JP6778918B2 - 耐熱性のBacillus(バチルス)細菌を用いた、発酵による乳酸またはその塩を製造するためのプロセス - Google Patents
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Description
本発明は、耐熱性のBacillus(バチルス)細菌を用いた、発酵による乳酸またはその塩を製造するためのプロセスに関し、上記プロセスは、以下の工程を含む:
(a)種培養を得るために、耐熱性のBacillus(バチルス)属の細菌を培養する工程;
(b)工程(a)から得られた種培養を、好気的条件下において、初期の炭素源を含む発酵槽へと植えつけることによって、細菌の細胞数を増加させる工程;
(c)乳酸またはその塩を得るために、微好気的条件下において、上記発酵槽内において工程(b)から得られた種培養を発酵させる工程;
上記工程(b)は、上記炭素源の濃度を増加させるために、互いに独立した以下のいずれかの条件下における、上記炭素源の少なくとも一回の追加を含む:
発酵槽内における上記炭素源の上記濃度が、上記初期の濃度に比べて50%以下へと減少するとき;
上記工程(b)が、少なくとも3分の1の時間行われるとき;
発酵槽内における細菌細胞の光学密度(OD)が、少なくとも10倍に増加するとき。
本発明は、乳酸を製造することのできる発酵プロセスおよび細菌に関連する、バイオテクノロジーの分野に属する。
乳酸がプラスチック産業、食品および製薬産業、および化粧品産業において広く用いられていることは、よく知られている。プラスチック産業のために、特にポリ乳酸またはポリ(乳酸‐コ‐グリコール酸)といったポリエステルの製造のために、乳酸は広く用いられている。乳酸から製造されたポリマーには、生物分解性および生物学的適合性という利点がある。上記ポリマーは、織物の繊維、フィルム、腸線縫合糸梱包、および医学における足場といった多くの用途に用いることができる。
定義
本願において用いられる技術的用語または科学的用語は、別に言及しない限り、当業者によって理解される定義を有する。
(a)種培養を得るために、耐熱性のBacillus(バチルス)属の細菌を培養する工程;
(b)工程(a)から得られた種培養を、好気的条件下において、初期の炭素源を含む発酵槽へと植えつけることによって、細菌の細胞数を増加させる工程;
(c)乳酸またはその塩を得るために、微好気的条件下において、上記発酵槽内において工程(b)から得られた種培養を発酵させる工程;
上記工程(b)は、炭素源の濃度を増加させるために、互いに独立した以下のいずれかの条件下における、上記炭素源の少なくとも一回の追加を含む:
発酵槽内における上記炭素源の上記濃度が、上記初期の濃度に比べて50%以下へと減少するとき;
上記工程(b)が、少なくとも3分の1の時間行われるとき;
発酵槽内における細菌細胞の光学密度(OD)が、少なくとも10倍に増加するとき。
乳酸およびその塩の製造における細菌細胞を増加させる工程における炭素源の複数回の追加の効果を研究するために、細菌細胞を増加させる工程において炭素源を追加しないサンプルを、本発明に係る乳酸の製造方法と比較するために用いた。
細菌の培養は、細菌培養培地を含むフラスコに、耐熱性のBacillus(バチルス)属を追加することによって行い、細菌の初期濃度は容積で約1%であり、初期光学密度は、約0.3〜0.4であった。サンプルを、約50℃の温度において、約250rpmで3時間遠心分離し、種培養を得る。それから、種培養を、2.5Lの培養培地を含む5Lの発酵槽へと追加することによって、細菌細胞を増加させる。上記の培養培地は、初期グルコース濃度が約15g/Lであり、かつpHを約6.5へと調整するために水酸化カルシウム(Ca(OH)2)を含む。細菌細胞を増加させる工程は、温度約50℃において約3時間、1vvmの曝気および300rpmの混合下において実行する。それから曝気を止め、および約1Lの350g/Lグルコース溶液を、発酵工程のはじめに初期グルコース濃度100g/Lを達成するために、発酵槽の中に追加する。発酵は、微好気的条件下において約50℃の温度で、かつ約300rpmの混合速度で、pHを約6.5に調整するために、表1の様々な塩基性溶液を用いることによって操作する。発酵は、グルコースが検出されなくなるまで実行する。それから、生成物を、約10,000rpmにおいて約5分間遠心分離する。得られた生成物について、製造された乳酸および発酵の間の細菌の光学密度を分析する。
耐熱性のBacillus(バチルス)属を、細菌の初期濃度が容積で約1%、かつ初期光学密度約0.30〜0.40で、細菌培養培地を含むフラスコに追加する。サンプルを、約250rpmにおいて3時間、約50℃の温度において遠心分離し、種培養を得る。それから、2.5Lの培養培地を含む5Lの発酵槽に種培養を追加することによって、細菌細胞を増加させる。上記の培養培地は、初期グルコース濃度が約15g/Lであり、かつpHを6.5へと調整するために水酸化カルシウム(Ca(OH)2)を含む。細菌細胞を増加させる工程を、温度約50℃において約2時間、1vvmの曝気および300rpmの混合下において実行する。それから、約0.5Lの90g/Lグルコース溶液を追加した。細菌細胞を増加させる工程を、さらに2時間操作した。それから、発酵は、微好気的条件下において約50℃の温度で、かつ約300rpmの混合速度で、pHを約6.5に調整するために、表1の様々な塩基性溶液を用いることによって行った。発酵は、グルコースが検出されなくなるまで実行する。それから、生成物を、約10,000rpmにおいて約5分間遠心分離する。得られた生成物について、製造された乳酸および発酵の間の細菌の光学密度を分析する。
Claims (32)
- 以下の工程を含む、乳酸またはその塩を製造するためのプロセス:
(a)種培養を得るために、耐熱性のBacillus(バチルス)属の細菌を培養する工程;
(b)工程(a)から得られた種培養を、好気的条件下において初期の炭素源を含む発酵槽へと植えつけることによって、細菌の細胞数を増加させる工程;
(c)乳酸またはその塩を得るために、微好気的条件下において、上記発酵槽内において工程(b)から得られた種培養を発酵させる工程;
上記工程(b)は、上記炭素源の濃度を増加させるために、互いに独立した以下のいずれかの条件下における、上記炭素源の少なくとも一回の追加を含む:
発酵槽内における上記炭素源の上記濃度が、上記初期の濃度に比べて50%以下へと減少するとき;
上記工程(b)が、少なくとも3分の1の時間行われるとき;
発酵槽内における細菌細胞の光学密度(OD)が、少なくとも10倍に増加するとき。 - 工程(b)における上記炭素源の上記追加は、上記発酵槽内における上記炭素源の濃度を、上記初期の濃度に比べて75%以上へと増加させる、請求項1に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 工程(b)における上記炭素源の上記追加は、上記発酵槽内における上記炭素源の上記濃度が、上記初期の濃度に比べて、25%以下へと減少する条件下において実行される、請求項1または2に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記炭素源の上記追加は、上記工程(b)が少なくとも2分の1の時間行われる条件下において実行される、請求項1または2に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記炭素源の上記追加は、上記発酵槽内における細菌細胞の光学密度(OD)が10倍から50倍へと増加する条件下において実行される、請求項1または2に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 工程(b)における上記初期の炭素源の上記濃度は、10g/Lから20g/Lの範囲内である、請求項1に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 工程(b)における上記初期の炭素源の上記濃度は、15g/Lである、請求項1または6に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記プロセスは、45℃から60℃の範囲内の温度で行われる、請求項1に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記プロセスは、48℃から52℃の範囲内の温度で行われる、請求項8に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記工程(a)における上記耐熱性のBacillus(バチルス)属の細菌は、Bacillus acidiproducens(バチルス アシディプロデュセンス)、Bacillus coagulans(バチルス コアギュランス)、またはこれらの細菌の混合物から選択される、請求項1に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記工程(a)は、2時間から5時間行われる、請求項1または10に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記工程(a)は、3時間から4時間行われる、請求項11に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記工程(b)は、2時間から5時間行われる、請求項1に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記工程(b)は、3時間から4時間行われる、請求項13に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記工程(b)は、4時間行われる、請求項14に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記工程(c)は、上記炭素源の少なくとも一回の追加をさらに含む、請求項1に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 工程(c)の上記炭素源の上記濃度は、100g/Lから200g/Lの範囲内である、請求項1または16に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 工程(c)の上記炭素源の上記濃度は、100g/Lである、請求項17に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記工程(c)は、塩基性溶液を使用することによって、pH6からpH7となるように調整される、請求項1に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記工程(c)は、塩基性溶液を使用することによって、pH6.5となるように調整される、請求項19に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 前記塩基性溶液は、水酸化ナトリウム(NaOH)、水酸化アンモニウム(NH4OH)、水酸化カリウム(KOH)、またはこれらの混合物から選択される、請求項19に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記塩基性溶液は、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムである、請求項21に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記塩基性溶液は、水酸化ナトリウムである、請求項22に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記炭素源は、発酵性の糖である、請求項1に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記発酵性の糖は、単糖、二糖、三糖、またはこれらの混合物から選択される、請求項24に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記単糖は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、またはこれらの混合物から選択される、請求項24に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記二糖は、スクロース、ラクトース、マルトース、セロビオース、またはこれらの混合物から選択される、請求項24に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記三糖は、ラフィノース、イソマルトトリオース、マルトトリオース、ニゲロトリオース、ケストース、またはこれらの混合物から選択される、請求項24に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記発酵性の糖はグルコースである、請求項24に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記発酵槽はさらに混合器を含む、請求項1に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記混合器は、150rpmから450rpmの範囲内の速度を有する、請求項30に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
- 上記混合器は、300rpmの速度を有する、請求項31に記載の乳酸またはその塩を製造するためのプロセス。
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