JP7114206B2 - 処理方法、生産方法およびハイドロキシアパタイト充填剤 - Google Patents
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Description
(1) ハイドロキシアパタイト充填剤に、所定の物質を含む第1の液体を接触させる第1ステップと、
前記ハイドロキシアパタイト充填剤に、アルコールを含む第2の液体を接触させる第2ステップとを有することを特徴とする処理方法。
これにより、ハイドロキシアパタイト充填剤に優れた耐久性を付与することができる。
これにより、ハイドロキシアパタイト充填剤で構成される吸着剤に、優れた耐久性を確実に付与することができる。
これにより、ハイドロキシアパタイト充填剤で構成される吸着剤に、優れた耐久性を確実に付与することができる。
これにより、ハイドロキシアパタイト充填剤で構成される吸着剤に、優れた耐久性を確実に付与することができる。
これにより、ハイドロキシアパタイト充填剤で構成される吸着剤に、優れた耐久性を確実に付与することができる。
前記ハイドロキシアパタイト充填剤に、含有量が0.05M以下のNaOHを含む第2の液体を12時間以上接触させる第2ステップとを有することを特徴とする処理方法。
これにより、ハイドロキシアパタイト充填剤に優れた耐久性を付与することができる。
これにより、吸着剤に対して処理液を安定的に接触させることができる。
前記所定の物質としてリン酸塩と、リン酸塩とは異なる他の塩とを含むリン酸緩衝液を前記第1の液体として、前記ハイドロキシアパタイト充填剤に接触させる回収工程と、
前記所定の物質としてリン酸塩を含むリン酸緩衝液を前記第1の液体として、前記ハイドロキシアパタイト充填剤に接触させる洗浄工程と、
前記所定の物質としてアルカリを含むアルカリ溶液を前記第1の液体として、前記ハイドロキシアパタイト充填剤に接触させるアルカリ洗浄工程と、
前記所定の物質としてリン酸塩を含むリン酸緩衝液を前記第1の液体として、前記ハイドロキシアパタイト充填剤に接触させるpH平衡工程と、を有する上記(1)ないし(7)のいずれかに記載の処理方法。
かかる工程を適用することで、所定の物質を含む第1の液体が接触した、ハイドロキシアパタイト充填剤を用意することができる。
かかる工程を適用することで、所定の物質を含む第1の液体が接触した、ハイドロキシアパタイト充填剤を用意することができる。
目的物質を含む液体組成物を準備する組成物準備工程と、
前記処理工程で処理された前記ハイドロキシアパタイト充填剤を用いて、前記液体組成物から前記目的物質を分離して得る分離工程と、を有することを特徴とする生産方法。
本発明の生産方法を適用することで、目的物質を優れた精度で精製することができる。
上記(1)ないし(9)のいずれかに記載の処理方法によって、前記ハイドロキシアパタイト充填剤を処理することにより、耐久性を向上させた前記ハイドロキシアパタイト充填剤を得る再生産工程とを有することを特徴とする生産方法。
本発明の生産方法を適用することで、耐久性を向上させたハイドロキシアパタイト充填剤を得ることができる。
これにより、ハイドロキシアパタイト充填剤を、耐久性を向上させたものとすることができる。
図1は、本発明の処理方法および生産方法を適用し得る吸着剤を備える吸着装置の一例を示す縦断面図である。なお、以下の説明では、図1中の上側を「流入側」、下側を「流出側」と言う。
次に、このような吸着装置1、すなわち、吸着剤3として、アパタイトの二次粒子を含む粉体で構成されたものを用いてタンパク質を分離する、タンパク質の分離方法について説明する。
まず、分離(精製)すべきタンパク質(目的物質)と、分離すべきタンパク質以外の物質(混合物)とを含有する試料液(液体組成物)を用意する。
次に、流入管24からカラム2内に、緩衝液を供給する。これにより、カラム2内をこの緩衝液に置換する。
次に、前記工程[S1A]で得られた試料液を、流入管24およびフィルタ部材4を介してカラム本体21内に注入することで、カラム2(吸着装置1)内を通過させて、吸着剤3に接触させる。
次に、流入管24からカラム2内に、タンパク質を溶出させるための溶出液として例えばリン酸系緩衝液を供給する。そして、カラム2内から流出管25を介して流出する流出液を、所定量ずつ分画(採取)する。これにより、吸着剤3に吸着しているタンパク質および混入物は、それぞれが有する吸着剤3に対する吸着力の差に応じて、それぞれ、各分画内に溶解した状態で回収(分離・精製)される。すなわち、吸着剤3を用いて、試料液(液体組成物)から目的物質としてのタンパク質が分離されることにより得られることとなる。
次に、流入管24からカラム2内に、吸着剤3に残存(吸着)しているタンパク質や、夾雑タンパク質等を溶出させることで、吸着剤3を洗浄する洗浄液(第1洗浄液)として例えば緩衝液を供給する。
次に、流入管24からカラム2内に、前記工程[S5A]を施すことによっても、溶出することなく、吸着剤3に残存しているタンパク質や、夾雑タンパク質等を溶出させることで、吸着剤3をさらに洗浄する洗浄液(第2洗浄液)として例えばアルカリ溶液を供給する。
次に、流入管24からカラム2内に、洗浄がなされた吸着剤3のpHを平衡化する平衡液として例えば緩衝液を供給する。
前記工程[S5A]に先立って、流入管24からカラム2内に、吸着剤3が備えるカルシウムサイトにカルシウムを補填するために、カルシウム溶液として例えばカルシウム含有緩衝液を供給する。
ここで、この吸着装置1を用いたタンパク質の分離方法では、前記工程[S1A]~[S8A]を繰り返して実施することで、タンパク質の分離が繰り返して実施される。
[S1B] 用意工程
まず、タンパク質の分離が実施された吸着剤3すなわち実施済粉体を用意する。
次に、吸着剤3すなわち実施済粉体に、アルコールもしくはNaOHを含む処理液を接触させる。
処理液として、アルコールを含むものを用いる場合、吸着剤3すなわち実施済粉体に、アルコールを含む処理液(第2の液体)を接触させる(第2ステップ)。
処理液として、NaOHを含むものを用いる場合、吸着剤3すなわち実施済粉体に、含有量が0.05M以下のNaOHを含む処理液(第2の液体)を12時間以上接触させる(第2ステップ)。
1.吸着装置の製造
吸着剤(充填剤)すなわちハイドロキシアパタイト充填剤としてハイドロキシアパタイト(BIO-RAD社製、CHT 40μm Type I)を、ステンレスカラム(内径4.0mm×長さ100mm,フィルタ2.0μm)の充填空間にほぼ満量となるように充填して、吸着装置を製造した。
(比較例10)
<1A> まず、吸着装置を、クロマト装置に装着した。その後、400mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH6.5、温度25℃)を、通液速度0.5mL/min、通液量10CVで吸着装置に通液することで、吸着装置を400mMリン酸ナトリウム緩衝液で置換した。
前記工程<6A>における第2の液体として、20wt%エタノール水溶液に代えて、表1に示すものを用いたこと以外は、前記比較例10と同様にして、吸着装置が備える吸着剤に対して、第1の液体および第2の液体を接触させた。
前記工程<6A>における第2の液体として、20wt%エタノール水溶液に代えて、表1に示すものを用い、さらに、前記工程<6A>において、第2の液体に浸漬した状態で、充填剤を保存する時間を、7日間に変更したこと以外は、前記比較例10と同様にして、吸着装置が備える吸着剤に対して、第1の液体および第2の液体を接触させた。
前記工程<4A>に先立って、下記工程<7A>を追加したこと以外は、前記実施例3と同様にして、吸着装置が備える吸着剤に対して、第1の液体および第2の液体を接触させた。
吸着剤に対して第2の液体を接触させる前記工程<6A>を省略したこと以外は、前記比較例10と同様にして、吸着装置が備える吸着剤に対して、第1の液体を単独で接触させた。
吸着剤に対して第2の液体を接触させる前記工程<6A>を省略したこと以外は、前記実施例8と同様にして、吸着装置が備える吸着剤に対して、第1の液体を単独で接触させた。
各実施例および各比較例、各参考例における、吸着装置が備える吸着剤に対する第1の液体および第2の液体の接触、すなわち、前記工程<1A>~前記工程<7A>を、吸着装置における内圧が上昇し、カラムの耐圧を超えた時点で終了として、各実施例および各比較例、各参考例について、それぞれ、繰り返して実施した。
2 カラム
3 吸着剤
4 フィルタ部材
5 フィルタ部材
20 吸着剤充填空間
21 カラム本体
22 キャップ
23 キャップ
24 流入管
25 流出管
Claims (3)
- ハイドロキシアパタイト充填剤を処理するための方法であって、
前記ハイドロキシアパタイト充填剤にリン酸塩を含む液体を通液させる工程と、前記ハイドロキシアパタイト充填剤にアルカリを含む液体を通液させる工程とを含む第1ステップと、
前記第1ステップの後に、前記ハイドロキシアパタイト充填剤にアルコール水溶液(但し、塩又はアルカリを実質的に含むものを除く)を少なくとも7日間に亘って接触させて保存する第2ステップとを有することを特徴とする処理方法。 - 前記アルコールは、低級アルコールであり、前記アルコール水溶液における含有量が20wt%以上である、請求項1に記載の処理方法。
- 前記第1ステップ及び前記第2ステップに先立って、カルシウムイオンを含む緩衝液を、前記ハイドロキシアパタイト充填剤に接触させる工程をさらに有する請求項1又は2に記載の処理方法。
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