JP6917239B2 - タンパク質およびその製造方法、タンパク質組成物ならびにそれを用いたnmnの測定方法および測定組成物 - Google Patents
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Description
[1]
以下の(1)〜(3)の性質を有する、タンパク質。
(1)NMNにアデノシン三リン酸のアデニル酸を転移しNADを生成する活性を有する。
(2)70℃で45分間安定である。
(3)比活性が15(μmol/min/mg)以上である。
[2]
以下の(4)の性質をさらに有する、タンパク質。
(4)Thermus thermophilus由来であるか、またはThermus thermophilus由来の遺伝子の移入による形質転換体由来である。
[3]
以下の(5)〜(7)の性質をさらに有する、[1]または[2]に記載のタンパク質。
(5)SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定した前記タンパク質の分子量が20,000〜30,000である。
(6)ニッケルイオンで活性化される。
(7)至適pHが7〜8である。
[4]
以下の(a)〜(c)のいずれかである、[1]〜[3]のいずれかに記載のタンパク質。
(a)配列番号1に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質
(b)配列番号1に示されるアミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、および/または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質
(c)配列番号1に示されるアミノ酸配列と80%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質
[5]
[1]〜[4]のいずれかに記載のタンパク質を含む、タンパク質組成物。
[6]
以下の(A)〜(C)のいずれかを含むポリヌクレオチド。
(A)配列番号2に示される塩基配列
(B)配列番号2に示される塩基配列において、1もしくは複数個の塩基が置換、欠失、挿入、および/または付加された塩基配列を有し、かつ、NMNにアデノシン三リン酸のアデニル酸を転移しNADを生成する活性を有するタンパク質をコードする塩基配列
(C)配列番号2に示す塩基配列と80%以上の配列同一性を有し、かつ、NMNにアデノシン三リン酸のアデニル酸を転移しNADを生成する活性を有するタンパク質をコードする塩基配列
[7]
以下の(A)〜(C)のいずれかを含むポリヌクレオチド。
(A)配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列
(B)配列番号1に示されるアミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、NMNにアデノシン三リン酸のアデニル酸を転移しNADを生成する活性を有するタンパク質をコードする塩基配列
(C)配列番号1に示されるアミノ酸配列と80%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする塩基配列
[8]
[6]または[7]に記載のポリヌクレオチドを含む、組換えベクター。
[9]
[8]に記載の組換えベクターを導入した、形質転換体。
[10]
配列番号1に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子を組換えベクターに挿入する工程と、前記工程で得られた組換えベクターを用いて宿主細胞を形質転換し、形質転換体を製造する工程と、前記工程で得られた形質転換体を培地に培養し、培養液からNMNにアデノシン三リン酸のアデニル酸を転移しNADを生成する活性を有するタンパク質を採取する工程を含む、タンパク質の製造方法。
[11]
宿主細胞が微生物である、[10]に記載の製造方法。
[12]
以下の工程(A)〜(D)を含む、NMNを測定する方法。
(A)試料と[1]〜[4]のいずれかに記載のタンパク質または[5]に記載のタンパク質組成物とを接触せしめ、試料中のNMNをNADに変換せしめる工程
(B)変換された試料中のNADを下記式(1)の酵素サイクリング法により反応せしめる工程
(D)検出されたシグナルの変化量に基づき、試料が含有するNMNの量を算出する工程
[13]
テトラゾリウム塩が2‐(2‐メトキシ‐4‐ニトロフェニル)‐3‐(4−ニトロフェニル)‐5‐(2、4‐ジスルホフェニル)‐2H‐テトラゾリウム一ナトリウム(以下、WST−8)である、[12]に記載の方法。
[14]
脱水素酵素が12α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼである、[12]または[13]に記載の方法。
[15]
下記の成分を含む、NMNの測定用組成物。
(A)[1]〜[4]のいずれかに記載のタンパク質または[5]に記載のタンパク質組成物
(B)NADをNADHに変換せしめる脱水素酵素
(C)脱水素酵素の基質
(D)テトラゾリウム塩
(E)テトラゾリウム塩をホルマザン色素に変換せしめる還元酵素
[16]
テトラゾリウム塩がWST−8である、[15]に記載の測定用組成物。
[17]
脱水素酵素が12α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼである、[15]または[16]に記載の測定用組成物。
[18]
[15]〜[17]のいずれかに記載の測定用組成物を用いて、被検体由来の試料中のNMNの量を算出する工程を含む、NMNが関与する疾患および/または状態を、診断および/または管理する方法。
[19]
NMNが関与する疾患および/または状態が、インスリン抵抗性、脂質異常症、糖尿病性腎症、またはアルツハイマー病である[18]に記載の方法。
[20]
NMNが関与する疾患および/または状態の診断および/または管理用組成物である、[15]〜[17]のいずれかに記載の測定用組成物。
[21]
前記NMNが関与する疾患および/または状態が、インスリン抵抗性、脂質異常症、糖尿病性腎症、またはアルツハイマー病である[20]に記載の測定用組成物。
(1)NMNにアデノシン三リン酸のアデニル酸を転移しNADを生成する活性を有する。
(2)70℃で45分間安定である。
(3)比活性が15(μmol/min/mg)以上、好ましくは17(μmol/min/mg)以上、より好ましくは19(μmol/min/mg)以上である。
(5)SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定した本発明のタンパク質の分子量が20,000〜30,000である。
(6)ニッケルイオンで活性化される。
(7)至適pHが7〜8である。
(4)Thermus thermophilus由来であるか、またはThermus thermophilus由来の遺伝子の移入による形質転換体由来である。
(a)配列番号1に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質
(b)配列番号1に示されるアミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、および/または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質
(c)配列番号1に示されるアミノ酸配列と80%以上、好ましくは90%以上、より好ましくは95%以上、さらに好ましくは98%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質
(A)配列番号2に示される塩基配列
(B)配列番号2に示される塩基配列において、1もしくは複数個の塩基が置換、欠失、挿入、および/または付加された塩基配列を有し、かつ、NMNにアデノシン三リン酸のアデニル酸を転移しNADを生成する活性を有するタンパク質をコードする塩基配列
(C)配列番号2に示す塩基配列と80%以上、好ましくは90%以上、より好ましくは95%以上、さらに好ましくは98%以上の同一性を有し、かつ、NMNにアデノシン三リン酸のアデニル酸を転移しNADを生成する活性を有するタンパク質をコードする塩基配列
(A)配列番号1に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列
(B)配列番号1に示されるアミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、NMNにアデノシン三リン酸のアデニル酸を転移しNADを生成する活性を有するタンパク質をコードする塩基配列
(C)配列番号1に示されるアミノ酸配列と80%以上、好ましくは90%以上、より好ましくは95%以上、さらに好ましくは98%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする塩基配列
(A)試料と本発明のタンパク質(NMNAT)またはタンパク質組成物とを接触せしめ、試料中のNMNをNADに変換せしめる工程
(B)変換された試料中のNADを下記式(1)の酵素サイクリング法により反応せしめる工程。
(D)検出されたシグナルの変化量に基づき、試料が含有するNMNの量を算出する工程
(A)本発明のタンパク質またはタンパク質組成物
(B)NADをNADHに変換せしめる脱水素酵素
(C)脱水素酵素の基質
(D)テトラゾリウム塩
(E)テトラゾリウム塩をホルマザン色素に変換せしめる還元酵素
<Thermus thermophilus HB8 DSM579株由来NMNAT組換え体酵素の製造>
Thermus thermophilus HB8 DSM579株より染色体DNAを、フェノール・クロロホルム法にて抽出した。配列番号3に記載の塩基配列をセンスプライマー、配列番号4に記載の塩基配列をアンチセンスプライマーとして、KOD FX(品番:KFX−101,東洋紡社製)を用いてPCRを行い、約600 bpのPCR産物を得た。得られたPCR産物をNdeI(品番:1161A,タカラバイオ社製)とHindIII(品番:1060A,タカラバイオ社製)で消化し、発現ベクターであるpET21a(+)ベクター(品番:69740−3,Novagen社製)のNdeI−HindIII部位に挿入して、NMNAT/pET21a(+)発現用プラスミドを得た。上記発現プラスミドをOne shot BL21(DE3)Chemically Competent E.coli(品番:C6000−03,Invitrogen社製)に形質転換し、NMNATをコードする塩基配列からなるポリヌクレオチドを含む組換えベクターを有する形質転換体、NMNAT/pET−21a(+)/BL21(DE3)を得た。
<組換えNMNATの培養と可溶化>
実施例1記載の形質転換体1コロニーを50 μg/mLのアンピシリンを含む液体LB培地5 mMに植菌し、試験管にて25℃で16時間培養してシードとした。上記のシードを50 μg/mLのアンピシリンを含む液体培地(1% グリセロール、2% ソルビトール、3% ミースト、1% ラクトース、0.05% アデカノールLG−109(ADEKA社製))1.6 Lに1/1000量植菌し、ジャーファーメンターにて28℃、pH6.8、650 rpmの条件で24時間培養した。同条件で2つのジャーファーメンターにて培養した(3.2 L培養)。24時間後、培養液を遠心分離して集菌した後、菌体を10 mM Tris−HCl(pH7.5)に溶解し、超音波発生器で破砕し、可溶化した。可溶化液を70℃で30分間反応させた後、遠心分離し、得られた上清を粗酵素液とした。
<組換え体NMNATの精製>
実施例2で得られた粗酵素液を10 mM Tris−HCl(pH8.5)溶液で平衡化したQ Sepharose Big Beads(GEヘルスケア社製)を充填したカラムに吸着させた。その後0および0.5 M 塩化カリウムを含む10 mM Tris−HCl(pH8.5)溶液を用いた10 CV(Column Volume)のリニアグラジエントにより溶出した。SDS−PAGEにて組換え体NMNATの溶出画分を確認した後、溶出画分の溶液をAmicon Ultra−15遠心式フィルターユニット(ミリポア社製)で濃縮し、3 M 塩化カリウムを添加した。3 M 塩化カリウムを添加したNMNATを含む溶液を、3 M 塩化カリウムを含む10 mM Tris−HCl(pH7.5)溶液で平衡化したPhenyl Sepharose 6 Fast Flow(high sub)(GEヘルスケア社製)を充填したカラムに吸着させ、3および0 M 塩化カリウムを含む10 mM Tris−HCl(pH7.5)溶液を用いた10 CVのリニアグラジエントにより溶出した。溶出画分をSDS−PAGEにて確認後回収し、Amicon Ultra−15遠心式フィルターユニット(ミリポア社製)で濃縮した後、PD−10カラム(GEヘルスケア社製)で脱塩した。脱塩したNMNATを含む溶液を10 mM Tris−HCl(pH8.5)溶液で平衡化したQ Sepharose High Performance(GEヘルスケア社製)を充填したカラムに吸着させた。その後0および0.5 M 塩化カリウムを含む10 mM Tris−HCl(pH8.5)溶液を用いた10 CVのリニアグラジエントにより溶出した。溶出画分をSDS−PAGEにて確認後回収し、Amicon Ultra−15遠心式フィルターユニット(ミリポア社製)で濃縮した後、10 mM Tris−HCl(pH8.0)溶液で透析し、組換え体NMNAT酵素溶液14 mLを得た。得られたNMNAT酵素溶液をSDS−PAGEにて電気泳動を行ったところ、20kDaと29kDaの間にNMNATのバンドが確認された。また、280 nmの吸光度を用いてタンパク質濃度を計算したところ、32.7 mg/mL(培養液3.2Lあたり)であり、培養液1LあたりのNMNAT生産量は143.1 mgであった。
<組換え体NMNATの熱安定性>
実施例3で精製した組換え体NMNATの熱安定性を調べるため、70℃で15分、30分、45分間インキュベーション後の残存活性を調べた。試薬の組成は以下の通りである。
<R1試薬>
100mM HEPES(4−(2−hydroxyethyl)−1−piperazineethanesulfonic acid)−NaOH(pH7.5)
1mM MgCl2
1mM β−NMN
1mM ATP
20U/mL 12α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ
4mM コール酸ナトリウム
(試料)
NMNATを10 mM リン酸カリウム緩衝液(pH7.5)にて希釈し、NMNAT溶液を作製した。作製したNMNAT溶液を4つに分注し、それぞれを、4℃保存、70℃で15分間インキュベート、70℃で30分間インキュベート、70℃で45分間インキュベートし、それぞれについて活性測定を行った。(活性測定)
活性の測定には7080形日立自動分析装置を使用した。測定パラメーターを以下に示す。
(7080形日立自動分析装置測定パラメーター)
分析方法 レートA
測定波長(副/主) 405nm/340nm
反応時間 5分
測光ポイント 10−13
試料量 5μL
R1試薬量 150μL
(NMNAT活性値算出方法)
NMNAT活性値(μmol/min/mL)
={(ΔAbs/min)/NADHミリモル吸光係数}÷{(試料量)/(試料量+R1試薬量)}
={(ΔmAbs/min)/6.22}÷{(試料量)/(試料量+R1試薬量)}÷1000
5 μLの試料と150 μLのR1試薬を混合し、37℃でインキュベートし反応を開始した。反応開始後3−4分(測光ポイント10−13)の試料の吸光度変化の値から、水(ブランク)の同測光ポイントにおける吸光度変化の値を差し引き、1分間当たりの吸光度変化の値(ΔmAbs/min)を算出し、前記の式を用いてNMNAT活性値(μmol/min/mL)を算出した。4℃保存したNMNATの活性値を100%とした時の各インキュベート時間(Incubation time(min))における残存活性率(Remaining activity(%))を図1に示した。
活性測定の結果、NMNAT活性は70℃で45分間のインキュベーションを行った後でも98%以上残存することが示された(図1)。
<組換え体NMNATの金属塩の影響と比活性>
実施例3で精製した組換え体NMNATの金属塩の影響と比活性を調べるため、R1試薬中の金属塩の種類と濃度を変えて活性測定を行った。金属塩としてNiCl2、CoCl2、MgCl2、MnCl2を使用し、濃度は1 mM、2 mM、4 mM、6 mM、8 mM、10 mMで測定を行った。試薬の組成は以下の通りである。
<R1試薬>
100mM HEPES−NaOH(pH8.0)
1〜10mM 上記各金属塩
1mM β−NMN
1mM ATP
20U/mL 12α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ
4mM コール酸ナトリウム
(試料)
10 mM リン酸カリウム緩衝液(pH7.5)にて希釈したNMNAT溶液。
(活性測定)
活性の測定には7080形日立自動分析装置を使用した。測定パラメーターを以下に示す。
(7080形日立自動分析装置測定パラメーター)
分析方法 レートA
測定波長(副/主) 405nm/340nm
反応時間 5分
測光ポイント 10−13
試料量 5μL
R1試薬量 150μL
5 μLの試料と150 μLのR1試薬を混合し、37℃でインキュベートし反応を開始した。反応開始後3−4分(測光ポイント10−13)の試料の吸光度変化の値から、水(ブランク)の同測光ポイントにおける吸光度変化の値を差し引き、1分間当たりの吸光度変化の値(ΔmAbs/min)を算出し、前記の式を用いてNMNAT活性値(μmol/min/mL)を算出した。さらに、得られたNMNAT活性値(μmol/min/mL)を試料中NMNAT溶液の濃度(mg/mL)で除算し、NMNAT比活性(μmol/min/mg)を算出した。各金属塩(Divalent metal)の種類と濃度におけるNMNAT比活性(μmol/min/mg)を図2に示した。
図2に示す通り、4 mMニッケルイオン存在下での組換え体NMNATの比活性(Specific activity)は19.2(μmol/min/mg)であった。
<組換えNMNATの至適pH>
実施例3で精製した組換え体NMNATの至適pHを調べるため、R1の緩衝液の種類とpHを変えて活性測定を行った。緩衝液として酢酸(acetate)‐NaOH(pH5.1〜6.0)、HEPES−NaOH(pH6.0〜7.9)、リン酸カリウム(Pik)緩衝液(pH6.3〜7.5)、Tris−HCl(pH7.7〜8.9)、グリシン(Glycine)‐NaOH(pH8.9〜9.7)を使用した。試薬の組成は以下の通りである。
<R1試薬>
100mM 各緩衝液(各pH)
1mM NiCl2
1mM β−NMN
1mM ATP
20U/mL 12α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ
4mM コール酸ナトリウム
(試料)
10 mM リン酸カリウム緩衝液(pH7.5)にて希釈したNMNAT溶液。
(活性測定)
活性の測定には7080形日立自動分析装置を使用した。測定パラメーターを以下に示す。
(7080形日立自動分析装置測定パラメーター)
分析方法 レートA
測定波長(副/主) 405nm/340nm
反応時間 5分
測光ポイント 10−13
試料量 5μL
R1試薬量 150μL
5 μLの試料と150 μLのR1試薬を混合し、37℃でインキュベートし反応を開始した。反応開始後3−4分(測光ポイント10−13)の試料の吸光度変化の値から、水(ブランク)の同測光ポイントにおける吸光度変化の値を差し引き、1分間当たりの吸光度変化の値(ΔmAbs/min)を算出し、前記の式を用いてNMNAT活性値(μmol/min/mL)を算出した。もっとも高い活性を示したHEPESバッファー(pH7.8)の活性を100%としたときの、各緩衝液の各pHにおけるNMNAT活性の相対値(%)を図3に示した。至適pHは7〜8であることが示された。
<NMN測定試薬の検討>
実施例3で精製した組換え体NMNATを用いて、NMN測定試薬を作製した。試薬の組成は以下のとおりである。
<R1試薬>
200mM Tris−HCl(pH8.0)
4mM NiCl2
1mM ATP
0.4mM WST−8
1U/mL 組換えNMNAT
30U/mL 12α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ
0.5% TritonX−100
<R2試薬>
200mM Tris−HCl(pH8.0)
24mM コール酸ナトリウム
180U/mL ジアホラーゼ
0.5% TritonX−100
(試料)
0〜10 μM β‐NMN
(活性測定)
活性の測定には7170形日立自動分析装置を使用した。測定パラメーターを以下に示す。
(7170形日立自動分析装置測定パラメーター)
分析方法 レートA
測定波長(副/主) 600nm/450nm
反応時間 10分
測光ポイント 26−30
試料量 5μL
R1試薬量 150μL
R2試薬量 50μL
5 μLの試料と150 μLのR1試薬を混合して37℃で4.5分間インキュベートした後(測光ポイント1−16)、50 μLのR2試薬を添加して反応を開始した(測光ポイント17)。R2試薬の添加による反応開始後約3−4分(測光ポイント26−30)の試料の吸光度から、水(ブランク)の同測光ポイントにおける吸光度を差し引き、1分間当たりの吸光度変化の値(ΔmAbs/min)を算出した。β‐NMNの各濃度における450 nmにおける吸光度(Abs.)のタイムコース(Reaction time(min)を図4に、β‐NMNの各濃度(μM)における1分間当たりの吸光度変化の値(ΔmAbs/min)を図5に示した。
組換え体NMNATを用いて、NMN測定が可能であった。
配列番号2は、Thermus thermophilus由来の遺伝子の塩基配列を示す。
配列番号3は、センスプライマーの塩基配列を示す。
配列番号4は、アンチセンスプライマーの塩基配列を示す。
Claims (9)
- 以下の(1)〜(3)の性質を有し、以下の(a)〜(c)のいずれかである、タンパク質を含む、ニコチンアミドモノヌクレオチド(NMN)の測定用タンパク質組成物。
(1)NMNにアデノシン三リン酸のアデニル酸を転移しニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)を生成する活性を有する。
(2)70℃で45分間安定である。
(3)比活性が15(μmol/min/mg)以上である。
(a)配列番号1に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質
(b)配列番号1に示されるアミノ酸配列において、1もしくは2個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、および/または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質
(c)配列番号1に示されるアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質 - 前記タンパク質が以下の(4)の性質をさらに有する、請求項1に記載のタンパク質組成物。
(4)Thermus thermophilus由来であるか、またはThermus thermophilus由来の遺伝子の移入による形質転換体由来である。 - 前記タンパク質が以下の(5)〜(7)の性質をさらに有する、請求項1または2に記載のタンパク質組成物。
(5)SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定した前記タンパク質の分子量が20,000〜30,000である。
(6)ニッケルイオンで活性化される。
(7)至適pHが7〜8である。 - テトラゾリウム塩が2‐(2‐メトキシ‐4‐ニトロフェニル)‐3‐(4−ニトロフェニル)‐5‐(2、4‐ジスルホフェニル)‐2H‐テトラゾリウム一ナトリウム(WST−8)である、請求項4に記載の方法。
- 脱水素酵素が12α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼである、請求項4または5に記載の方法。
- 下記の成分(A)〜(E)を含む、NMNの測定用組成物。
(A)請求項1〜3のいずれか一項に記載のタンパク質組成物
(B)NADをNADHに変換せしめる脱水素酵素
(C)脱水素酵素の基質
(D)テトラゾリウム塩
(E)テトラゾリウム塩をホルマザン色素に変換せしめる還元酵素 - テトラゾリウム塩がWST−8である、請求項7に記載の測定用組成物。
- 脱水素酵素が12α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼである、請求項7または8に記載の測定用組成物。
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JP4127767B2 (ja) * | 2002-05-20 | 2008-07-30 | 関東化学株式会社 | 液状で保存可能な酵素サイクリングを用いた測定試薬 |
JP5570731B2 (ja) * | 2008-02-28 | 2014-08-13 | 旭化成ファーマ株式会社 | ピロリン酸の測定方法 |
EP2968306B1 (en) * | 2013-03-15 | 2023-06-07 | Washington University | Administration of nicotinamide mononucleotide in the treatment of dry eye |
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