる生理活性物質産生細胞は、前記態様［１－３－４］に記載された、生理活性物質産生細胞と同じである。
［１Ｂ－３－１１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる生理活性物質産生細胞は、インスリン分泌細胞、膵島、膵島細胞、又は膵β細胞由来のＭＩＮ６細胞からなる群から選択される細胞である。
［１Ｂ－３－１２］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、生理活性物質発現ベクターにより形質転換された培養細胞（生理活性物質産生遺伝子組換え細胞）である。
［１Ｂ－３－１３］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、生理活性物質を産生する遺伝子組換え動物細胞である。
［１Ｂ－３－１４］前記態様［１Ｂ－３－１３］において、宿主として用いられる動物細胞としては、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、又はＰＥＲＣ６細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、又はＣ１２７細胞から選択される細胞であり；好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、及びＮＳ０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、又はＢＨＫ細胞から選択される細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞、又はＣＨＯ細胞亜株である。
［１Ｂ－３－１５］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、好ましくは、その宿主細胞がＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＨＥＫ２９３細胞、又はＢＨＫ細胞から選択される細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞、又はＣＨＯ細胞亜株である。
［１Ｂ－３－１６］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、バイオ医薬品又はバイオ医薬品原料として用いられる生理活性物質を産生する細胞である。
［１Ｂ－３－１７］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、アルテプラーゼ、モンテプラーゼ、イミグルセラーゼ、ベラグルセラーゼ、アガルシダーゼ、ラロニダーゼ、アルグルコシダーゼ、アバルグルコシダーゼ、イデュルスルファーゼ、ガルスルファーゼ、エロスルファーゼ、ラスブリカーゼ、ドルナーゼ、セルリポナーゼ、グルカルピダーゼ、ヒアルロニダーゼ、アスホターゼ等の酵素を産生する細胞；エプタコグ、オクトコグ、ルリオクトコグ、ツロクトコグ、ロノクトコグ、ダモクトコグ、シモクトコグ、ノナコグ、アルブトレペノナコグ、カトリデカコグ、エフラロクトコグ、エフトレノナコグ、トロンボモデュリン、アンチトロンビン、ボニコグ、アルブミン等の血液凝固系因子及び血液関連蛋白を産生する細胞；インスリン、インスリン リスプロ、インスリン アスパルト、インスリン グラルギン、インスリン デテミル、インスリン グルリジン、インスリン デグルデク、ソマトロピン、ソマプシタン、メカセルミン、カルペリチド、ボソリチド、グルカゴン、ホリトロピン、コリオゴナドトロピン、デュラグルチド、リラグルチド、セマグルチド、テデュグルチド、テリパラチド、メトレレプチン等のホルモンを産生する細胞；インターフェロンアルファ－２ａ、インターフェロンアルファ－２ｂ、インターフェロンベータ－１ａ、インターフェロンベータ－１ｂ、インターフェロンガンマ－１ａ等のインターフェロンを産生する細胞；エポエチン、ダルベポエチン、ロミプロスチム等の造血因子を産生する細胞；フィルグラスチム、レノグラスチム、テセロイキン、トラフェルミン、ベルフェルミン、エタネルセプト、アフリベルセプト、デニロイキン ジフチトクス等のサイトカイン及びそれらの受容体を産生する細胞；アバタセプト等の細胞表面抗原、細胞表面受容体及びそれらのリガンドを産生する細胞から選択される細胞である。
［１Ｂ－３－１８］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、生理活性物質産生動物細胞であり、好ましくは、生理活性物質産生ＣＨＯ細胞、生理活性物質産生ＨＥＫ２９３細胞又は生理活性物質産生ＢＨＫ細胞であり、より好ましくは、生理活性物質産生ＣＨＯ細胞である。
［１Ｂ－３－１９］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、好ましくは、その宿主細胞がＣＨＯ細胞である生理活性物質産生細胞ＣＨＯ細胞であり、例えば、アルテプラーゼ産生ＣＨＯ細胞、アルグルコシダーゼ産生ＣＨＯ細胞、ルリオクトコグ産生ＣＨＯ細胞、デュラグルチド産生ＣＨＯ細胞、インターフェロンベータ－１ａ産生ＣＨＯ細胞、ダルベポエチン産生ＣＨＯ細胞、エタネルセプト産生ＣＨＯ細胞、アフリベルセプト産生ＣＨＯ細胞又はアバタセプト産生ＣＨＯ細胞から選択される細胞である。
［２］第２の態様は、次の通りである。抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに前記態様［１］に記載の式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことで得られる架橋アルギン酸ゲルを含むコア層を、カチオン性ポリマーで被覆して形成されるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法であって、
工程（１）：抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに前記態様［１］に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体が含まれる混合溶液を、２価金属イオンを含む溶液中に射出し、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を得る工程、
工程（２）：工程（１）で得られた抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を、カチオン性ポリマーを含む溶液に接触させることで、カチオン性ポリマー層で被覆されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）を得る工程、を含むことを特徴とする、製造方法である。
［２Ａ］前記態様［２］におけるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、前記態様（［１］～［１－１７－５］）のいずれかに記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［２－１］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、前記態様［１－３］～［１－３－５］のいずれか１項に記載の抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と同じである。
［２－１－１］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、前記態様［１Ｂ－３］～［１Ｂ－３－１９］のいずれか１項に記載の抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と同じである。
［２－２］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量は、例えば、約１００，０００Ｄａ～約３，０００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲である。
［２－３］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量は、例えば、約１００，０００Ｄａ～約３，０００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲である。
［２－４］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基：Ａｋｎ－Ｌ１－ＮＨ２基（Ａｋｎ－Ｌ１－は、前記態様［１］～［１－１－４］中の定義と同じである）の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１０ｍｏｌ％の範囲である。
［２－５］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基：Ｎ３－Ｌ２－ＮＨ２基（－Ｌ２－は、前記態様［１］、［１－２－１］～［１－２－４］中の定義と同じである）の導入率が、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１５ｍｏｌ％の範囲である。
［２－６］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できる成分としては、例えば、アルギン酸溶液、培地、培養液、コラーゲン溶液、メチルセルロース、スクロース溶液、又はそれらの混合物等からなる群から選択される成分であり；好ましくは、アルギン酸溶液、培地、培養液、又はそれらの混合物等からなる群から選択される成分である。
［２－７］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量が、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約７００，０００Ｄａ～約１，５００，０００Ｄａの範囲である。
［２－７Ａ］前記態様［２］のファイバ製造の工程（１）で、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量が、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは、約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲；より好ましくは、約７００，０００Ｄａ～約１，４００，０００Ｄａ、約８００，０００Ｄａ～約１，５００，０００Ｄａ、約１，４００，０００～約２，０００，０００Ｄａ、または約１，５００，０００～約２，５００，０００から選ばれる範囲である。
［２－７Ｂ］前記態様［２］のファイバ製造の工程（１）で、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量は、好ましくは、約１，４００，０００～約２，０００，０００、又は約７００，０００ ～約１，４００，０００、又は約８００，０００～約１，５００，０００から選ばれる範囲であり；より好ましくは、約１，４００，０００～約２，０００，０００の範囲である。
［２－８］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
本明細書中、重量％と記載した場合、ｗ／ｖ％を意味するものとする。
［２－９］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
［２－１０］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体と式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液の濃度は、例えば、約０．０２～約２．０重量％の範囲であり；好ましくは、約０．１～約２．０重量％の範囲であり；より好ましくは約０．１５～約１．５重量％の範囲である。
［２－１１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できるアルギン酸溶液の濃度は、例えば、０～約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０～約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０～約１．７重量％の範囲である。
［２－１１－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できるアルギン酸溶液の濃度(ＣＡＬＧ)は、例えば、０＜ＣＡＬＧ≦約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．７重量％の範囲である。
［２－１１－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度は、好ましくは約０．５～約２．０重量％であり；より好ましくは、約１．０重量％、約１．５重量％及び約２．０重量％から選ばれる濃度である。
［２－１１－１－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度（ＣＴＯＬ）は、例えば、０＜ＣＴＯＬ≦約２．０重量％であり、
好ましくは約０．５～約２．０重量％；
より好ましくは約１．０～約２．０重量％であり；
更に好ましくは、約１．０重量％、約１．５重量％及び約２．０重量％から選ばれる濃度である。
［２－１１－２］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、好ましくは、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、および（約０．３４：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［２－１１－２－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり、好ましくは、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、および（約０．３４：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［２－１１－３］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、好ましくは、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、および（約０．１７：約０．１７：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［２－１１－３－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ＋Ｃ１Ｎ＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；好ましくは、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、および（約０．１７：約０．１７：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［２－１２－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液中の、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の各容量比（ｖ１、ｖ２）は、例えば、ｖ１＋ｖ２＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１＋ｖ２＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５である。
［２－１２－２］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、アルギン酸溶液を添加した混合溶液における、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の容量（ｖ１）、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の容量（ｖ２）およびアルギン酸溶液の容量（ｖ３）の容量比は、例えば、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２：ｖ３）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５、０＜ｖ３＜１５である。
［２－１３］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体が含まれる混合溶液を射出させる溶液中に含まれる２価金属イオンとしては、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、バリウムイオン、ストロンチウムイオン、亜鉛イオン等の群から選択される２価金属イオンであり；好ましくは、カルシウムイオン、バリウムイオン又はストロンチウムイオンであり；より好ましくは、カルシウムイオン又はバリウムイオンである。
［２－１４］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体が含まれる混合溶液を射出させる溶液は、塩化カルシウム水溶液、炭酸カルシウム水溶液、グルコン酸カルシウム水溶液、塩化バリウム水溶液、塩化ストロンチウム水溶液等からなる群から選択される２価金属イオンを含む水溶液であり；好ましくは、塩化カルシウム水溶液又は塩化バリウム水溶液である。
［２－１５］前記態様［２］または［２－１４］において、２価金属イオンの濃度は、例えば、約１ｍＭ～約１Ｍの範囲、又は約１０～約５００ｍＭの範囲であり；好ましくは、約１０～約１００ｍＭである。
［２－１６－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液は、例えば、図３に示されるような、導入口１および排出口２が備わる装置ＸＸ等を用い、装置ＸＸの導入口１から当該混合溶液を導入し、装置ＸＸの排出口２から、射出することができる。
［２－１６－２］前記態様［２－１６－１］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液は、例えば、図３に示されるような、押出筒ＹＹ等を用いて、装置ＸＸの排出口２から、射出することができる。
［２－１７］前記態様［２－１６－２］において、装置ＸＸと押出筒ＹＹを合わせたものとして、例えば、注射筒を用いることができる。また、注射筒はガラス製またはプラスチック製の注射筒を用いることができる。
［２－１８］前記態様［２］、［２－１６－１］および［２－１６－２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の射出速度（流速）は、例えば、約１００～約１００００μＬ／分の範囲である。
［２－１９－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させるカチオン性ポリマーを含む溶液は、ポリアミノ酸（塩基性アミノ酸の重合体）、塩基性多糖類、塩基性ポリマー、それらの塩等からなる群から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液である。
［２－１９－２］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させるカチオン性ポリマーを含む溶液は好ましくは、ポリアミノ酸である、ポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリ－Ｄ－オルニチン（ＰＤＯ）、ポリ－ＤＬ－オルニチン、ポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ポリ－ＤＬ－リジン、ポリ－Ｌ－アルギニン（ＰＬＡ）、ポリ－Ｄ－アルギニン（ＰＤＡ）、ポリ－ＤＬ－アルギニン、ポリ－Ｌ－ホモアルギニン（ＰＬＨＡ）、ポリ－Ｄ－ホモアルギニン（ＰＤＨＡ）、ポリ－ＤＬ－ホモアルギニン、ポリ－Ｌ－ヒスチジン（ＰＬＨ）、ポリ－Ｄ－ヒスチジン（ＰＤＨ）、ポリ－ＤＬ－ヒスチジンおよびそれらの塩からなる群から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液であり；より好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリ－Ｌ－リジンおよびそれらの塩からなる群から選ばれるカチオン性ポリマーを含む溶液であり；更に好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチンまたはその塩から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液である。
［２－１９－３］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させるカチオン性ポリマーを含む溶液は、例えば、塩基性多糖類であるキトサンまたはその塩からなる群から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液である。
［２－１９－４］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させるカチオン性ポリマーを含む溶液は、例えば、塩基性ポリマーであるポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリビニルアミン（ＰＶＡ）、ポリエチレンイミン、アリルアミン－ジアリルアミン共重合体、アリルアミン－マレイン酸共重合体、およびそれらの塩からなる群から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液である。
［２－１９－４－１］前記態様［２－１９－４］において、好ましくは、カチオン性ポリマーを含む溶液は、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）及びそれらの塩からなる群から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液であり；より好ましくは、ポリエチレンイミン、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、またはその塩から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液である。
［２－２０］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させるカチオン性ポリマーを含む溶液は、２価金属イオンを含む水溶液（例えば、塩化カルシウム水溶液、塩化バリウム水溶液、等）、緩衝液等の成分を含むことができる。
［２－２１］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造時の温度は、例えば、約４～約３７℃の範囲である。
前記態様に記載されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法および各要素を組み合わせることで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法の好ましい態様を任意に形成し得る。
［２－２２］前記態様［２］～［２－２１］において、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を、各々、前記態様［１Ｘ］に記載の、式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体に置き換えることで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法の好ましい態様を任意に形成し得る。
当該置き換えにより、式（Ｉ－Ａ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の濃度、容量等に係る変数は、上記態様［１－１１－２－１Ｘ］、［１－１１－３－１Ｘ］、［１－１１－４Ｘ］、［１－１１－５Ｘ］中に記載された対応する変数に置き換わるものとする。
［３］第３の態様は、次の通りである。抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに前記態様［１］に記載の式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルを含むコア層を、カチオン性ポリマーで被覆して形成されるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造方法である。一態様の前記製造方法は、前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養容器に入れ、培地を添加して前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを含浸させ、培養を行うことによる、抗体、生理活性物質等の製造方法である。
［３Ａ］前記態様［３］におけるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、前記態様（［１］～［１－１７－５］）のいずれかに記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［３Ｘ］第３Ｘの態様は、次の通りである。抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに前記態様［１Ｘ］に記載の式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルを含むコア層を、カチオン性ポリマーで被覆して形成されるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造方法である。一態様の前記製造方法は、前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養容器に入れ、培地を添加して前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを含浸させ、培養を行うことによる、抗体、生理活性物質等の製造方法である。
［３－１］前記態様［３］又は［３Ｘ］において、培養容器は、例えば、組織培養用プレート、三角フラスコ、Ｔ－フラスコ、スピナーフラスコ、培養バッグ、動物細胞培養槽等からなる群から選択される容器であり；好ましくは三角フラスコ又は動物細胞培養槽である。培養は、例えば、静置培養または振とう培養などのいずれの方法を選択してもよく、回分培養（バッチ培養）、流加培養（フェドバッチ培養）、連続培養などのいずれの方法を用いてもよいが、流加培養または連続培養が好ましい。
［３－２］前記態様［３］～［３－１］のいずれか１つにおいて、培養時の温度は、例えば、約２８℃～約３９℃の範囲であり、例えば、約３０℃～約３７℃の範囲である。
［３－３］前記態様［３］～［３－２］のいずれか１つにおいて、培養時の攪拌速度は、例えば、約５０～約５００ｒｐｍ、約５０～約３５０ｒｐｍ、約５０～約２５０ｒｐｍ、約５０～約１５０ｒｐｍ、の範囲であり、例えば、約１２５ｒｐｍである。
［３－４］前記態様［３］～［３－３］のいずれか１つにおいて、培養条件は、例えば、培養温度を約２８℃～約３９℃の範囲とし、５％ＣＯ２雰囲気下に培養装置で、約１２５ｒｐｍの攪拌速度で培養をする。
［３－５］前記態様［３］～［３－４］のいずれか１つにおいて、培養する期間は、例えば、７日間であり、又は１４日であり、又は２８日であり、又は４２日であり、又は５６日であり、又は７０日である。
本明細書中、培養温度において、「約」と記載した場合、当該数値の±１０％迄、ある態様では当該数値の±２０％迄の値も含み得るものである。
［３－６］前記態様［３］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、前記態様［１－３］～［１－３－５］のいずれか１項に記載の抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と同じである。
［３－６－１］前記態様［３］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、前記態様［１Ｂ－３］～［１Ｂ－３－１９］のいずれか１項に記載の抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と同じである。
［３－７］前記態様［３］～［３－６－１］のいずれか１つにおいて、細胞増殖抑制剤を添加することを含む、抗体、生理活性物質等の製造方法である。
前記態様に記載されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造方法及び各要素を組み合わせることで、抗体、生理活性物質等の製造方法の好ましい態様を任意に形成し得る。
［４］第４の態様は、前記態様［３］～［３－７］のいずれか１つに記載の抗体の製造方法で得られるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層で産生されたカチオン性ポリマー層を透過する抗体が、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ等からなる群から選択されるアイソタイプを有する抗体である。
［５］第５の態様は、前記態様［３］～［３－７］のいずれか１つに記載の抗体の製造方法で得られるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層で産生されたカチオン性ポリマー層を透過する抗体の分子量が、例えば、約４５，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約３，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約４００，０００Ｄａ、約４５，０００～約４００，０００Ｄａ、約２０，０００～約２００，０００Ｄａ、約４５，０００～約２００，０００Ｄａの範囲である抗体である。
［６］第６の態様は、前記態様［３］～［３－７］のいずれか１つに記載の製造方法にて、ＭＩＮ６細胞を用いて産生されたインスリンの分子量が、例えば、約５，０００～１０，０００の範囲であるインスリンである。
［６Ｂ］第６Ｂの態様は、前記態様［３］～［３－７］に記載の製造方法にて、生理活性物質産生細胞を用いて産生された生理活性物質の分子量が、例えば、例えば、約３，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約４５，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約４００，０００Ｄａ、約４５，０００～約４００，０００Ｄａ、約２０，０００～約２００，０００Ｄａ、約４５，０００～約２００，０００Ｄａの範囲である生理活性物質である。
［７］第７の態様は、前記態様［３］～［３－７］のいずれか１つに記載の抗体の製造方法において得られる抗体が、例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞を用いてムロモナブ－ＣＤ３、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトラスツズマブ、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてリツキシマブ、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてパリビズマブ、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてインフリキシマブ、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてバシリキシマブ、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトシリズマブ、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてゲムツズマブ、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベバシズマブ、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイブリツモマブ、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアダリムマブ、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてセツキシマブ、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてラニビズマブ、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてオマリズマブ、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエクリズマブ、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてパニツムマブ、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてウステキヌマブ、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてゴリムマブ、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてカナキヌマブ、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデノスマブ、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてモガムリズマブ、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてセルトリズマブ、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてオファツムマブ、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてペルツズマブ、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてブレンツキシマブ、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてナタリズマブ、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてニボルマブ、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアレムツズマブ、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてセクキヌマブ、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてラムシルマブ、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイピリムマブ、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエボロクマブ、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてメポリズマブ、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアリロクマブ、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイキセキズマブ、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてブロダルマブ、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイダルシズマブ、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエロツズマブ、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてペムブロリズマブ、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてサリルマブ、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベズロトクスマブ、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベリムマブ、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてダラツムマブ、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアベルマブ、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデュピルマブ、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアテゾリズマブ、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベンラリズマブ、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイノツズマブ、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエミシズマブ、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてグセルクマブ、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデュルバルマブ、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてオビヌツズマブ、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞を用いて抗ＧＰＶＩ抗体である。
［７－１］前記態様［３］～［３－７］のいずれか１つに記載の抗体の製造方法において、産生可能な抗体としては、例えば、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトラスツズマブ、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてリツキシマブ、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてインフリキシマブ、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトシリズマブ、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアダリムマブ、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてニボルマブ又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞を用いて抗ＧＰＶＩ抗体であり；例えば、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトシリズマブ、又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞を用いて抗ＧＰＶＩ抗体である。
［７Ｂ］第７Ｂの態様は、前記態様［３］～［３－７］に記載の抗体の製造方法において得られる抗体が、ムロモナブ－ＣＤ３、トラスツズマブ、リツキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、トシリズマブ、ベバシズマブ、アダリムマブ、セツキシマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、パニツムマブ、ウステキヌマブ、ゴリムマブ、カナキヌマブ、デノスマブ、オファツムマブ、ペルツズマブ、ナタリズマブ、ニボルマブ、アレムツズマブ、セクキヌマブ、ラムシルマブ、イピリムマブ、エボロクマブ、メポリズマブ、アリロクマブ、イキセキズマブ、ブロダルマブ、エロツズマブ、ペムブロリズマブ、サリルマブ、ベズロトクスマブ、ベリムマブ、ダラツムマブ、アベルマブ、デュピルマブ、アテゾリズマブ、エミシズマブ、グセルクマブ、デュルバルマブ、ベドリズマブ、ロモソズマブ、リサンキズマブ、ネシツムマブ、ラブリズマブ、ブロスマブ、イサツキシマブ、チルドラキズマブ、サトラリズマブ、ガルカネズマブ、ジヌツキシマブ、フレマネズマブ、エレヌマブ、カシリビマブ、イムデビマブ、アニフロルマブ、ソトロビマブ、オクレリズマブ、ナキシタマブ、アデュカヌマブ、タファシタマブ、マルジェツキシマブ、ガンテネルマブ、チラゴルマブ、クロバリマブ、ネモリズマブ、カツマクソマブ、プラモタマブ、ファリシマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、ブレンツキシマブ、イノツズマブ、ポラツズマブ、エンホルツマブ、サシツズマブ、ベランタマブ、ロンカスツキシマブ、チソツマブ、ダトポタマブ、パトリツマブ等の抗体；モガムリズマブ、ベンラリズマブ、オビヌツズマブ、イネビリズマブ等の改変糖鎖を有する抗体；ラニビズマブ、イダルシズマブ、ブリナツモマブ、ブロルシズマブ、アブシキシマブ、カプラシズマブ、セルトリズマブ等の抗体断片からなる低分子抗体である。
［７Ｃ］第７Ｃの態様は、前記態様［３］～［３－７］に記載の抗体の製造方法において得られる抗体が、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＮＳ０細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＮＳ０細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＮＳ０細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＮＳ０細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＮＳ０細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＮＳ０細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＮＳ０細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ロモソズマブ産生ＣＨＯ細胞、リサンキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ネシツムマブ産生ＮＳ０細胞、ネシツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ラブリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロスマブ産生ＣＨＯ細胞、イサツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チルドラキズマブ産生ＣＨＯ細胞、サトラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ガルカネズマブ産生ＣＨＯ細胞、ジヌツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ジヌツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、フレマネズマブ産生ＣＨＯ細胞、エレヌマブ産生ＣＨＯ細胞、カシリビマブ産生ＣＨＯ細胞、イムデビマブ産生ＣＨＯ細胞、アニフロルマブ産生ＮＳ０細胞、アニフロルマブ産生ＣＨＯ細胞、ソトロビマブ産生ＣＨＯ細胞、オクレリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナキシタマブ産生ＣＨＯ細胞、アデュカヌマブ産生ＣＨＯ細胞、タファシタマブ産生ＣＨＯ細胞、マルジェツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＮＳ０細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生Ｓｐ２／０細胞、サシツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、イネビリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブリナツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アブシキシマブ産生ＣＨＯ細胞、カプラシズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等のＣＨＯ細胞から産生される抗体である。
［７Ｃ－１］前記態様［３］～［３－７］に記載の抗体の製造方法において得られる抗体が、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ロモソズマブ産生ＣＨＯ細胞、リサンキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ネシツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ラブリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロスマブ産生ＣＨＯ細胞、イサツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チルドラキズマブ産生ＣＨＯ細胞、サトラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ガルカネズマブ産生ＣＨＯ細胞、ジヌツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、フレマネズマブ産生ＣＨＯ細胞、エレヌマブ産生ＣＨＯ細胞、カシリビマブ産生ＣＨＯ細胞、イムデビマブ産生ＣＨＯ細胞、アニフロルマブ産生ＣＨＯ細胞、ソトロビマブ産生ＣＨＯ細胞、オクレリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナキシタマブ産生ＣＨＯ細胞、アデュカヌマブ産生ＣＨＯ細胞、タファシタマブ産生ＣＨＯ細胞、マルジェツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞、イネビリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブリナツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アブシキシマブ産生ＣＨＯ細胞、カプラシズマブ産生ＣＨＯ細胞、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等のＣＨＯ細胞から産生される抗体である。
［７Ｃ－２］前記態様［３］～［３－７］に記載の抗体の製造方法において得られる抗体が、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、及び抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等のＣＨＯ細胞から産生される抗体であり；又はトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞から産生される抗体であり；又はトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞から産生される抗体である。
以下、各態様についてより詳細に説明する。尚、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、各々、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体へ置き換えることができる。
１．アルギン酸（Alginic acid）
本明細書中の、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の合成原料になるアルギン酸、及びコア層に含むことができるアルギン酸溶液又はアルギン酸ゲルの原料になるアルギン酸について、以下説明する。
本明細書中、アルギン酸と記載する場合、アルギン酸、アルギン酸エステル、及びそれらの塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）からなる群から選択される少なくとも１種のアルギン酸（「アルギン酸類」という場合がある）を意味する。用いられるアルギン酸は、天然由来でも合成物であってもよいが、天然由来であるのが好ましい。好ましく用いられるアルギン酸類は、レッソニア、マクロシスティス、ラミナリア、アスコフィラム、ダービリア、カジメ、アラメ、コンブなどの褐藻類から抽出される生体内吸収性の多糖類であって、Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）とＬ－グルロン酸（Ｇ）という２種類のウロン酸が直鎖状に重合したポリマーである。より具体的には、Ｄ－マンヌロン酸のホモポリマー画分（ＭＭ画分）、Ｌ－グルロン酸のホモポリマー画分（ＧＧ画分）、およびＤ－マンヌロン酸とＬ－グルロン酸がランダムに配列した画分（Ｍ／Ｇ画分）が任意に結合したブロック共重合体である。
アルギン酸は、褐藻類の海藻から抽出し、精製して製造される天然多糖類の一種であり、Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）とＬ－グルロン酸（Ｇ）が重合したポリマーである。アルギン酸のＤ－マンヌロン酸とＬ－グルロン酸の構成比（Ｍ／Ｇ比）、すなわちゲル強度は、主に海藻等の由来となる生物の種類によって異なり、また、その生物の生育場所や季節による影響を受け、Ｍ／Ｇ比が約０．２の高Ｇ型からＭ／Ｇ比が約５の高Ｍ型まで高範囲にわたる。アルギン酸のＭ／Ｇ比、ＭとＧの配列の仕方等によってアルギン酸の物理化学的性質が異なり、また好ましい用途が異なる場合がある。アルギン酸類のゲル化能力および生成したゲルの性質は、Ｍ／Ｇ比によって影響を受け、一般的に、Ｇ比率が高い場合にはゲル強度が高くなることが知られている。Ｍ／Ｇ比は、その他にも、ゲルの硬さ、もろさ、吸水性、柔軟性などにも影響を与える。したがって、本発明で使用するアルギン酸は、その最終使用用途に応じて、適切なＭ／Ｇ比や適切な粘度のものを用いるのがよい。
アルギン酸の工業的な製造方法には、酸法とカルシウム法などがあるが、本発明ではいずれの製法で製造されたものも使用することができる。精製により、ＨＰＬＣ法による定量値が８０～１２０質量％の範囲に含まれるものが好ましく、９０～１１０質量％の範囲に含まれるものがより好ましく、９５～１０５質量％の範囲に含まれるものがさらに好ましい。本発明においては、ＨＰＬＣ法による定量値が前記の範囲に含まれるものを高純度のアルギン酸と称する。本発明で使用するアルギン酸又はその塩は、高純度アルギン酸であることが好ましい。市販品としては、例えば、キミカアルギンシリーズとして、（株）キミカより販売されているもの、好ましくは、高純度食品・医薬品用グレードのものを購入して使用することができる。市販品を、さらに適宜精製して使用することも可能である。例えば、低エンドトキシン処理することが好ましい。精製法や低エンドトキシン処理方法は、例えば特開２００７－７５４２５号公報に記載されている方法を採用することができる。本明細書中、質量％と記載した場合、ｗ／ｗ％又はｗ／ｖ％を意味するものとする。
本発明で使用する「アルギン酸」におけるアルギン酸の塩としては、「アルギン酸の１価金属塩」であり、アルギン酸のＤ－マンヌロン酸またはＬ－グルロン酸のカルボン酸の水素イオンを、Ｎａ+やＫ+などの１価金属イオンとイオン交換することでつくられる塩である。アルギン酸の１価金属塩としては、具体的には、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウムなどを挙げることができるが、特に、アルギン酸ナトリウムが好ましい。
本明細書中、アルギン酸は、アルギン酸を（ＡＬＧ）として、アルギン酸の任意のカルボキシル基の１つを－ＣＯＯＨとして、（ＡＬＧ）－ＣＯＯＨと表記する場合がある。
本発明で使用するアルギン酸は、その最終使用用途に応じて、適切な重量平均分子量を有するものを用いる。本発明で使用するアルギン酸の重量平均分子量（ＧＰＣ）は、例えば、１万～１，０００万であり；好ましくは１０万～５００万であり；より好ましくは１５万～３００万である。
いくつかの態様では、アルギン酸は、アルギン酸ナトリウムである。アルギン酸ナトリウムは、市販品のアルギン酸ナトリウムを用いることができる。ここで、後述の実施例で用いられるアルギン酸ナトリウムは、下表に記載したＡ－１、Ａ－２、Ａ－３、Ｂ－１、Ｂ－２、及びＢ－３のアルギン酸ナトリウム（発売元 持田製薬株式会社）から選択される。各アルギン酸ナトリウムの１ｗ／ｗ％の水溶液の粘度、重量平均分子量及びＭ／Ｇ比を下記の表に示す。
Figure 0007450793000060
前記アルギン酸ナトリウムＡ－１、Ａ－２、Ａ－３、Ｂ－１、Ｂ－２、及びＢ－３の各物性値は、下記の各種方法により測定した。測定方法は、当該方法に限定されるものではないが、測定方法により各物性値が上記のものと異なる場合がある。
［アルギン酸ナトリウムの粘度測定］
日本薬局方（第１６版）の粘度測定法に従い、回転粘度計法（コーンプレート型回転粘度計）を用いて測定した。具体的な測定条件は以下のとおりである。試料溶液の調製は、MilliQ水を用いて行った。測定機器は、コーンプレート型回転粘度計（粘度粘弾性測定装置レオストレスRS600（Thermo Haake GmbH）センサー：３５／１）を用いた。回転数は、１ｗ／ｗ％アルギン酸ナトリウム溶液測定時は１ｒｐｍとした。読み取り時間は、２分間測定し、開始１分から２分までの平均値とした。３回の測定の平均値を測定値とした。測定温度は２０℃とした。
［アルギン酸ナトリウムの重量平均分子量測定］
（１）ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）と、（２）ＧＰＣ－ＭＡＬＳの２種類の測定法で測定した。測定条件は以下のとおりである。
［前処理方法］
試料に溶離液を加え溶解後、０．４５μｍメンブランフィルターろ過したものを測定溶液とした。
（１）ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）測定
［測定条件（相対分子量分布測定）］
カラム：ＴＳＫｇｅｌ ＧＭＰＷ－ＸＬ×２＋Ｇ２５００ＰＷ－ＸＬ（７．８ｍｍ Ｉ．Ｄ．×３００ｍｍ×３本）
溶離液：２００ｍＭ硝酸ナトリウム水溶液
流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
濃度：０．０５％
検出器：ＲＩ検出器
カラム温度：４０℃
注入量：２００μＬ
分子量標準：標準プルラン、グルコース
（２）ＧＰＣ－ＭＡＬＳ測定
［屈折率増分（ｄｎ／ｄｃ）測定（測定条件）］
示差屈折率計：Ｏｐｔｉｌａｂ Ｔ－ｒＥＸ
測定波長：６５８ｎｍ
測定温度：４０℃
溶媒：２００ｍＭ硝酸ナトリウム水溶液
試料濃度：０．５～２．５ｍｇ／ｍＬ（５濃度）
［測定条件（絶対分子量分布測定）］
カラム：ＴＳＫｇｅｌ ＧＭＰＷ－ＸＬ×２＋Ｇ２５００ＰＷ－ＸＬ（７．８ｍｍ Ｉ．Ｄ．×３００ｍｍ×３本）
溶離液：２００ｍＭ硝酸ナトリウム水溶液
流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
濃度：０．０５％
検出器：ＲＩ検出器、光散乱検出器（ＭＡＬＳ）
カラム温度：４０℃
注入量：２００μＬ
本明細書中、アルギン酸、アルギン酸誘導体、架橋アルギン酸、及び架橋アルギン酸の分子量において、単位としてＤａ（ダルトン）を付記する場合がある。
アルギン酸類のＤ－マンヌロン酸とＬ－グルロン酸の構成比（Ｍ／Ｇ比）は、主に海藻等の由来となる生物の種類によって異なり、また、その生物の生育場所や季節による影響を受け、Ｍ／Ｇ比が約０．２の高Ｇ型からＭ／Ｇ比が約５の高Ｍ型まで高範囲にわたる。アルギン酸類のゲル化能力および生成したゲルの性質は、Ｍ／Ｇ比によって影響を受け、一般的に、Ｇ比率が高い場合にはゲル強度が高くなることが知られている。Ｍ／Ｇ比は、その他にも、ゲルの硬さ、もろさ、吸水性、柔軟性などにも影響を与える。用いるアルギン酸類および／またはその塩のＭ／Ｇ比は、通常、０．１～４．０であり、ある態様では、０．１～３．０であり、ある態様では、０．１～２．０であり、ある態様では０．５～１．８であり、ある態様では０．８～１．２である。又、別の態様では、０．１～０．５である。
また、本発明で使用するアルギン酸は、その最終使用用途に応じて、適切な粘度や、適切なＭ／Ｇ比のものを用いるのがよい。
本明細書中、「～」を用いて示された数値範囲は、「～」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値および最大値として含む範囲を示す。
本明細書中、用いられる「アルギン酸エステル」、「アルギン酸塩」とは、特に限定されないが、架橋剤と反応させるため、架橋反応を阻害する官能基を有していないことが必要である。アルギン酸エステルとしては、好ましくは、アルギン酸プロピレングリコール、等が挙げられる。
アルギン酸は、例えば、アルギン酸の１価の塩、アルギン酸の２価の塩の形態をとることができる。アルギン酸の１価の塩としては、例えば、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸アンモニウム、等が挙げられ、好ましくは、アルギン酸ナトリウムまたはアルギン酸カリウムであり、より好ましくは、アルギン酸ナトリウムである。アルギン酸の２価の塩としては、例えば、アルギン酸カルシウム、アルギン酸マグネシウム、アルギン酸バリウム、アルギン酸ストロンチウム、等が挙げられる。
アルギン酸は、高分子多糖類であり、分子量を正確に定めることは困難であるが、一般的に重量平均分子量で１，０００～１０００万、好ましくは１万～８００万、より好ましくは２万～３００万である。天然物由来の高分子物質の分子量測定では、測定方法により値に違いが生じうることが知られている。
本明細書において本発明のアルギン酸誘導体またはアルギン酸又はその塩の分子量を特定する場合は、特段のことわりがない限り、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により算出される重量平均分子量である。本発明で使用するアルギン酸又はその塩としても、その最終使用用途に応じて、適切な分子量分布のものを用いることが望ましい。
例えば、後記実施例に記載したゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）又はゲルろ過クロマトグラフィー（これらを合わせてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）ともいう）の測定条件にて、好ましくは、１０万～５００万であり、より好ましくは１５万～３００万である。また、ある態様では、５０万～３００万であり、より好ましくは、１００万～２５０万であり、さらに好ましくは、１００万～２００万である。
また、例えば、ＧＰＣ－ＭＡＬＳ（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）法によれば、絶対重量平均分子量を測定することができる。ＧＰＣ－ＭＡＬＳ法により測定した重量平均分子量(絶対分子量)は、好ましくは１万以上、より好ましくは５万以上、さらに好ましくは６万以上であり、また好ましくは、１００万以下、より好ましくは８０万以下、さらに好ましくは７０万以下、とりわけ好ましくは５０万以下である。その好ましい範囲は、１万～１００万であり、より好ましくは５万～８０万であり、さらに好ましくは６万～５０万である。
通常、高分子多糖類の分子量を上記のようなＳＥＣ、ＳＥＣ－ＭＡＬＳを用いた手法で算出する場合、約１０％～約３０％の測定誤差を生じうる。例えば、５０万であれば３５万～６５万、１００万であれば７０万～１３０万程度の範囲で値の変動が生じうる。本明細書中、分子量測定の記載において「約」と記載した場合、当該数値の±１０％迄、ある態様では当該数値の±２０％迄の値も含み得るものである。
ここで、一般に天然物由来の高分子物質は、単一の分子量を持つのではなく、種々の分子量を持つ分子の集合体であるため、ある一定の幅を持った分子量分布として測定される。代表的な測定手法はゲルろ過クロマトグラフィーである。ゲルろ過クロマトグラフィーにより得られる分子量分布の代表的な情報としては、重量平均分子量（Ｍｗ）、数平均分子量（Ｍｎ）、分散比（Ｍｗ／Ｍｎ）があげられる。
分子量の大きい高分子の平均分子量への寄与を重視したのが重量平均分子量であり、下記式で表される。
Ｍｗ＝Σ（ＷｉＭｉ）／Ｗ＝Σ（ＨｉＭｉ）／Σ（Ｈｉ）
数平均分子量は、高分子の総重量を高分子の総数で除して算出される。
Ｍｎ＝Ｗ／ΣＮｉ＝Σ（ＭｉＮｉ）／ΣＮｉ＝Σ（Ｈｉ）／Σ（Ｈｉ／Ｍｉ）
ここで、Ｗは高分子の総重量、Ｗｉはｉ番目の高分子の重量、Ｍｉはｉ番目の溶出時間における分子量、Ｎｉは分子量Ｍｉの個数、Ｈｉはｉ番目の溶出時間における高さである。
天然物由来の高分子物質の分子量測定では、測定方法により値に違いが生じうることが知られている（ヒアルロン酸の例：Ｃｈｉｋａｋｏ ＹＯＭＯＴＡ ｅｔ．ａｌ． Ｂｕｌｌ．Ｎａｔｌ．Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉ．， Ｖｏｌ．１１７， ｐｐ１３５－１３９（１９９９）、Ｃｈｉｋａｋｏ ＹＯＭＯＴＡ ｅｔ．ａｌ． Ｂｕｌｌ．Ｎａｔｌ．Ｉｎｓｔ． Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉ．， Ｖｏｌ．１２１， ｐｐ３０－３３（２００３））。アルギン酸の分子量測定については、固有粘度（Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ）から算出する方法、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ａｎｇｌｅ Ｌａｓｅｒ Ｌｉｇｈｔ Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）により算出する方法が記載された文献がある（ＡＳＴＭ Ｆ２０６４－００（２００６），ＡＳＴＭ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ発行）。本発明においては、重量平均分子量は、上記文献に示されるような常法にて、例えばサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により分子量を測定し、プルランを標準物質として用いた較正曲線により算出した値とすることができる。
又、本発明においては、重量平均分子量は、上記文献に示されるような常法にて、例えばサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）―ＭＡＬＳにより測定した絶対分子量とすることができる。
アルギン酸類の分子量の測定は、常法に従い測定することができる。
本明細書中においてアルギン酸又はその塩の分子量を特定する場合は、特段のことわりがない限り、ゲルろ過クロマトグラフィーにより算出される重量平均分子量である。分子量測定にゲルろ過クロマトグラフィーを用いる場合の代表的な条件は、例えば、後述する本実施例の条件を採用することができる。カラムは、例えば、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６ Ｉｎｃｒｅａｓｅ１０／３００ ＧＬカラム（ＧＥヘルスケアサイエンス社）を用いることができ、展開溶媒として、例えば、０．１５ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌを含む１０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を使用することができ、分子量標準としてブルーデキストラン、チログロブリン、フェリチン、アルドラーゼ、コンアルブミン、オブアルブミン、リボヌクレアーゼＡおよびアプロチニンを用いることができる。
本明細書中で用いられるアルギン酸の粘度は、特に限定されないが、１ｗ／ｗ％のアルギン酸類の水溶液として粘度を測定した場合、好ましくは、１０ｍＰａ・ｓ～１０００ｍＰａ・ｓ、より好ましくは、５０ｍＰａ・ｓ～８００ｍＰａ・ｓである。
アルギン酸の水溶液の粘度の測定は、常法に従い測定することができる。例えば、回転粘度計法の、共軸二重円筒形回転粘度計、単一円筒形回転粘度計（ブルックフィールド型粘度計）、円すい－平板形回転粘度計（コーンプレート型粘度計）等を用いて測定することができる。好ましくは、日本薬局方（第１６版）の粘度測定法に従うことが望ましい。より好ましくは、コーンプレート型粘度計を用いる。
アルギン酸類は、褐藻類から抽出された当初は、分子量が大きく、粘度が高めだが、熱による乾燥、精製などの過程で、分子量が小さくなり、粘度は低めとなる。製造工程の温度等の条件管理、原料とする褐藻類の選択、製造工程における分子量の分画などの手法により分子量の異なるアルギン酸類を製造することができる。さらに、異なる分子量あるいは粘度を持つ別ロットのアルギン酸類と混合することにより、目的とする分子量を有するアルギン酸類とすることも可能である。
本明細書中で用いられるアルギン酸は、いくつかの態様においては、低エンドトキシン処理されていないアルギン酸であり、又は別のいくつかの態様においては、低エンドトキシン処理されたアルギン酸である。低エンドトキシンとは、実質的に炎症、または発熱を惹起しない程度にまでエンドトキシンレベルが低いことをいう。より好ましくは、低エンドトキシン処理されたアルギン酸類であることが望ましい。
低エンドトキシン処理は、公知の方法またはそれに準じる方法によって行うことができる。例えば、ヒアルロン酸ナトリウムを精製する、菅らの方法（例えば、特開平９－３２４００１号公報など参照）、β１，３－グルカンを精製する、吉田らの方法（例えば、特開平８－２６９１０２号公報など参照）、アルギネート、ゲランガム等の生体高分子塩を精製する、ウィリアムらの方法（例えば、特表２００２－５３０４４０号公報など参照）、ポリサッカライドを精製する、ジェームスらの方法（例えば、国際公開第９３／１３１３６号パンフレットなど参照）、ルイスらの方法（例えば、米国特許第５５８９５９１号明細書など参照）、アルギネートを精製する、ハーマンフランクらの方法（例えば、ＡｐｐｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（１９９４）４０：６３８－６４３など参照）等またはこれらに準じる方法によって実施することができる。低エンドトキシン処理は、それらに限らず、洗浄、フィルター（エンドトキシン除去フィルターや帯電したフィルターなど）によるろ過、限外ろ過、カラム（エンドトキシン吸着アフィニティーカラム、ゲルろ過カラム、イオン交換樹脂によるカラムなど）を用いた精製、疎水性物質、樹脂または活性炭などへの吸着、有機溶媒処理（有機溶媒による抽出、有機溶剤添加による析出・沈降など）、界面活性剤処理（例えば、特開２００５－０３６０３６号公報など参照）など公知の方法によって、あるいはこれらを適宜組合せて実施することができる。これらの処理の工程に、遠心分離など公知の方法を適宜組み合わせてもよい。アルギン酸の種類に合わせて適宜選択するのが望ましい。
エンドトキシンレベルは、公知の方法で確認することができ、例えば、リムルス試薬（ＬＡＬ）による方法、エンドスペシー（登録商標）ＥＳ－２４Ｓセット（生化学工業株式会社）を用いる方法などによって測定することができる。
用いられるエンドトキシンの処理方法は特に限定されないが、その結果として、アルギン酸類のエンドトキシン含有量が、リムルス試薬（ＬＡＬ）によるエンドトキシン測定を行った場合に、５００エンドトキシン単位（ＥＵ）／ｇ以下であることが好ましく、さらに好ましくは、１００ＥＵ／ｇ以下、とりわけ好ましくは、５０ＥＵ／ｇ以下、特に好ましくは、３０ＥＵ／ｇ以下である。本発明において、「実質的にエンドトキシンを含まない」とは、日局エンドトキシン試験により測定したエンドトキシン値が前記の数値範囲にあるものを意味する。低エンドトキシン処理されたアルギン酸ナトリウムは、例えば、Ｓｅａ Ｍａｔｒｉｘ（登録商標）（持田製薬株式会社）、ＰＲＯＮＯＶＡＴＭ ＵＰ ＬＶＧ（ＦＭＣＢｉｏＰｏｌｙｍｅｒ）など市販品により入手可能である。
別のいくつかの態様において、本明細書中の、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の合成原料になるアルギン酸ナトリウム、及びコア層に含むことができるアルギン酸溶液又はアルギン酸ゲルの原料になるアルギン酸ナトリウムは、特に限定されることは無いが、例えば、前記表８に記載のアルギン酸ナトリウムＡ－１、Ａ－２、Ａ－３、Ｂ－１、Ｂ－２、又はＢ－３から選択することが可能である。
本明細書中、前記アルギン酸ナトリウムを用いて調製されたアルギン酸溶液（アルギン酸ナトリウム溶液ともいう）の濃度は、例えば、約０．１～約３．３重量％の範囲である。
本明細書中、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の合成原料になるアルギン酸ナトリウムは、好ましくは、前記表８に記載のＡ－２、Ａ－３、Ｂ－２又はＢ－３であり、より好ましくは、Ａ－２又はＡ－３である。又、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の合成で用いられる当該アルギン酸ナトリウム溶液の濃度は、好ましくは、１．５～２．０重量％の範囲である。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸ナトリウムは、好ましくは、前記表８に記載のＡ－２、Ａ－３、Ｂ－２又はＢ－３であり、より好ましくは、Ａ－２又はＡ－３であり、更に好ましくは、Ａ－３である。又、当該アルギン酸ナトリウムを用いて調製したアルギン酸溶液の濃度は、好ましくは約０．３～約１．５重量％の範囲である。
本明細書中、アルギン酸溶液とは、アルギン酸を溶媒に溶解させた溶液を意味する。当該溶媒としては、特に限定されないが、例えば、培地、細胞培養用培地、培養液、等張緩衝液、水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、及び生理食塩水等が挙げられる。アルギン酸ナトリウムを溶媒に溶解した場合、アルギン酸ナトリウム溶液と言う。
いくつかの態様において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いられる式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、アルギン酸溶液は、特に限定されることは無いが、コラーゲン溶液、培地、培養液等を、混合することも可能である。尚、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、及びアルギン酸溶液の調製に用いられる溶媒は、後述の通りである。
２．化学修飾アルギン酸誘導体
いくつかの態様において、本明細書中の化学修飾アルギン酸誘導体は、アルギン酸の任意の１つ以上のカルボキシル基にアミド結合及び２価のリンカーを介して、後述のＨｕｉｓｇｅｎ反応における反応性基、又は当該反応性基の相補的な反応性基が導入されたものである。より具体的には、下記式（Ｉ）：
Figure 0007450793000061
［式（Ｉ）中、（ＡＬＧ）、Ａｋｎ－Ｌ１－、及び－ＮＨ－ＣＯ－の定義は、前述の第１の態様中の定義と同じである］で表されるアルギン酸誘導体、及び下記式（ＩＩ）：
Figure 0007450793000062
［式（ＩＩ）中、（ＡＬＧ）、－Ｌ２－、及び－ＮＨ－ＣＯ－の定義は、前述の第１の態様中の定義と同じである］で表されるアルギン酸誘導体である。
２価のリンカー（－Ｌ１－又は－Ｌ２－）は、具体的には、前記態様中に記載される２価のリンカーから選択して用いることができる。
より具体的には、下記式（Ｉ－Ａ）：
Figure 0007450793000063
［式（Ｉ－Ａ）中、（ＡＬＧ）、Ａｋｙ－Ｌ１Ａ－、及び－ＮＨ－ＣＯ－の定義は、前述の第１Ｘの態様中の定義と同じである］で表されるアルギン酸誘導体、及び下記式（ＩＩ－Ａ）：
Figure 0007450793000064
［式（ＩＩ－Ａ）中、（ＡＬＧ）、－Ｌ２Ａ－、及び－ＮＨ－ＣＯ－の定義は、前述の第１Ｘの態様中の定義と同じである］で表されるアルギン酸誘導体である。
２価のリンカー（－Ｌ１Ａ－又は－Ｌ２Ａ－）は、具体的には、前記態様［１Ｘ］中に記載される２価のリンカーから選択して用いることができる。
本明細書中、特に断りのない限り、「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子等が挙げられる。
本明細書中、特に断りのない限り、「Ｃ1-３アルキル基」としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルの基が挙げられる。
本明細書中、特に断りのない限り、「Ｃ２－４アルカノイル基」とは、前記「Ｃ１－３アルキル基」にカルボニル基が結合した、「Ｃ１－３アルキルカルボニル基」を意味し、例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル等の基が挙げられる。
本明細書中、特に断りのない限り、「Ｃ3-8シクロアルキル環」としては、炭素数３～８の単環式又は多環式の飽和又は不飽和のシクロアルキル環が挙げられ、例えば、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、又はシクロオクタン等の環が挙げられる。
本明細書中、特に断りのない限り、「Ｃ５－９シクロアルケン環」としては、炭素数５～９の単環式のシクロアルケン環が挙げられ、例えば、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘプテン、シクロオクテン、シクロノネン等の環が挙げられる。
本明細書中、特に断りのない限り、「５～６員芳香族複素環」とは、窒素原子、硫黄原子、及び酸素原子からなる群から選ばれるヘテロ原子を１～４個含有する５～６員不飽和環を意味する。
本明細書中、特に断りのない限り、前記「５～６員芳香族複素環」としては、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、トリアゾール、オキサジアゾール、フラザン、チアジアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、トリアジン、チアジアジン等の基が挙げられる。
本明細書中、特に断りのない限り、「５～６員非芳香族複素環」とは、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子から選ばれるヘテロ原子を１～４個含有する５～６員の飽和複素環を意味する。
本明細書中、特に断りのない限り、前記「５～６員非芳香族複素環」としては、例えば、ピロリジン、テトラヒドロフラン、チオラン、ピペリジン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロチオピラン、ピペラジン、ジオキサン、モルホリン、チオモルホリン、又はキヌクリジン等の環が挙げられる。
本明細書中、特に断りのない限り、「環状アルキン基」とは、「５～９員シクロアルキン基」を意味し、また「５～９員シクロアルキン基」の－ＣＨ２－が、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、又は＝Ｃ（＝Ｏ）からなる群から選ばれる基で１～４個置換された、シクロアルキン基も含む。環状アルキン基は、その環上の－ＣＨ２－の水素原子が、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；また環状アルキン基は、Ｃ3-8シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環から選択される環が１～３個縮環していてもよい。
本明細書中、特に断りのない限り、「５～９員シクロアルキン基」は、炭素数５～９の単環式の飽和シクロアルキル基の、－ＣＨ２－ＣＨ２－が、－Ｃ≡Ｃ－に置き換えられた基を意味し、例えば、シクロペンチン基、シクロヘキシン基、シクロへプチン基、シクロオクチン基、シクロノニン基、等の基が挙げられる。また「５～９員シクロアルキン基」の－ＣＨ２－は、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、又は＝Ｃ（＝Ｏ）からなる群から選ばれる基で１～４個置換することもできる。
本明細書中、特に断りのない限り、環状アルキン基は、好ましくは７～９員環状アルキン基であり（７～９員シクロアルキン基の－ＣＨ２－が、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、又は＝Ｃ（＝Ｏ）からなる群から選ばれる基で１～４個置換されたシクロアルキン基も含み；７～９員環状アルキン基の環上の－ＣＨ２－の水素原子が、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；また７～９員環状アルキン基は、Ｃ3-8シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環から選択される環が１～３個縮環していてもよく）；
より好ましくはシクロオクチン基であり（シクロオクチン基の－ＣＨ２－が、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、又は＝Ｃ（＝Ｏ）からなる群から選ばれる基で１～４個置換されたシクロアルキン基も含み；シクロオクチン基の環上の－ＣＨ２－の水素原子が、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；またシクロオクチン基は、Ｃ3-8シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環から選択される環が１～３個縮環していてもよく）；
更に好ましくは、下記部分構造式：
Figure 0007450793000065
［式中、両端の破線右側は含まない］から選択される基であり；
特に好ましくは、下記部分構造式：
Figure 0007450793000066
［式中、両端の破線右側は含まない］から選択される基であり；
最も好ましくは、下記部分構造式：
Figure 0007450793000067
［式中、両端の破線右側は含まない］から選択される基である。
いくつかの態様において、本明細書中の２価のリンカー（－Ｌ１－又は－Ｌ２－）は、環状アルキン基（Ａｋｎ－）およびアジド基との反応（Ｈｕｉｓｇｅｎ反応）を阻害しない限り、任意のリンカーを使用することも可能である。具体的には、直鎖のアルキレン基（－（ＣＨ２）ｎ－、ｎ＝１～３０）［当該基中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＣＯＮＨ－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－、炭素数が３～８のシクロアルキル環、ベンゼン環、複素環（ピリジン環、ピペリジン環、ピペラジン環、等の５～６員芳香族複素環又は５～６員非芳香族複素環）、等の基で複数個（例えば、１～１０個、又は１～５個）置き換えられても良く；当該直鎖のアルキレン基（－ＣＨ２－）の水素原子は、オキソ基（＝Ｏ）、Ｃ１－６アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、ｉｓｏ－プロピル基、等の基）、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、等）、水酸基（－ＯＨ）、等の基から選択される基で複数個（例えば、１～１０個、又は１～５個）置換されていても良い］が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
前記式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の－ＮＨ－ＣＯ－基における、イミノ基（－ＮＨ－）の水素原子をメチル基に置換し－Ｎ（Ｍｅ）－ＣＯ－基することが可能である。
前記式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体における、リンカー（－Ｌ１－、－Ｌ２－）とアルギン酸の結合様式は、－ＮＨ－ＣＯ－結合、又は－Ｎ（Ｍｅ）－ＣＯ－結合があり；好ましくは、－ＮＨ－ＣＯ－結合である。前記－ＮＨ－ＣＯ－結合、又は－Ｎ（Ｍｅ）－ＣＯ－結合の－ＣＯ－はアルギン酸のカルボキシル基に由来するものである。
前記式（Ｉ－Ａ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体における、リンカー（－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－）とアルギン酸の結合様式は、－ＮＨ－ＣＯ－結合、又は－Ｎ（Ｍｅ）－ＣＯ－結合があり；好ましくは、－ＮＨ－ＣＯ－結合である。前記－ＮＨ－ＣＯ－結合、又は－Ｎ（Ｍｅ）－ＣＯ－結合の－ＣＯ－はアルギン酸のカルボキシル基に由来するものである。
本明細書中、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、例えば、後述の化学修飾アルギン酸誘導体の合成方法により製造することが可能である
本明細書の式（Ｉ）又は式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量が、約１０万Ｄａ～約３００万Ｄａの範囲であり；好ましくは約３０万Ｄａ～約２５０万Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５０万Ｄａ～約２００万Ｄａの範囲である。又、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量が、約１０万Ｄａ～約３００万Ｄａの範囲であり；好ましくは約３０万Ｄａ～約２５０万Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５０万Ｄａ～約２００万Ｄａの範囲である。
本明細書中、式（Ｉ）のＡｋｎ－Ｌ１－ＮＨ－基は、アルギン酸構成単位の全てのカルボキシル基に結合している必要はなく、又、式（ＩＩ）のＮ３－Ｌ２－ＮＨ－基は、アルギン酸構成単位の全てのカルボキシル基に結合している必要はない。
本明細書中、式（Ｉ－Ａ）のＡｋｙ－Ｌ１Ａ－ＮＨ－基は、アルギン酸構成単位の全てのカルボキシル基に結合している必要はなく、又、式（ＩＩ－Ａ）のＮ３－Ｌ２Ａ－ＮＨ－基は、アルギン酸構成単位の全てのカルボキシル基に結合している必要はない。
本明細書中、式（Ｉ）のＡｋｎ－Ｌ１－ＮＨ－基を反応性基と言う場合、式（ＩＩ）のＮ３－Ｌ２－ＮＨ－基が相補的な反応性基となる。又、逆に式（ＩＩ）のＮ３－Ｌ２－ＮＨ－基を反応性基と言う場合、式（Ｉ）のＡｋｎ－Ｌ１－ＮＨ－基が相補的な反応性基となる。
本明細書中、式（Ｉ－Ａ）のＡｋｙ－Ｌ１Ａ－ＮＨ－基を反応性基と言う場合、式（ＩＩ－Ａ）のＮ３－Ｌ２Ａ－ＮＨ－基が相補的な反応性基となる。又、逆に式（ＩＩ－Ａ）のＮ３－Ｌ２Ａ－ＮＨ－基を反応性基と言う場合、式（Ｉ－Ａ）のＡｋｙ－Ｌ１Ａ－ＮＨ－基が相補的な反応性基となる。
本明細書中、式（Ｉ）又は式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１０ｍｏｌ％の範囲である。又、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１５ｍｏｌ％の範囲である。
前記反応性基又は相補的な反応性基の導入率は、アルギン酸の繰り返し単位であるウロン酸単糖単位のうち、各反応性基が導入されたウロン酸単糖単位の数を百分率で表した値である。各反応性基又は相補的な反応性基の導入率は、後述の実施例に記載の方法により求めることができる。
本明細書中、式（Ｉ）中の環状アルキン基（Ａｋｎ）及び式（ＩＩ）中のアジド基が、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応によりトリアゾール環を形成し、これにより架橋が形成される。
本明細書中、式（Ｉ－Ａ）中の環状アルキン基（Ａｋｙ）及び式（ＩＩ－Ａ）中のアジド基が、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応によりトリアゾール環を形成し、これにより架橋が形成される。
本明細書中、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体は、その分子内の任意のカルボキシル基にて１価の塩（例えば、ナトリウム塩等）を形成しているものも、含まれる。
３．Ｈｕｉｓｇｅｎ反応
Ｈｕｉｓｇｅｎ反応（１，３－双極子付加環化反応）は、下記式に示される様に末端アジド基及び末端アルキン基を有する化合物間の縮合反応である。反応の結果、二置換１，２，３－トリアゾール環が収率良く得られ、余計な副生成物が生じないという特徴を有している。当該反応は、１，４－又は１，５－二置換トリアゾール環が生成し得ると考えられるが、銅触媒（Cu catalyst）を用いることで位置選択的にトリアゾール環を得ることが可能である。
Figure 0007450793000068
又、銅触媒を用いないＨｕｉｓｇｅｎ反応がＷｉｔｔｉｇとＫｒｅｂｓにより報告がなされている。即ち、シクロオクチンとフェニルアジドを混合するだけで環化付加体が得られる反応である（下記式中、Ｒ３＝フェニルである）。本反応は、シクロオクチンの三重結合が大きく歪んでいるため、フェニルアジドとの反応による歪みの解消が駆動力となり、反応が自発的に進行することにより、触媒が不要となった。
Figure 0007450793000069
以上の様に、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応は、置換された１級アジド、２級アジド、３級アジド、芳香族アジド、等を有するアジド化合物、及びアジド基の相補的な反応性基である末端又は環状アルキン基を有する化合物を用いることができる。又、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応では、ほぼアジド基及びアルキン基のみが反応することから、反応基質中に種々の官能基（例えば、エステル基、カルボキシル基、アルケニル基、水酸基、アミノ基、等）を置換させることが可能である。
いくつかの態様では、望ましくない副生成物を生じさせず、銅触媒による細胞毒性を回避させる為に銅触媒を用いずに、短時間、容易に、且つ効率的に１，２，３－トリアゾール環による架橋をアルギン酸分子間に形成させる為に、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応のアルキン基としては、例えば、前記態様［１］に記載の環状アルキン基（シクロオクチル基）を用いる。
好ましい態様の化学修飾アルギン酸誘導体の架橋方法においては、当該反応（Ｈｕｉｓｇｅｎ反応）にて望ましくない副反応は起こらず、副生成物がほとんど形成されない。したがって、本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を取込むことが可能となる。
４．化学修飾アルギン酸誘導体の製造方法
本明細書中、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、下記反応式に示される様に、式（ＡＭ－１）（Ａｋｎ－Ｌ１－ＮＨ２：Ａｋｎ－Ｌ１－は、前記態様［１］中の定義と同じである）で表わされるアミン、又は、式（ＡＭ－２）（Ｎ３－Ｌ２－ＮＨ２：－Ｌ２－は、前記態様［１］中の定義と同じである）で表わされるアミンを、アルギン酸の任意のカルボキシル基と、任意の縮合剤（ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ ａｇｅｎｔ）を用いる縮合反応により製造することができる。各反応の詳細条件は、国際公開第２０１９／２４０２１９号パンフレットに記載された条件に準じる。
Figure 0007450793000070
前記、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の製造方法において、式（ＡＭ－１）又は式（ＡＭ－２）で表わされるアミンの導入率（前記態様中の式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基の導入率と同じ意味になる）は、当該アミンの性質等を考慮することで、下記（ｉ）～（ｖ）等の反応条件を適宜選択して組み合わせることにより調節が可能になる。（ｉ）縮合剤の等量の増減、（ｉｉ）反応温度の上昇・下降、（ｉｉｉ）反応時間の延長・短縮、（ｉｖ）反応基質のアルギン酸の濃度の調整、（ｖ）式（ＡＭ－１）又は式（ＡＭ－２）のアミンの溶解度を上げる為に水に混和する有機溶媒を添加する、等。
また、前記縮合反応において、式（ＡＭ－１）、式（ＡＭ－２）で表わされるアミンを、各々、式（ＡＭ－１Ａ）、式（ＡＭ－２Ａ）で表わされるアミンに置き換えて、同様に縮合反応を行うことで、式（Ｉ－Ａ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を製造することができる。各反応式中、Ａｋｙ－Ｌ１Ａ－ＮＨ２のＡｋｙ－Ｌ１Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じであり、Ｎ３－Ｌ２Ａ－ＮＨ２の－Ｌ２Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じである。
Figure 0007450793000071
以下に、式（ＡＭ－１）又は式（ＡＭ－２）で表わされるアミンのうち、本明細書中で用いられる、より具体的なアミンの製造方法を示す。
以下の各製造方法において、ｘ１ａ、ｘ１ｂ、ｙ１ｂ、ｘ２、ｙ２、ｚ２、ｘ３ａ、ｙ３ａ、ｚ３ａ、ｘ３ｂ、ｙ３ｂ、ｚ３ｂ、ｘ４、ｙ４、ｘ５ａ、ｙ５ａ、ｚ５ａ、ｘ５ｂ、ｙ５ｂ、ｚ５ｂ、ｘ６、ｙ６、ｚ６、ｘ７ａ、ｙ７ａ、ｚ７ａ、ｖ７ａ、ｘ７ｂ、ｙ７ｂ、ｚ７ｂ、ｖ７ｂ、ａ１、ｂ１、ａ２、ｂ２、ａ３、ｂ３、ａ４、ｂ４、ａ５及びａ６の定義は前記態様［１］中の記載と同じ定義であり；ＲＡ＝メチル基、エチル基、等のＣ１～６アルキル基であり；Ｐ１は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ｔｅｒｔＢｕ基、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｂｎ基、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ３基、－Ｃ（Ｏ）ＣＦ３基、－ＳＯ２Ｐｈ、－ＳＯ２ＰｈＭｅ基、－ＳＯ２Ｐｈ（ＮＯ２）基、等から選択されるアミノ基の保護基であり；Ｅ＝ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、等）、－ＯＴｓ基、－ＯＭｓ基、等の脱離基であり、Ｘ＝ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、等）である。又、以下の各製造方法において、式（ＳＭ－Ａ１）、式（ＳＭ－Ａ２）、式（ＳＭ－Ｂ）、式（ＳＭ－Ｃ１）、式（ＳＭ－Ｃ２）、式（ＳＭ－Ｄ）、式（ＳＭ－Ｅ１）、式（ＳＭ－Ｅ２）、式（ＳＭ－Ｆ）、式（ＳＭ－Ｇ１）、式（ＳＭ－Ｇ２）、式（ＳＭ－Ｈ）、式（ＳＭ－Ｊ）、式（ＳＭ－Ｋ）、式（ＳＭ－Ｌ）、式（ＲＧ－Ａ１）、式（ＲＧ－Ａ２）、式（ＲＧ－Ｂ１）、式（ＲＧ－Ｃ１）、式（ＲＧ－Ｃ２）、式（ＲＧ－Ｄ１）、式（ＲＧ－Ｅ１）、式（ＲＧ－Ｅ２）、式（ＲＧ－Ｆ１）、式（ＲＧ－Ｆ２）、式（ＲＧ－Ｆ３）、式（ＲＧ－Ｇ１－１）、式（ＲＧ－Ｇ１－２）、式（ＲＧ－Ｇ１－３）、式（ＲＧ－Ｇ２－１）、式（ＲＧ－Ｇ２－２）、式（ＲＧ－Ｇ２－３）、式（ＲＧ－Ｈ１）、式（ＲＧ－Ｈ２）、式（ＲＧ－Ｉ１）、式（ＲＧ－Ｊ１）、式（ＲＧ－Ｋ）、式（ＲＧ－Ｌ１）及び式（ＲＧ－Ｍ）で表される化合物は市販化合物、又は市販化合物から文献公知の製造方法により製造できる化合物である。
又、以下の各製造方法において、保護基Ｐ１の保護・脱保護は、文献公知の方法、例えば、『プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ） 第４版、２００７年、ジョン ウィリー アンド サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ）、グリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）ら』の成書に記載された脱保護の方法に準じて、保護・脱保護を行うことができる。
又、以下の各製造方法において、縮合反応と記載した場合、前記の縮合反応と同様の反応を意味する。
［製造方法Ａ］
式（ＡＭ－１－１Ａ）及び式（ＡＭ－１－１Ｂ）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000072
＜Ｓｔｅｐ １＞ 式（ＳＭ－Ａ）の化合物及び式（ＲＧ－Ａ１）の化合物を用いて、縮合反応を行うことで縮合体を得る。続いて、臭素を付加させた後、ｔｅｒｔ－ＢｕＯＫ等の塩基を用いて脱臭素化反応を行うことによりアルキン基を形成させる。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－１Ａ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ ２＞ 前記［製造方法Ａ］＜Ｓｔｅｐ １＞と同様な方法で得られる式（ＳＭ－Ａ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ａ２）の化合物を用いて縮合反応を行い、続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－１Ｂ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｂ］
式（ＡＭ－１－２）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000073
式（ＳＭ－Ｂ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｂ１）の化合物を用いて縮合反応を行うことで縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－２）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｃ］式（ＡＭ－１－３Ａ）及び式（ＡＭ－１－３Ｂ）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000074
式（ＳＭ－Ｃ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｃ１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－３Ａ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
式（ＳＭ－Ｃ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ｃ２）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－３Ｂ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｄ］式（ＡＭ－１－Ｄ）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000075
式（ＳＭ－Ｄ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｄ１）の化合物を用いて縮合反応を行い、縮合体を得る。続いて保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｄ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｅ］式（ＡＭ－１－Ｅ１）及び式（ＡＭ－１－Ｅ２）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000076
式（ＳＭ－Ｅ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｅ１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｅ１）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
式（ＳＭ－Ｅ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ｅ２）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｅ２）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｆ］式（ＡＭ－１－Ｆ）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000077
＜Ｓｔｅｐ １＞ 式（ＳＭ－Ｆ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｆ１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｆ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ ２＞ 式（ＳＭ－Ｆ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｆ２）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、水酸化ナトリウム等の塩基存在下、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、水等の反応に関与しない溶媒若しくはそれらの混合溶媒中で、エステル基を加水分解することにより式（ＩＭ－Ｆ１）で表されるカルボン酸、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ ３＞ ［製造方法Ｆ］＜Ｓｔｅｐ ２＞で得られた式（ＩＭ－Ｆ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｆ３）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｆ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｇ］式（ＡＭ－１－Ｇ１）及び式（ＡＭ－１－Ｇ２）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000078
＜Ｓｔｅｐ １＞ 式（ＳＭ－Ｇ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ１－１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｇ１）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ ２＞ 式（ＳＭ－Ｇ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ１－２）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、エステル基を加水分解することにより式（ＩＭ－Ｇ１）で表されるカルボン酸、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ ３＞ ［製造方法Ｇ］＜Ｓｔｅｐ ２＞で得られた式（ＩＭ－Ｇ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ１－３）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｇ１）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ ４＞ 式（ＳＭ－Ｇ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ２－１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｇ２）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ ５＞ 式（ＳＭ－Ｇ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ２－２）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、エステル基を加水分解することにより式（ＩＭ－Ｇ２）で表されるカルボン酸、又はその塩（例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等）を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ ６＞ ［製造方法Ｇ］＜Ｓｔｅｐ ５＞で得られた式（ＩＭ－Ｇ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ２－３）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｇ２）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｈ］
式（ＡＭ－２－Ｈ）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000079
＜Ｓｔｅｐ １＞ 式（ＳＭ－Ｈ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｈ１）の化合物を用いて、 文献公知の方法、例えば、『Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２０１４（６）， ｐ１２８０－１２８６； ２０１４年』等に記載された方法に準じて、（ｉ）ＰＰｈ３、及びＮ２（ＣＯ２ＣＨＭｅ２）２の試薬存在下、テトラヒドロフラン等の反応に関与しない溶媒中、光延反応を行い、続いて［製造方法Ｆ］＜Ｓｔｅｐ ２＞に記載の方法と同様に、加水分解を行うことにより、式（ＩＭ－Ｈ１）で表される化合物、又はその塩（例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等）をを製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ ２＞ ［製造方法Ｈ］＜Ｓｔｅｐ １＞で得られた式（ＩＭ－Ｈ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｈ２）の化合物を用いて縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－２－Ｈ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｉ］
式（ＡＭ－２－Ｉ）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000080
＜Ｓｔｅｐ １Ａ＞ ［製造方法Ｈ］＜Ｓｔｅｐ １＞で得られた式（ＩＭ－Ｈ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｉ１）の化合物を用いて縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－２－Ｉ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｊ］
式（ＡＭ－２－Ｊ）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000081
＜Ｓｔｅｐ １＞ 式（ＳＭ－Ｊ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｊ１）の化合物を用いて、縮合反応を行うことにより式（ＩＭ－Ｊ１）を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ ２＞［製造方法Ｊ］＜Ｓｔｅｐ １＞で得られる式（ＩＭ－Ｊ１）の化合物を用いて、文献公知の方法、例えば、『Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ，２９（２３），ｐ６６１９－６６２２；２０１０年』等に記載された方法に準じて、ジメチルスルホキシド等の反応に関与しない溶媒中、ＮａＮ３を反応させアジド基を導入した後、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－２－Ｊ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｋ］
式（ＡＭ－２－Ｋ）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000082
＜Ｓｔｅｐ １＞ 式（ＳＭ－Ｋ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｋ）の化合物を用いて縮合反応を行うことにより式（ＩＭ－Ｋ）を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ ２＞［製造方法Ｋ］＜Ｓｔｅｐ １＞で得られる式（ＩＭ－Ｋ）の化合物を用いて、［製造方法Ｊ］＜Ｓｔｅｐ ２＞と同様な反応、保護基Ｐ１の脱保護を行うことにより式（ＡＭ－２－Ｋ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｌ］
式（ＡＭ－２－Ｌ）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000083
式（ＳＭ－Ｌ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｌ１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－２－Ｌ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｍ］
式（ＡＭ－２－Ｍ）で表されるアミンの製造方法：
Figure 0007450793000084
式（ＳＭ－Ｌ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｍ）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－２－Ｍ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
前記［製造方法Ａ］～［製造方法Ｍ］で製造することができる式（ＡＭ－１）又は式（ＡＭ－２）で表わされるアミン以外のアミン、例えば、式（ＡＭ－１）のリンカー－Ｌ１－又は式（ＡＭ－２）のリンカー－Ｌ２－が、直鎖のアルキレン基（－（ＣＨ２）ｎ－、ｎ＝１～３０）［当該基中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＣＯＮＨ－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－、炭素数が３～８のシクロアルキル環、ベンゼン環、複素環（ピリジン環、ピペリジン環、ピペラジン環、等の５～６員芳香族複素環又は５～６員非芳香族複素環）、等の基で複数個（例えば、１～１０個、又は１～５個）置き換えられても良く；当該直鎖のアルキレン基（－ＣＨ２－）の水素原子は、オキソ基（＝Ｏ）、Ｃ１－６アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、ｉｓｏ－プロピル基、等の基）、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、等）、水酸基（－ＯＨ）、等の基から選択される基で複数個（例えば、１～１０個、又は１～５個）置換されていても良い］である場合、文献公知の方法、例えば、『実験化学講座 第５版、各本、２００７年、丸善』、『Comprehensive Organic Transformations, A Guide to Functional GroupPreparations, 3rd Edition (Edited by Richard C. Larock),2018年』、『Strategic Applications of Named Reactions inOrganic Synthesis, (Edited by Laszlo Kurti, Barbara Czako), Academic Press,2005年』等に記載の合成方法を適宜組み合わせることにより、所望のアミンを製造することができる。
式（ＡＭ－１Ａ）又は式（ＡＭ－２Ａ）［各式中の、Ａｋｙ、－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－の定義は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じである］で表されるアミンは、市販化合物、又は市販化合物から文献公知の製造方法により製造できる化合物を用いて、文献公知の方法、例えば、国際公開第２０１９／２４０２１９号パンフレット、国際公開第２０２１／１２５２５５号パンフレット、『実験化学講座 第５版、各本、２００７年、丸善』、『Comprehensive Organic Transformations, A Guide to Functional GroupPreparations, 3rd Edition (Edited by Richard C. Larock),2018年』、『Strategic Applications of Named Reactions inOrganic Synthesis, (Edited by Laszlo Kurti, Barbara Czako), Academic Press,2005年』等に記載の合成方法（酸化・還元反応、－O-CH2-結合形成反応、ハロゲン化反応、アジド化反応、付加・脱離反応、縮合反応、保護・脱保護等）を適宜組み合わせることにより、所望のアミンを製造することができる。
Figure 0007450793000085
本明細書中、式（ＡＭ－１）、式（ＡＭ－１Ａ）、式（ＡＭ－２）、式（ＡＭ－２Ａ）で表わされるアミン（各々の式の下位の式も含む）は、製薬学的に許容される塩（例えば、酸付加塩；例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩等）を形成する場合がある。
本明細書中の化合物は、塩を形成することができ、常法に従い、例えば、適量の酸もしくは塩基を含む溶液を混合することにより目的の塩を形成させた後に分別濾取するか、もしくは該混合溶媒を留去することにより得ることができる。塩に関する総説として、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ， ａｎｄ Ｕｓｅ、Ｓｔａｈｌ＆Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２００２）が出版されており、本書に詳細な記載がなされている。
本明細書中、式（ＡＭ－１）、式（ＡＭ－１Ａ）、式（ＡＭ－２）、式（ＡＭ－２Ａ）で表わされるアミン（各々の式の下位の式も含む）又はその塩は、水、エタノール、グリセロール等の溶媒と溶媒和物を形成し得る。
本明細書中、特に断りのない限り、環状基に可変置換基が置換している場合、該可変置換基は環状基の特定の炭素原子に結合されていない事を意味する。例えば、下記式Ａにおける可変置換基Ｒｓは、該式Ａにおける炭素原子ｉ、ｉｉ、ｉｉｉ、ｉｖ又はｖの何れかに置換する事ができる事を意味する。
Figure 0007450793000086
５－１．架橋アルギン酸ゲル
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルは、前記「２．化学修飾アルギン酸誘導体」の項に記載の化学修飾アルギン酸誘導体を用いて形成される、（ｉ）２価の金属イオン結合を介した架橋、（ｉｉ）化学結合を介した架橋、又は（ｉｉｉ）２価の金属イオン結合及び化学結合の両方を介した架橋を有する架橋アルギン酸ゲル（架橋アルギン酸または化学架橋アルギン酸と言うこともできる）がある。ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルは、架橋としてＨｕｉｓｇｅｎ反応（架橋反応）を行うことにより形成されるトリアゾール環による化学架橋、及び２価金属イオン（例えば、カルシウムイオン等）を共存させることにより形成されるイオン架橋の両方を含む架橋アルギン酸ゲルである。又、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルは、架橋としてＨｕｉｓｇｅｎ反応（架橋反応）を行うことにより形成されるトリアゾール環による化学架橋を含む、架橋アルギン酸ゲルである。
下記の記載において、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、各々、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体へ置き換えることができる。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルは、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて、当該誘導体間に化学架橋を形成させるＨｕｉｓｇｅｎ反応（架橋反応）を行うことで得られる。又は、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体に２価の金属イオンを共存させることにより、当該誘導体間にイオン架橋を形成させることで得られる。又は、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応（架橋反応）を行い、当該誘導体間に化学架橋を形成させ、更に２価の金属イオンを共存させることにより、当該誘導体間にイオン架橋を形成させることでも得られる。
本明細書中、「架橋が形成される」、「架橋が形成された」、又は「架橋反応を行う」とは、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応を行うことにより、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体間で化学架橋（化学結合）が形成されること、又は、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体に２価の金属イオンを共存させることにより当該式（Ｉ）の化学修飾アルギン酸誘導体及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の各誘導体間でイオン架橋（イオン結合）が形成されること、又は、前記Ｈｕｉｓｇｅｎ反応による化学架橋及び２価の金属イオンによるイオン架橋の両方が形成されることを意味する。また、アルギン酸（アルギン酸ナトリウム等）に２価の金属イオンを共存させることにより、アルギン酸にイオン架橋が形成されることも意味する。
前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体に２価金属イオンを接触させることにより、イオン架橋が形成され、イオン架橋アルギン酸ゲルになる時間は、例えば、瞬時（例えば、１～５秒）～数時間（例えば、１～３時間）である。又、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体間でＨｕｉｓｕｇｅｎ反応が進行して、化学架橋が形成され、化学架橋アルギン酸ゲルになる時間は、例えば、数秒～２４時間、数秒～１２時間、又は数秒～３０分間である。
前記架橋アルギン酸ゲルを得る為に用いられる２価金属イオンとしては、特に限定されないが、例えば、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、バリウムイオン、ストロンチウムイオン、亜鉛イオン等が挙げられ、好ましくはカルシウムイオン、バリウムイオン又はストロンチウムイオンであり、より好ましくはカルシウムイオン又はバリウムイオンである。
２価金属イオンを含む溶液としては、特に限定されないが、例えば、カルシウムイオンを含む溶液（例えば、塩化カルシウム水溶液、炭酸カルシウム水溶液、グルコン酸カルシウム水溶液、等の水溶液）、バリウムイオンを含む溶液（例えば、塩化バリウム水溶液等の水溶液）、ストロンチウムイオンを含む溶液（例えば、塩化ストロンチウム水溶液等の水溶液）が挙げられ、好ましくはカルシウムイオンを含む溶液又はバリウムイオンを含む溶液であり、より好ましくは、塩化カルシウム水溶液又は塩化バリウム水溶液である。
２価金属イオンを含む溶液の２価金属イオン濃度（例えば、カルシウムイオン又はバリウムイオン濃度）は、特に限定されないが、例えば、約１ｍＭ～約１Ｍの範囲、又は約１０～約５００ｍＭの範囲であり；好ましくは、約１０～約１００ｍＭである。
２価金属イオンを含む溶液等を調製する際に用いる溶媒は、特に限定されないが、例えば、水道水、純水（例えば、蒸留水、イオン交換水、ＲＯ水、ＲＯ－ＥＤＩ水、等）、超純水（ＭｉｌｌｉＱ水）、培地、細胞培養用培地、培養液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、及び生理食塩水等が挙げられ；好ましくは生理食塩水又は超純水である。
前記ファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルにおいて、イオン架橋及び化学架橋がある場合、イオン架橋の反応は瞬時かつ可逆的であるのに対して、化学架橋の反応は、比較的温和な条件でゆっくり反応が進行して得られ、非可逆的である。この性質を利用して、化学架橋とイオン架橋を適切に組み合わせることにより、本発明の架橋アルギン酸ゲルを効率的に作製することが可能となる。例えば、後述の「９．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法」における装置ＸＸを用いて、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液を、２価金属イオンを含有する溶液の中に射出することにより、イオン架橋が形成され、瞬時にファイバ（繊維）形状の架橋アルギン酸ゲルを作製することができる。又、同時に式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体間でＨｕｉｓｇｅｎ反応（架橋反応）が進行し化学架橋が形成されることで、イオン架橋および化学架橋の両方を含むファイバ（繊維）形状の架橋アルギン酸ゲルが得られる。架橋アルギン酸ゲルの物性は、例えば、使用する２価金属イオンが含まれる水溶液（例えば、塩化カルシウム水溶液）の濃度、若しくは、化学修飾アルギン酸誘導体に導入される反応性基の導入率を変化させる等の方法で、調整が可能である。
前記の架橋反応を利用し、式（Ｉ）及び（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて、本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルをファイバ（繊維）形状（「架橋アルギン酸ゲルファイバ」ともいう）として作製することができる。尚、当該架橋アルギン酸ゲルファイバを作製する際に、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム）溶液を添加して、作製することができる。
架橋アルギン酸ゲルファイバの長さは、例えば、後述の「９．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法」において、装置ＸＸの排出口２から、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を射出する際に、射出される混合溶液を、ハサミ、カッター等の切断器具を用いて一定間隔で切断することで、所望の長さを有する架橋アルギン酸ゲルファイバを得ることが可能である。
架橋アルギン酸ゲルファイバの長さは、特に限定はされないが、後述の「９．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法」に記載された、長さのものが挙げられる。
本発明では、ファイバ構造を強化（例えば、長期安定性の獲得、等）する方法の１つとして、化学架橋（Ｈｕｉｓｕｇｅｎ反応）を利用している。前記の様に作製されたイオン架橋及び化学架橋の両方を有する架橋アルギン酸ゲルファイバを用いて、培養液中で培養を行う場合、イオン架橋を形成している２価金属イオンが徐々に可逆的に放出され、化学架橋のみが残った架橋アルギン酸ゲルファイバとなるが、非可逆的な化学架橋によりゲル構造が保たれ、安定に継続して培養することが可能である。
本発明の、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成される架橋アルギン酸ゲルは、特に限定されないが、例えば、コラーゲン溶液、コラーゲンゲル、培地、細胞培養用培地、培養液、メチルセルロース、スクロース溶液、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、等の他の成分を含むことができる。
本明細書中、単純に「アルギン酸ゲル」と記載する場合、アルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム）又はその溶液に２価の金属イオンを共存させることで、イオン架橋が形成された、アルギン酸ゲルを意味する。
５－２．架橋アルギン酸ゲルにおける化学架橋
本明細書中、架橋アルギン酸ゲルは、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を混合してＨｕｉｓｇｅｎ反応を行うことにより、得ることができる。また、前記式（Ｉ－Ａ）及び前記式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を混合してＨｕｉｓｇｅｎ反応を行うことでも、得ることができる。
本明細書中、架橋アルギン酸ゲルは、化学架橋（アルキン基及びアジド基から形成されるトリアゾール環による架橋）を介して三次元の網目構造を形成する。好ましい化学修飾アルギン酸誘導体は、架橋後の架橋アルギン酸ゲルの安定性を改善するものである。なお、架橋アルギン酸ゲルの物性は、例えば、原料である式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸における各反応性基の導入率によって調整することが可能である。
いくつかの態様の架橋アルギン酸ゲルは、下記式（ＩＩＩ－Ｌ）：
Figure 0007450793000087
［式（ＩＩＩ－Ｌ）中、両端の－ＣＯＮＨ－及び－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ１－、－Ｌ２－、及び－Ｘ－は、前記態様[１－１２]中の定義と同じである］で表わされる基を介して架橋された架橋アルギン酸ゲルである。
本明細書中、架橋アルギン酸ゲルは、化学架橋（アルキン基及びアジド基から形成されるトリアゾール環による架橋）を介して三次元の網目構造を形成する。好ましい化学修飾アルギン酸誘導体は、架橋後の架橋アルギン酸ゲルの安定性を改善するものである。なお、架橋アルギン酸ゲルの物性は、例えば、原料である式（Ｉ－Ａ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸における各反応性基の導入率によって調整することが可能である。
いくつかの態様の架橋アルギン酸ゲルは、下記式（ＩＩＩ－Ｌx）：
Figure 0007450793000088
［式（ＩＩＩ－Ｌｘ）中、両端の－ＣＯＮＨ－及び－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－、及び－ＸＡ－は、前記態様［１－１２Ｘ］中の定義と同じである］で表わされる基を介して架橋された架橋アルギン酸ゲルである。
下記の記載において、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）は、各々、式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）に置き換えることができる。
いくつかの態様にて、架橋アルギン酸ゲルを作製する際の、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合比は、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の重量比にて、例えば、１：１．０～４．０、又は１：１．０～３．０、又は１：１．０～２．０、又は１：１．０～１．５、又は１：１であり；好ましくは１：１．０～３．０である。
いくつかの態様にて、架橋アルギン酸ゲルを作製する際の、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合比は、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の重量比にて、例えば、１：１．０～４．０、又は１：１．０～３．０、又は１：１．０～２．０、又は１：１．０～１．５、又は１：１である。
いくつかの態様にて、架橋アルギン酸ゲルを作製する際の、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合比は、より好ましくは式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基の導入率（ｍｏｌ％）比にて、例えば、１：１．０～４．０、又は１：１．０～３．０、又は１：１．０～２．０、又は１：１．０～１．５、又は１：１であり；好ましくは１：１．０～３．０である。
いくつかの態様にて、架橋アルギン酸ゲルを作製する際の、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合比は、より好ましくは式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基の導入率（ｍｏｌ％）比にて、例えば、１：１．０～４．０、又は１：１．０～３．０、又は１：１．０～２．０、又は１：１．０～１．５、又は１：１である。
架橋アルギン酸ゲルは、アルギン酸の構成単位の全てのカルボキシル基が上記式（ＩＩＩ－Ｌ）の架橋を有している必要はない。架橋アルギン酸ゲルにおける、上記式（ＩＩＩ－Ｌ）で表わされる架橋の導入率（架橋率とも言う）は、例えば、約０．１～約８０％、約０．３～約６０％、約０．５～約３０％、または約１．０～約１０％の範囲である。
架橋アルギン酸ゲルは、アルギン酸の構成単位の全てのカルボキシル基が上記式（ＩＩＩ－Ｌｘ）の架橋を有している必要はない。架橋アルギン酸ゲルにおける、上記式（ＩＩＩ－Ｌｘ）で表わされる架橋の導入率（架橋率とも言う）は、例えば、約０．１～約８０％、約０．３～約６０％、約０．５～約３０％、または約１．０～約１０％の範囲である。
本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルを得るためのＨｕｉｓｇｅｎ反応における前記式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされるアルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルを得るためのＨｕｉｓｇｅｎ反応における前記式（Ｉ－Ａ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされるアルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルを得るための前記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされるアルギン酸誘導体を用いたＨｕｉｓｇｅｎ反応において、前記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされるアルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該アルギン酸溶液の濃度(ＣＡＬＧ)は、例えば、０＜ＣＡＬＧ≦約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．７重量％の範囲である。
本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルを得るための前記式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされるアルギン酸誘導体を用いたＨｕｉｓｇｅｎ反応において、前記式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされるアルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該アルギン酸溶液の濃度（ＣＡＬＧ）は、例えば、０＜ＣＡＬＧ≦約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．７重量％の範囲である。
Ｈｕｉｓｇｅｎ反応の反応温度（架橋アルギン酸ゲル、架橋アルギン酸ゲルファイバを作製する際の温度）は、通常、外温約４～約６０℃であり、好ましくは外温約１５～約３７℃の範囲である。
６．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ
下記の記載において、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、各々、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体へ置き換えることができる。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と、前記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルとを含むコア層を、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）で被覆して得られる、ファイバ状（繊維状）の構造体を意味する（ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法は後述する）。
又、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、コア層とコア層の外側に配置されるカチオン性ポリマー層を含む、ファイバ状（繊維状）の構造体である。前記コア層は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と前記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋が形成された架橋アルギン酸ゲルとを含み、前記カチオン性ポリマー層は、カチオン性ポリマーである。
又、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、コア層とコア層の外側に配置されるカチオン性ポリマー層を含む、ファイバ状（繊維状）の構造体である。前記コア層は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と、架橋アルギン酸ゲルとを含み、前記架橋アルギン酸ゲルは、前記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋を含み、前記カチオン性ポリマー層は、カチオン性ポリマーである。
図１は、架橋アルギン酸ゲルファイバをカチオン性ポリマーで被覆することで形成されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの一例の断面図を示す。このポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、その外径がｃであり、直径ａのコア層５と厚さｂのカチオン性ポリマー層４を含み、コア層５は、抗体、生理活性物質等を産生する細胞６が含まれた架橋アルギン酸ゲルを含んでいる。当該、コア層５の架橋アルギン酸ゲルは、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成された架橋アルギン酸ゲルである。
いくつかの態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層は、前記態様［１］に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成された架橋アルギン酸ゲルの他に、細胞毒性を有さないものであれば特に限定されないが、コラーゲン溶液、コラーゲンゲル、培地、細胞培養用培地、培養液、メチルセルロース、スクロース溶液、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、等の他の成分を含むことができ；好ましくは、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、培地、培養液からなる群から選択される成分を含むことができる。
「ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ」は、ファイバの外径（図１でのｃ）が、例えば、約０．１～約２０００μｍ程度である繊維状の構造体であることから、「ポリマーコーティング架橋アルギン酸マイクロファイバ」と言うこともある。
ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの中心軸に対する垂直方向の断面形状は、円形に限定されるものではなく、非対称構造や変形させた形状でも良く、例えば、断面形状は、円形、楕円系、又は多角形（例えば、三角形、四角形、五角形等）等の多様な形状であっても良く、好ましくは、図１に示されるような円形の断面形状である。
ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの外径（非円形の場合は、長径又は最大径を外径とみなす）は、例えば、約０．１～約２０００μｍ、約０．２μｍ～約２０００μｍ、約０．２～約１０００μｍ、約０．５～約１０００μｍ、約１～約１０００μｍ、約１０～約１０００μｍ、約２０～約１０００μｍ等の範囲である。
ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の直径は、例えば、約０．１～約２０００μｍ、約０．２μｍ～約２０００μｍ、約１～約１０００μｍ、約２～約５００μｍ、約２～約２００μｍ等の範囲である。又、例えば、約０．１～約２０００μｍ、約０．２μｍ～約２０００μｍ、約０．２～約１０００μｍ、約０．５～約１０００μｍ、約１～約１０００μｍ、約１０～約１０００μｍ、約２０～約１０００μｍ等の範囲である。コア層の断面の直径は、ファイバ断面の直径未満であって５０％以上であることが好ましい。
ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのポリマー層（ｂ）の厚さは、「（ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの外径－コア層の直径）／２（図１でｂ＝（ｃ－ａ）／２）」により求めることができる。ポリマー層の厚さは、例えば、約０．１～約２００μｍ、約１～約２００μｍ、約５μｍ～約２００μｍ等である。
上記のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の直径、外径、及びポリマー層の内径の値は、例えば、ポリマー層に蛍光発色するカチオン性ポリマーを用いてファイバを作製し、位相差光学顕微鏡による画像から計測することが可能である。当該ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの数カ所における計測値の平均値として表される。上記のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層及びポリマー層は、通常、実質的に均一な厚みを有しており、好ましくは、各層は、±１０％の範囲内の厚さ均一性を有する。
ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの長さは、特に限定はされないが、例えば、後述の「９．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法」に記載された、約０．０１ｍ～約１００ｍ、約０．１ｍ～約７５ｍ、約０．３～約５０ｍ等の長さが挙げられる。
本明細書中、いくつかの態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液を用いて形成することができる。その場合、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、各々、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
又、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液の濃度は、例えば、約０．０２～約２．０重量％の範囲であり；好ましくは、約０．１～約２．０重量％の範囲であり；より好ましくは約０．１５～約１．５重量％の範囲である。
又、前記、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合の、当該アルギン酸の濃度(ＣＡＬＧ)は、例えば、０＜ＣＡＬＧ≦約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．７重量％の範囲である。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、特に限定されないが、例えば、０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；例えば、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、（約０．３４：約０．６６）、（約０．１６：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１およびＣ２の濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１ｘ（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；
例えば、（Ｃ１ｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、（約０．３４：約０．６６）、（約０．１６：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１ｘおよびＣ２ｘの濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、特に限定されないが、例えば、０＜Ｃ１Ａ≦約２．０－Ｃ２、０＜Ｃ１Ｎ≦約２．０－Ｃ２、０＜Ｃ２≦約１．９８、０＜Ｃ１Ａ＋Ｃ１Ｎ＋Ｃ２≦約２．０で表される式を満たす範囲の組合せであり；例えば、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、（約０．１７：約０．１７：約０．６６）、（約０．０８：約０．０８：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１Ａ、Ｃ１Ｎ、Ｃ２の濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａｘ（重量％））、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎｘ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、特に限定されないが、例えば、
０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ＋Ｃ１Ｎｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；
例えば、（Ｃ１Ａｘ：Ｃ１Ｎｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、（約０．１７：約０．１７：約０．６６）、（約０．０８：約０．０８：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１Ａｘ、Ｃ１Ｎｘ、Ｃ２ｘの濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液中の、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の各容量比（ｖ１、ｖ２）は、例えば、ｖ１＋ｖ２＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１＋ｖ２＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５である。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液中の、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の各容量比（ｖ１ｘ、ｖ２ｘ）は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５において、０＜ｖ１ｘ＜１５、０＜ｖ２ｘ＜１５である。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、アルギン酸溶液を添加した混合溶液における、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の容量（ｖ１）、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の容量（ｖ２）およびアルギン酸溶液の容量（ｖ３）の容量比は、例えば、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２：ｖ３）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５、０＜ｖ３＜１５である。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、アルギン酸溶液を添加した混合溶液における、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の容量（ｖ１ｘ）、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の容量（ｖ２ｘ）およびアルギン酸溶液の容量（ｖ３ｘ）の容量比は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ：ｖ３ｘ）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５において、０＜ｖ１ｘ＜１５、０＜ｖ２ｘ＜１５、０＜ｖ３ｘ＜１５である。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液、又は式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該アルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）の分子量は、特に限定はされないが、ゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量が、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲、約３００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲、約７００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａ等の範囲である。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液、又は式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該アルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）の分子量は、特に限定はされないが、ゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量が、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲、約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲、約７００，０００Ｄａ～約１，４００，０００Ｄａ、約８００，０００Ｄａ～約１，５００，０００Ｄａ、約１，４００，０００～約２，０００，０００Ｄａ、約１，５００，０００～約２，５００，０００等の範囲である。
ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層を作製する際に用いる、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、アルギン酸溶液等を調製する際に用いる溶媒としては、特に限定されないが、例えば、培地、細胞培養用培地、培養液、等張緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、及び生理食塩水等が挙げられ；好ましくは、培地、細胞培養用培地、培養液、生理食塩水または等張緩衝液である。
７．カチオン性ポリマー
ポリカチオンとは、１分子中に２個以上のカチオン性基を有する化合物をいい、カチオン性基とは、カチオン基又はカチオン基に誘導され得る基をいう。カチオン性基としては、例えば、アミノ基；メチルアミノ基、エチルアミノ基等のモノアルキルアミノ基；ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基等のジアルキルアミノ基；イミノ基；グアニジノ基、等の基が挙げられる。アミノ基はプロトンが配位結合した－ＮＨ３ ＋基であってもよい。
本明細書中、カチオン性ポリマーとは、１分子中に２個以上のカチオン性基を有するポリマーをいう。カチオン性ポリマーとしては、カチオン性基を有するモノマーを重合させたものが挙げられる。また、カチオン性ポリマーは、水に溶解することが可能な親水性を有し、水中でカチオン性基が解離することにより正電荷を帯びるという特性を有するものが好ましい。カチオン性ポリマーとしては、特に１分子中に２個以上のアミノ基を有するポリマーが好ましい。
本明細書中、カチオン性ポリマーとしては、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成される架橋アルギン酸ゲルファイバ、又は抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む、式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成される架橋アルギン酸ゲルファイバの表面において、当該架橋アルギン酸ゲルファイバが有するカルボキシル基とカチオン性ポリマーのカチオン性基とが静電的相互作用により、当該架橋アルギン酸ゲルファイバの表面がカチオン性ポリマーにて被覆される（図２を参照）ことで、架橋アルギン酸ゲルファイバの強度を高めることができる物質であることが好ましい。また、カチオン性ポリマーは、コア層に含まれる、抗体、生理活性物質等を産生する細胞から産生された抗体、生理活性物質等が、コア層を被覆したカチオン性ポリマー（ポリマー層）を透過して、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの外に放出できる、物質であることが好ましい。
本明細書中、カチオン性ポリマーとしては、例えば、ポリアミノ酸（塩基性アミノ酸の重合体）、塩基性多糖類（例えば、キトサン等）、塩基性ポリマー（ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリビニルアミン（ＰＶＡ）、ポリエチレンイミン、アリルアミン－ジアリルアミン共重合体およびアリルアミン－マレイン酸共重合体等）のカチオン性ポリマーが挙げられ、好ましくは、ポリアミノ酸であるポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリ－Ｄ－オルニチン（ＰＤＯ）、ポリ－ＤＬ－オルニチン、ポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ポリ－ＤＬ－リジン、ポリ－Ｌ－アルギニン（ＰＬＡ）、ポリ－Ｄ－アルギニン（ＰＤＡ）、ポリ－ＤＬ－アルギニン、ポリ－Ｌ－ホモアルギニン（ＰＬＨＡ）、ポリ－Ｄ－ホモアルギニン（ＰＤＨＡ）、ポリ－ＤＬ－ホモアルギニン、ポリ－Ｌ－ヒスチジン（ＰＬＨ）、ポリ－Ｄ－ヒスチジン（ＰＤＨ）、及びポリ－ＤＬ－ヒスチジン；塩基性ポリマーである、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）及びポリエチレンイミンからなる群から選ばれるカチオン性ポリマーであり；より好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）又はポリエチレンイミンであり；更に好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）又はポリエチレンイミンである。
本明細書中、カチオン性ポリマーを含む溶液を調製する際に用いるカチオン性ポリマーとしては、例えば、前記ポリアミノ酸、塩基性多糖類、塩基性ポリマー及びそれらの塩（塩酸塩、臭化水素酸塩等）が挙げられる。前記、カチオン性ポリマーは市販品または市販品から調製されたものを使用することが可能である。
本明細書中、カチオン性ポリマーの重合度は、特に限定されないが、例えば、５０～６，０００の重合度、５０～２，０００の重合度、１００～１，５００の重合度等が、挙げられる。ポリ－Ｌ－オルニチンの場合、例えば、１３０～１，３００の重合度であり、ポリアリルアミンの場合、例えば、５０～１，８００の重合度であり、キトサンの場合、例えば、６０～６，０００の重合度である。
本明細書中、カチオン性ポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）は、特に限定されないが、例えば、５００～１，０００，０００の範囲内、１，０００～５００，０００の範囲内、３，０００～３００，０００の範囲内、５，０００～１００，０００の範囲内、１０，０００～５０，０００の範囲内、等が、挙げられる。カチオン性ポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定することができる。
例えば、ポリ－Ｌ－オルニチンの場合、市販品のポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩［例えば、分子量：７０，０００～１５０，０００（富士フィルム－和光純薬製）、分子量：１５，０００～３０，０００、３０，０００～７０，０００、５，０００～１５，０００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）等］を使用することができ；例えば、ポリアリルアミンの場合、市販品のポリアリルアミン［例えば、分子量：１，６００、３，０００、５，０００、８，０００、１５，０００、２５，０００（日東紡製）、～１５，０００、～６５，０００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）等］、市販品のポリアリルアミン塩酸塩［例えば、分子量：１，６００、３，０００、５，０００、１５，０００、１００，０００（日東紡製）、～１７，５００、５０，０００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）等］を使用することができ；例えば、キトサンの場合、市販品のキトサン［例えば、分子量：～１５，０００（富士フィルム－和光純薬製）、５，０００、５０，０００、１００，０００、１６０，０００、１８０，０００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）等］を使用することができる。
カチオン性ポリマーの１つであるキトサンは、キチンの脱アセチル化物であり、その水溶性の観点より、その脱アセチル化度が、例えば、４０～１００％の範囲内、４５～９０％の範囲内、または５０～８０％の範囲内等のものを用いることができる。
カチオン性ポリマーを含む溶液の濃度は、特に限定されないが、アルギン酸ゲルファイバの表面を均一にコーティングすることができる濃度であればよく、例えば、約０．０１～約１０．０重量％、約０．０１～約５．０重量％、約０．０２～約１．０重量％の濃度が挙げられ、好ましくは、約０．０２～約５．０重量％、より好ましくは約０．０５～約１．０重量％の濃度である。
カチオン性ポリマーを含む溶液の粘度は、特に限定されないが、例えば、１０．０～５００．０ｍＰａ・ｓの範囲内、２０．０～３００．０ｍＰａ・ｓ の範囲内、５０．０～２００．０ｍＰａ・ｓの範囲内等である。
カチオン性ポリマーを含む溶液には、２種類以上のカチオン性ポリマーを併用することが可能である。
カチオン性ポリマーを含む溶液の溶媒としては、カチオン性ポリマーを溶解できるものであれば、特に限定されないが、例えば、水（水道水、純水（例えば、蒸留水、イオン交換水、ＲＯ水、ＲＯ－ＥＤＩ水、等）、超純水（ＭｉｌｌｉＱ水））、無機塩類の水溶液（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水等）等が挙げられ、カチオン性ポリマーの電荷量をより多くできる、超純水、水又は生理食塩水が好ましい。
８．コア層に含まれる細胞
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる細胞としては、特に制限されないが、例えば、抗体（ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体等の各種のモノクローナル抗体又はそれらのバイスペシフィック抗体、低分子化抗体、糖鎖改変抗体等の各種の改変型抗体）産生細胞、生理活性物質（酵素、サイトカイン、ホルモン、血液凝固系因子、ワクチン等）産生細胞、医薬品原料、化学原料、食品原料等として有用な各種の有用物質を産生できる細胞が挙げられる。好ましくは、抗体産生細胞または生理活性物質産生細胞である。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞としては、抗体を産生するＢ細胞から得られたハイブリドーマ（抗体産生ハイブリドーマ）、または抗体発現ベクターにより形質転換された培養細胞（抗体産生遺伝子組換え細胞）が挙げられる。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞としては、生理活性物質発現ベクターにより形質転換された培養細胞（生理活性物質産生遺伝子組換え細胞）が挙げられる。
これらの遺伝子組換えの宿主として用いられる培養細胞は、特に限定されることは無いが、細菌もしくは酵母等の微生物、植物細胞、昆虫細胞又は動物細胞が挙げられる。
宿主として用いられる微生物としては、例えば、大腸菌、出芽酵母、分裂酵母又はピキア酵母等が挙げられ、宿主として用いられる昆虫細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞又はＨｉｇｈ ｆｉｖｅ細胞等が挙げられる。
宿主として用いられる動物細胞としては、例えば、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株（ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＣＨＯ－ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ－ＤＸＢ１１細胞、又は糖鎖を改変させるように形質転換されたＣＨＯ細胞等）、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、ＰＥＲＣ６細胞、ＹＢ２／０細胞、ＹＥ２／０細胞、１Ｒ９８３Ｆ細胞、Ｎａｍａｌｗａ細胞、Ｗｉｌ－２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、Ｍｏｌｔ－４細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、ＫＧＨ６細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞、Ｃ１２７細胞、ＪＣ細胞、ＬＡ７細胞、ＺＲ－４５－３０細胞、ｈＴＥＲＴ細胞、ＮＭ２Ｃ５細胞、又はＵＡＣＣ－８１２細胞等（これらの細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手可能なＡＴＣＣ細胞系カタログに記載されているものもある）から、適宜選択することができる。なお、本明細書において、特に断りのない限り、「ＣＨＯ細胞」と記した場合「ＣＨＯ細胞亜株」も含めた細胞を意味し、他の細胞においても各々の細胞亜株を含めた細胞を意味する。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞としては、好ましくは、抗体発現ベクターにより形質転換された動物細胞であり、すなわち、抗体を産生する遺伝子組換え動物細胞である。又、コア層に封入できる生理活性物質産生細胞としては、好ましくは、生理活性物質発現ベクターにより形質転換された動物細胞であり、すなわち、生理活性物質を産生する遺伝子組換え動物細胞である。
それらの宿主として用いられる動物細胞としては、具体的には、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、又はＰＥＲＣ６細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、又はＣ１２７細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、及びＮＳ０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、及びＢＨＫ細胞からなる群から選択される細胞であり；更に好ましくは、ＣＨＯ細胞またはＣＨＯ細胞亜株である。また、ある態様では、抗体産生細胞の宿主細胞としては、好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、又はＮＳ０細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞又はＣＨＯ細胞亜株である。また、生理活性物質産生細胞の宿主細胞としては、好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＨＥＫ２９３細胞、又はＢＨＫ細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞又はＣＨＯ細胞亜株である。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる抗体産生細胞としては、特に限定されることは無いが、バイオ医薬品またはバイオ医薬品原料として用いられる抗体を産生する細胞が挙げられる。また、生理活性物質産生細胞としては、特に限定されることは無いが、バイオ医薬品またはバイオ医薬品原料として用いられる生理活性物質を産生する細胞が挙げられる。
バイオ医薬品としては、例えば、各種がん、自己免疫疾患・炎症性疾患、眼疾患、血液疾患、脳神経疾患、遺伝性希少疾患、内分泌代謝系疾患、循環器疾患、呼吸器疾患、消化器疾患、皮膚疾患、筋・骨疾患、感染症等の各種疾患に対する医薬品が挙げられる。
バイオ医薬品のうち、抗体医薬品の具体的な標的としては、特に限定されることは無いが、Ｃ５（補体）、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ７９、ＩＬ－１β、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ-６、ＩＬ-６Ｒ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－２３、ＩＦＮＡＲ、ＰＣＳＫ９、ＣＧＲＰ、ＣＧＲＰＲ、ＧＤ２（ガングリオシド）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＴＲＯＰ２、ＢＣＭＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＫＩＲ、ＳＬＡＭＦ７、ＲＡＮＫＬ、ＴＮＦ－α、ＢＬｙＳ、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＦＧＦ、ネクチン、インテグリン、ＥｐＣＡＭ、ＣＣＲ４、ＴｆＲ、ＴＦ、ＦＩＸａ、ＦＸ、ＧＰＶＩ、スクレロスチン、アミロイドβ、ＩｇＥ、又は各種ウイルス等（これらのサブタイプ、サブユニット、断片も含む）が挙げられ、これら標的に対する抗体を産生する細胞をコア層に含むことができる。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる抗体産生細胞としては、特に限定されることは無いが、具体的には、ムロモナブ－ＣＤ３、トラスツズマブ、リツキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、トシリズマブ、ベバシズマブ、アダリムマブ、セツキシマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、パニツムマブ、ウステキヌマブ、ゴリムマブ、カナキヌマブ、デノスマブ、オファツムマブ、ペルツズマブ、ナタリズマブ、ニボルマブ、アレムツズマブ、セクキヌマブ、ラムシルマブ、イピリムマブ、エボロクマブ、メポリズマブ、アリロクマブ、イキセキズマブ、ブロダルマブ、エロツズマブ、ペムブロリズマブ、サリルマブ、ベズロトクスマブ、ベリムマブ、ダラツムマブ、アベルマブ、デュピルマブ、アテゾリズマブ、エミシズマブ、グセルクマブ、デュルバルマブ、ベドリズマブ、ロモソズマブ、リサンキズマブ、ネシツムマブ、ラブリズマブ、ブロスマブ、イサツキシマブ、チルドラキズマブ、サトラリズマブ、ガルカネズマブ、ジヌツキシマブ、フレマネズマブ、エレヌマブ、カシリビマブ、イムデビマブ、アニフロルマブ、ソトロビマブ、オクレリズマブ、ナキシタマブ、アデュカヌマブ、タファシタマブ、マルジェツキシマブ、ガンテネルマブ、チラゴルマブ、クロバリマブ、ネモリズマブ、カツマクソマブ、プラモタマブ、ファリシマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、ブレンツキシマブ、イノツズマブ、ポラツズマブ、エンホルツマブ、サシツズマブ、ベランタマブ、ロンカスツキシマブ、チソツマブ、ダトポタマブ、パトリツマブ等の抗体を産生する細胞；モガムリズマブ、ベンラリズマブ、オビヌツズマブ、イネビリズマブ等の改変糖鎖を有する抗体を産生する細胞；ラニビズマブ、イダルシズマブ、ブリナツモマブ、ブロルシズマブ、アブシキシマブ、カプラシズマブ、セルトリズマブ等の抗体断片からなる低分子抗体を産生する細胞等が挙げられる。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる抗体産生細胞としては、特に限定されることは無いが、具体的には、抗体産生動物細胞が挙げられ、好ましくは、抗体産生ＣＨＯ細胞、抗体産生Ｓｐ２／０細胞又は抗体産生ＮＳ０細胞であり、より好ましくは、抗体産生ＣＨＯ細胞である。
より具体的には、前記抗体産生動物細胞としては、特に限定されることは無いが、例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＮＳ０細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＮＳ０細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＮＳ０細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＮＳ０細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＮＳ０細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＮＳ０細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＮＳ０細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ロモソズマブ産生ＣＨＯ細胞、リサンキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ネシツムマブ産生ＮＳ０細胞、ネシツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ラブリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロスマブ産生ＣＨＯ細胞、イサツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チルドラキズマブ産生ＣＨＯ細胞、サトラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ガルカネズマブ産生ＣＨＯ細胞、ジヌツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ジヌツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、フレマネズマブ産生ＣＨＯ細胞、エレヌマブ産生ＣＨＯ細胞、カシリビマブ産生ＣＨＯ細胞、イムデビマブ産生ＣＨＯ細胞、アニフロルマブ産生ＮＳ０細胞、アニフロルマブ産生ＣＨＯ細胞、ソトロビマブ産生ＣＨＯ細胞、オクレリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナキシタマブ産生ＣＨＯ細胞、アデュカヌマブ産生ＣＨＯ細胞、タファシタマブ産生ＣＨＯ細胞、マルジェツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＮＳ０細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生Ｓｐ２／０細胞、サシツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、イネビリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブリナツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アブシキシマブ産生ＣＨＯ細胞、カプラシズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等が挙げられ；
例えば、前記抗体産生ＣＨＯ細胞としては、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ロモソズマブ産生ＣＨＯ細胞、リサンキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ネシツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ラブリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロスマブ産生ＣＨＯ細胞、イサツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チルドラキズマブ産生ＣＨＯ細胞、サトラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ガルカネズマブ産生ＣＨＯ細胞、ジヌツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、フレマネズマブ産生ＣＨＯ細胞、エレヌマブ産生ＣＨＯ細胞、カシリビマブ産生ＣＨＯ細胞、イムデビマブ産生ＣＨＯ細胞、アニフロルマブ産生ＣＨＯ細胞、ソトロビマブ産生ＣＨＯ細胞、オクレリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナキシタマブ産生ＣＨＯ細胞、アデュカヌマブ産生ＣＨＯ細胞、タファシタマブ産生ＣＨＯ細胞、マルジェツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞、イネビリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブリナツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アブシキシマブ産生ＣＨＯ細胞、カプラシズマブ産生ＣＨＯ細胞、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等が挙げられ；
例えば、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、及び抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞からなる群から選択されるＣＨＯ細胞であり；例えば、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞である。
このようにして産生した抗体を、産生後に修飾や改変することもでき、具体的には、ＰＥＧ化、薬物の結合修飾、放射標識等が挙げられる。すなわち、ＰＥＧ化抗体や抗体薬物複合体等の修飾抗体の生産において、原料となる抗体の産生に用いる細胞（原料抗体産生細胞）を、コア層に封入できる細胞として挙げることができる。当該原料抗体産生細胞としては、特に制限されないが、ＰＥＧ化抗体の原料抗体産生細胞としては、例えば、セルトリズマブ ペゴルの原料抗体断片を産生する細胞、具体的には、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞等が挙げられ；抗体薬物複合体の原料抗体産生細胞としては、例えば、ゲムツズマブ オゾガマイシン、イブリツモマブ チウキセタン、トラスツズマブ エムタンシン、トラスツズマブ デルクステカン、ブレンツキシマブ ベドチン、イノツズマブ オゾガマイシン、セツキシマブ サロタロカンナトリウム、ポラツズマブ ベドチン、エンホルツマブベドチン、サシツズマブ ゴビテカン、ベランタマブ マホドチン、ロンカスツキシマブ テシリン、チソツマブ ベドチン、ダトポタマブ デルクステカン、パトリツマブ デルクステカン等の原料抗体を産生する細胞が挙げられ、具体的には、ゲムツズマブ産生ＮＳ０細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞等が挙げられる。
また、抗体又は抗体断片と他の蛋白質又はペプチドとの融合蛋白質を産生する細胞を、コア層に含むこともでき、例えば、パビナフスプアルファ産生ＣＨＯ細胞、ビントラフスプアルファ産生ＣＨＯ細胞等が挙げられる。
「抗体」に関しては、「１２．抗体の分類」及び「１３．抗体・生理活性物質の産生及び精製法」にて詳述する。
本明細書中、生理活性物質とは、生物に対して生理作用や薬理作用を発現する物質及び化合物群を意味する。生物に対して生理作用や薬理作用を発現する物質及び化合物群としては、例えば、酵素、インスリン、アルカロイド、サイトカイン（インターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、腫瘍壊死因子等）、植物ホルモン、神経伝達物質、フェロモン、ホルモン（動物ホルモン）、成長因子、成長調節因子、成長阻害因子、活性化因子、造血因子、血液凝固系因子、ワクチン（弱毒化ワクチン、不活化ワクチン、蛋白ワクチン等）等が挙げられる。
また、これら物質の受容体、細胞表面抗原、細胞表面受容体及びそれらのリガンドも、生理作用や薬理作用を発現する物質であり、生理活性物質に含まれる。さらに、生体が本来有する生理活性物質に加え、生理活性物質を修飾や改変した物質、生理活性を活性化又は阻害する物質、複数の生理活性物質又はその一部領域や断片を組合わせた融合蛋白質も、生理作用や薬理作用を発現する物質である限りは、生理活性物質に含まれ、本明細書においては、これらも含めて生理活性物質と称する。本明細書中、生理活性物質としては、好ましくは蛋白性の生理活性物質、すなわち蛋白質又はペプチドからなる生理活性物質である。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる生理活性物質産生細胞としては、特に限定されることは無いが、前述の通り、バイオ医薬品またはバイオ医薬品原料として用いられる生理活性物質を産生する細胞が挙げられる。
バイオ医薬品として用いられる生理活性物質としては、特に限定されることは無いが、例えば、ｔ－ＰＡ、グルコセレブロシダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、イズロニダーゼ、グルコシダーゼ、スルファターゼ、尿酸オキシダーゼ、ＤＮＡ分解酵素、アデノシンデアミナーゼ、トリペプチジルペプチダーゼ、ヒアルロニダーゼ、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、アルカリホスファターゼ等の酵素；ＦＶＩＩａ、ＦＶＩＩＩ、ＦＩＸ、ＦＸＩＩＩ、トロンボモジュリン、アンチトロンビン、アルブミン等の血液凝固系因子及び血液関連蛋白；インスリン、成長ホルモン、利尿ペプチド、性腺刺激ホルモン、ＧＬＰ－１、ＧＬＰ－２、副甲状腺ホルモン、レプチン等のホルモン；ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ等のインターフェロン；エリスロポエチン、トロンボポエチン等の造血因子；Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＴＮＦＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦＲ、ＴＧＦ－β等のサイトカイン及びそれらの受容体；ＣＴＬＡ－４等の細胞表面抗原、細胞表面受容体及びそれらのリガンド；Ｂ型肝炎ウイルス由来抗原、パピローマウイルス由来抗原、水痘帯状疱疹ウイルス由来抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来抗原等のワクチン用蛋白・ペプチド等が挙げられ、これらのサブタイプ、サブユニット、活性断片も挙げられ、これら生理活性物質を産生する細胞をコア層に含むことができる。
本明細書中、生理活性物質としては構造改変された物質も含むが、例えば、物質の活性を変化させるようなアミノ酸配列の改変を加えた物質が挙げられ、具体的には、インスリンアナログ、ＧＬＰ－１アナログ、エリスロポエチンアナログ等が挙げられる。また、本来の物質の一部領域や断片のアミノ酸配列からなる物質も含まれ、それら一部領域や断片のアミノ酸配列を複数配列組合せた物質であっても良く；具体的には、インスリンアナログ、ＦＶＩＩＩアナログ、副甲状腺ホルモンアナログ等が挙げられる。さらに、二種類以上の物質やその一部領域や断片を組合わせた融合蛋白質も含まれ、例えば、酵素と抗体の融合蛋白質、サイトカイン受容体と抗体Ｆｃ部分の融合蛋白質、細胞表面抗原細胞外ドメインと抗体Ｆｃ部分の融合蛋白質、血液凝固系因子と抗体Ｆｃ部分の融合蛋白質、血液凝固系因子と血漿タンパクの融合蛋白質等が挙げられる。これら構造改変された生理活性物質を産生する細胞をコア層に含むことができる。
このようにして産生した生理活性物質を、産生後に修飾や改変することもでき、具体的には、ＰＥＧ化、糖鎖修飾、薬物の結合修飾、放射標識等が挙げられる。すなわち、ＰＥＧ化蛋白質、脂肪酸付加ペプチド等の修飾蛋白質・ペプチドの生産において、原料となる蛋白質・ペプチドの生産に用いることができ、具体的には、ＰＥＧ化ＦＶＩＩＩ、ＰＥＧ化エリスロポエチン、脂肪酸付加インスリンアナログ等の原料蛋白質・ペプチドを産生する細胞が挙げられ、これら原料となる生理活性物質を産生する細胞（原料生理活性物質産生細胞）をコア層に含むことができる。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる生理活性物質産生細胞としては、特に限定されることは無いが、具体的には、アルテプラーゼ、モンテプラーゼ、イミグルセラーゼ、ベラグルセラーゼ、アガルシダーゼ、ラロニダーゼ、アルグルコシダーゼ、アバルグルコシダーゼ、イデュルスルファーゼ、ガルスルファーゼ、エロスルファーゼ、ラスブリカーゼ、ドルナーゼ、セルリポナーゼ、グルカルピダーゼ、ヒアルロニダーゼ、アスホターゼ等の酵素を産生する細胞；エプタコグ、オクトコグ、ルリオクトコグ、ツロクトコグ、ロノクトコグ、ダモクトコグ、シモクトコグ、ノナコグ、アルブトレペノナコグ、カトリデカコグ、エフラロクトコグ、エフトレノナコグ、トロンボモデュリン、アンチトロンビン、ボニコグ、アルブミン等の血液凝固系因子及び血液関連蛋白を産生する細胞；インスリン、インスリン リスプロ、インスリン アスパルト、インスリン グラルギン、インスリン デテミル、インスリン グルリジン、インスリン デグルデク、ソマトロピン、ソマプシタン、メカセルミン、カルペリチド、ボソリチド、グルカゴン、ホリトロピン、コリオゴナドトロピン、デュラグルチド、リラグルチド、セマグルチド、テデュグルチド、テリパラチド、メトレレプチン等のホルモンを産生する細胞；インターフェロンアルファ－２ａ、インターフェロンアルファ－２ｂ、インターフェロンベータ－１ａ、インターフェロンベータ－１ｂ、インターフェロンガンマ－１ａ等のインターフェロンを産生する細胞；エポエチン、ダルベポエチン、ロミプロスチム等の造血因子を産生する細胞；フィルグラスチム、レノグラスチム、テセロイキン、トラフェルミン、ベルフェルミン、エタネルセプト、アフリベルセプト、デニロイキン ジフチトクス等のサイトカイン及びそれらの受容体を産生する細胞；アバタセプト等の細胞表面抗原、細胞表面受容体及びそれらのリガンドを産生する細胞が挙げられ；これらのサブタイプ、サブユニット、活性断片を産生する細胞も挙げられる。
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる生理活性物質産生細胞としては、特に限定されることは無いが、具体的には、生理活性物質産生動物細胞が挙げられ、好ましくは、生理活性物質産生ＣＨＯ細胞、生理活性物質産生ＨＥＫ２９３細胞又は生理活性物質産生ＢＨＫ細胞であり、より好ましくは、生理活性物質産生ＣＨＯ細胞である。
より具体的には、前記生理活性物質産生動物細胞としては、特に限定されることは無いが、例えば、アルテプラーゼ産生ＣＨＯ細胞、イミグルセラーゼ産生ＣＨＯ細胞、アガルシダーゼ産生ＣＨＯ細胞、ラロニダーゼ産生ＣＨＯ細胞、アルグルコシダーゼ産生ＣＨＯ細胞、アバルグルコシダーゼ産生ＣＨＯ細胞、イデュルスルファーゼ産生ＣＨＯ細胞、ガルスルファーゼ産生ＣＨＯ細胞、エロスルファーゼ産生ＣＨＯ細胞、ドルナーゼ産生ＣＨＯ細胞、セルリポナーゼ産生ＣＨＯ細胞、ヒアルロニダーゼ産生ＣＨＯ細胞、アスホターゼ産生ＣＨＯ細胞、ルリオクトコグ産生ＣＨＯ細胞、ツロクトコグ産生ＣＨＯ細胞、ロノクトコグ産生ＣＨＯ細胞、ノナコグ産生ＣＨＯ細胞、アルブトレペノナコグ産生ＣＨＯ細胞、トロンボモデュリン産生ＣＨＯ細胞、アンチトロンビン産生ＣＨＯ細胞、ボニコグ産生ＣＨＯ細胞、ホリトロピン産生ＣＨＯ細胞、コリオゴナドトロピン産生ＣＨＯ細胞、デュラグルチド産生ＣＨＯ細胞、インターフェロンベータ－１ａ産生ＣＨＯ細胞、エポエチン産生ＣＨＯ細胞、ダルベポエチン産生ＣＨＯ細胞、レノグラスチム産生ＣＨＯ細胞、エタネルセプト産生ＣＨＯ細胞、アフリベルセプト産生ＣＨＯ細胞、アバタセプト産生ＣＨＯ細胞等の生理活性物質産生ＣＨＯ細胞；シモクトコグ産生ＨＥＫ２９３細胞、エフラロクトコグ産生ＨＥＫ２９３細胞、エフトレノナコグ産生ＨＥＫ２９３細胞等の生理活性物質産生ＨＥＫ２９３細胞；モンテプラーゼ産生ＢＨＫ細胞、エプタコグ産生ＢＨＫ細胞、オクトコグ産生ＢＨＫ細胞、ダモクトコグ産生ＢＨＫ細胞等の生理活性物質産生ＢＨＫ細胞；ベラグルセラーゼ産生ＨＴ－１０８０細胞、アガルシダーゼ産生ＨＴ－１０８０細胞、イデュルスルファーゼ産生ＨＴ－１０８０細胞等の生理活性物質産生ＨＴ－１０８０細胞；ホリトロピン産生ＰＥＲＣ６細胞等の生理活性物質産生ＰＥＲＣ６細胞等が挙げられ；
例えば、前記生理活性物質産生ＣＨＯ細胞としては、アルテプラーゼ産生ＣＨＯ細胞、アルグルコシダーゼ産生ＣＨＯ細胞、ルリオクトコグ産生ＣＨＯ細胞、デュラグルチド産生ＣＨＯ細胞、インターフェロンベータ－１ａ産生ＣＨＯ細胞、ダルベポエチン産生ＣＨＯ細胞、エタネルセプト産生ＣＨＯ細胞、アフリベルセプト産生ＣＨＯ細胞及びアバタセプト産生ＣＨＯ細胞等が挙げられる。
なお、ここに挙げた生理活性物質は、前述のように産生後に修飾や改変を加えられた物質名を記している場合があるが、それらはその原料となる生理活性物質を産生する細胞をコア層に含むことができる。例えば、エラペグアデマーゼ、ペグバリアーゼ、ルリオクトコグ アルファ ペゴル、ツロクトコグ アルファ ペゴル、ダモクトコグ アルファ ペゴル、ノナコグ ベータ ペゴル、ペグビソマント、ペグインターフェロン アルファ－２ａ、ペグインターフェロン アルファ－２ｂ、エポエチン ベータ ペゴル、ペグフィルグラスチム、ペグベルフェルミン等のＰＥＧ化された生理活性物質においては、それらの原料となる生理活性物質を産生する細胞をコア層に含むことができる。
生理活性物質を産生できる細胞としては、前述の生理活性物質産生遺伝子組換え細胞に加え、天然の細胞や、人工的な改変操作を施された細胞も含まれ、複数個の細胞からなる細胞塊も含まれ、例えば、インスリン分泌細胞、膵島、膵島細胞、ドーパミン分泌細胞、脳下垂体細胞、成長ホルモン分泌細胞、副甲状腺細胞、神経成長因子分泌細胞、血液凝固因子分泌細胞、肝細胞、上皮小体細胞、エリスロポエチン分泌細胞、ノルエピネフリン分泌細胞等が挙げられる。本明細書中、生理活性物質を産生する細胞としては、ある態様においては、インスリン分泌細胞、膵島又は膵島細胞、又は膵β細胞由来のＭＩＮ６細胞である。
「インスリン分泌細胞」とは、インスリンを分泌する機能を有する細胞を意味し、例えば、膵島を構成する細胞においては、インスリンを分泌するβ細胞を意味する。また、「インスリン分泌細胞」は、分化、成熟や改変などによってインスリン分泌機能を有するようになった細胞であってもよく、例えば、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞、又は体性幹細胞（例えば、間葉系幹細胞）等の幹細胞を分化させて得られたインスリン分泌機能を有する細胞、幼若細胞や前駆細胞を成熟させて得られたインスリン分泌機能を有する細胞、及び、遺伝子組み換えによりインスリン分泌機能を付与された細胞も含み得る。ここで、当該細胞を分化や成熟させることには、当該細胞を培養させることが含まれ、すなわち、分化又は成熟させて得られた細胞とは、培養されて得られた細胞を含み得る。
「膵島」とは、別名ランゲルハンス氏島とも呼ばれる、平均約２０００個の膵島細胞より構成される細胞塊である。膵島は、グルカゴンを分泌するα細胞、インスリンを分泌するβ細胞、ソマトスタチンを分泌するδ細胞、グレリンを分泌するε細胞、及び膵ポリペプチドを分泌するＰＰ（pancreatic polypeptide；膵ポリペプチド）細胞の５種の細胞から構成される。
本明細書において、「膵島細胞」とは、上記の膵島を構成する５種類の細胞うちの少なくとも１種類の細胞を含むものであればよいが、少なくともβ細胞を含むことが好ましい。いくつかの態様では、膵島細胞としては、α細胞、β細胞、δ細胞、ε細胞、及びＰＰ細胞の全てを含む混合物でもよく、膵島に含まれた状態のものでもよい。
また、「膵島細胞」は、分化、成熟や改変などにより膵島細胞になったものであってもよい。この場合、「膵島細胞」には、例えば、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞、及び体性幹細胞（例えば、間葉系幹細胞）等の幹細胞を分化させて得られた膵島細胞、及び幼若細胞や前駆細胞を成熟させて得られた膵島細胞も含み得る。
「インスリン分泌細胞」又は「膵島（膵島細胞を含む）」としては、移植用途として用いる場合は、患者に移植した際に、患者の病的状態を回復することができる程度の生存性と機能とを有することが好ましい。インスリン分泌細胞、膵島又は膵島細胞の機能としては、例えば、インスリンを分泌することが挙げられ、移植後においてもグルコース応答性が維持されていることが好ましい。
「インスリン分泌細胞」、「膵島」又は「膵島細胞」のドナーは、動物、好ましくは脊椎動物、より好ましくは哺乳類であり、具体的にはヒト、ブタ、サル、ラット又はマウスなどが挙げられ、更に好ましくはヒト又はブタである。「インスリン分泌細胞」、「膵島」又は「膵島細胞」のドナーは、いくつかの態様では、ドナー不足解消の観点からブタである。「インスリン分泌細胞」、「膵島」又は「膵島細胞」としては、ドナーである動物から得られた膵島又は膵島細胞、あるいはドナー由来細胞から得られたインスリン分泌細胞又は膵島細胞のいずれかでもよく、例えば、ヒト由来のＥＳ細胞またはiＰＳ細胞から分化したインスリン分泌細胞又は膵島細胞でもよい。
「インスリン分泌細胞」、「膵島」又は「膵島細胞」がブタ由来である場合には、成体のブタ膵島、又は、胎生期、新生児期、もしくは周産期のブタ膵島、又は当該膵島から得られたインスリン分泌細胞もしくは膵島細胞が挙げられる。当該膵島は適宜培養してから使用するようにしてもよく、胎生期、新生児期、もしくは周産期のブタ膵島を成熟させた膵島を使用してもよい。
血液凝固因子分泌細胞としては、例えば、第VIII因子分泌細胞及び第IX因子分泌細胞を挙げることができる。
９．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法
下記の記載において、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、各々、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体へ置き換えることができる。
ここでは、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含み、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成される架橋アルギン酸ゲル（コア層）がカチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）で被覆された、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法が提供される。例えば、図３に示される装置ＸＸを用いることを含む当該ファイバの製造方法が提供される。
以下に、前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法について説明する。
前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法は、特に限定されないが、例えば、図３に示される装置ＸＸを用いて行う。ここでの装置ＸＸは、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを作製するのに好ましく用いられる装置である。
装置ＸＸは、例えば、図３に示されるように、導入口を１つ、排出口を１つ備える微細流路を作ることが可能な装置であり、導入口から溶液を導入し、適当な速さで流すことで、排出口から溶液がファイバ状（繊維状）となり排出される。
装置ＸＸは、例えば、図３に示されるような押出筒ＹＹ等を用いて、装置ＸＸの導入口から導入した、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を、押し出すことで装置ＸＸの排出口から、当該混合溶液を射出することができる。
装置ＸＸと押出筒ＹＹを備えるものとして、例えば、注射筒を用いることができる。注射筒の場合、装置ＸＸが外筒となり、装置ＸＸに導入された溶液を排出口から押し出すための押出筒ＹＹが内筒になる。注射筒を用いる場合、ガラス製またはプラスチック製の注射筒を用いることができる。
図３に示すように、装置ＸＸの排出口２より排出されるファイバ状物質を受ける容器として、２価金属イオンを含む溶液を含むビーカー等の容器ＤＤが用いられる。又、架橋アルギン酸ゲルファイバＣＬＡの表面を、カチオン性ポリマーで被覆するための容器として、カチオン性ポリマーを含む溶液を含むビーカー等の容器ＥＥが用いられる。
図３は、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造過程の１つの態様を説明する模式図である。一例として、細胞（抗体、生理活性物質等を産生できる細胞）を含み、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液を用いる作製方法について説明する。
ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、例えば下記工程（Ｓ）～（２）を含む方法により製造することができる。
工程（Ｓ）：装置ＸＸの導入口１から、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を導入する工程、
工程（１）：装置ＸＸの排出口２から、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体が含まれる混合溶液を、２価金属イオンを含む溶液中に射出し、２価金属イオンに接触させ、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を得る工程、
工程（２）：工程（１）で得られた抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を、カチオン性ポリマーを含む溶液に接触させることで、カチオン性ポリマー層で被覆して形成されるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）を得る工程。
工程（Ｓ）では、前述のコア層に含まれる細胞で説明される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む溶液に懸濁または溶解させる。この際、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞以外に、アルギン酸溶液、培地、培養液、コラーゲン溶液、メチルセルロース、スクロース溶液等の成分を添加することも可能である。
工程（１）では、工程（Ｓ）で調製した抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液（または懸濁液）を、２価金属イオンを含む溶液へゆっくりと放出することで、放出された溶液が順次、ゲル化していくことにより、ファイバー状（繊維状）の構造物を製造することができる。２価金属イオンを含む溶液と接触させることにより、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の間でイオン架橋が進むのと同時にＨｕｉｓｇｅｎ反応による化学架橋も進み、ゲルが作製できる。
工程（２）では、工程（１）で得られた抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバを、カチオン性ポリマーを含む溶液に接触させることにより、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバの表面がカチオン性ポリマー層で被覆される。
前記（Ｓ）～（２）の工程を行うことにより、本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）を製造することができる。
本明細書において、「接触」とは、ある溶液（例えば、化学修飾アルギン酸誘導体の溶液）またはゲル（例えば、架橋アルギン酸ゲル）を別の溶液（例えば、２価金属イオンを含む溶液、カチオン性ポリマーを含む溶液）に浸漬または添加すること等を意味する。
装置ＸＸの排出口２から射出される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の流速（射出速度）は、例えば、約１００～約１００００μＬ／分程度であってもよい。例えば、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞又はトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞をコア層に含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを作製する場合の流速は、例えば、２５０μＬ／分、４ｍＬ／分、１０ｍＬ／分等であり、ＭＩＮ６細胞をコア層に含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを作製する場合の流速は、例えば、１２５μＬ／分である。流速（射出速度）はシリンジポンプ等を用いて調整することが可能であり、様々なサイズのファイバーを製造することが可能になる。又、装置ＸＸの排出口２の大きさ（径）を変化させることにより、コア層の直径を調整できたファイバーを製造することも可能となる。
装置ＸＸの排出口２には、ルアーロック用ニードル（金属製等の材質）、シリコンチューブ、ガラスキャピラリ等を適宜組み合わせて接続して、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を２価金属イオンを含む溶液へ放出することができる。
装置ＸＸの導入口１から導入される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液は、例えば、前記態様［１］に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて、溶媒（例えば、培地、細胞培養用培地、培養液、等張緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、及び生理食塩水等）を添加して、所定の濃度（例えば、各化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度が約０．０１～約１．５重量％、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液の濃度が約０．０２～約２．０重量％）の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液を調製する。
装置ＸＸの導入口１から導入される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度は、例えば、約０．５～約２．０重量％の範囲に調整される。
装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、特に限定されないが、
例えば、０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり、
例えば、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、（約０．３４：約０．６６）、（約０．１６：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１およびＣ２の濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１ｘ（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、特に限定されないが、
例えば、０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；
例えば、（Ｃ１ｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、（約０．３４：約０．６６）、（約０．１６：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１およびＣ２の濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、特に限定されないが、例えば、
０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ＋Ｃ１Ｎ＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；
例えば、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、（約０．１７：約０．１７：約０．６６）、（約０．０８：約０．０８：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１Ａ、Ｃ１Ｎ、Ｃ２の濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａｘ（重量％））、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎｘ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、特に限定されないが、例えば、
０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ＋Ｃ１Ｎｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；
例えば、（Ｃ１Ａｘ：Ｃ１Ｎｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、（約０．１７：約０．１７：約０．６６）、（約０．０８：約０．０８：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１Ａｘ、Ｃ１Ｎｘ、Ｃ２ｘの濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液中の、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の各容量比（ｖ１、ｖ２）は、例えば、ｖ１＋ｖ２＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１＋ｖ２＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５である。
装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液中の、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の各容量比（ｖ１ｘ、ｖ２ｘ）は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５において、０＜Ｖ１ｘ＜１５、０＜Ｖ２ｘ＜１５である。
装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、アルギン酸溶液を添加した混合溶液における、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の容量（ｖ１）、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の容量（ｖ２）およびアルギン酸溶液の容量（ｖ３）の容量比は、例えば、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２：ｖ３）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５、０＜ｖ３＜１５である。
装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、アルギン酸溶液を添加した混合溶液における、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の容量（ｖ１ｘ）、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の容量（ｖ２ｘ）およびアルギン酸溶液の容量（ｖ３ｘ）の容量比は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ：ｖ３ｘ）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５において、０＜ｖ１ｘ＜１５、０＜ｖ２ｘ＜１５、０＜ｖ３ｘ＜１５である。
装置ＸＸの排出口２から、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を射出する際に、射出される混合溶液を、ハサミ、カッター等の切断器具を用いて一定間隔で切断することで、所望の長さを有する架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を得ることが可能である。架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）の長さは、特に限定はされないが、例えば、約０．０１ｍ～約１００ｍ、約０．１ｍ～約７５ｍ、約０．３ｍ～約５０ｍ、約０．５ｍ～約３０ｍ、約１．０ｍ～約１０ｍ、約１．０ｍ～約２．０ｍ、約２．０ｍ～約３．０ｍ、約３．０ｍ～約４．０ｍ、約４．０ｍ～約５．０ｍ、約５．０ｍ～約６．０ｍ、約６．０ｍ～約７．０ｍ、約７．０ｍ～約８．０ｍ、約８．０ｍ～約９．０ｍ、約９．０ｍ～約１０ｍ、約１ｃｍ～約５ｃｍ、約５ｃｍ～約１０ｃｍ、約１０ｃｍ～約２０ｃｍ、約２０ｃｍ～約３０ｃｍ、約３０ｃｍ～約４０ｃｍ、約４０ｃｍ～約５０ｃｍ、約５０ｃｍ～約６０ｃｍ、約６０ｃｍ～約７０ｃｍ、約７０ｃｍ～約８０ｃｍ、約８０ｃｍ～約９０ｃｍ、約９０ｃｍ～約１．０ｍ、約９０ｃｍ～約１．０ｍ等が挙げられる。
装置ＸＸの排出口２から、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を射出する際に、射出される混合溶液を、ハサミ、カッター等の切断器具を用いて一定間隔で切断することで、所望の長さを有する架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を得ることが可能である。架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）の長さは、特に限定はされないが、上記と同様の長さが挙げられる。
作製されるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）の外径は、特に限定されないが、前述の通りであり、例えば、約０．１～約２０００μｍ、約０．２μｍ～約２０００μｍ、約０．２～約１０００μｍ、約０．５～約１０００μｍ、約１～約１０００μｍ、約１０～約１０００μｍ、約２０～約１０００μｍ等の範囲である。
ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）の長さは特に限定されず、前述の通りであり、例えば、約０．３～約５０ｍ程度であってもよい。また、前述の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）の長さを調整して得ることで、例えば、約０．０１ｍ～約１００ｍ、約０．１ｍ～約７５ｍ、約０．３ｍ～約５０ｍ、約０．５ｍ～約３０ｍ、約１．０ｍ～約１０ｍ、約１．０ｍ～約２．０ｍ、約２．０ｍ～約３．０ｍ、約３．０ｍ～約４．０ｍ、約４．０ｍ～約５．０ｍ、約５．０ｍ～約６．０ｍ、約６．０ｍ～約７．０ｍ、約７．０ｍ～約８．０ｍ、約８．０ｍ～約９．０ｍ、約９．０ｍ～約１０ｍ、約１ｃｍ～約５ｃｍ、約５ｃｍ～約１０ｃｍ、約１０ｃｍ～約２０ｃｍ、約２０ｃｍ～約３０ｃｍ、約３０ｃｍ～約４０ｃｍ、約４０ｃｍ～約５０ｃｍ、約５０ｃｍ～約６０ｃｍ、約６０ｃｍ～約７０ｃｍ、約７０ｃｍ～約８０ｃｍ、約８０ｃｍ～約９０ｃｍ、約９０ｃｍ～約１．０ｍ、約９０ｃｍ～約１．０ｍ等の長さの、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）が得られることが可能となる。
ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）の断面形状としては、前述の通りであり、例えば、円形、楕円系、四角形や五角形等の多角形等が挙げられる。
装置ＸＸの排出口２から射出される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液、又は生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液、を接触させる、２価金属イオンを含む溶液は、前述の「５－１．架橋アルギン酸ゲル」に記載の通りであり、例えば、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、バリウムイオン、ストロンチウムイオン、亜鉛イオン等が含まれる溶液があげられる。
２価金属イオンを含む溶液の２価金属イオン濃度は、例えば、約１ｍＭ～約１Ｍの範囲、又は約１０～約５００ｍＭの範囲であり；好ましくは、約１０～約１００ｍＭである。
２価金属イオンを含む溶液を調製する際に用いる溶媒は、前述の「５－１．架橋アルギン酸ゲル」に記載の通りであり、例えば、水、及び生理食塩水等が挙げられる。
装置ＸＸの排出口２から射出される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を２価金属イオンを含む溶液に接触させる時間は、例えば、約１分～６０分、１分～３０分等である。
前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法の工程（２）で得られる架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させる、カチオン性ポリマーを含む溶液は、前述の「７．カチオン性ポリマー」に記載されるカチオン性ポリマーを含む溶液であり、例えば、ポリアミノ酸、塩基性多糖、塩基性ポリマー等を含む溶液が挙げられる。
前記架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させる、カチオン性ポリマーを含む溶液の濃度は、前述の「７．カチオン性ポリマー」に記載される通りであり、例えば、約０．０２～約０．２重量％、約０．０５～約０．１重量％等である。
前記架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させる、カチオン性ポリマーを含む溶液は、２価金属イオンを含む水溶液（例えば、塩化カルシウム水溶液、塩化バリウム水溶液、等）、塩化ナトリウム水溶液、溶液のｐＨ調整のための緩衝液（酢酸、酢酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸等の水溶液）等の成分を含むことができる。
前記架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）をカチオン性ポリマーを含む溶液に接触させる時間は、例えば、約１分～６０分、１分～３０分等である。
いくつかの態様では、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製法時の温度は、例えば、約４～約３７℃の範囲である。
前記製造方法により、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞がある一定数含まれたコア層を有するポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを容易に得ることができる。
いくつかの態様では、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養液中で培養することにより、抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等が培養され、抗体、生理活性物質等を産生することができる。ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、培養液を適切に交換することにより、抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等を数週間～数か月の間連続培養することが可能となる。
前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの強度については、当業者に周知の方法に従って、振盪崩壊試験、引張強度試験等により測定することができる。
本明細書中の記載において「約」と記載した場合、特に断りが無い場合には、当該数値の±２０％迄、好ましくは当該数値の±１０％迄の値も含み得るものである。
１０．抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の培養方法
ここでは、前記製造方法にて作製される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含むポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた、抗体、生理活性物質等の製造方法が提供される。例えば、前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養容器に入れ、培地を添加して前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを含浸させ、培養を行うことにより、抗体、生理活性物質等を製造することができる。以下、「抗体、生理活性物質等の製造方法」を「抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の培養方法」という場合がある。
好ましい態様の抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の培養方法によれば、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含むポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを前記製造方法にて作製した後の早い段階で、培養液に浸潤させ抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の培養を開始することができる。これにより、図４に示すように、コア層への培養液（栄養源）及び酸素の供給をすぐに行うことができ、すなわち、コア層に含まれる、抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等を壊死させることなく、培養が可能となる。特に好ましい態様では、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層での抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の壊死を十分に防ぎつつ、抗体、生理活性物質等を産生することができる。
本発明の抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含むポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、培養時にファイバ外に存在している培養液（栄養源）及び酸素等の成分に対して十分な透過性を有しているものである。
以下に、抗体産生細胞の培養方法の一例について、具体的に説明するが、これに限定されない。ベントキャップ付三角フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社、 Ｃａｔ．４３１１４３）に、前述の製造方法にて作製された、コア層に抗体産生細胞を含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを入れ、後述する表３１の組成である培地（３０ ｍＬ）を添加し、ゲルファイバを含浸させた後、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下にインキュベータ内で振盪器（パナソニックヘルスケア（株）ＭＩＲ－Ｓ１００Ｃ）を用いた１２５ ｒｐｍの条件で振とうしながら培養を行う。培養期間中、２～３日に一回、培地１．８ ｍＬを抜き取り、Ｆｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、ＪＸ Ｆｅｅｄ ００３）または表３１の組成である培地１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０ ｍＬに保つ。また、培養期間中、週に一度培地の半量交換をおこなう。
また、以下に、生理活性物質産生細胞の培養方法の一例について、具体的に説明するが、これに限定されない。前述の製造方法にて作製された、コア層に生理活性物質産生細胞を含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを低接着表面ディッシュに入れ、後述する表３５の組成である培地（５ ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で静置して培養をおこなう。
ある態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造技術は、コア層に含まれる抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等がある一定数以上には増殖しないことにより、細胞への物理的ストレスが少ないため、封入した抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等が長期間に渡り抗体、生理活性物質等を産生し続ける可能性を有している点で優れている。
特に好ましい態様では、抗体の生産・精製効率を飛躍的に向上させる可能性があり（例えば、好ましい態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いることで、大規模な培養タンクを要する浮遊培養とは異なり、小規模の生産設備にて抗体を培養することも可能となる）、少量・多種品目の抗体医薬品の製造にも適した次世代型抗体医薬品の連続生産技術として期待できる。
培養により産生された抗体（例えば、抗ＧＰＶＩ抗体、トシリズマブ）または生理活性物質（例えば、インスリン）は、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に貯留されても良く、好ましくは、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層およびカチオン性ポリマー層を透過しポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ外の培養液中に貯留される。
尚、抗体、生理活性物質等の回収・精製は、後述の記載を参照し、行うことが可能である。
好ましい態様では、図４に示すように、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層内で産生された抗体、生理活性物質等が、コア層及びカチオン性ポリマー層を透過して当該ファイバ外へ順次放出されることとなり、抗体、生理活性物質等の連続培養が可能なサイクルが形成可能である。尚、このとき、代謝物及び老廃物も当該ファイバ外へ放出されてもよい。
実際に、後述の実施例では、コア層に含める細胞として、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞またはＭＩＮ６細胞から選択される細胞を用い、コア層の架橋アルギン酸ゲルの形成に用いる式（Ｉ）の化学修飾アルギン酸誘導体として、下記式：
Figure 0007450793000089
［式中、（ＡＬＧ）は、アルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わす］から選択される化学修飾アルギン酸誘導体を、式（ＩＩ）の化学修飾アルギン酸誘導体として、下記式：
Figure 0007450793000090
［式中、（ＡＬＧ）は、アルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わす］から選択される化学修飾アルギン酸誘導体を用い、カチオン性ポリマー層のカチオン性ポリマーとして、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）を用いて、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを作製した。
また、前記で得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養した処、産生された抗体（抗ＧＰＶＩ抗体、トシリズマブ）又は生理活性物質（インスリン）が、コア層及びカチオン性ポリマー層を透過して培養液中に貯留された事が確認できた。
抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含むポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養する、培養容器としては、例えば、組織培養用プレート、三角フラスコ、Ｔ－フラスコ、スピナーフラスコ、培養バッグ、動物細胞培養槽等からなる群から選択される容器であり；好ましくは三角フラスコ又は動物細胞培養槽である。培養は、静置培養、振とう・揺動培養などのいずれの方法を選択してもよい。
抗体、生理活性物質等の生産性向上には、培養当たりの抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の細胞数の増大化が有効であるが、一方で過剰な増殖が起こり、培養環境が悪化し、培養期間の短縮が起こりうる。いくつかの態様の抗体、生理活性物質等の製造方法にて、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる、抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の過剰増殖に起因する細胞への物理的ストレスを少なくする為の方法として、例えば、コア層に含まれる抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等がある一定数以上に増殖しない方法としては、培養中の培養温度のコントロール、培養液中に細胞増殖抑制剤を添加する、等の方法が挙げられる。
いくつかの態様の抗体、生理活性物質等の製造方法にて、培養温度は、例えば、約２８℃～約３９℃の範囲であり、例えば、約３０℃～約３７℃の範囲である。
いくつかの態様の抗体、生理活性物質等の製造方法にて、培養開始から終了時までの培養温度は、適時、変化させることも可能である。例えば、培養開始時の温度を約３７℃として、ある一定時間培養した段階で、約３０℃に変化させることが可能である。
いくつかの態様の抗体、生理活性物質等の製造方法にて、培養期間は、例えば、７日以上であり、又は１０日以上であり、又は２０日以上であり、又は３０日以上であり、又は４０日以上であり、又は５０日以上であり、又は６０日以上であり、又は７０日以上である。
いくつかの態様の抗体、生理活性物質等の製造方法にて、培養期間は、例えば、７日であり、又は１４日であり、又は２８日であり、又は３５日であり、又は４２日であり、又は４９日であり、又は５６日であり、又は６３日であり、又は７０日である。
いくつかの態様の抗体の製造方法にて、培養液中に細胞増殖抑制剤を添加することもできる。細胞増殖抑制剤とは、培養期間中、過剰な細胞増殖を抑制することが可能な剤であり、例えば、ジメチルスルホキシド、酪酸ナトリウム、バルプロ酸、塩化リチウム、吉草酸、メトトレキサート（ＭＴＸ）等の添加剤が挙げられる。細胞増殖抑制剤を培養液に添加するタイミングは、培養開始時点、又は培養期間中（必要な細胞数まで増殖できた時点）のいずれでも可能である。本明細書にて、抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞を用いて培養を行う場合、メトトレキサート（ＭＴＸ）を添加している。
本明細書中、細胞培養用培地には、市販の培地基材又は調製済み培地、若しくは自製した培地を使用することができる。又、天然培地（例えば、ソイビーン－カゼインダイジェスト培地（ＳＣＤ培地）等がある）又は合成培地（増殖に必要な各種栄養素を全て化学薬品にて補う培地である）を使用することもできる。又、当該培地は、特に限定されることは無いが、細胞の生存増殖に必要な成分（無機塩、炭水化物、ホルモン、必須アミノ酸、非必須アミノ酸、ビタミン等）が含まれる基本培地であれば良く、例えば、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）、Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ－１６４０、Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅａｇｌｅ（ＢＭＥ）、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ－１２（ＤＭＥＭ／Ｆ－１２）、Ｇｌａｓｇｏｗ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（ＧｌａｓｇｏｗＭＥＭ）、Ｇ０１６培地、ＤＭＥＭ（Ｈｉｇｈ Ｇｌｕｃｏｓｅ）等が挙げられる。
又、前記培地には、更に血清が含まれていても良い。前記血清としては、特に限定されることは無いが、例えば、ＦＢＳ／ＦＣＳ（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ／Ｃａｌｆ Ｓｅｒｕｍ）、ＮＣＳ（Ｎｅｗｂｏｒｎ Ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ）、ＣＳ（Ｃａｌｆ Ｓｅｒｕｍ）、ＨＳ（Ｈｏｒｓｅ Ｓｅｒｕｍ）等が挙げられる。培地に含まれる血清の濃度は、例えば、２重量％以上１０重量％以下である。
本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、そのコア層の架橋アルギン酸ゲルファイバの両端がカチオン性ポリマーで被覆されていることから、培養期間中にコア層に含まれる抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の細胞が、多量に（例えば、１×１０５個／ｍＬ以上）ファイバ外へ漏れだすことの防止、抑制又は低減に繋がる。
１１．コア層における生細胞数の算出方法
以下に、培養開始時、培養期間中または培養後における、抗体産生細胞を含有するポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体産生細胞の生細胞数の測定方法の一例について、具体的に説明するが、これに限定されるものではない。
抗体産生細胞を含有する架橋アルギン酸ゲルファイバ、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（０．２ｍＬ）を１５ｍＬチューブ（遠沈管（印刷目盛付・バルク），型式：２３２５－０１５－ＭＹＰ）に移し、チューブの目盛で約４．５ｍＬまで後述する表３１の組成であるＧ０１６培地（４．５ ｍＬ）を添加する。続いて、１ ｍｇ／ｍＬ Ａｌｇｉｎａｔｅ ｌｙａｓｅ （Ｐｏｌｙ α－ｇｕｌｕｒｏｎａｔｅ ｌｙａｓｅ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｚｏｂｅｌｌｉａ ｇａｌａｃｔａｎｉｖｏｒａｎｓ） （Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｅｎｚｙｍｅｓ， Ｃａｔ＃ＮＡＴＥ－１５６３）を３０μＬ添加し、３０ ℃、１２５ ｒｐｍで１時間以上振盪撹拌した。振盪撹拌の間、架橋アルギン酸ゲルファイバが均一に溶解するまで、適宜、溶液のピペッティングあるいは前記Ａｌｇｉｎａｔｅ ｌｙａｓｅを添加した。前記架橋アルギン酸ゲルファイバが均一に溶解したことを確認後、液量を確認し、前記Ｇ０１６培地を追加して５ｍＬとする。前記溶液の一部を採取し、細胞数をカウントする。２回測定の平均値を用いて、架橋アルギン酸ゲルファイバ中の生細胞数とする。
１２．抗体の分類
抗体は、作製時の免疫動物種によって、マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ヒト抗体等と称される。ヒトで使用する際の免疫原性を減じるために、異なる種由来の抗体の部分領域をヒト配列に変換させた改変抗体として、キメラ抗体とヒト化抗体があり、バイオ医薬品として用いられる。また、ヒト抗体遺伝子を組込まれたマウスなどを用いて、ヒト抗体遺伝子から産生された抗体もあり、ヒト型抗体、あるいは単にヒト抗体と称され、バイオ医薬品として用いられる。
上記の各種抗体に加え、次世代抗体と言われる様々な改変抗体も開発されており、本明細書においては、改変抗体も「抗体」に含まれる。例えば、２以上の抗原に対して特異性を示す抗体である多価抗体があり、特に二重特異性を示すものをバイスペシフィック抗体と言い、高機能化抗体の一つである。抗体のＦｃ部位を除去し低分子化した抗体である低分子化抗体もあり、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ（単鎖Ｆｖ）、ＶＨＨ等が挙げられ、バイオ医薬品として用いられている。さらに、バイスペシフィック低分子化抗体も作製されており、例えばｓｃＦｖ－ｓｃＦｖがバイオ医薬品として用いられている。糖鎖を改変させるようにＦｃ領域等に変異を入れた抗体も、改変抗体の一例である。糖鎖を改変させるように宿主細胞を予め形質転換させることで、糖鎖改変抗体を産生させることもでき、例えば、フコース除去抗体が挙げられる。なお、本明細書において、抗体又は抗体断片と他の蛋白質又はペプチドとの融合蛋白質も、改変抗体、すなわち抗体の一例として挙げられるが、前記の生理活性物質との融合蛋白質である場合は、生理活性物質にも含まれる。
抗体は、定常領域の構造上の違いにより、下記表に示されるようなクラス（アイソタイプ）やサブクラスに分類される。
ヒトＩｇの分類
Figure 0007450793000091
１３．抗体・生理活性物質の産生及び精製法
いくつかの態様の抗体の製造方法にて、抗体産生細胞を培養することよってポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層で産生されポリマー層を透過し得る抗体としては、特に限定されることは無いが、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ等からなる群から選択されるクラス（アイソタイプ）を有する抗体が挙げられる。産生抗体をバイオ医薬品として用いる場合には、好ましくは、ＩｇＧ抗体である。
いくつかの態様の抗体の製造方法にて、抗体産生細胞を培養することによって、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層で産生されカチオン性ポリマー層を透過し得る抗体の分子量は、特に限定されることは無いが、例えば、約４５，０００～約１，０００，０００Ｄａの範囲にある抗体である。また、カチオン性ポリマー層を透過し得る抗体の分子量は例えば、約３，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約４００，０００Ｄａ、約４５，０００～約４００，０００Ｄａ、約２０，０００～約２００，０００Ｄａ、約４５，０００～約２００，０００Ｄａの範囲にある抗体である。
いくつかの態様の生理活性物質の製造方法にて、生理活性物質産生細胞を培養することによって、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層で産生されカチオン性ポリマー層を透過し得る生理活性物質の分子量は、特に限定されることは無いが、例えば、約３，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約４５，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約４００，０００Ｄａ、約４５，０００～約４００，０００Ｄａ、約２０，０００～約２００，０００Ｄａ、約４５，０００～約２００，０００Ｄａの範囲にある生理活性物質である。
本明細書中、前記の各抗体産生細胞を用いて前記の抗体の製造方法にて培養を行う場合、用いた抗体産生細胞に対応する抗体が産生される。例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞を用いる場合、抗体としてムロモナブ－ＣＤ３が産生される。
本明細書中、前記の各生理活性物質産生細胞を用いて前記の生理活性物質の製造方法にて培養を行う場合、用いた生理活性物質産生細胞に対応する生理活性物質が産生される。
産生される抗体としては、例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞を用いてムロモナブ－ＣＤ３（ＩｇＧ；１５０，０００）、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトラスツズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてリツキシマブ（ＩｇＧ；１４４，５１０）、パリビズマブ産生ＮＳ０細胞を用いてパリビズマブ（ＩｇＧ；１４７，７００）、インフリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞又はインフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてインフリキシマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、バシリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞を用いてバシリキシマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトシリズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてゲムツズマブ（ＩｇＧ；１５０，０００）、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベバシズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイブリツモマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアダリムマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、セツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞を用いてセツキシマブ（ＩｇＧ；１５１，８００）、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてラニビズマブ（ＩｇＧ（Ｆａｂ）；４８，０００）、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてオマリズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、エクリズマブ産生ＮＳ０細胞を用いてエクリズマブ（ＩｇＧ；１４５，２３５）、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてパニツムマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、ウステキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞を用いてウステキヌマブ（ＩｇＧ；１４８，０７９～１４９，６９０）、ゴリムマブ産生Ｓｐ２／０細胞を用いてゴリムマブ（ＩｇＧ；１４９，８０２～１５１，０６４）、カナキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞を用いてカナキヌマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデノスマブ（ＩｇＧ；１５０，０００）、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてモガムリズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてセルトリズマブ（ＩｇＧ（Ｆａｂ’）；５０，０００）、オファツムマブ産生ＮＳ０細胞を用いてオファツムマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてペルツズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてブレンツキシマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、ナタリズマブ産生ＮＳ０細胞を用いてナタリズマブ（ＩｇＧ；１４６，１７８）、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてニボルマブ（ＩｇＧ；１４５，０００）、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアレムツズマブ（ＩｇＧ；１５０，０００）、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてセクキヌマブ（ＩｇＧ；１５１，０００）、ラムシルマブ産生ＮＳ０細胞を用いてラムシルマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイピリムマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエボロクマブ（ＩｇＧ；１４１，７８９）、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてメポリズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアリロクマブ（ＩｇＧ；１４５８９２．０４９．）、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイキセキズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてブロダルマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイダルシズマブ（ＩｇＧ（Ｆａｂ）；４７，７８２）、エロツズマブ産生ＮＳ０細胞を用いてエロツズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてペムブロリズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてサリルマブ（ＩｇＧ；１５０，０００）、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベズロトクスマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、ベリムマブ産生ＮＳ０細胞を用いてベリムマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてダラツムマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアベルマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデュピルマブ（ＩｇＧ；１５２，０００）、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアテゾリズマブ（ＩｇＧ；１４４，６１１）、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベンラリズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイノツズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエミシズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてグセルクマブ（ＩｇＧ；１４６，０００）、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデュルバルマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてオビヌツズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００～１５０，０００）、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベドリズマブ（ＩｇＧ；１５０，０００）又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞を用いて抗ＧＰＶＩ抗体（ＩｇＧ；１５０，０００）が挙げられる（抗体名後のカッコ内は、当該抗体のクラス（アイソタイプ）及び分子量を示す）。尚、本発明の抗体の製造方法で得ることができる抗体は、前記クラス（アイソタイプ）やサブクラスに、特に限定されるものではない。
産生された抗体は、例えば、下記の３工程を経て精製が行われる。
〔工程１〕培地中に含まれる、抗体以外のタンパク質及び固形物をほぼ取り除く為に、遠心分離法又はフィルターによる濾過等を行う。
〔工程２〕例えば、アフィニティークロマトグラフィー（抗体の場合は、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ又はＰｒｏｔｅｉｎ Ｇを用いたアフィニティークロマトグラフィー）、又はイオン交換クロマトグラフィー等のクロマトグラフィーにて目的とする抗体を取り出す。
〔工程３〕工程２で混入してきた夾雑物を除去する為に、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー等を行い、目的とする抗体を高純度精製する。
産生された生理活性物質は、例えば、前記工程と同様な方法を経て精製が行われる。
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ又はＰｒｏｔｅｉｎ Ｇを用いたアフィニティークロマトグラフィー：
ＩｇＧの精製法としては、例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ又はＰｒｏｔｅｉｎ Ｇを用いた抗体の精製方法が知られている。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａを用いた抗体の精製法として、下記方法が１例として挙げられる。（１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａが固定されたビーズが充填されたカラムを用いて、前記〔ステップ１〕の方法で得られてくる溶液に血清を添加した溶液をろ過することで、ＩｇＧがカラム中のビーズに結合して、他の血清成分がカラム外へ流出がされる。（２）その後、カラムに酸性溶液を通過させることにより、ビーズに結合していたＩｇＧが切れて、カラム外へ溶出されてＩｇＧが得られる。尚、ＩｇのＰｒｏｔｅｉｎ ＡとＰｒｏｔｅｉｎ Ｇへの結合力が、動物種やサブクラスによって違うことから、目的によって、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ又はＰｒｏｔｅｉｎ Ｇを使い分けることができる。
イオン交換クロマトグラフィー：
タンパク質が有する電気的な性質（電荷）を利用してタンパク質を分離する方法である。正電荷を示す塩基性タンパク質は、負電荷をもつ陽イオン交換体（担体）にイオン結合し、負電荷を示す酸性タンパク質は正電荷を持つ陰イオン交換体に結合することから、タンパク質が含まれる試料をイオン交換体が充填されたカラムを通すことで、タンパク質がイオン交換体に結合する。その後、カラムを通す溶媒の塩濃度を高濃度にすることで、タンパク質とイオン交換体とのイオン結合が弱くなり、結合力の弱いタンパク質から順番に、イオン交換体から外れて、カラム外へ流出してくる。陽イオン交換体又は陰イオン交換体の選択は、試料として用いるタンパク質の電荷から選択するものとする。
ゲルろ過クロマトグラフィー：
タンパク質の分子量の違いを利用してタンパク質を分離する方法である。小孔が付いている担体が充填されたカラムに試料を流すことで、分子量の小さいタンパク質は、前記小孔に入り込みながら流出していき、分子量の大きいタンパク質は前記小孔に入らずに流出してくる為、カラムを通過する時間が分子量の小さいタンパク質は遅く、分子量の大きいタンパク質は早くなることから、時間差的にタンパク質を分離することが可能となる。
ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー：
リン酸カルシウムの１種であるヒドロキシアパタイトを用いたクロマトグラフィーである。主にカルシウムイオンによる金属アフィニティーとリン酸基による陽イオン交換に基づく、複数の相互作用を利用してタンパク質を分離する方法である。アミノ酸のカルボキシル基及びアミノ基がそれぞれ担体と相互作用することで吸着し、高濃度リン酸または高塩濃度の溶媒を流すことで目的物と不純物の分離を行う。
１４．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの物性
［ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの安定性の確認法］
本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの安定性は、例えば、以下の試験法により確認することができる。より具体的には、後記実施例に記載の方法で確認することができる。
＜振盪崩壊試験＞：上記の製造方法で得られるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバをリン酸緩衝生理食塩水中（ＰＢＳ）に懸濁させ、これを一定時間、振盪させたのち、ファイバの崩壊し易さ（振盪崩壊度）を確認することにより、その物理的な強度を測定することができる。具体的な試験方法としては、例えば、後述の実施例に記載の方法が挙げられる。
＜引張強度試験＞：上記の製造方法で得られるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いて、引張強度測定装置を用いて、その破断値（ｍＮ）を確認することにより、その物理的な強度を測定することができる。具体的な試験方法としては、例えば、後述の実施例に記載の方法が挙げられる。
本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの強度は、これを構成するコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲル、およびコア層とカチオン性ポリマー層の間で形成されている架橋アルギン酸ゲルとカチオン性ポリマーの静電的作用が、本発明のファイバーの強度にとって最適な性質を有していることに起因する。
本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、高い物理的安定性を有するとともに、コア層で産生された抗体、生理活性物質等がコア層から放出され、更にポリマー層を透過することができることから、適切な透過性も有しており、抗体、生理活性物質等を生産するのに適した構造体でもある。
１５．化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基（相補的な反応性基）の導入率測定
反応性基又は相補的な反応性基導入率は、アルギン酸の繰り返し単位であるウロン酸単糖単位あたりに導入された反応性基又は相補的な反応性基の数を百分率で表した値を意味する。
後記実施例においては、反応性基又は相補的な反応性基導入率（ｍｏｌ％）は、１Ｈ－ＮＭＲの積分比により計算した。又、導入率の算出に必要なアルギン酸の量は、検量線を利用したカルバゾール硫酸法により測定し、反応性基又は相補的な反応性基の量は、検量線を利用した吸光度測定法により測定することもできる。
１６．化学修飾アルギン酸誘導体の分子量の測定
後記実施例で得られた化学修飾アルギン酸誘導体の固体を０．１５ ｍｏｌ／ＬのＮａＣｌを含む１０ ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し０．１％又は０．２％溶液を調製し、孔径０．２２μｍのポリエーテルスルフォン製ろ過フィルター（Ｍｉｎｉｓａｒｔ Ｈｉｇｈ Ｆｌｏｗ Ｆｉｌｔｅｒ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）を通し不溶物を除いた後、ゲルろ過用サンプルとした。各サンプルのスペクトルを分光光度計ＤＵ－８００（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ社）により測定し、各化合物のゲルろ過における測定波長を決定した。特異的な吸収波長を持たない化合物に関しては、示差屈折計を用いた。
ゲルろ過用サンプルの２００μＬをＳｕｐｅｒｏｓｅ６ Ｉｎｃｒｅａｓｅ１０／３００ ＧＬカラム（ＧＥヘルスケアサイエンス社）に供した。ゲルろ過は、クロマトグラフ装置としてＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ １０Ｓを、展開溶媒として０．１５ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌを含む１０ ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を使用し、室温で流速０．８ ｍＬ／ｍｉｎの条件で実施した。サンプルの溶出プロファイルは、各化合物で決定した波長の吸収をモニターし作製した。得られたクロマトグラムは、Ｕｎｉｃｏｒｎ５．３１ソフトウエア（ＧＥヘルスケアサイエンス社）にて解析し、ピーク範囲を決定した。
反応性基又は相補的な反応性基が導入されたアルギン酸の分子量は、ブルーデキストラン（分子量２００万Ｄａ、ＳＩＧＭＡ社）、チログロブリン（分子量６６．９万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）、フェリチン（分子量４４万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）、アルドラーゼ（分子量１５．８万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）、コンアルブミン（分子量７．５万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）、オブアルブミン（分子量４．４万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）、リボヌクレアーゼＡ（分子量１．３７万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）及びアプロチニン（分子量６５００Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）を標準品として用い、反応性基又は相補的な反応性基が導入されたアルギン酸と同じ条件でゲルろ過を行い、各成分の溶出液量をＵｎｉｃｏｒｎソフトウエアにて決定した。この各成分の溶出液量を横軸に、分子量の対数値を縦軸にそれぞれプロットし、直線回帰し、検量線を作成した。検量線は、ブルーデキストランからフェリチンまで、フェリチンからアプロチニンまでの２種類を作成した。
この検量線を用いて、先に得られたクロマトグラムの溶出時間ｉにおける分子量（Ｍｉ）を計算した。次いで、溶出時間ｉにおける吸光度を読み取りＨｉとした。これらのデータから重量平均分子量（Ｍｗ）を以下の式から求めた。
Figure 0007450793000092
尚、本明細書において引用した全ての文献、及び公開公報、特許公報、その他の特許文献は、その目的にかかわらず参照として本明細書に組み込むものとする。
また、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、本発明を実施できる。発明を実施するための最良の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図ならびに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々に修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
[化学修飾アルギン酸誘導体の合成法]
核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）の測定には、ＪＥＯＬ ＪＮＭ－ＥＣＸ４００ ＦＴ－ＮＭＲ（日本電子）を用いた。液体クロマトグラフィー－質量分析スペクトル（ＬＣ－Ｍａｓｓ）は以下の方法で測定した。［ＵＰＬＣ］Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣシステムおよびＢＥＨ Ｃ１８カラム（２．１ｍｍ×５０ｍｍ、１．７μｍ）（Ｗａｔｅｒｓ）を用い、アセトニトリル：０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液＝５：９５（０分）～９５：５（１．０分）～９５：５（１．６分）～５：９５（２．０分）の移動相およびグラジエント条件を用いた。
１Ｈ－ＮＭＲデータ中、ＮＭＲシグナルのパターンで、ｓはシングレット、ｄはダブレット、ｔはトリプレット、ｑはカルテット、ｍはマルチプレット、ｂｒはブロード、Ｊはカップリング定数、Ｈｚはヘルツ、ＣＤＣｌ３は重クロロホルム、ＤＭＳＯ－ｄ６は重ジメチルスルホキシド、Ｄ２Ｏは重水を意味する。１Ｈ－ＮＭＲデータ中、水酸基（ＯＨ）、アミノ基（ＮＨ２）、カルボキシル基（ＣＯＯＨ）のプロトン等、ブロードバンドであるため確認ができないシグナルについては、データに記載していない。
ＬＣ－Ｍａｓｓデータ中、Ｍは分子量、ＲＴは保持時間、［Ｍ＋Ｈ］＋，［Ｍ＋Ｎａ］＋は分子イオンピークを意味する。
実施例中の「室温」又は「ｒ．ｔ．」は、通常約０℃から約３５℃の温度を示すものとする。実施例中の「ＤＭＴ－ＭＭ」は、４－（４、６－ジメトキシ－１、３、５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：３９４５－６９－５）を意味し、市販品または文献公知の方法で合成したものを使用することができる。
実施例中の反応性基導入率（ｍｏｌ％）は、１Ｈ－ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）の積分比から算出されたアルギン酸を構成する単糖（グルロン酸およびマンヌロン酸）単位のモル数に対する導入された反応性基のモル数の割合を示すものとする。
実施例中、アルギン酸ナトリウムは、前記表８に記される物性値を示すアルギン酸ナトリウム（Ａ－１～Ａ－３またはＢ－２～Ｂ－３）を用いた。また、アルギン酸ナトリウムあるいは各種アルギン酸誘導体は、必要に応じてろ過滅菌を実施した。
表２４－１～表２４－２には、（実施例１）～（実施例１８）で得られた、反応性基が導入されたアルギン酸誘導体の物性値（具体的には、反応性基導入率（ｍｏｌ％）、分子量、及び重量平均分子量（Ｄａ））を示す。
表２５－１～表２５－３には、実施例中の各中間体の１Ｈ－ＮＭＲ、ＬＣ－Ｍａｓｓのデータを示す。
（実施例１ａ～ｉ）ジベンゾシクロオクチン－アミノ基導入アルギン酸（１－Ａ２、１－Ａ１、１－Ａ３、１－Ｂ２、１－Ｂ２ｂ、１－Ｂ２ｃ、１－Ａ２ｂ、１－Ａ２ｃおよび１－Ａ２ｄ）の合成：
Figure 0007450793000093
下記の合成方法および反応条件にて、１－Ａ２、１－Ａ１、１－Ａ３、１－Ｂ２、１－Ｂ２ｂ、１－Ｂ２ｃ、１－Ａ２ｂ、１－Ａ２ｃおよび１－Ａ２ｄの化合物を合成した。
［合成方法］
１重量％または２重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、４－（４、６－ジメトキシ－１、３、５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、１モル濃度－重曹水を加えた。この溶液に、市販のジベンゾシクロオクチン－アミン（３－アミノ－１－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－１－プロパノン）［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：１２５５９４２－０６－３］（ＳＭ１）のエタノール（ＥｔＯＨ １）溶液を滴下し、室温で攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ ２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を得た。実施例１ｇ、１ｈおよび１ｉは、先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure 0007450793000094
Figure 0007450793000095
（実施例２）５－アミノ－１－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－１－ペンタノン基（ＡＤＩＢＯ－Ｃ５－アミン）導入アルギン酸（２－Ｂ２）の合成：
Figure 0007450793000096
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ｂ－２）水溶液（２８．５ ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（６０ ｍｇ）、文献公知の方法で得られたＡＤＩＢＯ－Ｃ５－アミン［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：２４０１８７６－２９－５ ］（ＳＭ２）（２２ ｍｇ）のエタノール（２．９ ｍＬ）溶液、１モル濃度－重曹水（７２ μＬ）を加え、３０℃で３時間攪拌した。塩化ナトリウム（２８５ ｍｇ）を加えた後、エタノール（５７ ｍＬ）を加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物（２７７ ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例３）２－アミノ－Ｎ－［３－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－３－オキソプロピル］アセタミド基導入アルギン酸（３－Ａ２）の合成：
Figure 0007450793000097
＜Ｓｔｅｐ１＞ （９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル－Ｎ－［３－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－３－オキソプロピル］アセタミド－２－カルバメート（ＩＭ３－１）の合成：
式ＳＭ１の化合物（５０ ｍｇ）、Ｎ－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］グリシン［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：２９０２２－１１－５］（５４ ｍｇ）をアセトニトリル（１．５ ｍＬ）に溶解した。Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（７６ ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７０ μＬ）を加え、室温で４．５時間撹拌した。反応液に、酢酸エチル（１５ ｍＬ）、水（５ ｍＬ）を加え、分液後、有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、標記化合物（６３ ｍｇ）を薄いベージュアモルファスとして得た。
＜Ｓｔｅｐ２＞ ２－アミノ－Ｎ－［３－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－３－オキソプロピル］アセタミド（ＩＭ３－２）の合成：
（実施例３）＜Ｓｔｅｐ１＞で得られた式ＩＭ３－１の化合物（６３ ｍｇ）に、ピぺリジン（５６ μＬ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３１５ μＬ）溶液を加え、室温で３０分間攪拌した。反応液に、酢酸エチル（１５ ｍＬ）、水（５ ｍＬ）を加え、分液後、有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた固体に、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（５ ｍＬ）を加え、トリチュレートした後、ろ取し、標記化合物（１０ ｍｇ）を薄いベージュ固体として得た。また、ろ液から回収し、追加で、標記化合物（１１ ｍｇ）を淡黄色ガム状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ３＞ ２－アミノ－Ｎ－［３－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－３－オキソプロピル］アセタミド基導入アルギン酸（３－Ａ２）の合成：
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（１９ ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（１０６ ｍｇ）、（実施例３）＜Ｓｔｅｐ２＞で得られた式ＩＭ３－２の化合物（２１ ｍｇ）のエタノール（１．９ ｍＬ）溶液、１モル濃度－重曹水（４８ μＬ）を加えた。３０℃で３時間攪拌した後、塩化ナトリウム（０．１９ ｇ）、エタノール（３８ ｍＬ）を順次加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶解後凍結乾燥して、標記化合物（１８８ ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例４ａ～ｇ）Ｎ－（４－（アミノメチル）ベンジル）－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド基導入アルギン酸（４－Ｂ２、４－Ａ２、４－Ｂ２ｂ、４－Ａ２ｂ、４－Ａ２ｃ、４－Ａ２ｄおよび４－Ａ３）の合成：
Figure 0007450793000098
下記の合成方法および反応条件にて、４－Ｂ２、４－Ａ２、４－Ｂ２ｂ、４－Ａ２ｂ、４－Ａ２ｃ、４－Ａ２ｄおよび４－Ａ３の化合物を合成した。
［合成方法］
１重量％または２重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、室温撹拌下、ＤＭＴ－ＭＭを加えた。続いて、文献公知の方法で得られたＮ－［［４－（アミノメチル）ベンジル］－２－（２－シクロオクチン－１－イロキシ）－アセタミド［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：２４０１８７６－３３－１］（ＳＭ４）のエタノール（ＥｔＯＨ １）溶液を室温で滴下し、攪拌した。室温に冷却後、塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ ２）を加え、攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノール（２ｍＬ）で３回洗浄後、減圧下乾燥し、標記化合物を得た。実施例４ｂ、４ｃ、４ｄ、４ｅ、４ｆおよび４ｇは、先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure 0007450793000099
Figure 0007450793000100
（実施例５ａ、ｂ）Ｎ－（４－（２－アミノエトキシ）ベンジル）－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド基導入アルギン酸（５－Ａ２および５－Ｂ２）の合成：
Figure 0007450793000101
＜Ｓｔｅｐ１＞ ｔｅｒｔ－ブチル （４－（２－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）エトキシ）ベンジル）カルバメート（ＩＭ－５－１）の合成：
市販のｔｅｒｔ－ブチル （４－ヒドロキシベンジル）カルバメート（式ＲＧ５－１、ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：１４９５０５－９４－２）（０．３６ｇ）、市販または文献公知の方法にて合成して得られたＮ－（２－ブロモエチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド（式ＳＭ５、ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：７５９１５－３８－７）（０．４６ ｇ）、ヨウ化カリウム（０．３５ ｇ）およびＮ－メチルピロリドン（３．６ ｍＬ）の混合物に対し、室温で炭酸カリウム（０．４５ ｇ）を加え、１４０℃で５時間攪拌した。反応終了後、室温まで冷却し、水（１０ ｍＬ）で希釈した。メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１０ ｍＬ）で３回抽出し、有機層を１規定－水酸化ナトリウム水溶液（５ ｍＬ）で２回、水（５ ｍＬ）、飽和食塩水（５ ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機層をろ過後、減圧下で濃縮することで、粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン／酢酸エチル）で精製し、標記化合物（０．２０２ ｇ）を白色アモルファスとして得た。
＜Ｓｔｅｐ２＞ Ｎ－（２－（４－（アミノメチル）フェノキシ）エチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド 塩酸塩（ＩＭ５－２）の合成：
（実施例５）＜Ｓｔｅｐ１＞で得られた式ＩＭ５－１の化合物（０．２ ｇ）および１，４－ジオキサン（１．４ ｍＬ）の混合物に対し、水冷攪拌下、４規定－塩化水素／１，４－ジオキサン（１．４ ｍＬ）を加えた後、室温で７時間撹拌した。反応液に、ジイソプロピルエーテル（２０ ｍＬ）を加え、懸濁液を室温で１日攪拌した。析出物をろ過し、回収した固体を減圧乾燥して、標記化合物（０．１５ ｇ）を白色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ３＞ Ｎ－（２－（４－（（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）メチル）フェノキシ）エチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド（ＩＭ５－３）の合成：
文献公知の方法（Ｏｒｇ． Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓ． Ｄｅｖ．（２０１８）２２：１０８－１１０）に従い合成した２－（２－シクロオクチン－１－イロキシ）－酢酸（式ＲＧ５－２）［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：９１７７５６－４２－４］（５０ ｍｇ）、（実施例５）＜Ｓｔｅｐ２＞で合成した式ＩＭ５－２の化合物（８１．９６ ｍｇ）およびエタノール（１ ｍＬ）の混合物に対し、氷冷攪拌下、ＤＭＴ－ＭＭ（１３７．２２ ｍｇ）およびトリエチルアミン（３８．２５ μＬ）を加え、室温で１時間３０分攪拌した。反応終了後、水（２ ｍＬ）を加え、懸濁液を攪拌し、メチル ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（０．５ ｍＬ）を加えた。分離した水層をメチル ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（５ ｍＬ）で２回抽出し、水（５ ｍＬ）、飽和食塩水（５ ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥した有機層をろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－へプタン／酢酸エチル）で精製し、標記化合物（９９ ｍｇ）を白色アモルファスとして得た。
＜Ｓｔｅｐ４＞ Ｎ－（４－（２－アミノエトキシ）ベンジル－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド（ＩＭ５－４）の合成：
（実施例５）＜Ｓｔｅｐ３＞で得られた式ＩＭ５－３の化合物（９９ ｍｇ）およびメタノール（１４８５ μＬ）の混合物に対し、水冷攪拌下、炭酸カリウム（６４．１７ ｍｇ）及び水（４９５ μＬ）を加え、室温で１５時間攪拌した。反応終了後、メタノールを減圧下で濃縮し、生じた水層を酢酸エチル（５ ｍＬ）で３回抽出した。有機層を水（５ ｍＬ）及び飽和食塩水（５ ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥させた有機層をろ過後、減圧下で濃縮することで、標記化合物（６８ ｍｇ）の粗生成物を黄色油状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ５＞ Ｎ－（４－（２－アミノエトキシ）ベンジル）－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド基導入アルギン酸（５－Ａ２および５－Ｂ２）の合成：
下記の合成方法および反応条件にて、式５－Ａ２および５－Ｂ２の化合物を合成した。
［合成方法］
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、室温撹拌下、ＤＭＴ－ＭＭを加えた。続いて（実施例５）＜Ｓｔｅｐ４＞で得られた式ＩＭ５－４の化合物の水（１ ｍＬ）およびエタノール（ＥｔＯＨ １）溶液を室温で滴下し、同温で攪拌した後、塩化ナトリウム、エタノール（ＥｔＯＨ ２）を順次加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶解後凍結乾燥して、標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure 0007450793000102
（実施例６ａ、６ｂ、６ｃ）Ｎ－（２－アミノエチル）－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド基導入アルギン酸（６－Ａ２、６－Ｂ２および６－Ｂ２ｂ）の合成：
Figure 0007450793000103
下記の合成方法および反応条件にて、６－Ａ２、６－Ｂ２および６－Ｂ２ｂの化合物を合成した。
［合成方法］
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、室温撹拌下、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法で得られたＮ－（２－アミノエチル）－２－（２－シクロオクチン－１－イロキシ）－アセタミド［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：１８０９７８９－７６－１］（ＳＭ６）のエタノール（ＥｔＯＨ １）溶液、１モル濃度重曹水を順次加え、攪拌した。反応液に、塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ ２）を加え、攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を得た。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure 0007450793000104
（実施例７）Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド基導入アルギン酸（７－Ａ２）の合成：
Figure 0007450793000105
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製、Ａ－２）水溶液（４０ ｍＬ）に、室温撹拌下、ＤＭＴ－ＭＭ（１１２ ｍｇ）、文献公知の方法で得られたＮ－［２－（２－アミノエトキシ）エチル］－２－（２－シクロオクチン－１－イロキシ）－アセタミド［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：２４０１８７６－５１－３］（ＳＭ７）（３０ ｍｇ）のエタノール（４．０ ｍＬ）溶液、１モル濃度重曹水（１０１ μＬ）を順次加え、３０℃で３時間攪拌した。反応液に、塩化ナトリウム（０．４ ｇ）を加えた後、エタノール（８０ ｍＬ）を加え、３０分間攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥して、標記化合物（４１０ ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例８ａ、８ｂ）Ｎ－（２－アミノエチル）－２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）アセタミド基導入アルギン酸（８－Ａ２、８－Ｂ２）の合成：
Figure 0007450793000106
＜Ｓｔｅｐ１＞ ｔｅｒｔ－ブチル （２－オキソ－２－（（２－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）エチル）アミノ）エチル）カルバメート（ＩＭ８－１）の合成：
文献公知の方法で得られたＮ－（２－アミノエチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド 塩酸塩（式ＳＭ８）［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：４９６９４６－７３－７］（１００ ｍｇ）およびＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）グリシン（式ＲＧ８－１）［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：４５３０－２０－５］（９１ ｍｇ）をアセトニトリル（３．０ ｍＬ）に溶解した。Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（２１７ ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２８１ μＬ）を加え、室温で３．５時間撹拌した。反応液に、酢酸エチル（１５ ｍＬ）、水（５ ｍＬ）を加え、分液後、有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：４０％酢酸エチル／ｎ－ヘプタン→酢酸エチル）で精製し、標記化合物（１８０ ｍｇ）を薄いベージュアモルファスとして得た。
＜Ｓｔｅｐ２＞ Ｎ－（２－（２－アミノアセタミド）エチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド 塩酸塩（ＩＭ８－２）の合成：
（実施例８）＜Ｓｔｅｐ１＞で得られた式ＩＭ８－１の化合物（１８０ ｍｇ）に、氷水冷下４規定－塩化水素／１，４－ジオキサン（１．２ ｍＬ）を加えた後、室温で０．８時間撹拌した。反応液に、ジイソプロピルエーテル（３．６ ｍＬ）を加え、３０分間撹拌した。得られた固体をろ過して、標記化合物（１１４ ｍｇ）を白色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ３＞ Ｎ－（２－（２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）アセタミド）エチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド（ＩＭ８－３）の合成：
文献公知の方法で得られた２－（２－シクロオクチン－１－イロキシ）－酢酸（式ＲＧ５－２）［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：９１７７５６－４２－４］（８０ ｍｇ）、（実施例８）＜Ｓｔｅｐ２＞で得られた式ＩＭ８－２の化合物（１１０ ｍｇ）に、エタノール（１．６ ｍＬ）、ＤＭＴ－ＭＭ（２１９ ｍｇ）、トリエチルアミン（６７ μＬ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応液に、水（３．２ ｍＬ）を加え、室温で３０分間撹拌した後、固体をろ過し、水で洗浄した。得られた固体に、酢酸エチル／エタノール（１／１、１０ ｍＬ）を加え、不溶物をろ去した。ろ液を減圧濃縮して、標記化合物（１０１ ｍｇ）を白色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ４＞ Ｎ－（２－（アミノエチル）－２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）アセタミド（ＩＭ８－４）の合成：
（実施例８）＜Ｓｔｅｐ３＞で得られた式ＩＭ８－３の化合物（６０ ｍｇ）のメタノール（１．８ ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（５９ ｍｇ）の水（０．３ ｍＬ）溶液を加え、室温で４時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、水（２ｍＬ）を加え、塩化ナトリウムで飽和させた。酢酸エチル（１５ｍＬ，１０ ｍＬ×４）で抽出し、有機層を減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル（１０ ｍＬ）、エタノール（１ｍＬ）を加え、不溶物をろ去した。得られたろ液を減圧濃縮して、標記化合物（４９ ｍｇ）を無色ガム状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ５＞ Ｎ－（２－アミノエチル）－２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）アセタミド基導入アルギン酸（８－Ａ２および８－Ｂ２）の合成：
下記の合成方法および反応条件にて、式８－Ａ２および８－Ｂ２の化合物を合成した。
［合成方法］
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、式ＩＭ８－４の化合物のエタノール（ＥｔＯＨ １）溶液、１モル濃度－重曹水を加え、攪拌した後、塩化ナトリウム、エタノール（ＥｔＯＨ ２）を順次加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶解後凍結乾燥して、標記化合物を白色固体として得た。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure 0007450793000107
（実施例９） Ｎ－（２－アミノエチル）－３－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）プロパンアミド基導入アルギン酸（９－Ａ２）の合成：
Figure 0007450793000108
＜Ｓｔｅｐ１＞ｔｅｒｔ－ブチル （３－オキソ－３－（（２－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）エチル）アミノ）プロピル）カルバメート（ＩＭ９－１）の合成：
文献公知の方法で得られたＮ－（２－アミノエチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド 塩酸塩（式ＳＭ８）（１１０ ｍｇ）及びＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－β－アラニン（式ＲＧ９－１）［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：３３０３－８４－２］（１１３．５ ｍｇ）をアセトニトリル（３．３ ｍＬ）に溶解し、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（２６１ ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３１９ μＬ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応液に、酢酸エチル（１５ ｍＬ）、水（５ ｍＬ）を加え、分液後、有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２０ ｍＬ）でトリチュレートした。固体をろ取し、酢酸エチル（２０ ｍＬ）に溶解した。有機層を、１規定－クエン酸、水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１０ ｍＬ）でトリチュレートした後、固体をろ取し、標記化合物（８０ ｍｇ）を白色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ２＞ ３－アミノ－Ｎ－（２－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）エチル）プロパンアミド 塩酸塩（ＩＭ９－２）の合成：
（実施例９）＜Ｓｔｅｐ１＞で得られた式ＩＭ９－１の化合物（８０ ｍｇ）に、氷水冷下４規定－塩化水素／１，４－ジオキサン（１．１ ｍＬ）を加えた後、室温で２時間撹拌した。反応液に、ジイソプロピルエーテル（３．４ ｍＬ）を加え、１．５時間撹拌した。得られた固体をろ過して、標記化合物（６１ ｍｇ）を白色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ３＞ ３－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）－Ｎ－（２－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）エチル）プロパンアミド（ＩＭ９－３）の合成：
文献公知の方法で得られた式ＲＧ５－２の化合物（４４ ｍｇ）、（実施例９）＜Ｓｔｅｐ２＞で得られた式ＩＭ９－２の化合物（６１ ｍｇ）に、エタノール（１．２ ｍＬ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１１５ ｍｇ）、トリエチルアミン（３９ μＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液に、水（３．７ ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１５ ｍＬ， ５ ｍＬ）で抽出した。有機層を、水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム乾燥後、減圧濃縮した。得られた固体に、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（１０ ｍＬ）を加え、トリチュレートし、ろ過した。得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（８０％酢酸エチル／ｎ－ヘプタン→酢酸エチル→２０％メタノール／酢酸エチル）で精製して、標記化合物（６０ ｍｇ）を淡黄色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ４＞ Ｎ－（２－アミノエチル－３－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）プロパンアミド（ＩＭ９－４）の合成：
（実施例９）＜Ｓｔｅｐ３＞で得られた式ＩＭ９－３の化合物（６０ ｍｇ）のメタノール（３．０ ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（４２ ｍｇ）の水（０．３ ｍＬ）溶液を加え、室温で３時間撹拌後、さらに、炭酸カリウム（４２ ｍｇ）の水（０．３ ｍＬ）溶液を加え、室温で１６．５時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、飽和食塩水（２ｍＬ）を加え、さらに塩化ナトリウムで飽和させた。酢酸エチル（１５ｍＬ，１０ ｍＬ×４）で抽出し、抽出層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル（５ ｍＬ）と数滴のメタノールを加え、不溶物をろ去した。得られたろ液を減圧濃縮して、標記化合物（３１ ｍｇ）を無色油状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ５＞ Ｎ－（２－アミノエチル）－３－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）プロパンアミド基導入アルギン酸（９－Ａ２）の合成：
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（４１ ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（１１４ ｍｇ）、（実施例９）＜Ｓｔｅｐ４＞で得られた式ＩＭ９－４の化合物（３０．５ ｍｇ）のエタノール（４．１ ｍＬ）溶液、１モル濃度－重曹水（１０３ μＬ）を加えた。３０℃で３時間攪拌した後、塩化ナトリウム（０．４１ ｇ）、エタノール（８２ ｍＬ）を順次加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶解後凍結乾燥して、標記化合物（４０６ ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例１０） ３－アミノ－Ｎ－（２－（２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）エトキシ）エチル）プロパンアミド基導入アルギン酸（１０－Ａ２）の合成：
Figure 0007450793000109
＜Ｓｔｅｐ１＞ ｔｅｒｔ－ブチル （２－（２－（３－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）プロパンアミド）エトキシ）エチル）カルバメート（ＩＭ１０－１）の合成：
文献公知の方法で得られた式ＳＭ１０の化合物［ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：５０６３２－８２－１］（４００ ｍｇ）、および市販品または文献公知の方法で得られる式ＲＧ１０－１の化合物（ｔｅｒｔ－ブチル （２－（２－アミノエトキシ）エチル）カルバメート、ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：１２７８２８－２２－２）（４４１ ｍｇ）のエタノール（４．０ ｍＬ）溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ（８９７ ｍｇ）を加え、３．５時間撹拌した。反応液に、水（５ ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ ｍＬ、１０ ｍＬ）で抽出後、有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（［溶出溶媒・比率％］酢酸エチル：ｎ－ヘプタン＝３０：７０→酢酸エチル：ｎ－ヘプタン＝１００：０）で精製して、標記化合物（４５１ ｍｇ）を無色油状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ２＞ Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－３－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）プロパンアミド 塩酸塩（ＩＭ１０－２）の合成：
（実施例１０）＜Ｓｔｅｐ１＞で得られた式ＩＭ１０－１の化合物（４５１ ｍｇ）に、氷水冷下４規定－塩化水素／１，４－ジオキサン（３．１６ ｍＬ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応液に、ジイソプロピルエーテル（６．４ ｍＬ）を加え、減圧濃縮して、標記化合物（４３３ ｍｇ）を無色ガム状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ３＞ Ｎ－（２－（２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）エトキシ）エチル－３－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）プロパンアミド（ＩＭ１０－３）の合成：
文献公知の方法で得られた式ＲＧ５－２の化合物（１１１ ｍｇ）、および（実施例１０）＜Ｓｔｅｐ２＞で得られた式ＩＭ１０－２の化合物（２１５ ｍｇ）に、エタノール（１．７ ｍＬ）、ＤＭＴ－ＭＭ（２５３ ｍｇ）、トリエチルアミン（１０２ μＬ）を加え、室温で２１時間撹拌した。反応液に、水（５ ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１５ ｍL）で抽出した。有機層を、水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（［溶出溶媒・比率％］酢酸エチル：ｎ－ヘプタン＝３０：７０→酢酸エチル：ｎ－ヘプタン＝１００：０→メタノール：酢酸エチル＝１５：８５）で精製して、標記化合物（３５ ｍｇ）を無色油状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ４＞ ３－アミノ－Ｎ－（２－（２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）エトキシ）エチル）プロパンアミド（ＩＭ１０－４）の合成：
（実施例１０）＜Ｓｔｅｐ３＞で得られた式ＩＭ１０－３の化合物（３５ ｍｇ）のメタノール（７００ μＬ）溶液に、炭酸カリウム（３３ ｍｇ）の水（１７５ μＬ）溶液を加え、室温で１６．５時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、水（２ ｍＬ）を加え、塩化ナトリウムで飽和させた。酢酸エチル（１０ ｍＬ×５）で抽出し、抽出層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル（１０ ｍＬ）と数滴のメタノールを加え、不溶物をろ去した。得られたろ液を減圧濃縮して、標記化合物（２４ ｍｇ）を無色ガム状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ５＞ ３－アミノ－Ｎ－（２－（２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）エトキシ）エチル）プロパンアミド基導入アルギン酸（１０－Ａ２）の合成：
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（２８ ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（７８ ｍｇ）、（実施例１０）＜Ｓｔｅｐ４＞で得られた式ＩＭ１０－４の化合物（２４ ｍｇ）のエタノール（２．８ ｍL）溶液、１モル濃度－重曹水（７１ μＬ）を加えた。３０℃で３．５時間攪拌した後、塩化ナトリウム（０．２８ ｇ）、エタノール（５６ ｍＬ）を順次加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶解後凍結乾燥して、標記化合物（２７２ ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例１１ａ～ｍ）４－（２－アミノエトキシ）－Ｎ－（３－アジドプロピル）ベンズアミド基導入アルギン酸（１１－Ａ２、１１－Ａ１、１１－Ａ３、１１－Ｂ２、１１－Ｂ２ｂ、１１－Ｂ２ｃ、１１－Ａ２ｂ、１１－Ａ２ｃ、１１－Ｂ２ｄ、１１－Ａ２ｄ、１１－Ａ２ｅ、１１－Ａ３および１１－Ａ２ｆ）の合成：
Figure 0007450793000110
下記の合成方法および反応条件にて、１１－Ａ２、１１－Ａ１、１１－Ａ３、１１－Ｂ２、１１－Ｂ２ｂ、１１－Ｂ２ｃ、１１－Ａ２ｂ、１１－Ａ２ｃ、１１－Ｂ２ｄ、１１－Ａ２ｄ、１１－Ａ２ｅ、１１－Ａ３および１１－Ａ２ｆの化合物を合成した。
［合成方法］
１重量％または２重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１１の化合物（４－（２－アミノエトキシ）－Ｎ－（３－アジドプロピル）ベンズアミド 塩酸塩；ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：２４０１８７６－１９－３）、１モル濃度－重曹水を加え攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ ２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を固体として得た。実施例１１ｇ、１１ｈ、１１ｉ、１１ｊ、１１ｋ、１１ｌおよび１１ｍは、先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure 0007450793000111
Figure 0007450793000112
Figure 0007450793000113
（実施例１２） ４－（３－アミノプロポキシ）－Ｎ－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エチル）ベンズアミド基導入アルギン酸（１２－Ａ２）の合成：
Figure 0007450793000114
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（１９．６ ｍＬ）に、氷冷撹拌下、ＤＭＴ－ＭＭ（５０．１９ ｍｇ）、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１２の化合物（４－（３－アミノプロポキシ）－Ｎ－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エチル）ベンズアミド 塩酸塩；ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：２４０１８７６－２２－８）（７０．３５ ｍｇ）、１モル濃度－重曹水（１８１．４ μＬ）を加え、室温で５時間攪拌した。塩化ナトリウム（２００ ｍｇ）を加えた後、エタノール（３９．２ ｍＬ）を加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物（１９９ ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例１３ａ、ｂ） Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド基導入アルギン酸（１３－Ａ２および１３－Ａ２ｂ）の合成：
Figure 0007450793000115
下記の合成方法および反応条件にて、１３－Ａ２および１３－Ａ２ｂの化合物を合成した。
［合成方法］
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１３の化合物（Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド 塩酸塩；ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：２４０１８７６－３８－６）、１モル濃度－重曹水を加え攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ ２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を固体として得た。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure 0007450793000116
（実施例１４ａ～ｃ） Ｎ－（２－アミノエチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド基導入アルギン酸（１４－Ａ２、１４－Ｂ２および１４－Ａ２ｂ）の合成：
Figure 0007450793000117
下記の合成方法および反応条件にて、１４－Ａ２、１４－Ｂ２および１４－Ａ２ｂの化合物を合成した。
［合成方法］
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１４の化合物（Ｎ－（２－アミノエチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド 塩酸塩；ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：２４０１８７６－２５－１）、１モル濃度－重曹水を加え攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ ２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を固体として得た。実施例１４ｃｂは、先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure 0007450793000118
（実施例１５） Ｎ－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド基導入アルギン酸（１５－Ａ２）の合成：
Figure 0007450793000119
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（４０ ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（１１２ ｍｇ）、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１５の化合物（Ｎ－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド 塩酸塩；ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：２４０１８７６－４１－１）（３８ ｍｇ）のエタノール（４．０ ｍＬ）溶液、１モル濃度－重曹水（１５１ μＬ）を加え、３０℃で３時間攪拌した。塩化ナトリウム（０．４ ｇ）を加えた後、エタノール（８０ ｍＬ）を加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物（４１６ ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例１６ａ，ｂ） Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－４－アジドベンズアミド基導入アルギン酸（化合物：１６－Ａ２、１６－Ａ２ｂ）の合成：
Figure 0007450793000120
下記の合成方法および反応条件にて、１６－Ａ２および１６－Ａ２ｂの化合物を合成した。
［合成方法］
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１６の化合物（Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－４－アジドベンズアミド 塩酸塩；ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：２４０１８７６－４７－７）、１モル濃度－重曹水を加え攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ ２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を固体として得た。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure 0007450793000121
（実施例１７ａ～ｃ） Ｎ－（２－アミノエチル）－４－アジドベンズアミド基導入アルギン酸（１７－Ｂ２、１７－Ｂ２ｂおよび１７－Ａ２）の合成：
Figure 0007450793000122
下記の合成方法および反応条件にて、１７－Ｂ２、１７－Ｂ２ｂおよび１７－Ａ２の化合物を合成した。
［合成方法］
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１７の化合物（Ｎ－（２－アミノエチル）－４－アジドベンズアミド 塩酸塩；ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：１６４０１３－００－７）、１モル濃度－重曹水を加え攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ ２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を固体として得た。実施例１７ｃは、先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure 0007450793000123
（実施例１８） Ｎ－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）－４－アジドベンズアミド基導入アルギン酸（１８－Ａ２）の合成：
Figure 0007450793000124
１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（４０ ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（１１２ ｍｇ）、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１８の化合物（Ｎ－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）－４－アジドベンズアミド 塩酸塩；ＣＡＳ ＲＥＧＩＳＴＲＹ ＮＯ．：２４０１８７６－４８－８）（４５ ｍｇ）のエタノール（４．０ ｍＬ）溶液、１モル濃度－重曹水（１５１ μＬ）を加え、３０℃で３時間攪拌した。塩化ナトリウム（０．４ ｇ）を加えた後、エタノール（８０ ｍＬ）を加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物（４０８ ｍｇ）を白色固体として得た。
Figure 0007450793000125
Figure 0007450793000126
Figure 0007450793000127
Figure 0007450793000128
Figure 0007450793000129
（実施例Ｆ１－Ａ）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（１）
化合物４－Ａ２ｄまたは化合物１－Ａ２ｄから調製される３重量％アルキン水溶液（アルキン溶液）および化合物１１－Ａ２ｄ、化合物１３－Ａ２ｂまたは化合物１６－Ａ２ｂから調製される３重量％のアジド水溶液（アジド溶液）を用いて、表２６に示す組合せにて、前記アルキン溶液およびアジド溶液を等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ１Ａ－Ｍ１）を調製した。混合溶液Ｆ１Ａ－Ｍ１およびアルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）から調製された３重量％アルギン酸水溶液（ＡＬＧＳ）を表２６に示す比率にて混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ１Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ１Ａ－Ｍ２および２０ｍｇ／ｍＬのブルーデキストラン（ｃｙｔｉｖａ製、Ｂｌｕｅ Ｄｅｘｔｒａｎ ２０００、コード番号１７０３６００１）含有の１．８重量％食塩水を等容量混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ１Ａ－Ｍ３）とした。混合溶液Ｆ１Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジに金属ニードル（武蔵エンジニアリング， ＳＮＡ－１９Ｇ－Ｂ）、シリコンチューブ（アズワン，φ１×φ２）及びガラスキャピラリ（ナリシゲ，Ｇ－１）を順次接続し、シリンジポンプにセットした。前記ガラスキャピラリの先端を１００ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウム水溶液中に１分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－１Ａ）として得られた（表２６中 ＣＬＡ－１ＡＮｏ．参照）。
Figure 0007450793000130
（実施例Ｆ１－Ｂ）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（２）
化合物４－Ａ２ｄから調製された３重量％化合物４－Ａ２ｄ水溶液および化合物１１－Ａ２ｄから調製された３重量％化合物１１－Ａ２ｄ水溶液を等容量混合し、化学修飾アルギン酸の混合溶液（Ｆ１Ｂ－Ｍ１）を調製した。混合溶液Ｆ１Ｂ－Ｍ１およびアルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）から調製された３重量％アルギン酸ナトリウム水溶液（ＡＬＧＳ）を１：２の容量比率にて混合し、３重量％アルギン酸混合溶液（Ｆ１Ｂ－Ｍ１Ｂ）とした。混合溶液Ｆ１Ｂ－Ｍ１Ｂを表２７に示す濃度に調製し（表２７中；Ｆ１Ｂ－Ｍ２の濃度）、別途調製したブルーデキストラン（ｃｙｔｉｖａ製、Ｂｌｕｅ Ｄｅｘｔｒａｎ ２０００、コード番号１７０３６００１）を含有する食塩水（Ｆ１Ｂ－ＢＳ：ブルーデキストランの濃度と塩化ナトリウムの濃度は表２７の通り）とを、表２７に示す容量比率にて混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ１Ｂ－Ｍ３）とした。混合溶液Ｆ１Ｂ－Ｍ３中のブルーデキストラン濃度（ｍｇ／ｍＬ）と塩化ナトリウム濃度（ｍｇ／ｍＬ）は、ブルーデキストランが１０ ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウムが９ ｍｇ／ｍＬとなる様に調製した。混合溶液Ｆ１Ｂ－Ｍ３を、ハミルトンシリンジに充填した。続いて、シリンジに金属ニードル（武蔵エンジニアリング， ＳＮＡ－１９Ｇ－Ｂ）、シリコンチューブ（アズワン，φ１×φ２）及びガラスキャピラリ（ナリシゲ，Ｇ－１）を順次接続し、シリンジポンプにセットした。前記ガラスキャピラリの先端を、１００ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで１分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－１Ｂ）として得られた（表２７中 ＣＬＡ－１ＢＮｏ．参照）。
Figure 0007450793000131
（実施例Ｆ１－Ｃ）ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（１）
前記（実施例Ｆ１－Ａ）または（実施例Ｆ１－Ｂ）で得られた、塩化カルシウム水溶液中の架橋アルギン酸ゲルファイバをセルストレーナーを用いてろ過、分取した。分取した架橋アルギン酸ゲルファイバを、表２８に示す各組成のカチオン性ポリマーが含まれる水溶液に添加し、３７℃、１２５ ｒｐｍで２０分間振とう攪拌し、架橋アルギン酸ゲルファイバをポリマーコーティングした。水溶液中のファイバを、セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩液５ｍＬを使用して２回洗浄して、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－１）（表２９中 ＣＦＢ－１Ｎｏ．参照）を得た。
Figure 0007450793000132
Figure 0007450793000133
（実施例Ｆ１－Ｄ）ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの安定性
（１）ファイバのＥＤＴＡ処理
前記（実施例Ｆ１－Ｃ）で得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－１）を２０ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ／生理食塩液（５ｍＬ）に添加し、３７℃、１２５ ｒｐｍで２０分間振とう攪拌した。前記キレート処理したポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、再度セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩液５ｍＬを使用して２回洗浄した。得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは安定性評価試験の実施まで５ｍＬ生理食塩液中に浸漬した。
（２）振盪崩壊試験
前記ＥＤＴＡ処理したポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバをセルストレーナーを用いて分離した後、１０ｍＬのＰＢＳ溶液を加えた２５ｍＬ遠沈管に添加し、３７℃で２４時間振盪した。
前記、ＥＤＴＡ処理後、振盪後のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの安定性は、以下の指標に基づき評価した。
安定性評価（スコア）：
３：ファイバの崩壊/溶解/変形/ブルーデキストランの溶出等が全く認められない
２：ファイバの一部に崩壊/溶解/変形/ブルーデキストランの溶出（累積で１００μｇ／ｍＬ未満）等が認められる
１：ファイバに明らかな崩壊/溶解/変形/ブルーデキストランの溶出（累積で１００μｇ／ｍＬ以上）等が認められる
Figure 0007450793000134
（実施例Ｆ２－Ａ）抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
下記表３１の組成を有するＧ０１６培地を調製した。続いて、メトトレキサート（以下、ＭＴＸとする）を１ ｍｍｏｌ／ＬになるようにＤ－ＰＢＳに溶解させ、ＭＴＸ溶液を調製した。前記ＭＴＸ溶液を終濃度１ μｍｏｌ／ＬになるようにＧ０１６培地で希釈し、抗体産生培地溶液を調製した。
Figure 0007450793000135
下記表３２および表３３の処方で調製されたアルキン水溶液およびアジド水溶液を用いて、表３４に示す組合せで等容量混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ２Ａ－Ｍ１）を調製した。
Figure 0007450793000136
Figure 0007450793000137
混合溶液Ｆ２Ａ－Ｍ１およびアルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）と０．９重量％塩化ナトリウム水溶液から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ２）またはアルギン酸ナトリウム（Ａ－２）と０．９重量％塩化ナトリウム水溶液から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ２Ａ）を表３４に示す比率にて混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ２Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ２Ａ－Ｍ２および抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞（２×１０７細胞／ｍＬ）を含む抗体産生培地溶液を等容量混合し、混合溶液（Ｆ２Ａ－Ｍ３）とした。混合溶液Ｆ２Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社， １５／２３ ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を１００ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウム水溶液中に２分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ）を得た（表３４中 ＣＬＡ－Ｇ Ｎｏ．参照）。
Figure 0007450793000138
（実施例Ｆ２－Ｂ）生理活性物質産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
下記表３５の組成を有する完全培地を調製した。
Figure 0007450793000139
（実施例Ｆ２－Ａ）の表３２および３３に記載された、Ｆ２Ａ１のアルキン水溶液およびＦ２Ｎ２のアジド水溶液を等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ２Ｂ－Ｍ１）を調製した。混合溶液Ｆ２Ｂ－Ｍ１およびアルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）と０．９重量％塩化ナトリウム水溶液から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）を１：２の比率にて混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ２Ｂ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ２Ｂ－Ｍ２とＭＩＮ６細胞（１×１０７細胞／ｍＬ）を含む表３５の完全培地を等容量を混合し、混合溶液Ｆ２Ｂ－Ｍ３とした。混合溶液Ｆ２Ｂ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社， １５／２３ ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。ニードルの先端を１００ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速１２５μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウム水溶液中に２分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、ＭＩＮ６細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｍ）（ＦＢ２－Ｂ－１）として得られた。
（実施例Ｆ２－Ｃ）細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
前記（実施例Ｆ２－Ａ）または（実施例Ｆ２－Ｂ）で得られた各種細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバを、表３６に示す各組成のカチオン性ポリマーが含まれる溶液を用いて、前記（実施例Ｆ１－Ｃ）に記載される方法と同様にして（振とう攪拌時間は３０分）、コーティングを行うことで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ）（表３７中 ＣＦＢ－Ｓ Ｎｏ．参照）を得た。
Figure 0007450793000140
Figure 0007450793000141
（実施例Ｆ３）カチオン性ポリマーによる架橋アルギン酸ゲルファイバのコーティング確認
（実施例Ｆ１－Ａ）のＮｏ．Ｆ１－Ａ－６に示す条件で作製した架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１－Ａ－６）を用いて、０．１％ ポリ－Ｌ－リシン－ＦＩＴＣラベル／１００ｍＭ 塩化カルシウムが含有される水溶液に浸漬した。（実施例Ｆ１－Ｃ）と同様の操作をした後、得られたファイバの表面を蛍光顕微鏡を使用して観察した。
観察結果を図７に示す。ゲルファイバの表面にポリ－Ｌ－リシン－ＦＩＴＣがコーティングされていることが確認された（図７の背景（黒色）に反転した色の部分がポリ－Ｌ－リシン－ＦＩＴＣである）。この結果は、架橋アルギン酸ゲルファイバがカチオン性ポリマーによってコーティングされていることを示唆するものであった。
（実施例Ｆ４－Ａ）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（３）
アルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から３重量％アルギン酸水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ２）を調製した。続いて、下記表３８および表３９の処方でアルキン水溶液およびアジド水溶液を調製した。
Figure 0007450793000142
Figure 0007450793000143
前記アルキン水溶液（Ｆ４Ａ１、Ｆ４Ａ２）及びアジド水溶液（Ｆ４Ｎ１、Ｆ４Ｎ２及びＦ４Ｎ３）を下記表の組合せにて等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ａ－Ｍ１）とした。混合溶液Ｆ４Ａ－Ｍ１及びＡＬＧＳ２を１：２の比率にて混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ａ－Ｍ２）とした。続いて、下表４０の処方で、アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ａ－Ｍ２）、９．９重量％塩化ナトリウム水溶液及び注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）で調製し、混合溶液（Ｆ４Ａ－Ｍ３）とした。尚、Ｆ４Ａ－Ｍ３に含まれる全アルギン酸濃度は約１．５重量％である。続いて、混合溶液Ｆ４Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジに金属ニードル（武蔵エンジニアリング， ＳＮＡ－１９Ｇ－Ｂ）、シリコンチューブ（アズワン，φ１×φ２）及びガラスキャピラリ（ナリシゲ，Ｇ－１）を順次接続し、シリンジポンプにセットした。前記ガラスキャピラリの先端を１００ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウム水溶液中に１分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、架橋アルギン酸ゲルファイバ(ＣＬＡ－Ｘ１)（表４０中 ＣＬＡ－Ｘ１ Ｎｏ．参照）を得た。
Figure 0007450793000144
（実施例Ｆ４-Ａ２）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（３ａ）
化合物４－Ａ２ｄあるいは化合物１１－Ａ２ｄに対して、０．９重量％塩化ナトリウム水溶液（塩化ナトリウムおよび水で調製）を加え、３重量％アルキン水溶液およびアジド水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した（アルキンをＦ４Ａ３、アジドをＦ４Ｎ４とする）。続いて、下表４１の処方で各種アルギン酸ナトリウムと０．９重量％塩化ナトリウム水溶液から３重量％アルギン酸ナトリウム水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した。
Figure 0007450793000145
前記アルキン水溶液（Ｆ４Ａ３）及びアジド水溶液（Ｆ４Ｎ４）を等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ａ２－Ｍ１）とした。続いて、下表４２に記載の組み合わせで混合溶液Ｆ４Ａ２－Ｍ１及び３重量％アルギン酸ナトリウム水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を５：１０の比率で混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ａ２－Ｍ２）とした。混合溶液Ｆ４Ａ２-Ｍ２と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）を等容量混合し、混合溶液（Ｆ４Ａ２－Ｍ３）とした。尚、Ｆ４Ａ－Ｍ３に含まれる全アルギン酸濃度は１．５重量％である。続いて、混合溶液Ｆ４Ａ２－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社， １５／２３ ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化バリウム水溶液中に０．８分間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｘ１Ａ）を得た（表４２中 ＣＬＡ－Ｘ１Ａ Ｎｏ．参照）。
Figure 0007450793000146
（実施例Ｆ４－Ｂ）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（４）
前記（実施例Ｆ４－Ａ）記載のアルキン水溶液（Ｆ４Ａ１）及びアジド水溶液（Ｆ４Ｎ１）を等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ｂ－Ｍ１）とした。混合溶液Ｆ４Ｂ－Ｍ１及び前記ＡＬＧＳ２を下表４３の処方で調製し、アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ｂ－Ｍ２）とした。続いて、下表４３に示すアルギン酸混合溶液Ｆ４Ｂ－Ｍ２及びＩＮｓの混合比率で混合溶液（Ｆ４Ｂ－Ｍ３）を調製した。続いて、混合溶液Ｆ４Ｂ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジに金属ニードル（武蔵エンジニアリング， ＳＮＡ－１９Ｇ－Ｂ）、シリコンチューブ（アズワン，φ１×φ２）及びガラスキャピラリ（ナリシゲ，Ｇ－１）を順次接続し、シリンジポンプにセットした。前記ガラスキャピラリの先端を１００ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウム水溶液中に１分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、架橋アルギン酸ゲルファイバ(ＣＬＡ－Ｘ２)（表４３中 ＣＬＡ－Ｘ２ Ｎｏ．参照）を得た。
Figure 0007450793000147
（実施例Ｆ４－Ｃ）ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（２ａ）
前記（実施例Ｆ４－Ａ）あるいは（実施例Ｆ４－Ｂ）で得られた、塩化カルシウム水溶液中の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｘ１およびＣＬＡ－Ｘ２）をセルストレーナーを用いてろ過、分取した。分取した架橋アルギン酸ゲルファイバを、０．１％ ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩／１００ｍＭ 塩化カルシウムの水溶液に添加し、３７℃、１２５ ｒｐｍで３０分間振とう攪拌し、架橋アルギン酸ゲルファイバをポリマーコーティングした。水溶液中のファイバを、セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩液５ｍＬを使用して２回洗浄して、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｘ）（表４４中 ＣＦＢ－ＸＮｏ．参照）を得た。
Figure 0007450793000148
（実施例Ｆ４－Ｃ２）ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（２）
１％ ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、９．２ｍｍｏｌ／Ｌ ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸、１５４ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化ナトリウムが含まれる１％ポリ－Ｌ－オルニチン水溶液を調製した。前記１％ポリ－Ｌ－オルニチン水溶液を、０．９％ 塩化ナトリウム及び２０ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて希釈し、０．１％ポリ－Ｌ－オルニチン水溶液とした。続いて、前記（実施例Ｆ４－Ａ２）で得られた塩化バリウム水溶液中の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｘ１Ａ）をセルストレーナーを用いてろ過、分取した。分取した架橋アルギン酸ゲルファイバを、前記０．１％ポリ－Ｌ－オルニチン水溶液に添加し、３７℃、１２５ ｒｐｍで３０分間振とう撹拌し、架橋アルギン酸ゲルファイバをポリマーコーティングした。水溶液中のファイバを、セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩液１０ｍＬを使用して１回洗浄して、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｘ２）（表４５中 ＣＦＢ－Ｘ２Ｎｏ．参照）を得た。
Figure 0007450793000149
(実施例Ｆ４－Ｄ)ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの引張試験
前記（実施例Ｆ４－Ｃ）及び（実施例Ｆ４－Ｃ２）で得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－ＸあるいはＣＦＢ－Ｘ２）の引張試験は、小型卓上ゲル強度測定機ＥＺ－ＳＸ ５ＮＣ１（島津、Ｎｏ．Ｉ３０８２５６Ｄ０５９２）、ロードセルＳＭＴ１－５Ｎ（Ｓ／Ｎ＝９１３１９３）を用い、注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）中で、ファイバを治具にセットし測定した。測定値は、ファイバが破断したところの応力をＭＰａ、および歪みを％で、表４６に示す。
Figure 0007450793000150
表４６中、Ｎｏ．Ｆ４－Ｄ－１～Ｆ４－Ｄ－１０およびＦ４－Ｄ－１２～Ｆ４－Ｄ－１５において、０．１ＭＰａ以上の引張強度、および１００％以上の歪み（伸び率）を示す、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバであることが確認された。
（実施例ＦＩ－１）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５ ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、（実施例Ｆ２－Ｃ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ２－Ａ－１－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－２－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－３－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－４－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－５－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－６－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－７－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－８－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－９－ｃ１、およびＦＢ２－Ａ－１０－ｃ１）を入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液（３０ ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５ ｒｐｍで振とうしながら培養を１４日または２０日間実施した。２～３日に一回、培養液１．８ ｍＬを抜き取り、前記抗体産生培地溶液１．８ｍＬまたはＦｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ Ｆ００３）１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０ ｍＬに保った。また、週に一度培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、培養期間中の累積抗体量および培養液に検出される抗ＧＰＶＩ抗体生産ＣＨＯ細胞の濃度は表４７の通りであった。
Figure 0007450793000151
（実施例ＦＩ－２）生理活性物質産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
＜工程１＞ ＭＩＮ６細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
（実施例Ｆ２－Ｃ）で得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ２－Ｂ－１－ｃ１）を６０ｍｍ超低接着表面ディッシュ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、製品番号：３２６１）に入れ、（実施例Ｆ２－Ｂ）に記載の完全培地（５ ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で静置して３日あるいは１４日間培養した。
＜工程２＞インスリン分泌能評価
（実施例ＦＩ－２）＜工程１＞で３日間あるいは１４日間培養した、ＭＩＮ６細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ中のＭＩＮ６細胞のインスリン分泌能を評価した。ＭＩＮ６細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを低グルコース溶液（２ ｍＭ ｇｌｕｃｏｓｅ／ＫＲＢＨ／０．１％ ＢＳＡ）１０ｍＬ中で２時間培養し、高グルコース溶液（２０ ｍＭ ｇｌｕｃｏｓｅ／ＫＲＢＨ／０．１％ ＢＳＡ）１０ｍＬへ溶液交換したのちにさらに２時間培養した。その後再び低グルコース溶液１０ｍＬへ溶液交換して２時間培養した。各工程の終了時の溶液中インスリン濃度を超高感度マウスインスリン測定キット（森永生科学研究所製）を使用して測定した。グルコース濃度に依存して、インスリンを放出することが確認できた。
Figure 0007450793000152
（実施例Ｆ５－Ａ）抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の表３２および表３３の処方と同様にして、化合物４－Ａ２ｄおよび化合物１１－Ａ２ｄの３重量％水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した後、各水溶液を等容量混合して、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ５Ａ－Ｍ１）を調製した。前記混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ１、アルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ２）をＦ５Ａ－Ｍ１：ＡＬＧＳ２＝５：１０の比率にて混合して、アルギン酸混合溶液（Ｆ５Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ２およびトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞（１×１０８細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ５Ａ－Ｍ３）とした。前記混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社， １５／２３ ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を１００ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液あるいは０．９％塩化ナトリウム含有２０ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウムあるいは塩化バリウム水溶液中に０．８分間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ５）を得た（表４９中 ＣＬＡ－Ｇ５ Ｎｏ．参照）。
Figure 0007450793000153
（実施例Ｆ５－Ｂ）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ５－Ａ）で得られた抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ５）を表５０に示す各組成のカチオン性ポリマー含有水溶液に添加し、３７℃、１２５ ｒｐｍで３０分間振とう撹拌し、細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバをポリマーコーティングした。尚、ポリマーコーティングに使用した水溶液はコーティングするファイバ量の１０倍量使用した。水溶液中のファイバを、セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩水５ｍＬを使用して２回洗浄して、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ２）（表５１中 ＣＦＢ－Ｓ２ Ｎｏ．参照）を得た。
Figure 0007450793000154
Figure 0007450793000155
（実施例ＦＩ－３）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５ ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、（実施例Ｆ５－Ｂ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ５－Ａ－１－ｃ１又はＦＢ５－Ａ－２－ｃ２）を１本入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載のＧ０１６培地（３０ ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５ ｒｐｍで振とうしながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。この間、２～３日に一回、培養液１．８ ｍＬを抜き取り、前記Ｇ０１６培地１．８ｍＬまたはＦｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ Ｆ００３）１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０ ｍＬに保った。また、週に一度培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出されるトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞の濃度は表５２の通りであった。培養結果より、各ファイバの培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。
Figure 0007450793000156
（実施例Ｆ６）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞（３×１０７細胞／ｍＬあるいは１×１０８細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地および前記（実施例Ｆ５－Ａ）で調製された混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ２を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ６Ａ－Ｍ３）とした。尚、混合溶液Ｆ６Ａ－Ｍ３中には、アルキン化合物およびアジド化合物の終濃度が０．５重量％に、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞を表５３に示す濃度で含有させた。前記混合溶液Ｆ６Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社， １５／２３ ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該水溶液中に表５３に記載した時間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバとして得た。続いて、０．１％ ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％ 塩化ナトリウム及び２０ｍｍｍｏｌ／Ｌ 塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ３）（表５３中 ＣＦＢ－Ｓ３ Ｎｏ．参照）を得た。
Figure 0007450793000157
（実施例ＦＩ－４）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５ ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、（実施例Ｆ６）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ６－１－ｃ１、ＦＢ６－２－ｃ１又はＦＢ６－４－ｃ１は１本、ＦＢ６－３－ｃ１は２本）を入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地を添加し、ゲルファイバ及びＧ０１６培地の総量を３０ｍＬとし、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５ ｐｍで振とうしながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。培養開始２日後に、培養液１．８ ｍＬを抜き取り、Ｆｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ Ｆ００３）１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０ ｍＬに保った。以降、２～３日に一回、培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出されるトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞の濃度は表５４の通りであった。培養結果より、各ファイバの培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。
Figure 0007450793000158
（実施例Ｆ７）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞（２×１０７細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液および前記（実施例Ｆ５－Ａ）で調製された混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ２を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ７Ａ－Ｍ３）とした。尚、混合溶液Ｆ７Ａ－Ｍ３中には、アルキン化合物およびアジド化合物を終濃度０．５重量％で含有させた。前記混合溶液Ｆ７Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社， １５／２３ ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該水溶液中に表５５に記載した時間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバとして得た。続いて、０．１％ ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％ 塩化ナトリウム及び２０ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ４）（表５５中 ＣＦＢ－Ｓ４ Ｎｏ．参照）を得た。
Figure 0007450793000159
（実施例ＦＩ－５）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５ ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、（実施例Ｆ７）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ７－１－ｃ１又はＦＢ７－２－ｃ１は１本、ＦＢ７－３－ｃ１は２本）を入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液を添加し、ゲルファイバ及び抗体産生培地溶液の総量を３０ｍＬとし、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５ ｒｐｍで振とうしながら培養した。培養開始２日後に、培養液１．８ ｍＬを抜き取り、Ｆｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ Ｆ００３）１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０ ｍＬに保った。以降、２～３日に一回、抗体産生培地溶液を使用して培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出される抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞の濃度は表５６の通りであった。培養結果より、各ファイバの培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。
Figure 0007450793000160
（実施例Ｆ８）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
下表５７の処方で各種アルギン酸ナトリウムと注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から３重量％アルギン酸水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した。続いて、下表５８の処方で３重量％アルキン水溶液およびアジド水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した。
Figure 0007450793000161
Figure 0007450793000162
前記表５８に記載の３重量％アルキン水溶液及びアジド水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を下表５９に示す処方にて等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ８Ａ－Ｍ１）を調製した。混合溶液Ｆ８Ａ－Ｍ１、前記３重量％アルギン酸ナトリウム水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を下表５９に記載された組み合わせで５：１０になるように混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ８Ａ－Ｍ２）を調製した。続いて、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞（１×１０８細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地および混合溶液Ｆ８Ａ－Ｍ２を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ８Ａ－Ｍ３）とした。尚、混合溶液Ｆ８Ａ－Ｍ３中には、アルキン化合物およびアジド化合物を終濃度０．５重量％で含有させた。
混合溶液Ｆ８Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社， １５／２３ ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで０．８分間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバとして得た。続いて、得られたトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバおよび、０．１％ ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％ 塩化ナトリウム及び２０ｍｍｍｏｌ／Ｌ 塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ５）（表５９中 ＣＦＢ－Ｓ５ Ｎｏ．参照）を得た。
Figure 0007450793000163
（実施例ＦＩ－６）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５ ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、（実施例Ｆ８）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ８－１－ｃ１、ＦＢ８－２－ｃ１、ＦＢ８－３－ｃ１、ＦＢ８－４－ｃ１又はＦＢ８－５－ｃ１）を１本入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地（３０ ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５ ｒｐｍで振とうしながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。この間、２～３日に一回、培養液１．８ ｍＬを抜き取り、前記Ｇ０１６培地１．８ｍＬまたはＦｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ Ｆ００３）１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０ ｍＬに保った。また、週に一度培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出されるトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞の濃度は表６０の通りであった。培養結果より、各ファイバの培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。本培養結果において、ファイバの伸縮性（（実施例Ｆ４－Ｄ）における引張試験の結果）に応じて、より高い抗体産生となった。
Figure 0007450793000164
（実施例Ｆ９）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞（１×１０８細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地および前記（実施例Ｆ５－Ａ）で調製されたアルギン酸混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ２を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ９Ａ－Ｍ３）とした。尚、混合溶液Ｆ９Ａ－Ｍ３中には、アルキン化合物およびアジド化合物の終濃度を０．５重量％で含有させた。前記混合溶液Ｆ９Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社， １５／２３ ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該水溶液中に０．８分間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバとして得た。得られた前記細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバを、表６１に示す各組成のカチオン性ポリマー含有水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ６）（表６２中 ＣＦＢ－Ｓ６ Ｎｏ．参照）を得た。
Figure 0007450793000165
Figure 0007450793000166
（実施例ＦＩ－７）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５ ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、前記（実施例Ｆ９）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ９－１－ｃ１、ＦＢ９－２－ｃ２又はＦＢ９－３－ｃ３）を１本入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載のＧ０１６培地（３０ ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５ ｐｍで振とうしながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。この間、２～３日に一回、培養液１．８ ｍＬを抜き取り、前記Ｇ０１６培地１．８ｍＬまたはＦｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ Ｆ００３）１．８ｍＬを添加、あるいは培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出されるトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞の濃度は表６３の通りであった。培養結果より、ＦＢ９－１－ｃ１及びＦＢ９－１－ｃ３のファイバの培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。
Figure 0007450793000167
（実施例Ｆ１６－Ａ）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
下表６４の処方で３重量％アルギン酸ナトリウム水溶液、アルキン水溶液およびアジド水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した。
Figure 0007450793000168
前記アルキン水溶液（Ｆ１６Ａ１）およびアジド水溶液（Ｆ１６Ｎ１）を等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ１６Ａ－Ｍ１）を調製した。混合溶液Ｆ１６Ａ－Ｍ１およびＡＬＧＳ２ＢをＦ１６Ａ－Ｍ１：ＡＬＧＳ２Ｂ＝５：１０の比率で混合して、アルギン酸混合溶液（Ｆ１６Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ１６Ａ－Ｍ２およびビーズ懸濁液（Ｓｐｈｅｒｅｔｅｃｈ製、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ＵＶ Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ、コード番号ＦＰ－１００４０－２）を等容量混合し、ビーズ含有アルギン酸混合溶液（Ｆ１６Ａ－Ｍ３）とした。混合溶液Ｆ１６Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社， １５／２３ ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで１分間射出した。尚、３秒毎に解剖ハサミを使用して、射出直後の繊維状形態の物質を切断した。切断した繊維状形態の物質は、前記塩化バリウム水溶液中で３０分以上静置することにより、長さ約５ｃｍの架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－１６Ａ）として得た。
（実施例Ｆ１６－Ｂ）ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
前記（実施例Ｆ１６－Ａ）で得られた、塩化バリウム水溶液中の架橋アルギン酸ゲルファイバをセルストレーナーを用いてろ過、分取し、分取した架橋アルギン酸ゲルファイバを、カチオン性ポリマーが含まれる水溶液に添加し、３７℃、１２５ ｒｐｍで３０分間振とう撹拌し、架橋アルギン酸ゲルファイバをポリマーコーティングし、水溶液中のファイバを、セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩液５ｍＬを使用して２回洗浄して、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－１６）を得る。
（実施例Ｆ１７－Ａ）抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
下表６５の処方で３重量％アルキン水溶液およびアジド水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した。
Figure 0007450793000169
前記表６５に記載の化合物４－Ａ２ｄ、化合物１１－Ａ２ｄおよび化合物１１－Ａ２ｆの３重量％水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した後、下表６６に記載の組み合わせにて、アルキンおよびアジド水溶液を等容量混合して、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ１７Ａ－Ｍ１）を調製した。前記混合溶液Ｆ１７Ａ－Ｍ１、アルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ２）をＦ１７Ａ－Ｍ１：ＡＬＧＳ２＝５：１０の比率にて混合して、アルギン酸混合溶液（Ｆ１７Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ１７Ａ－Ｍ２およびトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞（３×１０７細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ１７Ａ－Ｍ３）とした。前記混合溶液Ｆ１７Ａ－Ｍ３を用いて、以下の操作方法（操作方法Ａ、Ｂ）に準じて、操作を実施することで、抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ１７）（表６６中 ＣＬＡ－Ｇ１７ Ｎｏ．参照）を得た。
（操作方法Ａ）（実施例Ｆ１６－Ａ）に記載の操作方法
（操作方法Ｂ）前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０ ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化バリウム水溶液中に射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置する。
尚、ＦＢ１７－３およびＦＢ１７-４のファイバ長は、約２－４ｃｍである。
Figure 0007450793000170
（実施例Ｆ１７－Ｂ）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ１７－Ａ）で得られた抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ１７）を、０．１％ ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％ 塩化ナトリウム及び２０ｍｍｍｏｌ／Ｌ 塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｇ１７）を得た。尚、コーティングに使用したファイバ量は下表６７に示す通りである（表６７中 ＣＦＢ－Ｇ１７ Ｎｏ．参照）。
Figure 0007450793000171
（実施例ＦＩ－１７）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
前記（実施例Ｆ－１７Ｂ）で得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｇ１７）を用いて、以下の操作方法（操作方法１、２）に準じて、操作を実施することで抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養を行った。
（実施操作１）
磁気撹拌子を備えたガラス製培養槽（全容５００ｍＬ培養槽）に、０．０１％の消泡剤（Ｓｉｇｍａ製、ＡｎｔｉｆｏｒｍＣ Ｅｍｕｌｓｉｏｎ、カタログ番号Ａ８０１１）を添加した前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載のＧ０１６培地及び前記（実施例Ｆ１７－Ｂ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－１－ｃ１あるいはＦＢ１７－３－ｃ１）を入れ、培養系の総量を３００ｍＬとた。前記抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを含む培養槽を、フィルター滅菌した空気を常時通気しながら、ｐＨが約７になるようにＣＯ２を適宜通気させ、３７℃、下表６８に示す速度で撹拌しながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。培養開始日から下表６８に記載の培地交換速度（ｖｅｓｓｅｌ ｖｏｌｕｍｅ／ｄａｙ、以下ｖｖｄと記載）にて培養液を連続的に入れ替えた。尚、培養液の交換には、前記Ｇ０１６培地に０．０１％の消泡剤を添加して使用した。
（実施操作２）
１２５ ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、前記（実施例Ｆ１７－Ｂ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－２－ｃ１あるいはＦＢ１７－４－ｃ１）を入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載のＧ０１６培地を添加し、培養系の総量を３０ｍＬとした。３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で下表６８に記載の撹拌速度で振とうしながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。この間、２～３日に一回、培養液１．８ ｍＬを抜き取り、前記Ｇ０１６培地１．８ｍＬまたはＦｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ Ｆ００３）１．８ｍＬを添加、あるいは培養液の半量交換を実施した。
培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、培養最終日における培養液に検出されるトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞の濃度および累積抗体濃度は下表６８の通りであった。
Figure 0007450793000172
表６８の結果は、ファイバ長を短くすることで、リアクター培養における抗体産生量がフラスコ培養と比較して向上することを示唆するものであった。
（実施例Ｆ１８－Ａ）抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の表３２および表３３の処方と同様にして、化合物４－Ａ２ｄおよび化合物１１－Ａ２ｄの３重量％水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した後、各水溶液を等容量混合して、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ１８Ａ－Ｍ１）を調製した。前記混合溶液Ｆ１８Ａ－Ｍ１、アルギン酸ナトリウム（Ａ－３）と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ３Ａ）をＦ１８Ａ－Ｍ１：ＡＬＧＳ３Ａ＝５：１０の比率にて混合して、アルギン酸混合溶液（Ｆ１８Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ１８Ａ－Ｍ２および抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞（２×１０７細胞／ｍＬ）を含む前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ１８Ａ－Ｍ３）とした。前記混合溶液Ｆ１８Ａ－Ｍ３を用いて、（実施例Ｆ１７－Ａ）に記載の（操作方法Ｂ）と同様の操作を実施することで、抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ１８）を得た。
（実施例Ｆ１８－Ｂ）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ１８－Ａ）で得られた抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ１８）を、０．１％ ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％ 塩化ナトリウム及び２０ｍｍｍｏｌ／Ｌ 塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｇ１８）を得た。尚、コーティングに使用したファイバ量は下表６９に示す通りである（表６９中 ＣＦＢ－Ｇ１８ Ｎｏ．参照）。
Figure 0007450793000173
（実施例ＦＩ－１８）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５ ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、前記（実施例Ｆ１８－Ｂ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１８－１－ｃ１、ＦＢ１８－２－ｃ１又はＦＢ１８－３－ｃ１）を入れ、前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液を添加し、培養系の総量を３０ｍＬとした。前記三角フラスコを３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５ ｐｍで振とうしながら培養を開始し、同温度にて培養を継続した。この間、２～３日に一回、培養液１．８ ｍＬを抜き取り、Ｆｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ Ｆ００３）１．８ｍＬを添加、あるいは培養液の半量交換を実施した。尚、培養液の半量交換には、前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液の他、前記抗体産生培地溶液に対して、４５％Ｄ－（＋）グルコース溶液（ＳＩＧＭＡ製、カタログ番号Ｇ８７６９）を１/１００あるいは１/５０容量添加したグルコース追加抗体産生培地溶液を使用した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出される抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞の濃度は表７０の通りであった。培養結果より、ＦＢ１８－１－ｃ１、ＦＢ１８－２－ｃ１又はＦＢ１８－３－ｃ１のファイバ培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。
Figure 0007450793000174
（実施例Ｆ１９－Ａ）抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ１６－Ａ）に記載の表６４の処方と同様にして、化合物４－Ａ２ｄおよび化合物１１－Ａ２ｆの３重量％水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した後、各水溶液を等容量混合して、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ１９Ａ－Ｍ１）を調製した。前記混合溶液Ｆ１９Ａ－Ｍ１、アルギン酸ナトリウム（Ａ－３）と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ３Ａ）をＦ１９Ａ－Ｍ１：ＡＬＧＳ３Ａ＝５：１０の比率にて混合して、アルギン酸混合溶液（Ｆ１９Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ１９Ａ－Ｍ２および抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞（２×１０７細胞／ｍＬ）を含む前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ１９Ａ－Ｍ３）とした。前記混合溶液Ｆ１９Ａ－Ｍ３を用いて、（実施例Ｆ１６－Ａ）に準じた操作を実施することで、ファイバ長が約２－４ｃｍの抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－１９Ａ）を６０ｍＬ得た。
（実施例Ｆ１９－Ｂ）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ１９－Ａ）で得られた抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ１９）を、０．１％ ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％ 塩化ナトリウム及び２０ｍｍｍｏｌ／Ｌ 塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｇ１９）を得た。
（実施例ＦＩ－１９）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
磁気撹拌子を備えたガラス製培養槽（全容５００ｍＬ培養槽）に、前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液及び前記（実施例Ｆ１９－Ｂ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｇ１９）を入れ、培養系の総量を３００ｍＬとた。前記抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを含む培養槽を、フィルター滅菌した空気を常時通気しながら、ｐＨが約７になるようにＣＯ２を適宜通気させ、３７℃、３５０ ｒｐｍで撹拌しながら培養を開始した。１日後に撹拌速度を２１０ ｒｐｍとし、３７℃、同速度にて培養を継続した。培養開始１日後から、（実施例ＦＩ－１７）と同様に約０．５ｖｖｄにて培養液を連続的に入れ替えた。尚、培養液の交換には、前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液あるいは０．０１％の消泡剤（Ｓｉｇｍａ製、ＡｎｔｉｆｏｒｍＣ Ｅｍｕｌｓｉｏｎ、カタログ番号Ａ８０１１）を添加した前記抗体産生培地溶液を使用した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出される抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞の濃度は表７１の通りであった。
Figure 0007450793000175
前記（実施例ＦＩ-１９）の結果は、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いたリアクター培養において、抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞が抗体産生していることを示唆するものであった。
ここでは、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞及び架橋アルギン酸ゲルを含むコア層が、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）で被覆されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバが提供される。また、当該ファイバの製造方法、及び当該ファイバを用いた抗体、生理活性物質等の培養方法を提供することができる。
ａ：ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の直径
ｂ：ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのカチオン性ポリマー層の厚さ
ｃ：ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの外径
４：カチオン性ポリマー層
５：コア層
６：細胞（抗体、生理活性物質等を産生できる細胞）
ＸＸ：装置
ＹＹ：押出筒
１：導入口
２：排出口
ＤＤ：容器（例えば、ビーカー）（２価金属イオン含有溶液）
ＥＥ：容器（例えば、ビーカー）（カチオン性ポリマー含有溶液）
ＣＬＡ：架橋アルギン酸ゲルファイバ
ＣＦＢ：ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ

Claims (12)

  1. 抗体および生理活性物質からなる群から選択される少なくとも１種の生産に用いるための、コア層およびカチオン性ポリマー層を含むポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバであって、前記コア層は、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルに包埋された抗体産生細胞又は生理活性物質産生細胞を含み、前記カチオン性ポリマー層は、前記コア層を被覆し、前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、０．０１ｍ～７５ｍの長さを有し、外径が、０．１～２０００μｍの範囲である、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ：

    式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、下記式（Ｉ）：
    ［式（Ｉ）中、（ＡＬＧ）は、アルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；Ａｋｎ－Ｌ１－（Ａｋｎは環状アルキン基を表し；－Ｌ１－は、環状アルキン基（Ａｋｎ）と結合する２価のリンカーである）は、下記表：

    に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基である］で表される化学修飾アルギン酸誘導体であり；
    式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、下記式（ＩＩ）：
    ［式（ＩＩ）中、（ＡＬＧ）はアルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ２－は、下記表：

    に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択されるリンカーを表わす］で表される化学修飾アルギン酸誘導体。
  2. コア層に含まれる抗体産生細胞が、抗体を産生する遺伝子組換え動物細胞であって、その宿主細胞が、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、ＰＥＲＣ６細胞、ＹＢ２／０細胞、ＹＥ２／０細胞、１Ｒ９８３Ｆ細胞、Ｎａｍａｌｗａ細胞、Ｗｉｌ－２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、Ｍｏｌｔ－４細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、ＫＧＨ６細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞、Ｃ１２７細胞、ＪＣ細胞、ＬＡ７細胞、ＺＲ－４５－３０細胞、ｈＴＥＲＴ細胞、ＮＭ２Ｃ５細胞、及びＵＡＣＣ－８１２細胞からなる群から選択される細胞である、請求項１に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  3. コア層に含まれる生理活性物質産生細胞が、インスリン分泌細胞、膵島、膵島細胞、ドーパミン分泌細胞、脳下垂体細胞、成長ホルモン分泌細胞、副甲状腺細胞、神経成長因子分泌細胞、血液凝固因子分泌細胞、肝細胞、上皮小体細胞、エリスロポエチン分泌細胞、ノルエピネフリン分泌細胞及び生理活性物質発現ベクターにより形質転換された細胞（遺伝子組換え細胞）からなる群から選択される細胞である、請求項１に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  4. コア層が、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、培地、培養液、コラーゲン溶液、メチルセルロース及びスクロース溶液からなる群から選択される成分を追加で含む、請求項１に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  5. コア層が、アルギン酸溶液及びアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルからなる群から選択される成分を追加で含む、請求項１に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  6. カチオン性ポリマー層が、ポリアミノ酸、塩基性多糖類、及び塩基性ポリマーからなる群から選択されるカチオン性ポリマーである、請求項１に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  7. カチオン性ポリマー層が、ポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリ－Ｄ－オルニチン（ＰＤＯ）、ポリ－ＤＬ－オルニチン、ポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ポリ－ＤＬ－リジン、ポリ－Ｌ－アルギニン（ＰＬＡ）、ポリ－Ｄ－アルギニン（ＰＤＡ）、ポリ－ＤＬ－アルギニン、ポリ－Ｌ－ホモアルギニン（ＰＬＨＡ）、ポリ－Ｄ－ホモアルギニン（ＰＤＨＡ）、ポリ－ＤＬ－ホモアルギニン、ポリ－Ｌ－ヒスチジン（ＰＬＨ）、ポリ－Ｄ－ヒスチジン（ＰＤＨ）、ポリ－ＤＬ－ヒスチジン、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリビニルアミン（ＰＶＡ）、ポリエチレンイミン、アリルアミン－ジアリルアミン共重合体、およびアリルアミン－マレイン酸共重合体からなる群から選択されるカチオン性ポリマーである、請求項１に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  8. カチオン性ポリマー層が、ポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、およびポリエチレンイミンからなる群から選択されるカチオン性ポリマーである、請求項１に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  9. 外径が、２０～１０００μｍの範囲である、請求項１に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  10. ０．０１ｍ～１０ｍの長さを有する、請求項１に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  11. 請求項１ないし１０のいずれか１項に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法であって、
    （１）抗体産生細胞又は生理活性物質産生細胞ならびに請求項１に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体が含まれる混合溶液を、２価金属イオンを含む溶液中に射出し、抗体又は生理活性物質を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバを得る工程、
    （２）（１）で得られた抗体産生細胞又は生理活性物質産生細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバを、カチオン性ポリマーを含む溶液に接触させることで、カチオン性ポリマー層で被覆されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを得る工程、
    を含むことを特徴とする、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法。
  12. 請求項１ないし１０のいずれか１項に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いる、抗体又は生理活性物質の製造方法。
JP2023194056A 2021-06-23 2023-11-15 新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ Active JP7450793B2 (ja)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021104094 2021-06-23
JP2021104094 2021-06-23
JPPCT/JP2021/048567 2021-12-27
PCT/JP2021/048567 WO2022145420A1 (ja) 2020-12-28 2021-12-27 新規な多層ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ
PCT/JP2022/024935 WO2022270549A1 (ja) 2021-06-23 2022-06-22 新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ
JP2022568561A JPWO2022270549A1 (ja) 2021-06-23 2022-06-22

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022568561A Division JPWO2022270549A1 (ja) 2021-06-23 2022-06-22

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2024020393A JP2024020393A (ja) 2024-02-14
JP7450793B2 true JP7450793B2 (ja) 2024-03-15

Family

ID=84545455

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022568561A Pending JPWO2022270549A1 (ja) 2021-06-23 2022-06-22
JP2023194056A Active JP7450793B2 (ja) 2021-06-23 2023-11-15 新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ
JP2024031804A Active JP7545000B2 (ja) 2021-06-23 2024-03-04 新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022568561A Pending JPWO2022270549A1 (ja) 2021-06-23 2022-06-22

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2024031804A Active JP7545000B2 (ja) 2021-06-23 2024-03-04 新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ

Country Status (8)

Country Link
US (1) US12312574B2 (ja)
EP (1) EP4361249A1 (ja)
JP (3) JPWO2022270549A1 (ja)
KR (1) KR20240024839A (ja)
CN (2) CN116710110A (ja)
AU (1) AU2022298245A1 (ja)
CA (1) CA3223483A1 (ja)
WO (1) WO2022270549A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113181217A (zh) * 2021-04-28 2021-07-30 吉林大学 一种细胞支架、其搭载胰岛细胞复合物、制备方法、应用
CN117631135B (zh) 2024-01-25 2024-04-09 四川大学 一种双功能柔性水凝胶光纤及其制备方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018534936A (ja) 2015-11-25 2018-11-29 ニューテック・ベンチャーズ 大規模細胞製造システム
WO2019240219A1 (ja) 2018-06-14 2019-12-19 持田製薬株式会社 新規な架橋アルギン酸
WO2020262642A1 (ja) 2019-06-28 2020-12-30 持田製薬株式会社 化学架橋アルギン酸を用いた移植用デバイス

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4352883A (en) 1979-03-28 1982-10-05 Damon Corporation Encapsulation of biological material
US4391909A (en) * 1979-03-28 1983-07-05 Damon Corporation Microcapsules containing viable tissue cells
JPS60160885A (ja) * 1984-01-30 1985-08-22 Asama Kasei Kk 固定化した微生物、植物細胞および／または酵素
US5589591A (en) 1986-07-03 1996-12-31 Advanced Magnetics, Inc. Endotoxin-free polysaccharides
AU3065192A (en) 1991-12-20 1993-07-28 Howmedica Inc. Ultra-pure polysaccharide materials for medical use
JP2678431B2 (ja) * 1994-05-06 1997-11-17 ナショナル・サイエンス・カウンシル 細胞培養用の液体コアマイクロカプセルの製造方法及び液体コアマイクロカプセル
JPH08269102A (ja) 1995-03-30 1996-10-15 Shiseido Co Ltd エンドトキシンフリーのβ１，３−グルカン及びその製造法並びに医療用ゲル素材
JPH09324001A (ja) 1996-04-02 1997-12-16 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd ヒアルロン酸ナトリウムの精製法
US6281341B1 (en) 1997-04-30 2001-08-28 Biomm, Inc. & University Of Miami Hetero-polysaccharide conjugate and methods of making and using the same
WO2001052871A1 (en) 2000-01-20 2001-07-26 Diatranz Limited Preparation and xenotransplantation of porcine islets
JP2005036036A (ja) 2003-07-16 2005-02-10 Tanabe Seiyaku Co Ltd エンドトキシン除去方法
WO2005095626A1 (ja) * 2004-03-31 2005-10-13 Nippon Soda Co., Ltd. 固定化生体触媒およびそれを用いた有機酸塩の製造方法
JP4986273B2 (ja) 2005-09-15 2012-07-25 持田製薬株式会社 アルギン酸を含む創傷被覆材
WO2010139061A1 (en) 2009-06-02 2010-12-09 Harald Stover Immuno-compatible hydrogel system
JP4901931B2 (ja) 2009-09-18 2012-03-21 大阪瓦斯株式会社 コンロ
WO2011046105A1 (ja) 2009-10-14 2011-04-21 国立大学法人 東京大学 被覆されたマイクロゲルファイバ
EP3138571A1 (en) * 2011-03-04 2017-03-08 Wake Forest University Health Sciences Encapsulated cells for hormone replacement therapy
JP6074765B2 (ja) 2013-01-18 2017-02-08 国立大学法人 東京大学 移植用神経束及びその製造方法
CN103981147B (zh) * 2013-02-08 2017-11-10 中国科学院上海生命科学研究院 一种新的制备肝实质细胞的方法
WO2014171842A1 (en) 2013-04-19 2014-10-23 Living Cell Technologies New Zealand Limited Biocompatible encapsulation system
JP6332782B2 (ja) 2013-06-07 2018-05-30 国立大学法人 鹿児島大学 細胞凝集塊作製法
CN105078923A (zh) 2014-05-07 2015-11-25 中国科学院大连化学物理研究所 Peg原位共价接枝的海藻酸盐微胶囊及其制备和应用
EP3147346A4 (en) 2014-05-20 2018-01-10 The University of Tokyo Hollow microfiber
JP6439918B2 (ja) 2014-10-17 2018-12-19 国立大学法人 東京大学 ３次元細胞構造体の製造方法
CN109563487A (zh) * 2016-07-18 2019-04-02 苏黎士联邦理工大学 β细胞拟似细胞
EP3584318A4 (en) 2017-02-16 2020-11-25 Ajinomoto Co., Inc. POLYMER BALL
JP7090868B2 (ja) 2017-10-19 2022-06-27 国立大学法人 東京大学 接着剤及びその使用
JP7034467B2 (ja) 2017-10-20 2022-03-14 国立大学法人 東京大学 細胞の三次元培養方法、細胞構造体、細胞構造体の製造方法、細胞の運搬方法及び細胞の保存方法
US20200392439A1 (en) 2017-12-23 2020-12-17 The University Of Tokyo Array and use thereof
WO2019168058A1 (ja) 2018-02-28 2019-09-06 持田製薬株式会社 新規光架橋性アルギン酸誘導体
US20210340481A1 (en) 2018-08-10 2021-11-04 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Alginate hollow microfiber
JP6601931B1 (ja) 2019-07-17 2019-11-06 株式会社セルファイバ 細胞ファイバ製造システム、細胞ファイバ製造方法及びプログラム
JP2023015413A (ja) 2019-12-18 2023-02-01 持田製薬株式会社 化学架橋アルギン酸ゲルファイバ
CN114929754A (zh) 2019-12-18 2022-08-19 持田制药株式会社 新型交联海藻酸
CN117042782A (zh) * 2020-12-28 2023-11-10 持田制药株式会社 使用了化学交联海藻酸的多层结构体
JP2024160885A (ja) 2023-05-03 2024-11-15 Ｓｋ８Ｉｎｓｏｌｌ株式会社 インソール提示システムおよびインソール提示方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018534936A (ja) 2015-11-25 2018-11-29 ニューテック・ベンチャーズ 大規模細胞製造システム
WO2019240219A1 (ja) 2018-06-14 2019-12-19 持田製薬株式会社 新規な架橋アルギン酸
WO2020262642A1 (ja) 2019-06-28 2020-12-30 持田製薬株式会社 化学架橋アルギン酸を用いた移植用デバイス

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
山地秀樹，浮遊性動物細胞の固定化培養に関する研究，京都大学博士論文，1994年，https://doi.org/10.11501/3098583

Also Published As

Publication number Publication date
JP2024063159A (ja) 2024-05-10
CN116710110A (zh) 2023-09-05
CA3223483A1 (en) 2022-12-29
JPWO2022270549A1 (ja) 2022-12-29
EP4361249A1 (en) 2024-05-01
AU2022298245A1 (en) 2024-01-18
US20240174959A1 (en) 2024-05-30
US12312574B2 (en) 2025-05-27
JP7545000B2 (ja) 2024-09-03
CN117529547A (zh) 2024-02-06
WO2022270549A1 (ja) 2022-12-29
JP2024020393A (ja) 2024-02-14
KR20240024839A (ko) 2024-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7450793B2 (ja) 新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ
US9987393B2 (en) Covalently cross linked hydrogels and methods of making and using same
AU2019351262A1 (en) Implantable devices for cell therapy and related methods
KR101898229B1 (ko) 광가교된 실크 피브로인을 제조하는 방법 및 그에 의해 제조된 광가교된 실크 피브로인
JP5020973B2 (ja) 細胞接着用の組換ゼラチン粒子
KR102005737B1 (ko) 신규한 3d 바이오 프린팅용 바이오 잉크 및 이의 이용
Meco et al. Impact of elastin-like protein temperature transition on PEG-ELP hybrid hydrogel properties
US20210340481A1 (en) Alginate hollow microfiber
CN114302749A (zh) 使用了化学交联海藻酸的移植用器件
WO2014039245A1 (en) Method of creating hydrogels through oxime bond formation
WO2021125279A1 (ja) 化学架橋アルギン酸ゲルファイバ
CN1509155A (zh) 具有蛋白代谢功能的体内型人工肾及其构建方法
JP2007516323A (ja) 分解時間を調整可能なステレオコンプレックスヒドロゲル
CN113543818B (zh) 基于重组生物聚合物的组合物及其作为生物墨水的用途
WO2022145420A1 (ja) 新規な多層ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ
EP4268856A1 (en) Multilayer structure using chemically crosslinked alginic acid
Tytgat et al. Photopolymerizable materials for cell encapsulation
Fu et al. Development of ZmT-PEG hydrogels through Michael addition reaction and protein self-assembly for 3D cell culture
KR20230123959A (ko) 화학 가교 알긴산을 사용한 이식용 디바이스
ITMI20131560A1 (it) Polimero fotoreticolabile con struttura a pettine

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20231115

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20231115

A871 Explanation of circumstances concerning accelerated examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871

Effective date: 20231115

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20240109

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240220

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20240227

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20240305

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7450793

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150