JP7370616B2 - 歯周病原因菌の検出方法 - Google Patents
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Description
歯周病の検査項目のうち、細菌感染や炎症を検査する方法として、プラーク染色液を使用して染色歯面を目視で判定する方法や、染色せずに歯周プローブや歯科用探針等の先端で歯面を擦過してプラーク付着の有無を判定するするプラーク付着状況検査、歯肉縁下プラークをペーパポイントで採取し、検査機関に依頼してDNA定量法等により細菌数を測定する歯周病原細菌検査、歯周病原細菌に対する血清中のIgG抗体価を測定する抗体検査法等がある。これらの方法は、時間と労力、費用がかかるだけでなく、特殊な施設や技術を必要とするため、簡便、迅速に複数人の患者を同時に検査することができず、また、患者への負担も大きい。
また、この酵素活性は還元剤により活性化されることも知られている(特許文献3~4、非特許文献1)。さらに、この酵素活性は室温にて10分で分析できることが報告されている。(特許文献4)
歯周病原因菌の重要な3菌種の存在をより短時間で簡便にトリプシン様酵素活性を分析、判定することができれば、歯周病のスクリーニングとして有用な方法である。
請求項2に記載の発明は、検体に含まれる歯周病原因菌を室温でかつ2分で検出する歯周病原因菌の検出方法であって、抗酸化作用を有する第1の化合物およびSH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する第2の化合物を、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩とともに吸湿性物質に含ませ、この吸湿性物質に検体を室温で接触させ、室温で2分放置することにより、その後の発色試薬による発色分析において歯周病原因菌を検出可能とし、前記第1の化合物は、25mMのL-アスコルビン酸、25mMのL-システイン塩酸塩または25mMのグルタチオンであり、前記第2の化合物は、25mMのDTT、25mMのチオグリコール酸、25mMのチオグリセロールまたは25mMのメルカプトエタノールである歯周病原因菌の検出方法である。
請求項3に記載の発明は、検体に含まれる歯周病原因菌を室温でかつ5分で検出する歯周病原因菌の検出方法であって、抗酸化作用を有する第1の化合物またはSH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する第2の化合物を、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩とともに吸湿性物質に含ませ、この吸湿性物質に検体を室温で接触させ、室温で5分放置することにより、その後の発色試薬による発色分析において歯周病原因菌を検出可能とし、前記第1の化合物は6.25mM~50mMのL-アスコルビン酸、6.25mM~100mMのL-システイン塩酸塩または6.25mM~100mMのグルタチオンであり、前記第2の化合物は6.25mM~100mMのDTT、12.5mM~100mMのチオグリコール酸、6.25mM~100mMのチオグリセロール、6.25mM~100mMのメルカプトエタノールまたは6.25mM~25mMのTCEPである歯周病原因菌の検出方法である。
請求項4に記載の発明は、検体に含まれる歯周病原因菌を室温でかつ5分で検出する歯周病原因菌の検出方法であって、抗酸化作用を有する第1の化合物またはSH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する第2の化合物が含まれた検体を、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩を含ませた吸湿性物質に加え、室温で5分放置することにより、その後の発色試薬による発色分析において歯周病原因菌を検出可能とし、前記第1の化合物は6.25mM~100mMのL-アスコルビン酸、6.25mM~100mMのL-システイン塩酸塩または6.25mM~100mMのグルタチオンであり、前記第2の化合物は6.25mM~100mMのチオグリセロールまたは6.25mM~100mMのメルカプトエタノールである歯周病原因菌の検出方法である。
請求項5に記載の発明は、検体に含まれる歯周病原因菌を室温でかつ5分で検出する歯周病原因菌の検出方法であって、抗酸化作用を有する第1の化合物およびSH基を保護、ジスルフィド結合を切断する作用を有する第2の化合物を、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩とともに吸湿性物質に含ませ、この吸湿性物質に検体を室温で接触させ、室温で5分放置することにより、その後の発色試薬による発色分析において歯周病原因菌を検出可能とし、前記第1の化合物は、25mMのL-アスコルビン酸、25mMのL-システイン塩酸塩または25mMのグルタチオンであり、前記第2の化合物は、25mMのDTT、25mMのチオグリコール酸、25mMのチオグリセロールまたは25mMのメルカプトエタノールである歯周病原因菌の検出方法である。
請求項6に記載の発明は、検体に含まれる歯周病原因菌を室温でかつ5分で検出する歯周病原因菌の検出方法であって、抗酸化作用を有する第1の化合物およびSH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する第2の化合物が含まれた検体を、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩を含ませた吸湿性物質に加え、室温で5分放置することにより、その後の発色試薬による発色分析において歯周病原因菌を検出可能とし、前記第1の化合物は、25mMのL-アスコルビン酸、25mMのL-システイン塩酸塩または25mMのグルタチオンであり、前記第2の化合物は、25mMのチオグリコール酸、25mMのチオグリセロールまたは25mMのメルカプトエタノールである歯周病原因菌の検出方法である。
第2の化合物は、SH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する化学物質であり、DTT(ジチオトレイトール)、チオグリコール酸、チオグリセロール、メルカプトエタノール、TCEP(トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩)の中から選ばれる。第2の化合物は1種類でも複数種類を組み合わせてもよい。
トリプシン様プロテアーゼ活性の分析の際に第1の化合物、第2の化合物のいずれか一方を存在させてもよく、第1の化合物、第2の化合物の両方を混在させてもよい。
発色試薬としては、種々の公知の試薬を用いることができる。例えば、4-ヒドロキシ-3-[(2,4-ジヒドロキシ-3-キノリル)アゾ]ベンゼンスルホン酸ナトリウム、4-ベンゾイルアミノ-2,5-ジエトキシベンゼンジアゾニウム、4-(ジメチルアミノ)シンナムアルデヒド等を用いることができる。
第1の化合物、第2の化合物の1mM~100mMの溶解液(分散液)を吸水性物質に10μL~500μLを染み込ませ、その後、自然乾燥、送風乾燥、減圧真空乾燥または凍結乾燥により乾燥させて用いることができる。
溶媒としては、例えばトリス塩酸緩衝液、トリスマレイン酸緩衝液、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、ホウ酸ナトリウム緩衝液、炭酸-重炭酸緩衝液、グッド緩衝液、または精製水等を使用することができる。さらにこれらの溶媒に適当な界面活性剤、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノラウラート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート、オクチルフェノールエトキシレート等を添加したものを使用することができる。
第1の化合物、第2の化合物の10mM~1000mMの溶解液を検体に、検体の体積の1/10容量を添加することができる。また、第1の化合物、第2の化合物を直接検体に添加する場合、添加量はおよそ1mM~100mMである。
抗酸化作用を有する化合物(第1の化合物)として、L-アスコルビン酸、L-システイン塩酸塩、グルタチオンをそれぞれ62.5mM、125mM、250mM、500mM、1000mM採取し、採取した第1の化合物を50mMトリスマレインン酸緩衝液pH8.5に溶解後、pHが8.5となるようにpH調整を行った。
SH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する化合物(第2の化合物)として、DTT、チオグリコール酸、チオグリセロール、メルカプトエタノール、TCEPを62.6mM、125mM、250mM、500mM、1000mM濃度に、50mMトリスマレイン酸緩衝液pH8.5に溶解後、pHが8.5となるようにpH調整を行った。
基質として、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩(シグマアルドリッチジャパン合同会社から入手)を50mMトリスマレイン酸緩衝液pH8.5に溶解した。基質濃度は0.11重量%である。
4-(ジメチルアミノ)シンナムアルデヒド(DMAC)(シグマアルドリッチジャパン合同会社から入手)を1mol/L塩酸に溶解した。DMACの濃度は0.1重量%である。
調製Porphyromonas gingivalis(P.g菌)JCM12257を、ブイヨン培地に接種し、37℃、24時間嫌気培養し、1.0×107cfu/mLの菌培養液を得た。
ブイヨン培地は、トリプチケースソイブロス3.0g、イーストエクストラクト0.5g、L-システイン塩酸塩0.05g、ヘミン溶液0.1mL、ビタミンK1溶液0.02mL、蒸留水100mLによって調製し、調製に121℃、15分間殺菌処理を行った。
ヘミン溶液はヘミン0.005g、リン酸水素カリウム0.0174gを蒸留水1mLに溶解したものである。ビタミンK1溶液は、ビタミンK1を5mg、エタノール1mLに溶解したものである。
菌数の測定方法は、嫌気培養後のブイヨン培養液を滅菌生理食塩水にて10倍段階希釈し、CDC嫌気性菌用ヒツジ血液寒天培地(ベクトンデッキンソン社から入手)に接種後、37℃、48時間嫌気培養し、培地上に発育した集落を肉眼にて計測することで菌数測定を行った。
(A)基質及び第1の化合物、第2の化合物の乾燥保持
調製した第1の化合物または第2の化合物と、基質とを1:9の割合で混合し、10mmのペーパディスク(アドバンテック社から入手)1枚あたり80μL染み込ませた。その後、ペーパディスクを25℃、一晩乾燥させた。
24時間培養後の菌培養液を50mMトリスマレイン酸緩衝液pH8.5にて10倍段階希釈し、1.0×106cfu/mL、1.0×105cfu/mL、1.0×104cfu/mL、1.0×103cfu/mLの菌液を調製した。
各濃度の第1の化合物または第2の化合物と、基質とを染み込ませたペーパディスクに調製後のP.g菌液を80μL染み込ませたものを2つ用意し、一方を室温で、他方を50℃にてそれぞれ2分、5分、8分、10分、15分、20分間静置した。前者を室温分析、後者を50℃分析と称する。その後、ペーパディスクに発色液を30μL滴下し、ペーパディスクの発色を肉眼にて観察、判定を行った。
第1の化合物、第2の化合物を含まない場合のP.gの検出感度を図1に示す。図1に示すように第1の化合物、第2の化合物が存在しない室温分析では、20分後も1.0×106cfu/mLしか検出できていないが、50℃分析では、5分で1.0×104cfu/mLまで検出でき、50℃分析は室温と比較すると短時間に100倍の検出感度であることがいえる。
図2から図6は第1の化合物であるL-アスコルビン酸が存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図7から図11は第1の化合物であるL-システイン塩酸塩が存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図12から図16は第1の化合物であるグルタチオンが存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図17から図21は第2の化合物であるDTTが存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図22から図26は第2の化合物であるチオグリコール酸が存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図27から図31は第2の化合物であるチオグリセロールが存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図32から図36は第2の化合物であるメルカプトエタノールが存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図37から図41は第2の化合物であるTCEPが存在した場合の検出時間と検出感度を示す。第1の化合物、第2の化合物を存在させると50℃分析で得られる感度が室温分析でも同等に10分未満の分析時間で得られることが判明した。すなわち、第1の化合物、第2の化合物が存在しない場合、室温分析と50℃分析では100倍の感度差が認められ、20分でも最小菌濃度(P.g 1×104cfu/mL)を検出できないが、第1の化合物、第2の化合物を存在させることで化合物の種類により最小反応時間に違いはあるものの、どの化合物も室温分析にて50℃分析と同等の10分未満に最小菌濃度を検出できることが判明した。第1の化合物、第2の化合物を各濃度で存在させることで得られる最小菌濃度の検出が可能な最小分析時間を室温分析と50℃分析とで比較し表1に示す。表1に示すように、化合物の種類や濃度により最小分析時間は異なるが、第1の化合物、第2の化合物の効果は広い至適濃度を有し、室温で10分未満に最小菌濃度を検出できることが確認できた。さらに、化合物の種類および濃度によっては室温2分で最小菌濃度を検出できる驚くべき結果が得られた。
また、酵素反応は基質濃度が十分量ある場合、検出物質の濃度により反応速度が変わり、検出物質の濃度が高いほど短時間に反応が定常状態に達し、逆に検出物質の濃度が低いと、反応が定常状態に達するまでの時間を要する。しかし図113に示すように、第1の化合物および第2の化合物が存在すると、菌濃度が低い場合も、高い場合と同様の時間で定常状態に達することが確認された。図の縦軸は本発明の分析における発色の強さ(数字が高くなるほど発色が強いことを示す)、横軸に反応時間を示している。第1の化合物および第2の化合物が存在しない場合、室温分析では1×106cfu/mLのみ反応が認められたが、20分後も定常状態には至っていない。しかし、第1の化合物および第2の化合物が存在すると、室温分析においても1×104cfu/mLのP.g菌濃度で反応が認められ、どの菌濃度でもほぼ同等の反応時間で定常状態になっていることが確認された。さらに50℃分析においても第1の化合物および第2の化合物が存在した場合は存在しない場合よりも早期に定常状態に達することも確認された。すなわち、第1の化合物および第2の化合物の存在は室温分析においてどの菌濃度でも同等の時間で定常状態に達することが判明した。
(A)基質乾燥保持
調製した基質を50mMトリスマレイン酸緩衝液pH8.5に体積割合で9:1となるように混合し、10mmのペーパディスク(アドバンテック社から入手)1枚あたり80μL染み込ませた。その後、ペーパディスクを25℃、一晩乾燥させた。
調製した第1の化合物または第2の化合物を50mMトリスマレイン酸緩衝液pH8.5にて9倍希釈して化合物の希釈液を調製する。
24時間培養後の菌培養液を化合物の希釈液を用いて10倍段階希釈し、1.0×106cfu/mL、1.0×105cfu/mL、1.0×104cfu/mL、1.0×103cfu/mLの菌液を調製した。
基質を染み込ませたペーパディスクに調製後のP.g菌液を80μL染み込ませたものを2つ用意し、一方を室温で、他方を50℃にてそれぞれ2分、5分、8分、10分、15分、20分間静置した。前者を室温分析、後者を50℃分析と称する。その後、ペーパディスクに発色液を30μL滴下し、ペーパディスクの発色を肉眼にて観察、判定を行った。
第1の化合物、第2の化合物を含まない場合のP.gの検出感度を図42に示す。図42に示すように第1の化合物、第2の化合物が存在しない室温分析では、20分後も1.0×106cfu/mLしか検出できていないが、50℃分析では、5分で1.0×104cfu/mLまで検出でき、50℃分析は室温と比較すると短時間に100倍の検出感度であることがいえる。
図43から図47は第1の化合物であるL-アスコルビン酸が存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図48から図52は第1の化合物であるL-システイン塩酸塩が存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図53から図57は第1の化合物であるグルタチオンが存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図58から図62は第2の化合物であるDTTが存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図63から図67は第2の化合物であるチオグリコール酸が存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図68から図72は第2の化合物であるチオグリセロールが存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図73から図77は第2の化合物であるメルカプトエタノールが存在した場合の検出時間と検出感度を示す。図78から図82は第2の化合物であるTCEPが存在した場合の検出時間と検出感度を示す。
実施例1に示した乾燥保持法と同様に、第1の化合物、第2の化合物を存在させると50℃分析で得られる感度が室温でも同等に10分未満の反応時間で得られることが判明した。すなわち、第1の化合物、第2の化合物が存在しない場合、室温分析と50℃分析では100倍の感度差が認められ、20分でも最小菌濃度(P.g 1×104cfu/mL)を検出できないが、第1の化合物、第2の化合物を存在させることで化合物の種類により最小分析時間に違いはあるものの、どの化合物も室温分析にて50℃分析と同等の10分未満に最小菌濃度を検出できることが判明した。第1の化合物、第2の化合物を各濃度で存在させることで得られる最小菌濃度の検出が可能な最小分析時間を室温分析と50℃分析とで比較し表2に示す。表2に示すように、化合物の種類や濃度により最小分析時間は異なるが、第1の化合物、第2の化合物の効果は広い至適濃度を有し、室温で10分未満に最小菌濃度を検出できることが確認できた。ただし、チオグリコール酸とTCEPは実施例1における乾燥保持法では最小菌濃度を10分未満で検出可能であったが、本溶液法では検出することはできなかった。これは、菌培養液に直接、第2の化合物を添加した影響と思われる。
(A)第1の化合物と第2の化合物の混合調製
第1の化合物と第2の化合物を表3に示す組合せで混合した。混合濃度は第1の化合物および第2の化合物それぞれ500mMを50mMトリスマレイン酸緩衝液pH8.5に溶解後、第1の化合物と第2の化合物を等量混合し、それぞれが250mMになるように調製した。
第1の化合物と第2の化合物を混合した溶液と調製した基質とを1:9の割合で混合し、10mmのペーパーディスクに1枚あたり80μL染み込ませた。その後、ペーパーディスクを25℃、一晩乾燥させた。(混合した第1の化合物および第2の化合物はそれぞれ終濃度25mM)
24時間培養後の菌培養液を50mMトリスマレイン酸緩衝液pH8.5にて10倍段階希釈し、1.0×106cfu/mL、1.0×105cfu/mL、1.0×104cfu/mL、1.0×103cfu/mLの菌液を調製した。
第1の化合物と第2の化合物の混合物と基質とを染み込ませたペーパディスクに調製後のP.g菌液を80μL染み込ませたものを2つ用意し、一方を室温で、他方を50℃にてそれぞれ2分、5分、8分、10分、15分、20分間静置した。前者を室温分析、後者を50℃分析と称する。その後、ペーパディスクに発色液を30μL滴下し、ペーパディスクの発色を肉眼にて観察、判定を行った。
第1の化合物と第2の化合物を混合添加したP.gの検出感度を図83から図97に示す。
また、第1の化合物と第2の化合物を混合添加した組合せにおける、最小菌濃度が検出できた最小分析時間を表4に示す。これらの図と表に示すようにグルタチオンとTCEPの組合せ以外は、第1の化合物または第2の化合物を単独で添加した場合と同様に、最小菌濃度を10分未満に検出することができた。このことから、第1の化合物と第2の化合物を混合して使用しても、単独使用の場合と同様に室温分析と50℃分析で同等の感度で10分未満に検出できる結果が得られた。
(A)第1の化合物と第2の化合物の混合調製
第1の化合物と第2の化合物を表3に示す組合せで混合した。混合濃度は第1の化合物および第2の化合物それぞれ55.5mMを50mMトリスマレイン酸緩衝液pH8.5に溶解後、第1の化合物と第2の化合物を等量混合し、それぞれが27.75mMになるように調製した。
調製した基質は50mMトリスマレイン酸緩衝液pH8.5を体積割合で9:1となるように混合し、10mmのペーパディスク(アドバンテック社から入手)1枚あたり80μL染み込ませた。その後、ペーパディスクを25℃、一晩乾燥させた。
24時間培養後の菌培養液を、調製した第1の化合物と第2の化合物の混合液で10倍段階希釈し、1.0×106cfu/mL、1.0×105cfu/mL、1.0×104cfu/mL、1.0×103cfu/mLの菌液を調製した。
基質を染み込ませたペーパディスクに調製後のP.g菌液を80μL染み込ませたものを2つ用意し、一方を室温で、他方を50℃にてそれぞれ2分、5分、8分、10分、15分、20分間静置した。前者を室温分析、後者を50℃分析と称する。その後、ペーパディスクに発色液を30μL滴下し、ペーパディスクの発色を肉眼にて観察、判定を行った。
第1の化合物と第2の化合物を混合添加したP.gの検出感度を図98から図112に示す。また、第1の化合物と第2の化合物を混合添加した組合せにおける、最小菌濃度が検出できた最小分析時間を表5に示す。これらの図と表に示すようにL-アスコルビン酸とDTT,L-アスコルビン酸とTCEP,L-システイン塩酸塩とDTT,L-システイン塩酸塩とTCEP,グルタチオンとDTTおよびグルタチオンとTCEPの組合せ以外は、第1の化合物または第2の化合物を単独で添加した場合と同様に、室温分析と50℃分析において同等の感度となること、10分未満に最小菌濃度を検出できることが確認できた。
Claims (6)
- 検体に含まれる歯周病原因菌を室温でかつ2分で検出する歯周病原因菌の検出方法であって、
抗酸化作用を有する第1の化合物またはSH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する第2の化合物を、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩とともに吸湿性物質に含ませ、この吸湿性物質に検体を室温で接触させ、室温で2分放置することにより、その後の発色試薬による発色分析において歯周病原因菌を検出可能とし、
前記第1の化合物は25mM~100mMのグルタチオンであり、
前記第2の化合物は25mM~50mMのDTTまたは25mM~50mMのチオグリコール酸である歯周病原因菌の検出方法。 - 検体に含まれる歯周病原因菌を室温でかつ2分で検出する歯周病原因菌の検出方法であって、
抗酸化作用を有する第1の化合物およびSH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する第2の化合物を、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩とともに吸湿性物質に含ませ、この吸湿性物質に検体を室温で接触させ、室温で2分放置することにより、その後の発色試薬による発色分析において歯周病原因菌を検出可能とし、
前記第1の化合物は、25mMのL-アスコルビン酸、25mMのL-システイン塩酸塩または25mMのグルタチオンであり、
前記第2の化合物は、25mMのDTT、25mMのチオグリコール酸、25mMのチオグリセロールまたは25mMのメルカプトエタノールである歯周病原因菌の検出方法。 - 検体に含まれる歯周病原因菌を室温でかつ5分で検出する歯周病原因菌の検出方法であって、
抗酸化作用を有する第1の化合物またはSH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する第2の化合物を、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩とともに吸湿性物質に含ませ、この吸湿性物質に検体を室温で接触させ、室温で5分放置することにより、その後の発色試薬による発色分析において歯周病原因菌を検出可能とし、
前記第1の化合物は6.25mM~50mMのL-アスコルビン酸、6.25mM~100mMのL-システイン塩酸塩または6.25mM~100mMのグルタチオンであり、
前記第2の化合物は6.25mM~100mMのDTT、12.5mM~100mMのチオグリコール酸、6.25mM~100mMのチオグリセロール、6.25mM~100mMのメルカプトエタノールまたは6.25mM~25mMのTCEPである歯周病原因菌の検出方法。 - 検体に含まれる歯周病原因菌を室温でかつ5分で検出する歯周病原因菌の検出方法であって、
抗酸化作用を有する第1の化合物またはSH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する第2の化合物が含まれた検体を、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩を含ませた吸湿性物質に加え、室温で5分放置することにより、その後の発色試薬による発色分析において歯周病原因菌を検出可能とし、
前記第1の化合物は6.25mM~100mMのL-アスコルビン酸、6.25mM~100mMのL-システイン塩酸塩または6.25mM~100mMのグルタチオンであり、
前記第2の化合物は6.25mM~100mMのチオグリセロールまたは6.25mM~100mMのメルカプトエタノールである歯周病原因菌の検出方法。 - 検体に含まれる歯周病原因菌を室温でかつ5分で検出する歯周病原因菌の検出方法であって、
抗酸化作用を有する第1の化合物およびSH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する第2の化合物を、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩とともに吸湿性物質に含ませ、この吸湿性物質に検体を室温で接触させ、室温で5分放置することにより、その後の発色試薬による発色分析において歯周病原因菌を検出可能とし、
前記第1の化合物は、25mMのL-アスコルビン酸、25mMのL-システイン塩酸塩または25mMのグルタチオンであり、
前記第2の化合物は、25mMのDTT、25mMのチオグリコール酸、25mMのチオグリセロールまたは25mMのメルカプトエタノールである歯周病原因菌の検出方法。 - 検体に含まれる歯周病原因菌を室温でかつ5分で検出する歯周病原因菌の検出方法であって、
抗酸化作用を有する第1の化合物およびSH基を保護し、ジスルフィド結合を切断する作用を有する第2の化合物が含まれた検体を、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-2-ナフチルアミド塩酸塩を含ませた吸湿性物質に加え、室温で5分放置することにより、その後の発色試薬による発色分析において歯周病原因菌を検出可能とし、
前記第1の化合物は、25mMのL-アスコルビン酸、25mMのL-システイン塩酸塩または25mMのグルタチオンであり、
前記第2の化合物は、25mMのチオグリコール酸、25mMのチオグリセロールまたは25mMのメルカプトエタノールである歯周病原因菌の検出方法。
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