JP6989300B2 - アンモニアの定量方法、定量試薬キット、試験片及びアンモニアの定量装置 - Google Patents
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<1> 本発明の一態様は、アンモニアを含有する被検液に、ATP及びL−グルタミン酸の存在下にてグルタミン合成酵素を作用させてADPを生成し、生成された前記ADP及びグルコースにADP依存性ヘキソキナーゼを作用させ、グルコース−6−リン酸を生成し、生成された前記グルコース−6−リン酸及びNAD系化合物の酸化型にグルコース−6−リン酸脱水素酵素を作用させNAD系化合物の還元型を生成し、生成された前記NAD系化合物の還元型を定量してアンモニアの定量を行うアンモニアの定量方法である。
<2> 本発明の一態様は、生成された前記NAD系化合物の還元型及び発色剤を反応させて得られる色素を定量してアンモニアの定量を行う<1>に記載のアンモニアの定量方法である。
<3> 本発明の一態様は、更に、触媒であるマグネシウムイオン(Mg2+)及びマンガンイオン(Mn2+)の少なくとも一方の存在下にて前記被検液に前記グルタミン合成酵素を作用させて前記ADPを生成する<1>又は<2>に記載のアンモニアの定量方法である。
<4> 本発明の一態様は、グルコースを含有する第1試薬と、グルタミン合成酵素、ADP依存性ヘキソキナーゼ及びグルコース−6−リン酸脱水素酵素を含有する第2試薬と、を備え、ATP、L−グルタミン酸及びNAD系化合物の酸化型はそれぞれ独立に、前記第1試薬及び前記第2試薬の少なくとも一方に含有される定量試薬キットである。
<5> 本発明の一態様は、前記ATP、前記L−グルタミン酸及び前記NAD系化合物の酸化型は前記第1試薬に含有される<4>に記載の定量試薬キットである。
<6> 本発明の一態様は、前記第1試薬は、発色剤を更に含有し、前記第2試薬は、電子キャリアーを更に含有する<4>又は<5>に記載の定量試薬キットである。
<7> 本発明の一態様は、グルコース、グルタミン合成酵素、ADP依存性ヘキソキナーゼ、グルコース−6−リン酸脱水素酵素、ATP、L−グルタミン酸及びNAD系化合物の酸化型を含有する試験片である。
<8> 本発明の一態様は、アンモニアを含有する被検液に、ATP及びL−グルタミン酸の存在下にてグルタミン合成酵素を作用させてADPを生成し、生成された前記ADP及びグルコースにADP依存性ヘキソキナーゼを作用させ、グルコース−6−リン酸を生成し、生成された前記グルコース−6−リン酸及びNAD系化合物の酸化型にグルコース−6−リン酸脱水素酵素を作用させNAD系化合物の還元型を生成し、生成された前記NAD系化合物の還元型を定量してアンモニアの定量を行うアンモニアの定量装置である。
<9> 本発明の一態様は、アンモニアと、グルコースと、グルタミン合成酵素と、ADP依存性ヘキソキナーゼと、グルコース−6−リン酸脱水素酵素と、ATPと、L−グルタミン酸と、NAD系化合物の酸化型と、を含有する被検対象が配置され、前記被検対象中にて、前記アンモニア、前記ATP及び前記L−グルタミン酸の存在下にて前記グルタミン合成酵素を作用させてADPを生成し、生成された前記ADP及び前記グルコースに前記ADP依存性ヘキソキナーゼを作用させ、グルコース−6−リン酸を生成し、かつ、生成された前記グルコース−6−リン酸及び前記NAD系化合物の酸化型に前記グルコース−6−リン酸脱水素酵素を作用させ前記NAD系化合物の還元型を生成する反応を行う反応部と、前記反応部での反応により生成された前記NAD系化合物の還元型を定量する定量部と、を備えるアンモニアの定量装置である。
<10> 本発明の一態様は、前記反応部は、生成された前記NAD系化合物の還元型及び発色剤を反応させて色素を生成し、前記定量部は、前記反応部での反応により生成された前記色素を定量する<9>に記載のアンモニアの定量装置である。
本明細書において、「〜」を用いて表される数値範囲は、「〜」の前後に記載される数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味する。
本明細書において、アンモニアを含有する被検液は、アンモニア及びアンモニウムイオンの少なくとも一方を含む被検液を意味し、アンモニア濃度及びアンモニア量はそれぞれ、アンモニアとアンモニウムイオンとの合計濃度及び合計量を意味している。
本明細書において、L−グルタミン酸、リン酸及びテトラゾリウム化合物は、それぞれ塩であってもよく、イオンであってもよい。
本発明の一態様は、アンモニアを含有する被検液に、ATP(アデノシン三リン酸)及びL−グルタミン酸の存在下にてグルタミン合成酵素を作用させてADP(アデノシン二リン酸)を生成し、生成されたADP及びグルコースにADP依存性ヘキソキナーゼを作用させ、グルコース−6−リン酸を生成し、生成されたグルコース−6−リン酸及びNAD(ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド)系化合物の酸化型にグルコース−6−リン酸脱水素酵素を作用させNAD系化合物の還元型を生成し、生成されたNAD系化合物の還元型を定量してアンモニアの定量を行うアンモニアの定量方法である。
本態様のアンモニアの定量方法は、NAD合成酵素及びホスホエノールピルビン酸といった高価な試薬原料を使用せず、グルコースという安価な試薬原料を使用してアンモニアの定量が可能であるため、安価である。
本態様のアンモニアの定量方法は、溶存酸素を反応として使用しないため、例えば、密閉系にて本態様のアンモニアの定量方法を実施することにより、溶存酸素の影響を回避することができる。また、被検液、試薬中等に溶存酸素が含まれる場合であっても、酸化酵素を使用しない還元系にてアンモニアを定量するため、溶存酸素の影響を受けにくい。
また、本発明の一態様は、グルコースを含有する第1試薬と、グルタミン合成酵素、ADP依存性ヘキソキナーゼ及びグルコース−6−リン酸脱水素酵素を含有する第2試薬と、を備え、ATP、L−グルタミン酸及びNAD系化合物の酸化型はそれぞれ独立に、第1試薬及び第2試薬の少なくとも一方に含有される定量試薬キットである。本態様の定量試薬キットは、例えば、アンモニアの定量に用いられる。
また、本発明の一態様は、グルコース、グルタミン合成酵素、ADP依存性ヘキソキナーゼ、グルコース−6−リン酸脱水素酵素、ATP、L−グルタミン酸及びNAD系化合物の酸化型を含有する試験片である。本態様の試験片は、例えば、アンモニアの定量に用いられる。
本発明の一態様は、アンモニアを含有する被検液に、ATP及びL−グルタミン酸の存在下にてグルタミン合成酵素を作用させてADPを生成し、生成されたADP及びグルコースにADP依存性ヘキソキナーゼを作用させ、グルコース−6−リン酸を生成し、生成されたグルコース−6−リン酸及びNAD系化合物の酸化型にグルコース−6−リン酸脱水素酵素を作用させNAD系化合物の還元型を生成し、生成されたNAD系化合物の還元型を定量してアンモニアの定量を行うアンモニアの定量装置である。
以下に示す含浸液1及び含浸液2を調製し、ろ紙を準備した。
<含浸液1>
TES−水酸化ナトリウム緩衝液(同仁化学社製、pH7.0) 150mmol/L
L−グルタミン酸ナトリウム(ナカライテスク社製) 15mmol/L
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド酸化型(Roche社製) 15mmol/L
アデノシン三リン酸二水和物(Roche社製) 15mmol/L
塩化マグネシウム六水和物 75mmol/L
グルコース−6−リン酸脱水素酵素(東洋紡社製) 80U/mL
ジアホラーゼ(旭化成社製) 50U/mL
ADP依存性ヘキソキナーゼ(旭化成社製) 40U/mL
グルタミン合成酵素(キッコーマン社製) 45U/mL
<含浸液2>
グルコース一水和物(Merck社製) 25mmol/L
テトラゾリウムバイオレット(同仁化学社製) 15mmol/L
<ろ紙>
3MM HP(Whatman社製)
K/S値=(1−R)2/2R(Kubelka−Munk式、Rは反射率)
Claims (3)
- グルタミン合成酵素、ADP依存性ヘキソキナーゼ及びグルコース−6−リン酸脱水素酵素を含有する含浸液1をろ紙に含浸し、乾燥させることと、
前記ろ紙にグルコースを含有する含浸液2を含浸し、乾燥させることと、を含み、
ATP、L−グルタミン酸及びNAD系化合物の酸化型はそれぞれ独立に、前記含浸液1及び前記含浸液2の少なくとも一方に含有される試験片の製造方法。 - グルタミン合成酵素、ADP依存性ヘキソキナーゼ、グルコース−6−リン酸脱水素酵素及び電子キャリアーを含有する含浸液1をろ紙に含浸し、乾燥させることと、
前記ろ紙にグルコース及び発色剤を含有する含浸液2を含浸し、乾燥させることと、を含み、
ATP、L−グルタミン酸及びNAD系化合物の酸化型はそれぞれ独立に、前記含浸液1及び前記含浸液2の少なくとも一方に含有される試験片の製造方法。 - 前記ATP、前記L−グルタミン酸及び前記NAD系化合物の酸化型は、前記含浸液1に含有される請求項1又は請求項2に記載の試験片の製造方法。
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