JP6984140B2 - Rnアーゼ阻害剤組成物 - Google Patents
Rnアーゼ阻害剤組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6984140B2 JP6984140B2 JP2017037201A JP2017037201A JP6984140B2 JP 6984140 B2 JP6984140 B2 JP 6984140B2 JP 2017037201 A JP2017037201 A JP 2017037201A JP 2017037201 A JP2017037201 A JP 2017037201A JP 6984140 B2 JP6984140 B2 JP 6984140B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- rnase inhibitor
- aqueous solution
- surfactant
- rnase
- aggregation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
項1.RNase(RNase)阻害剤を含む水溶液中において界面活性剤を含有せしめることを特徴とするRNase阻害剤組成物。
項2.水溶液中における前期RNase阻害剤の濃度が5〜200U/μlである項1に記載のRNase阻害剤組成物。
項3.水溶液中における前記界面活性剤の濃度が0.001〜1%である項1または2記載のRNase阻害剤組成物。
項4.水溶液中における前記界面活性剤の濃度が0.01〜0.1%である項3に記載のRNase阻害剤組成物。
項5.水溶液中に含まれる前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である項1から4のいずれかに記載のRNase阻害剤組成物。
項6.水溶液中における前記界面活性剤がSDS、CHAPS、コール酸ナトリウムおよびデオキシコール酸ナトリウムからなる群よりから選ばれる少なくとも1種類の界面活性剤である項1から4のいずれかに記載のRNase阻害剤組成物。
項7.水溶液中における前記界面活性剤がTween−20、ノニデット P−40、TritonX−100、Brig35、SDS、CHAPS、コール酸ナトリウムおよびデオキシコール酸ナトリウムからなる群より選ばれる少なくとも1種類の界面活性剤である項1から4のいずれかに記載のRNase阻害剤組成物。
項8.水溶液中のRNase阻害剤凝集を抑制するために用いることを特徴とする項1から7のいずれかに記載のRNase阻害剤組成物。
項9.項1から8のいずれかに記載のRNase阻害剤組成物を含んでなることを特徴とするRT−PCR反応用キット。
界面活性剤の添加検討
(1)RNase阻害剤を含む水溶液の作製
特許文献2に基づき大腸菌を宿主としてRNase阻害剤を発現させ、精製することによりRNase阻害剤を取得した。取得したRNase阻害剤の活性を、レート法を用いて測定し、1、5、20、40、200U/μlのRNase阻害剤を含む、以下の組成からなる水溶液を作製した。
20mM Hepes−KOH(pH7.6)
50mM KCl
8mM DTT
50% Glycerol
作製した1、5、20、40、200U/μlのRNase阻害剤を含む水溶液1mLに対して各界面活性剤の終濃度が1〜0.00001%になるように表1に示すように調整した。その後、調製したRNase阻害剤を含む水溶液を15mLチューブに入れ、MIX−ROTAR MR−5(ASONE)にて回転数40rpmにて6時間撹拌し、目視により凝集の有無を判別した。結果を表2および表3に示す。凝集が見られない場合を○、凝集が見られる場合を×を表記する。
40U/μlのRNase阻害剤を含む水溶液に界面活性剤を添加した結果を表2、表3に示す。界面活性剤を添加しない場合は凝集が確認されたが、RNase阻害剤を含む水溶液に対して界面活性剤を0.001〜1%添加することで凝集が発生しないことが確認できた。同様の結果が、5、20、200U/μlのRNase阻害剤を含む水溶液でも得られた。
界面活性剤の有無がRT−PCRの反応系に与える影響の確認
(1)RNAサンプル
RNAサンプルとして、HeLa細胞より精製したTotal RNAを使用した。
(2)RT−PCR反応
界面活性剤の反応系への影響の確認を行うためにTween−20を0.01%含む40U/μlのRNase阻害剤溶液を実施例1に記載の方法で調整し、RT−PCR反応液の調整に使用した。反応液中に含まれるTween−20の終濃度は0.00025%となる。
RT−PCRは、以下のような組成及びサイクル条件により行った反応系の指標としてPCRの反応効率、相関係数、Ct値を使用し、β−Actinを標的としたRT−PCRを行った。
ReverTra Ace(東洋紡) 1unit、
RNase 阻害剤(東洋紡) 1unit、
rTth DNA Polymerase(東洋紡) 1unit、
抗Tth抗体 0.4μg、
10×Buffer(東洋紡 rTth DNA PolymeraseのBuffer)
10mM dNTPs(東洋紡) 1.0μL、
50μM β−actinフォアードプライマー(配列番号1) 0.3μL、
100μM β−actinプローブ(配列番号2) 0.1μL、
50μM β−actinリバースプライマー(配列番号3) 0.3μL、
RNA 5μL、
血液 10μL、
を含む反応液50μLを、以下の温度サイクルでPCR反応を行った。
50℃ 10分
95℃ 1分
95℃ 15秒−60℃ 45秒 45サイクル
(3)結果
その結果を表5に示す。
Claims (5)
- タンパク質からなるRNase阻害剤を5〜200U/μl濃度で含む水溶液中において非イオン性界面活性剤を0.001〜1%濃度で含有せしめることを特徴とするRNase阻害剤組成物。
- 水溶液中における前記非イオン性界面活性剤の濃度が0.01〜0.1%である請求項1に記載のRNase阻害剤組成物。
- 水溶液中における前記非イオン性界面活性剤がTween−20(登録商標)、ノニデット P−40(登録商標)、TritonX−100(登録商標)、及びBrij35(登録商標)からなる群より選ばれる少なくとも1種類の非イオン性界面活性剤である請求項1又は2に記載のRNase阻害剤組成物。
- 水溶液中のRNase阻害剤の凝集発生が抑制されていることを特徴とする請求項1から3のいずれかに記載のRNase阻害剤組成物。
- 請求項1から4のいずれかに記載のRNase阻害剤組成物を含んでなることを特徴とするRT−PCR反応用キット。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017037201A JP6984140B2 (ja) | 2017-02-28 | 2017-02-28 | Rnアーゼ阻害剤組成物 |
JP2021050519A JP7036259B2 (ja) | 2017-02-28 | 2021-03-24 | Rnアーゼ阻害剤組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017037201A JP6984140B2 (ja) | 2017-02-28 | 2017-02-28 | Rnアーゼ阻害剤組成物 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021050519A Division JP7036259B2 (ja) | 2017-02-28 | 2021-03-24 | Rnアーゼ阻害剤組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018139563A JP2018139563A (ja) | 2018-09-13 |
JP6984140B2 true JP6984140B2 (ja) | 2021-12-17 |
Family
ID=63526994
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017037201A Active JP6984140B2 (ja) | 2017-02-28 | 2017-02-28 | Rnアーゼ阻害剤組成物 |
JP2021050519A Active JP7036259B2 (ja) | 2017-02-28 | 2021-03-24 | Rnアーゼ阻害剤組成物 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021050519A Active JP7036259B2 (ja) | 2017-02-28 | 2021-03-24 | Rnアーゼ阻害剤組成物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (2) | JP6984140B2 (ja) |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE9902410D0 (sv) * | 1999-06-24 | 1999-06-24 | Cavidi Tech Ab | Reverse transcriptase assay kit, use thereof and method for analysis of RT activity in biological samples |
DK2213747T3 (da) * | 2007-11-05 | 2021-08-09 | Riken | Fremgangsmåde til fremstilling af membranprotein |
US8895240B2 (en) * | 2008-05-19 | 2014-11-25 | E I Du Pont De Nemours And Company | Method, kit and system for collecting and processing samples for DNA and RNA detection |
-
2017
- 2017-02-28 JP JP2017037201A patent/JP6984140B2/ja active Active
-
2021
- 2021-03-24 JP JP2021050519A patent/JP7036259B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7036259B2 (ja) | 2022-03-15 |
JP2018139563A (ja) | 2018-09-13 |
JP2021100965A (ja) | 2021-07-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112760318B (zh) | 一种用于稳定核酸分子的试剂组合物及其应用 | |
JP5192631B2 (ja) | 生物学的試料を収集し安定化させるための方法および装置 | |
JP5442105B2 (ja) | 生物試料回収/輸送組成物および方法 | |
ES2579803T3 (es) | Composiciones y métodos mejorados para la síntesis de ADNc | |
US20110027862A1 (en) | Sample stabilization | |
JP5809385B2 (ja) | 環状ゲノムのローリングサークル増幅 | |
JP2010217198A (ja) | 生物学的試料を収集し安定化させるための方法および装置 | |
JP7375845B2 (ja) | 改変された耐熱性dnaポリメラーゼ | |
WO2022000152A1 (en) | Rapid pcr-based virus detection method, and kits therefor | |
JP6636247B2 (ja) | WT1mRNAの発現量定量方法 | |
JP2011504754A (ja) | 1ステップrt−pcrの阻害低減 | |
JP2022511993A (ja) | Rna保存溶液、及び製造方法及び使用方法 | |
JP5608998B2 (ja) | 保存安定性に優れた核酸増幅検出試薬キット | |
Hoyland et al. | A comparison of in situ hybridisation, reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) and in situ-RT-PCR for the detection of canine distemper virus RNA in Paget's disease | |
KR101777168B1 (ko) | 별도의 세포 용해 과정 없이 핵산을 추출하기 위한 검체 수송 배지 조성물 및 이의 용도 | |
US11981893B2 (en) | DNA stabilization of RNA | |
JP7036259B2 (ja) | Rnアーゼ阻害剤組成物 | |
EP3329011B1 (en) | Method and composition | |
JP2006087394A (ja) | 核酸抽出方法および核酸抽出キット | |
US20160097086A1 (en) | Compositions and Methods for RT-PCR | |
CN107532197A (zh) | 干燥形态的酶反应试剂及其制备方法 | |
JP2010233504A (ja) | 保存安定性に優れた核酸増幅検出試薬キット | |
CN114341150A (zh) | 用于增强逆转录酶活性和/或减少逆转录酶抑制的组合物和方法 | |
López et al. | AU Content in the MicroRNA sequence influences its stability after heat treatment | |
JP6733951B2 (ja) | 核酸保存用組成物及び核酸保存方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200214 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210115 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210126 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210324 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210824 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211001 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20211026 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20211108 |
|
R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 6984140 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |