CN112656802B

CN112656802B - 白头翁皂苷b4在制备治疗多发性硬化药物中的应用

Info

Publication number: CN112656802B
Application number: CN202110045881.9A
Authority: CN
Inventors: 李艳红; 邹敏; 韩倩; 邓礼荣
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: South China University of Technology SCUT
Priority date: 2021-01-14
Filing date: 2021-01-14
Publication date: 2022-11-18
Anticipated expiration: 2041-01-14
Also published as: CN112656802A

Abstract

本发明公开了白头翁皂苷B4在制备抗多发性硬化药物中的应用。白头翁皂苷B4对多发性硬化有明显的缓解和治疗作用，且不影响机体免疫和防御功能，对血常规和血生化不产生显著影响，证明无明显毒副作用。白头翁皂苷B4有望用于临床多发性硬化治疗，可解决现有药物副作用多及毒性大的问题。

Description

白头翁皂苷B4在制备治疗多发性硬化药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及白头翁皂苷B4在制备治疗多发性硬化药物中的应用。

背景技术

多发性硬化是一种慢性的受自身免疫系统攻击的神经系统退化性疾病。由于发病机制复杂，目前多发性硬化治疗药物十分有限，且以注射用药为主。这些药物大多存在严重的毒副作用，病人依从性低、治愈率低且易反复。芬戈莫德是首个多发性硬化口服治疗药物，于2010年被美国药品食品监督管理局批准。但遗憾的是芬戈莫德存在选择性低、副作用大且价格昂贵的缺陷，研发新的替代药物十分迫切。

发明人长期致力于从中医药寻找和鉴定具有生物活性及治疗潜力的单体化合物。白头翁皂苷B4是中药白头翁的主要化学成分。目前白头翁皂苷B4对多发性硬化的治疗作用还未见报道。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供白头翁皂苷B4在制备治疗多发性硬化药物中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：白头翁皂苷B4在制备治疗多发性硬化药物中的应用。

所述白头翁皂苷B4的用量为10-500mg/kg；优选为100-200mg/kg。白头翁皂苷B4的用量在不同人群可在安全有效范围内调整。

所述药物给药方式为口服或其他临床可接受的方式。

所述药物含有药学上可接受的载体、辅料或其他可联合用药物。

所述药物可采用常规方法制备成各种剂型，如粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊、丸剂等口服剂型，或其他与给药途径相应的制剂。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

白头翁皂苷B4对多发性硬化有明显的缓解和治疗作用，且对血常规和血生化不产生显著影响，表明无明显毒副作用。有望用于临床多发性硬化治疗，为临床提供新的药物选择，并解决现有药物存在的副作用及毒性问题。

附图说明

图1为小鼠造模周期图。

图2为小鼠体重统计图；其中，与对照组比，^##P<0.01，^###P＜0.001；与模型组比，**P<0.01，***P＜0.001；与白头翁皂苷B4低剂量治疗组比，^△△△P＜0.001；均值±标准误；n＝7。

图3为小鼠神经功能学评分统计图；其中，与对照组比，^#P<0.05，^###P＜0.001；与模型组比，*P<0.05，**P<0.01，***P＜0.001；与白头翁皂苷低剂量治疗组比，^△P<0.05，^△△P<0.01，^△△△P＜0.001；均值±标准误；n＝7。

图4为小鼠脊髓组织HE染色图；其中，箭头指示空泡化形成，星号指示炎性细胞浸润；标尺为100μm。

图5为小鼠脊髓组织LFB染色图；其中，其中，箭头指示空泡化形成，星号指示脱髓鞘部位；标尺为100μm。

图6为小鼠淋巴细胞统计图；其中，均值±标准误；n＝7。

图7为小鼠中性粒细胞统计图；其中，均值±标准误；n＝7。

图8为各实验组小鼠血常规统计图；其中，与对照组比，^#P<0.05；与模型组比，***P＜0.001；与白头翁皂苷低剂量治疗组组比，^△△△P＜0.001；均值±标准差；n＝7。

图9为各实验组小鼠血生化统计图；其中，均值±标准差；n＝7。

具体实施方式

下面将结合实施方式和附图对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

本实施例采用MOG_35-55(髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白myelin oligodendrocyteglycoprotein的第35-55位片段)诱导制备实验性自发性脑脊髓膜炎模型，然后对实验性自发性脑脊髓膜炎小鼠分组给药，以给药后小鼠神经功能学症状的缓解情况为指标考察各组药物的缓解和治疗效果。

1、制备实验性自发性脑脊髓膜炎模型：首先用1％异氟烷对C57BL/6小鼠(购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，中国长沙)进行麻醉，然后将2mg/mL的MOG_35-55与含有8mg/mL灭活结核分枝杆菌的完全弗氏佐剂(CFA)等体积混合，充分乳化，在第0天于小鼠颈部分两点注射含MOG_35-55的CFA乳化液200μL，对照组仅注射CFA200μL。2小时后对照组和模型组均腹腔注射400ng百日咳毒素(PTX)，免疫24小时后腹腔再次注射400ng PTX。

2、分组及给药流程为：将小鼠随机分为4组，每组7只。采用不同的处理方式，具体为：

(1)第一组为对照组：接受CFA及PTX的对照小鼠实验期间(28天)均给予自由饮水，并且饮食中不加入任何药物，于第8天开始每天灌胃给予蒸馏水直至实验结束；

(2)第二组为模型组(MOG_35-55组)：接受MOG_35-55、CFA及PTX的模型小鼠实验期间(28天)均给予自由饮水，并且饮食中不加入任何药物，于第8天开始每天灌胃给予蒸馏水直至实验结束；

(3)第三组为白头翁皂苷B4低剂量治疗组(MOG_35-55+白头翁皂苷B4)：模型小鼠实验期间(28天)均给予自由饮水，在造模第8天开始给予每天100mg/kg白头翁皂苷B4灌胃给药，直至实验结束；

(4)第四组为白头翁皂苷B4高剂量治疗组(MOG_35-55+白头翁皂苷B4)：模型小鼠实验期间(28天)均给予自由饮水，在造模第8天开始每天给予200mg/kg白头翁皂苷B4灌胃给药，直至实验结束。

3、实验过程中，每日记录所有小鼠的体重、神经功能学症状。神经功能学评分如下：新评分标准：0，无临床体征；0.5，部分瘫痪的尾巴；1，瘫痪的尾巴；2，后肢轻瘫；2.5，一只后肢瘫痪；3，后肢均瘫痪；3.5，后肢瘫痪，前肢无力；4，前肢瘫痪；5，垂死和死亡。

实验结果：小鼠在第10天开始发病，并在第13至第20天达高峰，相对于正常组，造模组及给药组在第10天后开始出现体重下降(图2)及神经功能缺损症状(图3)。随着时间推移神经症状缺损评分逐渐升高，表明症状逐步加重(图3)。低剂量、高剂量治疗组小鼠对体重下降及缺损症状评分均有显著改善作用，尤其至第21天后，低剂量、高剂量治疗组小鼠神经功能学症状明显好于造模组，其中高剂量组与模型组比差异显著，且作用优于低剂量组(图3)。脊髓组织病理切片HE染色显示，模型组小鼠脊髓两侧边缘及中间部位白质的空泡化及炎性细胞浸润，低剂量、高剂量治疗组以上变化有所改善，且高剂量作用优于低剂量治疗组(图4)。脊髓组织快蓝染色(LFB)证实变化，模型组染色与对照组比较有所减少，提示模型组出现脱髓鞘现象，低剂量、高剂量治疗组以上变化均显著改善(图5)。以上两方面结果表明白头翁皂苷B4对造模所致的脊髓病理损害具有保护作用。

4、为研究其毒副作用，对以上各组小鼠淋巴细胞和中性粒细胞计数，结果显示，各实验组无明显差异(图6和图7)，表明白头翁皂苷B4不影响机体免疫和防御功能。此外，对以上各组小鼠的血常规和血生化进行检测，结果显示各组无明显变化(图8和图9)，提示给药组对血液系统及肝肾功能无明显副作用。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.白头翁皂苷B4作为唯一活性成分在制备治疗多发性硬化药物中的应用，其特征在于：

所述白头翁皂苷B4的用量为100 -200mg/kg。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物给药方式为口服或其他临床可接受的方式。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物含有药学上可接受的辅料或其他联合用药物。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物制备成粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊、丸剂，或其他与给药途径相应的制剂。