JP7201725B2 - 治療用rna - Google Patents
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Description
実施形態2.配列番号24のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%または80%同一であるIL-15 sushiタンパク質をコードするRNAをさらに含む、実施形態1に記載の組成物。
実施形態3.配列番号9のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%または80%同一であるIL-2タンパク質をコードするRNAをさらに含む、実施形態1に記載の組成物。
実施形態4.配列番号19のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%または80%同一であるIFNα2bタンパク質をコードするRNAをさらに含む、実施形態1に記載の組成物。
実施形態5.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%または80%同一であるIL-12scタンパク質をコードするRNA;
b.配列番号27のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%または80%同一であるGM-CSFタンパク質をコードするRNA;および
c.配列番号19のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%または80%同一であるIFNα2bタンパク質をコードするRNA。
実施形態6.配列番号24のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%または80%同一であるIL-15 sushiタンパク質をコードするRNAをさらに含む、実施形態5に記載の組成物。
実施形態7.配列番号9のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%または80%同一であるIL-2タンパク質をコードするRNAをさらに含む、実施形態5に記載の組成物。
実施形態8.少なくとも1つのRNAは、少なくとも1つのウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含む、実施形態1~7のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態9.各RNAは、各ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含む、実施形態1~7のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態10.修飾核酸塩基は、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、または5-メチル-ウリジン(m5U)である、実施形態8~9のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態12.少なくとも1つのRNAは、5’キャップをさらに含む、実施形態1~11のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態13.各RNAは、5’キャップをさらに含む、実施形態1~11のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態14.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gである、実施形態12~13のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態15.少なくとも1つのRNAは、5’UTRをさらに含む、実施形態1~14のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態16.各RNAは、5’UTRをさらに含む、実施形態1~14のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態17.5’UTRは、配列番号2、4もしくは6のヌクレオチド、もしくは配列番号2、4もしくは6に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、実施形態15~16のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態18.少なくとも1つのRNAは、3’UTRをさらに含む、実施形態1~17のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態19.各RNAは、3’UTRをさらに含む、実施形態1~17のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態20.3’UTRは、配列番号8のヌクレオチド、もしくは配列番号8に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、実施形態18~19のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態22.各RNAは、ポリAテールをさらに含む、実施形態1~20のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態23.ポリAテールは、少なくとも100ヌクレオチドを含む、実施形態21~22のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態24.少なくとも1つのRNAは、5’キャップ、5’UTR、3’UTR、およびポリAテールを含む、実施形態1~23のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態25.各RNAは、5’キャップ、5’UTR、3’UTR、およびポリAテールを含む、実施形態1~23のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態26.
a.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gであり;
b.5’UTRは、配列番号2、4もしくは6のヌクレオチド、もしくは配列番号2、4もしくは6に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり;
c.3’UTRは、配列番号8のヌクレオチド、もしくは配列番号8に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり;および
d.ポリAテールは、少なくとも100ヌクレオチドを含む、
実施形態24~25のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態27.対象におけるがんを処置もしくは予防する、腫瘍のサイズを縮小する、寛解期のがんの再発を予防する、またはがん転移を予防する方法であって、実施形態1~26のいずれか1つに記載の組成物を対象に投与することを含む方法。
実施形態28.対象におけるがんを処置もしくは予防する、腫瘍のサイズを縮小する、寛解期のがんの再発を予防する、またはがん転移を予防する方法であって、対象に:
a.配列番号14のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%同一であるIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNAと;
b.配列番号27のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%同一であるGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNAと
を投与することを含み、
それによって、対象におけるがんを処置もしくは予防する、腫瘍のサイズを縮小する、寛解期のがんの再発を予防する、またはがん転移を予防する、方法。
実施形態29.配列番号19のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%同一であるIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNAを投与することをさらに含む、実施形態28に記載の方法。
実施形態30.配列番号24のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%同一であるIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌク
レオチドを含む、RNAを投与することをさらに含む、実施形態28に記載の方法。
実施形態32.
a.配列番号24のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%同一であるIL-15 sushiタンパク質、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むIL-15 sushiタンパク質;ならびに
b.配列番号19のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%同一であるIFNα2bタンパク質、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むIFNα2bタンパク質
をコードするRNAを投与することをさらに含む、実施形態28に記載の方法。
実施形態33.
a.配列番号9のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%同一であるIL-2タンパク質、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むIL-2タンパク質;ならびに
b.配列番号19のアミノ酸と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%同一であるIFNα2bタンパク質、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むIFNα2bタンパク質
をコードするRNAを投与することをさらに含む、実施形態28に記載の方法。
実施形態34.がんは、肉腫、癌腫、またはリンパ腫である、実施形態27~33のいずれか1つに記載の方法。
実施形態35.がんは、固形腫瘍である、実施形態27~33のいずれか1つに記載の方法。
実施形態36.固形腫瘍は、肺、結腸、卵巣、子宮頸部、子宮、腹膜、精巣、陰茎、舌、リンパ節、膵臓、骨、乳房、前立腺、軟部組織、結合組織、腎臓、肝臓、脳、甲状腺または皮膚におけるものである、実施形態35に記載の方法。
実施形態37.固形腫瘍は、上皮腫瘍、ホジキンリンパ腫(HL)、非ホジキンリンパ腫、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、消化管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を伴う腫瘍、中皮腫腫瘍、膵腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、脳腫瘍、メラノーマ腫瘍、小細胞肺腫瘍、神経芽腫、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、神経膠腫腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、または骨肉腫腫瘍である、実施形態35に記載の方法。
実施形態38.組成物は、腫瘍内または腫瘍周囲投与される、実施形態27~37のいずれか1つに記載の方法。
実施形態39.被注射腫瘍および未注射腫瘍は、両方とも、第1の腫瘍へのまたはその付近への腫瘍内または腫瘍周囲注射後にサイズが縮小される、実施形態38に記載の方法。
実施形態40.対象はヒトである、実施形態27~39のいずれか1つに記載の方法。
実施形態42.他の治療は、腫瘍を摘出、切除または減量するための外科手術である、実施形態41に記載の方法。
実施形態43.他の治療は、免疫療法、放射線療法または化学療法である、実施形態41に記載の方法。
実施形態44.少なくとも1つのRNAは、少なくとも1つのウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含む、実施形態27~43のいずれか1つに記載の方法。
実施形態45.各RNAは、各ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含む、実施形態27~43のいずれか1つに記載の方法。
実施形態46.修飾核酸塩基は、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、または5-メチル-ウリジン(m5U)である、実施形態44~45のいずれか1つに記載の方法。
実施形態47.修飾核酸塩基は、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)である、実施形態46に記載の方法。
実施形態48.少なくとも1つのRNAは、5’キャップをさらに含む、実施形態27~47のいずれか1つに記載の方法。
実施形態49.各RNAは、5’キャップをさらに含む、実施形態27~47のいずれか1つに記載の方法。
実施形態50.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gである、実施形態48~49のいずれか1つに記載の方法。
実施形態52.各RNAは、5’UTRをさらに含む、実施形態27~50のいずれか1つに記載の方法。
実施形態53.5’UTRは、配列番号2、4もしくは6のヌクレオチド、もしくは配列番号2、4もしくは6に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、実施形態51~52のいずれか1つに記載の方法。
実施形態54.少なくとも1つのRNAは、3’UTRをさらに含む、実施形態27~54のいずれか1つに記載の方法。
実施形態55.各RNAは、3’UTRをさらに含む、実施形態27~54のいずれか1つに記載の方法。
実施形態56.3’UTRは、配列番号8のヌクレオチド、もしくは配列番号8に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、実施形態54~55のいずれか1つに記載の方法。
実施形態57.少なくとも1つのRNAは、ポリAテールをさらに含む、実施形態27~56のいずれか1つに記載の方法。
実施形態58.各RNAは、ポリAテールをさらに含む、実施形態27~56のいずれか1つに記載の方法。
実施形態59.ポリAテールは、少なくとも100ヌクレオチドを含む、実施形態57~58のいずれか1つに記載の方法。
実施形態60.少なくとも1つのRNAは、5’キャップ、5’UTR、3’UTR、およびポリAテールを含む、実施形態27~59のいずれか1つに記載の方法。
実施形態62.
a.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gであり;
b.5’UTRは、配列番号2、4もしくは6のヌクレオチド、もしくは配列番号2、4もしくは6に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり;
c.3’UTRは、配列番号8のヌクレオチド、もしくは配列番号8に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり;および
d.ポリAテールは、少なくとも100ヌクレオチドを含む、
実施形態60~61のいずれか1つに記載の方法。
実施形態63.コドン最適化DNAであって、配列番号11に対して少なくとも83%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、コドン最適化RNA。
実施形態64.配列番号11に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、実施形態63に記載のDNA。
実施形態65.コドン最適化RNAであって、配列番号13に対して少なくとも83%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、コドン最適化RNA。
実施形態66.配列番号13に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、実施形態65に記載のRNA。
実施形態67.実施形態63または64のいずれか1つに記載のDNAから産生されるRNA。
実施形態68.以下を含むか、またはそれらからなる、コドン最適化DNA:
a.配列番号16のヌクレオチド1~984に対して少なくとも78%の同一性を有する連続したヌクレオチド;
b.配列番号16のヌクレオチド1027~1623に対して少なくとも81%の同一性を有する連続したヌクレオチド;および
c.a)のヌクレオチドとb)のヌクレオチド間のリンカーをコードするヌクレオチド。
実施形態69.リンカーは、配列番号16のヌクレオチド985~1026を含む、実施形態68に記載のDNA。
実施形態70.部分a)は、配列番号16のヌクレオチド1~984に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%または75%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含み;および部分b)は、配列番号16のヌクレオチド1027~1623に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%または85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含む、実施形態68および69のいずれか1つに記載のDNA。
a.配列番号18のヌクレオチド1~984に対して少なくとも78%の同一性を有する連続したヌクレオチド;
b.配列番号18のヌクレオチド1027~1623に対して少なくとも81%の同一性を有する連続したヌクレオチド;および
c.a)のヌクレオチドとb)のヌクレオチド間のリンカーをコードするヌクレオチド。
実施形態72.リンカーは、配列番号18のヌクレオチド985~1026を含む、実
施形態71に記載のRNA。
実施形態73.部分a)は、配列番号18のヌクレオチド1~984に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%または75%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含み;および部分b)は、配列番号18のヌクレオチド1027~1623に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%または85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含む、実施形態71および72のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態74.実施形態68~70のいずれか1つに記載のDNAから産生されるRNA。
実施形態75.コドン最適化DNAであって、配列番号21に対して少なくとも80%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、コドン最適化DNA。
実施形態76.配列番号21に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、実施形態75に記載のDNA。
実施形態77.コドン最適化RNAであって、配列番号23に対して少なくとも80%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、コドン最適化RNA。
実施形態78.配列番号23に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、実施形態77に記載のRNA。
実施形態79.実施形態75~76のいずれか1つに記載のDNAから産生されるRNA。
実施形態80.以下を含むか、またはそれらからなる、DNA:
a.配列番号25のヌクレオチド1~321に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
b.配列番号25のヌクレオチド382~729に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
c.a)のヌクレオチドとb)のヌクレオチド間のリンカーをコードするヌクレオチド。
実施形態82.以下を含むか、またはそれらからなる、RNA:
a.配列番号26のヌクレオチド1~321に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
b.配列番号26のヌクレオチド382~729に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
c.a)のヌクレオチドとb)のヌクレオチド間のリンカーをコードするヌクレオチド。
実施形態83.DNAであって、配列番号28に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、DNA。
実施形態84.実施形態83に記載のDNAから産生されるRNA。
実施形態85.RNAであって、配列番号29に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有する連続したヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、RNA。
実施形態86.DNAからin vitroで転写される、実施形態67、74、79、81および84のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態87.少なくとも1つのウリジンは、修飾核酸塩基で置換されている、実施形態65~67、71~74、78~79、81~82、および84~85のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態88.各ウリジンは、修飾核酸塩基で置換されている、実施形態65~67、71~74、78~79、81~82、および84~85のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態89.修飾核酸塩基は、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、または5-メチル-ウリジン(m5U)である、実施形態87または88に記載のRNA。
実施形態90.修飾核酸塩基は、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)である、実施形態89に記載のRNA。
実施形態92.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gである、実施形態91に記載のRNA。
実施形態93.5’UTRをさらに含む、実施形態65~67、71~74、78~79、81~82、および84~92のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態94.5’UTRは、配列番号2、4もしくは6のヌクレオチド、もしくは配列番号2、4もしくは6に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、実施形態93に記載のRNA。
実施形態95.3’UTRをさらに含む、実施形態65~67、71~74、78~79、81~82、および84~94のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態96.3’UTRは、配列番号8のヌクレオチド、もしくは配列番号8に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなる、実施形態95に記載のRNA。
実施形態97.ポリAテールをさらに含む、実施形態65~67、71~74、78~79、81~82、および84~96のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態98.ポリAテールは、少なくとも100ヌクレオチドを含む、実施形態97に記載のRNA。
実施形態99.5’キャップ、5’UTR、3’UTR、およびポリAテールをさらに含む、実施形態65~67、71~74、78~79、81~82、および84~97のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態100.
a.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gであり;
b.5’UTRは、配列番号2、4もしくは6のヌクレオチド、もしくは配列番号2、4もしくは6に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり;
c.3’UTRは、配列番号8のヌクレオチド、もしくは配列番号8に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%もしくは85%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり;および
d.ポリAテールは、少なくとも100ヌクレオチドを含む、
実施形態99に記載の組成物。
a.配列番号11に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは83%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
b.配列番号1、3もしくは5に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)およびb)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、前記DNA。
実施形態102.DNAであって:
a.配列番号16のヌクレオチド1~984に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%もしくは78%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
b.配列番号16のヌクレオチド1027~1623に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%もしくは81%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
c.配列番号1、3もしくは5に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)、b)およびc)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、DNA。
実施形態103.DNAであって:
a.配列番号21に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
b.配列番号1、3もしくは5に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)およびb)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、DNA。
実施形態104.DNAであって:
a.配列番号28と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
b.配列番号1、3もしくは5に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)およびb)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、DNA。
実施形態105.DNAであって:
a.配列番号25のヌクレオチド1~321に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
b.配列番号25のヌクレオチド382~729に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
c.配列番号1、3もしくは5に対して少なくとも80%の同一性を有する連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)、b)およびc)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、DNA。
実施形態106.DNAであって:
a.配列番号11に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは83%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
b.配列番号7に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)およびb)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、前記DNA。
実施形態107.DNAであって:
a.配列番号16のヌクレオチド1~984に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%もしくは78%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
b.配列番号16のヌクレオチド1027~1623に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%もしくは81%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
c.配列番号7に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)、b)およびc)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、前記DNA。
実施形態108.DNAであって:
a.配列番号21に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
b.配列番号7に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)およびb)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、DNA。
実施形態109.DNAであって:
a.配列番号28に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
b.配列番号7に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)およびb)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、前記DNA。
実施形態110.DNAであって:
a.配列番号25のヌクレオチド1~321に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
b.配列番号25のヌクレオチド382~729に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
c.配列番号7に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%
、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)、b)およびc)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、前記DNA。
a.配列番号11に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは83%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
b.配列番号1、3もしくは5に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
c.配列番号7に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)、b)およびc)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、DNA。
実施形態112.DNAであって:
a.配列番号16のヌクレオチド1~984に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%もしくは78%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
b.配列番号16のヌクレオチド1027~1623に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%もしくは81%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
c.配列番号1、3もしくは5に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
d.配列番号7に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)、b)、c)およびd)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、DNA。
実施形態113.DNAであって:
a.配列番号21に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
b.配列番号1、3もしくは5に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド(ここで、この部分b)のヌクレオチドは、部分a)のヌクレオチドの発現を調節するものである);
c.配列番号7に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)、b)およびc)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、DNA。
実施形態114.DNAであって:
a.配列番号28に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
b.配列番号1、3もしくは5に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
c.配列番号7に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)、b)およびc)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、前記DNA。
実施形態115.DNAであって:
a.配列番号25のヌクレオチド1~321に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
b.配列番号25のヌクレオチド382~729に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;
c.配列番号1、3もしくは5に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド;および
d.配列番号7に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチドを含むか、もしくはそのようなヌクレオチドからなる連続したヌクレオチド
を含むか、またはこれらからなり、転写されたとき、部分a)、b)、c)およびd)のヌクレオチドが単一の転写物を形成する、前記DNA。
実施形態116.実施形態101~115のいずれか1つに記載のDNAから産生されるRNA。
実施形態117.少なくとも1つのウリジンは、修飾核酸塩基で置換されている、実施形態116に記載のRNA。
実施形態118.各ウリジンは、修飾核酸塩基で置換されている、実施形態116に記載のRNA。
実施形態119.修飾核酸塩基は、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、または5-メチル-ウリジン(m5U)である、実施形態117~118のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態120.修飾核酸塩基は、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)である、実施形態119に記載のRNA。
実施形態122.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gである、実施形態121に記載のRNA。
実施形態123.二本鎖RNAが実質的にない、実施形態116~122のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態124.二本鎖RNAは除去された、実施形態116~122のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態125.HPLCによってまたはセルロースに基づくクロマトグラフィーによって精製された、実施形態123~124のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態126.実施形態63~125に記載のDNAまたはRNAのいずれか1つと薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬製剤。
実施形態127.対象におけるがんを処置もしくは予防する、腫瘍のサイズを縮小する、寛解期のがんの再発を予防する、またはがん転移を予防する方法であって、実施形態6
3~125に記載のRNAもしくはDNAのいずれか1つもしくはそれ以上、または実施形態126に記載の医薬製剤を、投与することを含む方法。
実施形態128.IL-2、IL-12sc、IL-15 sushi、GM-CSFおよびIFNα2bをコードするポリペプチドをin vivoで産生させる方法であって、実施形態63~125のいずれか1つに記載のDNAもしくはRNAの1つもしくはそれ以上、実施形態1~26のいずれか1つに記載の組成物、または実施形態126に記載の医薬製剤を、対象に投与することを含む方法。
実施形態129.少なくとも2つのRNAを含む組成物であって、該RNAは、異なるタンパク質をコードし、ならびに該RNAは、実施形態65~67、71~74、78~79、81~82、84~100、および116~125のいずれか1つに記載のRNAから選択される、組成物。
実施形態130.GM-CSFおよびIL-12scをコードする2つのRNAを含む、実施形態129に記載の組成物。
実施形態132.GM-CSF、IL-2およびIFNα2bをコードする3つのRNAを含む、実施形態129に記載の組成物。
実施形態133.GM-CSF、IL-12sc、IL-2およびIFNα2bをコードする4つのRNAを含む、実施形態129に記載の組成物。
実施形態134.GM-CSF、IL-12sc、IL-15 sushiおよびIFNα2bをコードする4つのRNAを含む、実施形態129に記載の組成物。
実施形態135.GM-CSFをコードするRNAは、実施形態84~85のいずれか1つに記載のRNAから選択される、実施形態130~134のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態136.IL-12scをコードするRNAは、実施形態71~74のいずれか1つに記載のRNAから選択される、実施形態130~134のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態137.IFNα2bをコードするRNAは、実施形態77~79のいずれか1つに記載のRNAから選択される、実施形態131~134のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態138.IL-15 sushiをコードするRNAは、実施形態81~82のいずれか1つに記載のRNAから選択される、実施形態134に記載の組成物。
実施形態139.IL-2をコードするRNAは、実施形態65~67のいずれか1つに記載のRNAから選択される、実施形態132~133のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態140.固形腫瘍がんを処置または予防する方法であって、以下のRNAの各々:
a.IL-12scをコードするRNA(配列番号17または18)を含むRNA;
b.GM-CSFをコードするRNA(配列番号29)を含むRNA;および
c.IFNα2bをコードするRNA(配列番号22または23)を含むRNA
についての治療有効量を腫瘍に直接投与することを含み、
各RNAは、各ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含み、ならびに
各RNAは、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、前記方法。
a.IL-12scをコードするRNA(配列番号17または18)を含むRNA;
b.GM-CSFをコードするRNA(配列番号29)を含むRNA;
c.IFNα2bをコードするRNA(配列番号22または23)を含むRNA;および
d.IL-2をコードするRNA(配列番号12または13)を含むRNA
についての治療有効量を腫瘍に直接投与することを含み、
各RNAは、各ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含み、ならびに
各RNAは、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、前記方法。
実施形態142.固形腫瘍がんを処置または予防する方法であって、以下のRNAの各々:
a.IL-12scをコードするRNA(配列番号17または18)を含むRNA;
b.GM-CSFをコードするRNA(配列番号29)を含むRNA;
c.IFNα2bをコードするRNA(配列番号22または23)を含むRNA;および
d.IL-15 sushiをコードするRNA(配列番号26)を含むRNA
についての治療有効量を腫瘍に直接投与することを含み、
各RNAは、各ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含み、ならびに
各RNAは、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、方法。
実施形態143.RNAを含む組成物であって、該RNAは、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている配列番号9のアミノ酸に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードし、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、前記組成物。
実施形態144.RNAを含む組成物であって、該RNAは、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている配列番号14のアミノ酸に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードし、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、前記組成物。
実施形態145.RNAを含む組成物であって、該RNAは、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている配列番号27のアミノ酸に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードし、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、前記組成物。
実施形態146.RNAを含む組成物であって、該RNAは、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている配列番号19のアミノ酸に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードし、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、前記組成物。
実施形態147.RNAを含む組成物であって、該RNAは、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている、配列番号24のアミノ酸に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードし、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、組成物。
実施形態148.IL-12sc RNA組成物であって、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている、配列番号17または18に対して少なくとも95%の同一性を有する、ヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、IL-12sc RNA組成物。
実施形態149.GM-CSF RNA組成物であって、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている、配列番号29に対して少なくとも95%の同一性を有する、ヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、GM-CSF RNA組成物。
実施形態150.IFNα2b RNA組成物であって、各ウリジンがウリジンアナロ
グで置換されている、配列番号22または23に対して少なくとも95%の同一性を有する、ヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、IFNα2b RNA組成物。
実施形態152.IL-2 RNA組成物であって、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている、配列番号12または13に対して少なくとも95%の同一性を有する、ヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、前記IL-2 RNA組成物。
実施形態153.IL-12sc RNA組成物であって、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている配列番号17または18のヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、前記IL-12sc RNA組成物。
実施形態154.GM-CSF RNA組成物であって、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている配列番号29のヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、前記GM-CSF RNA組成物。
実施形態155.IFNα2b RNA組成物であって、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている配列番号22または23のヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、前記IFNα2b RNA組成物。
実施形態156.IL-15 sushi RNA組成物であって、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている配列番号26のヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、IL-15 sushi RNA組成物。
実施形態157.IL-2 RNA組成物であって、各ウリジンが修飾核酸塩基で置換されている配列番号12または13のヌクレオチドを含むか、またはそのようなヌクレオチドからなり、さらに、5’UTR(配列番号2、4または6)、3’UTR(配列番号8)、5’キャップ、およびポリAテールを含む、IL-2 RNA組成物。
実施形態158.修飾核酸塩基は、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、または5-メチル-ウリジン(m5U)である、実施形態143~157のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態159.IFNα2bをコードするRNAを含む組成物であって、該RNAは、非改変RNAと比較して免疫原性が低下するように改変されている、組成物。
実施形態160.改変は、少なくとも1つのウリジンの修飾核酸塩基での置換を含む、実施形態159に記載の組成物。
実施形態162.修飾核酸塩基は、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)である
、実施形態161に記載の組成物。
実施形態163.改変は、二本鎖RNAの量の低減を含む、実施形態159~162のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態164.二本鎖RNAの低減は、HPLCによる精製またはセルロースに基づくクロマトグラフィーによる精製の結果である、実施形態163に記載の組成物。
実施形態165.改変は、自然免疫系によるRNA認識を非改変RNAと比較して低下させる、実施形態159~164のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態166.改変は、RNAへの5’キャップの付加を含む、実施形態159~165のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態167.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gである、実施形態166に記載の組成物。
実施形態168.目的のペプチドまたはタンパク質をコードする第2のRNAをさらに含む、実施形態159~167のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態169.目的のペプチドまたはタンパク質は、サイトカイン、ケモカイン、自殺遺伝子産物、免疫原性タンパク質またはペプチド、アポトーシス誘導因子、血管新生阻害剤、熱ショックタンパク質、腫瘍抗原、β-カテニン阻害剤、STING経路の活性化因子、レチノイン酸誘導性遺伝子(RIG)-I経路の活性化因子、toll様受容体(TLR)経路のアゴニスト、チェックポイントモジュレーター、自然免疫活性化因子、抗体、ドミナントネガティブ受容体およびデコイ受容体、骨髄系由来サプレッサー細胞(MDSC)の阻害剤、IDO経路阻害剤、ならびにアポトーシスの阻害剤に結合するタンパク質またはペプチドから選択される、またはこれらに由来するペプチドまたはタンパク質である、実施形態168に記載の組成物。
実施形態170.第2のRNAは、非改変RNAと比較して免疫原性が低下するように改変されている、実施形態168または169に記載の組成物。
実施形態172.修飾核酸塩基は、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、または5-メチル-ウリジン(m5U)である、実施形態171に記載の組成物。
実施形態173.修飾核酸塩基は、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)である、実施形態172に記載の組成物。
実施形態174.改変は、二本鎖RNAの量の低減を含む、実施形態168~173のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態175.二本鎖RNAの低減は、HPLCによる精製またはセルロースに基づくクロマトグラフィーによる精製の結果である、実施形態174に記載の組成物。
実施形態176.改変は、RNAへの5’キャップの付加を含む、実施形態168~173のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態177.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gである、実施形態176に記載の組成物。
実施形態178.第二のRNAは:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/もしくは配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/もしくは配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
c.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-1
5 sushiタンパク質をコードする、および/もしくは配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;または
d.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/もしくは配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA
を含む、実施形態168~177のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態179.対象におけるがんを処置もしくは予防する、腫瘍のサイズを縮小する、寛解期のがんの再発を予防する、またはがん転移を予防する方法であって、実施形態159~178に記載の組成物のいずれか1つを投与することを含む方法。
実施形態180.がんを処置するもしくは予防する、腫瘍のサイズを縮小させる、寛解期のがんの再発を予防する、またはがん転移を予防する方法における使用のための、実施形態159~178のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態182.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードするRNAを含む組成物。
実施形態183.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードするRNAを含む組成物。
実施形態184.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 suhiタンパク質をコードするRNAを含む組成物。
実施形態185.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードするRNAを含む組成物。
実施形態186.IL-12scタンパク質をコードするRNAを含む組成物であって、該RNAは、配列番号17または18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、組成物。
実施形態187.GM-CSFタンパク質をコードするRNAを含む組成物であって、該RNAは、配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、組成物。
実施形態188.IFNα2bタンパク質をコードするRNAを含む組成物であって、該RNAは、配列番号22または23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、組成物。
実施形態189.IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAを含む組成物であって、該RNAは、配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、組成物。
実施形態190.IL-2タンパク質をコードするRNAを含む組成物であって、該RNAは、配列番号12または13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、組成物。
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
c.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
d.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-1
5 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
e.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態192.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態193.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
b.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22または23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態194.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
b.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態195.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
b.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12または13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態196.以下を含む組成物:
a.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
b.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態197.以下を含む組成物:
a.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
b.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態198.以下を含む組成物:
a.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少な
くとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
b.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態199.以下を含む組成物:
a.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
b.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドをコードする、RNA。
実施形態200.以下を含む組成物:
a.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
b.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
a.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
b.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態202.以下のうちのいずれか3つを含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
c.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
d.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
e.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態203.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
c.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα
2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態204.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
c.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態205.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
c.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態206.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
c.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態207.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
c.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態208.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
c.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タ
ンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態209.以下を含む組成物:
a.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
c.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態210.以下を含む組成物:
a.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
c.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
a.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
c.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態212.以下を含む組成物:
a.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
c.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態213.以下のうちのいずれか4つを含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
c.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
d.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
e.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態214.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
c.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
d.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態215.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
c.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
d.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態216.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
c.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
d.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態217.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-1
2scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
c.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
d.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態218.以下を含む組成物:
a.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
c.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
d.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態219.以下を含む組成物:
a.配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-12scタンパク質をコードする、および/または配列番号17もしくは18のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
b.配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するGM-CSFタンパク質をコードする、および/または配列番号29のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
c.配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIFNα2bタンパク質をコードする、および/または配列番号22もしくは23のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;
d.配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-15 sushiタンパク質をコードする、および/または配列番号26のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA;ならびに
e.配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するIL-2タンパク質をコードする、および/または配列番号12もしくは13のヌクレオチドに対して少なくとも95%の同一性を有するヌクレオチドを含む、RNA。
実施形態220.実施形態181~219に記載の組成物のいずれか1つを含む、医薬製剤。
実施形態222.がんを処置または予防する方法における使用のための、実施形態181~219のいずれか1つに記載の組成物、または実施形態220もしくは221に記載の医薬製剤。
実施形態223.腫瘍のサイズを縮小する方法における使用のための、実施形態181~219のいずれか1つに記載の組成物、または実施形態220もしくは221に記載の
医薬製剤。
実施形態224.寛解期のがんの再発を予防する方法における使用のための、実施形態181~219のいずれか1つに記載の組成物、または実施形態220もしくは221に記載の医薬製剤。
実施形態225.がん転移を予防する方法における使用のための、実施形態181~219のいずれか1つに記載の組成物、または実施形態220もしくは221に記載の医薬製剤。
実施形態226.がんを処置または予防する方法であって、実施形態181~219のいずれか1つに記載の組成物、または実施形態220もしくは221に記載の医薬製剤を投与することを含む方法。
実施形態227.腫瘍のサイズを縮小する方法であって、実施形態181~219のいずれか1つに記載の組成物、または実施形態220もしくは221に記載の医薬製剤を投与することを含む方法。
実施形態228.寛解期のがんの再発を予防する方法であって、実施形態181~219のいずれか1つに記載の組成物、または実施形態220もしくは221に記載の医薬製剤を投与することを含む方法。
実施形態229.がん転移を予防する方法であって、実施形態181~219のいずれか1つに記載の組成物、または実施形態220もしくは221に記載の医薬製剤を投与することを含む方法。
実施形態A1.IL-12scタンパク質をコードするRNAと、GM-CSFタンパク質をコードするRNAとを含む、医療用製剤。
実施形態A2.IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAをさらに含む、実施形態A1に記載の医療用製剤。
実施形態A3.IL-2タンパク質をコードするRNAをさらに含む、実施形態A1または2に記載の医療用製剤。
実施形態A4.IFNαタンパク質をコードするRNAをさらに含む、実施形態A1~3のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A5.IFNαタンパク質は、IFNα2bタンパク質である、実施形態A4に記載の医療用製剤。
実施形態A6.IL-12scタンパク質をコードするRNAと、GM-CSFタンパク質をコードするRNAと、IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAとを含む、実施形態A2に記載の医療用製剤。
実施形態A7.IL-12scタンパク質をコードするRNAと、GM-CSFタンパク質をコードするRNAと、IL-2タンパク質をコードするRNAとを含む、実施形態A3に記載の医療用製剤。
実施形態A8.IL-12scタンパク質をコードするRNAと、GM-CSFタンパク質をコードするRNAと、IFNαタンパク質をコードするRNAとを含む、実施形態A4または5に記載の医療用製剤。
実施形態A9.IL-12scタンパク質をコードするRNAと、GM-CSFタンパク質をコードするRNAと、IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAと、IFNαタンパク質をコードするRNAとを含む、実施形態A4または5に記載の医療用製剤。
実施形態A10.IL-12scタンパク質をコードするRNAと、GM-CSFタンパク質をコードするRNAと、IL-2タンパク質をコードするRNAと、IFNαタンパク質をコードするRNAとを含む、実施形態A4または5に記載の医療用製剤。
配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)IL-12scタンパク質は、配列番号14のアミノ酸配列、もしくは配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態A1~10のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A12.(i)GM-CSFタンパク質をコードするRNAは、配列番号29のヌクレオチド配列、もしくは配列番号29のヌクレオチド配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)GM-CSFタンパク質は、配列番号27のアミノ酸配列、もしくは配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態A1~11のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A13.(i)IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAは、配列番号26のヌクレオチド配列、もしくは配列番号26のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)IL-15 sushiタンパク質は、配列番号24のアミノ酸配列、もしくは配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態A2~12のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A14.(i)IL-2タンパク質をコードするRNAは、配列番号12もしくは13のヌクレオチド配列、もしくは配列番号12もしくは13のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)IL-2タンパク質は、配列番号9のアミノ酸配列、もしくは配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態A3~13のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A15.(i)IFNαタンパク質をコードするRNAは、配列番号22もしくは23のヌクレオチド配列、もしくは配列番号22もしくは23のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)IFNαタンパク質は、配列番号19のアミノ酸配列、もしくは配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態A4~14のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A16.少なくとも1つのRNAは、少なくとも1つのウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含む、実施形態A1~15のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A17.各RNAは、少なくとも1つのウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含む、実施形態A1~16のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A18.各RNAは、各ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含む、実施形態A1~17のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A19.修飾核酸塩基は、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、または5-メチル-ウリジン(m5U)である、実施形態A16~18のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A20.修飾核酸塩基は、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)である、実施形態A19に記載の医療用製剤。
実施形態A22.各RNAは、5’キャップを含む、実施形態A1~21のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A23.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gである、実施形態A21または22に記載の医療用製剤。
実施形態A24.少なくとも1つのRNAは、5’UTRを含む、実施形態A1~23のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A25.各RNAは、5’UTRを含む、実施形態A1~24のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A26.5’UTRは、配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、実施形態A24または25に記載の医療用製剤。
実施形態A27.少なくとも1つのRNAは、3’UTRを含む、実施形態A1~26のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A28.各RNAは、3’UTRを含む、実施形態A1~27のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A29.3’UTRは、配列番号8のヌクレオチド配列を含むか、または配列番号8のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、実施形態A27または28に記載の医療用製剤。
実施形態A30.少なくとも1つのRNAは、ポリAテールを含む、実施形態A1~29のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A32.ポリAテールは、少なくとも100ヌクレオチドを含む、実施形態A30または31に記載の医療用製剤。
実施形態A33.少なくとも1つのRNAは、5’キャップ、5’UTR、3’UTR、およびポリAテールを含む、実施形態A1~32のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A34.各RNAは、5’キャップ、5’UTR、3’UTR、およびポリAテールを含む、実施形態A1~33のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A35.
a.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gであり;
b.5’UTRは、配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含み;
c.3’UTRは、配列番号8のヌクレオチド配列を含むか、または配列番号8のヌクレオチド配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含み;
d.ポリAテールは、少なくとも100ヌクレオチドを含む、
実施形態A33または34に記載の医療用製剤。
実施形態A36.RNAは、mRNAである、実施形態A1~35のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A37.さらなる治療剤を含む、実施形態A1~36のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A38.さらなる治療剤は、抗がん治療剤である、実施形態A37に記載の医
療用製剤。
実施形態A39.さらなる治療剤は、チェックポイントモジュレーターである、実施形態A37または38に記載の医療用製剤。
実施形態A40.チェックポイントモジュレーターは、抗PD1抗体、抗CTLA-4抗体、または抗PD1抗体と抗CTLA-4抗体の組合せである、実施形態A39に記載の医療用製剤。
実施形態A42.別々の容器に各RNAを含む、実施形態A41に記載の医療用製剤。
実施形態A43.さらなる治療剤は、RNAを含まない容器内にある、実施形態A41または42に記載の医療用製剤。
実施形態A44.がんを処置または予防するための医療用製剤の使用説明書をさらに含む、実施形態A41~43のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A45.RNAを含む医薬組成物である、実施形態A1~40のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A46.医薬組成物は、1つまたはそれ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤および/または賦形剤をさらに含む、実施形態A45に記載の医療用製剤。
実施形態A47.RNAは、液体形態、固体形態、またはこれらの組合せから選択される形態で存在する、実施形態A1~46のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A48.固体形態は、凍結形態または脱水形態である、実施形態A47に記載の医療用製剤。
実施形態A49.脱水形態は、凍結乾燥または噴霧乾燥形態である、実施形態A48に記載の医療用製剤。
実施形態A50.薬学的使用のための、実施形態A1~49のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A52.がんを処置または予防する方法における使用のための、実施形態A1~51のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A53.がんは、肉腫、癌腫、またはリンパ腫である、実施形態A38~52のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A54.がんは、固形腫瘍である、実施形態A38~53のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A55.固形腫瘍は、肺、結腸、卵巣、子宮頸部、子宮、腹膜、精巣、陰茎、舌、リンパ節、膵臓、骨、乳房、前立腺、軟部組織、結合組織、腎臓、肝臓、脳、甲状腺または皮膚におけるものである、実施形態A54に記載の医療用製剤。
実施形態A56.固形腫瘍は、上皮腫瘍、ホジキンリンパ腫(HL)、非ホジキンリンパ腫、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、消化管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を伴う腫瘍、中皮腫腫瘍、膵腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、脳腫瘍、メラノーマ腫瘍、小細胞肺腫瘍、神経芽腫腫瘍、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、神経膠腫腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、または骨肉腫腫瘍である、実施形態A54または55に記載の医療用製剤。
実施形態A57.RNAは、腫瘍内または腫瘍周囲投与のためのものである、実施形態A1~56のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A58.さらなる治療剤は、全身投与のためのものである、実施形態A37~57のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A59.ヒトへの投与のためのものである、実施形態A1~58のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態A60.対象におけるがんを処置または予防することは、腫瘍のサイズを縮小させること、寛解期のがんの再発を予防すること、またはがん転移を予防することを含む、実施形態A44および47~59のいずれか1つに記載の医療用製剤。
実施形態B1.対象におけるがんを処置または予防する方法において使用するためのRNAであって、方法は、IL-12scタンパク質をコードするRNA、およびGM-CSFタンパク質をコードするRNAを投与することを含む、RNA。
実施形態B2.方法は、IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAを投与することをさらに含む、実施形態B1に記載のRNA。
実施形態B3.方法は、IL-2タンパク質をコードするRNAを投与することをさらに含む、実施形態B1または2に記載のRNA。
実施形態B4.方法は、IFNαタンパク質をコードするRNAを投与することをさらに含む、実施形態B1~3のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B5.IFNαタンパク質は、IFNα2bタンパク質である、実施形態B4に記載のRNA。
実施形態B6.方法は、IL-12scタンパク質をコードするRNA、GM-CSFタンパク質をコードするRNA、およびIL-15 sushiタンパク質をコードするRNAを投与することを含む、実施形態B2に記載のRNA。
実施形態B7.方法は、IL-12scタンパク質をコードするRNA、GM-CSFタンパク質をコードするRNA、およびIL-2タンパク質をコードするRNAを投与することを含む、実施形態B3に記載のRNA。
実施形態B8.方法は、IL-12scタンパク質をコードするRNA、GM-CSFタンパク質をコードするRNA、およびIFNαタンパク質をコードするRNAを投与することを含む、実施形態B4または5に記載のRNA。
実施形態B9.方法は、IL-12scタンパク質をコードするRNA、GM-CSFタンパク質をコードするRNA、IL-15 sushiタンパク質をコードするRNA、およびIFNαタンパク質をコードするRNAを投与することを含む、実施形態B4または5に記載のRNA。
実施形態B10.方法は、IL-12scタンパク質をコードするRNA、GM-CSFタンパク質をコードするRNA、IL-2タンパク質をコードするRNA、およびIFNαタンパク質をコードするRNAを投与することを含む、実施形態B4または5に記載のRNA。
実施形態B12.(i)GM-CSFタンパク質をコードするRNAは、配列番号29のヌクレオチド配列、もしくは配列番号29のヌクレオチド配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)GM-CSFタンパク質は、配列番号27のアミノ酸配列、もしくは配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態B1~11のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B13.(i)IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAは、配
列番号26のヌクレオチド配列、もしくは配列番号26のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)IL-15 sushiタンパク質は、配列番号24のアミノ酸配列、もしくは配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態B2~12のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B14.(i)IL-2タンパク質をコードするRNAは、配列番号12もしくは13のヌクレオチド配列、もしくは配列番号12もしくは13のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)IL-2タンパク質は、配列番号9のアミノ酸配列、もしくは配列番号9のアミノ酸配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態B3~13のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B15.(i)IFNαタンパク質をコードするRNAは、配列番号22もしくは23のヌクレオチド配列、もしくは配列番号22もしくは23のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)IFNαタンパク質は、配列番号19のアミノ酸配列、もしくは配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態B4~14のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B16.少なくとも1つのRNAは、少なくとも1つのウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含む、実施形態B1~15のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B17.各RNAは、少なくとも1つのウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含む、実施形態B1~16のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B18.各RNAは、各ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含む、実施形態B1~17のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B19.修飾核酸塩基は、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、または5-メチル-ウリジン(m5U)である、実施形態B16~18のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B20.修飾核酸塩基は、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)である、実施形態B19に記載のRNA。
実施形態B22.各RNAは、5’キャップを含む、実施形態B1~21のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B23.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gである、実施形態B21または22に記載のRNA。
実施形態B24.少なくとも1つのRNAは、5’UTRを含む、実施形態B1~23のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B25.各RNAは、5’UTRを含む、実施形態B1~24のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B26.5’UTRは、配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、実施形態B24または25に記載のRNA。
実施形態B27.少なくとも1つのRNAは、3’UTRを含む、実施形態B1~26
のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B28.各RNAは、3’UTRを含む、実施形態B1~27のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B29.3’UTRは、配列番号8のヌクレオチド配列を含むか、または配列番号8のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、実施形態B27または28に記載のRNA。
実施形態B30.少なくとも1つのRNAは、ポリAテールを含む、実施形態B1~29のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B32.ポリAテールは、少なくとも100ヌクレオチドを含む、実施形態B30または31に記載のRNA。
実施形態B33.少なくとも1つのRNAは、5’キャップ、5’UTR、3’UTR、およびポリAテールを含む、実施形態B1~32のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B34.各RNAは、5’キャップ、5’UTR、3’UTR、およびポリAテールを含む、実施形態B1~33のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B35.
a.5’キャップは、m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gであり;
b.5’UTRは、配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含み;
c.3’UTRは、配列番号8のヌクレオチド配列を含むか、または配列番号8のヌクレオチド配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含み;
d.ポリAテールは、少なくとも100ヌクレオチドを含む、
実施形態B33または34に記載のRNA。
実施形態B36.mRNAである、実施形態B1~35のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B37.方法は、さらなる治療を投与することをさらに含む、実施形態B1~36のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B38.さらなる治療は、次の(i)、(ii)、(iii)および(iv)からなる群から選択される1つまたはそれ以上を含む、実施形態B37に記載のRNA:(i)腫瘍を摘出、切除または減量するための外科手術、(ii)免疫療法、(iii)放射線療法、および(iv)化学療法。
実施形態B39.さらなる治療は、さらなる治療剤を投与することを含む、実施形態B37または38に記載のRNA
実施形態B40.さらなる治療剤は、抗がん治療剤である、実施形態B39に記載のRNA。
実施形態B42.チェックポイントモジュレーターは、抗PD1抗体、抗CTLA-4抗体、または抗PD1抗体と抗CTLA-4抗体の組合せである、実施形態B41に記載のRNA。
実施形態B43.がんは、肉腫、癌腫、またはリンパ腫である、実施形態B1~42のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B44.がんは、固形腫瘍である、実施形態B1~43のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B45.固形腫瘍は、肺、結腸、卵巣、子宮頸部、子宮、腹膜、精巣、陰茎、舌、リンパ節、膵臓、骨、乳房、前立腺、軟部組織、結合組織、腎臓、肝臓、脳、甲状腺または皮膚におけるものである、実施形態B44に記載のRNA。
実施形態B46.固形腫瘍は、上皮腫瘍、ホジキンリンパ腫(HL)、非ホジキンリンパ腫、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、消化管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を伴う腫瘍、中皮腫腫瘍、膵腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、脳腫瘍、メラノーマ腫瘍、小細胞肺腫瘍、神経芽腫腫瘍、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、神経膠腫腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、または骨肉腫腫瘍である、実施形態B44または45に記載のRNA。
実施形態B47.腫瘍内または腫瘍周囲投与される、実施形態B1~46のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B48.さらなる治療剤は、全身投与される、実施形態B39~47のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B49.対象はヒトである、実施形態B1~48のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B50.複数のRNAは、同時に投与される、実施形態B1~49のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B51.複数のRNAは、該RNAの組合せを含む組成物を投与することにより投与される、実施形態B1~50のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B52.複数のRNAのうちの少なくとも2つは、異なる時点で投与される、実施形態B1~49のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B53.複数のRNAは、前記RNAの少なくとも1つを各々の組成物が含む、少なくとも2つの組成物を投与することにより投与される、実施形態B1~49および52のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B54.がんを処置または予防することは、対象における腫瘍のサイズを縮小させること、寛解期のがんの再発を予防すること、またはがん転移を予防することを含む、実施形態B1~53のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B55.前記方法で投与される複数のRNAの1つもしくはそれ以上であるか、1つもしくはそれ以上を含む、実施形態B1~54のいずれか1つに記載のRNA。
実施形態B56.IL-12scタンパク質をコードするRNA、GM-CSFタンパク質をコードするRNA、IL-15 sushiタンパク質をコードするRNA、IL-2タンパク質をコードするRNA、およびIFNαタンパク質をコードするRNAからなる群から選択される1つもしくはそれ以上である、または1つもしくはそれ以上を含む、実施形態B55に記載のRNA。
実施形態B57.IL-12scタンパク質をコードするRNAであるか、またはそのようなRNAを含む、実施形態B55または56に記載のRNA。
実施形態B58.GM-CSFタンパク質をコードするRNAであるか、またはそのようなRNAを含む、実施形態B55または56に記載のRNA。
実施形態B59.IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAであるか、またはそのようなRNAを含む、実施形態B55または56に記載のRNA。
実施形態B60.IL-2タンパク質をコードするRNAであるか、またはそのようなRNAを含む、実施形態B55または56に記載のRNA。
実施形態B62.IL-12scタンパク質をコードするRNA、およびGM-CSFタンパク質をコードするRNAであるか、またはそのようなRNAを含む、実施形態B55または56に記載のRNA。
実施形態B63.IL-12scタンパク質をコードするRNA、GM-CSFタンパク質をコードするRNA、およびIL-15 sushiタンパク質をコードするRNAであるか、またはそのようなRNAを含む、実施形態B55または56に記載のRNA。
実施形態B64.IL-12scタンパク質をコードするRNA、GM-CSFタンパク質をコードするRNA、およびIL-2タンパク質をコードするRNAであるか、またはそのようなRNAを含む、実施形態B55または56に記載のRNA。
実施形態B65.IL-12scタンパク質をコードするRNA、GM-CSFタンパク質をコードするRNA、およびIFNαタンパク質をコードするRNAであるか、またはそのようなRNAを含む、実施形態B55または56に記載のRNA。
実施形態B66.IL-12scタンパク質をコードするRNA、GM-CSFタンパク質をコードするRNA、IL-15 sushiタンパク質をコードするRNA、およびIFNαタンパク質をコードするRNAであるか、またはそのようなRNAを含む、実施形態B55または56に記載のRNA。
実施形態B67.IL-12scタンパク質をコードするRNA、GM-CSFタンパク質をコードするRNA、IL-2タンパク質をコードするRNA、およびIFNαタンパク質をコードするRNAであるか、またはそのようなRNAを含む、実施形態B55または56に記載のRNA。
表1および2は、本明細書で言及される、ある特定の配列の一覧表を提供するものである。
I.定義
用語「ModB」は、少なくとも1つの(例えば、あらゆる)ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含むRNAであって、該RNAの5’末端にCap1構造をさらに含むRNAを表す。一部の実施形態では、ModB RNAの5’UTRは、配列番号4または6を含む。ModB RNAは、二本鎖RNA(dsRNA)を低減させるように処理されている。「Cap1」構造は、in vitro翻訳後に酵素的キャッピングにより生成されることもあり、またはin vitro翻訳中に生成(同時翻訳キャッピング)されることもある。
m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApG
(m2 7,3’-OG(5’)ppp(5’)m2’-OApGと呼ばれることもある)であり、これは、次の構造を有する:
チド(A、C、GおよびU)のランダム配列により分断されている。このようなランダム配列は、5~50ヌクレオチド長であることもあり、10~30ヌクレオチド長であることもあり、または10~20ヌクレオチド長であることもある。
AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGCAUAUGACUAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(配列番号78)
を含み、これは、表2中にも3’UTR配列に続いて示されている。
たはアミノ酸配列は、前記所与の配列の少なくとも1つの機能的特性を有することができ、例えば、および場合によっては、前記所与の配列と機能的に等価である。1つの重要な特性としては、特に、対象に投与されたとき、サイトカインとして作用することができることが挙げられる。一部の実施形態では、所与の核酸配列またはアミノ酸配列に対して特定の同一度を有する核酸配列およびアミノ酸配列は、前記所与の配列と機能的に等価である。
A.インターロイキン-2(IL-2)
一部の実施形態では、組成物は、インターロイキン-2(IL-2)(配列番号9)をコードするDNA配列を含む。一部の実施形態では、IL-2をコードするDNA配列は、配列番号10で提供される。
A配列は、配列番号12もしくは13に対して70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%もしくは99%の同一性を有するRNA配列を含むか、またはそのようなRNA配列からなる。
リAテールは、配列番号78を含むか、または配列番号78からなる。
一部の実施形態では、組成物は、IL-12 p40(IL-12Bと呼ばれることもある)と、GSリンカーのようなリンカーと、IL-12 p35(IL-12Aと呼ばれることもある)とを含む、インターロイキン-12単鎖(IL-12sc)(例えば、配列番号14)をコードするDNA配列を含む。一部の実施形態では、IL-12p40、リンカー、およびIL-12p35は連続しており、介在ヌクレオチドを有さない。IL-12scをコードする例示的DNA配列は、配列番号15で提供される。
、98%または99%の同一性を有するコドン最適化DNA配列を含む。一部の実施形態では、IL-12 p40をコードするコドン最適化DNA配列は、IL-12sc-p40(配列番号16のヌクレオチド1~984)をコードするヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、IL-12 p35をコードするコドン最適化DNA配列は、IL-12sc-p35(配列番号16のヌクレオチド1027~1623)をコードするヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、IL-12scをコードするコドン最適化DNA配列は、配列番号16のIL-12sc-p40部分(配列番号16のヌクレオチド1~984)およびIL-12sc-p35部分(配列番号16のヌクレオチド1027~1623)をコードするヌクレオチドを含み、さらに、p40部分とp35部分を接続するリンカーポリペプチドをコードするヌクレオチド(例えば、配列番号16のヌクレオチド985~1026)をp40部分とp35部分の間に含む。当業者に公知のいずれのリンカーを使用してもよい。p40部分は、p35部分の5’側にあってもよく、または3’側にあってもよい。
が挙げられる。
リジン(m1ψ)または5-メチル-ウリジン(m5U)である。一部の実施形態では、RNAは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)である。
配列番号8と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%もしくは100%同一である核酸配列を含むかまたはそのような核酸配列からなる、RNA配列を含む。一部の実施形態では、IL-12sc RNA中の1つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の修飾ヌクレオシドにより置換されている。一部の実施形態では、ウリジンを置換する修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)または5-メチル-ウリジン(m5U)である。
一部の実施形態では、組成物は、インターフェロンアルファ(IFNα)(例えば配列番号19)をコードするDNA配列を含む。IFNαをコードする例示的DNA配列は、配列番号20で提供される。
番号21に対して70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%もしくは99%の同一性を有するコドン最適化DNA配列を含むか、またはそのようなコドン最適化DNA配列からなる。
5%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%同一である。
チル-プソイドウリジン(m1ψ)または5-メチル-ウリジン(m5U)である。一部の実施形態では、RNAは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)である。
RNA中の1つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の修飾ヌクレオシドにより置換されている。一部の実施形態では、ウリジンを置換する修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)または5-メチル-ウリジン(m5U)である。
本明細書で使用される場合、用語「IL-15 sushi」は、可溶性インターロイキン15(IL-15)受容体アルファsushiドメインと成熟インターロイキンアルファ(IL-15)とを融合タンパク質として含む構築物を表す。一部の実施形態では、組成物は、可溶性IL-15受容体アルファ鎖(sushi)、続いてグリシン-セリン(GS)リンカー、続いてIL-15の成熟配列を含む、IL-15 sushi(配列番号24)をコードするDNA配列を含む。IL-15 sushiをコードするDNA配列は、配列番号25で提供される。
全に非存在であることもあり、または適切なリンカーをコードする任意のヌクレオチドで一部がもしくは全体が置換されていることもある。一部の実施形態では、RNA配列は、配列番号26を含むか、または配列番号26からなる。一部の実施形態では、RNA配列は、配列番号26に対して70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の同一性を有するRNA配列を含む。一部の実施形態では、IL-15 sushiをコードするDNAまたはRNA配列は、IL-15受容体アルファのsushiドメインをコードするヌクレオチド(例えば、配列番号25または26のヌクレオチド1~321)、および成熟IL-15をコードするヌクレオチド(例えば、配列番号25または26のヌクレオチド382~729)を含む。一部の実施形態では、IL-15 sushiをコードするDNAまたはRNA配列は、IL-15受容体アルファのsushiドメインをコードするヌクレオチド(例えば、配列番号25または26のヌクレオチド1~321)、および成熟IL-15をコードするヌクレオチド(例えば、配列番号25または26のヌクレオチド382~729)を含み、さらに、これらの部分の間に、これらの部分を接続するリンカーポリペプチドをコードするヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号25または26のヌクレオチド322~381を含む。当業者に公知の任意のリンカーを使用することができる。
TRは、RNAのポリアデニル化、翻訳効率、局在または安定性を調節する。一部の実施形態では、3’UTR RNA配列は、配列番号7から転写される。一部の実施形態では、3’UTR RNA配列は、配列番号8を含むか、または配列番号8からなる。一部の実施形態では、3’UTR RNA配列は、配列番号8と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%同一である。
からなるDNA配列から転写される。RNAは、組換えにより産生されることもある。一部の実施形態では、IFNα RNA中の1つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の修飾ヌクレオシドにより置換されている。一部の実施形態では、ウリジンを置換する修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)または5-メチル-ウリジン(m5U)である。一部の実施形態では、RNAは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)である。
一部の実施形態では、組成物は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)(例えば配列番号27)をコードするDNA配列を含む。一部の実施形態では、GM-CSFをコードするDNA配列は、配列番号28で提供される。
。一部の実施形態では、RNA配列は、配列番号29を含むか、または配列番号29からなる。一部の実施形態では、RNA配列は、配列番号29に対して70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の同一性を有するRNA配列を含む。
RNA配列は、配列番号2、4もしくは6を含むか、または配列番号2、4もしくは6からなる。一部の実施形態では、5’UTR RNA配列は、配列番号2、4または6と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%同一である。
を含む。一部の実施形態では、ポリAテールは、配列番号78を含むか、または配列番号78からなる。
な核酸配列からなる、DNA配列を含む。
本明細書に記載されるRNAおよび組成物の各々を、当業者に公知のいずれの方法で修飾してもよい。一部の実施形態では、修飾形態は、本明細書に記載の通り修飾された「ModA」または「ModB」である。
-ウリジン(m3U)、5-メトキシ-ウリジン(mo5U)、5-アザ-ウリジン、6-アザ-ウリジン、2-チオ-5-アザ-ウリジン、2-チオ-ウリジン(s2U)、4-チオ-ウリジン(s4U)、4-チオ-プソイドウリジン、2-チオ-プソイドウリジン、5-ヒドロキシ-ウリジン(ho5U)、5-アミノアリル-ウリジン、5-ハロ-ウリジン(例えば、5-ヨード-ウリジンもしくは5-ブロモ-ウリジン)、ウリジン5-オキシ酢酸(cmo5U)、ウリジン5-オキシ酢酸メチルエステル(mcmo5U)、5-カルボキシメチル-ウリジン(cm5U)、1-カルボキシメチル-プソイドウリジン、5-カルボキシヒドロキシメチル-ウリジン(chm5U)、5-カルボキシヒドロキシメチル-ウリジンメチルエステル(mchm5U)、5-メトキシカルボニルメチル-ウリジン(mcm5U)、5-メトキシカルボニルメチル-2-チオ-ウリジン(mcm5s2U)、5-アミノメチル-2-チオ-ウリジン(nm5s2U)、5-メチルアミノメチル-ウリジン(mnm5U)、1-エチル-プソイドウリジン、5-メチルアミノメチル-2-チオ-ウリジン(mnm5s2U)、5-メチルアミノメチル-2-セレノ-ウリジン(mnm5se2U)、5-カルバモイルメチル-ウリジン(ncm5U)、5-カルボキシメチルアミノメチル-ウリジン(cmnm5U)、5-カルボキシメチルアミノメチル-2-チオ-ウリジン(cmnm5s2U)、5-プロピニル-ウリジン、1-プロピニル-プソイドウリジン、5-タウリノメチル-ウリジン(τm5U)、1-タウリノメチル-プソイドウリジン、5-タウリノメチル-2-チオ-ウリジン(τm5s2U)、1-タウリノメチル-4-チオ-プソイドウリジン)、5-メチル-2-チオ-ウリジン(m5s2U)、1-メチル-4-チオ-プソイドウリジン(m1s4ψ)、4-チオ-1-メチル-プソイドウリジン、3-メチル-プソイドウリジン(m3ψ)、2-チオ-1-メチル-プソイドウリジン、1-メチル-1-デアザ-プソイドウリジン、2-チオ-1-メチル-1-デアザ-プソイドウリジン、ジヒドロウリジン(D)、ジヒドロプソイドウリジン、5,6-ジヒドロウリジン、5-メチル-ジヒドロウリジン(m5D)、2-チオ-ジヒドロウリジン、2-チオ-ジヒドロプソイドウリジン、2-メトキシ-ウリジン、2-メトキシ-4-チオ-ウリジン、4-メトキシ-プソイドウリジン、4-メトキシ-2-チオ-プソイドウリジン、N1-メチル-プソイドウリジン、3-(3-アミノ-3-カルボキシプロピル)ウリジン(acp3U)、1-メチル-3-(3-アミノ-3-カルボキシプロピル)プソイドウリジン(acp3ψ)、5-(イソペンテニルアミノメチル)ウリジン(inm5U)、5-(イソペンテニルアミノメチル)-2-チオ-ウリジン(inm5s2U)、α-チオ-ウリジン、2’-O-メチル-ウリジン(Um)、5,2’-O-ジメチル-ウリジン(m5Um)、2’-O-メチル-プソイドウリジン(ψm)、2-チオ-2’-O-メチル-ウリジン(s2Um)、5-メトキシカルボニルメチル-2’-O-メチル-ウリジン(mcm5Um)、5-カルバモイルメチル-2’-O-メチル-ウリジン(ncm5Um)、5-カルボキシメチルアミノメチル-2’-O-メチル-ウリジン(cmnm5Um)、3,2’-O-ジメチル-ウリジン(m3Um)、5-(イソペンテニルアミノメチル)-2’-O-メチル-ウリジン(inm5Um)、1-チオ-ウリジン、デオキシチミジン、2’-F-アラ-ウリジン、2’-F-ウリジン、2’-OH-アラ-ウリジン、5-(2-カルボメトキシビニル)ウリジン、5-[3-(1-E-プロペニルアミノ)ウリジンまたは当技術分野において公知の任意の他の修飾ウリジンのいずれか1つまたはそれ以上であってもよい。
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の1つより多くのRNAを含む組成物を含む。一部の実施形態では、組成物は、2つのRNAを含む。一部の実施形態では、組成物は、3つのRNAを含む。一部の実施形態では、組成物は、4つのRNAを含む。一部の実施形態では、組成物は、5つのRNAを含む。一部の実施形態では、IL-2、IL12sc、IL-15 sushi、GM-CSFまたはIFNαをコードするRNAのいずれかまたはすべては、例えば、本明細書に記載のこれらのRNAを含む組成物およ
び製剤のいずれにおいても、IL-2、IL12sc、IL-15 sushi、GM-CSFおよび/またはIFNαポリペプチドによって置換されていてもよい。
レオシドにより置換されている。一部の実施形態では、ウリジンを置換する修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)または5-メチル-ウリジン(m5U)である。一部の実施形態では、組成物中のRNAの1つまたはそれ以上は、本明細書中の組成物セクションに記載の5’キャップ、5’UTR、3’UTRおよびポリAテールをさらに含む。
/3、1/4、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9または1/10である比で、投与される。
RNAは、様々なパターン認識受容体(PRR)を刺激することによって免疫系を活性化することができ、その結果、I型インターフェロン(IFNαのような)の産生に至る。様々な修飾ヌクレオチド、または投与されるdsRNAの量を低減させることのような他の改変を組み込むことで、RNAの免疫刺激効果を低下させることができる。意外にも、実施例で説明されるように、インターフェロンアルファをコードする、ヌクレオチド修飾型およびdsRNA低減型mRNAの包含は、ヌクレオチド修飾がなく、dsRNAを低減させないmRNAの包含と比較して、抗腫瘍活性を向上させた。インターフェロンアルファをコードするmRNAの追加は、修飾ヌクレオチドおよびdsRNA精製の包含により除去された免疫刺激効果の一部分を回復させた。
本明細書に記載されるいずれのRNA、組成物、医療用製剤および組合せ組成物も、がんまたは固形腫瘍を処置するために対象に投与することができる。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、嚢胞も液状領域も含有しない組織の異常な塊である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、良性であってもよく、または悪性であってもよい。一部の実施形態では、固形腫瘍は、前がん性病変である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、肺、結腸、卵巣、子宮頸部、子宮、腹膜、精巣、陰茎、舌、リンパ節、膵臓、骨、乳房、前立腺、軟部組織、結合組織、腎臓、肝臓、脳、甲状腺または皮膚に存在する。
2イリジウム、または放射性ヨウ素である。一部の実施形態では、放射線療法は、静脈内投与される放射性同位元素製剤である。一部の実施形態では、放射性同位元素製剤は、放射性ヨウ素(131I)、ストロンチウム(89Sr)またはサマリウム(153Sm)である。
-3を含む。一部の実施形態では、免疫刺激因子、免疫療法、またはチェックポイントモジュレーター/阻害剤は、モノクローナル抗体である。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、PD1、PDL1、CTLA-4、LAG3、OX40、CD40、CD40L、41BB、41BBL、GITR、CD3、CD28、CD38またはTGFベータに対する抗体である。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、免疫刺激因子は、細胞に基づく免疫療法である。一部の実施形態では、免疫刺激因子は、サイトカインまたはケモカインである。一部の実施形態において、免疫刺激因子は、がんワクチンである。広範な免疫刺激因子が、当技術分野における技能を有する科学者および臨床医に公知であるので、本発明は、特定の免疫刺激因子との特異的な組合せに限定されない。
一部の実施形態では、次のCDRを含む抗体が包含される:
HCDR1=GFTFSNFG(配列番号81)
HCDR2=ISGGGRDT(配列番号82)
HCDR3=VKWGNIYFDY(配列番号83)
LCDR1=LSINTF(配列番号84)
LCDR2=AAS(配列番号85)
LCDR3=QQSSNTPFT(配列番号86)。
レトラゾール、ボロゾール、エキセメスタン)、抗プロゲストーゲン、抗アンドロゲン剤(例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、シプロテロン酢酸エステル)、LHRHアゴニストおよびアンタゴニスト(例えば、ゴセレリン酢酸塩、リュープロリド、ブセレリン)、ならびに5-アルファ-レダクターゼ阻害剤(例えば、フィナステリド)が挙げられる。
一部の実施形態では、本明細書に記載のいずれのDNA、RNAおよび組成物も医薬製剤である。一部の実施形態では、医薬製剤は、希釈剤、賦形剤、または他の薬学的に許容される担体を含む。したがって、本明細書で提供されるDNA、RNA、組成物またはその組合せと、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物が、本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、水溶液である。ある特定の実施形態では、水溶液は、食塩溶液である。本明細書で使用される場合、薬学的に許容される賦形剤は、無菌であると理解される。一部の実施形態では、医薬組成物は、投薬単位の形態で投与される。例えば、ある特定の実施形態では、投薬単位は、錠剤、カプセル、植込み型デバイス、またはボーラス注入の形態でのものある。
懸濁液はまた、高濃度溶液の調製を可能にするために、適切な安定剤と、医薬品の溶解度を上昇させる薬剤とを含有することもある。
条項1.IL-12scタンパク質をコードするRNAと、IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAと、IFNαタンパク質をコードするRNAと、GM-CSFタンパク質をコードするRNAとを含む、組成物。
条項2.IFNαタンパク質は、IFNα2bタンパク質である、条項1に記載の組成物。
条項3.(i)IL-12scタンパク質をコードするRNAは、配列番号17もしくは18のヌクレオチド配列、もしくは配列番号17もしくは18のヌクレオチド配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)IL-12scタンパク質は、配列番号14のアミノ酸配列、もしくは配列番号14のアミノ酸配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、条項1に記載の組成物。
条項4.(i)IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAは、配列番号26のヌクレオチド配列、もしくは配列番号26のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)IL-15 sushiタンパク質は、配列番号24のアミノ酸配列、もしくは配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、条項1に記載の組成物。
条項5.(i)IFNαタンパク質をコードするRNAは、配列番号22もしくは23のヌクレオチド配列、もしくは配列番号22もしくは23のヌクレオチド配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)IFNαタンパク質は、配列番号19のアミノ酸配列、もしくは配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、条項1に記載の組成物。
条項6.(i)GM-CSFタンパク質をコードするRNAは、配列番号29のヌクレオチド配列、もしくは配列番号29のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、および/または(ii)GM-CSFタンパク質は、配列番号27のアミノ酸配列、もしくは配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、条項1に記載の組成物。
条項7.少なくとも1つのRNAは、少なくとも1つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含み、該修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、5-メチル-ウリジン(m5U)、またはこれらの組合せである、条項1に記載の組成物。
条項8.各RNAは、少なくとも1つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含み、該修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、5-メチル-ウリジン(m5U)、またはこれらの組合せである、条項1に記載の組成物。
条項9.少なくとも1つのRNAは、5’キャップm2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApG、または3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)G、またはm2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApG、または3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gを含む、条項1に記載の組成物。
条項10.少なくとも1つのRNAは、(i)配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列、もしくは(ii)配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む5’UTR、および/または(i)配列番号8のヌクレオチド配列、もしくは(ii)配列番号8のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む3’UTRを含む、条項1に記載の組成物。
条項11.少なくとも1つのRNAは、少なくとも100ヌクレオチドのポリAテールを含む、条項1に記載の組成物。
条項12.ポリAテールは、配列番号78で示されるポリAテールを含む、条項11に記載の組成物。
条項13.1つまたはそれ以上のRNAは:
- m2 7,3’-OGppp(m1 2’-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gを含む5’キャップ;
- (i)配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または(ii)配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む5’UTR;
- (i)配列番号8のヌクレオチド配列、または(ii)配列番号8のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%もしくは80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む3’UTR;ならびに
- 少なくとも100ヌクレオチドを含むポリAテール
を含む、条1に記載の組成物。
条項14.ポリAテールは、配列番号78を含む、条項13に記載の組成物。
条項15.条項1に記載の組成物と薬学的に許容される担体、希釈剤および/または賦形剤とを含む、医薬組成物。
条項16.固形腫瘍を処置するまたは固形腫瘍の可能性を低下させる方法であって、それを必要とする対象に条項1に記載の組成物を投与することを含む方法。
条項17.固形腫瘍を処置するまたは固形腫瘍の可能性を低下させる方法であって、それを必要とする対象に第1のRNAを投与することを含み、第1のRNAは、IL-12
scタンパク質、IL-15 sushiタンパク質、IFNαタンパク質、またはGM-CSFタンパク質、およびさらなるRNAをコードし、ここで:
- 第1のRNAがIL-12scタンパク質をコードする場合には、さらなるRNAは、IL-15 sushiタンパク質、IFNαタンパク質、およびGM-CSFタンパク質をコードし;
- 第1のRNAがIL-15 sushiタンパク質をコードする場合には、さらなるRNAは、IL-12scタンパク質、IFNαタンパク質、およびGM-CSFタンパク質をコードし;
- 第1のRNAがIFNαタンパク質をコードする場合には、さらなるRNAは、IL-15 sushiタンパク質、IL-12scタンパク質、およびGM-CSFタンパク質をコードし;
- 第1のRNAがGM-CSFタンパク質をコードする場合には、さらなるRNAは、IL-15 sushiタンパク質、IFNαタンパク質、およびIL-12scタンパク質をコードする、前記方法。
条項18.第1のRNAは、さらなるRNAと同時に対象に投与される、条項17に記載の方法。
条項19.RNAは、腫瘍内または腫瘍周囲投与される、条項17に記載の方法。
条項20.対象は、(i)腫瘍を摘出、切除もしくは減量するための外科手術、(ii)免疫療法、(iii)放射線療法、または(iv)化学療法を含む、追加の治療でさらに処置される、条項17に記載の方法。
条項21.対象は、チェックポイントモジュレーターでさらに処置される、条項17に記載の方法。
条項22.チェックポイントモジュレーターは、抗PD1抗体、抗CTLA-4抗体、または抗PD1抗体と抗CTLA-4抗体の組合せである、条項21に記載の方法。
条項23.RNAは、注射によって腫瘍内または腫瘍周囲投与され、チェックポイントモジュレーターは、全身投与される、条項21に記載の方法。
条項24.固形腫瘍は、肉腫、癌腫またはリンパ腫である、条項17に記載の方法。
条項25.固形腫瘍は、肺、結腸、卵巣、子宮頸部、子宮、腹膜、精巣、陰茎、舌、リンパ節、膵臓、骨、乳房、前立腺、軟部組織、結合組織、腎臓、肝臓、脳、甲状腺または皮膚におけるものである、条項17に記載の方法。
条項26.固形腫瘍は、上皮腫瘍、ホジキンリンパ腫(HL)、非ホジキンリンパ腫、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、消化管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を伴う腫瘍、中皮腫腫瘍、膵腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、脳腫瘍、メラノーマ腫瘍、小細胞肺腫瘍、神経芽腫腫瘍、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、神経膠腫腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、または骨肉腫腫瘍である、条項17に記載の方法。
条項27.固形腫瘍を処置することまたは固形腫瘍の可能性を低下させることは、対象における、腫瘍のサイズを縮小すること、寛解期のがんの再発の可能性を低下させること、またはがん転移の可能性を低下させることを含む、条項17に記載の方法。
条項28.固形腫瘍を処置するまたは固形腫瘍の可能性を低下させる併用治療方法であって、それを必要とする対象にRNAおよびさらなる治療を投与することを含み、RNAは、IL-12scタンパク質、IL-15 sushiタンパク質、IFNαタンパク質、およびGM-CSFタンパク質をコードし、さらなる治療は、免疫療法、化学療法またはチェックポイントモジュレーターを含む、併用治療方法。
条項29.さらなる治療は、抗PD1抗体、抗CTLA-4抗体、または抗PD1抗体と抗CTLA-4抗体の組合せを含む、条項28に記載の併用治療方法。
条項30.IL-12scタンパク質をコードする配列を含む単離された核酸であって、IL-12scタンパク質をコードする配列は、a)配列番号16または18のヌクレオチド1~984に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%または78%の同一性を有する連続したヌクレオチドと、b)配列番号16または18のヌクレオチド1027~1623に対して少なくとも99%、98%、
97%、96%、95%、90%、85%または81%の同一性を有する連続したヌクレオチドと、c)a)のヌクレオチドとb)のヌクレオチドの間のリンカーをコードするヌクレオチドとを含む、単離された核酸。
条項31.DNAである、条項30に記載の核酸。
条項32.RNAである、条項30に記載の核酸。
条項33.IFNαタンパク質をコードする配列を含む、単離された核酸であって、IFNαタンパク質をコードする配列は、配列番号21または23のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%または80%の同一性を有する、前記単離された核酸。
条項34.DNAである、条項33に記載の核酸。
条項35.RNAである、条項33に記載の核酸。
条項36.固形腫瘍を処置するまたは固形腫瘍の可能性を低下させる方法であって、それを必要とする対象に条項34に記載のRNAを投与することを含み、対象は、IL-15 sushiタンパク質、IFNαタンパク質およびGM-CSFタンパク質をコードするさらなるRNAでさらに処置される、前記方法。
条項37.固形腫瘍を処置するまたは固形腫瘍の可能性を低下させる方法であって、それを必要とする対象に条項35に記載のRNAを投与することを含み、対象は、IL-15 sushiタンパク質、IL-12scタンパク質およびGM-CSFタンパク質をコードするさらなるRNAでさらに処置される、前記方法。
条項38.IL-12scをコードするRNAを産生する方法であって、プロモーターに作動可能に連結された条項32に記載の核酸を含む発現構築物を、転写可能な条件下で、RNAポリメラーゼと接触させることを含む、前記方法。
条項39.IFNαをコードするRNAを産生する方法であって、プロモーターに作動可能に連結された条項35に記載の核酸を含む発現構築物を、転写可能な条件下で、RNAポリメラーゼと接触させることを含む、前記方法。
条項40.条項1に記載の組成物を含む、キット。
条項41.IL-12scタンパク質をコードするRNAと、IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAと、IFNαタンパク質をコードするRNAと、GM-CSFタンパク質をコードするRNAとを含むキットであって、これらのRNAは、同じ容器内にない、前記キット。
条項42.各RNAは、別々の容器内にある、条項41に記載のキット。
条項43.固形腫瘍を処置するまたは固形腫瘍の可能性を低下させるための組成物またはRNAの使用説明書をさらに含む、条項40~42のいずれか1項に記載のキット。
品目に加えることができる他の同様の品目の除外への言及ではない。
B16F10腫瘍モデル:6~8週齢で17.0~20.9gの間の体重を有する雌C57BL/6Jマウス(Jackson Laboratory;Bar Harbor、ME)を、研究登録前に少なくとも3日間、順化させた。マウスは、餌(Harlan
2916齧歯動物用飼料、Massachusetts、USA)および滅菌水を自由に入手でき、12時間の昼夜サイクルで、22℃±2℃、相対湿度55%±15%でマウスを飼育した。B16F10細胞を米国培養細胞系統保存機関(ATCC)(Manassas、Virginia USA)(カタログ番号CRL-6475)から入手し、10%熱不活性化ウシ胎仔血清(HI FBS)(Life technologies、カタログ番号10082-147)を補充したダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)(Life technologies、カタログ番号11995)において5%CO2で、37℃で培養した。0.25%トリプシン-EDTA(Life technologies、カタログ番号25200-056)を使用して細胞を回収し、ダルベッコリン酸緩衝食塩水(DPBS)(Life technologies、カタログ番号14190-144)に再浮遊させ、マウス1匹当たり細胞0.5×106個/200μlを、雌C57BL/6Jマウスの右側腹部に皮下(SC)移植した。二重側腹部腫瘍モデルには、0日目に、マウス1匹当たりB16F10細胞0.5×106個/200μlを右側腹部に皮下(SC)移植し、マウス1匹当たりB16F10細胞0.25×106個/200μlを左側腹部にSC移植した。サイトカインmRNAの局所投与が、遠位効果を及ぼすことができるかどうかを試験するために(図19を参照されたい)、17~24gの間の体重を有する6~8週齢の雌C57BL/6JOlaHsdマウス(Envigo、Rossdorf、Germany)を、研究登録前に少なくとも6日間、順化させた。マウスは、餌(加熱滅菌処理可能なssniff M-Z、Soest、Germany)および滅菌水を自由に入手でき、12時間の昼夜サイクルで、22℃±2℃、相対湿度55%±10%でマウスを飼育した。B16F10細胞を米国培養細胞系統保存機関(ATCC(登録商標)CRL-6475(商標))から入手し、10%ウシ胎仔血清(FBS)(Biochrom、カタログ番号S 0115)を補充したDMEM、高グルコース、GlutaMAX(商標)(Life technologies、カタログ番号31966047)において、7.5%CO2で、37℃で培養した。StemPro(登録商標)Accutase(登録商標)細胞解離試薬(Life technologies、カタログ番号A1110501)を使用して細胞を回収し、ダルベッコリン酸緩衝食塩水(DPBS)(Life technologies、カタログ番号14190-169)に再浮遊させ、マウス1匹当たり細胞0.3×106個/100μlを、雌C57BL/6Jマウスの右側の剪毛した側腹部に皮下(SC)移植した。遠位肺腫瘍の播種には、B16F10_luc-gfp細胞を使用した。これらの細胞は、ルシフェラーゼおよびGFPをコードするプラスミドでの安定したトランスフェクションによってB16F10から得た。B16F10_luc-gfp細胞を、B16F10と同じ条件で培養し;だがしかし0.5μg/mL ピューロマイシンを培養培地に添加した。SC移植の翌日、マウス1匹当たりB16F10_luc-gfp細胞0.3×106個/200μlを尾静脈に静脈内(IV)注射した。腫瘍のSC接種の10~14日後に、腫瘍内mRNA注射を開始した。腫瘍成長を2~3日ごとにノギス測定によって評定し、次の式を使用して垂直直径の積として表した:a2×b/2(式中、a<b)。肺におけるルシフェラーゼ陽性腫瘍細胞の生着を、Xenogen IVIS Spectrumイメージン
グシステム(Caliper Life Sciences)を用いるin vivo生物発光イメージングにより分析した。L-ルシフェリンの水溶液(250μl、1.6mg;BD Biosciences)を腹腔内注射した。生存動物から放出される光子を1分の露光時間で10分後に定量した。関心領域(ROI)を、平均放射輝度(Caliper Life SciencesからのLiving Imageソフトウェアを使用してマウスのグレースケール写真に重ね合せたカラースケールの画像として表される、光子・s-1cm-2sr-1)として定量した。絶対定量のために、生物発光シグナルを全光束(光子・s-1)としてブロットした。図20C~Gおよび21E~Iに関して行った研究には、肺転移の播種を伴わない、C57BL/6JOlaHsdマウス(Envigo、Rossdorf、Germany)の上記モデルも、使用した。
gp70四量体-SPSYVYHQF-APC(MBL(TS-M-521-2)、血液100μLに対して4μL)と、抗CD8a FITC(life technolo
gies(MCD801)、血液100μLに対して1μL)と、抗CD45 V500(BD(561487)、血液100μLに対して1μL)とを含有する抗体混合物を添加した。室温で20分インキュベーション後、Blood Lysis Buffer(BD(349202)、チューブ1本当たり300μL)を添加し、さらに6分間インキュベートした。次いで、試料をPBS-EDTA緩衝液で2回洗浄した。FACS試料をFACS Canto IIフローサイトメーターで分析した。
Harbor、ME)を、研究登録前に少なくとも3日間、放置して順化させた。マウスは、餌(Harlan 2916齧歯動物用飼料、Massachusetts、USA)、滅菌水を自由に入手でき、12時間の昼夜サイクルで、(22±2℃)で、相対湿度(55%±15%)でマウスを飼育した。NCI-H1975細胞をATCC(カタログ番号CRL-5908)から入手し、10%HI FBS(Gibco、カタログ番号10082)を補充した、L-グルタミンを含有するRPMI培地1640(Gibco、カタログ番号11875)において培養し、37℃で、5%CO2でインキュベートした。0.25%トリプシン-EDTA(Gibco、カタログ番号25200)を使用して細胞を回収し、DPBS(Gibco、カタログ番号14190)に再浮遊させ、マウスごとに、50%マトリゲル(BD、カタログ番号356234)を含有するDPBS 200μl中の細胞5.0×106個を、雌NSGマウスの右側腹部にSC移植した。
00μlをSC注射により再負荷し、腫瘍成長をモニターした。
ロポレーションシステム(250V、パルス1×30ms)でエレクトロポレーションを行った。エレクトロポレーションの直後に、細胞を、抗生物質不含の新鮮培地が入っている新たな培養プレートに移し、1時間、37℃のインキュベーター内に静置した。0.5%FCSを補充した新鮮RPMI 1640 GlutaMAXに培地を交換し、15~18時間インキュベートした。上清を回収し、本明細書の中で説明するようにELISAによってタンパク質含有量について分析した。
HTB-140)をATCCから入手し、10%FBS HI FBS(Life Technologies、カタログ10082)を補充したDMEM(ThermoFisher Scientific、カタログ11885-084)において5%CO2の加湿雰囲気で、37℃で培養した。
Scale Discovery(MDS)アッセイにより判定した。
ra-sensitiveキット(カタログN05050A-1)を使用して、判定した。データは、MSD Discovery Workbench V.4.0.12ソフトウェアおよびGraphPad Prism V.6.00ソフトウェアを使用して解析した。
GM-CSF、IL-2およびIL-12scをコードする修飾mRNAの混合物をB16F10腫瘍担持マウスに注射し、腫瘍成長を41日目までモニターした。図1に示すように、ModAを有する、GM-CSF、IL-2およびIL-12scをコードする3つのmRNA(配列番号32、38および56;図1)の組合せ、またはModBを有する、GM-CSF、IL-2およびIL-12scをコードする3つのmRNA(配列番号35、41および59;図1B)の組合せの腫瘍内注射は、マウス10匹のうちの6匹において退縮を誘導したが、ルシフェラーゼをコードする対照mRNA(ModA)で処置したマウスは、動物10匹のうちの1匹において腫瘍退縮を示した(図1C)。これらのデータを同様のデザインの反復研究(図1D~1G)で確認した。反復実験では、ModAまたはModBを有するサイトカインmRNA(GM-CSF、IL-2、IL-12sc)の混合物は、マウス9匹のうち5匹において腫瘍退縮をもたらしたが、ModAおよびModBでの対照mRNAを用いる処置は、それぞれ、9匹のうち2匹、および9匹のうち0匹において腫瘍退縮を示した。
縮は認められなかった(図4E-ModA、図4F-ModB)。
本発明者らは、次に、サイトカインmRNA混合物に第4のmRNAを加えることの効果を試験した。B16F10腫瘍担持マウスに、i)GM-CSF、IL-2、IL-12sc(配列番号59、35および41;図5A)、ii)GM-CSF、IL-15 sushi、IL-12sc(配列番号59、53および41;図5B)およびiii)GM-CSF、IL-15 sushi、IL-12sc、IFNα(配列番号59、53、41および47;図5C)をコードするModBサイトカインmRNA混合物の4回の腫瘍内注射を施し、腫瘍成長を45日目までモニターした。サイトカインmRNA混合物の各々には抗腫瘍効果があり、GM-CSFとIL-2とIL-12scのまたはGM-CSFとIL-15 sushiとIL-12scとのサイトカインmRNA混合物の腫瘍内注射後に腫瘍8個のうちの4個が退縮し、GM-CSF、IL-15 sushi、IL-12scおよびIFNαでの処置時には腫瘍8個のうちの7個が退縮した。対照mRNA(ModB)で処置したマウスは、腫瘍退縮を示さなかった(図5D)。
sushi、IL-12scおよびIFNαの、ii)IL-15 sushi、GM-CSFおよびIFNαの、iii)IL-12sc、GM-CSFおよびIFNαの、iv)IL-15 sushi、IL-12scおよびGM-CSFの、ModB mRNA混合物で処置した腫瘍は、腫瘍10個のうちのそれぞれ8、6、8、7個の退縮を生じさせる結果となった(図8B~E)。対照mRNA(ModB)で処置した腫瘍は、腫
瘍退縮を示さなかった(図8F)。腫瘍成長動態を分析するために、平均腫瘍体積を処置群ごとに33日目まで計算した(図8G)。最小平均腫瘍体積は、IL-15 sushi、IL-12sc、GM-CSFおよびIFNαの混合物で処置したマウスについて観察され、その一方で、最大平均腫瘍体積は、ルシフェラーゼ処置動物において観察された。腫瘍成長抑制T/C(平均腫瘍体積の基づく、腫瘍/対照)を、処置群の各々について19日目までプロットした(図8H)。IL-15 sushi、IL-12sc、GM-CSFおよびIFNαの4成分混合物は、最大T/Cを示した。
びIFNα(ModB)についてはマウス8匹のうちの2匹、iii)IL-12sc、GM-CSFおよびIFNα、ならびにIL-2、IL-12scおよびIFNαについては、8匹のうちの3匹、およびiv)IL-2、IL-12scおよびGM-CSF(ModB)のサイトカインmRNA混合物で処置したマウス8匹のうちの4匹(図11)。
sushi、IL-12sc、GM-CSF、IFNα)または対照ルシフェラーゼmRNAの4回の腫瘍内注射(mRNA8μg/標的ごとに2μg)で、マウスを処置した。サイトカインmRNAの4成分混合物での処置は、処置したマウス6/10匹において腫瘍拒絶が生じる結果となった。図24Bを参照されたい。比較して、単一のmRNAで処置したいずれの群においても無腫瘍マウスは観察されなかった(図24C~F)。IL-15 sushi、IL-12sc、GM-CSF、IFNαの組合せは、全生存率上昇をもたらし、70日目に腫瘍のないマウスについて60%であったが、単一のサイトカインmRNAで処置したマウスのすべての腫瘍は、動物に安楽死を施す必要がある病期まで進行した(図24G)。ルシフェラーゼ対照を図24Aに示す。
免疫学的記憶の発生に対するサイトカインmRNA混合物の効果を評価するために、再負荷実験を行った。簡単に言うと、B16F10腫瘍担持マウスを、IL-15 sushi、IL-12sc、GM-CSFおよびIFNα(ModB;配列番号53、41、59および47)のサイトカインmRNA混合物で処置した。サイトカインmRNA処置B16F10腫瘍の一部分は完全に退縮し、無腫瘍動物をもたらした。次いで、これらの無腫瘍動物に、適応免疫記憶を評定する手段としてB16F10細胞を再負荷し、腫瘍生着の正の対照として、無処置マウス9匹にB16F10腫瘍細胞を移植した(図12A)。B16F10細胞を生着させたマウス9匹すべてが腫瘍を発生したが、無腫瘍マウス8匹すべては、B16F10細胞を拒絶し、B16F10腫瘍の成長を示さなかった(図12B)。サイトカインmRNAで以前に処置したマウスの一部分は、最初の腫瘍部位に限局性白斑を発症した(図12C)。この実験を本質的に反復した。結果を図33に示す。
全身性抗腫瘍応答を発揮する局所腫瘍内サイトカインmRNAの能力を評価するために、マウスの左右両方の側腹部にB16F10腫瘍細胞を生着させた(図13A)。両側B16F10腫瘍を担持しているマウスに、ルシフェラーゼをコードする対照mRNA、またはIL-15 sushi、IL-12sc、GM-CSFおよびIFNα(ModB;配列番号53、41、59および47)をコードするサイトカインmRNA混合物の、4回の腫瘍内注射を施した。右側の腫瘍にmRNAを3つの異なる用量レベル(20μg、2μgおよび0.2μg mRNA/標的に対応する、80μg、8μgおよび0.8μg mRNA)で注射したが、左側腹部の腫瘍を処置しなかった。用量依存的な抗腫瘍活性が、注射を施した腫瘍(図13B)と未注射の腫瘍(図13C)の両方で観察され、腫瘍成長阻害は、未注射の腫瘍における88%から注射を施した腫瘍における96%に及んだ。サイトカインmRNA処置で処置した群には、ルシフェラーゼ対照mRNAで処置した群と比較して生存率中央値上昇があった(図13D)。
ヒトサイトカインmRNAのin vitro発現を評価するために、ヒトサイトカインIL-15 sushi、IL-12sc、GM-CSFおよびIFNα2b(配列番号26、18、29および23)(ModB)をコードするmRNA混合物を、4つのメラノーマ腫瘍細胞株(A375、A101D、A2058およびHs294T)に加えてHEK293細胞株にトランスフェクトした(図14A)。サイトカインmRNA混合物は、5つのヒト細胞株のパネルにわたって用量依存的発現および分泌を示した(図14B~F)。
件培地を24時間の時点で回収し、希釈し、ヒトPBMCに添加した(図15A)。IL-15 sushi、IL-12sc、GM-CSFおよびIFNα2bのサイトカインmRNA混合物で処置したドナー6名からのIFNγレベル中央値は、5623pg/mLであったが、IL-12sc、IFNα2b、IL-15 sushiまたはGM-CSFの個々のサイトカインmRNAでの処置は、それぞれ、534、67、17および4pg/mLのIFNγレベル中央値を誘導した(図15B)。
える誘導を示し、腫瘍内mRNA注射後8時間までにピーク誘導が発生した。
B16F10腫瘍担持マウスに、IL-2、Flt3リガンド(FLT3L)、41BBL(CD137Lまたは腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー9としても公知)およびCD27L-CD40L(これは、CD70としても公知のCD27Lの可溶性ドメインとCD40Lの可溶性ドメインの融合タンパク質を含み;CD27LとCD40Lの両方が、CD27LまたはCD40Lのどちらかの3つの可溶性ドメインを含み、これらの可溶性ドメインのすべてが、GS-リンカー配列によって隔てられている)(図18A、配列番号32、62、68、および74)をコードする、ModA(「標準」)サイトカインmRNA、またはIL-2、FLT3L、41BBLおよびCD27L-CD40L(図18B、配列番号35、65、71、および77)をコードするModB(「修飾」)サイトカインmRNAの腫瘍内注射を施した。加えて、IFNαをコードするModA mRNA(配列番号44)、またはIFNαをコードするModB mRNA(配列番号47)のどちらかを、それぞれ、ModAまたはModB mRNA混合物に加えた(図18Dおよび18E)。抗腫瘍活性を評定した。
抗体の全身投与と組み合わせたサイトカインmRNAの腫瘍内注射の効果を評価するために、マウスの左右両方の側腹部にB16F10またはMC38腫瘍細胞を生着させた。マウスの側腹部の腫瘍の一方のみに、11、15、19、23日目に、IL-15 sushi、IL-12sc、GM-CSFおよびIFNα(ModB;配列番号53、41、59および47)のサイトカインmRNA混合物の4回の腫瘍内注射を施したが、他方の側腹部の腫瘍は、未処置のまま放置した。マウスには、10、13、16、19、22、25日目に、抗PD1抗体(5mg/kgでの、ラットIgG2a抗マウスPD-1クローンRMP1-14のSanofiマウス化バージョン)の腹腔内注射も施した。群は、次の通りであった:1)対照mRNA(全mRNA 80μg;1.6mg/mLでの50μL腫瘍内注射)、加えて、アイソタイプ抗体(クローンMOPC-21(BioLegend);5mg/kg);2)対照mRNA、加えて、抗PD1抗体;3)サイトカインmRNA、加えて、対照アイソタイプ抗体;および4)サイトカインmRNA、加えて、抗PD1。B16F10(図20A)およびMC38(図20B)腫瘍モデル両方において全生存率をモニターした。両方の腫瘍モデルにおいて、最高全生存率は、サイトカインmRNAと抗PD-1の組合せでの処置で観察され、この研究の終了時にB16F10担持マウスの60%およびMC38担持マウスの80%が無腫瘍であった。B16F10腫瘍モデルでは、抗PD-1またはサイトカインmRNA単独で処置したマウスの10%が無腫瘍であったが、MC38モデルでは、抗PD-1で処置したマウスの40%、およびサイトカイン単独で処置したマウスの30%が無腫瘍であった。これらの結果は、サイトカインmRNAと抗PD-1抗体の組合せに関連する強い抗腫瘍活性を示す。
、SC腫瘍は拒絶されたが、肺転移は徐々に増した。最高全生存率は、サイトカインmRNAと抗PD-1の組合せ処置で観察された。サイトカインmRNA単独で処置したマウスの6~7%は無腫瘍であったが、単独での抗PD-1、または対照mRNA+アイソタイプ抗体を施したマウスはすべて、高い腫瘍量のため、22日目に屠殺した。これらの結果は、肺疑似転移を有するこのB16F10腫瘍モデルにおけるサイトカインmRNAと抗PD-1抗体の組合せに関連する強い抗腫瘍活性を示すが、単独での抗PD-1抗体は、抗腫瘍活性を一切示さなかった。
インmRNA混合物の3回の腫瘍内注射を施した。腫瘍接種後13、17、20および24日目に、マウスに、抗CTLA-4抗体(マウス1匹当たり100μg/200μL;InVivoMAbからのクローン9H10)またはアイソタイプ対照抗体(マウス1匹当たり100μg/200μL;BioXCellからのアルメニアハムスターIgG)の腹腔内(IP)注射も施した。SC腫瘍の腫瘍成長はもちろん生存率もモニターした。群は、次の通りであった:1)サイトカインmRNA、加えて、抗CTLA-4抗体(図21E);2)サイトカインmRNA、加えて、アイソタイプ対照抗体(図21F);3)対照mRNA、加えて、抗CTLA-4抗体(図21G)および4)対照mRNA、加えて、アイソタイプ対照抗体(図21H)。腫瘍内サイトカインmRNAとIP注射抗CTLA-4の併用療法は、最も強い抗腫瘍活性を生じさせる結果となり、腫瘍接種後60日目にマウス9匹のうちの6匹が無腫瘍マウスであった(図21E)。サイトカインmRNA、加えて、アイソタイプ対照抗体での処置(図21F)は、抗腫瘍活性を然程誘導せず、マウス9匹のうち2匹が無腫瘍マウスであった。比較して、対照mRNA、加えて、抗CTLA-4抗体(図21G)または対照mRNA、加えて、アイソタイプ対照抗体(図21H)のどちらかを施した2群では、研究の終わりに無腫瘍マウスは残存しなかった。生存パーセントは、図21Iに描示されており、この図は、サイトカインmRNA単独で処置したマウスの33%が無腫瘍であった一方で、サイトカインmRNAと抗CTLA-4の組合せ処置では研究終了時(70日目)に腫瘍担持マウスについて67%である最高全生存率を示す。これらの結果は、単独での抗CTLA-4抗体が抗腫瘍活性を一切示さなかったこのB16F10腫瘍モデルにおいて、単独でのサイトカインmRNA、およびサイトカインmRNAと抗CTLA-4抗体の組合せに関連する、強い抗腫瘍活性を示す。
様々な種類のがんにおけるサイトカインmRNAの腫瘍内注射の効果を評価するために、5つの異種移植マウスモデル-KM12(CRC)、RPMI8226(骨髄腫)、NCI-N87(胃がん)、A375(メラノーマ)およびNCI-H1975(NSCLC)-を、実施例1で説明したように試験した。KM12(CRC)、RPMI8226(骨髄腫)、NCI-N87(胃がん)、A375(メラノーマ)、およびNCI-H1975(NSCLC)腫瘍を担持しているマウスに、IL-15 sushi、IL-12sc、GM-CSFおよびIFNα(ModB;配列番号26、18、29および23)のヒトサイトカインmRNA混合物 8μg(2μg/標的)の単回腫瘍内注射を施し、24時間の時点で腫瘍内のコードされたサイトカインを評定した。IL-15 sushi(図22D)、IL-12sc(図22A)、GM-CSF(図22C)およびIFNα(図22B)の4つのサイトカインの各々についての発現が、異種移植モデル5つすべてにおいて検出され、NCI-H1975に関して観察されたサイトカインレベルが最も高く、これにA375、NCI-N87、RPMI8226、そしてKM12が続いた。
コードされたサイトカインの発現に対する種々の腫瘍内mRNA用量の効果を、右側腹部に単一A375腫瘍を生着させたマウスの血清において検査した。マウスに、ヒトIL-15 sushi、IL-12sc、GM-CSFおよびIFNα(ModB;配列番号26、18、29および23)のサイトカインmRNA混合物の単回腫瘍内注射を施した。腫瘍内mRNA注射後6時間の時点で血清を採取し、サイトカイン発現をMeso Scale Discoveryアッセイによって分析した。mRNAにコードされたサイトカインの各々についての用量依存的発現が、80μg(20μg)の最高用量から0.0256μg(0.0064μg)の最低用量まで、血清中で観察された。結果を図2
3A~Dに示す。
一方の側腹部に単一のCT26腫瘍を担持しているマウスに、IL-15 sushi、GM-CSF、IFNαおよびIL-12sc(ModB;配列番号53、41、59および47)のサイトカインmRNA混合物の4回の腫瘍内注射を施した。初回腫瘍内mRNA投与の13日後に血液を採取し、gp70腫瘍抗原に対して特異的なT細胞をフローサイトメトリーにより定量した。血液中のgp70腫瘍抗原に対して特異的なT細胞の出現頻度は、mRNAサイトカインの腫瘍内注射時のマウスにおいて、対照RNAを施したマウスと比較して強く増加された。
左右側腹部にB16F10腫瘍を担持しているマウスの、細胞0.5×106個で発症させた右側の腫瘍に、mRNA 80μg(20μg/標的)の単回腫瘍内注射を施した(腫瘍を処置した)が、細胞0.25×106個で発症させた腫瘍は、未処置のままとした。mRNAの腫瘍内注射後7日の時点で、両方の腫瘍を採取し、RNAを単離し、RNA配列決定分析に供した。図27A~Cに示すように、IL-15 sushi、GM-CSF、IFNαおよびIL-12sc(配列番号59、53、41および47)のサイトカインmRNA混合物での処置は、様々なIFNガンマ応答遺伝子を含む複数の炎症誘発性経路を上方調節した。炎症誘発性/IFNガンマ関連経路の上方調節は、処置した腫瘍においても、未処置の腫瘍においても発生し、これは、局所腫瘍内処置に全身性免疫調節効果があることを支持した。
よびCD8+T細胞を増加させる
左右側腹部にB16F10腫瘍を担持しているマウスの、細胞0.5×106個で発症させた右側の腫瘍、腫瘍の一方のみ、にmRNA 80μg(20μg/標的)の単回腫瘍内注射を施した(腫瘍を処置した)が、細胞0.25×106個で発症させた他方の腫瘍は、未処置のままとした。腫瘍内mRNA注射後7日の時点で、両方の腫瘍を採取し、CD4+、CD8+およびFoxP3+細胞について抗体で染色するIHC(免疫蛍光顕微鏡法)のために処理した。図28Aおよび28Bにおける腫瘍からのマウスは、サイトカインmRNAで処置し、その一方で、図28CおよびDにおける腫瘍からのマウスは、対照mRNAで処置した。パネルAおよびCは、mRNAの注射を施した腫瘍からのものであり、その一方で、パネルBおよびDは、注射を施していない対応する反対側の腫瘍からのものである。(図28A~D)。サイトカインmRNA処置群と対照mRNA処置群の両方について、RNAの注射を施した腫瘍5つ、および未注射の対応する反対側の腫瘍5つを、CD4+、CD8+、FOXP3+細胞について免疫蛍光染色した。細胞の相対出現頻度および比を図28E、F、Gにプロットした。これらの結果は、IL-15 sushi、GM-CSF、IFNαおよびIL-12sc(配列番号59、53、41および47)のサイトカインmRNA混合物が、CD8+およびCD4+T細胞浸潤を増加させて、CD8+/Treg比の変化をもたらすことを示す。免疫浸潤の増加は、処置した腫瘍においても未処置の腫瘍においても発生し、これは、局所腫瘍内処置に全身性免疫調節効果があるという考えを支持した。
単一B16F10腫瘍を担持しているマウスに、Thy1.1タンパク質をコードするmRNAの単回腫瘍内注射を施した(図29A~G)。腫瘍内注射のおおよそ18時間後、腫瘍を解離させ、抗体のパネルで染色し、フローサイトメトリーを行って、Thy1.1タンパク質を発現する細胞を定義した。これらの結果は、腫瘍細胞と免疫細胞の両方がmRNAを取込み、発現することを示す。
B16F10腫瘍を担持しているマウスに、IL-15 sushi、GM-CSF、IFNαおよびIL-12sc(配列番号59、53、41および47)のサイトカインmRNA混合物80、8または0.8μgの単回mRNA注射を施した。腫瘍内注射のおおよそ6時間後、腫瘍を除去し、溶解し、腫瘍溶解物中のIL-15 sushi、GM-CSF、IFNαおよびIL-12sc、IFNガンマおよびIP-10のレベルを定量した。図30A~Fは、サイトカインmRNAが用量依存的に腫瘍内に発現されたことを示す。
B16F10腫瘍を担持しているマウスに、ホタルルシフェラーゼをコードするmRNA 50μgの単回腫瘍内注射を施した。6および24時間の時点で、マウス3匹を屠殺し、腫瘍、肝臓、脾臓、腫瘍流入領域リンパ節(TDLN)および非腫瘍流入領域リンパ節(NDLN)をex vivoでルシフェラーゼ発現について分析した。図32A~Bは、ルシフェラーゼ発現が腫瘍内で最も高度であり、腫瘍内での発現が、いずれの他の組織より100倍を超えて高度であったことを示す。
B16F10腫瘍を担持しているマウスの群を、合計4週間にわたって枯渇用抗体(抗CD4、抗CD8、抗NK1.1)100μgでの週1回の腹腔内注射により処置した。IL-15 sushi、GM-CSF、IFNαおよびIL-12sc(配列番号59、53、41および47)のサイトカインmRNA混合物 80μgでの処置の前日に、抗体媒介細胞枯渇を開始した。全生存率に対する抗体の枯渇効果をモニターした。図34に示すこれらの結果は、CD8+、CD4+またはNK細胞の個々の枯渇が、サイトカインmRNAの抗腫瘍活性および全生存率を、様々な程度に、低下させたことを示す。
WT C57BL6Jマウス、およびマウスIFNγが欠損している(IFNγKO)C57BL6Jマウスに、実施例1で説明したようにB16F10腫瘍細胞を移植した。IL-15 sushi、GM-CSF、IFNαおよびIL-12sc(配列番号59、53、41および47)のサイトカインmRNA混合物80μg(20μg/標的)または対照mRNA 80μgの腫瘍内注射によってマウスを処置し、全生存率をモニターした。図35に描示されているこれらの結果は、IFNγを欠いているマウスが、サイトカインmRNAで処置されたときに検出可能な抗腫瘍応答を示さなかったことを示す。
Claims (20)
- 対象における腫瘍のサイズを縮小させること、寛解期のがんの再発を予防すること、またはがん転移を予防することにおいて使用するための、IL-12scタンパク質をコードするRNAと、IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAと、IFNαタンパク質をコードするRNAと、GM-CSFタンパク質をコードするRNAとを含む、医薬組成物。
- RNAは、IL-12scタンパク質をコードするRNAと、IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAと、IFNαタンパク質をコードするRNAと、GM-CSFタンパク質をコードするRNAとからなる、請求項1に記載の医薬組成物。
- IFNαタンパク質は、IFNα2bタンパク質である、請求項1または2に記載の医薬組成物。
- (i)IL-12scタンパク質をコードするRNAは、配列番号17もしくは18のヌクレオチド配列、もしくは配列番号17もしくは18のヌクレオチド配列に対して少なくとも80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む;(ii)IL-12scタンパク質は、配列番号14のアミノ酸配列、もしくは配列番号14のアミノ酸配列に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む;または(i)および(ii)の組合せである、請求項1~3のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- (i)IL-15 sushiタンパク質をコードするRNAは、配列番号26のヌクレオチド配列、もしくは配列番号26のヌクレオチド配列に対して少なくとも80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む;(ii)IL-15 sushiタンパク質は、配列番号24のアミノ酸配列、もしくは配列番号24のアミノ酸配列に対して少なくとも
80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む;または(i)および(ii)の組合せである、請求項1~4のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - (i)IFNαタンパク質をコードするRNAは、配列番号22もしくは23のヌクレオチド配列、もしくは配列番号22もしくは23のヌクレオチド配列に対して少なくとも
80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む;(ii)IFNαタンパク質は、配列番号19のアミノ酸配列、もしくは配列番号19のアミノ酸配列に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む;または(i)および(ii)の組合せである、請求項1~5のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - (i)GM-CSFタンパク質をコードするRNAは、配列番号29のヌクレオチド配列、もしくは配列番号29のヌクレオチド配列に対して少なくとも80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む;(ii)GM-CSFタンパク質は、配列番号27のアミノ酸配列、もしくは配列番号27のアミノ酸配列に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む;または(i)および(ii)の組合せである、請求項1~6のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 少なくとも1つのRNAは、少なくとも1つのウリジンの代わりに、場合により各ウリジンの代わりに、修飾ヌクレオシドを含み、そして場合により各RNAは、少なくとも1つのウリジンの代わりに、場合により各ウリジンの代わりに、修飾ヌクレオシドを含む、請求項1~7のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、および5-メチル-ウリジン(m5U)から独立して選択される、請求項8に記載の医薬組成物。
- 少なくとも1つのRNAは、1つより多くのタイプの修飾ヌクレオシドを含み、該修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン(ψ)、N1-メチル-プソイドウリジン(m1ψ)、および5-メチル-ウリジン(m5U)から独立して選択される、請求項8に記載の医薬組成物。
- 少なくとも1つのRNAは、5’キャップ m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)Gを含み、場合により各RNAは、5
’キャップ m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’
)ppp(5’)Gを含む、請求項1~10のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - 少なくとも1つのRNA、場合により各RNAは、配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む5’UTRを含む、請求項1~11のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 少なくとも1つのRNA、場合により各RNAは、配列番号8のヌクレオチド配列、または配列番号8のヌクレオチド配列に対して少なくとも80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む3’UTRを含む、請求項1~12のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 少なくとも1つのRNA、場合により各RNAは、ポリAテールを含み、場合により該ポリAテールは、少なくとも100ヌクレオチドを含むか、または場合により該ポリAテールは、配列番号78で示されるポリAテールを含む、請求項1~13のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 1つまたはそれ以上のRNAは:
a.m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApGまたは3’-O-Me-m7G(5’)pp
p(5’)Gを含む5’キャップ;
b.(i)配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または(ii)配列番号2、4および6からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して
少なくとも80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む5’UTR;
c.(i)配列番号8のヌクレオチド配列、または(ii)配列番号8のヌクレオチド配列に対して少なくとも80%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む3’UTR;ならびに
d.少なくとも100ヌクレオチドを含むポリAテール、場合により該ポリAテールは、配列番号78で示されるポリAテールを含む、
を含む、請求項1~14のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - さらなる治療剤を用い、場合により該さらなる治療剤は、抗がん治療剤、場合によりチェックポイントモジュレーターであり、場合により該チェックポイントモジュレーターは、抗PD1抗体、抗CTLA-4抗体、または抗PD1抗体と抗CTLA-4抗体の組合せである、請求項1~15のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 腫瘍は、肉腫、癌腫またはリンパ腫である、請求項1~16のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 腫瘍は、肺、結腸、卵巣、子宮頸部、子宮、腹膜、精巣、陰茎、舌、リンパ節、膵臓、骨、乳房、前立腺、軟部組織、結合組織、腎臓、肝臓、脳、甲状腺または皮膚におけるものである、請求項1~17のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 腫瘍は、上皮腫瘍、ホジキンリンパ腫(HL)、非ホジキンリンパ腫、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、消化管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を伴う腫瘍、中皮腫腫瘍、膵腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、脳腫瘍、メラノーマ腫瘍、小細胞肺腫瘍、神経芽腫腫瘍、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、神経膠腫腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、または骨肉腫腫瘍である、請求項1~18のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- RNAは、腫瘍内または腫瘍周囲投与される;
RNAは、液体、固体、またはこれらの組合せとして製剤化される;
RNAは、注射用に製剤化される;
対象はヒトである;
複数のRNAは、同時に投与される;
複数のRNAは、注射によって投与され、該RNAは、注射の前に液体溶液中で混合される;
複数のRNAは、該RNAの組合せを含む組成物を投与することにより投与される;または
上記の1つまたはそれ以上の組合せである、
請求項1~19のいずれか1項に記載の医薬組成物。
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