JP7149337B2 - アミド調製のための微生物プロセス - Google Patents
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Description
R(R’)(R’’)C-CONH2 (I)
を有するアミドの調製のための微生物プロセスであって、式:
R(R’)(R’’)C-CN (II)
を有するニトリルの反応を含み、
Microorganisms BCCM-LMGのコレクションに寄託され、寄託番号LMG P-29520を有し、「Palladio 22」と命名された、ロドコッカス・ビフェニリボランス(Rhodococcus biphenylivorans)の菌株により生成されたニトリルヒドラターゼ酵素を用いる微生物プロセスであり、
式中、
R、R’およびR’’の中の少なくとも1個は水素とは異なり、
R、R’およびR’’は、互いに同一または異なり、独立して、水素、C1-C6アルキル基、C1-C6アルコキシ基、C1-C6アルコキシカルボニル基、C2-C6アルケニル基、所望により=O基を含有しているC3-C6シクロアルキル基、R’’’CO-、少なくとも1個の原子がNまたはOである3~6個の原子を有する複素環、アリールスルホニル基、C1-C6アルキルスルホニル基、アリール基、アリールアミノカルボニル基およびC1-C6アルキルアミノカルボニル基から選択され、
R’’’は、C1-C6アルキル、アリール、アミノ、ヒドラジノであり、
各R、R’、R’’およびR’’’は、水素と異なる場合、ハロゲン基、ニトリル基、アミノ基、C1-C6アルキルアミノ基、ヒドロキシ基、C1-C6アルコキシ基、アリール基から選択される1個以上の置換基に置換されていてもよく、
ただし、式Iの化合物はアクリルアミドではない。
2-クロロアセトアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、2-クロロアセトニトリル(38mg、0.5mmol)を、MeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いて、1H-NMRで分析した。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、真空下にて蒸発させた。1.5時間後に、2-クロロアセトアミドへの合計変換率を観察した。
1H-NMR(CD3OD、300.13MHz):4.05-4.83(s、2H)であり、商業的に利用可能な試料2-クロロアセトアミドに相当する。
2,2-ジエトキシアセトアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、2,2-ジエトキシアセトニトリル(65mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いて、1H-NMRで分析した。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、真空下にて蒸発させた。1.5時間後に、2,2-ジエトキシアセトアミドへの合計変換率を観察した。
1H-NMR(CD3OD、300.13MHz):1.44(t、6H、3JHH=6.0Hz)、3.61-3.70(m、4H)、4.81(s、1H)であり、商業的に利用可能な試料2,2-ジエトキシアセトアミドに相当する。
tert-ブチル4-カルバモイルピペリジン-1-カルボキシレート
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、tert-ブチル4-シアノピペリジン-1-カルボキシレート(105mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてHPLC-MSを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、HPLCに直接注入した。7時間後に、tert-ブチル4-カルバモイルピペリジン-1-カルボキシレートへの40%の変換率を観察した。
MS(ES+):m/z:173.0[M-55]。MS(ES-):m/z:227.0[M-1]。
HPLCクロマトグラムは、tert-ブチル4-カルバモイルピペリジン-1-カルボキシレートの合成試料に相当した。RRT3=1、RRT3a=0.87。
2-(フェニルスルホニル)アセトアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、2-(フェニルスルホニル)アセトニトリル(91mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてHPLC-MSを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、HPLCに直接注入した。
MS(ES+):m/z:200.1[M+1]、217.1[M+18]。RRT4a=0.36。
メチル3-アミノ-3-オキソプロパノエート
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、メチル2-シアノアセテート(91mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてHPLC-MSおよび1H-NMRを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、HPLCに直接注入した。注入しなかった残りの試料は、真空下で蒸発させ、1H-NMRによって分析した。1.5時間後に合計変換率を観察した。
1H-NMR(CD3OD、300.13MHz):3.77(s、2H)、3.98(s、3H)。
MS(ES+):m/z:118.1[M+1]。
3-(フェニルアミノ)プロパンアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、3-(フェニルアミノ)プロパンニトリル(73mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてHPLC-MSを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、HPLCに直接注入した。2.5時間後に合計変換率を観察した。
MS(ES+):m/z:165.1[M+1]。RRT8=1、RRT8a=0.51。
3,3-ジメトキシプロパンアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、3,3-ジメトキシプロパンニトリル(58mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてGC-MSを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過した。試料に水(2mL)を添加し、試料をEtOAc(4mL)で抽出した。有機相をNa2SO4上で乾燥させ、ろ過し、GC-MSに直接注入した。7時間後に、ほぼ完全な変換が観察された。
MS(ES+):m/z:156.1[M+23]。RRT9=1、RRT9a=1.22。
2-(2-アミノフェニル)アセトアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、2-(2-アミノフェニル)アセトニトリル(66mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてHPLC-MSを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、HPLCに直接注入した。2.5時間後に合計変換率を観察した。
MS(ES+):m/z:151.1[M+1]。RRT10=1、RRT10a=0.48。
2-アミノ-2-オキソアセトヒドラジド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、2-シアノアセトヒドラジド(50mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いて、1H-NMRで分析した。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、真空下で蒸発させ、1H-NMRによって分析した。1.5時間後に合計変換率を観察した。1H-NMR(CD3OD、300.13MHz):3.48-3.58(m、2H)。
2-(2-シアノフェニル)アセトアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、2-(シアノメチル)ベンゾニトリル(71mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてHPLC-MSおよび1H-NMRを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、HPLCに直接注入した。注入しなかった残りの試料は、真空下で蒸発させ、1H-NMRによって分析した。1.5時間後に合計変換率を観察した。
1H-NMR(CD3OD、300.13MHz):3.81(s、2H)、7.49(t、2H、3JHH=7.6Hz)、7.70(d、2H、3JHH=7.6Hz)。
MS(ES+):m/z:161.1[M+1]
2-(イソプロピルスルホニル)アセトアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、2-(イソプロピルスルホニル)アセトニトリル(74mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてHPLC-MSおよび1H-NMRを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、HPLCに直接注入した。注入しなかった残りの試料は、真空下で蒸発させ、1H-NMRによって分析した。1.5時間後に合計変換率を観察した。
1H-NMR(CD3OD、300.13MHz):1.35(s、3H)、1.38(s、1H)、3.52-3.61(m、1H)、4.60(s、2H、CD3ODの水とオーバーラップ)。
MS(ES+):m/z:166.1[M+1]。RRT14=1、RRT14a=0.54。
エチル(R)-5-アミノ-3-ヒドロキシ-5-オキソペンタノエート
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、エチル(R)-4-シアノ-3-ヒドロキシブタノアート(79mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いて、1H-NMRで分析した。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、真空下で蒸発させ、1H-NMRによって分析した。7時間後に34%の変換率を観察した。
1H-NMR(CD3OD、300.13MHz):1.35(t、3H、3JHH=2.3Hz)、2.41-2.77(4H、m、出発化合物の信号とオーバーラップ)、3.70(s、2H)、4.40-4.43(m、1H)。
MS(ES+):m/z:176.1[M+1]。
N1-フェニルマロンアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(8mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、2-シアノ-N-フェニルアセトアミド(80mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてHPLC-MSを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、HPLCに直接注入した。4時間後に低い変換率(13%)が観察された。
MS(ES+):m/z:176.9[M-1]。RRT17=1、RRT17a=0.61。
メチル1-カルバモイルシクロペンタン-1-カルボキシレート
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、メチル1-シアノシクロペンタン-1-カルボキシレート(77mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてGC-MSを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過した。試料に水(2mL)を添加し、試料をEtOAc(4mL)で抽出した。有機相をNa2SO4上で乾燥させ、ろ過し、GC-MSに直接注入した。7時間後に約72%の変換率が観察された。
MS(ES+):m/z:171.9[M+1]。RRT19=1、RRT19a=1.11。
6-ブロモ-2,2-ジメチルヘキサンアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、6-ブロモ-2,2-ジメチルヘキサンニトリル(102mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてGC-MSを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過した。試料に水(2mL)を添加し、試料をEtOAc(4mL)で抽出した。有機相をNa2SO4上で乾燥させ、ろ過し、GC-MSに直接注入した。7時間後に約64%の変換率が観察された。
MS(ES+):m/z:223.9[M+1]。RRT20=1、RRT20a=1.12。
(E)-5-シアノペンタ-3-エナミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、(E)-ヘキサ-3-エンジニトリル(53mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いて、1H-NMRで分析した。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、真空下で蒸発させ、1H-NMRによって分析した。1.5時間後に97%の変換率を観察した。1H-NMRスペクトルから、約7%の割合での対応するジアミドの存在を仮定することができる。
1H-NMR(CD3OD、300.13MHz):3.00-3.19(m、2H)、3.21-3.30(m、2H)、5.55-5.50(m、1H)、5.90-6.00(m、1H)。
MS(ES+):m/z:142.1[M+18]。
2-((シアノメチル)アミノ)アセトアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、2,2’-アザンジイルジアセトニトリル(48mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いて、1H-NMRで分析した。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、真空下で蒸発させ、1H-NMRによって分析した。1.5時間後に合計変換率を観察した。1H-NMRスペクトルから、対応するジアミド(約30%)の存在を仮定することができる。
1H-NMR(CD3OD、300.13MHz):3.336(s、2H)、3.68(s、2H)。
MS(ES+):m/z:113.9[M+1]。
N1-ベンジルマロンアミド
NHaseを乳鉢で粉砕し、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、pH=7.4)(9mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、N-ベンジル-2-シアノアセトアミド(80mg、0.5mmol)をMeOH(1mL)に溶解した懸濁液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてHPLC-MSを行った。試料(1mL)を、1.5時間後、2.5時間後、4時間後および7時間後に分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、HPLCに直接注入した。4時間後に80%の変換率を観察した。
MS(ES+):m/z:193.1[M+1]。RRT25=1、RRT25a=0.65。
2-フェニルアセトアミド
NHase(4mg)を、50mL三角フラスコにおいて、リン酸カリウム緩衝液(10mM、1%MeOH、pH=7.4)(10mL)中の2-フェニルアセトニトリル(59mg、0.5mmol)の溶液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃で攪拌した。試料(200μL)をHPLC-MSおよび1H-NMRによって測定した。反応を4時間後に停止した。反応物をDCM(15mL×2)によって抽出した。有機層を合わせ、Na2SO4上で乾燥させ、ろ過し、真空下にて蒸発させた。2-フェニルアセトアミドを白色固体として、37%の収率で単離した。
1H-NMR(CDCl3、300.13MHz):3.70(s、2H)、5.16(bs、1H)、5.73(bs、1H)、7.27-7.43(m、5H)。
3-フェニルプロパンアミド
NHase(4mg)を、50mL三角フラスコにおいてリン酸カリウム緩衝液(10mM、1%MeOH、pH=7.4)(10mL)中の3-フェニルプロパンニトリル(66mg、0.5mmol)の溶液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃で攪拌した。試料(200μL)をHPLC-MSおよび1H-NMRによって測定した。反応を4時間後に停止した。反応物をDCM(15mL×2)によって抽出した。有機層を合わせ、Na2SO4上で乾燥させ、ろ過し、真空下にて蒸発させた。3-フェニルプロパンアミドを白色固体として、99%の収率で単離した。
1H-NMR(CDCl3、300.13MHz):2.55(t、2H、3JHH=8.2Hz)、3.00(t、2H、3JHH=8.2Hz)、5.16-5.47(bs、1H)、5.73(bs、1H)、7.17-7.36(m、5H)。
エチル3-アミノ-3-オキソ-2-フェニルプロパノエート
NHase(4mg)を、50mL三角フラスコにおいて、リン酸カリウム緩衝液(10mM、1%トルエン、pH=7.4)(10mL)中の(±)エチル2-シアノ-2-フェニルアセテート(59mg、0.5mmol)の溶液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃で攪拌した。試料(500μL)をDCMで抽出し、UPC-MSによって測定した。反応を異なる時間で分析した。これらの条件で1時間後に観察される変換率は30%であり、97%eeを有するエチル3-アミノ-3-オキソ-2-フェニルプロパノエートを得た。
合成経路により得られたアミドの1H-NMRスペクトルと比較して、構造を確認した。
2-フェニルプロパンアミド
NHase(4mg)を、50mL三角フラスコにおいて、リン酸カリウム緩衝液(10mM、1%トルエン、pH=7.4)(10mL)中の(±)2-フェニルプロパンニトリル(66mg、0.5mmol)の溶液に添加した。反応物を回転振とうにより、25℃で攪拌した。試料(500μL)をDCMで抽出し、GC-MSによって測定した。反応を異なる時間で分析した。これらの条件で1時間後に観察される変換率は83%であり、82%eeを有する(S)-2-フェニルプロパンアミドを得た。
合成経路により得られたアミドの1H-NMRスペクトルと比較して、構造を確認した。
5-シアノペンタンアミド
NHase(16mg)を乳鉢で粉砕し、100mL三角フラスコにおいて、脱塩水(40mL)に添加した。懸濁液をボルテックスで混合し、トルエン(400μL)に溶解したこの懸濁液に、アジポニトリル(224μL、0.5mmol)を添加した。反応物を回転攪拌により、25℃および250rpmで攪拌した。反応に続いてGC-MSを行った。試料(1mL)を適時分析した。試料をMeOH(2mL)と混合し、ろ過し、真空下で蒸発させ、MeOHに溶解させた。5-シアノペンタンアミド(92mg)を、37%の収率で単離した。
RRTamide=1.12、RRTnitrile=1。
1H-NMR(CD3OD、300.13MHz):1.59-1.84(m、4H)、2.26(t、2H、3JHH=7.0Hz)、2.49(t、2H、3JHH=7.0Hz)。
MS(EI):m/z:126.1[M]
Claims (10)
- 式:R(R’)(R’’)C-CONH2 (I)
を有するアミドの調製のための微生物プロセスであって、
式:R(R’)(R’’)C-CN (II)
を有するニトリルの反応を含み、
Microorganisms BCCM-LMGのコレクションに寄託され、寄託番号LMG P-29520を有し、「Palladio 22」と命名された、ロドコッカス・ビフェニリボランス(Rhodococcus biphenylivorans)の菌株により生成されたニトリルヒドラターゼ酵素を用いる微生物プロセスであり、
式中、R、R’およびR’’の中の少なくとも1個は水素とは異なり、
R、R’およびR’’は、互いに同一または異なり、独立して、水素、C1-C6アルキル基、C1-C6アルコキシ基、C1-C6アルコキシカルボニル基、C2-C6アルケニル基、C 3 -C 6 シクロアルキル基、=O基を含有しているC3-C6シクロアルキル基、R’’’CO-、ピロリジニル、ピロリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、モルホリニル、テトラヒドロピラニル、アゼチジニル、オキセタニル、フタルイミド、スクシンイミド、アリールスルホニル基、C1-C6アルキルスルホニル基、アリール基、アリールアミノカルボニル基およびC1-C6アルキルアミノカルボニル基から選択され、
R’’’は、C1-C6アルキル、アリール、アミノ、または、ヒドラジノであり、
各R、R’、およびR’’は、水素と異なる場合、およびR’’’は、ハロゲン基、ニトリル基、アミノ基、C1-C6アルキルアミノ基、ヒドロキシ基、C1-C6アルコキシ基、アリール基から選択される1個以上の置換基に置換されるまたは置換されていない、
ただし、式Iの前記化合物はアクリルアミドではない、アミド調製のための微生物プロセス。 - R、R’、R’’およびR’’’の中の少なくとも1個が、酸、塩基性もしくは中性の触媒または追加のニトリル基、エステル基、アミド基、ハロアルキル基、アンモニウム塩から選択される環境の下で、加水分解または加溶媒分解に反応性の高い官能基であるか、またはそのような官能基を含有する、式Iのアミドの調製のための、請求項1に記載の微生物プロセス。
- 前記酵素が、105℃で、20~45%の範囲の乾燥残留物を有する、ペースト状のバイオマスの形態で使用される、請求項1または2に記載の微生物プロセス。
- 前記酵素が、105℃で、90~100%の乾燥残留物を有する、乾燥/凍結乾燥されたバイオマスの形態で使用される、請求項1または2に記載の微生物プロセス。
- 前記バイオマスが、固体タイプの培地上に固定化される、請求項3または4に記載の微生物プロセス。
- 水溶液中で、有機共溶媒の存在下で実施される、請求項1~5のいずれか一項に記載の微生物プロセス。
- 前記共溶媒が、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、メチル-テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサエオ(dioxaeo)、トルエン、t.BuOMeから選択される、請求項6に記載の微生物プロセス。
- 共溶媒の量が、2v/v%~20v/v%である、請求項6に記載の微生物プロセス。
- 前記反応が、pH6.0~9.0で実施される、請求項1~8のいずれか一項に記載の微生物プロセス。
- 前記反応が、10~45℃の温度にて実施される、請求項1~9のいずれか一項に記載の微生物プロセス。
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