JP7134502B2 - メチオニルtRNA合成酵素を利用した膵臓癌の診断方法及びこれを利用した膵臓癌の診断キット - Google Patents
メチオニルtRNA合成酵素を利用した膵臓癌の診断方法及びこれを利用した膵臓癌の診断キット Download PDFInfo
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Description
(b)前記(a)段階で測定したメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準を陰性対照群と比較して、メチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階を含むことを特徴とする膵臓癌の診断方法を提供するものである。
(a)潜在患者から採取した膵臓試料でメチオニルtRNA合成酵素(methionyl tRNA synthetase)蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階でメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階。
(a)潜在患者から採取した膵臓試料でメチオニルtRNA合成酵素(methionyl tRNA synthetase)蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階でメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階を含むことを特徴とする膵臓癌細胞判別法をさらに遂行することを特徴とする、膵臓癌診断に必要な情報を提供する方法(膵臓癌診断方法)を提供することである。
(b)前記(a)段階で測定したメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準を陰性対照群と比較して、メチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階を含むことを特徴とする膵臓癌の診断方法を提供する。
(a)潜在患者から採取した膵臓試料でメチオニルtRNA合成酵素(methionyl tRNA synthetase)蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階でメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階。
(a)潜在患者から採取した膵臓試料でメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階でメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階を含むことを特徴とする膵臓癌細胞の判別法をさらに、含むことを特徴とする膵臓癌診断に必要な情報を提供する方法(膵臓癌診断方法)を提供する。
本明細書に開示された内容全般にわたって、本発明と関連する様々な様相又は条件らが範囲形式で提供されることがある。本明細書で範囲値の記載は、別の言及がない限り、その境界値を含むものであって、すなわち、下限値以上乃至上限値以下の値を全て含む意味である。範囲形式の記述は単に便宜性及び簡潔性のためのものであって、本発明の範囲に対する融通性のない制限(inflexible limitation)として解釈されてはならないものと理解されるべきである。従って範囲の叙述は、前記範囲内の個別的な数値だけでなく、全ての可能な下部範(subrange)囲を具体的に開示したもので考慮されるべきである。例えば、1乃至5のような範囲の叙述は、前記の範囲内の個別的数値、例えば、1、2、2.7、3、3.5、4.3及び5だけでなく、1乃至3、1乃至4、2乃至5、2乃至3、2乃至4、3乃至4などのような下部範囲を具体的に開示したものと見做されるべきである。これは範囲の幅とは関係無く適用される。
(a)潜在患者から採取した膵臓試料でメチオニルtRNA合成酵素(methionyl-tRNA synthetase)蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階でメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階を含むことでもある。
(i)潜在患者から採取した膵臓細胞を、細胞核を染色するDAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole)、メチレンブルー(methylene blue)、酢酸カルミン(acetocarmine)、トルイジンブルー(toluidine blue)、ヘマトキシリン(hematoxylin)及びヘキスト(Hoechst)からなる群から選択された一つ以上の染色溶液、及び
細胞質を染色するエオシン(eosin)、クリスタルバイオレット(crystal violet)及びオレンジ G(orange G)からなる群から選択された一つ以上の染色溶液で細胞染色する段階;及び
(ii)前記細胞染色により膵臓細胞を悪性腫瘍細胞、異型細胞(atypical cell)又は正常細胞に判断する段階。
細胞が一層で塗抹されていて、細胞核/細胞質比率(N/C ratio)が小さく核膜が滑らかな場合には、正常細胞と判定し、
細胞の変化が悪性細胞にまでは及ばないものの、正常(benign)と判定することができない場合、異型細胞(atypical cell)と判定する。
本発明は、(a)潜在患者から採取した膵臓試料でメチオニルtRNA合成酵素(methionyl-tRNA synthetase)蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階で測定したメチオニルtRNA合成酵素水準を陰性対照群と比較して、メチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階を含むことを特徴とする膵臓癌の診断方法を提供する。
膵臓癌に対する細胞診(cytodiagnosis)検査又は組織検査において、下記の段階を含むことを特徴とする感受性又は/及び特異性を向上させる方法を提供する:
(a)潜在患者から採取した膵臓試料からメチオニルtRNA合成酵素(methionyl-tRNA synthetase)蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階でメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階。
(a)潜在患者から採取した膵臓試料においてメチオニルtRNA合成酵素(methionyl-tRNA synthetase)蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階でメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階を含むことを特徴とする膵臓癌細胞判別法をさらに遂行することを特徴とする膵臓癌診断に必要な情報を提供する方法(膵臓癌診断方法)を提供する。
(a)潜在患者から採取した膵臓試料でMRS蛋白質及びCK19蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階でCK19蛋白質が検出(発現)されてメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階を含むものでもある。
(a)潜在患者から採取した膵臓試料でMRS蛋白質及びCK19蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階で測定したメチオニルtRNAの合成酵素蛋白質の発現水準を陰性対照群と比較してメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加し、CK19蛋白質が発現している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階を含むことを特徴とする膵臓癌の診断方法を提供する。
(a)潜在患者から採取した膵臓試料からメチオニルtRNA合成酵素(methionyl-tRNA synthetase)蛋白質及びサイトケラチン-19(Cytokeratin 19, CK19)蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階でサイトケラチン-19蛋白質が検出(発現)されてメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階。
(a)潜在患者から採取した膵臓試料でメチオニルtRNA合成酵素(methionyl-tRNA synthetase)蛋白質とサイトケラチン-19(Cytokeratin 19, CK19)蛋白質の発現水準を測定する段階;及び
(b)前記(a)段階でサイトケラチン-19蛋白質が検出(発現)されてメチオニルtRNA合成酵素蛋白質の発現水準が増加している場合、前記潜在患者を膵臓癌患者であると判断する段階を含むことを特徴とする膵臓癌細胞判定法を追加して行うことを特徴とする膵臓癌診断に必要な情報を提供する方法(膵臓癌診断方法)を提供する。
但し、下記の実施例は本発明を例示するものであり、本発明の内容が下記の実施例に限定されるものではない。
生体内でMRS(methyonyl-tRNA synthetase)はAIMP3(Aminoacyl tRNA synthetase complex-interacting multifunctional protein 3)と結合された状態で存在し、UV照射などによって、これらの結合状態が分離されるものと知られている。従って、実質的にMRSの正確な検出のためには、MRSがAIMP3と結合している状態などの状況でもMRSのみを特異的に検出する必要があるが、現在AIMP種類及びARS種類には、蛋白質構造上類似点が多く、市販の抗体の場合、他のAIMP及びARSの種類と交差反応性が表れる問題点がある。そこで、本発明の膵臓癌検査法の診断正確性のために、本発明者は他の蛋白質には交差反応性がない高感度のMRS抗体を、以下のような方法で製造した。
大腸菌(E.coli)上でMRS-AIMP3 co-purified蛋白質を発現及び精製し、具体的な実験方法は以下の通りである。BL21DE3 strainを利用して、MRS(配列番号1)とAIMP3(配列番号40, NCBI ref. NM_004280.4)が発現するように形質転換し、LB培地で培養した後、単一コロニーをアンピシリン(ampicilin)を含む5ml LB液体培地にOD 600値が0.6乃至0.8になるように培養した。以後1mMのIPTGを入れた後、37℃で3時間培養してその次の10分間遠心分離して細胞だけを獲得した。細胞液でSDS-PAGEを実施してクマシ溶液(coomassie stain)を利用して前記蛋白質の発現を確認した。その後、IPTGで過発現を 誘導した細胞液を集めて遠心分離を実施して細胞を獲得した。1ml DPBSで細胞を放した後、超音波破砕機を利用して、細胞を溶解してその次に溶解された細胞で遠心分離を実施して、MRS-AIMP3 co-purified蛋白質を分離した。
ハイブリドーマ細胞の製造に必要な免疫化されたマウスを得るために前記実施例1-1で収得したMRS-AIMP3 co-purified蛋白質を8~10週齢のマウス4匹の腹腔内に1次注射した。体重25乃至30gの10週齢BALB/cマウスをOrient Bio Co.(Sungnam, KyungKiDo, Republic of Korea)から購入して、動物らは一定の条件(温度:20±2℃、湿度:40~60%、明暗:12時間 light/dark cycle) 下で十分に適用させた後で本研究に利用した。動物実験はソウル大学校の大学動物管理及び使用委員会の指針を遵守した。1次免疫化後、マウスの免疫性を高めるために、2週間後に同じ容量のMRS-AIMP3 co-purified蛋白質をマウスの腹腔内に2次注射した。その後1週間後に、細胞融合実験を実施する3日前にMRS-AIMP3 co-purified蛋白質をマウスの尾静脈にブースター(booster)注射した。前記免疫化されたマウスをエーテルで麻酔した後、ヘパリン処理された注射器で心臓から採血した後、血液を4℃で一夜静置して、遠心分離して血清を分離した。分離した血清を適当に分けて-80℃で保管した。
先ず、細胞融合のために骨髄腫細胞(myeloma cell)を準備した。骨髄腫細胞を培養して細胞密度を2.5~5×104cell/mlにした。細胞融合24時間前に骨髄腫細胞を1/3に希釈して準備した。前記実施例1-2で免疫化されたマウスをエーテルで麻酔させて脾臓を採取し、B細胞を分離した後、SF-DMEM2(DMEM+2XAA)で洗浄して細胞を溶出させた。細胞懸濁液を回収してチューブに入れて静置させ、重い塊を沈めて上澄み液を新しいチューブに移した後、1500rpmで5分間遠心分離した。遠心分離された脾臓細胞の上澄み液を除去してタッピングした(tapping)後でSF-DMEM2を満たした。B細胞と骨髄腫細胞をそれぞれ遠心分離して洗浄した後、洗浄工程を1回さらに繰り返した。洗浄した骨髄腫細胞の上澄み液を除去して、タッピングした後、SF-DMEM2を満たした。また、洗浄したB細胞の上澄み液を除去し、タッピングした後、LB(lysis buffer)1mlに赤血球(RBC, red blood cell)を入れて処理した後、SF-DMEM2を満たした。次に、B細胞と骨髄腫細胞をそれぞれ遠心分離し、遠心分離されたB細胞と骨髄腫細胞の上澄み液を除去した後タッピングしてSF-DMEM2 10mlを満たした。B細胞と骨髄腫細胞をそれぞれe-チューブで100倍に希釈した後、計数して濃度を決定した[B細胞の濃度(1×108、8×107、5×107)、骨髄腫細胞の濃度(1×107、8×106、5×106)]。B細胞と骨髄腫細胞は、10:1の比率で決定した。決定された濃度の B細胞と骨髄腫細胞をチューブに一緒に入れて遠心分離した。遠心分離された細胞の上澄み液を除去した後、アルコール綿の上に伏せておいて、30秒~1分間半乾燥させてタッピングした。ここでPEG(2ml)を1分間除々に入れながらピペッティングして反応させて、SF-DMEM2を入れながらチューブを振り次に遠心分離した。遠心分離後、上澄み液を除去してタッピングしていない状態で、HT培地 [ HT50×(HT(sigma)1 vial + SF-DMEM1 10 ml) 1ml、FBS 10 ml、SF-DMEM1(DMEM + 1×AA)30 ml]を点々と落として、少しずつ速度を上げながら50 mlになるようにした。この懸濁液を再び37℃、5%CO2培養器で3時間培養した。
前記実施例1-3で製造した融合細胞群の中でMRSをよく認識しながら、AIMP3を認識しない細胞を選別して、抗体の生成可否を確認するために次のように実験を実施した。
MRSに対する単クローン抗体は、前記実施例1-4で選択された最終融合細胞(ハイブリドーマ細胞“1E8”または“8A12”)から、それぞれ次の二つの方法を通じて得ることができる。
それぞれ1E8 、8A12クローン発現抗体のクローニング及び配列分析はYBIO inc、及びアブクーロン(Abclon Inc. Korea)に依頼して行った。簡略に、先ず1E8又は8A12ハイブリドーマ細胞からRNAを抽出してcDNAを合成した。その次に、それぞれVL、CL、VH及びCH1に特異的なプライマーを用いてPCRを行った。予想されるサイズのPCR productをagarose gelで精製してsequencingを通じて配列を確認し、Kabat numberingを通じてCDR regionを確認した。1E8抗体の抗原結合部位配列確認結果を表1に示し、8A12抗体の抗原結合部位配列確認結果を表2に示す。確認された配列でFabを合成してMRSに高い結合力を示すことをELISAで確認した。
前記実施例で獲得した1E8抗体及び8A12抗体のMRS結合能力を確認するために、次のようにウエスタンブロット実験を実施した。H460細胞を10%FBS(Fetal bovine serum, Hyclone, GE lifesciences)、1%ペニシリン(Hyclone, GE lifescience)を含むDMEM(Hyclone, GE lifesciences)培地で培養した。各細胞は5%CO2 、37℃の条件で培養した。前記培養されたH460細胞にsi-MRSを72時間処理した。その次にH460細胞を収得して溶解させた後、H460細胞溶解物でウエスタンブロットを実施した。実験は2回繰り返された。1次抗体として1E8抗体又は8A12抗体を1:5000(0.2 μg/ml)で希釈して使用し、結合能力の比較のために市販のMRS抗体(Abcam,Ab50793)を同じ方法で使用して対照群にはチューブリン(Tublin)を使用した。
前記実施例で獲得した8A12抗体が他のARS(aminoacyl-tRNA synthetase)蛋白質に対する交叉活性(cross activity)があるか否かを確認するために、次のように実験を実施した。
1E8抗体及び8A12抗体のMRS特異的親和性を確認するために、MRS-AIMP3 co-purified蛋白質(以下、MRS+AIMP3蛋白質)及びAIMP3蛋白質を利用して、SPR(Surface plasmon resonance、表面プラズモン共鳴)の実験を実施した。MRS + AIMP3又はAIMP3蛋白質をCM5chipにコーティングして、1E8抗体又は8A12抗体を様々な濃度で流しながら、蛋白質との結合反応の程度を測定した。分析試料やバッファは30μl/ minの流速で8分間注入して20分間洗浄した。
前記1E8抗体又は8A12抗体が結合する部位(エピトープ、main binding site)を確認するために次のように実験を行った。先ず、MRS全体蛋白質からGST、catalytic domain、tRNA binding domain部位を考慮して、それぞれの長さと位置が異なる複数のMRS断片を製作し、pcDNA3 vector(EV)にMRS全体蛋白質又はそれぞれのMRS断片(MRS fragment)をクローニングした。各MRS断片の位置は、配列番号1のMRS全体のアミノ酸配列の中から1~266aa断片、267~597aa断片、1~598aa断片、598~900aa断片、660~860aa断片、660~900断片、730~900の断片などをはじめ、さまざまな小単位領域を含む位置から選定された。このとき、Myc蛋白質をそれぞれのペプチドN-末端に結合させ、Myc蛋白質を対照群として使用した。その後H460細胞に、クローニングしたベクターDNA 2μgを製造社の指針に従ってTurbofect(Thermo)を使用してトランスフェクション(transfection)させた。24時間後、細胞を収得してウエスタンブロットを実施した。この時、1次抗体として1E8抗体及び8A12抗体を1:5000(0.2ug/mL)で希釈して使用した。
以下で、本発明者らが新規に考案した膵臓癌検査法に対して前記で製作したMRS検出能が優れた抗体を適用した一実施例を示す。
PANC-1膵臓癌細胞株とSCK(非膵臓癌細胞株)細胞株に対して、それぞれ1E8抗体又は8A12抗体を利用して、MRS蛍光染色を行った。この時、対照群としては市販されているMRS抗体(Abcam, Ab137105)を使用した。具体的には、次のような過程で染色を行った。スライド上に用意されたそれぞれの対象細胞に0.2%tween 20を含むPBSを処理して透過性を増加させた後、2%goat serumで1時間ブロックキング(blocking)処理した。1次抗体として本発明の抗体等(1E8抗体または8A12抗体、Oncotag社製作)又はAb137105抗体(Abcam)を 1μg/ ml37℃で1時間処理して0.05%TBST(500ul)で3回洗浄した。その後蛍光物質が結合されている2次antibodyとしてAlexa-488-conjugated secondary antibodies(購入元:Molecular probes、Cat.No.A11001)を1:100に希釈して、常温の暗所で1時間処理して、0.05%TBST(500ul)で3回洗浄した。DAPIが添加されているマウンティングソリューション(ProLong Gold antifade regent with DAPI/ Molecular probes、Cat.No.P36931)をスライド上の組織に20μl処理後、カバースリップ(coverslip)を覆い、共焦点レーザー顕微鏡及び蛍光顕微鏡で観察した。
実験方法
1)検体として膵臓細胞を、通常的な内視鏡超音波細針吸込み術(EUS-FNA)により収得した。先ず、内視鏡超音波機器(alineararray echoendoscope EUS、製品名:GF-UCT140またはGF-UCT180、会社:オリンパス、Japan)を胃腸や十二指腸に進行して内視鏡先端に装着した超音波装備を利用して、膵臓腫瘤を超音波映像で確認した。超音波映像で照準された腫瘤に対して細針吸込みのための針を進入(製品名:22G Echo-ultraTM, 会社:Cook Medical, Cork, Ireland)して膵臓細胞を採取した。
(1) パラフィン除去:60℃のオーブンでパラフィンを溶かす
(2)水和(Hydration):キシレン(Xylene)で5分ずつ3回洗浄、100%エタノールで2分洗浄、95%エタノールで2分洗浄、90%エタノールで2分洗浄、70%エタノールで2分洗浄、DWで2分洗浄、PBSで5分洗浄
(3)透過性(permeabilize)増加処理:0.2%Triton X-100で30分間処理してPBSで5分洗浄
(4)前処理:2% goat serumで1時間ブロッキング(blocking)
(5)1次抗体処理:anti-MRS抗体(代表的に本発明の8A12抗体使用艦、Oncotag社製作)を1:300に希釈して4℃でovernight処理してPBSで5分ずつ3回洗浄
(6)発色:蛍光物質が結合されている2次antibodyとしてAlexa-488-conjugated secondary antibodies(購入元:Molecular probes, Cat. No. A11001)を1:200~1:300に希釈して常温の暗所で1時間処理してPBSで5分ずつ3回洗浄
(7)DAPIが添加されているマウンティングソリューション(ProLong Gold antifade regent with DAPI/ Molecular probes, Cat. No. P36931)をスライド上の組織に20μl処理後カバースリップを覆った。
具体的実験結果は下記の表3、表4及び表5に示した通りである。良性(Benign)膵臓細胞試料14個及び膵臓癌(Malignancy)細胞試料94個を対象に本願発明のMRS染色を通じた膵臓癌判別方法を適用した結果,H&E staining方式を使用する従来の細胞病理学的検査の結果は、感受性が75.5%程度に過ぎなかったことと対比して本発明のMRS染色は感受性(Sensitivity)が92.6%に示された。特に、従来の細胞学的病理検査方法では、異型(atypia)に分類されるしかなかった細胞試料に対しても膵臓癌の可否判別が可能であったため、従来の細胞学的病理検査では、陰性予測率(NPV)が36%水準であったのに比べてMRS染色を通じては陰性予測率が著しく高まる効果を示した。これらの結果は、膵臓癌においてMRSをマーカーとして利用する本発明の染色法は、細胞水準での診断でも高い判別能(診断能)を有することを示したもので、後述する実施例3で示した通り、従来市販の膵臓癌マーカー(CEAと同じお知らせのすい臓がんマーカー)らが、細胞水準の診断(つまり、cytodiagnosis)では実効性を示すことが難しかったことと明確に区別されることであった。
実験方法
1)患者群及び細胞診(cytodiagnosis)のための膵臓細胞試料の収得
26人の膵臓癌が疑われる患者から内視鏡、超音波下細胞吸込み施術 (微細針吸引法、Fine needle aspiration)で採取及び収得された膵臓細胞試料26例で研究を実行し、本研究は韓国ソウル江南セブランス病院の研究倫理委員会の承認を得た。前記患者らから膵臓細胞試料は前記実施例2と同じ方法で、内視鏡超音波細針吸込み術(EUS-FNA)を通じて収得した。その後採取された膵臓細胞をCellient Automated Cell Block System(Hologic)を利用する通常的な方法でパラフィン切片状態(Cellient paraffin sections)態、又はThinprep方法で準備した(実施例2参照)。
H&E染色:パラフィン切片試料は、Xyleneで5分ずつ3回処理、100%エタノールで2分処理、95%エタノールで2分処理、90%エタノールで2分処理、70%エタノールで2分処理、水道水で10分処理をそれぞれ実施し、Paraffin除去とHydrationを実施した。常温でhematoxylineを30秒間反応させ、水道水で10分間洗浄した。常温でeosinを1分間反応させ、水道水で10分間洗浄した。70%エタノールで1分、90%エタノールで1分、95%エタノールで1分、100%エタノールで1分、Xyleneで5分ずつ3回処理を実施してdehydrationとclearingを実施した。Mounting solutionをスライド組織に落とした後、coverslideで細胞を覆った後、サンプルを光学顕微鏡で観察した。
悪性腫瘍を形態学的に診断しようとする時、最も決定的な証拠は、周辺の正常組織で浸潤性成長をするとのことであるが、癌組織と周囲組織との関係の証明に容易な組織検査とは異なり、細胞診検査の場合、個別の細胞を抜き出して塗抹したものである為、周囲の組織との関係を証明することができない。従って、次善策として個々の細胞の異型性(atypia)を評価することになるが、この時、異型性とは、細胞の核(nucleus)が大きくなり細胞質(cytoplasm)は減って、細胞核/細胞質比率(Nuclear to cytoplasmic ratio, N/c ratio)が大きくなること、染色質(chromatin)が核内に均等に分布されず、部分的に凝集する現象(clumping)、核内核小体(nucleolus)の出現、類似分裂(mitosis)出現などを意味する。これらの異型性の所見がすべて表れ、程度が著しいとき細胞診検査でも悪性腫瘍を診断することが可能であるが、これらの所見が部分的に表れたり、程度が微弱な場合には、異型細胞(atypical cell)に分類しなければならない。重度の炎症などの良性病変でも、このような所見が部分的に表れるからである。逆に、このような所見がいずれも表示されない場合は、正常細胞に判定することができる。勿論、細胞を採取した部位で観察することができる細胞であることが前提されなければならない。
MRSに対する免疫染色は、前記実施例2に記載された方法と同様に行われた。CEAに対する免疫染色の場合、1次抗体としてCarcinoembryonic Antigen(CEA) antibody(購入元:Dako、Cat.No.M7072)をその最適処理条件で使用したこと以外は実施例2と同じ過程で行われた。
実験結果は、少なくとも3回以上の独立的な実験結果をもとに平均±標準偏差で示した。統計的有意性は、多数のグループ間の差が観察のためにStudent's t testを活用してデータを分析した。P-valueが0.05未満の場合の実験結果が有意性があると判断した。
3-1.正常細胞の免疫染色
正常患者または膵臓癌患者の膵臓からEUS-FNAの方法で分離した細胞を、H&E染色を通じて分析した結果、正常と判断された細胞をMRS又はCEA抗体を利用して免疫蛍光染色を行った。これに対する結果を図11に示した。
膵臓癌患者の膵臓から分離した細胞を H&E染色を通じて分析した結果、腫瘍と判断された細胞をMRS又はCEA抗体を利用した免疫蛍光染色を行った。これに対する結果を図12に示した。
H&E染色だけでは腫瘍細胞であるか否かを明確に判断し難い異型(atypical)細胞として、今後の患者の予後を追跡観察した結果、最終的に腫瘍と判明した患者の膵臓細胞を利用して、MRS又はCEA染色を行った。これに対する結果を図13に示した。
4-1.偽陽性結果の原因探索
前記実施例3に示した通り、MRSはCEAなど従来の膵臓癌マーカーより高い精確度で膵臓癌の診断が可能であると立証されたが、前述した実施例での実験は既に全て確定判断を有する試料に対して行ったものであるので、膵臓癌の発症が疑われる患者からの組織採取後blind(未知)の状態で、どの程度の正確性をもって診断可能であるかを確認する必要がある。また前記実施例2に示した通り、MRSは膵臓癌の診断において極めて優れた感受性を示すものの、MRSを単独で膵臓癌を判断する際に感受性に比べて特異性が多少低い傾向を示した。そこで、本研究者らは、新しい患者から収得した膵臓試料においてMRSの膵臓癌判別能の試験中に細胞組織病理検査上negative(非膵臓癌)に示された10件のサンプルの中から3件のサンプルでMRS発現が示されるような様子を観察した。つまり、通常膵臓細胞試料からMRS発現度が高い場合があり、偽陽性(膵臓癌でないものを膵臓癌が発生したと判断できるもの)の結果が含まれる問題があることを確認した。
前記実施例4-1項目の結果に示した通り、正常人腺房細胞(acinar cell)でも、MRSが高い水準で発現されていて、その単独では膵臓癌判断の疑陽性率に寄与しているので(つまり、MRS単独だけで判断する際には診断の特異性が相対的に低い)、これらの腺房細胞を結果解釈から除外して疑陽性率を減らすための戦略を模索した。
パラフィン切片試料を利用する場合には、先ず60℃のオーブンでパラフィンを溶かしてXyleneで5分間ずつ3回洗浄、100%エタノールで2分洗浄、95%エタノールで2分洗浄、90%エタノールで2分洗浄、70%エタノールで2分洗浄、DWで2分洗浄してParaffin除去とHydrationを実施した。
前述した実施形態で使用されたものとは異なる被検体から収得した新しい膵臓細胞試料29個について、本発明の二重染色法を適用して膵臓癌を判別した。これらの膵臓癌細胞は、上述したのと同じくEUS-FNAの方法で採取された。本発明の二重染色法を行う上で、病理学的診断結果や最終臨床的診断は未知(blind)の状態で行われた。
pap stainingを通じて従来の細胞病理検査上で異型細胞に分類されたが、最終的な臨床診断で悪性腫瘍細胞と診断された細胞試料において、本願発明の二重染色法を適用して膵臓癌の可否を判別した。
pap stainingを通じて従来の細胞病理検査上で膵臓癌に確診されずに、膵臓癌の疑い(Suspicious of malignancy)のある状態で一次診断されたが、最終的に臨床診断で悪性腫瘍細胞に診断された細胞試料において、本願発明の二重染色法を適用して膵臓癌の可否を判別した。
pap stainingを通じた従来の病理検査の方法で分析した結果、悪性腫瘍細胞であると判断されて、最終的な臨床診断でも悪性腫瘍細胞に診断された試料において、本願発明の二重染色法を適用して膵臓癌であるか否かを判別した。
それぞれの細胞試料検体について、本発明の二重染色法を行い判断した結果と、最終的な臨床診断結果及び従来の細胞病理学的診断の結果を比較してこれを下記表8に示した。本発明の二重染色結果、MRS(+)及びCK19(+)である場合に膵臓癌Positiveに分類して残りの場合(つまり、MRSまたはCK19一つだけ染色された場合か、MRS(-)およびCK19(-)で現れた場合)にはNegativeに分類する。
膵臓癌組織と組織に含まれている周辺正常膵臓組織試料に対して本願発明の二重染色法を適用した。手術で得られた組織らは、通常的な方法でパラフィン包埋した後、薄切して提供された。本発明に係る二重染色及び判断結果を下記表9に示し、下記表9に示した通り組織試料は細胞診サンプルとは異なり、膵臓組織内でacinarとpancreatic ductが区別可能で領域別に個別判断が可能であった。
Claims (14)
- (a)潜在患者から採取した膵臓試料におけるメチオニルtRNA合成酵素(methionyl-tRNA synthetase;MRS)蛋白質及びサイトケラチン-19(Cytokeratin 19;CK19)蛋白質の発現レベルを測定するステップ;及び
(b)前記(a)ステップで測定したMRS蛋白質及びCK19蛋白質の発現レベルを陰性対照群と比較するステップであって、MRS蛋白質及びCK19蛋白質の発現レベルが増加している場合、前記潜在患者が膵臓癌患者であることを示す、ステップ;
を含むことを特徴とする膵臓癌診断のためのデータの作成方法。 - 膵臓試料が、膵臓細胞であることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 膵臓細胞が、微細針吸引法(Fine needle aspiration)で分離された膵臓細胞であることを特徴とする請求項2記載の方法。
- MRS蛋白質の発現レベル測定前に、同時に、又は後に、下記ステップ(i)をさらに含むことを特徴とする請求項1~3のいずれか記載の方法:
(i)潜在患者から採取した膵臓細胞を、細胞核を染色するDAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole)、メチレンブルー(methylene blue)、酢酸カルミン(acetocarmine)、トルイジンブルー(toluidine blue)、ヘマトキシリン(hematoxylin)及びヘキスト(Hoechst)からなる群から選択されるいずれかの一つ以上の染色溶液、及び
細胞質を染色するエオシン(eosin)、クリスタルバイオレット(crystal violet)及びオレンジG(orange G)からなる群から選択されるいずれかの一つ以上の染色溶液で染色するステップであって、前記細胞染色が、前記膵臓細胞を悪性腫瘍細胞、異型細胞(atypical cell)又は正常細胞と判定するための指標となる、ステップ。 - 細胞染色の結果から、膵臓細胞が、細胞が3次元で塗抹される;細胞核/細胞質比率が高い;染色質の凝集現象出現;不整な形状の核膜;核小体の出現;及び有糸分裂の出現からなる群から選択されるいずれかの二つ以上の形態学的異常を示す場合、悪性腫瘍細胞であることを示し、
細胞が一層で塗抹されていて、細胞核/細胞質比率(N/c ratio)が小さく、核膜が滑らかな場合には、正常細胞であることを示し、
細胞の変化が悪性腫瘍細胞にまでは及ばないものの、正常と判定できない場合、異型細胞であることを示すことを特徴とする請求項4記載の方法。 - MRS蛋白質及びCK19蛋白質の発現レベルが、ウエスタンブロット、酵素免疫測定法(ELISA)、放射線免疫測定、放射免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、免疫染色法、免疫沈降法、補体結合法、FACS(Fluorescence activated cell sorter)アッセイ、SPR(surface plasmon resonance)アッセイ又は蛋白質チップアッセイのうち、いずれかを利用して測定されることを特徴とする請求項1~5のいずれか記載の方法。
- メチオニルtRNA合成酵素(methionyl-tRNA synthetase;MRS)蛋白質及びサイトケラチン-19(Cytokeratin 19;CK19)蛋白質の発現レベルを測定するための製剤を含む膵臓癌診断用組成物であって、
前記製剤が、MRS蛋白質及びCK19蛋白質に特異的に結合する抗体又はアプタマー、あるいは、MRS蛋白質及びCK19蛋白質をコードするmRNAに特異的に結合するプライマー又はプローブであることを特徴とする、前記膵臓癌診断用組成物。 - MRS蛋白質が、配列番号1で表されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項7記載の膵臓癌診断用組成物。
- 抗体が、MRS蛋白質における配列番号2で表されるアミノ酸配列を含む領域のエピトープ(epitope)に特異的に結合することを特徴とする抗体又はその機能的断片であることを特徴とする請求項7記載の膵臓癌診断用組成物。
- 抗体が、
配列番号28で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL);及び
配列番号30で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)を含むか;又は
配列番号32で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL);及び
配列番号34で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)を含むことを特徴とする請求項9記載の膵臓癌診断用組成物。 - 請求項7~10のいずれか記載の膵臓癌診断用組成物を含む膵臓癌診断用キット。
- 膵臓癌に対する細胞診(cytodiagnosis)検査又は組織検査において、下記のステップ(a)を含むことを特徴とする感受性又は特異性を向上させる方法:
(a)潜在患者から採取した膵臓試料でメチオニルtRNA合成酵素(methionyl-tRNA synthetase;MRS)蛋白質及びサイトケラチン-19(Cytokeratin 19;CK19)蛋白質の発現レベルを測定するステップであって、MRS蛋白質及びCK19蛋白質の発現レベルが増加している場合、潜在患者が膵臓癌患者であることを示す、ステップ。 - 感受性が80%以上であることを特徴とする請求項12記載の方法。
- 感受性及び特異性が80%以上であることを特徴とする請求項12又は13に記載の方法。
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Ali Abdullah et al.,The Predictive Value of CK19 and CD99 in Pancreatic Endocrine Tumors,The American Journal of Surgical Pathology,2006年12月,Volume 30 - Issue 12,,PP.1588-1594 |
Mark L. Mitchell et al.,Cytologic Criteria for the Diagnosis of Pancreatic Carcinoma,American Journal of Clinical Pathology,Volume 83, Issue 2,1985年02月,PP.171-176 |
Sunghoon Kim et al.,Aminoacyl-tRNA synthetases and tumorigenesis: more than housekeeping,Nature Reviews Cancer,2011年11月,PP.708-718 |
Yi-Yong Baek et al.,Su2031 Methionyl-tRNAsynthetaseServes as a New Prognostic Marker in Pancreatic Cancer,Gastroenterology,2016年,150(4),S-616 |
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