JP7297902B2 - 分析方法及びキット - Google Patents
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Description
(分析方法)
第1実施形態に従う分析方法は、図1の(a)に示すように、対象由来の試料中のhsa-miR-1301-3pを定量すること(定量工程(S1))を含む、対象におけるがんの罹患の有無を判定する方法である。
UUGCAGCUGCCUGGGAGUGACUUC(配列番号1)
を有するmiRNAである。以下、hsa-miR-1301-3pを「標的miRNA」とも称する。
第1実施形態によれば、hsa-miR-1301-3pを含む、がん検出用マーカーが提供される。
第1実施形態によれば、がん検出用キットが提供される。
(分析方法)
第2実施形態の分析方法は、図2の(a)に示すように、対象由来の試料中のhsa-miR-1301-3pを定量すること(定量工程(S11))を含む、対象における乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、前立腺がん、肉腫及び子宮体がんから選択される少なくとも1つの罹患の有無を判定する方法である。
UAUUGCACUUGUCCCGGCCUGU(配列番号2)
を有するmiRNAである。標的miRNAとhsa-miR-92a-3pとの両方の定量値が高いとき、対象が前立腺がんに罹患していると判定することができる。
UGGAGUGUGACAAUGGUGUUUG(配列番号3)
を有するmiRNAである。標的miRNAとhsa-miR-122a-5pとの両方の定量値が高いとき、対象が膵臓がんに罹患していると判定することができる。
第3実施形態では、標的miRNAを定量する工程の好ましい一例について説明する。この例においては、標的miRNAを特異的に逆転写し、人工配列を付加して伸長し、伸長産物をLAMP法により増幅し、得られた増幅産物を検出する。以下では、標的miRNAの配列(配列番号1)を「第1の配列」とも称する。
(S1-1)標的miRNAの第1の配列とハイブリダイズする第1プライマー部及び第1LAMP認識配列を含む逆転写用(RT)プライマーの、第1プライマー部を第1の配列とハイブリダイズさせ、第1の配列を逆転写し、標的miRNAのcDNA(第1aの配列)を含む逆転写産物を得る逆転写工程、
(S1-2)逆転写産物と標的miRNAとを解離させる解離工程、
(S1-3)第1aの配列とハイブリダイズする第2プライマー部、及び第2LAMP認識配列を含む伸長用(EL)プライマーの第2プライマー部を逆転写産物の第1aの配列とハイブリダイズさせ、ELプライマー及び逆転写産物を、互いを鋳型として伸長させて、第1aの配列5の相補配列(即ち、第1の配列に対応するDNA配列)を含む伸長産物を得る伸長工程、
(S1-4)伸長産物をLAMP反応により増幅し、増幅産物を得る増幅工程、及び
(S1-5)得られた増幅産物を検出する検出工程。
(1)第1LAMP認識配列4bはB2配列を含み、
第2LAMP認識配列8bはB1c配列、F1配列及びF2配列を含む。
(2)第1LAMP認識配列4bはLBc配列及びB2配列を含み、
第2LAMP認識配列8bはB1c配列、F1配列及びF2配列を含む。
(3)第1LAMP認識配列4bはダミー配列及びB2配列を含み、
第2LAMP認識配列8bはB1c配列、F1配列及びF2配列を含む。
(4)第1LAMP認識配列4bはB1配列及びB2配列を含み、
第2LAMP認識配列8bはF1配列、LFc配列及びF2配列を含む。
(5)第1LAMP認識配列4bはB2配列を含み、
第2LAMP認識配列8bはF1配列、LFc配列及びF2配列を含む。
(6)第1LAMP認識配列4bはLBc配列及びB2配列を含み、
第2LAMP認識配列8bはF1配列及びF2配列を含む。
(7)第1LAMP認識配列4bはB1配列及びB2配列を含み、
第2LAMP認識配列8bはLFc配列及びF2配列を含む。
(1)F2配列及びF1c配列を含むFIPプライマー、
B2配列及びB1c配列を含むBIPプライマー、及び
第1aの配列の相補配列9を含むLBプライマー。
(2)F2配列及びF1c配列を含むFIPプライマー
B2配列及びB1c配列を含むBIPプライマー、及び
LB配列を含むLBプライマー。
(3)F2配列及びF1c配列を含むFIPプライマー
B2配列及びB1c配列を含むBIPプライマー、及び
第1aの配列の相補配列9を含むLBプライマー。
(4)B2配列及びB1c配列を含むFIPプライマー
F2配列及びF1c配列を含むBIPプライマー、及び
LF配列を含むLFプライマー。
(5)F2配列及びF1c配列を含むFIPプライマー
B2配列及び第1aの配列の相補配列9を含むBIPプライマー、及び
LF配列を含むLFプライマー。
(6)F2配列及びF1c配列を含むFIPプライマー
B2配列及び第1aの配列の相補配列9を含むBIPプライマー、及び
LB配列を含むLBプライマー。
(7)F2配列及び第1aの配列5を含むFIPプライマー
B2配列及びB1c配列を含むBIPプライマー、及び
LF配列を含むLFプライマー。
UCACCGGGUGUAAAUCAGCUUG(配列番号49)
を有するmiRNAである。
以下に、実施形態の分析方法又はキットを用いて行った実験について記載する。
健常者29検体、乳がん患者15検体、大腸がん患者6検体、胃がん患者5検体、肺がん患者3検体、卵巣がん患者5検体、膵臓がん患者8検体、胆管がん患者5検体、食道がん患者5検体、肝臓がん患者5検体、脳腫瘍患者5検体、膀胱がん患者4検体、前立腺がん患者5検体、肉腫患者5検体、子宮体がん患者4検体、子宮肉腫患者5検体から得られた合計114検体の血清を用意した。
全ての血清からRNAを抽出した。抽出は、NucleoSpin(登録商標)miRNA Plasma(商品名、タカラバイオ製)を用いて行った。cel-miR-39-3pの合成RNAをspike-inし抽出を行った。
上記血清サンプルの、cel-miR-39-3p(配列番号49)を、定量した。cel-miR-39-3pの長鎖化及び増幅はhsa-miR-1301-3pと同様の方法で行った。また、cel-miR-39-3pを103,104,105,106コピー/μLで反応させて検量線を作成した。検量線と比較することによりcel-miR-39-3pの定量値を得た。
次にhsa-miR-1301-3pの定量値をcel-miR-39-3pの定量値で除して補正値を得た。
(hsa-miR-1301-3pの定量)
例1と同様の検体から得られた血清を用意した。例1と同じ方法で検体からRNAの抽出を行った。抽出サンプル2μLを、反応体積20μL、16℃10分、42℃5分、85℃5分の条件で逆転写した。逆転写反応液の組成は、67unit MultiScribe(登録商標)Reverse Transcriptase(*)、1×RT Buffer(*)、0.1mMのdNTPs(*)、4UのRNaseOUT(商品名、サーモフィッシャー・サイエンティフィック製)、10nMのRTプライマーとした。「*」を付したものは全てHigh-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit(商品名、サーモフィッシャー・サイエンティフィック製)に含まれているものを用いた。
上記血清サンプルの、cel-miR-39-3p(配列番号49)を定量した。cel-miR-39-3p抽出、長鎖化及び増幅はhsa-miR-1301-3pと同様の方法で行った。cel-miR-39-3pの逆転写は、20nM RT プライマー、長鎖化は40nM EL プライマーを用いた。増幅は、1.6μMのFIPプライマー、1.6μMのBIPプライマー、及び0.8μMのLBプライマーを用いた。
次にhsa-miR-1301-3pの定量値をcel-miR-39-3pの定量値で除して補正値を得た。
例2で使用したFIPプライマー及びBIPプライマー(各48μM)、LBプライマー(24μM)を含むプライマー溶液を調製した。シリコーン製流路パッキン(流路幅×高さ:1mm×1mm)にプライマー溶液100nLを、微量分注機を用いてスポットした。電極をパターニングしたDNAチップ基板(ガラス(0.8mm)/チタン(500nm)/金(2000nm))と該流路パッキンとをカセットに組み込み、チップを作製した。
以下に、本願発明の実施態様を付記する。
[1]対象由来の試料中のhsa-miR-1301-3pを定量することを含む、前記対象におけるがんの罹患の有無を判定する分析方法。
[2]対象由来の試料中のhsa-miR-1301-3pを定量することを含む、前記対象におけるがんの罹患の有無の判定を補助する分析方法。
[3]前記対象におけるhsa-miR-1301-3pの存在量が、対照におけるhsa-miR-1301-3pの存在量よりも多い場合、前記対象ががんに罹患していると判定する判定工程を更に含む[1]又は[2]に記載の方法。
[4]前記がんの罹患の有無の判定は、前記対象におけるがんの予後判定、又は前記対象におけるがんの再発の有無の判定を含む、[1]~[3]の何れか1項に記載の方法。
[5]前記がんは、乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、前立腺がん、肉腫、子宮体がん及び子宮肉腫から選択される少なくとも1つを含む、[1]~[4]の何れか1項に記載の方法。
[6]前記定量はLAMP法を用いて行われ、
前記がんは、乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、前立腺がん、肉腫及び子宮体がんから選択される少なくとも1つである、[1]~[4]の何れか1項に記載の方法。
[7]前記判定において、乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、前立腺がん、肉腫又は子宮体がんから選択される少なくとも1つの罹患の有無は、他のがんと識別されて判定される、[6]に記載の方法。
[8]前記他のがんは、子宮肉腫を含む、[7]に記載の方法。
[9]前記がんは前立腺がんであり、
前記試料中のhsa-miR-92a-3pを定量する工程を更に含み、
前記判定は、hsa-miR-1301-3pの定量結果とhsa-miR-92a-3pの定量結果とを用いて行われる、[6]~[8]の何れか1項に記載の方法。
[10]前記がんは膵臓がんであり、
前記試料中のhsa-miR-122-5pを定量する工程を更に含み、
前記判定は、hsa-miR-1301-3pの定量結果とhsa-miR-122-5pの定量結果とを用いて行われる、[6]~[8]の何れか1項に記載の方法。
[11]前記対象内に存在しないmiRNAを前記試料に添加して定量することを更に含み、前記hsa-miR-1301-3pの定量結果は、前記対象内に存在しないmiRNAの定量結果と比較することにより補正される、[1]~[10]の何れか1項に記載の方法。
[12]前記試料は、血清である、[1]~[11]の何れか1項に記載の方法。
[13]前記定量は、hsa-miR-1301-3pを逆転写するための逆転写用プライマー、hsa-miR-1301-3pを伸長するための伸長用プライマー、hsa-miR-1301-3pを増幅するための増幅用プライマーセット、及びhsa-miR-1301-3pを検出するための核酸プローブからなる群から選択される少なくとも1種の核酸を用いて行われる、[1]~[12]の何れか1項に記載の方法。
[14]前記逆転写用プライマーが配列番号4を含み、前記伸長用プライマーが配列番号5を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号6のFIPプライマー、配列番号7のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号9を含み、前記伸長用プライマーが配列番号10を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号11のFIPプライマー、配列番号12のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号13を含み、前記伸長用プライマーが配列番号14を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号15のFIPプライマー、配列番号16のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号17を含み、前記伸長用プライマーが配列番号18を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号19のFIPプライマー、配列番号20のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、又は
前記逆転写用プライマーが配列番号45を含み、前記伸長用プライマーが配列番号46を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号47のFIPプライマー、配列番号48のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含み、
前記各プライマーの塩基配列は、対応する配列番号で表される塩基配列の1又は2の塩基の欠失、置換、付加又は挿入があるものも含む、
[13]に記載の方法。
[15]hsa-miR-1301-3pを逆転写するための逆転写用プライマー、hsa-miR-1301-3pを伸長するための伸長用プライマー、hsa-miR-1301-3pを増幅するための増幅用プライマーセット、及びhsa-miR-1301-3pを検出するための核酸プローブからなる群から選択される少なくとも1種の核酸を含む、がんを検出するためのキット。
[16]前記逆転写用プライマーが配列番号4を含み、前記伸長用プライマーが配列番号5を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号6のFIPプライマー、配列番号7のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号9を含み、前記伸長用プライマーが配列番号10を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号11のFIPプライマー、配列番号12のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号13を含み、前記伸長用プライマーが配列番号14を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号15のFIPプライマー、配列番号16のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号17を含み、前記伸長用プライマーが配列番号18を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号19のFIPプライマー、配列番号20のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、又は
前記逆転写用プライマーが配列番号45を含み、前記伸長用プライマーが配列番号46を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号47のFIPプライマー、配列番号48のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含み、
前記各プライマーの塩基配列は、対応する配列番号で表される塩基配列の1又は2の塩基の欠失、置換、付加又は挿入があるものも含む、
[15]に記載のキット。
[17]前記がんは、乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、前立腺がん、肉腫、子宮体がん及び子宮肉腫から選択される少なくとも1つを含む、[15]又は[16]に記載のキット。
[18]前記がんは、乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、前立腺がん、肉腫及び子宮体がんから選択される少なくとも1つである、[17]に記載のキット。
[19]hsa-miR-92a-3p用の逆転写用プライマー、伸長用プライマー、増幅用プライマーセット及び核酸プローブからなる群から選択される少なくとも1種の核酸を更に含む、[18]に記載のキット。
[20]hsa-miR-122-5p用の逆転写用プライマー、伸長用プライマー、増幅用プライマーセット及び核酸プローブからなる群から選択される少なくとも1種の核酸を更に含む、[18]に記載のキット。
[21]cel-miR-39-3p、及び
cel-miR-39-3p用の逆転写用プライマー、伸長用プライマー、増幅用プライマーセット及び核酸プローブからなる群から選択される少なくとも1種の核酸を更に含む、[15]~[20]の何れか1項に記載のキット。
[22]がんを検出するためのプライマーセットであって、前記プライマーセットは、
前記逆転写用プライマーが配列番号4を含み、前記伸長用プライマーが配列番号5を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号6のFIPプライマー、配列番号7のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号9を含み、前記伸長用プライマーが配列番号10を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号11のFIPプライマー、配列番号12のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号13を含み、前記伸長用プライマーが配列番号14を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号15のFIPプライマー、配列番号16のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号17を含み、前記伸長用プライマーが配列番号18を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号19のFIPプライマー、配列番号20のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、又は
前記逆転写用プライマーが配列番号45を含み、前記伸長用プライマーが配列番号46を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号47のFIPプライマー、配列番号48のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含み、
前記各プライマーの塩基配列は、対応する配列番号で表される塩基配列の1又は2の塩基の欠失、置換、付加又は挿入があるものも含む、
プライマーセット。
[23]前記がんは、乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、前立腺がん、肉腫及び子宮体がんから選択される少なくとも1つを含む、[22]に記載のプライマーセット。
[24]がんを検出するための検出用デバイスであって、hsa-miR-1301-3pを増幅し、増幅産物を検出する増幅検出部を備え、
前記増幅検出部は、基板と、前記基板の1つの面上に備えられた1つ以上の検出領域とを備える、
検出用デバイス。
[25]前記がんは、乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、前立腺がん、肉腫、子宮体がん及び子宮肉腫から選択される少なくとも1つを含む、[24]に記載の検出用デバイス。
[26]前記検出領域の付近に固定された、前記増幅産物とハイブリダイズする核酸プローブを備える、[24]又は[25]に記載の検出用デバイス。
[27]前記検出領域の付近に遊離可能に固定された、hsa-miR-1301-3pを逆転写するための逆転写用プライマー、hsa-miR-1301-3pを伸長するための伸長用プライマー及び/又はhsa-miR-1301-3pを増幅するための増幅用プライマーセットを更に備える、
[24~[26の何れか1項に記載の検出用デバイス。
[28]前記逆転写用プライマーが配列番号4を含み、前記伸長用プライマーが配列番号5を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号6のFIPプライマー、配列番号7のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号9を含み、前記伸長用プライマーが配列番号10を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号11のFIPプライマー、配列番号12のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号13を含み、前記伸長用プライマーが配列番号14を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号15のFIPプライマー、配列番号16のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号17を含み、前記伸長用プライマーが配列番号18を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号19のFIPプライマー、配列番号20のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、又は
前記逆転写用プライマーが配列番号45を含み、前記伸長用プライマーが配列番号46を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号47のFIPプライマー、配列番号48のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含み、
前記各プライマーの塩基配列は、対応する配列番号で表される塩基配列の1又は2の塩基の欠失、置換、付加又は挿入があるものも含む、
[27]に記載の検出用デバイス。
[29]前記がんは、乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、前立腺がん、肉腫及び子宮体がんから選択される少なくとも1つである、[28]に記載の検出用デバイス。
[30]前記検出の結果からhsa-miR-1301-3pの定量値を算出する算出部をさらに備える[24]~[29]のいずれか1項に記載のデバイス。
Claims (16)
- (S1)対象由来の試料中のhsa-miR-1301-3pを定量すること;
(S2)前記(S1)で得られた定量値と、対照由来の試料中のhsa-miR-1301-3pの定量値とを比較し、前記(S1)で得られた定量値の方が大きい場合に、前記対象が標的がん群に含まれるいずれのがんにも罹患していない可能性よりも、前記対象が当該標的がん群に含まれる少なくとも一種のがんに罹患している可能性の方が高いと、乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、肉腫、子宮体がん、膵臓がん及び子宮肉腫からなる当該標的がん群に含まれるすべてのがんを分析対象として罹患可能性を判定すること;
を含み、
前記対照は、標的がんの何れにも罹患していない個体又は前記標的がん以外に分類されるがんに罹患した個体である、前記対象における前記標的がん群の罹患の有無の判定を補助する分析方法。 - 前記がんの罹患の可能性の判定は、前記対象におけるがんの予後の可能性の判定、又は前記対象におけるがんの再発の可能性の判定を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記対象内に存在しないmiRNAを前記試料に添加して定量することを更に含み、前記hsa-miR-1301-3pの定量結果は、前記対象内に存在しないmiRNAの定量結果と比較することにより補正される、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記試料は、血清である、請求項1~3の何れか1項に記載の方法。
- 前記定量は、hsa-miR-1301-3pを逆転写するための逆転写用プライマー、hsa-miR-1301-3pを伸長するための伸長用プライマー、hsa-miR-1301-3pを増幅するための増幅用プライマーセット、及びhsa-miR-1301-3pを検出するための核酸プローブからなる群から選択される少なくとも1種の核酸を用いて行われる、請求項1~4の何れか1項に記載の方法。
- 前記逆転写用プライマーが配列番号4を含み、前記伸長用プライマーが配列番号5を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号6のFIPプライマー、配列番号7のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号9を含み、前記伸長用プライマーが配列番号10を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号11のFIPプライマー、配列番号12のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号13を含み、前記伸長用プライマーが配列番号14を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号15のFIPプライマー、配列番号16のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号17を含み、前記伸長用プライマーが配列番号18を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号19のFIPプライマー、配列番号20のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、又は
前記逆転写用プライマーが配列番号45を含み、前記伸長用プライマーが配列番号46を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号47のFIPプライマー、配列番号48のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含み、
前記各プライマーの塩基配列は、対応する配列番号で表される塩基配列の1又は2の塩基の欠失、置換、付加又は挿入があるものも含む、
請求項5に記載の方法。 - 前記対照からの当該定量値が、健常な状態の前記対象に由来する試料中のhsa-miR-1301-3pの定量値である請求項1~6の何れか1項に記載の方法。
- 前記分析方法が、健康診断のために定期的に行われる請求項1~7の何れか1項に記載の方法。
- hsa-miR-1301-3pを逆転写するための逆転写用プライマー、hsa-miR-1301-3pを伸長するための伸長用プライマー、hsa-miR-1301-3pを増幅するための増幅用プライマーセット、及びhsa-miR-1301-3pを検出するための核酸プローブからなる群から選択される少なくとも1種の核酸を含み、
対象が標的がん群に含まれるいずれのがんにも罹患していない可能性よりも、前記対象が当該標的がん群に含まれる少なくとも1種のがんに罹患している可能性の方が高いと、乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、肉腫、子宮体がん、膵臓がん及び子宮肉腫からなる当該標的がん群に含まれるすべてのがんを検出対象として罹患可能性を判定するためのキット。 - 前記逆転写用プライマーが配列番号4を含み、前記伸長用プライマーが配列番号5を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号6のFIPプライマー、配列番号7のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号9を含み、前記伸長用プライマーが配列番号10を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号11のFIPプライマー、配列番号12のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号13を含み、前記伸長用プライマーが配列番号14を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号15のFIPプライマー、配列番号16のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、
前記逆転写用プライマーが配列番号17を含み、前記伸長用プライマーが配列番号18を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号19のFIPプライマー、配列番号20のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、又は
前記逆転写用プライマーが配列番号45を含み、前記伸長用プライマーが配列番号46を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号47のFIPプライマー、配列番号48のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含み、
前記各プライマーの塩基配列は、対応する配列番号で表される塩基配列の1又は2の塩基の欠失、置換、付加又は挿入があるものも含む、
請求項9に記載のキット。 - cel-miR-39-3p、及び
cel-miR-39-3p用の逆転写用プライマー、伸長用プライマー、増幅用プライマーセット及び核酸プローブからなる群から選択される少なくとも1種の核酸を更に含む、請求項9又は10に記載のキット。 - 標的がん群が、乳がん、大腸がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、胆管がん、食道がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、肉腫、子宮体がん、すい臓がん及び子宮肉腫からなり、対象が当該標的がん群に含まれるいずれのがんにも罹患していない可能性よりも、前記対象が当該標的がん群に含まれる少なくとも1種のがんに罹患している可能性の方が高いと、前記標的がん群に含まれるすべてのがんを分析対象として罹患可能性を判定するための検出用デバイスであって、hsa-miR-1301-3pを増幅し、増幅産物を検出する増幅検出部を備え、
前記増幅検出部は、基板と、前記基板の1つの面上に備えられた1つ以上の検出領域とを備える、
検出用デバイス。 - 前記検出領域の付近に固定された、前記増幅産物とハイブリダイズする核酸プローブを備える、請求項12に記載の検出用デバイス。
- 前記検出領域の付近に遊離可能に固定された、hsa-miR-1301-3pを逆転写するための逆転写用プライマー、hsa-miR-1301-3pを伸長するための伸長用プライマー及び/又はhsa-miR-1301-3pを増幅するための増幅用プライマーセットを更に備える、
請求項12又は13に記載の検出用デバイス。 - 前記逆転写用プライマーが配列番号4を含み、前記伸長用プライマーが配列番号5を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号6のFIPプライマー、配列番号7のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、A
前記逆転写用プライマーが配列番号9を含み、前記伸長用プライマーが配列番号10を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号11のFIPプライマー、配列番号12のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、B
前記逆転写用プライマーが配列番号13を含み、前記伸長用プライマーが配列番号14を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号15のFIPプライマー、配列番号16のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、C
前記逆転写用プライマーが配列番号17を含み、前記伸長用プライマーが配列番号18を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号19のFIPプライマー、配列番号20のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含むか、D、又は
前記逆転写用プライマーが配列番号45を含み、前記伸長用プライマーが配列番号46を含み、前記増幅用プライマーセットが配列番号47のFIPプライマー、配列番号48のBIPプライマー及び配列番号8のLBプライマーを含み、J
前記各プライマーの塩基配列は、対応する配列番号で表される塩基配列の1又は2の塩基の欠失、置換、付加又は挿入があるものも含む、
請求項14に記載の検出用デバイス。 - 前記検出の結果からhsa-miR-1301-3pの定量値を算出する算出部をさらに備える請求項12~15のいずれか1項に記載のデバイス。
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