JP6623148B2 - 大豆（「ｓ７０１」）からの可溶性タンパク質溶液の製造 - Google Patents

Description

関連出願への参照
本出願は、２００８年１０月２１日出願の米国特許出願第６１／１０７，１１２号、２００８年１２月２日出願の同第６１／１９３，４５７号、２００９年１月２６日出願の同第６１／２０２，０７０号、２００９年３月１２日出願の同第６１／２０２，５５３号、２００９年７月７日出願の同第６１／２１３，７１７号および２００９年９月３日出願の同第６１／２７２，２４１号から、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づいて優先権を主張する。

発明の分野
本発明は、大豆からのタンパク質溶液の製造および新規の大豆タンパク質製品を対象としている。

本発明の背景
低ｐＨで非常に可溶性であり透明な溶液を生成するタンパク質単離物は、様々な製品、特にソフトドリンクおよびスポーツドリンクなどの飲料において使用するために、食品産業において大いに価値があるであろう。上記の特性を熱安定性と組み合わせると、該単離物の価値はさらに増大するであろう。食品用途のタンパク質は、植物または動物源に由来し得るが、植物タンパク質の方が安価な場合が多い。大豆は、食品用途の植物タンパク質の非常に一般的な源である。大豆タンパク質は、その優れた栄養特性および健康上の利益が認識されている。

大豆タンパク質単離物は、従来、等電沈殿手順により形成され、該手順では、大豆からの大豆油の分離に由来するミールをアルカリ性条件下での最初の抽出により処理し、その後、アルカリ性抽出物を大豆タンパク質の等電点に酸性化して、タンパク質沈殿を生じる。沈殿した大豆タンパク質は、洗浄および／または中和することができ、次いで、乾燥して、大豆タンパク質単離物を得る。大豆タンパク質単離物は、乾燥重量基準（ｄ．ｂ．）で少なくとも約９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）のタンパク質含量を有する。

様々な機能特性を有する様々な大豆タンパク質製品が入手可能であるが、本発明者らの知る限り、低ｐＨ条件下で透明で熱安定性の溶液を生成する可溶性の大豆タンパク質単離物製品は存在しない。

低ｐＨ値で透明な熱安定性溶液を生成し、したがって、タンパク質を沈殿させることなく、特に、ソフトドリンクおよびスポーツドリンク、ならびに他の水系のタンパク質強化（ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）に使用することができる、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する大豆タンパク質製品を提供することが今や可能であることが分かった。

本発明において提供する新規の大豆タンパク質製品は、他の大豆タンパク質製品に見られないパラメーターの独特の組合せを有する。該製品は、約４．４未満の酸性ｐＨ値で完全に可溶性であり、このｐＨ範囲で熱安定性であり、高温充填用途（ｈｏｔ ｆｉｌｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）などの加熱処理を可能にする。該製品の完全な溶解性を考えると、溶液または懸濁液中にタンパク質を維持するのに安定剤または他の添加剤は必要ない。大豆タンパク質単離物は、「豆」臭（ｂｅａｎｙ ｆｌａｖｏｕｒ）および異臭を有さないものとして記載されてきた。該製品は、フィチン酸が少なく、一般に約１．５ｗｔ％未満である。大豆タンパク質単離物の製造において酵素は必要とされない。大豆タンパク質製品は、好ましくは、少なくとも約９０ｗｔ％、好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）のタンパク質含量を有する単離物である。

本発明の一態様において、乾燥重量基準で少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）の大豆タンパク質含量を有する大豆タンパク質製品の製造方法であって、
（ａ）大豆タンパク質源を塩化カルシウム水溶液で抽出して、該タンパク質源からの大豆タンパク質の可溶化を引き起こし、大豆タンパク質水溶液を形成するステップと、
（ｂ）残留する大豆タンパク質源から大豆タンパク質水溶液を分離するステップと、
（ｃ）任意選択により（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）大豆タンパク質水溶液を希釈するステップと、
（ｄ）大豆タンパク質水溶液のｐＨを約１．５〜約４．４、好ましくは約２〜約４のｐＨに調整して、透明な酸性化大豆タンパク質溶液を生成するステップと、
（ｅ）任意選択により（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）選択的膜技法を使用することにより、イオン強度を実質的に一定に維持しながら透明な大豆タンパク質水溶液を濃縮するステップと、
（ｆ）任意選択により（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）濃縮大豆タンパク質溶液を透析濾過するステップと、
（ｇ）任意選択により（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）濃縮大豆タンパク質溶液を乾燥するステップと
を含む方法を提供する。

大豆タンパク質製品は、少なくとも約９０ｗｔ％、好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する単離物であることが好ましい。

本発明は、約４．４未満の酸性ｐＨ値で水溶性であり、熱安定性で透明な溶液を形成し、タンパク質沈殿をもたらすことなくソフトドリンクおよびスポーツドリンクを含めた水系をタンパク質強化（ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）をするのに有用である新規の大豆タンパク質単離物をさらに提供する。大豆タンパク質単離物もフィチン酸含量が低く、一般に約１．５重量％未満である。該製品中の大豆タンパク質は、加水分解されていない。

したがって、本発明の（ｔｏ）別の態様において、約４．４未満、好ましくは約１．５〜約４．４のｐＨの水性媒体に実質的に完全に可溶である、少なくとも約９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する大豆タンパク質単離物を提供する。

本明細書において提供する大豆タンパク質単離物は、酸性ｐＨ値、一般に約４．４未満、好ましくは約１．５〜約４．４で高い透明度を有し、これらのｐＨ値で熱安定性である、その水溶液として提供することができる。

本発明の新規の大豆タンパク質単離物は、粉末状飲料を水に溶解することにより水性ソフトドリンクまたはスポーツドリンクを形成するために、粉末状飲料とブレンドすることができる。そのようなブレンドは、粉末状飲料とすることができる。

本発明は主に大豆タンパク質単離物の製造に言及するが、大豆タンパク質単離物と同様の特性を有する純度の低い大豆タンパク質製品を提供することができると考えられる。そのような純度の低い製品は、少なくとも約６０重量％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質濃度を有し得る。

本発明の別の態様において、約４．４未満のｐＨで熱安定性である、本発明で提供される大豆製品の水溶液を提供する。該水溶液は、大豆タンパク質製品が完全に可溶および透明である透明な飲料または大豆タンパク質製品が不透明度を増大させない不透明な飲料でもよい飲料とすることができる。

本発明は、約７のｐＨで実質的に完全に可溶性である、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、好ましくは少なくとも約９０ｗｔ％、より好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％のタンパク質含量を有する大豆タンパク質製品も提供する。そのような大豆タンパク質製品は、その水溶液、例えば飲料として提供することができる。

本発明のさらなる態様において、以下の例１４に記載の方法により求めたところ、約２〜約４のｐＨの水に１％タンパク質ｗ／ｖで約９５％を超える溶解度を有する、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、好ましくは少なくとも約９０ｗｔ％、より好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％のタンパク質含量を有する大豆タンパク質製品を提供する。

さらに、本発明は、以下の例１５に記載の方法により求めたところ、約２〜約４のｐＨの１％タンパク質ｗ／ｖ水溶液において０．１５０未満、好ましくは約０．１００未満、より好ましくは０．０５０未満の６００ｎｍでの可視光吸光度（ａｂｓｏｒｂｅｎｃｅ）（Ａ６００）を有する、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、好ましくは少なくとも約９０ｗｔ％、より好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％のタンパク質含量を有する大豆タンパク質製品を提供する。

本発明のさらなる実施形態において、以下の例１５に記載の方法により求めたところ、約２〜約４のｐＨの１％タンパク質ｗ／ｖ水溶液について約１５％未満、好ましくは約１０％未満、より好ましくは約５％未満のヘイズ値（ｈａｚｅ ｒｅａｄｉｎｇ）を有する、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、好ましくは少なくとも約９０ｗｔ％、より好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％のタンパク質含量を有する大豆タンパク質製品を提供する。

本発明のさらなる実施形態において、以下の例１６に記載の方法により求めたところ、９５℃で３０秒間の熱処理後の２％タンパク質ｗ／ｖ水溶液について１５％未満、好ましくは約１０％未満、より好ましくは５％未満のヘイズ値を有する、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、好ましくは少なくとも約９０ｗｔ％、より好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％のタンパク質含量を有する大豆タンパク質単離物を提供する。

本発明の方法に従って製造する大豆タンパク質単離物は、大豆タンパク質単離物の特徴的な豆臭（ｂｅａｎｙ ｆｌａｖｏｕｒ）を有しておらず、酸性媒体のタンパク質強化（ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）に適しているだけではなく、加工食品および飲料のタンパク質強化（ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、油の乳化を含むがこれらに限定されないタンパク質単離物の広範な従来の用途において、焼いた食品の組織形成剤（ｂｏｄｙ ｆｏｒｍｅｒ）およびガスを閉じ込める製品の発泡剤として（ａｓ ａ）使用し得る。さらに、大豆タンパク質単離物は、肉類似食品に有用なタンパク質繊維に形成することができ、つなぎとして卵白が使用される食品において卵白代替物または増量剤（ｅｘｔｅｎｄｅｒ）として使用し得る。大豆タンパク質単離物は、栄養補助食品（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）においても使用し得る。大豆タンパク質単離物の他の用途は、ペットフード、動物用飼料ならびに産業および化粧品用途ならびにパーソナルケア製品におけるものである。

１．少なくとも６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する大豆タ
ンパク質製品であって、
− ４．４未満の酸性ｐＨ値の水性媒体に完全に可溶であり、
− ４．４未満の酸性ｐＨ値の水性媒体中で熱安定性であり、
− 溶液または懸濁液中で前記大豆タンパク質製品を維持するために安定剤または他の添加剤を必要とせず、
− フィチン酸が１．５ｗｔ％未満であり、
− その製造において酵素を必要としない、
大豆タンパク質製品。

２．（ａ）豆臭または異臭を有さず、及び／又は、
（ｂ）大豆タンパク質が加水分解されておらず、及び／又は、
（ｃ）少なくとも９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、及び／又は、
（ｄ）１．５ｗｔ％未満のフィチン酸含量を有する、
上記１に記載の大豆タンパク質製品。

３．少なくとも１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する、上記２に記載の大豆タンパク質製品。

発明の概略説明
大豆タンパク質単離物を提供するプロセスの最初のステップは、大豆タンパク質源からの大豆タンパク質の可溶化を伴う。大豆タンパク質源は、大豆、あるいは大豆ミール（ｓｏｙ ｍｅａｌ）、大豆フレーク、大豆粗粒および大豆粉を含むがこれらに限定されない任意の大豆製品または大豆の加工に由来する副産物とすることができる。大豆タンパク質源は、脂肪を除いていない形態（ｆｕｌｌ ｆａｔ ｆｏｒｍ）、部分的に脱脂した形態または完全に脱脂した形態で使用し得る。大豆タンパク質源が相当量の脂肪を含有する場合、一般に、このプロセスの間に油除去ステップが必要となる。大豆タンパク質源から回収された大豆タンパク質は、大豆中に自然に存在するタンパク質であるか、またはタンパク質性物質（ｐｒｏｔｅｉｎａｃｅｏｕｓ ｍａｔｅｒｉａｌ）は、遺伝子操作により改変されたタンパク質であってもよいが、自然タンパク質の特徴的な疎水性および極性特性を有する。

大豆タンパク質源物質からのタンパク質の可溶化は、他のカルシウム塩の溶液も使用することができるが、塩化カルシウム溶液を使用して実施することが最も好都合である。さらに、マグネシウム塩などの他のアルカリ土類金属化合物を使用することができる。さらに、大豆タンパク質源からの大豆タンパク質の抽出は、カルシウム塩溶液を塩化ナトリウムなどの別の塩溶液と組み合わせて使用して実施し得る。さらに、大豆タンパク質源からの大豆タンパク質の抽出は、水または塩化ナトリウムなどの他の塩溶液を使用して実施し、その後、抽出ステップにおいて生成した大豆タンパク質水溶液にカルシウム塩を添加することができる。カルシウム塩の添加時に形成する沈殿物は、その後の処理の前に除去する。

大豆タンパク質源からのタンパク質の可溶化の程度は、カルシウム塩溶液の濃度が増大するにつれて、最初は最大値に達するまで増大する。その後、塩濃度をどれほど増大させても、可溶化するタンパク質の合計は増大しない。最大のタンパク質可溶化を引き起こすカルシウム塩溶液の濃度は、当該塩に応じて変動する。通常、約１．０Ｍ未満の濃度値、より好ましくは約０．１０〜約０．１５Ｍの値を利用することが好ましい。

バッチプロセスにおいて、タンパク質の塩可溶化は、約１℃〜約１００℃、好ましくは約１５℃〜約３５℃の温度で、好ましくは通常約１〜約６０分間の可溶化時間を減少させるための撹拌を伴って実施される。実質的に実現可能な量のタンパク質を大豆タンパク質源から抽出するように可溶化を実施して、全体的に高い製品収率を実現することが好ましい。

連続プロセスにおいて、大豆タンパク質源からの大豆タンパク質の抽出は、大豆タンパク質源からの大豆タンパク質の連続抽出の実施と調和する任意の様式で実施する。一実施形態において、大豆タンパク質源をカルシウム塩溶液と連続的に混合し、本明細書に記載のパラメーターに従って所望の抽出を実施するのに十分な滞留時間、ある長さを有するパイプまたは導管を通して、ある流量で混合物を移動させる。そのような連続的な手順において、塩可溶化ステップは、好ましくは実質的に実現可能な量のタンパク質を大豆タンパク質源から抽出するように可溶化を実施するために、最大で約１０分間で急速に実施する。連続的な手順での可溶化は、約１℃と約１００℃の間、好ましくは約１５℃と約３５℃の間の温度で実施する。

抽出は、一般に、約５〜約１１、好ましくは約５〜約７のｐＨで実施する。抽出系（大豆タンパク質源およびカルシウム塩溶液）のｐＨは、抽出ステップで使用するために、必要に応じて、任意の好都合な食品グレードの酸、通常は塩酸もしくはリン酸、または食品グレードのアルカリ、通常は水酸化ナトリウムの使用により、約５〜約１１の範囲内の任意の所望の値に調整し得る。

可溶化ステップの間のカルシウム塩溶液中の大豆タンパク質源の濃度は、幅広く変えることができる。一般的な濃度値は、約５〜約１５％ｗ／ｖである。

塩水溶液を用いるタンパク質抽出ステップは、大豆タンパク質源中に存在し得る脂肪を可溶化するという追加の効果を有し、その結果、水性相中に脂肪が存在することとなる。

抽出ステップから得られるタンパク質溶液は、一般に約５〜約５０ｇ／Ｌ、好ましくは約１０〜約５０ｇ／Ｌのタンパク質濃度を有する。

カルシウム塩水溶液は、酸化防止剤を含有し得る。酸化防止剤は、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸などの任意の好都合な酸化防止剤とすることができる。利用する酸化防止剤の量は、該溶液の約０．０１〜約１ｗｔ％、好ましくは約０．０５ｗｔ％まで変えることができる。酸化防止剤は、タンパク質溶液中のフェノール類の酸化を抑制する働きをする。

次いで、抽出ステップから得られる水性相は、例えば、デカンタ型遠心分離機の利用の後にディスク型遠心分離および／または濾過により残留する大豆タンパク質原料を除去するなどの任意の好都合な様式で、残留する大豆タンパク質源から分離し得る。分離した残留大豆タンパク質源は、廃棄するために乾燥することができる。あるいは、分離した残留大豆タンパク質源を、例えば、従来の等電沈殿手順またはそのような残留タンパク質を回収するための任意の他の好都合な手順により処理して、一部の残留タンパク質を回収することができる。

次いで、本発明の譲受人に譲渡され、その開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，８４４，０８６号および同第６，００５，０７６号に記載のように大豆タンパク質源がかなりの脂肪を含有する場合、分離したタンパク質水溶液に対して上記特許に記載の脱脂ステップを実施することができる。あるいは、分離したタンパク質水溶液の脱脂は、任意の他の好都合な手順により実現し得る。

大豆タンパク質水溶液は、粉末状活性炭または粒状活性炭などの吸着剤で処理して、色および／または臭気化合物を除去し得る。そのような吸着処理は、任意の好都合な条件下、一般に分離したタンパク質水溶液の周囲温度で実施し得る。粉末状活性炭については、約０．０２５％〜約５％ｗ／ｖ、好ましくは約０．０５％〜約２％ｗ／ｖの量を利用する。吸着剤は、任意の好都合な手段により、例えば、濾過により該大豆溶液から除去し得る。

得られた大豆タンパク質水溶液は、一般に約１〜約１０倍容（ｖｏｌｕｍｅｓ）、好ましくは約１〜約２倍容の水で希釈して、大豆タンパク質水溶液の伝導率を一般に約７０ｍＳ未満、好ましくは約４〜約１８ｍＳの値まで低下することができる。

大豆タンパク質溶液と混合する水は、約２°〜約７０℃、好ましくは約１０°〜約５０℃、より好ましくは約２０°〜約３０℃の温度を有し得る。

次いで、希釈した大豆タンパク質溶液を、塩酸またはリン酸などの任意の好適な食品グレードの酸の添加により約１．５〜約４．４、好ましくは約３の値にｐＨ調整して、透明な大豆タンパク質水溶液を得る。

希釈および酸性化した大豆タンパク質溶液は、一般に約７５ｍＳ未満、好ましくは約４〜約２３ｍＳの伝導率を有する。

透明な酸性化大豆タンパク質水溶液に熱処理を施して、抽出ステップの間の大豆タンパク質源物質からの抽出の結果としてそのような溶液中に存在するトリプシン阻害剤などの熱不安定性の抗栄養因子（ａｎｔｉ−ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｆａｃｔｏｒ）を不活性化することができる。そのような加熱ステップは、微生物負荷（ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｌｏａｄ）を低減するという追加の利益ももたらす。一般に、該タンパク質溶液は、約７０°〜約１００℃、好ましくは約８５°〜約９５℃の温度まで、約１０秒間〜約６０分間、好ましくは約３０秒間〜約５分間加熱する。次いで、熱処理した酸性化大豆タンパク質溶液は、以下に記載のようにさらに処理するために、約２°〜約６０℃、好ましくは約２０℃〜約３５℃の温度まで冷却し得る。

得られた透明な酸性化大豆タンパク質水溶液を直接乾燥して、大豆タンパク質製品を製造することができる。低下した不純物含量および低下した塩含量を有する大豆タンパク質単離物を得るために、乾燥前に透明な酸性化大豆タンパク質水溶液を処理することができる。

透明な酸性化大豆タンパク質水溶液を濃縮して、そのイオン強度を実質的に一定に維持しながらそのタンパク質濃度を増大させることができる。そのような濃縮は、一般に、約５０〜約３００ｇ／Ｌ、好ましくは約１００〜約２００ｇ／Ｌのタンパク質濃度を有する濃縮大豆タンパク質溶液を得るために実施する。

濃縮ステップは、例えば、異なる膜材料および構造を考慮して、約３０００〜約１００００００ダルトン、好ましくは約５０００〜約１０００００ダルトンなどの好適な分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔ−ｏｆｆ）を有し、連続操作については、タンパク質水溶液が膜を通過するときに所望の濃縮度が可能になるように寸法を決める、中空繊維膜または螺旋状膜（ｓｐｉｒａｌ−ｗｏｕｎｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ）などの膜を使用する、限外濾過または透析濾過などの任意の好都合な選択的膜技法を利用することにより、バッチまたは連続操作と調和する任意の好都合な様式で実施することができる。

よく知られているように、限外濾過および同様の選択的膜技法は、低分子量種が膜を通過することを可能にすると同時に、高分子量種が膜を通過することを阻止する。低分子量種としては、食品グレードの塩のイオン種だけではなく、原料から抽出される低分子量物質、例えば、炭水化物、色素、低分子量タンパク質、およびそれ自体が低分子量タンパク質であるトリプシン阻害剤などの抗栄養因子（ａｎｔｉ−ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｆａｃｔｏｒｓ）なども挙げられる。膜の分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔ−ｏｆｆ）は、通常、異なる膜材料および構造を考慮して、かなりの割合のタンパク質を溶液中に確実に保持すると同時に、汚染物質を通過させるように選択する。

次いで、濃縮大豆タンパク質溶液に水を使用して透析濾過ステップを施すことができる。水は、その自然のｐＨまたは透析濾過するタンパク質溶液のｐＨと等しいｐＨまたは中間の任意のｐＨ値とすることができる。そのような透析濾過は、約２〜約４０倍容（ｖｏｌｕｍｅｓ）の透析濾過溶液、好ましくは約５〜約２５倍容（ｖｏｌｕｍｅｓ）の透析濾過溶液を使用して実施し得る。透析濾過操作において、透過液（ｐｅｒｍｅａｔｅ）の膜通過により、さらなる量の汚染物質を透明な大豆タンパク質水溶液から除去する。このことにより、透明なタンパク質水溶液を精製し、さらにはその粘度を低減することができる。透析濾過操作は、さらなる相当量の汚染物質もしくは可視色が透過液（ｐｅｒｍｅａｔｅ）中に存在しなくなるまで、または、乾燥すると、少なくとも約９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する大豆タンパク質単離物を生成するように保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）を十分に精製するまで実施し得る。そのような透析濾過は、濃縮ステップと同じ膜を使用して実施し得る。しかし、所望であれば、透析濾過ステップは、異なる分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔ−ｏｆｆ）を有する別の膜、例えば、異なる膜材料および構造を考慮して、約３０００〜約１００００００ダルトン、好ましくは約５０００〜約１０００００ダルトンの範囲の分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔ−ｏｆｆ）を有する膜などを使用して実施し得る。

あるいは、透析濾過ステップは、濃縮前の透明な酸性化タンパク質水溶液に、または部分濃縮した透明な酸性化タンパク質水溶液に適用し得る。透析濾過は、濃縮プロセスの間の多数の時点でも適用し得る。濃縮前のまたは部分濃縮した溶液に透析濾過を適用する場合、得られた透析濾過溶液は、その後、完全に濃縮し得る。タンパク質溶液を濃縮しているときに多数回、透析濾過することにより実現する粘度の低減により、最終的に完全に濃縮したタンパク質の濃度をより高くすることが可能となり得る。このことにより、乾燥する物質の体積が低減する。

本明細書において、濃縮ステップおよび透析濾過ステップは、その後回収される大豆タンパク質製品が約９０ｗｔ％未満のタンパク質（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、例えば、少なくとも約６０ｗｔ％タンパク質（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂなどを含有するような様式で実施し得る。透明な大豆タンパク質水溶液を部分濃縮および／または部分透析濾過することにより、汚染物質を部分的にのみ除去することが可能である。次いで、このタンパク質溶液を乾燥して、より低レベルの純度を有する大豆タンパク質製品を得ることができる。大豆タンパク質製品は、依然として、酸性条件下で透明なタンパク質溶液を生成することができる。

酸化防止剤は、透析濾過ステップの少なくとも一部の間に透析濾過媒体中に存在させることができる。酸化防止剤は、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸などの任意の好都合な酸化防止剤とすることができる。透析濾過媒体において利用する酸化防止剤の量は、利用する物質次第であり、約０．０１〜約１ｗｔ％、好ましくは約０．０５ｗｔ％まで変えることができる。酸化防止剤は、濃縮大豆タンパク質単離物溶液中に存在する任意のフェノール類の酸化を抑制する働きをする。

濃縮ステップおよび任意選択の（ｏｐｔｉｏｎａｌ）透析濾過ステップは、任意の好都合な温度、一般に約２°〜約６０℃、好ましくは約２０°〜約３５℃で、所望の濃縮度を実現するための時間にわたって実施し得る。使用する温度および他の条件は、ある程度、膜処理を実施するために使用する膜装置、溶液の所望のタンパク質濃度および汚染物質を除去して透過液（ｐｅｒｍｅａｔｅ）とする効率の影響を受ける。

大豆中には、２種の主要なトリプシン阻害剤、すなわち、約２１０００ダルトンの分子量を有する熱不安定性の分子であるＫｕｎｉｔｚ阻害剤、および約８０００ダルトンの分子量を有するより熱安定性の分子、Ｂｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋ阻害剤が存在する。最終的な大豆タンパク質単離物のトリプシン阻害剤活性のレベルは、様々なプロセス変数の操作により調節することができる。

上述したように、透明な酸性化大豆タンパク質水溶液の熱処理は、熱不安定性のトリプシン阻害剤を不活性化するのに使用し得る。部分濃縮または完全濃縮した酸性化大豆タンパク質溶液も、熱不安定性のトリプシン阻害剤を不活性化するために熱処理することができる。

さらに、濃縮および／または透析濾過ステップは、透過液（ｐｅｒｍｅａｔｅ）中のトリプシン阻害剤を他の汚染物質と共に除去するのに好都合な様式で操作し得る。トリプシン阻害剤の除去は、大きい孔径（３００００〜１００００００Ｄａなど）の膜を使用すること、膜を高温（３０〜６０℃など）で操作すること、および多量の透析濾過媒体（２０〜４０倍容（ｖｏｌｕｍｅｓ）など）を利用することにより促進される。

希釈したタンパク質溶液を低いｐＨ（１．５〜３）で酸性化および膜処理することにより、該溶液を高いｐＨ（３〜４．４）で処理する場合と比較して、トリプシン阻害剤活性を低減することができる。タンパク質溶液をｐＨ範囲の下端で濃縮および透析濾過する場合、乾燥前に保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）のｐＨを上昇させることが望ましい可能性がある。濃縮および透析濾過したタンパク質溶液のｐＨは、水酸化ナトリウムなどの任意の好都合な食品グレードのアルカリの添加により、所望の値、例えばｐＨ３まで上昇させることができる。

さらに、トリプシン阻害剤活性の低減は、各阻害剤のジスルフィド結合を破壊または再配置する還元剤に大豆材料を曝すことにより実現し得る。好適な還元剤としては、亜硫酸ナトリウム、システインおよびＮ−アセチルシステインが挙げられる。

そのような還元剤の添加は、プロセス全体の様々な段階で実施し得る。還元剤は、抽出ステップにおいて大豆タンパク質源原料と共に添加してもよく、残留する大豆タンパク質源原料の除去後の清澄な大豆タンパク質水溶液に添加してもよく、乾燥前に透析濾過した保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）に添加してもよく、または乾燥した大豆タンパク質製品とドライブレンドしてもよい。還元剤の添加は、上記の熱処理ステップと組み合わせてもよい。

濃縮タンパク質溶液において活性トリプシン阻害剤を保持することが望ましいならば、このことは、熱処理ステップの強度を削減または低減すること、還元剤を利用しないこと、ｐＨ範囲の上端（３〜４．４）で濃縮および透析濾過ステップを操作すること、小さい孔径を有する濃縮および透析濾過膜を利用すること、膜を低温で操作すること、ならびに少量の透析濾過媒体を利用することにより、実現することができる。

必要ならば、濃縮し、任意選択で（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）透析濾過したタンパク質溶液に、米国特許第５，８４４，０８６号および同第６，００５，０７６号に記載のさらなる脱脂操作を実施することができる。あるいは、濃縮し、任意選択で（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）透析濾過したタンパク質溶液の脱脂は、任意の他の好都合な手順により実現し得る。

濃縮し、任意選択で（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）透析濾過した透明なタンパク質水溶液は、粉末状活性炭または粒状活性炭などの吸着剤で処理して、色および／または臭気化合物を除去することができる。そのような吸着処理は、任意の好都合な条件下、一般に濃縮するタンパク質溶液の周囲温度で実施し得る。粉末状活性炭については、約０．０２５％〜約５％ｗ／ｖ、好ましくは約０．０５％〜約２％ｗ／ｖの量を利用する。吸着剤は、大豆タンパク質溶液から任意の好都合な手段により、例えば、濾過により除去し得る。

濃縮し、任意選択で（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）透析濾過した透明な大豆タンパク質水溶液は、噴霧乾燥または凍結乾燥などの任意の好都合な技法により乾燥することができる。低温殺菌ステップは、乾燥前の大豆タンパク質溶液に対して実施し得る。そのような低温殺菌は、任意の所望の低温殺菌条件下で実施し得る。一般に、濃縮し、任意選択で（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）透析濾過した大豆タンパク質溶液は、約５５°〜約７０℃、好ましくは約６０°〜約６５℃の温度まで、約３０秒間〜約６０分間、好ましくは約１０分間〜約１５分間、加熱する。次いで、低温殺菌した濃縮大豆タンパク質溶液は、乾燥するために、好ましくは約２５°〜約４０℃の温度まで冷却し得る。

乾燥大豆タンパク質単離物は、約９０ｗｔ％タンパク質を超える、好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％、（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．の高タンパク質含量を有する。

本明細書において製造する大豆タンパク質単離物は酸性の水性環境に可溶であり、それにより、該単離物は、炭酸を含む飲料および炭酸を含まない飲料のいずれへも、そこにタンパク質強化（ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）をもたらすために組み込むのに適するようになる。そのような飲料は、約２．５〜約５の範囲の幅広い酸性ｐＨ値を有する。本明細書において提供する大豆タンパク質単離物は、そのような飲料にタンパク質強化をもたらすために、任意の好都合な量、例えば、一杯当たり少なくとも約５ｇの大豆タンパク質単離物を、そのような飲料に添加し得る。添加した大豆タンパク質単離物は、飲料中で溶解し、加熱処理後でさえ飲料の透明度を損なわない。大豆タンパク質単離物は、水への溶解による飲料の液戻し（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）の前に、乾燥飲料とブレンドし得る。飲料中に存在する成分が、飲料中に溶解したままとなる本発明の組成物の能力に悪影響を及ぼす恐れがある場合、本発明の組成物を許容するために、飲料の通常の配合を変更する必要性が生じる可能性がある。

例
低ｐＨで透明な、熱安定性溶液を生成する可溶性の大豆タンパク質の生成に、カルシウムへの曝露を使用することができるかどうかを確認するために、一連の試行実験（例１〜３）を実施した。

例１：
乾燥大豆（３０ｇ）を、水、０．０１ＭのＣａＣｌ_２または０．１５ＭのＮａＣｌ（３００ｍｌ）とキッチンブレンダー中で合わせ、最大速度で５分間、処理した。次いで、試料を７１００ｇで１０分間、遠心分離して、脂肪および残留する固形物から抽出物を分離した。水および塩化カルシウム溶液を用いて調製した試料は、分離が不十分であったため、１０２００ｇで１０分間、再び遠心分離した。抽出物のｐＨを測定し、次いで、孔径０．４５μｍのシリンジフィルターを用いて一定量（ａｌｉｑｕｏｔｓ）を濾過し、Ｌｅｃｏ ＦＰ５２８窒素測定器（ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ）を使用してタンパク質含量を求めた。濾過した抽出物（ＮａＣｌおよびＣａＣｌ2試験）の透明度を６００ｎｍでの吸光度（Ａ６００）として測定し、次いで、試料の一部を希ＨＣｌでｐＨ３に酸性化し、Ａ６００を再び測定した。清澄な抽出物（全ての試験）の一定量も室温の水で１：１０に希釈し、Ａ６００およびｐＨを測定し、次いで、希ＨＣｌで試料をｐＨ３に酸性化し、Ａ６００を再び測定した。ＮａＣｌ抽出物の別の一定量を孔径２５μｍの濾紙を用いて濾過した。この試料の伝導率を測定し、次いで、塩化カルシウムの添加により１９ｍＳまで上昇させた。この試料をシリンジフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、次いで、試料の透明度に対するｐＨ３への調整の効果を、未希釈の試料および室温の水で１：１０に希釈した試料について評価した。

３種の抽出物試料を７１００ｇで１０分間、遠心分離すると、塩化ナトリウム抽出物試料のみが良好に分離した。水および塩化カルシウム試料については、脂肪は水性層中に依然として高度に分散していた。１０２００ｇで１０分間の再度の遠心分離により、分離はあまり改善しなかった。塩化ナトリウム試料が塩化カルシウム試料より多くの溶解塩を有していたため、この不十分な分離には、おそらく、水性相密度が影響していた。遠心分離後の抽出物を、孔径０．４５μｍのフィルターを通したシリンジフィルター濾過により、さらに清澄化した。水抽出物は該フィルターを急速に塞ぎ、塩化カルシウム抽出物は完全に透明にならなかった。

驚くべきことに、水は、使用した塩溶液より多くのタンパク質を抽出することが判明した（以下の表１）。伝導率を１６．７０ｍＳ〜１９．９９ｍＳまで上昇させた塩化カルシウムの塩化ナトリウム抽出物への添加により、沈殿物が生じることが観察され、タンパク質は、除去した任意の他の種と共に失われたに違いなかった。

カルシウムの存在下で酸性化した未希釈の抽出物試料は、透明ではないが、非常に濁っていた酸性化した塩化ナトリウム抽出物よりは透明であった（以下の表２）。

酸性化の前に水で抽出物試料を希釈すると、塩化カルシウムに曝した、特に抽出において塩化カルシウムを用いた試料について優れた透明度が得られた（以下の表３）。希塩化ナトリウムおよび水抽出物の酸性化により、濁った試料が生じた。興味深いことに、希釈後および酸性化前に、塩化ナトリウム＋塩化カルシウムおよび水試料において相当な沈殿が観察されたが、述べたように、酸性化後には、カルシウムを用いた試料のみが透明であった。

例２：
乾燥大豆（３０ｇ）を、０．０５ＭのＣａＣｌ_２、０．１０ＭのＣａＣｌ_２または０．１５ＭのＣａＣｌ_２（３００ｍｌ）とキッチンブレンダー中で合わせ、最大速度で５分間処理した。次いで、試料を７１００ｇで１０分間、遠心分離して、脂肪および残留する固形物から抽出物を分離した。孔径０．４５μｍのシリンジフィルターを用いて抽出物を濾過し、Ｌｅｃｏ分析によりタンパク質含量を求め、試料の透明度をＡ６００により測定した。次いで、清澄な抽出物試料を希ＨＣｌで直接ｐＨ３に酸性化しＡ６００を測定するか、または室温の水で１：１０に希釈し、得られた溶液を希ＨＣｌでｐＨ３に調整し、Ａ６００を測定した。

様々な塩化カルシウム抽出試料を遠心分離すると、０．０５Ｍおよび０．１０ＭのＣａＣｌ_２試料はかなり良好に分離したが、０．１５ＭのＣａＣｌ_２試料は分離しなかった。遠心分離した抽出物をシリンジフィルターで濾過すると、０．０５Ｍの試料は無色透明であり、０．１０Ｍの試料はわずかに濁っており、０．１５Ｍの試料は非常に濁っていてほとんど乳濁していた（以下の表４）。脂肪が濁りの原因であったと考えられる。出発原料として脱脂大豆ミールを用いて処理することにより、その問題は回避されるはずである。しかし、０．１５ＭのＣａＣｌ_２抽出物は清澄化できないため、試験から除外した。

抽出物の水への希釈により多少の沈殿物が生成すると考えられ、その量は高い塩濃度で増大すると考えられた。０．０５Ｍおよび０．１０ＭのＣａＣｌ_２抽出物を直接酸性化することによりかなり透明な溶液が生じたが、優れた透明度は、酸性化前にこれらの試料を水で希釈することにより実現された（以下の表５）。

例３：
旋回振盪台（ｏｒｂｉｔａｌ ｓｈａｋｅｒ ｐｌａｔｆｏｒｍ）上で、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．１５ＭのＣａＣｌ_２または水（１００ｍｌ）を用いて、室温で３０分間、トーストした大豆ミール（１０ｇ）を抽出した。次いで、試料を１０２００ｇで１０分間、遠心分離して、使用済みミール（ｓｐｅｎｔ ｍｅａｌ）から抽出物を分離した。次いで、孔径２５μｍの濾紙を通した濾過により上澄み液をさらに清澄化し、試料のｐＨおよび伝導率を測定した。次いで、孔径０．４５μｍのシリンジフィルターを用いて少量の試料をさらに清澄化し、次いで、透明度（Ａ６００）およびタンパク質含量（Ｌｅｃｏ）を分析した。各抽出物の清澄化試料を４倍量（ｐａｒｔｓ）の室温の水で希釈し、Ａ６００を再び測定した。希釈済みおよび未希釈の抽出物試料を希ＨＣｌでｐＨ３に酸性化し、透明度を再び測定した。塩化ナトリウム抽出物の試料も塩化カルシウムを用いて最大で１９ｍＳの伝導率とし、そのままの濃度の（ｆｕｌｌ ｓｔｒｅｎｇｔｈ）試料および１：５に希釈した試料の透明度を自然のｐＨおよびｐＨ３で評価した。

水および塩化カルシウム溶液は、塩化ナトリウム溶液より多いタンパク質を抽出すると考えられた（以下の表６）。ミールをトーストし、比較的過酷な熱処理に曝したため、全体的な抽出性はかなり低かった。

３種全ての抽出物は、濾過後に比較的同様の透明度であった（以下の表７）。４倍量（ｐａｒｔｓ）の水による水抽出物および塩化ナトリウム抽出物の希釈により、タンパク質沈殿は全く生じなかった。しかし、塩化カルシウム抽出物を希釈すると沈殿物は形成した。この沈殿物は、ｐＨを３まで低下させると完全に溶解し、無色透明な試料が生じた。未希釈の塩化カルシウム抽出物も、酸性化するとかなり透明なままであった。試料を水で希釈したかどうかに関わらず、酸性化すると、水および塩化ナトリウム抽出物は非常に濁った。

塩化カルシウムを塩化ナトリウム抽出物試料に添加して１９ｍＳの伝導率を実現すると、結果的に、試料中に濁りが発生した。沈殿物を生じたこのカルシウムは、酸の添加により再可溶化するとは考えられなかった。そのため、試験した溶液は、いずれもかなりの濁りを有していた（以下の表８）。沈殿物は、試料の酸性化の前に遠心分離または濾過により除去するべきであった。

例４：
この例は、大豆の透明な、酸性化した塩化カルシウム抽出物が、濃縮および脱塩したときに透明なままであるかどうかを確認するために実施した。

「ａ」ｇのトーストした大豆ミールを、周囲温度で「ｂ」ｍｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」ｍｌを生成した。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」ｍｌの水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを３まで低下させた。

「ｈ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｇ」膜での濃縮により、希釈および酸性化したタンパク質抽出物溶液の体積を「ｆ」ｍｌまで減少させ、次いで、「ｊ」ｍｌの逆浸透精製水で、「ｉ」ｍｌの濃縮し、酸性化したタンパク質溶液の一定量を透析濾過した。その結果得られた、酸性化し、濃縮し、透析濾過したタンパク質溶液は、「ｋ」重量％のタンパク質含量を有しており、最初の濾過タンパク質溶液の「ｌ」ｗｔ％の収率を示した。酸性化し、濃縮し、透析濾過したタンパク質溶液を乾燥して、「ｍ」％（Ｎ×６．２５）ｗ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。この生成物は、Ｓ７０１大豆タンパク質単離物（ＳＰＩ）と名付けた。

パラメーター「ａ」〜「ｍ」は、以下の表９に示している。

水に良好に溶解する３．１２５ｇのＳ７０１ ＳＰＩ製品を製造した。Ｓ７０１ ＳＰＩの３．２ｗ／ｖ％タンパク質水溶液を調製し、ＨｕｎｔｅｒＬａｂ Ｃｏｌｏｒ Ｑｕｅｓｔ ＸＥ測定器を使用して色および透明度を評価した。得られた透明な低ｐＨ（３．２９）溶液は、優れた色および透明度を有していた（表１０）。

例５：
「ａ」ｇの乾燥大豆を、周囲温度で「ｂ」ｍｌの０．１０ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、キッチンブレンダーの最大速度で５分間、処理して、タンパク質水溶液を得た。残留する固形物および抽出した脂肪を除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」ｍｌを生成した。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」ｍｌの水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを３まで低下させた。

「ｈ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｇ」膜での濃縮により、希釈および酸性化したタンパク質抽出物溶液の体積を「ｆ」ｍｌまで減少させ、次いで、酸性化し、濃縮したタンパク質溶液の「ｉ」ｍｌの一定量を、「ｊ」ｍｌの逆浸透精製水で透析濾過した。その結果得られた、酸性化し、濃縮し、透析濾過したタンパク質溶液は、「ｋ」重量％のタンパク質含量を有しており、最初の濾過タンパク質溶液の「ｌ」ｗｔ％の収率を示した。酸性化し、濃縮し、透析濾過したタンパク質溶液を乾燥して、「ｍ」％（Ｎ×６．２５）ｗ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。この生成物は、Ｓ７０１大豆タンパク質単離物（ＳＰＩ）と名付けた。

パラメーター「ａ」〜「ｍ」は、以下の表１１に示している。

このプロセスにより、水に良好に溶解し、ＨｕｎｔｅｒＬａｂ Ｃｏｌｏｒ Ｑｕｅｓｔ ＸＥ測定器により評価したところ、優れた色を有するわずかに濁った低ｐＨ（３．１９）溶液（以下の表１２）を生成するＳ７０１ ＳＰＩ製品３．６９ｇが生じた。何らかの理由で、大豆から調製した試料は、ｐＨを３まで低下させ、濃縮すると、ミールから調製した試料ほど十分に透明にならなかった。おそらく、これは、どういうわけかフィルタープレスを回避した一部の残油、もしくはトーストしたミールから抽出できなかったタンパク質種の影響、または使用した異なる濃度の塩化カルシウムの効果であった。この例の最初に希釈および酸性化した抽出物の透明度が、例２において大豆を用いて実現した結果と一致していることに留意されたい。ｐＨ調整後および限外濾過開始前（ｐｒｉｏｒ ｔｏ ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）、またはこのプロセスのその他の後の時点での追加のフィルタープレスの通過は、おそらく、より良好な透明度を有する製品を生じたであろう。

例６：
例４の手順を卓上実験室規模からパイロットプラント規模まで拡大した。

「ａ」ｋｇのトーストした大豆ミールを、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」Ｌを生成した。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」Ｌの水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを３．０３まで低下させた。

「ｈ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｇ」膜での濃縮により、希釈および酸性化したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｆ」Ｌまで減少させた。酸性化し、濃縮したタンパク質溶液の「ｉ」Ｌの一定量を、「ｊ」Ｌの逆浸透精製水で透析濾過し、次いで、６０℃で１分間、低温殺菌し、濾過した。その結果得られた、酸性化し、濃縮し、透析濾過したタンパク質溶液は、「ｋ」重量％のタンパク質含量を有しており、最初の濾過タンパク質溶液の「ｌ」ｗｔ％の収率を示した。酸性化し、濃縮し、透析濾過したタンパク質溶液を乾燥して、「ｍ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。この生成物は、Ｓ００１−Ｈ０５−０８Ａ Ｓ７０１と名付けた。

パラメーター「ａ」〜「ｍ」は、以下の表１３に示している。

水に良好に溶解し、ＨｕｎｔｅｒＬａｂ ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ ＸＥ測定器により評価したところ、優れた色を有する透明な低ｐＨ（３．３５）溶液（以下の表１４）を生じるＳ７０１ １８７ｇを製造した。

乾燥粉末も色が非常に明るかった（以下の表１５）。

例７：
この例は、例６の手順に従って調製した大豆タンパク質単離物の熱安定性を評価する。

例６に記載のように調製したＳ００１−Ｈ０５−０８Ａ Ｓ７０１の２％ｗ／ｖタンパク質溶液を水中で調製した。Ａ６００を測定することにより試料の透明度を評価し、ＨｕｎｔｅｒＬａｂ色Ｑｕｅｓｔ ＸＥ測定器を透過モードで使用して色を測定した。次いで、タンパク質溶液を９５℃まで加熱し、この温度で３０秒間、保持し、その後、氷水中で急速に冷却した。次いで、該溶液の色および透明度を再び評価した。

タンパク質溶液の熱処理により、実際に透明度がわずかに改善し、試料の色に対する効果はほとんどなかった（以下の表１６）。熱処理条件下での透明度の維持は、その多くがその処理の一部として加熱される飲料系におけるタンパク質の使用に特に有益である。

例８：
この例は、トーストした大豆ミールから抽出されるタンパク質の収率に対する抽出溶液特性の効果を評価するため、および高ｐＨの塩化カルシウム抽出物がｐＨ３で透明な溶液を生成するかどうかを確認するために実施した。

トーストした大豆ミールの試料（１０ｇ）を、１００ｍｌの以下の溶媒と合わせた。

・ 水
・ 水＋抽出のｐＨを８．５０まで上昇させるのに十分な希ＮａＯＨ
・ ０．０５ＭのＣａＣｌ_２
・ ０．１０ＭのＣａＣｌ_２
・ ０．１５ＭのＣａＣｌ_２
・ ０．１５ＭのＣａＣｌ_２＋抽出のｐＨを８．７９まで上昇させるのに十分な希ＮａＯＨ
・ ０．０５ＭのＮａＣｌ
・ ０．１０ＭのＮａＣｌ
・ ０．１５ＭのＮａＣｌ
・ ０．１５ＭのＮａＣｌ＋抽出のｐＨを８．６４まで上昇させるのに十分な希ＮａＯＨ
旋回振盪台（ｏｒｂｉｔａｌ ｓｈａｋｅｒ ｐｌａｔｆｏｒｍ）を使用して試料を３０分間、混合した。次いで、孔径０．４５μｍのシリンジフィルターを使用して少量の試料を清澄化し、濾過した溶液のタンパク質含量をＬｅｃｏ分析により求めた。清澄化した高ｐＨの塩化ナトリウムおよび塩化カルシウム抽出物の少量の試料を２倍量（ｐａｒｔｓ）の水で希釈し、希ＨＣｌで試料のｐＨを３に調整した。次いで、試料の透明度を目視で評価した。

塩化カルシウム濃度の増大により、ミールから抽出されるタンパク質の量が増大すると考えられた（以下の表１７）。０．０５Ｍの抽出物について記録した数字は極度に低かったが、おそらく、測定での実験誤差が原因である。抽出における塩化ナトリウムの濃度の増大は、抽出されるタンパク質の量の増大にそれほど影響がなかった。高ｐＨでの抽出の実施により、溶媒タイプに関わらず、抽出されるタンパク質の量の相当な増大が生じるものと考えられた。最も高い収率が得られたのは、高ｐＨでの０．１５ＭのＣａＣｌ_２での抽出であった。この試料を水で希釈すると沈殿物が形成したが、この物質は、再可溶化し、ｐＨを３まで低下させると試料は完全に透明であった。このことは、可溶性であり低ｐＨで透明である大豆タンパク質単離物を生成するためのカルシウム処理プロセスを、所望であればアルカリ性抽出と組み合わせて収率を改善できることを示唆していた。抽出のｐＨが高いと、試料は自然のｐＨの抽出より暗い黄色であったことが観察されたが、これは、タンパク質濃度が高いと変わる可能性がある。ｐＨ８．６４の塩化ナトリウム抽出物を水で希釈すると、ヘイズまたは沈殿物は全く形成しなかった。試料のｐＨを３まで低下させると、ヘイズが形成し、沈殿が生じた。

例９：
この例は、水、塩化ナトリウムおよび塩化カルシウムを用いた別の大豆源の抽出ならびに透明度に対する酸性化の効果を例示する。

脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉（１０ｇ）を、撹拌子／撹拌プレートを使用して室温で３０分間、水、０．１５ＭのＮａＣｌまたは０．１５ＭのＣａＣｌ_２（１００ｍｌ）で抽出した。次いで、試料を１０２００ｇで１０分間、遠心分離して、残留する固形物から抽出物を分離した。次いで、孔径２５μｍの濾紙および孔径０．４５μｍのシリンジフィルターを通した濾過により上澄み液をさらに清澄化し、次いで、ｐＨ、伝導率、透明度（Ａ６００）およびタンパク質含量（Ｌｅｃｏ）を分析した。各抽出物の清澄化試料を４倍量（ｐａｒｔｓ）の室温の水で希釈し、Ａ６００を再び測定した。希釈済みおよび未希釈の抽出物試料を希ＨＣｌでｐＨ３に酸性化し、透明度を再び測定した。２５μｍ後の水および塩化ナトリウム抽出物の試料に少量のＣａＣｌ_２も添加し、伝導率を測定した。次いで、混合物を７８００ｇで１０分間、遠心分離し、孔径０．４５μｍのシリンジフィルターを用いて上澄み液を濾過した。これらの上澄み液のｐＨ、タンパク質含量およびＡ６００を測定し、次いで、ｐＨを３まで低下させ、Ａ６００を再び測定した。

遠心分離後、塩化ナトリウム抽出由来の上澄み液は少々濁っており、水抽出由来の上澄み液は非常に濁っていたため、塩化カルシウム抽出由来の上澄み液が最も透明な試料であるものと考えられた。試料の濾過後でさえ、水抽出物は依然として濁っていた（以下の表１８）。大豆粉の抽出性は、全ての抽出溶液、特に水について非常に良好であった。

未希釈の試料をｐＨ３に酸性化すると、塩化カルシウム抽出物のみが透明なままであった（以下の表１９）。この結果は、希釈ステップが、可溶性であり低ｐＨで透明な溶液を生成する大豆タンパク質単離物の生成に必要ではない可能性があることを示す。

希釈ステップを適用すると、やはり塩化カルシウム抽出物が、ｐＨ３で透明な唯一の試料であった（以下の表２０）。

塩化カルシウムの水抽出物への添加により、試料の伝導率が７．７６ｍＳまで上昇した。塩化カルシウムを用いて塩化ナトリウム抽出物の伝導率を２２．１０ｍＳまで上昇させた。いずれの試料も、塩化カルシウムの添加後にかなりの量の沈殿物を含有していたが、遠心分離および濾過ステップにより清澄化した。清澄化プロセスにおいてかなりの量のタンパク質が失われ、清澄化した水／ＣａＣｌ2抽出物試験では１．１９％のタンパク質およびＮａＣｌ／ＣａＣｌ_２抽出物試験では２．２７％タンパク質であった。カルシウムを添加した水抽出物は、ｐＨ３への酸性化時に透明なままであったが、ＮａＣｌ／ＣａＣｌ_２抽出物は濁った（以下の表２１）。興味深いことに、これらの抽出物試料はいずれも、酸性化前に水で希釈すると、ｐＨ３で透明な溶液を生じた（データは図示せず）。水／ＣａＣｌ_２試料は、希釈および酸添加のいずれのときも透明であった。ＮａＣｌ／ＣａＣｌ_２試料は希釈時に沈殿したが、ｐＨを３まで低下させると透明になった。

例１０：
この例は、量り売り店（ｂｕｌｋ ｆｏｏｄ ｓｔｏｒｅ）で購入した有機大豆粉を使用したパイロットプラント規模での大豆タンパク質単離物の製造を例示する。

「ａ」ｋｇの大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ2溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆粉および脂肪相を除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」Ｌを生成した。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」Ｌの水に添加し、希ＨＣｌ（ｄｉｌｕｔｅ ＨＣｌ）で試料のｐＨを３．０５まで低下させた。

「ｈ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｇ」膜での濃縮により、希釈および酸性化したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｆ」Ｌまで減少させた。酸性化し、濃縮したタンパク質溶液を、「ｉ」Ｌの逆浸透精製水で透析濾過をした。その結果得られた、酸性化し、濃縮し、透析濾過したタンパク質溶液は、「ｊ」重量％のタンパク質含量を有しており、最初の濾過タンパク質溶液の「ｋ」ｗｔ％の収率を示した。酸性化し、濃縮し、透析濾過したタンパク質溶液を等しい体積の水で希釈し、濾過した。次いで、タンパク質溶液を乾燥して、「ｌ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。この生成物は、Ｓ００３−Ｉ１８−０８Ａ Ｓ７０１と名付けた。

パラメーター「ａ」〜「ｌ」は、以下の表２２に示している。

Ｓ００３−Ｉ１８−０８Ａ Ｓ７０１製品を水に溶解すると、得られた溶液（ｐＨ３．３３）は、以下の表２３に見られるように透明で色が非常に明るかった。

以下の表２４に見られるように乾燥粉末も色が非常に明るかった。

例１１：
この例は、脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を使用したパイロットプラント規模での大豆タンパク質単離物の製造を例示する。

「ａ」ｋｇの大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ2溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆粉を除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」Ｌを生成した。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」Ｌの水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを３．０１まで低下させた。

「ｈ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｇ」膜での濃縮により、希釈および酸性化したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｆ」Ｌまで減少させた。酸性化し、濃縮したタンパク質溶液を、「ｉ」Ｌの逆浸透精製水で透析濾過をした。その結果得られた、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液は、「ｊ」重量％のタンパク質含量を有しており、最初の濾過タンパク質溶液の「ｋ」ｗｔ％の収率を示した。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液を乾燥して、「ｌ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。この生成物は、Ｓ００４−Ｊ０２−０８Ａ Ｓ７０１と名付けた。

パラメーター「ａ」〜「ｌ」は、以下の表２５に示している。

Ｓ００４−Ｊ０２−０８Ａ Ｓ７０１単離物を水に溶解すると、得られた溶液（ｐＨ３．０９）は、以下の表２６に見られるように透明で色が非常に明るかった。

以下の表２７に見られるように乾燥粉末も色が非常に明るかった。

例１２：
この例は、新規の酸可溶性の大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）の製造を例示する。

「ａ」ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、６０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」Ｌを生成した。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」Ｌの逆浸透精製水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを「ｆ」まで低下させた。

「ｉ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｈ」膜での濃縮により、希釈および酸性化したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｇ」Ｌまで減少させた。酸性化し、濃縮したタンパク質溶液を、「ｊ」Ｌの逆浸透精製水で透析濾過をした。その結果得られた、酸性化し、濃縮し、透析濾過したタンパク質溶液は、「ｋ」重量％のタンパク質含量を有しており、最初の濾過タンパク質溶液の「ｌ」ｗｔ％の収率を示した。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過したタンパク質溶液を乾燥して、「ｍ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。この生成物には、「ｎ」Ｓ７０１という名称を与えた。

３つの試験に関するパラメーター「ａ」〜「ｎ」は、以下の表２８に示している。

例１３：
この例は、タンパク質ミセル塊法（ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｉｃｅｌｌａｒ ｍａｓｓ ｍｅｔｈｏｄ）による大豆タンパク質単離物の製造を例示する。

１０ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で２００Ｌの０．５ＭのＮａＣｌ溶液に添加し、６０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆粉を除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、１．３４重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液１６５Ｌを生成した。

１０００００ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有するＰＥＳ膜での濃縮により、タンパク質抽出物溶液を１２．０６ｋｇまで減少させ、１７．５１重量％のタンパク質含量を有する濃縮タンパク質溶液を生成した。

３０℃の濃縮溶液を、４℃の温度を有する冷たいＲＯ水に入れて１：５に希釈した。白色の濁りが直ちに形成し、これを沈降させた。上部の希釈水を除去し、濾過したタンパク質溶液の２０．８ｗｔ％の収率で、沈殿した粘稠な粘着性の塊（ＰＭＭ）を容器の底部から回収した。乾燥したＰＭＭ由来のタンパク質は、９９．６６％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した。この生成物には、Ｓ００５−Ｋ１９−０８Ａ Ｓ３００という名称を与えた。

例１４：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）、ならびに２種の市販の大豆タンパク質単離物、すなわち製造業者が非常に可溶性であると示している製品、Ｐｒｏ Ｆａｍ ８２５およびＰｒｏ Ｆａｍ ８７３（ＡＤＭ、Ｄｅｃａｔｕｒ、ＩＬ）の水中の溶解度の評価を含む。タンパク質の溶解度（いわゆるタンパク質法、Ｍｏｒｒら、Ｊ． Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ． ５０： １７１５−１７１８の手順の改良版）および生成物全体の溶解度（いわゆるペレット法（ｐｅｌｌｅｔ ｍｅｔｈｏｄ））に基づいて溶解度を試験した。

０．５ｇのタンパク質を供給するのに十分なタンパク質粉末を秤量してビーカーに入れ、次いで、少量の逆浸透（ＲＯ）精製水を添加し、滑らかなペーストが形成するまで混合物を撹拌した。次いで、追加の水を添加して、体積を約４５ｍｌとした。次いで、電磁撹拌機を使用してビーカーの中身をゆっくりと６０分間、撹拌した。タンパク質の分散の直後にｐＨを求め、希ＮａＯＨまたはＨＣｌで適切なレベル（２、３、４、５、６または７）に調整した。自然のｐＨの試料も調製した。ｐＨを調整した試料についてはｐＨを測定し、６０分間の撹拌の間に２回補正した。６０分間の撹拌後、ＲＯ水で試料の体積を合計で最大５０ｍｌとし、１％ｗ／ｖタンパク質分散液を得た。Ｌｅｃｏ ＦＰ５２８窒素測定器を使用して分散液のタンパク質含量を測定した。次いで、分散液の一定量（２０ｍｌ）を、１００℃のオーブンにおいて終夜乾燥した、予め秤量した遠心分離管に移し、次いで、乾燥器において冷却し、該管に蓋をした。試料を７８００ｇで１０分間、遠心分離し、それにより不溶性物質が沈降し、透明な上澄み液が生じた。Ｌｅｃｏ分析により上澄み液のタンパク質含量を測定し、次いで、上澄み液および該管の蓋を廃棄し、１００℃に設定したオーブンにおいてペレット材料を終夜乾燥した。翌朝、該管を乾燥器に移し、冷却させた。乾燥ペレット材料の重量を記録した。使用した粉末の重量に（（１００−該粉末の含水率（％））／１００）の倍率を乗算することにより、最初のタンパク質粉末の乾燥重量を算出した。次いで、この生成物の溶解度を２種の異なる方法で算出した。

１）溶解度（タンパク質法）（％）＝（上澄み液中のタンパク質％／最初の分散液中のタンパク質％）×１００
２）溶解度（ペレット法）（％）＝（１−（重量乾燥不溶性ペレット材料／（（２０ｍｌの分散液の重量／５０ｍｌの分散液の重量）×最初の重量乾燥タンパク質粉末）））×１００
例１２および１３において製造したタンパク質単離物ならびに市販の単離物の水中の自然のｐＨ値は、以下の表２９に示している。

得られた溶解度の結果は、以下の表３０および３１に示している。

表３０および３１の結果から分かるように、Ｓ７０１製品は、使用した溶解度試験法に関わらず、ｐＨ２〜４の範囲、さらにはｐＨ７の市販の単離物よりずっと可溶性であった。低ｐＨ範囲における優れた溶解度は、酸性飲料において使用するためのＳ７０１製品の適用性の主要な要因である。Ｓ３００製品の溶解度は、ｐＨ４での溶解度がそれほど良好ではなかったこと以外はＳ７０１と同様のパターンをたどったが、依然として市販の製品より良好であった。

例１５：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）ならびに市販の大豆タンパク質単離物Ｐｒｏ Ｆａｍ ８２５およびＰｒｏ Ｆａｍ ８７３の水中の透明度の評価を含む。

例１４に記載のように調製した１％ｗ／ｖタンパク質分散液の透明度を、分光光度計のブランク測定に使用した水を用いながら６００ｎｍでの可視光線の吸光度（Ａ６００）を測定することにより評価した。ＨｕｎｔｅｒＬａｂ ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ ＸＥ測定器の透過モードでの試料の分析により、別の透明度の尺度であるパーセンテージヘイズ値も得られた。いずれの試験でも、スコアが低いほど透明度が高いことを示している。

透明度の結果は、以下の表３２および３３に示している。

表３２および３３の結果から分かるように、ｐＨ範囲２〜４で調製したＳ７０１の溶液は、透明度を評価するのに使用した方法に関わらず、極度に透明であった。市販の単離物は、試験した全てのｐＨ値で極度に濁っていた。Ｓ３００は、ｐＨ２〜３でかなり透明であったが、Ｓ７０１溶液ほどシャープではなかった。ｐＨ４では、Ｓ３００溶液はかなり濁っていた。Ｓ７０１およびＳ３００の溶液は、ｐＨ７の市販の単離物より透明であったが、このｐＨの各溶液は、酸性溶液ほど透明ではなかった。

例１６：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）の水中での熱安定性の評価を含む。Ｓ７０１の２％ｗ／ｖタンパク質溶液を水中で生成し、必要であればｐＨを３に調整した。これらの溶液の透明度を、ＨｕｎｔｅｒＬａｂ Ｃｏｌｏｒ Ｑｕｅｓｔ ＸＥ測定器を用いたヘイズ測定により評価した。次いで、各溶液を９５℃まで加熱し、この温度で３０秒間、保持し、次いで、氷浴中で直ちに室温まで冷却した。次いで、熱処理した溶液の透明度を再び測定した。

加熱の前および後のタンパク質溶液の透明度は、以下の表３４に示している。

表３４の結果から分かるように、Ｓ７０１の溶液は、最初は完全に透明であり、熱処理後も透明なままであった。

例１７：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）ならびに市販の大豆タンパク質単離物Ｐｒｏ Ｆａｍ ８２５およびＰｒｏ Ｆａｍ ８７３の、ソフトドリンク（Ｓｐｒｉｔｅ）およびスポーツドリンク（Ｏｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅ）への溶解度の評価を含む。ｐＨを補正していない各飲料にタンパク質を添加して溶解度を求め、タンパク質強化飲料のｐＨを元々の飲料のレベルに調整して再び溶解度を求めた。

ｐＨを補正せずに溶解度を評価する場合、１ｇのタンパク質を供給するのに十分な量のタンパク質粉末を秤量してビーカーに入れ、少量の飲料を添加し、滑らかなペーストが形成するまで撹拌した。追加の飲料を添加して体積を５０ｍｌとし、次いで、各溶液を電磁撹拌機で６０分間、ゆっくりと撹拌して、２％タンパク質ｗ／ｖ分散液を得た。ＬＥＣＯ ＦＰ５２８窒素測定器を使用して試料のタンパク質含量を分析し、次いで、タンパク質を含有する飲料の一定量を７８００ｇで１０分間、遠心分離し、上澄み液のタンパク質含量を測定した。

溶解度（％）＝（上澄み液中のタンパク質％／最初の分散液中のタンパク質％）×１００
ｐＨを補正して溶解度を評価する場合、タンパク質を含まないソフトドリンク（Ｓｐｒｉｔｅ）（３．３９）およびスポーツドリンク（Ｏｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅ）（３．１９）のｐＨを測定した。１ｇのタンパク質を供給するのに十分な量のタンパク質粉末を秤量してビーカーに入れ、少量の飲料を添加し、滑らかなペーストが形成するまで撹拌した。追加の飲料を添加して体積を約４５ｍｌとし、次いで、各溶液を電磁撹拌機で６０分間、ゆっくりと撹拌した。タンパク質を含有する飲料のｐＨを測定し、次いで、必要に応じてＨＣｌまたはＮａＯＨを用いて、元々のタンパク質を含まないｐＨに調整した。次いで、追加の飲料を用いて各溶液の体積を合計で５０ｍｌとし、２％タンパク質ｗ／ｖ分散液を得た。ＬＥＣＯ ＦＰ５２８窒素測定器を使用して試料のタンパク質含量を分析し、次いで、タンパク質を含有する飲料の一定量を７８００ｇで１０分間、遠心分離し、上澄み液のタンパク質含量を測定した。

溶解度（％）＝（上澄み液中のタンパク質％／最初の分散液中のタンパク質％）×１００
得られた結果は、以下の表３５に示している。

表３５の結果から分かるように、Ｓ７０１製品は、ＳｐｒｉｔｅおよびＯｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅに極度に可溶であった。Ｓ７０１は酸性化した製品であり、飲料のｐＨに対する効果はほとんどなかった。Ｓ３００および市販の単離物は酸性化した製品ではなかった。これらの製品の溶解度は、飲料のｐＨの補正により多少改善した。しかし、ｐＨ補正後でさえ、市販の単離物は、Ｓ７０１よりずっと可溶性が低かった。Ｓ３００は、ｐＨ補正後にＳ７０１よりわずかに可溶性が低かった。

例１８：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）ならびに市販の大豆タンパク質単離物Ｐｒｏ Ｆａｍ ８２５およびＰｒｏ Ｆａｍ ８７３の、ソフトドリンクおよびスポーツドリンク中での透明度の評価を含む。

例１５に記載の方法を使用して、例１７においてソフトドリンク（Ｓｐｒｉｔｅ）およびスポーツドリンク（Ｏｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅ）中で調製した２％ｗ／ｖタンパク質分散液の透明度を評価したが、６００ｎｍでの吸光度測定については、分光光度計のブランク測定に使用した適切な飲料を使用した。

得られた結果は、以下の表３６および３７に示している。

表３６および３７の結果から分かるように、Ｓ７０１製品のＳｐｒｉｔｅおよびＯｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅの透明度に対する効果は最小限であった。市販の単離物およびＳ３００の添加により、これらの飲料は、ｐＨ補正後でさえ非常に濁った。

例１９：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）ならびに市販の大豆タンパク質単離物Ｐｒｏ Ｆａｍ ８２５およびＰｒｏ Ｆａｍ ８７３のアルコール飲料への溶解度の評価を含む。ｐＨを補正していない各飲料にタンパク質を添加して溶解度を求め、タンパク質強化飲料（ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｔｉｆｉｅｄ ｂｅｖｅｒａｇｅｓ）のｐＨを元々の飲料のレベルに調整して再び溶解度を求めた。

ｐＨを補正せずに溶解度を評価する場合、１ｇのタンパク質を供給するのに十分な量のタンパク質粉末を秤量してビーカーに入れ、少量の飲料を添加し、滑らかなペーストが形成するまで撹拌した。追加の飲料を添加して体積を５０ｍｌとし、次いで、各溶液を電磁撹拌機で６０分間、ゆっくりと撹拌して、２％タンパク質ｗ／ｖ分散液を得た。ＬＥＣＯ ＦＰ５２８窒素測定器を使用して試料のタンパク質含量を分析し、次いで、タンパク質を含有する飲料の一定量を７８００ｇで１０分間、遠心分離し、上澄み液のタンパク質含量を測定した。

溶解度（％）＝（上澄み液中のタンパク質％／最初の分散液中のタンパク質％）×１００
ｐＨを補正して溶解度を評価する場合、タンパク質を含まないＭｉｌｌｅｒ Ｇｅｎｕｉｎｅ Ｄｒａｆｔビール（ｂｅｅｒ）（４．０５）、Ｂａｃａｒｄｉ Ｂｒｅｅｚｅｒ Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ Ｄａｉｑｕｉｒｉ（３．６０）ならびにＰｏｍｔｉｎｉ ＶｏｄｋａおよびＰｏｍｅｇｒａｎａｔｅ Ｃｏｏｌｅｒ（３．３６）のｐＨを測定した。１ｇのタンパク質を供給するのに十分な量のタンパク質粉末を秤量してビーカーに入れ、少量の飲料を添加し、滑らかなペーストが形成するまで撹拌した。追加の飲料を添加して体積を約４５ｍｌとし、次いで、各溶液を電磁撹拌機で６０分間、ゆっくりと撹拌した。タンパク質を含有する飲料のｐＨを測定し、次いで、必要に応じてＨＣｌまたはＮａＯＨを用いて元々のタンパク質を含まないｐＨに調整した。次いで、追加の飲料を用いて各溶液の体積を合計で５０ｍｌとし、２％タンパク質ｗ／ｖ分散液を得た。ＬＥＣＯ ＦＰ５２８窒素測定器を使用して試料のタンパク質含量を分析し、次いで、タンパク質を含有する飲料の一定量を７８００ｇで１０分間、遠心分離し、上澄み液のタンパク質含量を測定した。

溶解度（％）＝（上澄み液中のタンパク質％／最初の分散液中のタンパク質％）×１００
得られた結果は、以下の表３８および３９に示している。

表３８および３９の結果から分かるように、Ｓ７０１製品はアルコール飲料において極度に可溶であった。Ｓ７０１は酸性化した製品であるため、その添加は、中性のＳ３００および市販の単離物ほど飲料のｐＨを変えなかった。Ｓ３００の溶解度は、飲料のｐＨの補正により多少改善したが、Ｓ７０１の溶解度より依然として著しく不十分であった。市販の単離物は、飲料のｐＨを補正したかどうかに関わらず難溶性であった。

例２０：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）ならびに市販の大豆タンパク質単離物Ｐｒｏ Ｆａｍ ８２５およびＰｒｏ Ｆａｍ ８７３のアルコール飲料中での透明度および熱安定性の評価を含む。

例１９のアルコール飲料中で調製した２％ｗ／ｖタンパク質分散液の透明度を、例１５に記載の方法を使用して評価したが、６００ｎｍでの吸光度測定については、分光光度計のブランク測定に使用した適切な飲料を使用した。タンパク質を含有するアルコール飲料の一定量を９５℃まで加熱すること、および試料をこの温度で３０秒間、保持することにより熱安定性を評価した。次いで、試料を氷浴中で直ちに室温まで冷却し、透明度を再び測定した。６００ｎｍでの吸光度測定については、分光光度計のブランク測定に適切な非加熱のタンパク質を含まない飲料を使用した。

得られた結果は、以下の表４０〜４３に示している。

表４０〜４３の結果から分かるように、Ｓ７０１の添加は、アルコール飲料の透明度に対する効果がほとんどなかった。しかし、市販の大豆タンパク質単離物およびＳ３００を含有する飲料は非常に濁っていた。熱処理により、Ｓ７０１を含有するアルコール飲料の透明度は低下せず、多くの場合、わずかに改善した。市販の単離物およびＳ３００を含有する飲料は、熱処理後に濁ったままであった。

例２１：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）ならびに市販の大豆タンパク質単離物Ｐｒｏ Ｆａｍ ８２５中の特定の成分の含量の評価を含む。

プラズマ発光分光法により、カルシウム成分、リン成分、マグネシウム成分、カリウム成分、ナトリウム成分、鉄成分、銅成分、亜鉛成分およびマンガン成分の検出を実施した。

得られた結果は、以下の表４４に示している。

表４４の結果から分かるように、当該成分の含量は、一般にＳ７０１製品においてＳ３００または市販の単離物より低かった。Ｓ７０１製品は、他の単離物と比較して特にリン、カリウム、ナトリウム、亜鉛およびマンガンが少なかった。

例２２：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）ならびに市販の大豆タンパク質単離物Ｐｒｏ Ｆａｍ８２５および８７３のフィチン酸含量の評価を含む。

ＬａｔｔａおよびＥｓｋｉｎ（Ｊ． Ａｇｒｉｃ． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．、２８： １３１３−１３１５）の方法を使用してフィチン酸含量を求めた。

得られた結果は、以下の表４５に示している。

表４５の結果から分かるように、Ｓ３００および市販の単離物はかなりのレベルのフィチン酸を含有していたが、Ｓ７０１試料は極度にフィチン酸が少なかった。

例２３：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）ならびに市販の大豆タンパク質単離物Ｐｒｏ Ｆａｍ ８２５およびＰｒｏ Ｆａｍ ８７３の、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）スポーツドリンク（Ｏｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅ粉末）への溶解度の評価を含む。タンパク質および飲料粉末をドライブレンドし、次いで、ｐＨを補正していない水に溶解して溶解度を求め、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）タンパク質／飲料ミックスのｐＨを、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）タンパク質を含まない粉末状飲料のレベルに調整して再び溶解度を求めた。

Ｏｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅ粉末の容器の調製説明書から、１００ｍｌの飲料を生成するのに６．６８ｇの粉末が必要であることが判明した。２ｇのタンパク質を供給するのに十分な量のタンパク質粉末を秤量して２５０ｍｌのビーカーに入れ、次いで、Ｏｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅ粉末（６．６８ｇ）を添加し、ビーカーを回転させることにより混合物をドライブレンドした。逆浸透（ＲＯ）精製水（１００ｍｌ）をタンパク質−Ｇａｔｏｒａｄｅ混合物（２％タンパク質ｗ／ｖ）に添加し、試料を撹拌プレートで６０分間、ゆっくりと撹拌した。ｐＨを補正して試料を評価する場合、必要に応じてＨＣｌまたはＮａＯＨを用いて、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）Ｇａｔｏｒａｄｅ／タンパク質飲料のｐＨを、３．１７（液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）タンパク質を含まないＯｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅ粉末のｐＨ）に調整した。Ｌｅｃｏ ＦＰ５２８窒素測定器を使用して試料のタンパク質含量を分析し、次いで、飲料の一定量を７８００ｇで１０分間、遠心分離し、上澄み液のタンパク質含量を測定した。

溶解度（％）＝（上澄み液中のタンパク質％／最初の分散液中のタンパク質％）×１００
得られた結果は、以下の表４６に示している。

表４６の結果に見られるように、Ｓ７０１製品はＧａｔｏｒａｄｅ粉末に極度に可溶であった。Ｓ７０１は酸性化した製品であり、そのため、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）飲料のｐＨに対する効果がほとんどなかった。Ｓ３００は酸性化した製品ではなく、ｐＨを補正した場合のみ非常に可溶性であった。市販の大豆単離物も酸性化した製品ではなかったが、ｐＨを補正したかどうかに関わらず、Ｇａｔｏｒａｄｅ粉末に難溶であった。

例２４：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）ならびに市販の大豆タンパク
質単離物Ｐｒｏ Ｆａｍ ８２５およびＰｒｏ Ｆａｍ ８７３の、液戻しした（ｒｅｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）スポーツドリンク（Ｏｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅ粉末）中での透明度の評価を含む。タンパク質および飲料粉末をドライブレンドし、次いで、ｐＨを補正していない水に溶解して透明度を求め、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）タンパク質／飲料ミックスのｐＨを、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）タンパク質を含まない粉末状飲料のレベルに調整して再び溶解度を求めた。

例１５に記載の方法を使用して、例２３において液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）スポーツドリンク（Ｏｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅ粉末）中で調製した２％ｗ／ｖタンパク質分散液の透明度を評価したが、６００ｎｍでの吸光度測定については、分光光度計のブランク測定に使用した適切な飲料を使用した。

得られた結果は、以下の表４７に示している。

表４７の結果から分かるように、Ｓ７０１製品は、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）Ｏｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅ粉末中でヘイズレベルに対する効果がほとんどなかった。Ｓ３００および市販の単離物と共に液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｄ）Ｏｒａｎｇｅ Ｇａｔｏｒａｄｅ粉末は、ｐＨを補正したかどうかに関わらず、非常に濁っていた。

例２５：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）ならびに市販の大豆タンパク質単離物Ｐｒｏ Ｆａｍ ８２５およびＰｒｏ Ｆａｍ ８７３の、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）ソフトドリンク（Ｒａｓｐｂｅｒｒｙ Ｉｃｅ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔ粉末）への溶解度の評価を含む。タンパク質および飲料粉末をドライブレンドし、次いで、ｐＨを補正していない水に溶解して溶解度を求め、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）タンパク質／飲料ミックスのｐＨを、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）タンパク質を含まない粉末状飲料のレベルに調整して再び溶解度を求めた。

Ｒａｓｐｂｅｒｒｙ Ｉｃｅ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔ粉末のパッケージの調製説明書から、１００ｍｌの飲料を生成するのに０．５３ｇの粉末が必要であることが判明した。２ｇのタンパク質を供給するのに十分な量のタンパク質粉末を秤量して２５０ｍｌのビーカーに入れ、次いで、Ｒａｓｐｂｅｒｒｙ Ｉｃｅ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔ粉末（０．５３ｇ）を添加し、ビーカーを回転させることにより混合物をドライブレンドした。ＲＯ水（１００ｍｌ）をタンパク質−Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔ混合物（２％タンパク質ｗ／ｖ）に添加し、試料を撹拌プレートで６０分間、ゆっくりと撹拌した。ｐＨを補正して試料を評価する場合、必要に応じてＨＣｌまたはＮａＯＨを用いて、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔ／タンパク質飲料のｐＨを、３．２７（液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）タンパク質を含まないＲａｓｐｂｅｒｒｙ Ｉｃｅ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔ粉末のｐＨ）に調整した。ＬＥＣＯ ＦＰ５２８窒素測定器を使用して試料のタンパク質含量を分析し、次いで、飲料の一定量を７８００ｇで１０分間、遠心分離し、上澄み液のタンパク質含量を測定した。

溶解度（％）＝（上澄み液中のタンパク質％／最初の分散液中のタンパク質％）×１００
得られた結果は、以下の表４８に示している。

表４８の結果から分かるように、Ｓ７０１製品は、Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔ粉末と
共に液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）場合に極度に可溶性であった。Ｓ７０１
は酸性化した製品であり、そのため、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）飲料の
ｐＨに対する効果がほとんどなかった。Ｓ３００は酸性化した製品ではなく、ｐＨを補正
した場合のみ非常に可溶性であった。市販の大豆単離物は酸性化した製品ではなかったが
、ｐＨを補正したかどうかに関わらず、Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔ粉末と共に液戻しし
た（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）場合は難溶性であった。

例２６：
この例は、例１２の方法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）、例１３のＰＭＭ法により製造した大豆タンパク質単離物（Ｓ３００）ならびに市販の大豆タンパク質単離物Ｐｒｏ Ｆａｍ ８２５およびＰｒｏ Ｆａｍ ８７３の、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）ソフトドリンク（Ｒａｓｐｂｅｒｒｙ Ｉｃｅ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔ粉末）中での透明度の評価を含む。タンパク質および飲料粉末をドライブレンドし、次いで、ｐＨを補正していない水に溶解して透明度を求め、液戻ししたタンパク質／飲料ミックスのｐＨを、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）タンパク質を含まない粉末状飲料のレベルに調整して再び溶解度を求めた。

例１５に記載の方法を使用して、例２５において液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）ソフトドリンク（Ｒａｓｐｂｅｒｒｙ Ｉｃｅ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔ粉末）中で調製した２％ｗ／ｖタンパク質分散液の透明度を評価したが、６００ｎｍでの吸光度測定については、分光光度計のブランク測定に使用した適切な飲料を使用した。

得られた結果は、以下の表４９に示している。

表４９の結果から分かるように、Ｓ７０１製品は、液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）Ｒａｓｐｂｅｒｒｙ Ｉｃｅ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔの透明度に対する効果がほとんどなかった。Ｓ３００および市販の単離物と共に液戻しした（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）Ｒａｓｐｂｅｒｒｙ Ｉｃｅ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｌｉｇｈｔは、ｐＨを補正したかどうかに関わらず、非常に濁っていた。

例２７：
この例は、本発明の一実施形態に従って９０重量％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．未満のタンパク質含量を有する新規の大豆タンパク質製品の製造について記載する。

「ａ」ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの「ｃ」ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆粉を除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離により部分的に清澄化して、「ｅ」重量％のタンパク質含量を有する部分的に清澄化したタンパク質溶液「ｄ」Ｌを生成した。部分的に清澄化したタンパク質溶液を１倍容（ｖｏｌｕｍｅ）の水で希釈し、ＨＣｌでｐＨ３に調整した。

希釈および酸性化したタンパク質溶液を濾過によりさらに清澄化し、「ｇ」重量（「ｇ」 ｂｙ ｗｅｉｇｈｔ）のタンパク質含量を有する溶液「ｆ」Ｌを得た。

「ｊ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有するポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜での濃縮により、「ｈ」Ｌのタンパク質溶液の体積を、「ｉ」Ｌまで減少させた。容積減少係数（ｖｏｌｕｍｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）（ＶＲＦ）５、７および１０で、保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）の２００ｍｌの試料を採取し、乾燥した。

パラメーター「ａ」〜「ｊ」は、以下の表５０に示している。

Ｌｅｃｏ ＦＰ５２８窒素測定器を使用して、タンパク質含量について乾燥試料を分析した。次いで、試料を３．２重量％タンパク質のレベルで水に溶解し、必要に応じてｐＨを３に調整した。ＨｕｎｔｅｒＬａｂ ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ ＸＥ測定器を使用して各溶液の色および透明度を測定した。得られた結果は、以下の表５１に示している。

表５１の結果から分かるように、部分的に精製した大豆タンパク質製品は、ｐＨ３の水に可溶化すると、容認できる色および非常に良好な透明度の溶液を生じた。

例２８：
この例は、本発明の一実施形態に従って９０重量％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．未満のタンパク質含量を有する新規の大豆タンパク質製品の製造について記載する。

「ａ」ｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で「ｂ」ｍｌの「ｃ」ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆粉を除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｅ」重量％のタンパク質含量を有する清澄なタンパク質溶液「ｄ」ｍｌを生成した。

濾液の「ｆ」ｍｌの一定量を１倍容（ｖｏｌｕｍｅ）の水で希釈し、ＨＣｌでｐＨ３に調整した。次いで、得られた「ｈ」重量％のタンパク質含量を有する溶液「ｇ」ｍｌを、「ｉ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有するＰＥＳ膜で濃縮した。１．２５、２の容積減少係数（ｖｏｌｕｍｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ）および最終濃度点で保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）の試料を採取し、乾燥した。２倍容（ｖｏｌｕｍｅｓ）の水を用いた透析濾過（ＤＦ）後に別の保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）の試料も採取し、乾燥した。

試験に関するパラメーター「ａ」〜「ｉ」は、以下の表５２に示している。

Ｌｅｃｏ ＦＰ５２８窒素測定器を使用して、タンパク質含量について乾燥試料を分析した。次いで、３．２重量％タンパク質のレベルの水に試料を溶解し、必要に応じてｐＨを３に調整した。ＨｕｎｔｅｒＬａｂ ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ ＸＥ測定器を使用して各溶液の色および透明度を測定した。得られた結果は、以下の表５３に示している。

表５３の結果から分かるように、部分的に精製した大豆タンパク質製品の溶液は、ｐＨ３の水に可溶化すると、非常に良好な色および透明度を生じた。

例２９：
この例は、本明細書において提供する新規の酸可溶性の大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）のトリプシン阻害剤活性に対する膜タイプおよび孔径の効果を例示する。

Ｌｅｃｏ ＦＰ５２８窒素測定器を使用してタンパク質含量の定量を実施した。Ｋａｋａｄｅら、Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍ．、５１： ３７６−３８１（１９７４）の方法を使用してトリプシン阻害剤活性を求めた。

「ａ」ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」Ｌを生成した。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」倍容（複数可）（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の逆浸透精製水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを３．０１まで低下させた。希釈および酸性化した濾液は熱処理しなかった。

約「ｊ」℃の温度で操作しながら、「ｉ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｈ」膜での濃縮により、希釈および酸性化したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｆ」Ｌから「ｇ」Ｌまで減少させた。「ｋ」ｗｔ％のタンパク質含量を有する酸性化タンパク質溶液は、透析濾過操作を約「ｍ」℃で実施しながら、「ｉ」Ｌの逆浸透精製水で透析濾過をした。次いで、得られた透析濾過をしたタンパク質溶液をさらに濃縮して、最初の濾過タンパク質溶液の「ｏ」ｗｔ％の収率を示す「ｎ」重量％のタンパク質含量を有する溶液を得た。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液を乾燥して、「ｐ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。乾燥製品は、「ｑ」トリプシン阻害剤ユニット／ｍｇタンパク質（Ｎ×６．２５）のトリプシン阻害剤活性を有することが判明した。この生成物には、「ｒ」Ｓ７０１という名称を与えた。

２つの試験に関するパラメーター「ａ」〜「ｒ」は、以下の表５４に示している。

表５４のデータから分かるように、大きい孔径を有する膜を使用して生成した単離物の方が、低いトリプシン阻害剤活性を有していた。

例３０：
この例は、トリプシン阻害剤活性の低下における濃縮および透析濾過ステップの有効性を例示する。

「ａ」ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」Ｌを生成した。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」倍容（複数可）（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の逆浸透精製水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを「ｆ」まで低下させた。次いで、希釈および酸性化した溶液を９０℃で１分間、熱処理をした。

約「ｋ」℃の温度で操作しながら、「ｊ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｉ」膜での濃縮により、希釈し、酸性化し、熱処理したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｇ」Ｌから「ｈ」Ｌまで減少させた。この時点で、透析濾過操作を約「ｎ」℃で実施しながら、「ｍ」Ｌの逆浸透（ＲＯ）精製水で、タンパク質含量「ｌ」ｗｔ％を有する酸性化タンパク質溶液を透析濾過した。次いで、透析濾過溶液を「ｏ」Ｌの体積および約「ｐ」重量％のタンパク質含量まで濃縮し、透析濾過操作を約「ｒ」℃で実施しながら、追加の「ｑ」ＬのＲＯ水で透析濾過をした。この２回目の透析濾過後、タンパク質溶液を約「ｓ」重量％のタンパク質含量まで濃縮し、次いで、水で「ｔ」重量％のタンパク質含量まで希釈して、噴霧乾燥を促進した。噴霧乾燥前のタンパク質溶液を最初の濾過タンパク質溶液の「ｕ」ｗｔ％の収率で回収した。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液を乾燥して、「ｖ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。乾燥製品は、「ｗ」トリプシン阻害剤ユニット（ＴＩＵ）／ｍｇタンパク質（Ｎ×６．２５）のトリプシン阻害剤活性を有することが判明した。この生成物には、「ｘ」Ｓ７０１Ｈという名称を与えた。

３つの試験に関するパラメーター「ａ」〜「ｘ」は、以下の表５５に示している。

表５６は、このプロセスの様々な時点でのタンパク質溶液のトリプシン阻害剤活性の低減を示している。

表５６の結果から分かるように、トリプシン阻害剤活性の低減は、濃縮および透析濾過プロセスの全ての時点で実現された。

例３１：
この例は、任意選択の（ｏｐｔｉｏｎａｌ）希釈ステップの包含から得られるトリプシン阻害剤活性レベルの低減を例示する。希釈ステップの使用により、より十分な膜処理が実施され、本質的に付加的な透析濾過が生じる。

「ａ」ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する清澄なタンパク質溶液「ｃ」Ｌを生成した。

次いで、清澄なタンパク質溶液を「ｅ」倍容（複数可）（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の逆浸透精製水に添加し、試料のｐＨは「ｆ」であった（ｔｈｅ ｐＨ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ 「ｆ」）。次いで、試料を濾過によりポリッシュし（ｐｏｌｉｓｈｅｄ）、「ｈ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｇ」Ｌを得た。試料のｐＨは「ｉ」であった（Ｔｈｅ ｐＨ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ‘ｉ’．）。濾液は熱処理しなかった。

約「ｎ」℃の温度で操作しながら、「ｍ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｌ」膜での濃縮により、濾過したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｊ」Ｌから「ｋ」Ｌまで減少させた。酸性化し、濃縮したタンパク質溶液は、透析濾過操作を約「ｐ」℃で実施しながら、「ｏ」Ｌの逆浸透精製水で透析濾過をした。その結果得られた、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液は、「ｑ」重量％のタンパク質含量を有しており、最初の清澄なタンパク質溶液の「ｒ」ｗｔ％の収率を示した。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液を乾燥して、「ｓ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。乾燥製品は、「ｔ」トリプシン阻害剤ユニット／ｍｇタンパク質（Ｎ×６．２５）のトリプシン阻害剤活性を有することが判明した。この生成物には、「ｕ」Ｓ７０１という名称を与えた。

３つの試験に関するパラメーター「ａ」〜「ｕ」は、以下の表５７に示している。

表５７に提示の結果から分かるように、希釈ステップを用いた試験により、希釈ステップを利用しなかった試験より低いトリプシン阻害剤活性を有する製品が生じた。

例３２：
この例は、本明細書において提供する新規の酸可溶性の大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１Ｈ）のトリプシン阻害剤活性に対する膜処理の温度の効果を例示する。

「ａ」ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」Ｌを生成した。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」倍容（複数可）（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の逆浸透精製水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを「ｆ」まで低下させた。次いで、希釈および酸性化した溶液を９０℃で１分間熱処理した。

約「ｋ」℃の温度で操作しながら、「ｊ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｉ」膜での濃縮により、希釈し、酸性化し、熱処理したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｇ」Ｌから「ｈ」Ｌまで減少させた。この時点で、「ｌ」％ｗｔのタンパク質含量を有する酸性化タンパク質溶液は、透析濾過操作を約「ｎ」℃で実施しながら、「ｍ」Ｌの逆浸透（ＲＯ）精製水で透析濾過をした。次いで、透析濾過溶液を「ｏ」Ｌの体積および約「ｐ」重量％のタンパク質含量までさらに濃縮し、透析濾過操作を約「ｒ」℃で実施しながら、追加の「ｑ」ＬのＲＯ水で透析濾過をした。この２回目の透析濾過後、タンパク質溶液を約「ｓ」重量％のタンパク質含量まで濃縮し、次いで、水で「ｔ」重量％のタンパク質含量まで希釈して、噴霧乾燥を促進した。噴霧乾燥前のタンパク質溶液を、最初の濾過タンパク質溶液の「ｕ」ｗｔ％の収率で回収した。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液を乾燥して、「ｖ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。乾燥製品は、「ｗ」トリプシン阻害剤ユニット（ＴＩＵ）／ｍｇタンパク質（Ｎ×６．２５）のトリプシン阻害剤活性を有することが判明した。この生成物には、「ｘ」Ｓ７０１Ｈという名称を与えた。

２つの試験に関するパラメーター「ａ」〜「ｘ」は、以下の表５８に示している。

表５８の結果から分かるように、約５０℃での膜処理を用いて実施した試験は、膜処理を約３０℃で実施した試験より低いトリプシン阻害剤活性を有していた。

例３２：
この例は、新規の酸可溶性の大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１およびＳ７０１Ｈ）のトリプシン阻害剤活性に対する熱処理の効果を例示する。

「ａ」ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する清澄なタンパク質溶液「ｃ」Ｌを生成した。

次いで、清澄なタンパク質溶液を「ｅ」倍容（複数可）（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の逆浸透精製水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを「ｆ」まで低下させた。試料を「ｇ」℃で「ｈ」分間、熱処理をし、次いで、濾過によりポリッシュし（ｐｏｌｉｓｈｅｄ）、「ｊ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｉ」Ｌを得た。

約「ｏ」℃の温度で操作しながら、「ｎ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｍ」膜での濃縮により、濾過したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｋ」Ｌから「ｌ」Ｌまで減少させた。酸性化し、濃縮したタンパク質溶液は、透析濾過操作を約「ｑ」℃で実施しながら、「ｐ」Ｌの逆浸透精製水で透析濾過をした。その結果得られた、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液は、「ｒ」重量％のタンパク質含量を有しており、最初の清澄なタンパク質溶液の「ｓ」ｗｔ％の収率を示した。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液を乾燥して、「ｔ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。乾燥製品は、「ｕ」トリプシン阻害剤ユニット／ｍｇタンパク質（Ｎ×６．２５）のトリプシン阻害剤活性を有することが判明した。この生成物には、「ｖ」という名称を与えた。

２つの試験に関するパラメーター「ａ」〜「ｖ」は、以下の表５９に示している。

表５９の結果から分かるように、熱処理ステップを含むプロセスにより調製した単離物の方が、低いトリプシン阻害剤活性を有していた。

例３３：
この例も、本明細書において提供する新規の酸可溶性の大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１およびＳ７０１Ｈ）のトリプシン阻害剤活性に対する熱処理の効果を例示する。

「ａ」ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」Ｌを得た。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」倍容（複数可）（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の逆浸透精製水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを「ｆ」まで低下させた。次いで、希釈および酸性化した溶液を「ｇ」℃で「ｈ」分間（複数可）、熱処理をした。

約「ｍ」℃の温度で操作しながら、「ｌ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｋ」膜での濃縮により、タンパク質抽出物溶液の体積を、「ｉ」Ｌから「ｊ」Ｌまで減少させた。この時点で、「ｎ」ｗｔ％のタンパク質含量を有する酸性化タンパク質溶液は、透析濾過操作を約「ｐ」℃で実施しながら、「ｏ」Ｌの逆浸透（ＲＯ）精製水で透析濾過をした。次いで、透析濾過溶液を「ｑ」Ｌの体積および約「ｒ」重量％のタンパク質含量までさらに濃縮し、約「ｔ」℃で透析濾過操作を実施しながら、追加の「ｓ」ＬのＲＯ水で透析濾過をした。この２回目の透析濾過後、タンパク質溶液を約「ｕ」重量％のタンパク質含量まで濃縮し、次いで、水で「ｖ」重量％のタンパク質含量まで希釈して、噴霧乾燥を促進した。噴霧乾燥前のタンパク質溶液を、最初の濾過タンパク質溶液の「ｗ」ｗｔ％の収率で回収した。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液を乾燥して、「ｘ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。乾燥製品は、「ｙ」トリプシン阻害剤ユニット（ＴＩＵ）／ｍｇタンパク質（Ｎ×６．２５）のトリプシン阻害剤活性を有することが判明した。この生成物には、「ｚ」という名称を与えた。

２つの試験に関するパラメーター「ａ」〜「ｚ」は、以下の表６０に示している。

表６０の結果から分かるように、熱処理ステップを含むプロセスにより調製した単離物の方が、低いトリプシン阻害剤活性を有していた。

例３４：
この例は、本明細書において提供する新規の酸可溶性の大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）のトリプシン阻害剤活性に対する、異なるレベルの熱処理に曝した大豆タンパク質源の使用の効果を例示する。

「ａ」ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉（Ｓ００５）、脱脂し、中程度に熱処理した大豆粉（Ｓ００７）、または脱脂し、完全に熱処理した大豆粉（Ｓ００６）を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ2溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する清澄なタンパク質溶液「ｃ」Ｌを生成した。

次いで、清澄なタンパク質溶液を「ｅ」倍容（複数可）（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の逆浸透精製水に添加し、希「ｇ」で試料のｐＨを「ｆ」まで低下させた。次いで、試料を濾過によりポリッシュし（ｐｏｌｉｓｈｅｄ）、「ｉ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｈ」Ｌを得た。濾液は熱処理しなかった。

約「ｎ」℃の温度で操作しながら、「ｍ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｌ」膜での濃縮により、濾過したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｊ」Ｌから「ｋ」Ｌまで減少させた。酸性化し、濃縮したタンパク質溶液は、透析濾過操作を約「ｐ」℃で実施しながら、「ｏ」Ｌの逆浸透精製水で透析濾過をした。その結果得られた、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液は、「ｑ」重量％のタンパク質含量を有しており、最初の清澄なタンパク質溶液の「ｒ」ｗｔ％の収率を示した。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液を乾燥して、「ｓ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。乾燥製品は、「ｔ」トリプシン阻害剤ユニット／ｍｇタンパク質（Ｎ×６．２５）のトリプシン阻害剤活性を有することが判明した。この生成物には、「ｕ」Ｓ７０１という名称を与えた。

３つの試験に関するパラメーター「ａ」〜「ｕ」は、以下の表６１に示している。

表６１に提示のデータから分かるように、大豆タンパク質源の熱処理が十分であるほど、最終的な単離物のトリプシン阻害剤活性が低い。

例３５：
この例は、本明細書において提供する新規の酸可溶性の大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１Ｈ）のトリプシン阻害剤活性に対する、大豆タンパク質源への亜硫酸ナトリウムの添加（ａｄｄｉｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）の効果を例示する。

「ａ」ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、２０分間、撹拌した。次いで、「ｃ」ｋｇの亜硫酸ナトリウムを添加し、混合物をさらに１０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｅ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｄ」Ｌを生成した。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｆ」倍容（複数可）（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の逆浸透（ＲＯ）精製水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを「ｇ」まで低下させた。次いで、希釈および酸性化した溶液に、９０℃で１分間、熱処理をした。

約「ｌ」℃の温度で操作しながら、「ｋ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｊ」膜での濃縮により、熱処理をし、希釈し、酸性化したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｈ」Ｌから「ｉ」Ｌまで減少させた。この時点で、タンパク質含量「ｍ」ｗｔ％を有する酸性化タンパク質溶液は、約「ｏ」℃で透析濾過操作を実施しながら、「ｎ」ＬのＲＯ水で透析濾過をした。次いで、透析濾過溶液を「ｐ」Ｌの体積および約「ｑ」重量％のタンパク質含量までさらに濃縮し、約「ｓ」℃で透析濾過操作を実施しながら、追加の「ｒ」ＬのＲＯ水で透析濾過をした。この２回目の透析濾過後、タンパク質溶液を約「ｔ」重量％のタンパク質含量まで濃縮し、次いで、水で「ｕ」重量％のタンパク質含量まで希釈して、噴霧乾燥を促進した。噴霧乾燥前のタンパク質溶液を、最初の濾過タンパク質溶液の「ｖ」ｗｔ％の収率で回収した。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液を乾燥して、「ｗ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。乾燥製品は、「ｘ」トリプシン阻害剤ユニット（ＴＩＵ）／ｍｇタンパク質（Ｎ×６．２５）のトリプシン阻害剤活性を有することが判明した。この生成物には、「ｙ」Ｓ７０１Ｈという名称を与えた。

２つの試験に関するパラメーター「ａ」〜「ｙ」は、以下の表６２に示している。

表６２の結果から分かるように、亜硫酸ナトリウムの添加を利用するプロセスの方が、低いトリプシン阻害剤活性を有する単離物を生じた。

例３６：
この例は、本明細書において提供する新規の酸可溶性の大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１Ｈ）のトリプシン阻害剤活性に対する、乾燥前の濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液への亜硫酸ナトリウム添加の効果を例示する。

「ａ」ｋｇの脱脂し最小限に加熱処理した大豆粉を、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌して、タンパク質水溶液を得た。残留する大豆ミールを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」Ｌを得た。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」倍容（複数可）（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の逆浸透（ＲＯ）精製水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを「ｆ」まで低下させた。次いで、希釈および酸性化した溶液を９０℃で１分間、熱処理をした。

約「ｋ」℃の温度で操作しながら、「ｊ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｉ」膜での濃縮により、熱処理をし、希釈し、酸性化したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｇ」Ｌから「ｈ」Ｌまで減少させた。この時点で、「ｌ」ｗｔ％のタンパク質含量を有する酸性化タンパク質溶液は、透析濾過操作を約「ｎ」℃で実施しながら、「ｍ」ＬのＲＯ水で透析濾過をした。次いで、透析濾過溶液を「ｏ」Ｌの体積および約「ｐ」重量％のタンパク質含量までさらに濃縮し、透析濾過操作を約「ｒ」℃で実施しながら、追加の「ｑ」ＬのＲＯ水で透析濾過をした。この２回目の透析濾過後、タンパク質溶液を約「ｓ」重量％のタンパク質含量まで濃縮し、次いで、水で「ｔ」重量％のタンパク質含量まで希釈して、噴霧乾燥を促進した。噴霧乾燥前のタンパク質溶液を、最初の濾過タンパク質溶液の「ｕ」ｗｔ％の収率で回収した。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過したタンパク質溶液を２つの部分に分割した。対照部分（２５．１ｋｇ）を乾燥して、「ｖ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量および「ｗ」トリプシン阻害剤ユニット（ＴＩＵ）／ｍｇタンパク質（Ｎ×６．２５）のトリプシン阻害剤活性を有することが判明した生成物を得た。この生成物には、「ｘ」Ｓ７０１Ｈ−０１という名称を与えた。酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液の他方の部分（２５．１ｋｇ）に、「ｙ」ｍｇの亜硫酸ナトリウムを添加した。次いで、この試料を乾燥して、「ｚ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量および「ａａ」トリプシン阻害剤ユニット（ＴＩＵ）／ｍｇタンパク質（Ｎ×６．２５）のトリプシン阻害剤活性を有することが判明した生成物を得た。この生成物には、「ｘ」Ｓ７０１Ｈ−０２という名称を与えた。

１つの試験に関するパラメーター「ａ」〜「ａａ」は、以下の表６３に示している。

表６３の結果から分かるように、乾燥前の酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液への亜硫酸ナトリウムの添加により、該単離物のトリプシン阻害剤活性が低減した。

例３７
この例は、本明細書において提供する新規の酸可溶性の大豆タンパク質単離物（Ｓ７０１）のトリプシン阻害剤活性に対する、膜処理のｐＨの効果を例示する。

「ａ」ｋｇの脱脂した白色の大豆フレークを、周囲温度で「ｂ」Ｌの０．１５ＭのＣａＣｌ_２溶液に添加し、３０分間、撹拌した。残留する大豆フレークを除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離および濾過により清澄化して、「ｄ」重量％のタンパク質含量を有する濾過タンパク質溶液「ｃ」Ｌを生成した。

次いで、濾過タンパク質溶液を「ｅ」倍容（複数可）（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の逆浸透（ＲＯ）精製水に添加し、希ＨＣｌで試料のｐＨを「ｆ」まで低下させた。希釈および酸性化した溶液は熱処理しなかった。

約「ｋ」℃の温度で操作しながら、「ｊ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ）を有する「ｉ」膜での濃縮により、希釈および酸性化したタンパク質抽出物溶液の体積を、「ｇ」Ｌから「ｈ」Ｌまで減少させた。この時点で、タンパク質含量「ｌ」ｗｔ％を有する酸性化タンパク質溶液は、約「ｏ」℃で透析濾過操作を実施しながら、「ｍ」Ｌの「ｎ」ＲＯ水で透析濾過をした。次いで、透析濾過溶液を「ｐ」Ｌの体積および約「ｑ」重量％のタンパク質含量までさらに濃縮し、約「ｔ」℃で透析濾過操作を実施しながら、追加の「ｒ」Ｌの「ｓ」ＲＯ水で透析濾過をした。タンパク質溶液を、最初の濾過タンパク質溶液の「ｕ」ｗｔ％の収率で回収した。次いで、酸性化し、濃縮し、透析濾過をしたタンパク質溶液は「ｖ」であり（‘ｖ’ ａｎｄ）、乾燥して、「ｗ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した生成物を得た。乾燥製品は、「ｘ」トリプシン阻害剤ユニット（ＴＩＵ）／ｍｇタンパク質（Ｎ×６．２５）のトリプシン阻害剤活性を有することが判明した。この生成物には、「ｙ」Ｓ７０１という名称を与えた。

２つの試験に関するパラメーター「ａ」〜「ｙ」は、以下の表６４に示している。

表６４の結果から分かるように、約ｐＨ２での膜処理を用いて調製した単離物は、約ｐ
Ｈ３での膜処理を用いて調製した単離物より低いトリプシン阻害剤活性を有していた。

本開示の概要
本開示を要約すると、本発明は、単離物の形態でもよく、完全に可溶性であり酸性ｐＨで透明な熱安定性溶液を形成し、タンパク質沈殿をもたらすことなくソフトドリンクおよびスポーツドリンクを含めた水系のタンパク質強化（ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）において有用である新規の大豆タンパク質製品を提供する。本発明の範囲内で変更が可能である。

Claims (54)

1. 少なくとも６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する大豆タンパク質製品であって、
   該大豆タンパク質製品は、４．４未満のｐＨの水性媒体において、１％タンパク質ｗ／ｖで実質的に完全に可溶であり、
   該大豆タンパク質製品は、さらに、下記の（ｂ）〜（ｆ）から任意に選択される少なくとも一つの特徴を具え：
   （ｂ）該大豆タンパク質製品は、ｐＨ７の水性媒体において、１％タンパク質ｗ／ｖで実質的に完全に可溶である；
   （ｃ）該大豆タンパク質製品は、ｐＨ２〜４の水において１％タンパク質ｗ／ｖで９５％を超える溶解度を有する；
   （ｄ）該大豆タンパク質製品は、ｐＨ２〜４の１％タンパク質ｗ／ｖの水溶液において、０．１５０未満の、６００ｎｍでの可視光線の吸光度（Ａ６００）を有する；
   （ｅ）該大豆タンパク質製品は、ｐＨ２〜４の１％タンパク質ｗ／ｖの水溶液において、１５％未満のヘイズ値を有する；または
   （ｆ）該大豆タンパク質製品は、９５℃で３０秒間の熱処理後の２％タンパク質ｗ／ｖ水溶液が、１５％未満のヘイズ値を有する、
   該大豆タンパク質製品は、フィチン酸を１．５ｗｔ％未満含有し、
   但し、前記水性媒体は、逆浸透精製水であることを特徴とする、大豆タンパク質製品。
2. 前記（ｄ）に記載する、６００ｎｍでの可視光線の吸光度（Ａ６００）が０．１００未満である、ことを特徴とする、請求項１に記載の大豆タンパク質製品。
3. 前記（ｄ）に記載する、６００ｎｍでの可視光線の吸光度（Ａ６００）が０．０５０未満であることを特徴とする、請求項２に記載の大豆タンパク質製品。
4. 前記（ｅ）に記載する、ヘイズ値が１０％未満であることを特徴とする、請求項１に記載の大豆タンパク質製品。
5. 前記（ｅ）に記載する、ヘイズ値が５％未満であることを特徴とする、請求項４に記載の大豆タンパク質製品。
6. 前記（ｆ）に記載する、ヘイズ値が１０％未満であることを特徴とする、請求項１に記載の大豆タンパク質製品。
7. 前記（ｆ）に記載する、ヘイズ値が５％未満であることを特徴とする、請求項６に記載の大豆タンパク質製品。
8. 前記大豆タンパク質製品は、少なくとも９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の大豆タンパク質製品。
9. 前記大豆タンパク質製品は、少なくとも１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の大豆タンパク質製品。
10. ２〜４のｐＨ値で熱安定性である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の大豆タンパク質製品の水溶液。
11. 前記水溶液は、
    大豆タンパク質製品がその中で完全に可溶および透明である透明な飲料であるか、又は
    その中に溶解した大豆タンパク質製品が不透明度を増大させない不透明な飲料であることを特徴とする、請求項１０に記載の水溶液。
12. 請求項１に記載の大豆タンパク質製品を調製する方法であって、
    該調製方法は、下記のステップ（ａ）〜（ｃ）を含み、
    （ａ）カルシウム塩水溶液を使用して、大豆タンパク質源を抽出するステップ、
    （ｂ）残留する大豆タンパク質源から大豆タンパク質水溶液を分離するステップ、
    （ｃ）前記大豆タンパク質水溶液のｐＨを、ｐＨ１．５〜４．４に調整して、透明な酸
    性化大豆タンパク質水溶液を生成するステップ、
    該調製方法は、さらに、
    前記透明な酸性化大豆タンパク質水溶液を、そのイオン強度を実質的に一定に維持しな
    がら、濃縮して、５０〜３００ｇ／Ｌのタンパク質濃度の濃縮した透明な酸性化大豆タン
    パク質水溶液を調製するステップを含み；
    前記濃縮ステップは、１０，０００〜１０００，０００ダルトンの分画分子量を有する
    膜を使用して実施され；
    前記濃縮した透明な酸性化大豆タンパク質水溶液を乾燥させて、前記大豆タンパク質製
    品を得ることを特徴とする、大豆タンパク質製品の調製方法。
13. 前記ステップ（ａ）のカルシウム塩水溶液は酸化防止剤を含むことを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
14. 前記ステップ（ａ）のカルシウム塩水溶液は、塩化カルシウム水溶液であり、
    使用される塩化カルシウムは、食品グレードの塩化カルシウムであることを特徴とする、請求項１２または１３に記載の方法。
15. 前記ステップ（ａ）のカルシウム塩水溶液は０．１０〜０．１５Ｍの濃度を有する塩化カルシウム水溶液であることを特徴とする、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記大豆タンパク質水溶液を吸着剤で処理して、大豆タンパク質水溶液から色および／または臭気化合物を除去するステップをさらに有することを特徴とする、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記大豆タンパク質水溶液を、７０ｍＳ未満の伝導率まで希釈するステップをさらに有することを特徴とする、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記ステップ（ｃ）では、前記大豆タンパク質水溶液のｐＨを、ｐＨ２〜４に調整することを特徴とする、請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の方法。
19. １００〜２００ｇ／Ｌのタンパク質濃度を有する濃縮した透明な酸性化大豆タンパク質溶液を生成することを特徴とする、請求項１２〜１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 濃縮した透明な酸性化大豆タンパク質溶液を、吸着剤により処理して、色及び／又は臭気化合物を除去するステップをさらに有することを特徴とする、請求項１２〜１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 濃縮した透明な酸性化大豆タンパク質溶液を透析濾過するステップをさらに有することを特徴とする、請求項１２〜２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 濃縮及び透析濾過をした透明な酸性化大豆タンパク質溶液を、吸着剤により処理して、色及び／又は臭気化合物を除去するステップをさらに有することを特徴とする、請求項２１に記載の方法。
23. 濃縮及び透析濾過をした透明な酸性化大豆タンパク質溶液を、低温殺菌するステップをさらに有することを特徴とする、請求項２１又は２２に記載の方法。
24. ５５〜７０℃の温度で３０秒間〜６０分間、前記低温殺菌を行うことを特徴とする、請求項２３に記載の方法。
25. ５５〜７０℃の温度で１０〜１５分間、前記低温殺菌を行うことを特徴とする、請求項２３に記載の方法。
26. 濃縮し、透析濾過をした大豆タンパク質溶液を、乾燥して、少なくとも６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．の、タンパク質含量を有する大豆タンパク質製品を生成するステップをさらに有することを特徴とする、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
27. 濃縮し、透析濾過をした透明な酸性化大豆タンパク質溶液を、乾燥して、少なくとも９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．の、タンパク質含量を有する大豆タンパク質製品を生成するステップをさらに有することを特徴とする、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
28. 濃縮し、透析濾過をした透明な酸性化大豆タンパク質溶液を、乾燥して、少なくとも１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．の、タンパク質含量を有する大豆タンパク質製品を生成するステップをさらに有することを特徴とする、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
29. 前記抽出ステップが１５〜３５℃の温度で実施されることを特徴とする、請求項１２〜２８のいずれか一項に記載の方法。
30. 前記カルシウム塩水溶液がｐＨ５〜７を有することを特徴とする、請求項２９に記載の方法。
31. 前記希釈ステップを、２〜７０℃の温度を有する１〜１０倍容の水を用いて実施して、前記大豆タンパク質水溶液の４〜１８ｍＳの伝導率をもたらすことを特徴とする、請求項１６に記載の方法。
32. 前記水は、１０〜５０℃の温度を有することを特徴とする、請求項３１に記載の方法。
33. 前記水は、２０〜３０℃の温度を有することを特徴とする、請求項３２に記載の方法。
34. 前記透明な酸性化大豆タンパク質溶液は７０ｍＳ未満の伝導率を有することを特徴とする、請求項１２〜３３のいずれか一項に記載の方法。
35. 前記伝導率は４〜２３ｍＳであることを特徴とする、請求項３４に記載の方法。
36. 前記透明な酸性化大豆タンパク質水溶液に熱処理ステップを施して、熱不安定性の抗栄養因子を不活性化し、及び／又は 熱処理ステップでは、透明な酸性化大豆タンパク質水溶液の低温殺菌も行うことを特徴とする、請求項１２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
37. 熱不安定性の抗栄養因子は熱不安定性のトリプシン阻害剤であることを特徴とする、請求項３６に記載の方法。
38. 前記熱処理は、７０〜１００℃の温度で１０秒間〜６０分間、実施されることを特徴とする、請求項３６または３７に記載の方法。
39. 前記熱処理は、８５〜９５℃の温度で２０秒間〜５分間、実施されることを特徴とする、請求項３６または３７に記載の方法。
40. 前記熱処理をした透明な酸性化大豆タンパク質単離物がさらなる処理のために２〜６０℃の温度まで冷却されることを特徴とする、請求項３６〜３９のいずれか一項に記載の方法。
41. 前記熱処理をした透明な酸性化大豆タンパク質単離物がさらなる処理のために２０〜３５℃の温度まで冷却されることを特徴とする、請求項３６〜３９のいずれか一項に記載の方法。
42. 透明な酸性化大豆タンパク質溶液に対して、その部分的または完全な濃縮の前または後に、水または酸性化した水を使用して前記透析濾過ステップが実施されることを特徴とする、請求項２１に記載の方法。
43. 酸化防止剤の存在下で、前記透析濾過ステップが実施されることを特徴とする、請求項４２に記載の方法。
44. ２〜４０倍容の透析濾過溶液を使用して、前記透析濾過ステップが実施されることを特徴とする、請求項４２または４３に記載の方法。
45. ５〜２５倍容の透析濾過溶液を使用して、前記透析濾過ステップが実施されることを特徴とする、請求項４２または４３に記載の方法。
46. さらなる量の汚染物質および可視色が透過液中に存在しなくなるまで、前記透析濾過ステップが実施されることを特徴とする、請求項４２〜４５のいずれか一項に記載の方法。
47. 乾燥すると、少なくとも９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する大豆タンパク質単離物が生成するように保持液を十分に精製するまで、前記透析濾過ステップが実施されることを特徴とする、請求項４２〜４６のいずれか一項に記載の方法。
48. 前記濃縮ステップ及び／又は前記透析濾過ステップが、１０，０００〜１，０００，０００ダルトンの分画分子量を有する膜を使用して実施されることを特徴とする、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
49. 前記濃縮ステップ及び／又は前記透析濾過ステップが、１０，０００〜１００，０００ダルトンの分画分子量を有する膜を使用して実施されることを特徴とする、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
50. 前記濃縮ステップ及び／又は前記透析濾過ステップが、２〜６０℃の温度で実施されることを特徴とする、請求項１９〜２１、４８および４９のいずれか一項に記載の方法。
51. 前記濃縮ステップ及び／又は前記透析濾過ステップが、２０〜３５℃の温度で実施されることを特徴とする、請求項１９〜２１、４８および４９のいずれか一項に記載の方法。
52. イオン強度を実質的に一定に維持しながら、濃縮して、濃縮した透明な酸性化大豆タンパク質溶液を調製し、次いで、該濃縮した透明な酸性化大豆タンパク質溶液を、透析濾過して、乾燥すると少なくとも６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質濃度を有する大豆タンパク質製品を生成する、濃縮および透析濾過をした透明な酸性化大豆タンパク質溶液を生成することを特徴とする、請求項１９〜５１のいずれか一項に記載の方法。
53. 前記濃縮ステップが、トリプシン阻害剤の除去に好都合な様式で操作されることを特徴とする、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
54. （ａ）抽出ステップの間、及び／又は、
    （ｂ）濃縮ステップの間、及び／又は、
    （ｃ）乾燥ステップの前に、濃縮した透明な酸性化大豆タンパク質溶液中に、
    還元剤が存在することにより、トリプシン阻害剤のジスルフィド結合を破壊または再配
    置して、トリプシン阻害剤活性の低減を実現することを特徴とする、請求項１２〜５３のいずれか一項に記載の方法