JP7214751B2 - アネモシドｂ４の直腸粘膜投与製剤及びその製造方法 - Google Patents

アネモシドｂ４の直腸粘膜投与製剤及びその製造方法 Download PDF

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Description

本発明は、医薬及び薬物製剤の分野に属し、具体的には、新たなアネモシドＢ４（Ａｎｅｍｏｓｉｄｅ Ｂ４）の直腸粘膜投与製剤及びその製造方法に関するものである。
漢方薬の白頭翁（ハクトウオウ）は、キンポウゲ科オキナグサ属の植物である白頭翁（Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｂｇｅ．）Ｒｅｇｅｌ）の根を乾燥させたものであり、『神農本草経』に初めて掲載され、一般的に使用されている漢方薬である。その性味は苦寒で、清熱解毒、涼血止痢、燥湿殺虫などの効果があり、熱毒血痢、温瘧寒熱、鼻血、痔疾患の治療に用いられる。現代の薬理学研究により、白頭翁は更に多様な活性を有することが発見され、例えば、広域の抗菌活性、抗腫瘍、抗炎症及び体の免疫機能を強化する効果がある。
白頭翁は豊富なトリテルペノイドサポニン系成分を有する。アネモシドＢ４は、ルパン型の五環トリテルペノイドサポニンに属し、構造式は１に示すとおりである。
Figure 0007214751000001
アネモシドＢ４は、比較的強い活性を有し、例えば、公開番号ＣＮ１０５２１３４１０Ａ（公開日２０１６年１月６日）の中国発明特許出願には、アネモシドＢ４を免疫調節剤として、炎症因子の過剰発現により起こる急性腎障害、急性肝障害及び急性肺障害を含む急性炎症の治療薬に使用することが開示されている。また、公開番号ＣＮ１０５５３５００４Ａ（公開日２０１６年５月４日）の中国発明特許出願には、該化合物をＥＶ７１ウイルスの抑制剤として、手足口病の抗ウイルス薬の製造に使用することが開示されている。
アネモシドＢ４は５つのグリコシル基を有し、水溶性が良好である。該化合物を経口で（例えば、動物実験における強制経口）投与する場合は、有効量が大きいため、安全域が狭い。そのため、発明者は「アネモシドＢ４の注射用製剤」という発明特許を出願した（出願番号ＣＮ２０１７１０５５１７２６．８）。しかし、注射剤は溶血を起こすリスクがあるため、アネモシドＢ４の新たな非経口投与製剤を研究・開発することは、非常に意味のあることである。
非経口投与経路には、注射投与の他に、口腔粘膜投与、鼻粘膜投与、肺内投与、皮膚投与、直腸粘膜投与及び眼投与などが含まれる。そのうち、直腸粘膜は血液供給が豊富で、薬物吸収が速く、経口と比較して吸収に干渉する因子が少なく、薬物が胃腸管のｐＨ値の影響を受けることはない。薬物が粘膜を介して直接下直腸静脈や肛門静脈に入れば、肝臓の初回通過効果を回避することができる。
これまでのところ、アネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤に関する報道はない。
本発明は、従来技術の不足を解消するために、新たなアネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤を提供する。
上記の発明の目的を実現するために、本発明は以下の技術構想を採用する。
アネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤であって、アネモシドＢ４及び薬学的に許容可能な基質を含む。
アネモシドＢ４は、前記直腸粘膜投与製剤の唯一の活性成分であることが好ましい。
前記薬学的に許容可能な基質は、アクリル樹脂系、セルロース誘導体系、エチレンポリマー系、天然ゴム及び油脂性の坐剤基質から選択された１種又は複数種であることが好ましい。
前記薬学的に許容可能な基質は、カルボマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び混合脂肪酸グリセリドから選択される１種又は複数種であることがより好ましい。
前記直腸粘膜投与製剤は、直腸用ゲル剤及び直腸用坐剤から選択される１種又は２種であることが好ましい。
好ましい実施形態として、本発明はアネモシドＢ４の直腸用ゲル剤を提供し、ｐＨ＝６～７であり、有効量のアネモシドＢ４と、カルボマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースナトリウムから選択される１種又は複数種の薬学的に許容可能な基質と、保湿剤と、ｐＨ調整剤と、水とを含む。
本発明は、また、前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の製造方法を提供するものであり、前記製造方法は、
アネモシドＢ４を水に溶解させて濾過し、撹拌しながら、前記薬学的に許容可能な基質と保湿剤を加え、均一に分散させ、前記ｐＨ調整剤を加え、ｐＨを６～７に調整する操作を含む。
前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤において、前記薬学的に許容可能な基質はカルボマーであることが好ましく、カルボマー９４１及びカルボマー９８０から選択される１種又は２種であることがより好ましく、カルボマー９４１であることが最も好ましい。
さらに、前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の総質量を基準としたカルボマー９４１の質量百分率は０．２５％～１％であることが好ましく、０．２５％～０．５％であることがより好ましく、０．４％～０．６％であることが最も好ましい。
前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤において、前記保湿剤は、グリセリン及びプロピレングリコールから選択される１種又は２種であることが好ましく、グリセリンであることがより好ましい。
さらに、前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の総質量を基準としたグリセリンの質量百分率は５％～１５％であることが好ましく、５％～１０％であることがより好ましい。
前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤において、前記ｐＨ調整剤は、トリエタノールアミン、水酸化ナトリウム、エチレンジアミン、ラウリルアミン及び炭酸水素ナトリウムから選択される１種又は複数種であることが好ましく、トリエタノールアミンであることがより好ましい。
さらに、前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の総質量を基準としたトリエタノールアミンの質量百分率は０．２５％～１％であることが好ましく、０．２５％～０．５％であることがより好ましい。
特に好ましい実施形態として、本発明はアネモシドＢ４の直腸用ゲル剤を提供し、ｐＨ＝６～７であり、アネモシドＢ４と、カルボマー９４１と、グリセリンと、トリエタノールアミンと、水とを含む。前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の総質量を基準とした各成分の質量百分率は以下の通り、
１％～２０％のアネモシドＢ４、０．２５％～０．５％のカルボマー９４１、５％～１０％のグリセリン、０．２５％～５％のトリエタノールアミン、残りは水である。
前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤において、カルボマー９４１とトリエタノールアミンとの質量比は１：１であることが好ましい。
前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤において、カルボマー９４１とグリセリンとの質量比は１：１５～２５であることが好ましく、１：２０であることがより好ましい。
前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤において、カルボマー９４１と水との質量比は１：１５０～２００であることが好ましく、１：１８０であることがより好ましい。
本発明は、また、前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の製造方法を提供するものであり、前記製造方法は、
質量比に応じて、カルボマー９４１、グリセリン、トリエタノールアミン及び水を準備し、直腸用ゲル剤の薬物含有量に応じて、アネモシドＢ４を準備し、アネモシドＢ４を水に溶解させ、濾過し、アネモシドＢ４水溶液を得て、撹拌しながら、カルボマー９４１を前記アネモシドＢ４水溶液にゆっくりと加え、均一に混合するまで撹拌し、攪拌を続けて、グリセリンを加え、最後にトリエタノールアミンを加え、ｐＨを６～７に調整し、均一に膨潤するまで撹拌する操作を含む。
別の好ましい実施形態として、本発明はアネモシドＢ４の直腸用坐剤を提供し、有効量のアネモシドＢ４及び混合脂肪酸グリセリドを含む。
本発明は、また、前記アネモシドＢ４の直腸用坐剤の製造方法を提供するものであり、前記製造方法は、
前記混合脂肪酸グリセリドを用意して、３分の２から４分の３が溶融するまで加熱し、加熱を停止して撹拌し、基質の温度が５０±２℃に低下するまで待って、アネモシドＢ４を加え、攪拌して均一に分散させ、流動パラフィンが均一に塗布された坐剤金型に注入し（金型の温度は約２０℃）、３０分冷却した後、溢れた部分を削る操作を含む。
前記混合脂肪酸グリセリドは、混合脂肪酸グリセリド３４型、混合脂肪酸グリセリド３６型及び混合脂肪酸グリセリド３８型から選択される１種又は複数種であることが好ましく、混合脂肪酸グリセリド３４型又は混合脂肪酸グリセリド３６型から選択される１種又は２種であることがより好ましく、混合脂肪酸グリセリド３６型であることが最も好ましい。
本発明は、また、前記好ましいアネモシドＢ４の直腸用坐剤の製造方法を提供するものであり、前記製造方法は、
混合脂肪酸グリセリド３６型を用意して、５５～６０℃で３分の２又は４分の３が溶融するまで加熱し、加熱を停止して撹拌し、基質の温度が５０±２℃に低下するまで待って、アネモシドＢ４を加え、攪拌して均一に分散させ、流動パラフィンが均一に塗布された坐剤金型に注入し（金型の温度は約２０℃）、３０分冷却した後、溢れた部分を削る操作を含む。
本発明は、また、前記アネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤の、急性腎障害を治療するための薬物の製造における使用を提供する。
前記アネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤を腎障害の治療に用いる場合、投与のレシピエントは、哺乳類であり、好ましくはヒトである。
本発明の前記使用において、有効量の前記アネモシドＢ４を含む直腸粘膜投与製剤を、必要とするレシピエント、好ましくはヒトの直腸内に投与し、肛門から２±１ｃｍのところに投与する。
本発明の前記アネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤をヒトの急性腎障害に使用する場合、投与量は体重１ｋｇあたり８～３２ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇあたり１６～３２ｍｇである。
本明細書において、特に説明がない限り、前記「アネモシドＢ４」は、植物からの抽出、分離及び精製により得られたアネモシドＢ４（ＨＰＬＣ測定での含有量≧９０％）、アネモシドＢ４を主とする組成物（ＨＰＬＣ測定において、アネモシドＢ４の含有量が９０％以上）、又は化学合成により得られたアネモシドＢ４（ＨＰＬＣ測定での含有量≧９０％）を含む。
本明細書において、特に説明がない限り、前記「水」は、浄化処理された、粘膜投与製剤に使用可能な水であり、脱イオン水、二重蒸留水、注射用水などを含むがこれらに限定されない。
本明細書において、特に説明がない限り、前記「約」は、ある特定の値の近似値であっても同等の結果又は効果が得られることを示す場合に用いられる。本文において、「約」は±２０％の範囲の値を指す。
以下、具体的な実施例を参照して本発明を説明する。これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ用いられるものであり、本発明の範囲を限定するものではないことは、当業者によって理解される。
以下の実施例における実験方法は、特に説明がない限り、全て従来の方法である。以下の実施例において使用する薬剤の原料や試薬の材料などは、特に説明がない限り、全て市販の製品であり、一部の試薬の購入状況は以下の通りである。
アネモシドＢ４（ＨＰＬＣ検知純度９８％）：江西本草天工科技有限責任会社、ロット番号：２０１７０３０１
カルボマー９４１（ＣＰ－９４１）：北京国人逸康科技有限会社、ロット番号：２０１２０３２５
カルボマー９８０（ＣＰ－９８０）：安徽Ｎｅｗｍａｎ精細化工有限会社、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）：安徽山河薬用補料株式会社、ロット番号：１２０６０２
カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ－Ｎａ）：安徽山河薬用補料株式会社、ロット番号：１３０６０１
混合脂肪酸グリセリド３４型、混合脂肪酸グリセリド３６型、混合脂肪酸グリセリド３８型：湖北中科化工有限会社、ロット番号：１６０３２５
グリセリン：西隴化工株式会社、ロット番号：１２０９１４
実験例１ アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の研究
アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の処方構成は以下の通りとした。
アネモシドＢ４（以下「Ｂ４」と表記する）、基質、グリセリン（保湿剤）、トリエタノールアミン（ｐＨ調整剤）、脱イオン水。
本実験例におけるアネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の製造方法は以下の通りとした。
アネモシドＢ４を水に溶解させ、濾過して、アネモシドＢ４水溶液を得る。撹拌しながら、基質を前記アネモシドＢ４水溶液にゆっくりと加え、均一に混合するまで撹拌する。攪拌を続けて、グリセリンを加え、最後にトリエタノールアミンを加えて、ｐＨを６～７に調整する。均一に膨潤するまで撹拌して、アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤を得る。
１．基質のスクリーニング
表１に示す処方構成に従って各成分を準備し、同様の方法でゲル剤を製造した。ゲル剤の外観、粘稠性、延展性及び安定性を調査の指標とし、ＣＰ－９４１、ＣＰ－９８０、ＨＰＭＣ及びＣＭＣ－Ｎａについて調査した。結果を表１に示す。
Figure 0007214751000002
表１に示すように、ＨＰＭＣ及びＣＭＣ－Ｎａは、この濃度ではゲルを形成できず、粘度が低く、液体状であった。ＣＰ－９４１及びＣＰ－９８０は、成形性は比較的優れていたが、ＣＰ－９８０により形成されたゲルは比較的濃く、広がりにくく、表面はＣＰ－９４１と比較してやや粗かった。従って、各基質の直腸用ゲル剤の総合的な順位は、ＣＰ－９４１＞ＣＰ－９８０＞ＨＭＰＣ≒ＣＭＣ－Ｎａであった。よって、本発明では、アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の基質として、ＣＰ－９４１及びＣＰ－９８０が好ましく、ＣＰ－９４１が最も好ましい。
２．ＣＰ－９４１の使用量のスクリーニング
表２に示す処方構成に従って各成分を準備し、同様の方法でゲル剤を製造した。ゲルの外観、粘稠性、延展性及び安定性を調査の指標とし、ＣＰ－９４１の使用量（０．２５％、０．５％、１．０％）について調査した。
Figure 0007214751000003
表２に示すように、カルボマー９４１の使用量が０．２５％と１．０％の場合、製造したゲルの粘稠性は比較的薄く又は濃く、延展性も良好でないが、使用量が０．５％の場合、粘稠性及び延展性のいずれにおいても、０．２５％と１．０％の場合より優れていた。従って、カルボマー９４１の各使用量によるゲル剤の総合的な順位は、０．５％＞０．２５％＞１０％であり、最も好ましい使用量は約０．５％である。
３．グリセリンの使用量のスクリーニング
表３に示す処方構成に従って各成分を準備し、同様の方法でゲル剤を製造した。ゲルの外観、粘稠性、延展性、安定性及び保湿性を調査の指標とし、グリセリンの使用量について調査した。結果を表３と表４に示す。
Figure 0007214751000004
表３から、製造した３つのロットのゲル剤における粘稠性、延展性及び安定性は類似していることが分かる。
Figure 0007214751000005
しかし、表４から分かるように、水分損失率を指標とすると（水分損失率が低いほど、保湿性が良い）、グリセリンの各含有量によるゲル剤の順位は、グリセリン１０％＞グリセリン５％＞グリセリン１５％である。よって、本発明のアネモシドＢ４の直腸用ゲル剤における保湿剤グリセリンの使用量は、約５％～１５％（質量百分率）であってよく、約５％～１０％（質量百分率）であることが好ましく、約１０％（質量百分率）であることが最も好ましい。
４．結論
ゲル剤の外観、粘稠性、延展性、安定性及び保湿性を調査の指標として、最適なゲル基質としてカルボマー９４１を選択し、このカルボマー９４１がゲル剤総質量の０．２５％～０．５％を占め、０．４％～０．６％を占めることが好ましい。グリセリンの使用量は５％～１５％であり、５％～１０％であることが好ましい。
これに基くと、アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の好ましい処方は、
アネモシドＢ４、カルボマー９４１、グリセリン、トリエタノールアミン及び水であり、ｐＨ＝６～７であって、前記直腸用ゲル剤の総質量を基準として、カルボマー９４１の質量百分率は０．２５％～０．５％、グリセリンの質量百分率は５％～１５％、カルボマー９４１、トリエタノールアミン及びグリセリンの質量比は１：１：１５～１：１：２５となる。
さらに好ましいアネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の処方は、
アネモシドＢ４、カルボマー９４１、グリセリン、トリエタノールアミン及び水であり、ｐＨ＝６～７であって、前記直腸用ゲル剤の総質量を基準として、カルボマー９４１の質量百分率は０．４％～０．６％、グリセリンの質量百分率は５％～１２％、カルボマー９４１、トリエタノールアミン及びグリセリンの質量比は１：１：２０となる。
実施例１ アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤
処方：
アネモシドＢ４ １．２ｇ
カルボマー９４１ ０．４ｇ
グリセリン ８ｇ
トリエタノールアミン ０．４ｇ
脱イオン水 ７２ｍＬ
製造方法：
処方に従って各成分を精密に秤取／計量した。アネモシドＢ４を脱イオン水に完全に溶解させ（磁気攪拌）、濾過して、アネモシドＢ４水溶液を調製した。カルボマー９４１を前記アネモシドＢ４水溶液にゆっくりと加えながら、均一に混合するまで２０分間攪拌し、さらにグリセリンを加えて３分間攪拌を続け、最後にトリエタノールアミンを加えて、ｐＨを６～７に調整し、撹拌して、アネモシドＢ４のヒドロゲル製剤を得た。取得量は６５ｍｌであり、アネモシドＢ４の含有量は約１７．４６ｍｇ／ｍＬであった。
実施例２ アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤
処方：
アネモシドＢ４ ２．０ｇ
カルボマー９４１ ０．２５ｇ
グリセリン ５ｇ
トリエタノールアミン ０．２５ｇ
脱イオン水 ９１．５ｍＬ
製造方法：
実施例１の製造方法と同様にして、合計８０ｍＬのアネモシドＢ４のヒドロゲル製剤を得た。アネモシドＢ４の含有量は約２３．９２ｍｇ／ｍＬであった。
実施例３ アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤
処方：
アネモシドＢ４ ０．７５ｇ
カルボマー９４１ ０．４ｇ
グリセリン ８ｇ
トリエタノールアミン ０．４ｇ
脱イオン水 ９０．４５ｍＬ
製造方法：
実施例１の製造方法と同様にして、合計７９ｍＬのアネモシドＢ４のヒドロゲル製剤を得た。アネモシドＢ４の含有量は約８．７３ｍｇ／ｍＬであった。
実施例４ アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤
処方：
アネモシドＢ４ ２．５ｇ
カルボマー９４１ ０．２５ｇ
グリセリン ５ｇ
トリエタノールアミン ０．２５ｇ
脱イオン水 ９１．５ｍＬ
製造方法：
実施例１の製造方法と同様にして、合計８０ｍＬのアネモシドＢ４のヒドロゲル製剤を得た。アネモシドＢ４の含有量は約２９．７５ｍｇ／ｍＬであった。
実施例５ アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤
処方：
アネモシドＢ４ １．８ｇ
カルボマー９４１ ０．６ｇ
グリセリン １２ｇ
トリエタノールアミン ０．６ｇ
脱イオン水 ８５ｍＬ
製造方法：
実施例１の製造方法と同様にして、合計７４ｍＬのアネモシドＢ４のヒドロゲル製剤を得た。アネモシドＢ４の含有量は約２２．４２ｍｇ／ｍＬであった。
実験例２ アネモシドＢ４の坐剤の研究
アネモシドＢ４は水溶性が良好である。腔道内での薬物の吸収をさらに高め、薬物の水分吸収による坐剤の変形又は黴菌などの微生物の発生を防止するために、本発明の坐剤は、油脂性基質を選択した。油脂性基質の中でも、混合脂肪酸グリセリドは毒性や刺激性がなく、性質が安定しており、価格が適正で、供給が安定し、かつ異なる融点を持っているため、薬物の要件に応じて選択することができる。このため、本発明の坐剤は混合脂肪酸グリセリドを基質とした。本実験例によって、混合脂肪酸グリセリドの型番、製剤工程の条件について研究及びスクリーニングした。
１．基質のスクリーニング
本実験において、主に完成品の外観、溶融時間及び融点を指標とし、混合脂肪酸グリセリド３４型、３６型、３８型の３種類の異なるタイプの基質について調査した。
前記３種類の基質を４ｇずつ用意してそれぞれ蒸発皿に入れ、５５℃の水浴で完全に融解するまで加熱し、アネモシドＢ４の有効成分４５０ｍｇを融解した基質それぞれに加えながら均一になるまで攪拌し、流動パラフィンが均一に塗布された坐剤金型に注入し（金型の温度は約２０℃）、３０分冷却した後、溢れた部分を削り、坐剤の完成品を得た。
外観の判断にあたっては、製造した坐剤を白色の光沢紙に置き、自然光のもとで坐剤の外観を観察した。観察の指標は、色の均一さ、坐剤の滑らかさ、及び手での触り心地の快適さとした。溶融時間の測定にあたっては、各種類の坐剤を３粒ずつ取り、室温で３０分置いた後、それぞれ３つの金属の下層円板に置き、各自のステンレスメッシュカゴに入れ、定期的に反転させるとともに、温度を３７℃に制御し、溶融時間を測定した。また、薬典４部通則２０１５版の０６１２融点測定法第２法に従い、融点を測定した。各項目の測定結果を表５に示す。
Figure 0007214751000006
表５の結果から分かるように、混合脂肪酸グリセリド３６型及び３４型は、完成品の外観の点でいずれも明らかな優位性があるが、３６型の基質で製造した薬剤を含む坐剤の融点は３７℃前後であり、一般的な使用要件に合致していた。
よって、本発明のアネモシドＢ４の坐剤の基質は、混合脂肪酸グリセリド３４型又は３６型から選択される１種又は２種であることが好ましく、混合脂肪酸グリセリド３６型であることがより好ましい。
２．基質の加熱温度の選択
半合成脂肪酸グリセリドを加熱して溶融させる際は、温度が高くなりすぎないように注意する必要があり、３分の２又は４分の３が溶融したところで、加熱を停止し、自然に溶融させる。完全溶融後の温度は５０℃前後とすることが好ましく、坐剤金型に注入する前に温度を４０℃前後に制御する。温度が高すぎると冷却時間が長くなり、その間に薬の粉末が沈殿して含有量が不均一になるおそれがある。そのため、本実験では、主に、基質の加熱溶融温度が坐剤の成形に与える影響について調査した。
混合脂肪酸グリセリド（３６型）基質を４ｇずつ、３つ用意した。それぞれを５５℃、６０℃、６５℃で４分の３溶融させて、加熱を停止し、撹拌を続けた。温度が５０℃に低下してほぼ完全に融解した後、アネモシドＢ４の有効成分４５０ｍｇを融解した基質それぞれに加え、均一になるまで撹拌した後に、流動パラフィンが均一に塗布された坐剤金型に注入し（金型の温度は約２０℃）、３０分冷却した後、溢れた部分を削り、坐剤の完成品を得た。それぞれの外観を観察して、最も好ましい基質の加熱温度を選択した。結果を表６に示す。
Figure 0007214751000007
表６の結果が示すように、基質をそれぞれ３つの調査温度で加熱、溶融させた後、いずれも温度を約５０℃に低下させ、成形して得られた坐剤は、全て外観が滑らかで均一であり、有意な差は見られなかった。このため、混合脂肪酸グリセリド３６型を５５℃～６５℃で加熱、溶融させた場合、いずれもほぼ同様の効果が得られる。基質の温度が５０℃に低下するまでの時間を短縮するために、加熱する温度を約５５℃としてもよい。
３．結論
本発明のアネモシドＢ４の直腸用坐剤において、基質は油脂性基質であり、混合脂肪酸グリセリド３４型又は３６型から選択される１種又は２種であることが好ましく、混合脂肪酸グリセリド３６型であることがより好ましい。製造工程の条件は以下の通りである。
前記基質を５５～６５℃で約３分の２から４分の３が溶融するまで加熱し、加熱を停止して前記基質が完全に融解するまで撹拌し、基質の温度が５０±２℃に低下するまで待って、アネモシドＢ４を加え、攪拌して均一に分散させ、流動パラフィンが均一に塗布された坐剤金型に注入し（金型の温度は約２０℃）、３０分冷却した後、溢れた部分を削り、アネモシドＢ４の直腸用坐剤を得る。
より好ましい製造工程の条件は以下の通りである。前記基質を約５５℃で約３分の２から４分の３が溶融するまで加熱し、加熱を停止して前記基質が完全に融解するまで撹拌し、基質の温度が５０±２℃に低下するまで待って、アネモシドＢ４を加え、攪拌して均一に分散させ、流動パラフィンが均一に塗布された坐剤金型に注入し（金型の温度は約２０℃）、３０分冷却した後、溢れた部分を削り、アネモシドＢ４の直腸用坐剤を得る。
前記アネモシドＢ４の直腸用坐剤において、１つの坐剤におけるアネモシドＢ４の含有量は５０～２００ｍｇであってよい。
実施例６ アネモシドＢ４の直腸用坐剤
処方：
アネモシドＢ４ ４５００ｍｇ
混合脂肪酸グリセリド（３６型） ４０ｇ
製造方法：
処方に従って各成分を秤取し、混合脂肪酸グリセリド（３６型）を蒸発皿に入れて５５℃に加熱し、約４分の３が溶けたら、加熱を停止して撹拌を続け、温度を約５０℃に低下させ、完全に溶けた基質にアネモシドＢ４を加えて、均一に分散するまで撹拌した。流動パラフィンが均一に塗布された坐剤金型に注入し（金型の温度は約２０℃）、３０分冷却した後、溢れた部分を削り、アネモシドＢ４の直腸用坐剤を得た。
合計４０粒の坐剤が得られ、各粒の重量は約１ｇ、表面は滑らかで均一であり、アネモシドＢ４の含有量は１１２．５ｍｇ／粒であった。
実施例７ アネモシドＢ４の直腸用坐剤
処方：
アネモシドＢ４ ５４００ｍｇ
混合脂肪酸グリセリド（３６型） ４０ｇ
製造方法：
処方に従って各成分を秤取し、混合脂肪酸グリセリド（３６型）を蒸発皿に入れて６０℃に加熱し、約３分の２が溶けたら、加熱を停止して撹拌を続け、温度を約５０℃に低下させ、完全に溶けた基質にアネモシドＢ４を加えて、均一に分散するまで撹拌した。流動パラフィンが均一に塗布された坐剤金型に注入し（金型の温度は約２０℃）、３０分冷却した後、溢れた部分を削り、アネモシドＢ４の直腸用坐剤を得た。
合計４０粒の坐剤が得られ、各粒の重量は約１ｇ、表面は滑らかで均一であり、アネモシドＢ４の含有量は１３５ｍｇ／粒であった。
実施例８ アネモシドＢ４の直腸用坐剤
処方：
アネモシドＢ４ ４５００ｍｇ
混合脂肪酸グリセリド（３４型） ４０ｇ
製造方法：
処方に従って各成分を秤取し、混合脂肪酸グリセリド（３４型）を蒸発皿に入れて６５℃に加熱し、約３分の２が溶けたら、加熱を停止して撹拌を続け、温度を約５０℃に低下させ、完全に溶けた基質にアネモシドＢ４を加え、均一に分散するまで撹拌した。流動パラフィンが均一に塗布された坐剤金型に注入し（金型の温度は約２０℃）、３０分冷却した後、溢れた部分を削り、アネモシドＢ４の直腸用坐剤を得た。
合計４０粒の坐剤が得られ、各粒の重量は約１ｍｇ、表面は滑らかで均一であり、アネモシドＢ４の含有量は１１２．５ｍｇ／粒であった。
実験例３ 本発明におけるアネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤の薬力学研究
１． 各Ｂ４製剤が、ゲンタマイシンに起因するラットの急性腎障害に与える影響
ゲンタマイシンによる急性腎不全のモデルは、主に尿細管上皮細胞膜の脂質代謝に対する影響、及びミトコンドリアのエネルギー代謝の阻害などにより、尿細管細胞が損傷して急性腎不全起こすものである。ゲンタマイシンに起因する急性腎不全は、主にクレアチニン及び尿素窒素の増加で示されるが、ゲンタマイシンに起因する腎毒性の機序はまだよくわかっていない。本実験において、本発明の２種類のアネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤を肛門から注入して、ゲンタマイシンに起因するラットのＡＲＦに対する被験薬の予防・治療効果を観察するとともに、経口投与（強制経口投与）したアネモシドＢ４とも比較した。
１．１ 実験動物と実験材料
１．１．１ 動物 ＳＤラット、ＳＰＦグレード、１８０－２００ｇ、オス、湖南ＳＪＡ実験動物有限会社、ライセンス番号：ＳＣＸＫ（湘）２０１６－０００２。
１．１．２ 試薬 硫酸ゲンタマイシン注射剤、河南潤弘製薬株式会社、製品ロット番号：１６１０２０２ １本あたり２ｍｌ／８０ｍｇ
１．１．３ 薬物 実施例１で製造したアネモシドＢ４ゲル剤（以下「Ｂ４ゲル」と表記する）、実施例６で製造したアネモシドＢ４坐剤（以下「Ｂ４坐剤」と表記する）、アネモシドＢ４（以下「Ｂ４原末」と表記する）、デキサメタゾン（０．７５ｇ／錠、安徽金太陽生化薬業有限会社、ロット番号：１６０３２５２１）。
デキサメタゾン薬液：４錠のデキサメタゾンを用意し、粉砕して１００ｍｌの再蒸留水に溶解させ、０．０３ｍｇ／ｍｌに希釈し、デキサメタゾン薬液を得た。
Ｂ４原末薬液：２０００ｍｇのＢ４原末を秤取して粉砕し、１００ｍｌの再蒸留水に溶解させ、２０ｍｇ／ｍｌの溶液を得た。
１．１．４ 機器 卓上低速遠心機、全自動生化学分析装置、マイクロプレートリーダー
１．２ 実験方法
１．２．１ モデリング前の準備
全ての動物をナンバリングし、体重を量ってデータを記録した。
１．２．２ モデリング方法
１４０ｍｇ／ｋｇの用量で、硫酸ゲンタマイシンの原液を腹腔内注射し、ブランク群には等容積の生理食塩水を腹腔内注射して、モデリングを７ｄ継続した。
１．２．３ グループ分け、投与
動物を無作為にブランク群、モデル群、陽性薬デキサメタゾン群、Ｂ４ゲル剤の高、中、低用量群、Ｂ４坐剤の高、中、低用量群、Ｂ４原末群に分け、各群を１０匹とした。Ｂ４ゲル群には、体重１００ｇあたり０．３ｍｌの割合で直腸投与によりゲル剤を投与し、Ｂ４坐剤群には、直腸投与により坐剤を投与し、Ｂ４原末群及び陽性群には、体重１ｋｇあたり１０ｍｌの割合で強制経口投与によりそれぞれの薬物を投与し、モデル群及びブランク群には、強制経口投与により等容積の再蒸留水を与えて、モデリングの２日目から７日間連続で投与した。
１．２．４ 指標の検出
尿を取り、ブラッドフォード法で尿蛋白を検出し、ラットにイソフルラン麻酔を行った後、眼球から採血し、血清を分離して、全自動生化学分析で総蛋白（ＴＰ）、尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（Ｃｒｅ）を検出した。
１．３ 実験結果
１．３．１ 各製剤がゲンタマイシンにより急性腎障害を起こしたラットの血清指標に与える影響
結果を表７に示す。
Figure 0007214751000008
表７のデータは以下のことを示している。
（１）７日間のモデリングの後、モデル群とブランク群とを比較したところ、血清中のＢＵＮ、ＣＲＥＡが著しく上昇し（Ｐ＜０．０１）、ＴＰが著しく低下し（Ｐ＜０．０１）ており、モデリングが成功したことを示している。
（２）モデル群と比較すると、Ｂ４ゲル剤群及びＢ４坐剤群の低、中、高３つの用量は、いずれも、著しく又は非常に著しくＴＰのレベルを上昇させることができたが（Ｐ＜０．０５又はＰ＜０．０１）、Ｂ４原末群は有意な差が見られなかった。また、Ｂ４ゲル剤及びＢ４坐剤の高投与量と、Ｂ４原末とを比較すると、ＴＰ上昇のレベルに有意な差が見られた（Ｐ＜０．０１）。また、Ｂ４ゲル剤及びＢ４坐剤の中用量と、Ｂ４原末とを比較すると、有意な差は見られなかったが、２つの直腸投与群におけるＴＰレベルは、いずれも経口投与群よりも高かった。
（３）モデル群と比較すると、Ｂ４ゲル剤の高、中、低用量群、及びＢ４坐剤の高、中、低用量群のＢＵＮレベルは著しく又は非常に著しく低下し（Ｐ＜０．０１又はＰ＜０．０５）、Ｂ４原末群のＢＵＮレベルも著しく低下した（Ｐ＜０．０５）。しかし、Ｂ４直腸投与の各用量群のＢＵＮレベルは、いずれも経口投与群より低く、しかもＢ４ゲルの高用量群及びＢ４坐剤の高用量群のＢＵＮレベルはより低く、Ｂ４原末群と比較して有意な差が見られた（Ｐ＜０．０１）。
（４）モデル群と比較すると、Ｂ４ゲル剤の高、中用量群、及びＢ４坐剤の高、中用量群のＣＲＥＡレベルが著しく低下し（Ｐ＜０．０１）、Ｂ４原末群のＣＲＥＡレベルも著しく低下した（Ｐ＜０．０５）。しかし、Ｂ４直腸投与の各用量群のＣＲＥＡレベルはいずれも経口投与群より低く、しかもＢ４ゲル剤の高用量群及びＢ４坐剤の高用量群のＣＲＥＡレベルはより低く、Ｂ４原末群と比較すると、有意な又は非常に有意な差が見られた（Ｐ＜０．０５又はＰ＜０．０１）。
結論：
上記の結果から分かるように、同じ用量では、本発明のＢ４ゲル剤及びＢ４坐剤による腎機能の保護効果は、経口投与の原末に比べて、著しく優れている。より有意義なことは、Ｂ４ゲル剤及びＢ４坐剤の用量が原末の半分である場合の、ゲンタマイシンに起因するラットの急性腎障害に対する逆転効果は、経口原末と相当であるか、それよりもやや優れていることである。
１．３．２ 各Ｂ４製剤がゲンタマイシンにより急性腎障害を起こしたラットの尿蛋白に与える影響
結果を表８に示す。
Figure 0007214751000009
表８のデータは以下のことを示している。
（１）投与の５日目、６日目、７日目に、ブランク群と比較したところ、モデル群の尿蛋白含有量が著しく上昇しており（Ｐ＜０．０１）、モデリングが成功したことを示している。
（２）モデル群と比較すると、Ｂ４ゲル剤の高、中用量群、及びＢ４坐剤の高、中用量群において、投与の５日目、６日目、７日目に、ラットの尿蛋白含有量が著しく低下しており（Ｐ＜０．０１又はＰ＜０．０５）、しかもＢ４原末群と比較して有意な差が見られた（Ｐ＜０．０５）。
（３）Ｂ４ゲル剤の低用量群、Ｂ４坐剤の低用量群、及びＢ４原末群において、投与の５日目、６日目、７日目に、尿蛋白含有量が低い傾向が見られたが、モデル群との比較では統計学的な有意性はなかった。
結論：
上記の結果から分かるように、Ｂ４ゲル剤及びＢ４坐剤は、ゲンタマイシンにより急性腎障害を起こしたラットの尿蛋白レベルを有意に低下させることができたが、Ｂ４経口投与薬は尿蛋白の上昇を逆転させることができなかった。よって、本発明のＢ４直腸投与製剤は、Ｂ４経口製剤に比べて、極めて著しい効果を有している。
１．４ 結論
以上の実験結果によって、以下のことが示された。Ｂ４ゲル剤とＢ４坐剤は、いずれも、ゲンタマイシンにより急性腎障害を起こしたラットの腎機能（クレアチニン、尿素窒素）を著しく改善し、尿蛋白の排出を減少させて、血清中の総蛋白含有量（総蛋白）を増加させることができ、急性腎障害を起したラットに対して優れた保護効果を発揮する。また、Ｂ４原末（経口投与）には、急性腎障害を起こしたラットの腎機能を改善する傾向が見られる。これら複数の剤型（異なる投与経路）の比較において、本発明の直腸投与のＢ４ゲル剤及びＢ４坐剤は、経口のＢ４原末よりも、薬効が著しく優れており、しかも有効量がより小さい。これは、本発明のアネモシドＢ４の直腸投与製剤が、投与量を低減しつつ薬効を高めることができ、それによって臨床医薬の安全域を拡大できることを示している。
２．各Ｂ４製剤がシスプラチンに起因するマウスの急性腎障害に与える影響
シスプラチンは腎臓の様々な部分に対して毒性を持つことから、シスプラチンを腹腔内注射すると、糸球体や尿細管の機能の変化、及び形態学的変化を引き起こす可能性がある。シスプラチンは、腎血管を収縮させ、腎血流量及び糸球体の濾過率を低下させ、それによって蛋白尿、腎機能障害等の症状を引き起こすおそれがある。本実験では、異なる投与経路（直腸、経口）でＢ４を介入させて、Ｂ４の各製剤が、シスプラチンに起因するマウスのＡＲＦに与える予防・治療効果を観察した。
２．１．実験材料
２．１．１ 動物 ＩＣＲマウス、１６－１８ｇ、オス、湖南ＳＪＡ実験動物有限会社、ライセンス番号：ＳＣＸＫ（湘）２０１６－０００２。
２．１．２ 試薬 シスプラチン、原液５ｍｇ／ｋｇ、使用前にシスプラチンに適量の生理食塩水を加えて１．５ｍｇ／ｍｌの溶液としておいた。
２．１．３ 薬物 実施例１で製造したアネモシドＢ４ゲル剤（以下「Ｂ４ゲル」と表記する）、実施例６で製造したアネモシドＢ４坐剤（以下「Ｂ４坐剤」と表記する）、アネモシドＢ４（以下「Ｂ４原末」と表記する）、デキサメタゾン（０．７５ｇ／錠、安徽金太陽生化薬業有限会社、ロット番号：１６０３２５２１）。
デキサメタゾン薬液：４錠のデキサメタゾンを用意し、粉砕して１００ｍｌの再蒸留水に溶解させ、０．０３ｍｇ／ｍｌに希釈し、デキサメタゾン薬液を得た。
Ｂ４原末薬液：１０００ｍｇのＢ４原末を秤取して粉砕し、１００ｍｌの再蒸留水に溶解させ、１０ｍｇ／ｍｌの溶液を得た。
２．１．４ 機器 卓上低速遠心機、全自動生化学分析装置
２．２ 実験方法
２．２．１ モデリング前の準備
全ての動物をナンバリングし、体重を量った。
２．２．２ モデリング方法
シスプラチンを１５ｍｌ／ｋｇの用量でモデリングを行い、正常群に生理食塩水を腹腔内注射し、他の群にシスプラチン注射液を腹腔内注射した。
２．２．３ グループ分け、投与
動物を無作為にブランク群、モデル群、陽性薬デキサメタゾン群、Ｂ４ゲル剤の高、中、低用量群、Ｂ４坐剤の高、中、低用量群、Ｂ４原末群に分け、各群を１０匹とした。Ｂ４ゲル群には、体重１００ｇあたり０．３ｍｌの割合で直腸投与によりゲル剤を投与し、Ｂ４坐剤群には、直腸投与により坐剤を投与し、Ｂ４原末群及び陽性群には、体重１ｋｇあたり２０ｍｌの割合で強制経口投与によりそれぞれの薬物を投与し、モデル群及びブランク群には、強制経口投与により等容積の再蒸留水を与えて、モデリングの当日から４日間連続で投与した。４日目の投与前に、１６－１８時間絶食させた。
２．２．４ 指標の検出
最終回の投与の１時間後に採尿して、尿蛋白を検出し、眼球から採血して、血清を分離し、全自動生化学分析で総蛋白（ＴＰ）、尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（Ｃｒｅ）を検出した。
２．３ 実験結果：表９に示す。
Figure 0007214751000010
表９のデータは以下のことを示している。
（１）ブランク群と比較すると、モデル群の血清中のＢＵＮ、ＣＲＥＡ含有量、及び尿蛋白が著しく上昇し（Ｐ＜０．０１）、血清の総蛋白（ＴＰ）含有量が著しく低下しており（Ｐ＜０．０１）、モデリングが成功したことを示している。
（２）モデル群と比較すると、Ｂ４ゲル剤の高、中用量群、及びＢ４坐剤の高、中用量群は、いずれも、急性腎障害を起こしたマウスの血清ＴＰ含有量を著しく又は非常に著しく上昇させることができた（Ｐ＜０．０１又はＰ＜０．０５）。また、Ｂ４ゲル剤及びＢ４坐剤の低用量群、及びＢ４原末群では、ＴＰ含有量に弱い上昇傾向が見られた。Ｂ４原末群と比較すると、Ｂ４ゲル剤及びＢ４坐剤の高用量群は、ＴＰ含有量に有意な差が見られた（Ｐ＜０．０５）。
（３）モデル群と比較すると、Ｂ４ゲル剤の高、中用量群、Ｂ４坐剤の高、中用量群は、いずれも、急性腎障害を起こしたマウスの血清のＢＵＮ、ＣＲＥＡレベルを著しく又は非常に著しく低下させることができた（Ｐ＜０．０１又はＰ＜０．０５）。また、Ｂ４ゲル剤及びＢ４坐剤の低用量群、及び原末群では、血清のＢＵＮ及びＣＲＥＡレベルが多少低下したが、有意な差は見られなかった。
（４）モデル群と比較すると、Ｂ４ゲル剤の高、中用量群、Ｂ４坐剤の高、中用量群は、いずれも、急性腎障害を起こしたマウスの尿蛋白レベルを著しく又は非常に著しく低下させることができた（Ｐ＜０．０１又はＰ＜０．０５）。また、Ｂ４ゲル剤及びＢ４坐剤の低用量群、及びＢ４原末群では、尿蛋白レベルが多少低下したが、有意な差は見られなかった。
２．４ 結論
以上の実験結果によって、以下のことが示された。Ｂ４ゲル剤、Ｂ４坐剤は、いずれも、シスプラチンにより急性腎障害を起こしたマウスの腎機能を著しく改善することができる。また、血清中のクレアチニン、尿素窒素のレベルを低下させ、尿蛋白の排出を減少させ、血清中の総蛋白含有量を増加させるため、急性腎障害を起こしたマウスに対して、優れた保護効果を発揮する。Ｂ４原末（経口）は、急性腎障害のマウスに対し、血清のＢＵＮ、ＣＲＥＡＥ、及び尿蛋白含有量を低下させる傾向が見られ、血清総蛋白を上昇させる傾向も見られたが、モデル群と比較して有意な差は見られなかった。各投与経路を比較すると、本発明の直腸投与のＢ４ゲル剤及びＢ４坐剤の薬効は、経口のＢ４原末よりもはるかに優れており、しかも有効量がより小さいことが分かった。これは、本発明のアネモシドＢ４の直腸投与製剤において、アネモシドＢ４の用量を効果的に低下させることができ、それによって安全域を拡大できることを示している。
以上、本発明が提供するアネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤は、経口投与製剤と比較して、ゲンタマイシンやシスプラチンに起因する急性腎障害を逆転、又は改善する効果に優れており、しかも有効量が小さく、安全性がより高いため、著しい優位性がある。

Claims (7)

  1. アネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤であって、アネモシドＢ４及び薬学的に許容可能な基質を含み、
    アネモシドＢ４は、前記直腸粘膜投与製剤の唯一の活性成分であり、
    さらに、前記直腸粘膜投与製剤は、直腸用ゲル剤及び直腸用坐剤から選択される１種又は２種である
    ことを特徴とする、ゲンタマイシン又はシスプラチンに起因する尿細管障害に対する、アネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤。
  2. 請求項１に記載のアネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤において、
    前記薬学的に許容可能な基質は、アクリル樹脂系、セルロース誘導体系、エチレンポリマー系、天然ゴム及び油脂性の坐剤基質から選択される１種又は複数種であり、
    前記薬学的に許容可能な基質は、カルボマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び混合脂肪酸グリセリドから選択される１種又は複数種である
    ことを特徴する、アネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤。
  3. アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤であって、ｐＨ＝６～７であり、有効量のアネモシドＢ４と、カルボマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースナトリウムから選択される１種又は複数種の薬学的に許容可能な基質と、保湿剤と、ｐＨ調整剤と、水とを含むことを特徴とする、ゲンタマイシン又はシスプラチンに起因する尿細管障害に対する、アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤。
  4. 請求項３に記載のアネモシドＢ４の直腸用ゲル剤において、
    前記薬学的に許容可能な基質はカルボマーであり、カルボマー９４１及びカルボマー９８０から選択される１種又は２種であり、
    さらに、前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の総質量を基準としたカルボマー９４１の質量百分率は０．２５％～１％である
    ことを特徴とする、アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤。
  5. アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤であって、ｐＨ＝６～７であり、アネモシドＢ４と、カルボマー９４１と、グリセリンと、トリエタノールアミンと、水とを含み、前記アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の総質量を基準とした各成分の質量百分率は以下の通り、
    １％～２０％のアネモシドＢ４、０．２５％～０．５％のカルボマー９４１、５％～１０％のグリセリン、０．２５％～５％のトリエタノールアミン、残りは水であり、
    カルボマー９４１とトリエタノールアミンとの質量比は１：１であり、
    カルボマー９４１とグリセリンとの質量比は１：１５～２５であり、
    カルボマー９４１と水との質量比は１：１５０～２００である
    ことを特徴とする、ゲンタマイシン又はシスプラチンに起因する尿細管障害に対する、アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤。
  6. 請求項３～５のいずれか１項に記載のアネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の製造方法であって、
    アネモシドＢ４を水に溶解させて濾過し、撹拌しながら、薬学的に許容可能な基質と保湿剤を加え、均一に分散させ、ｐＨ調整剤を加え、ｐＨを６～７に調整する操作を含み、
    前記製造方法が、
    質量比に応じて、カルボマー９４１、グリセリン、トリエタノールアミン及び水を準備し、直腸用ゲル剤の薬物含有量に応じて、アネモシドＢ４を準備し、アネモシドＢ４を水に溶解させ、濾過し、アネモシドＢ４水溶液を得て、撹拌しながら、カルボマー９４１を前記アネモシドＢ４水溶液にゆっくりと加え、均一に混合するまで撹拌し、攪拌を続けて、グリセリンを加え、最後にトリエタノールアミンを加え、ｐＨを６～７に調整し、均一に膨潤するまで撹拌する操作を含む
    ことを特徴とする、アネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の製造方法。
  7. 請求項１又は２に記載のアネモシドＢ４の直腸粘膜投与製剤、又は、請求項３～５のいずれか１項に記載のアネモシドＢ４の直腸用ゲル剤の、急性腎障害を治療するための薬物の製造における使用。
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