JP7105888B2 - 低分子ヒアルロン酸又はその塩及びその調製方法 - Google Patents
低分子ヒアルロン酸又はその塩及びその調製方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7105888B2 JP7105888B2 JP2020533114A JP2020533114A JP7105888B2 JP 7105888 B2 JP7105888 B2 JP 7105888B2 JP 2020533114 A JP2020533114 A JP 2020533114A JP 2020533114 A JP2020533114 A JP 2020533114A JP 7105888 B2 JP7105888 B2 JP 7105888B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- molecular
- low
- salt
- hyaluronidase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims description 148
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims description 147
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims description 147
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims description 61
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 4
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 claims description 72
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 claims description 72
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 65
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 63
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 claims description 50
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 43
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 39
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 33
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 24
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 claims description 22
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 claims description 22
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical group [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 claims description 22
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 18
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 15
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 claims description 14
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 14
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 14
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 14
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 13
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 13
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 13
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 9
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 9
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 8
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 6
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 6
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 3
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 2
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims 1
- 102000009066 Hyaluronoglucosaminidase Human genes 0.000 description 59
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 18
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 11
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 11
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 4
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 4
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- -1 D-glucuronic acid disaccharides Chemical group 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-3-[(2s,3r,5s,6r)-3-acetamido-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5,6-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108050009363 Hyaluronidases Proteins 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000016150 acute pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 208000007565 gingivitis Diseases 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 229940014041 hyaluronate Drugs 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000010842 industrial wastewater Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000006864 oxidative decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
- C12Y402/02—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on polysaccharides (4.2.2)
- C12Y402/02001—Hyaluronate lyase (4.2.2.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
- C12Y402/99—Other carbon-oxygen lyases (4.2.99)
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Description
本開示は、2019年03月05日に中国国家知識産権局に提出された特許出願番号がCN201910164881.3であり、発明の名称が「低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法」である中国特許出願の優先権を主張するものであり、当該中国特許出願の全内容は参照により本開示に組み入れられる。
(2)ヒアルロニダーゼの不活性化:ステップ(1)での前記酵素分解液に対して昇温処理を行い、前記酵素分解液におけるヒアルロニダーゼが変性して不活性化される;
(3)吸着:ステップ(2)での前記酵素分解液を吸着し、混合液を取得する;
(4)濾過精製:ステップ(3)での混合液から吸着剤及び変性ヒアルロニダーゼを除去し、濾過して純粋な低分子ヒアルロン酸及びその塩溶液を取得する;
(5)低温噴霧乾燥:ステップ(4)での前記低分子ヒアルロン酸及びその塩溶液に対して低温噴霧乾燥を行い、所望の分子量の低分子ヒアルロン酸及びその塩の固体粉末を取得する。
(b)ステップ(1)での前記種培養液を殺菌された発酵培養基に接種し、培養温度が30℃-37℃であり、回転速度が0-150rpmであり、20-48h培養し、ヒアルロニダーゼ発酵液を取得する;
(c)ステップ(2)での前記ヒアルロニダーゼ発酵液に対して遠心を行い、上澄みを取得する;
(d)孔径分画分子量が200kDaである限外濾過膜を用いて、ステップ(3)での前記ヒアルロニダーゼの上澄みに対して限外濾過を行い、ろ液を取得する;
(e)孔径分画分子量が20kDaである限外濾過膜を用いて、ステップ(4)での前記ろ液に対して限外濾過を行い、低分子不純物を除去し、精製したヒアルロニダーゼを取得する。
(2)種培養液を殺菌された発酵培養基に接種し、培養温度が30℃-37℃であり、回転速度が0-150rpmであり、20-48h培養し、ヒアルロニダーゼ発酵液を取得する;
(3)上述のヒアルロニダーゼ発酵液に対して遠心を行い、上澄みを取得する;
(4)孔径分画分子量が200kDaである限外濾過膜を用いて上述ヒアルロニダーゼの上澄みに対して限外濾過を行い、ろ液を取得する;
(5)孔径分画分子量が20kDaである限外濾過膜を用いて上述ろ液に対して限外濾過を行い、低分子不純物を除去し、精製したヒアルロニダーゼを取得する;
以下、具体的な実施例を参照しながら、本開示の技術案をさらに説明する。
5Lの精製水に5mLのヒアルロニダーゼを加え、攪拌し、pHが5.0、温度が30℃になるまで調節し、250gの分子量が500kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し、素材を均一に溶解させるために、添加速度を遅くしなければならない。任意に、30min分解反応させた後、250gの分子量が500kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し続けた。5h酵素分解反応させた後、分子量が60kDaになり、任意に、酵素分解液を50℃に昇温して1h維持して、ヒアルロニダーゼが変性して不活性化された。任意に、上述酵素分解液に5gの活性炭を加え、60min吸着し、粗ろ過板(Coarse filtration board)で濾過し、孔径が0.22μmであるセルロースフィルターで濾過して純粋なヒアルロン酸溶液を取得した。任意に、上述ヒアルロン酸溶液に対して低温噴霧乾燥を行うことにより、低分子ヒアルロン酸の固体粉末を調製した。任意に、低温噴霧の吸気温度が40℃であり、吹き出し温度が40℃であり、流速が100mL/hであった。得られた完成品である低分子ヒアルロン酸の固体粉末の白色度が95%であり、水分含有量が6.3%であり、分子量が60kDaであり、ヒアルロン酸の含有量が97%であり、収率が89%であった。
5Lの精製水に6mLのヒアルロニダーゼを加え、攪拌し、pHが5.5、温度が32℃になるまで調節し、300gの分子量が650kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し、素材を均一に溶解させるために、添加速度を遅くしなければならない。任意に、40min分解反応させた後、400gの分子量650kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し続けた。6h酵素分解反応させた後、分子量が50kDaになり、任意に、酵素分解液を50℃に昇温して50min維持して、ヒアルロニダーゼが変性して不活性化された。
5Lの精製水に7mLのヒアルロニダーゼを加え、攪拌し、pHが6.0、温度が34℃になるまで調節し、400gの分子量が700kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し、素材を均一に溶解させるために、添加速度を遅くしなければならない。任意に、50min分解反応させた後、300gの分子量が700kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し続けた。6.5h酵素分解反応させた後、分子量が40kDaになり、任意に、酵素分解液を50℃に昇温して1h維持して、ヒアルロニダーゼが変性して不活性化された。任意に、上述酵素分解液に5gの活性炭を加え、60min吸着し、粗ろ過板で濾過し、孔径が0.22μmであるセルロースフィルターで濾過して純粋なヒアルロン酸溶液を取得した。任意に、上述ヒアルロン酸溶液に対して低温噴霧乾燥を行うことにより、低分子ヒアルロン酸の固体粉末を調製した。任意に、低温噴霧の吸気温度が60℃であり、吹き出し温度が40℃であり、流速が150mL/hであった。得られた完成品である低分子ヒアルロン酸の固体粉末の白色度が95%であり、水分含有量が8.2%であり、分子量が40kDaであり、ヒアルロン酸の含有量が97%であり、収率が90%であった。
5Lの精製水に8mLのヒアルロニダーゼを加え、攪拌し、pHが6.5、温度が36℃になるまで調節し、400gの分子量が500kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し、素材を均一に溶解させるために、添加速度を遅くしなければならない。任意に、60min分解反応させた後、400gの分子量が500kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し続けた。7h酵素分解反応させた後、分子量が30kDaになり、任意に、酵素分解液を50℃に昇温して1h維持して、ヒアルロニダーゼが変性して不活性化された。任意に、上述酵素分解液に5gの活性炭を加え、60min吸着し、粗ろ過板で濾過し、孔径が0.22μmであるセルロースフィルターで濾過して純粋なヒアルロン酸溶液を取得した。任意に、上述ヒアルロン酸溶液に対して低温噴霧乾燥を行うことにより、低分子ヒアルロン酸の固体粉末を調製した。任意に、低温噴霧の吸気温度が65℃であり、吹き出し温度が40℃であり、流速が100mL/hであった。得られた完成品である低分子ヒアルロン酸の固体粉末の白色度が93%であり、水分含有量が7.2%であり、分子量が30kDaであり、ヒアルロン酸の含有量が98%であり、収率が91%であった。
5Lの精製水に8mLのヒアルロニダーゼを加え、攪拌し、pHが7.0、温度が38℃になるまで調節し、400gの分子量が650kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し、素材を均一に溶解させるために、添加速度を遅くしなければならない。任意に、70min分解反応させた後、400gの分子量650kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し続けた。8h酵素分解反応させた後、分子量が20kDaになり、任意に、酵素分解液を50℃に昇温して1h維持して、ヒアルロニダーゼが変性して不活性化された。任意に、上述酵素分解液に5gの活性炭を加え、60min吸着し、粗ろ過板で濾過し、孔径が0.22μmであるセルロースフィルターで濾過して純粋なヒアルロン酸溶液を取得した。任意に、上述ヒアルロン酸溶液に対して低温噴霧乾燥を行うことにより、低分子ヒアルロン酸の固体粉末を調製した。任意に、低温噴霧の吸気温度が70℃であり、吹き出し温度が40℃であり、流速が200mL/hであった。得られた完成品である低分子ヒアルロン酸の固体粉末の白色度が93%であり、水分含有量が8.3%であり、分子量が20kDaであり、ヒアルロン酸の含有量が98%であり、収率が88%であった。
5Lの精製水に9mLのヒアルロニダーゼを加え、攪拌し、pHが8.0、温度が40℃になるまで調節し、500gの分子量が650kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し、素材を均一に溶解させるために、添加速度を遅くしなければならない。任意に、80min分解反応させた後、500gの分子量が650kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し続けた。7.5h酵素分解反応させた後、分子量が10kDaになり、任意に、酵素分解液を50℃に昇温して1h維持して、ヒアルロニダーゼが変性して不活性化された。任意に、上述酵素分解液に5gの活性炭を加え、60min吸着し、粗ろ過板で濾過し、孔径が0.22μmであるセルロースフィルターで濾過して純粋なヒアルロン酸溶液を取得した。任意に、上述ヒアルロン酸溶液に対して低温噴霧乾燥を行うことにより、低分子ヒアルロン酸の固体粉末を調製した。任意に、低温噴霧の吸気温度が75℃であり、吹き出し温度が40℃であり、流速が250mL/hであった。得られた完成品である低分子ヒアルロン酸の固体粉末の白色度が93%であり、水分含有量が7.8%であり、分子量が10kDaであり、ヒアルロン酸の含有量が99%であり、収率が89%であった。
5Lの精製水に10mLのヒアルロニダーゼを加え、攪拌し、pHが6.5、温度が38℃になるまで調節し、400gの分子量が700kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し、素材を均一に溶解させるために、添加速度を遅くしなければならない。任意に、90min分解反応させた後、500gの分子量が700kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し続けた。6h酵素分解反応させた後、分子量が7kDa-9kDaになり、任意に、酵素分解液を50℃に昇温して1h維持して、ヒアルロニダーゼが変性して不活性化された。任意に、上述酵素分解液に5gの活性炭を加え、60min吸着し、粗ろ過板で濾過し、孔径が0.22μmであるセルロースフィルターで濾過して純粋なヒアルロン酸溶液を取得した。任意に、上述ヒアルロン酸溶液に対して低温噴霧乾燥を行うことにより、低分子ヒアルロン酸の固体粉末を調製した。任意に、低温噴霧の吸気温度が80℃であり、吹き出し温度が40℃であり、流速が300mL/hであった。得られた完成品である低分子ヒアルロン酸の固体粉末の白色度が94%であり、水分含有量が6.9%であり、分子量が1kDaであり、ヒアルロン酸の含有量が99%であり、収率が90%であった。
5Lの精製水に10mLのヒアルロニダーゼを加え、攪拌し、pHが6.5、温度が38℃になるまで調節し、400gの分子量が700kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し、素材を均一に溶解させるために、添加速度を遅くしなければならない。90min分解反応させた後、500gの分子量が700kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し続けた。6h酵素分解反応させた後、分子量が7kDa-9kDaになり、酵素分解液を50℃に昇温して1h維持して、ヒアルロニダーゼが変性して不活性化された。上述酵素分解液に5gの活性炭を加え、60min吸着し、粗ろ過板で濾過し、孔径が0.22μmであるセルロースフィルターで濾過して純粋なヒアルロン酸溶液を取得した。得られた純粋なヒアルロン酸溶液を4倍のアルコールに逆沈殿しながら攪拌した。沈殿が終了し、1時間静置し、上澄みを除去し、一倍体積のアルコールを加えて3回脱水し、遠心し、上澄みを除去し、固形物に対して真空乾燥を行い、低分子ヒアルロン酸の固体粉末を調製した。低分子ヒアルロン酸粉末の白色度が89%であり、水分含有量が8.9%であり、分子量が9kDaであり、ヒアルロン酸の含有量が95%であり、収率が78%であった。
5Lの精製水に8mLのヒアルロニダーゼを加え、攪拌し、pHが6.5、温度が36℃になるまで調節し、400gの分子量が500kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し、素材を均一に溶解させるために、添加速度を遅くしなければならない。60min分解反応させた後、400gの分子量が500kDaであるヒアルロン酸ナトリウムをゆっくり添加し続けた。7h酵素分解反応させた後、分子量が30kDaになり、酵素分解液を50℃に昇温して1h維持して、ヒアルロニダーゼが変性して不活性化された。上述酵素分解液に5gの活性炭を加え、60min吸着し、粗ろ過板で濾過し、孔径が0.22μmであるセルロースフィルターで濾過して純粋なヒアルロン酸溶液を取得した。得られた純粋なヒアルロン酸溶液を4倍のアルコールに加えて逆沈殿しながら攪拌した。沈殿が終了し、1時間静置し、上澄みを除去し、1倍体積のアルコールを加えて3回脱水し、遠心し、上澄みを除去し、固形物に対して真空乾燥を行い、低分子ヒアルロン酸の固体粉末を調製した。低分子ヒアルロン酸粉末の白色度が87%であり、水分含有量が9.2%であり、分子量が30kDaであり、ヒアルロン酸の含有量が94%であり、収率が79%であった。
Claims (12)
- 以下のステップを含むことを特徴とする、低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
(1)酵素分解反応液:精製水にヒアルロニダーゼを加え、攪拌し、ヒアルロン酸又はその塩の固体粉末をゆっくり加え、酵素分解反応で酵素分解液を取得し、前記ヒアルロニダーゼは、植物性乳酸菌突然変異株CnT012-56が発酵生産して得られ、当該菌株がLactobacillus plantarumとして分類命名され、その寄託機関が中国微生物菌種保蔵管理委員会普通微生物センター(China General Microbiological Culture Collection Center)であり、住所が北京市朝陽区北辰西路1号院3号であり、寄託日が2018年11月28日であり、受託番号がCGMCC NO.16836である;
(2)ヒアルロニダーゼの不活性化:ステップ(1)での前記酵素分解液に対して昇温処理を行い、前記酵素分解液におけるヒアルロニダーゼ変性して不活性化される;
(3)吸着:ステップ(2)での前記酵素分解液を吸着し、混合液を取得する;
(4)濾過精製:ステップ(3)での混合液から吸着剤及び変性ヒアルロニダーゼを除去し、濾過して純粋な低分子ヒアルロン酸及びその塩溶液を取得する;
(5)低温噴霧乾燥:ステップ(4)での前記低分子ヒアルロン酸及びその塩溶液に対して低温噴霧乾燥を行い、所望の分子量の低分子ヒアルロン酸及びその塩の固体粉末を取得する。 - ステップ(1)において、まず、精製水にヒアルロニダーゼを加え、攪拌し、pHが5-8、温度が30-40℃になるまで調節し、質量対体積濃度が50-100g/Lになるように、ヒアルロン酸又はその塩の固体粉末をゆっくり加え、0.5-1.5h分解反応させた後、質量対体積濃度が100-200g/Lになるように、ヒアルロン酸又はその塩の固体粉末をゆっくり添加し続け、5-8h酵素分解し続けることを特徴とする、請求項1に記載の低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
- ステップ(1)での前記ヒアルロニダーゼの添加量は、1グラムのヒアルロン酸又はその塩あたり102-105IUの前記ヒアルロニダーゼであることを特徴とする、請求項1に記載の低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
- ステップ(2)での前記ヒアルロニダーゼが変性して不活性化される条件は、酵素分解液を45-80℃に昇温して5-60min維持することを特徴とする、請求項1に記載の低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
- ステップ(3)での前記酵素分解液の吸着条件は、0.01%-1%活性炭を用いて、30-90min吸着し、ステップ(4)で、孔径が0.22μmであるセルロースフィルターを用いて前記濾過を行うことを特徴とする、請求項1に記載の低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
- 前記ヒアルロン酸塩は、ヒアルロン酸ナトリウムであり、pHの調節は、塩酸又は水酸化ナトリウム溶液を用いることを特徴とする、請求項2に記載の低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
- ステップ(4)での前記低分子ヒアルロン酸又はその塩溶液の最終濃度は、10%-20%であることを特徴とする、請求項1に記載の低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
- ステップ(5)での前記低温噴霧乾燥の条件は、吸気温度が40℃-80℃であり、吹き出し温度が40℃であり、仕込み速度が100mL/h-300mL/hであることを特徴とする、請求項1に記載の低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
- ステップ(1)での前記酵素分解に用いられるヒアルロン酸又はその塩の分子量は、500kDa-700kDaであり、ステップ(5)で調製された前記低分子ヒアルロン酸又はその塩の分子量は、1kDa-60kDaであることを特徴とする、請求項1に記載の低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
- 前記ヒアルロニダーゼの生産方法は、以下のステップを含むことを特徴とする、請求項1-9のいずれか一項に記載の低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
(a)Lactobacillus plantarum CnT012-56菌種を殺菌された種培地に接種し、培養温度が30℃-37℃であり、回転速度が0-100rpm、8-24h培養し、種培養液を取得する;
(b)ステップ(1)での前記種培養液を殺菌された発酵培養基に接種し、培養温度が30℃-37℃であり、回転速度が0-150rpmであり、20-48h培養し、ヒアルロニダーゼ発酵液を取得する;
(c)ステップ(2)での前記ヒアルロニダーゼ発酵液に対して遠心を行い、上澄みを取得する;
(d)孔径分画分子量が200kDaである限外濾過膜を用いてステップ(3)での前記ヒアルロニダーゼ上澄みに対して限外濾過を行い、ろ液を取得する;
(e)孔径分画分子量が20kDaである限外濾過膜を用いてステップ(4)での前記ろ液に対して限外濾過を行い、低分子不純物を除去し、精製したヒアルロニダーゼを取得する。 - ステップ(a)での前記種培地の成分は、ペプトン10g/L、酵母浸漬パウダー5g/L、ヒアルロン酸5g/L、グルコース3g/L、塩化ナトリウム0.1g/L、硫酸アンモニウム2g/L、硫酸第一鉄0.05g/L、硫酸マグネシウム0.2g/L、トウェイン-801mLであり、pHが6.5であることを特徴とする、請求項10に記載の低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
- ステップ(b)での前記発酵培養基の成分は、ペプトン10g/L、酵母浸漬パウダー5g/L、ヒアルロン酸5g/L、グルコース3g/L、塩化ナトリウム0.1g/L、硫酸アンモニウム2g/L、硫酸第一鉄0.05g/L、硫酸マグネシウム0.2g/L、トウェイン-801mLであり、pHが6.5であることを特徴とする、請求項10-11のいずれか一項に記載の低分子ヒアルロン酸又はその塩を調製する方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910164881.3 | 2019-03-05 | ||
CN201910164881.3A CN109897876B (zh) | 2019-03-05 | 2019-03-05 | 一种制备小分子透明质酸或其盐的方法 |
PCT/CN2019/128316 WO2020177455A1 (zh) | 2019-03-05 | 2019-12-25 | 一种小分子透明质酸或其盐及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021517452A JP2021517452A (ja) | 2021-07-26 |
JP7105888B2 true JP7105888B2 (ja) | 2022-07-25 |
Family
ID=66946382
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020533114A Active JP7105888B2 (ja) | 2019-03-05 | 2019-12-25 | 低分子ヒアルロン酸又はその塩及びその調製方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP3730623A4 (ja) |
JP (1) | JP7105888B2 (ja) |
CN (1) | CN109897876B (ja) |
WO (1) | WO2020177455A1 (ja) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109897876B (zh) * | 2019-03-05 | 2020-11-06 | 山东安华生物医药股份有限公司 | 一种制备小分子透明质酸或其盐的方法 |
CN110408607B (zh) * | 2019-09-02 | 2021-05-18 | 山东安华生物医药股份有限公司 | 一种植物乳杆菌生产透明质酸酶发酵优化工艺 |
CN110982862B (zh) * | 2019-12-27 | 2022-05-06 | 华熙生物科技股份有限公司 | 一种大规模制备高纯度不饱和透明质酸二糖的方法 |
CN111632015A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-09-08 | 山东贯天下生物科技有限公司 | 一种鸡冠提取物及其提取方法和应用 |
CN112189765B (zh) * | 2020-09-30 | 2022-08-26 | 华熙生物科技股份有限公司 | 含透明质酸的宠物磨牙棒组合物、制法及其应用 |
CN112553273B (zh) * | 2020-12-26 | 2022-12-09 | 河北华曙新合药业有限公司 | 一种超小分子量透明质酸钠的制备工艺 |
CN113425662A (zh) * | 2021-08-16 | 2021-09-24 | 湖州伊婷生物科技有限公司 | 透明质酸与铁皮石斛酵母发酵产物组合物及化妆品 |
CN114250212A (zh) * | 2021-12-14 | 2022-03-29 | 华熙生物科技股份有限公司 | 一种透明质酸酶冻干制剂及其制备方法 |
CN114181986A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-03-15 | 新疆阜丰生物科技有限公司 | 一种低分子透明质酸钠的制备方法 |
KR102678076B1 (ko) * | 2022-12-14 | 2024-06-25 | 에이치케이이노엔 주식회사 | 발효 초저분자 히알루론산의 제조방법 및 이에 의해 제조된 발효 초저분자 히알루론산 |
CN116715786A (zh) * | 2023-05-15 | 2023-09-08 | 仁恒智研新材料科技(广东)有限公司 | 一种低动力粘度的线性透明质酸钠的制备方法 |
CN117535363A (zh) * | 2023-12-27 | 2024-02-09 | 常州加源医药科技研发有限公司 | 一种功能性透明质酸的生产方法 |
CN118186037A (zh) * | 2024-02-02 | 2024-06-14 | 北京伍冠肽斗生物科技有限责任公司 | 一种小分子透明质酸及其制备方法与应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012001696A (ja) | 2010-06-21 | 2012-01-05 | Toshitsu Kagaku Kenkyusho:Kk | 低分子ヒアルロン酸の製造方法 |
JP2015515260A (ja) | 2012-02-21 | 2015-05-28 | ブルームエイジ フリーダ バイオファーム カンパニー リミテッド | バチルス、ヒアルロン酸酵素、及びそれらの使用 |
JP2017088545A (ja) | 2015-11-11 | 2017-05-25 | 株式会社らいむ | 紫外線障害低減剤、紫外線障害低減剤の製造方法、培地用添加剤、微生物希釈液用添加剤、培地、微生物希釈液、外用剤および化粧品 |
CN108220364A (zh) | 2016-12-09 | 2018-06-29 | 华熙福瑞达生物医药有限公司 | 一种固液双相酶解与超滤联用制备超低分子量透明质酸寡糖及其盐的方法 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5094461B2 (ja) * | 2007-08-09 | 2012-12-12 | キッコーマン株式会社 | ヒアルロン酸加水分解酵素をコードする遺伝子 |
CN101507733B (zh) * | 2009-04-02 | 2011-03-30 | 北京中生奥普寡肽技术研究所 | 纳米小分子透明质酸及其制备方法 |
CN103562229A (zh) * | 2011-05-30 | 2014-02-05 | 诺维信生物制药丹麦公司 | 高分子量透明质酸的喷雾干燥 |
CN102690847A (zh) * | 2012-04-13 | 2012-09-26 | 华熙福瑞达生物医药有限公司 | 酶切法制备寡聚透明质酸盐的方法及所得寡聚透明质酸盐和其应用 |
CN106309471A (zh) * | 2015-07-02 | 2017-01-11 | 惠觅宙 | 一种低分子生物活性透明质酸的应用及其制剂 |
CN108410928B (zh) * | 2018-01-31 | 2021-04-06 | 彭文平 | 一种高浓度小分子透明质酸的制备方法及其应用 |
CN109897876B (zh) * | 2019-03-05 | 2020-11-06 | 山东安华生物医药股份有限公司 | 一种制备小分子透明质酸或其盐的方法 |
CN110408607B (zh) * | 2019-09-02 | 2021-05-18 | 山东安华生物医药股份有限公司 | 一种植物乳杆菌生产透明质酸酶发酵优化工艺 |
-
2019
- 2019-03-05 CN CN201910164881.3A patent/CN109897876B/zh active Active
- 2019-12-25 JP JP2020533114A patent/JP7105888B2/ja active Active
- 2019-12-25 EP EP19842856.7A patent/EP3730623A4/en active Pending
- 2019-12-25 WO PCT/CN2019/128316 patent/WO2020177455A1/zh unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012001696A (ja) | 2010-06-21 | 2012-01-05 | Toshitsu Kagaku Kenkyusho:Kk | 低分子ヒアルロン酸の製造方法 |
JP2015515260A (ja) | 2012-02-21 | 2015-05-28 | ブルームエイジ フリーダ バイオファーム カンパニー リミテッド | バチルス、ヒアルロン酸酵素、及びそれらの使用 |
JP2017088545A (ja) | 2015-11-11 | 2017-05-25 | 株式会社らいむ | 紫外線障害低減剤、紫外線障害低減剤の製造方法、培地用添加剤、微生物希釈液用添加剤、培地、微生物希釈液、外用剤および化粧品 |
CN108220364A (zh) | 2016-12-09 | 2018-06-29 | 华熙福瑞达生物医药有限公司 | 一种固液双相酶解与超滤联用制备超低分子量透明质酸寡糖及其盐的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3730623A4 (en) | 2020-12-30 |
CN109897876A (zh) | 2019-06-18 |
EP3730623A1 (en) | 2020-10-28 |
CN109897876B (zh) | 2020-11-06 |
JP2021517452A (ja) | 2021-07-26 |
WO2020177455A1 (zh) | 2020-09-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7105888B2 (ja) | 低分子ヒアルロン酸又はその塩及びその調製方法 | |
El-Gendi et al. | Recent advances in bacterial cellulose: a low-cost effective production media, optimization strategies and applications | |
JP5957096B2 (ja) | バチルス、ヒアルロン酸酵素、及びそれらの使用 | |
CN108220364B (zh) | 一种固液双相酶解与超滤联用制备超低分子量透明质酸寡糖及其盐的方法 | |
CN111040048A (zh) | 一种超低分子量透明质酸及其制备方法 | |
WO2008062998A1 (en) | Method for purifying hyaluronic acid | |
CN101173231A (zh) | 高密度蛭弧菌游泳体的发酵培养技术 | |
WO2014012418A1 (zh) | 一种连续发酵制备高丙酸含量短链脂肪酸的方法 | |
JPH0630605B2 (ja) | ヒアルロン酸ナトリウム水溶液の製造法 | |
EP2479194B1 (en) | Method for manufacturing low molecular weight hyaluronic acid | |
CN111700279A (zh) | 一种小麦麸皮膳食纤维的制备方法 | |
CN114410617B (zh) | 一种提高产氢细菌生物氢合成的固定化方法及应用 | |
KR20140121732A (ko) | 송이 분말을 이용한 박테리아 셀룰로오스의 제조 방법 및 그 방법에 의하여 얻어진 박테리아 셀룰로오스 | |
JPWO2011114470A1 (ja) | ヒアルロン酸の精製方法及び製造方法 | |
KR101627014B1 (ko) | 히알루론산의 정제 방법 | |
CN113413327B (zh) | 一种多糖类皮肤微生态化妆品的制备方法 | |
CN115558040B (zh) | 一种无防腐剂添加的透明质酸或其盐的生产方法 | |
CN115261424A (zh) | 一种葡寡糖的制备方法 | |
JPH054067B2 (ja) | ||
CN113493528A (zh) | 一种真菌发酵耦合氧化鱿鱼扇形骨制备壳聚糖的方法 | |
CN118580393A (zh) | 一种透明质酸固体原料的制备方法 | |
CN115813798A (zh) | 燕麦仁提取物的制备工艺 | |
CN104531645A (zh) | 一种假丝酵母蛋白酶制剂及其制备方法 | |
CN118086424A (zh) | 一种产酶菌组合及利用产酶菌制备银耳低聚糖的方法 | |
JPH0823992A (ja) | ヒアルロン酸の製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200608 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210803 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210902 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20210902 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211130 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220228 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20220524 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220621 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220712 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7105888 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |