CN102256496B - 从大豆(″s701″)制备可溶性蛋白溶液 - Google Patents

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Abstract

可为分离物的大豆蛋白产品在低pH值下制备透明的热稳定溶液并有用于软饮料和运动饮料的强化，而无蛋白沉淀。通过以下方式获得所述大豆蛋白产品：用钙盐水溶液提取大豆蛋白源物质，以形成大豆蛋白水溶液，将大豆蛋白水溶液与残余的大豆蛋白源分离，将大豆蛋白水溶液的pH调节为约1.5至约4.4的pH，以制备经酸化的澄清大豆蛋白溶液，可在任选的浓缩和渗滤之后将该溶液干燥，得到大豆蛋白产品。

Description

从大豆(″S701″)制备可溶性蛋白溶液
相关申请参考
本申请根据35USC 119(e)对以下美国专利申请要求优先权：2008年10月21日提交的61/107,112；2008年12月2日提交的61/193,457；2009年1月26日提交的61/202,070；2009年3月12日提交的61/202,553；2009年7月7日提交的61/213,717和2009年9月3日提交的61/272,241。
发明领域
本发明涉及从大豆制备蛋白溶液以及涉及新颖的大豆蛋白产品。
发明背景
高度可溶并在低pH下产生透明溶液的蛋白分离物(protein isolate)在食品工业中十分有价值，其用于各种产品，特别是饮料(例如软饮料和运动饮料(sports drink))中。以上性质与热稳定性组合会进一步增加所述分离物的价值。用于食品用途的蛋白可源自植物或动物来源，但植物蛋白通常较为廉价。大豆是非常普通的用于食品用途的植物蛋白来源。大豆蛋白因它们优异的营养性质和健康益处而得到认可。
常规通过等电沉淀方法形成大豆分离蛋白(soy protein isolates)，在所述等电沉淀方法中，通过在碱性条件下的初始提取对来自从大豆分离豆油的豆粕(meal)进行加工，然后将碱性提取物酸化至大豆蛋白的等电点，得到蛋白沉淀物。可将沉淀的大豆蛋白洗涤和/或中和，然后干燥，得到大豆分离蛋白。以干重基准(dry weight basis)(d.b.)计，大豆分离蛋白具有至少约90wt％(Nx6.25)的蛋白含量。
据我们所知，尽管可得到一系列具有各种功能性质的大豆蛋白产品，但不存在在低pH条件下产生透明且热稳定的溶液的可溶性大豆分离蛋白产品。
发明概述
现已发现，有可能提供具有至少约60wt％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量的大豆蛋白产品，其在低pH值下产生透明的热稳定溶液，因此其可用于特别是软饮料和运动饮料以及其它含水系统的蛋白强化，而不发生蛋白沉淀。
本文提供的新颖大豆蛋白产品具有在其它大豆蛋白产品中没有发现的独特的参数组合。该产品在小于约4.4的酸性pH值下是完全可溶的，并在该pH范围内是热稳定的，从而允许热加工，例如热填充(hot fill)应用。考虑到该产品的完全可溶性，不必需稳定剂或其它添加剂来将所述蛋白保持在溶液或悬浮液中。已将该大豆分离蛋白描述为不具有″豆腥″味(“beany”flavour)和不良气味(off odours)。该产品的肌醇六磷酸含量低，通常小于约1.5wt％。在大豆分离蛋白的制备中不需要酶。该大豆蛋白产品优选为具有小于约90wt％，优选至少约100wt％(Nx6.25)的蛋白含量的分离物。
根据本发明的一个方面，提供制备大豆蛋白产品的方法，以干重基准计，所述大豆蛋白产品具有至少约60wt％(Nx6.25)的大豆蛋白含量，所述方法包括：
(a)用氯化钙水溶液提取大豆蛋白源，以导致来自蛋白源的大豆蛋白溶解，并形成大豆蛋白水溶液，
(b)从残留的大豆蛋白源分离所述大豆蛋白水溶液，
(c)任选稀释所述大豆蛋白水溶液，
(d)将所述大豆蛋白水溶液的pH调节为约1.5至约4.4，优选约2至约4的pH，以制备经酸化的澄清(clear)大豆蛋白溶液，
(e)通过使用选择性膜技术任选将所述澄清大豆蛋白水溶液浓缩，同时保持离子强度基本恒定，
(f)任选将经浓缩的大豆蛋白溶液渗滤，和
(g)任选将经浓缩的大豆蛋白溶液干燥。
大豆蛋白产品优选为分离物，其具有至少约90wt％，优选至少约100wt％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。
本发明还提供新颖的大豆分离蛋白，其为水溶性的，在小于约4.4的酸性pH值下形成热稳定的透明溶液，并且有用于含水系统(包括软饮料和运动饮料)的蛋白强化，而不导致蛋白沉淀。所述大豆分离蛋白的肌醇六磷酸含量也是低的，通常小于约1.5重量％。所述产品中的大豆蛋白未被水解。
因此，本发明另一个方面提供大豆分离蛋白，其具有至少约90wt％(Nx6.25)d.b.，优选至少约100wt％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量，其在小于约4.4(优选约1.5至约4.4)的pH下基本完全可溶解在含水介质中。
本文提供的大豆分离蛋白可作为其水溶液提供，所述水溶液在酸性pH值(通常为小于约4.4，优选约1.5至约4.4)下具有高澄清度(clarity)，并且其在这些pH值下是热稳定的。
可将本发明的新颖大豆分离蛋白与粉末状饮料共混，用于通过将它们溶解在水中来配制含水饮料或运动饮料。此类共混物可为粉末状饮料。
尽管本发明主要涉及大豆分离蛋白的制备，但预期可提供具有与所述大豆分离蛋白具有相似性质的较低纯度的大豆蛋白产品。此类较低纯度的产品可具有至少约60wt％(Nx6.25)d.b.的蛋白浓度。
本发明另一个方面中提供本文所提供的大豆产品的水溶液，其在小于约4.4的pH下是热稳定的。所述水溶液可为饮料，其可为其中所述大豆蛋白产品为完全可溶且透明的澄清饮料，或其中大豆蛋白产品不增加不透明度的不透明饮料。
本发明还提供大豆蛋白产品，其具有至少约60wt％(Nx6.25)d.b.(优选至少约90wt％，更优选至少约100wt％)的蛋白含量，其在约7的pH下基本为完全可溶的。此类大豆蛋白产品可作为其水溶液(例如饮料)提供。
本发明另一个方面中提供大豆蛋白产品，其具有至少约60wt％(Nx6.25)d.b.(优选至少约90wt％，更优选至少约100wt％)的蛋白含量，如通过下面实施例14中描述的方法所测定，其在约2至约4的pH下，在含1％(w/v)蛋白的水中具有大于约95％的溶解度。
此外，本发明提供大豆蛋白产品，其具有至少约60wt％(Nx6.25)d.b.(优选至少约90wt％，更优选至少约100wt％)的蛋白含量，如通过下面实施例15中描述的方法所测定，其在约2至约4的pH下，在1％(w/v)蛋白水溶液中，对600nm处的可见光的吸光度(A600)为小于约0.150，优选小于约0.100，更优选小于0.050。
根据本发明的另一个实施方案，提供大豆蛋白产品，其具有至少约60wt％(Nx6.25)d.b.(优选至少约90wt％，更优选至少约100wt％)的蛋白含量，如通过下面的实施例15中描述的方法所测定，在约2至约4的pH下，其对于1％(w/v)蛋白水溶液具有小于约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％的浑浊度读数(haze reading)。
根据本发明的又一个实施方案，提供大豆分离蛋白，其具有至少约60wt％(Nx6.25)d.b.(优选至少约90wt％，更优选至少约100wt％)的蛋白含量，如通过下面实施例16中描述的方法所测定，在95℃下热处理30秒后，其对于2％(w/v)蛋白水溶液具有小于15％，优选小于约10％，更优选小于5％的浑浊度读数。
根据本文方法制备的大豆分离蛋白缺少大豆分离蛋白特有的豆腥味并且不仅适用于酸性介质的蛋白强化，而且可用于蛋白分离物的各种各样的常规应用中，所述常规应用包括但不限于加工食品和饮料的蛋白强化、油类的乳化、在烘焙制品中作为成形剂(body former)和在俘获气体的产品中作为发泡剂。此外，可使所述大豆分离蛋白形成蛋白纤维，有用于人造肉中并可在其中蛋清(egg white)用作粘合剂的食品中用作蛋清替代品或增补剂。所述大豆分离蛋白也可用于营养补充剂中。大豆分离蛋白的其它用途为用于宠物食品、动物饲料中和用于工业应用和化妆品应用中，以及用于个人护理产品中。
发明的一般描述
提供大豆分离蛋白的方法的初始步骤涉及从大豆蛋白源中溶解大豆蛋白。所述大豆蛋白源可为大豆或任意大豆产品或源自大豆加工的副产品，包括但不限于豆粕、豆片(soy flake)、碎大豆(soy grit)和豆粉(soy flour)。大豆蛋白源可按全脂形式、部分脱脂形式或全脱脂形式使用。当所述大豆蛋白源含有相当大量的脂肪时，在加工期间通常需要除油步骤。从大豆蛋白源回收的大豆蛋白可为大豆中天然存在的蛋白，或者所述蛋白质物质(proteinaceous material)可为通过基因操作改性的但具有天然蛋白特有的疏水性和极性性质的蛋白。
最合宜(conveniently)使用氯化钙溶液来实施(effect)从大豆蛋白来源物质中溶解蛋白质，但可使用其它钙盐的溶液。此外，可使用其它碱土金属化合物，例如镁盐。另外，从可通过使用与另一种盐溶液(例如氯化钠)组合的钙盐溶液来实施大豆蛋白源提取大豆蛋白。此外，可通过以下方式来实施从大豆蛋白源提取大豆蛋白：使用水或其它盐溶液(例如氯化钠)，随后将钙盐加入到在提取步骤制备的大豆蛋白水溶液中。在随后的加工之前，将一经加入钙盐即形成的沉淀物除去。
随着钙盐溶液的浓度增加，蛋白从大豆蛋白源的溶解程度开始增加直到达到最大值。盐浓度的任意随后增加不增加所溶解的总蛋白。导致最大蛋白溶解的钙盐溶液的浓度根据有关的盐而变化。通常优选利用小于约1.0M的浓度值，更优选约0.10至约0.15M的值。
在分批方法中，在约1℃至约100℃(优选约15℃至约35℃)的温度下实施所述蛋白的盐溶解，优选通过搅拌以减少溶解时间来完成，所述溶解时间通常为约1至约60分钟。优选是实施溶解，以尽可能多地从大豆蛋白源中大量提取蛋白，从而得到总的高产品收率。
在连续方法中，以与从大豆蛋白源实施连续提取大豆蛋白一致的任意方式进行从大豆蛋白源提取大豆蛋白。在一个实施方案中，将大豆蛋白源与钙盐溶液连续混合，将混合物以一定流速传送通过具有一定长度的管子或管道，持续一段停留时间，所述停留时间足以根据本文描述的参数实施所需的提取。在此类连续程序中，在至多约10分钟的时间内快速实施盐溶解步骤，优选实施溶解，以尽可能多地从大豆蛋白源中大量提取蛋白。所述连续程序中的溶解在约1℃至约100℃(优选约15℃至约35℃)的温度下实施。
通常在约5至约11(约5至约7)的pH下进行所述提取。可根据需要通过使用任意合宜的食品级酸(通常为盐酸或磷酸)或食品级碱(通常为氢氧化钠)将用于提取步骤中的提取系统(大豆蛋白源和钙盐溶液)的pH调节至任意所需的值(约5至约11的范围内)。
在溶解步骤期间，大豆蛋白源在钙盐溶液中的浓度可宽泛变化。典型的浓度值为约5至约15％w/v。
使用盐的水溶液的蛋白提取步骤具有溶解可能存在于大豆蛋白源中的脂肪的额外效果，其然后导致所述脂肪存在于水相中。
来自提取步骤的蛋白溶液通常具有约5至约50g/L，优选约10至约50g/L的蛋白浓度。
所述钙盐水溶液可含有抗氧化剂。所述抗氧化剂可为任意合宜的抗氧化剂，例如亚硫酸钠或抗坏血酸。所采用的抗氧化剂的量可从所述溶液的约0.01wt％变化至约1wt％，优选约0.05wt％。所述抗氧化剂用于抑制蛋白溶液中任意酚类化合物(phenolics)的氧化。
然后可按任意合宜的方式(例如通过采用沉降式离心机，然后通过盘式离心和/或过滤)将残余的大豆蛋白源与得自提取步骤的水相分离，以除去残余的大豆蛋白源物质。可将经分离的残余大豆蛋白源干燥用于进行处置。或者，可对经分离的残余大豆蛋白源进行加工以除去一些残余的蛋白，例如通过常规的等电沉淀程序或任意其它合宜的程序，以回收此类残余的蛋白。
当所述大豆蛋白源含有显著量的脂肪时，如美国专利No.5,844,086和6,005,076中所描述(所述专利转让至本文的受让人，并通过引用将它们的公开内容并入本文)，则可对经分离的蛋白水溶液实施所述专利中描述的脱脂步骤。或者，可通过任意其它合宜的程序来实现经分离的蛋白水溶液的脱脂。
可用吸附剂(例如粉末状活性炭或颗粒状活性炭)处理大豆蛋白水溶液，以除去有颜色和/或有臭味(colour and/or odour)的化合物。可在任意合宜的条件下(通常在所述经分离的蛋白水溶液的环境温度下)进行此类吸附剂处理。对于粉末状活性炭，所使用的量为约0.025％至约5％w/v，优选约0.05％至约2％w/v。可通过任意合宜的手段(例如通过过滤)将吸附剂从大豆溶液中除去。
通常可用约1至约10体积(优选约1至约2体积)水稀释所得大豆蛋白水溶液，以便将大豆蛋白水溶液的电导率降低至通常低于约70mS(优选约4至约18mS)的值。
与大豆蛋白溶液混合的水可具有约2℃至约70℃的温度，优选约10℃至约50℃，更优选约20℃至约30℃。
然后通过加入任意合适的食品级酸(例如盐酸或磷酸)将经稀释的大豆蛋白溶液的pH调节至约1.5至约4.4(优选约3)的值，以得到澄清的大豆蛋白水溶液。
经稀释及酸化的大豆蛋白水溶液具有通常低于约75MS(优选约4至约23MS)的电导率。
经酸化的澄清大豆蛋白水溶液可经受热处理，以使热不稳定的抗营养因子(例如胰蛋白酶抑制剂)失活，所述热不稳定的抗营养因子由于在提取步骤期间从大豆蛋白源物质提取而存在于此类溶液中。此类加热步骤也提供降低微生物负荷(microbial load)的额外益处。通常，将蛋白溶液加热至约70℃至约100℃(优选约85℃至约95℃)的温度，保持约10秒至约60分钟，优选约30秒至约5分钟。然后可将经热处理的酸化的大豆蛋白溶液冷却至约2℃至约60℃(优选约20℃至约35℃)的温度，用于如下所述的进一步加工。
可将所得的经酸化的澄清大豆蛋白水溶液直接干燥，以制备大豆蛋白产品。为了提供具有减少的杂质含量和降低的盐含量的大豆分离蛋白，可在干燥之前对经酸化的澄清大豆蛋白水溶液进行加工。
可浓缩经酸化的澄清大豆蛋白水溶液，以增加其蛋白浓度，同时保持其离子强度基本恒定。通常实施此类浓缩以提供具有约50至约300g/L，优选约100至约200g/L的蛋白浓度的经浓缩的大豆蛋白溶液。
可按任意合宜的与分批或连续操作一致的方式实施所述浓缩步骤，例如通过采用任意合宜的选择性膜技术，例如使用膜(例如具有合适截留分子量(例如约3,000至约1,000,000道尔顿，优选约5,000至约100,000道尔顿)的中空纤维膜或螺旋膜(spiral-wound membranes)的超滤或渗滤(根据不同的膜材料和构造)，以及对于连续操作，设计尺寸(dimensioned)，以在所述蛋白水溶液通过所述膜时允许所需程度的浓缩。
如众所周知的，超滤和类似的选择性膜技术允许低分子量种类(species)通过，而防止较高分子量的种类通过。所述低分子量种类不仅包括食品级盐的离子种类，而且包括从来源物质提取的低分子量物质，例如碳水化合物、色素、低分子量的蛋白和抗营养因子(例如胰蛋白酶抑制剂，其本身为低分子量蛋白)。根据不同的膜材料和构造，通常对所述膜的截留分子量进行选择，以确保显著比例的蛋白保留在溶液中，同时允许污染物通过。
然后可使经浓缩的大豆蛋白溶液经受使用水的渗滤步骤。所述水可处于其天然pH下或处于等于被渗滤的蛋白溶液的pH的pH下，或处于其间的任意pH值下。可使用约2至约40体积的渗滤溶液(优选约5至约25体积的渗滤溶液)来实施此类渗滤。在渗滤操作中，通过使渗透物通过所述膜而从所述澄清的大豆蛋白水溶液中除去另外量的污染物。这纯化了所述澄清的蛋白水溶液并且也可降低其粘度。可实施渗滤操作直到渗透物中不存在另外显著量的污染物或可见颜色，或者直到保留物已经被充分纯化，以致当干燥时提供蛋白含量为至少约90wt％(Nx6.25)d.b.的大豆分离蛋白。可使用与用于浓缩步骤的膜相同的膜实施此类渗滤。然而，需要时，可使用具有不同截留分子量(molecularweight cut-off)的单独的膜实施所述渗滤步骤，所述膜例如为根据不同的膜材料和构造，具有约3,000至约1,000,000道尔顿，优选约5,000至约100,000道尔顿范围内的截留分子量的膜。
或者，可在浓缩之前将所述渗滤步骤施用于澄清的经酸化的蛋白水溶液，或者施用于经部分浓缩的澄清的经酸化的蛋白水溶液。也可在浓缩过程中的多个点施用渗滤。当在浓缩之前施用渗滤时，或者对部分浓缩的溶液施用渗滤时，可然后将所得的经渗滤的溶液完全浓缩。当所述蛋白溶液被浓缩时，通过多次渗滤实现的粘度的降低可允许实现较高的最终完全浓缩的蛋白浓缩物。这减小了待干燥物质的体积。
可按随后回收的大豆蛋白产品含有小于约90wt％蛋白(Nx6.25)d.b(例如至少约60wt％蛋白(Nx6.25)d.b)的方式来实施本文中的浓缩步骤和渗滤步骤。通过将澄清的大豆蛋白水溶液部分浓缩和/或部分渗滤，有可能仅部分除去污染物。然后可将该蛋白溶液干燥，以得到具有较低水平纯度的大豆蛋白产品。在酸性条件下，所述大豆蛋白产品仍然能够产生澄清的蛋白溶液。
在至少一部分渗滤步骤期间，在渗滤介质中可存在抗氧化剂。所述抗氧化剂可为任意合宜的抗氧化剂，例如亚硫酸钠或抗坏血酸。在所述渗滤介质中采用的抗氧化剂的量取决于所采用的物质，并且可从约0.01wt％变化至约1wt％，优选为约0.05wt％。所述抗氧化剂用于抑制在经浓缩的大豆分离蛋白溶液中存在的任意酚类化合物的氧化。
可在任意合宜的温度(通常在约2℃至约60℃，优选约20℃至约35℃)下实施浓缩步骤和任选的渗滤步骤，并且持续一段时间，以实施所需程度的浓缩。使用的温度和其它条件在一定程度上取决于用于实施膜加工的膜设备、溶液的所需蛋白浓度和除去渗透物的污染物的功效。
大豆中存在两种主要的胰蛋白酶抑制剂，即，Kunitz抑制剂和Bowman-Birk抑制剂，Kunitz抑制剂为热不稳定分子，其分子量约为21,000道尔顿，Bowman-Birk抑制剂为较为热稳定的分子，分子量为约8,000道尔顿。可通过操纵各种工艺变量来控制最终大豆分离蛋白中的胰蛋白酶抑制剂活性水平。
如上所指出，对澄清的酸化大豆蛋白水溶液的热处理可用来使热不稳定的胰蛋白酶抑制剂失活。也可将经部分浓缩或完全浓缩的酸化大豆蛋白溶液热处理，以使热不稳定的胰蛋白酶抑制剂失活。
此外，可按有利于除去渗透物(permeate)中的胰蛋白酶抑制剂连同其它污染物的方式操作浓缩和/或渗滤步骤。可通过以下方式促进胰蛋白酶抑制剂的去除：使用较大孔径(例如30,000-1,000,000Da)的膜、在高温(例如30-60℃)下操作膜并采用较大体积(例如20至40体积)渗滤介质。
相对于在较高pH(3-4.4)下加工经稀释的蛋白溶液，在较低pH(1.5-3)下酸化和膜加工该溶液可降低胰蛋白酶抑制剂活性。当在所述pH范围的低限下对蛋白溶液进行浓缩和渗滤时，可能需要在干燥前提高保留物(retentate)的pH。可通过加入任意合宜的食品级碱(例如氢氧化钠)将经浓缩和渗滤的蛋白溶液的pH提高至所需的值，例如pH 3。
此外，可通过将大豆物质暴露于还原剂来实现胰蛋白酶抑制剂活性的降低，所述还原剂破坏所述抑制剂的二硫键或使该二硫键重排。合适的还原剂包括亚硫酸钠、半胱氨酸和N-乙酰半胱氨酸。
可在整个加工的不同阶段实施加入此类还原剂。可在提取步骤中将还原剂与大豆蛋白源物质一起加入、可在除去残余的大豆蛋白源物质后将还原剂加入到澄清的大豆蛋白水溶液中、可在干燥前将还原剂加入到经渗滤的保留物中或者可将还原剂与经干燥的大豆蛋白产品干燥共混。还原剂的加入可与如上所述的热处理步骤组合。
如果需要在经浓缩的蛋白溶液中保留活性胰蛋白酶抑制剂，这可通过以下方式来实现：消除或降低热处理步骤的强度、不使用还原剂、在所述pH范围(3-4.4)的高限下操作浓缩和渗滤步骤、使用具有较小孔径的浓缩和渗滤膜、在较低温度下操作所述膜和采用较少体积的渗滤介质。
如果需要，可使经浓缩和任选渗滤的蛋白溶液经受进一步的脱脂操作，如美国专利No.5,844,086和6,005,076中所述。或者，可通过任意其它合宜的程序实现对经浓缩和任选渗滤的蛋白溶液的脱脂。
可用吸附剂(例如粉末状活性炭粉末或颗粒状活性炭)处理经浓缩和任选渗滤的澄清蛋白水溶液，以除去有颜色和/或有臭味的化合物。可在任意合宜的条件下(通常在所述经浓缩的蛋白溶液的环境温度下)进行此类吸附剂处理。对于粉末状活性炭，所使用的量为约0.025％至约5％w/v，优选约0.05％至约2％w/v。可通过任意合宜的手段(例如通过过滤)将吸附剂从大豆溶液中除去。
可通过任意合宜的技术(例如喷雾干燥或冷冻干燥)将经浓缩和任选渗滤的澄清大豆蛋白水溶液干燥。可在干燥前对大豆蛋白溶液实施巴氏消毒步骤。可在任意所需的巴氏消毒条件下实施所述巴氏消毒。通常，将经浓缩和任选渗滤的大豆蛋白溶液加热至约55℃至约70℃(优选约60℃至约65℃)的温度，保持约30秒至约60分钟，优选约10分钟至约15分钟。然后可将经巴氏消毒的浓缩的大豆蛋白溶液冷却用于干燥，优选冷却至约25℃至约40℃的温度。
所述干燥大豆分离蛋白具有高蛋白含量，超过约90wt％蛋白，优选至少约100wt％，(Nx6.25)d.b.。
本文中制备的大豆分离蛋白可溶解在酸性含水环境中，使所述分离物理想用于并入饮料中(碳酸饮料和非碳酸饮料两者)，以向其提供蛋白强化。此类饮料具有宽范围的酸性pH值(约2.5至约5)。可按任意合宜的量将本文提供的大豆分离蛋白加入到此类饮料中，以向此类饮料提供蛋白强化，例如每份至少约5g大豆分离蛋白。加入的大豆分离蛋白溶解在所述饮料中，并且不损坏所述饮料的澄清度(clarity)，即使在热加工之后也如此。所述大豆分离蛋白可与经干燥的饮料共混，然后通过溶解在水中将所述饮料复原(reconstitution)。在一些情况下，当饮料中存在的组分可能不利地影响本发明组合物保持溶解在所述饮料中的能力时，可能必需对所述饮料的常规配方进行修改，以使其耐受本发明的组合物。
实施例
进行一系列测试实验(实施例1至3)来确定暴露于钙是否可用于产生可溶性大豆蛋白，所述可溶性大豆蛋白在低pH下产生透明、热稳定溶液。
实施例1
将干燥大豆(30g)与水、0.01M CaCl2或0.15M NaCl(300ml)在厨房用混合机中混合并高速加工5分钟。然后将样品以7,100g离心10分钟，从而将提取物与脂肪和残余固体分离。用水和氯化钙溶液制备的样品分离较差，因此将其以10,200g再次离心10分钟。测量提取物的pH，然后用0.45μm孔径的针筒式过滤器过滤等分试样，使用Leco FP528氮测定仪测定蛋白含量。将经过滤的提取物(NaCl和CaCl2测试)的澄清度测量为600nm处的吸光度(A600)，然后用稀HCl将一部分样品酸化至pH为3，再次测量A600。将澄清提取物(所有测试)的等分试样也在1∶10室温水中稀释，测量A600和pH，然后用稀HCl将样品酸化至pH为3，再次测量A600。用25μm孔径的滤纸过滤NaCl提取物的另一等分试样。测量该样品的电导率，然后通过加入氯化钙升至19mS。将该样品进行针筒式过滤(syringe filtered)(0.45μm)，然后针对未经稀释的样品和用室温水以1∶10稀释的样品来评价调节至pH 3对样品澄清度的影响。
当将三种提取样品以7,100g离心10分钟时，仅氯化钠提取样品分离良好。对于水和氯化钙样品，脂肪仍高度分散在水层中。以10,200g再次离心10分钟没有很大促进分离。也许该差的分离为水相密度的结果，因为氯化钠样品比氯化钙样品具有多得多的溶解的盐。通过用0.45μm孔径过滤器进行针筒式过滤可使离心后的提取物进一步澄清。水提取物快速堵塞过滤器，并且氯化钙提取物没有显得完全澄清。
惊人地，发现水比所使用的盐溶液提取更多的蛋白(下表1)。向氯化钠提取物中加入氯化钙，这使电导率从16.70mS升高至19.99mS，观察到氯化钙的加入引入沉淀物，并且必定随着任意其它被移除的种类(species)而损失蛋白。
表1-各种澄清的提取物样品的蛋白含量
尽管不澄清，但在钙的存在下，经酸化的未稀释的提取物样品比经酸化的氯化钠提取物更澄清，所述经酸化的氯化钠提取物非常浑浊(cloudy)(下表2)。
表2-各种先后经澄清和酸化的提取物样品的澄清度
对于暴露于氯化钙的样品，特别是在提取中使用氯化钙的样品，酸化前用水稀释提取物样品导致优异的澄清度(下表3)。经稀释的氯化钠和水提取物的酸化导致浑浊样品。令人感兴趣地，稀释后和酸化前，在氯化钠+氯化钙样品和水样品中观察到显著的沉淀，但如所提到的那样，酸化后仅含有钙的样品是澄清的。
表3-各种先后经稀释(1∶10)和酸化的提取物样品的澄清度
实施例2
将干燥大豆(30g)与0.05M CaCl2、0.10M CaCl2或0.15M CaCl2(300ml)在厨房用共混机中混合并高速加工5分钟。然后将样品以7,100g离心10分钟，以使提取物与脂肪和残余固体分离。用0.45μm孔径的针筒式过滤器过滤提取物，通过Leco分析来测定蛋白含量，并通过A600测量样品的澄清度。然后用稀HCl将澄清的提取物样品直接酸化至pH为3，并测量A600，或者用室温水以1∶10进行稀释，并用稀HCl将所得溶液调节至pH为3，测量A600。
当将各种氯化钙提取样品离心时，0.05M和0.10M的CaCl2样品分离相当良好，但0.15M的CaCl2样品却没有。当将经离心的提取物进行针筒式过滤时，0.05M样品为完全澄清的，0.10M样品为轻微浑浊的，0.15M样品为非常浑浊的，几乎为乳状的(下面的表4)。认为脂肪为形成浑浊的主要原因。用脱脂豆粕作为原料进行工作应当消除该问题。然而，由于0.15M CaCl2提取物不能被澄清，因此将其从所述试验中排除。
表4-具有不同CaCl2浓度的澄清大豆提取物的结果
将提取物稀释入水中似乎产生一些沉淀物，在较高盐浓度下，其量似乎增加。直接酸化0.05M和0.10M CaCl2提取物得到相当澄清的溶液，但是酸化之前通过用水稀释这些样品实现优异的澄清度(下表5)。
表5-稀释或未经稀释的酸化大豆提取物的澄清度
实施例3
在室温下，在定轨摇床平台(platform)上，将经烘焙的豆粕(10g)用0.15MNaCl、0.15M CaCl2或水(100ml)提取30分钟。然后将样品以10,200g离心10分钟，以将提取物与废豆粕(spent meal)分离。然后通过过滤通过25μm孔径滤纸使上清液进一步澄清，测量样品的pH和电导率。然后用0.45μm孔径针筒式过滤器使少量样品进一步澄清，然后分析澄清度(A600)和蛋白含量(Leco)。将每种提取物的澄清样品稀释入4份室温水中，再次测量A600。用稀HCl将经稀释和未经稀释的提取物样品酸化至pH为3，再次测量澄清度。用氯化钙将氯化钠提取物的样品也补足至电导率为19mS，并且在天然pH和pH 3下评价全强度(full strength)及1∶5稀释样品的澄清度。
水和氯化钙溶液看来比氯化钠溶液提取更多的蛋白(下表6)。由于对所述豆粕进行烘焙并因此使其暴露于相对严重的热处理，因此总提取性相当低。
表6-经烘焙的豆粕的各种提取物的性质
过滤后，所有三种提取物具有相对相似的澄清度(下表7)。用四份水稀释水提取物和氯化钠提取物没有产生任何蛋白沉淀。然而，当稀释氯化钙提取物时形成沉淀物。当pH降至3时，该沉淀物完全溶解，得到完全(crystal)澄清的样品。当酸化时，未经稀释的氯化钙提取物也保持相当澄清。当酸化时，不管是否用水稀释样品，水提取物和氯化钠提取物变得高度浑浊。
表7-酸化前和酸化后提取物的澄清度
向氯化钠提取物样品中加入氯化钙，以实现19mS的电导率，这导致在样品中发展混浊物(cloud)。该钙诱导的沉淀物看来没有随着酸的加入而溶解。因此，所测试的两种溶液都含有显著的混浊物(cloud)(下表8)。通过在酸化样品之前进行离心或过滤应已除去了所述沉淀物。
表8-酸化前或酸化后，含有加入的CaCl2的NaCl提取物的澄清度
实施例4
进行该实施例以测定当浓缩和脱盐时，透明的酸化的大豆氯化钙提取物是否澄清。
在环境温度下，将′a′克经烘焙的豆粕加到′b′毫升0.15M CaCl2溶液中并搅拌30分钟，以得到蛋白水溶液。除去残余的豆粕，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′毫升经过滤的蛋白溶液，其具有′d′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加到′e′毫升水中，用稀HCl将样品的pH降至3。
通过在具有′h′道尔顿截留分子量的′g′膜上浓缩将经稀释和酸化的蛋白提取物溶液的体积减至′f′毫升，然后用′j′毫升反渗透纯化水将′i′毫升经浓缩、酸化的蛋白溶液的等分试样渗滤。所得经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液具有′k′重量％的蛋白含量，并且收率为初始经过滤的蛋白溶液的′l′重量％。将经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′m′％(Nx6.25)w.b.的蛋白含量。将所述产品称为S701大豆分离蛋白(SPI)。
参数′a′至′m′陈述于下表9中：
表9
a 240
  b   1,000
  c   480
  d   1.13
  e   960
  f   28
  g   Hydrosart
  h   10,000
  i   26
  j   260
  k   11.24
  l   68.27
  m   93.61
制备3.125克S701SPI产品，将其充分溶解在水中。制备S701SPI于水中的3.2w/v％蛋白溶液，使用HunterLab Color Quest XE设备评价颜色和澄清度。所得的透明低pH(3.29)溶液具有优异的颜色和澄清度(表10)。
表10-来自经烘焙的豆粕的S701SPI的3.2％w/v蛋白溶液的HunterLab评分
实施例5
在环境温度下，将′a′克干燥大豆加到′b′毫升0.10M CaCl2溶液中，并在厨房用共混机中高速加工5分钟，得到蛋白水溶液。除去残余的固体和经提取的脂肪，通过离心和过滤使所得的蛋白溶液澄清，以制备′c′毫升经过滤的蛋白溶液，其具有′d′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加到′e′毫升水中，用稀HCl将样品的pH降至3。
通过在具有′h′道尔顿截留分子量的′g′膜上浓缩，将经稀释和酸化的蛋白提取物溶液的体积减至′f′毫升，然后用′j′毫升反渗透纯化水将′i′毫升经浓缩、酸化的蛋白溶液的等分试样渗滤。所得经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液具有′k′重量％的蛋白含量，并且收率为初始经过滤的蛋白溶液的′l′重量％。将经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′m′％(Nx6.25)w.b.的蛋白含量。将所述产品称为S701大豆分离蛋白(SPI)。
参数′a′至′m′陈述于下表11中：
表11
  a   150
  b   1,000
  c   610
  d   1.3
  e   1,220
  f   35
  g   Hydrosart
  h   10,000
  i   32
  j   384
  k   11.85
  l   53.59
  m   95.34
该方法得到3.69克S701SPI产品，其在水中充分溶解，并产生轻微浑浊的低pH(3.19)溶液，如通过HunterLab Color Quest XE设备所评价的，该溶液具有优异的颜色(下表12)。由于某种原因，当将pH降至3并进行浓缩时，从大豆制备的样品不像从豆粕制备的样品那样非常澄清。这也许受一些由于某种原因从压滤机中泄漏(escape)的残余油或者不能从经烘焙的豆粕中提取的蛋白物质的影响，或者受所使用的不同强度的氯化钙的影响。应注意，本实施例中初始经稀释和酸化的提取物的澄清度与实施例2中用大豆实现的结果一致。pH调节之后和开始超滤之前或在所述过程中后来的一些其它(时间)点额外通过所述压滤机可能会得到具有更好澄清度的产品。
表12-来自大豆的S701SPI的3.2％蛋白溶液的HunterLab评分
实施例6
将实施例4的程序规模放大，从工作台实验室(bench top laboratory)规模放大至试验厂(pilot plant)规模。
在环境温度下，将′a′公斤经烘焙的豆粕加入到′b′升0.15M CaCl2溶液中，搅拌30分钟，得到蛋白水溶液。除去残余的豆粕，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升经过滤的蛋白溶液，其具有′d′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加到′e′升水中，用稀HCl将样品的pH降至3.03。
通过在具有′h′道尔顿截留分子量的′g′膜上浓缩，将经稀释和酸化的蛋白提取物溶液的体积降至′f′升。用′j′升反渗透纯化水将′i′升经浓缩和酸化的蛋白溶液的等分试样渗滤，然后在60℃下巴氏消毒1分钟并过滤。所得的经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液具有′k′重量％的蛋白含量，并且收率为初始经过滤的蛋白溶液的′l′重量％。将经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′m′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。将所述产品称为S001-H05-08AS701。
参数′a′至′m′陈述于下表13中：
表13
  a   20
  b   100
  c   80
  d   0.66
  e   160
  f   5
  g   聚醚砜(PES)
  h   10,000
  i   5
  j   25
  k   6.87
  l   59.46
  m   100.24
制备187克S701，将其充分溶解在水中，得到透明的低pH(3.35)溶液，如通过HunterLab ColorQuest XE设备所评价的，所述溶液具有优异的颜色(下表14)。
表14-来自经烘焙豆粕的S001-H05-08A S701的3.2％w/v蛋白溶液的HunterLab评分
干燥粉末的颜色也非常浅(下表15)。
表15-来自经烘焙豆粕的干燥S001-H05-08A S701的HunterLab评分
实施例7
本实施例评价了根据实施例6的程序所制备的大豆分离蛋白的热稳定性。
在水中制备S001-H05-08A S701的2％w/v蛋白溶液(如实施例6中所述制备)。通过测量A600来评价样品的澄清度，使用HunterLab Colour Quest XE设备以传输模式测量颜色。然后将蛋白溶液加热至95℃并在该温度下保持30秒，然后在冰水中快速冷却。然后再次评价所述溶液的颜色和澄清度。
对蛋白溶液的热处理实际上轻微提高了澄清度，并且对样品的颜色影响极小(下表16)。在热处理条件下保持澄清度对将蛋白用于饮料系统(其中的许多被加热，作为其加工的一部分)中是特别有益的。
表16-在95℃下热处理30秒的S001-H05-08A S701的2w/v％蛋白溶液的澄清度和颜色结果
实施例8
实施本实施例以评价提取溶液性质对从经烘焙的豆粕提取的蛋白的收率的影响，并测定高pH氯化钙提取是否会在pH 3下产生透明溶液。
将经烘焙的豆粕样品(10g)与100ml以下溶剂混合：
·水
·水+经充分稀释的NaOH，以将提取的pH提高至8.50
·0.05M CaCl2
·0.10M CaCl2
·0.15M CaCl2
·0.15M CaCl2+经充分稀释的NaOH，以将提取的pH提高至8.79
·0.05M NaCl
·0.10M NaCl
·0.15M NaCl
·0.15M NaCl+经充分稀释的NaOH，以将提取的pH提高至8.64
使用定轨摇床平台将样品混合30分钟。然后使用0.45μm孔径针筒式过滤器使少量样品澄清，通过Leco分析测定经过滤的溶液的蛋白含量。用2份水稀释少量经澄清的高pH氯化钠和氯化钙提取物样品，用稀HCl将样品的pH调节至3。然后视觉评价所述样品的澄清度。
增加氯化钙浓度似乎增加了从豆粕提取的蛋白的量(下表17)。对于0.05M提取物记录的数值极其低，这可能归因于测量中的实验误差。增加提取中的氯化钠浓缩对增加所提取的蛋白的量影响很小。与溶剂类型无关，在高pH下进行提取似乎导致显著增加经提取的蛋白的量。对于在高pH下进行的0.15MCaCl2提取，获得最高收率。当用水稀释该样品时，形成了沉淀物，但当降至pH 3时，该物质重新溶解，并且样品完全澄清。这说明，如果需要，制备在低pH下具有可溶性并为透明的大豆分离蛋白的钙处理过程可与碱提取组合，以提高收率。观察到，较高pH提取样品呈比天然pH提取样品更深的黄色，但是这可能只是较高蛋白浓度所起的作用。用水稀释pH 8.64的氯化钠提取物没有导致任何浑浊或沉淀物的形成。将所述样品的pH降至3没有导致形成浑浊和沉淀。
表17-各种澄清的提取物的蛋白含量
实施例9
本实施例说明用水、氯化钠和氯化钙提取另一种大豆源，以及说明酸化对澄清度的影响。
在室温下，使用搅拌棒/搅拌板将经最小程度热加工的脱脂豆粉(10g)用水、0.15M NaCl或0.15M CaCl2(100ml)提取30分钟。然后将样品以10,200g离心10分钟，以将提取物与残余固体分离。然后通过过滤通过25μm孔径滤纸和0.45μm孔径针筒式过滤器使上清液进一步澄清，然后分析pH、电导率、澄清度(A600)和蛋白含量(Leco)。将每种提取物的澄清样品稀释入4份室温水中并再次测量A600。用稀HCl将经稀释的和未经稀释的提取物样品酸化至pH为3，再次测量澄清度。还将少量CaCl2加入到25μm水和氯化钠提取后样品中并测量电导率。然后将混合物以7,800g离心10分钟，用0.45μm孔径针筒式过滤器过滤上清液。测量这些上清液的pH、蛋白含量和A600，然后将pH降至3并再次测量A600。
离心后，来自氯化钙提取的上清液看来是最澄清的样品，而来自氯化钠提取的上清液有点浑浊，来自水提取的上清液非常浑浊。甚至在过滤样品后，水提取物仍是浑浊的(下表18)。对于所有提取溶液(特别是水)，豆粉的提取性非常好。
表18-初始提取物的性质
当将未经稀释的样品酸化至pH为3时，仅氯化钙提取物保持澄清(下表19)。该结果表明，稀释步骤对于大豆分离蛋白的产生可能不是必需的，所述大豆分离蛋白在低pH下是可溶的，并产生透明溶液。
表19-酸化对全强度(full strength)提取物的澄清度的影响
当施用稀释步骤时，氯化钙提取物再次是在pH 3下澄清的唯一样品(下表20)。
表20-酸化对经稀释的提取物的澄清度的影响
将氯化钙加入到水提取物中使样品的电导率提高至7.76mS。用氯化钙使所述氯化钠提取物的电导率提高至22.10mS。加入氯化钙后，这两种样品含有显著量的沉淀物，但通过离心和过滤步骤使其澄清。澄清过程中损失了显著量的蛋白，其中澄清的水/CaCl2提取物测试损失1.19％蛋白，NaCl/CaCl2提取物测试损失2.27％蛋白。含有加入的钙的水提取物一经酸化至pH为3就保持澄清，而NaCl/CaCl2提取物变得浑浊(下表21)。令人感兴趣的是，这两种提取物样品(如果在酸化前用水稀释)在pH 3下得到澄清溶液(数据未显示)。一经稀释和加入酸，水/CaCl2样品为澄清。但一经稀释就沉淀的NaCl/CaCl2样品在pH降至3时变得澄清。
表21-酸化对含有加入的氯化钙的提取物的澄清度的影响
实施例10
本实施例说明了在试验厂规模上，使用在散装食品店(bulk food store)购买的有机豆粉制备大豆分离蛋白。
在环境温度下，将′a′公斤豆粉加入到′b′升0.15M CaCl2溶液中，搅拌30分钟，以得到蛋白水溶液。除去残余的豆粉和脂肪相，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升经过滤的蛋白溶液，其具有′d′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加到′e′升水中，用稀HCl将样品的pH降至3.05。
通过在具有′h′道尔顿截留分子量的′g′膜上浓缩，将经稀释和酸化的蛋白提取物溶液的体积减少至′f′升。用′i′升反渗透纯化水将经酸化的浓缩蛋白溶液渗滤。所得的经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液具有′j′重量％的蛋白含量，并且收率为初始经过滤的蛋白溶液的′k′重量％。将经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液用等体积水稀释并过滤。然后将所述蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′l′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。将产品称为S003-I18-08A S701。
参数′a′至′l′示于下表22中：
表22
  a   8.12
  b   81
  c   76
  d   1.10
  e   76
  f   5
  g   PES
  h   10,000
  i   25
  j   12.73
  k   73.1
  l   103.01
当将S003-I18-08A S701产品溶解在水中时，所得溶液(pH3.33)为透明的并且颜色非常浅，如下表23中所示。
表23-S003-I18-08A S70的3.2w/v％蛋白溶液的HunterLab评分
干粉的颜色非常浅，如下表24中所示：
表24-干燥S003-I18-08A S701的HunterLab评分
实施例11
本实施例说明在试验厂规模上，使用经最小程度热加工的脱脂豆粉制备大豆分离蛋白。
在环境温度下，将′a′公斤豆粉加入到′b′升0.15M CaCl2溶液中，搅拌30分钟，以得到蛋白水溶液。除去残余的豆粉，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升经过滤的蛋白溶液，其具有′d′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加到′e′升水中，用稀HCl将样品的pH降至3.01。
通过在具有′h′道尔顿截留分子量的′g′膜上浓缩，将经稀释和酸化的蛋白提取物溶液的体积减少至′f′升。用′i′升反渗透纯化水将经酸化的浓缩蛋白溶液渗滤。所得的经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液具有′j′重量％的蛋白含量，并且收率为初始经过滤的蛋白溶液的′k′重量％。然后将所述经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′l′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。将产品称为S004-J02-08A S701。
参数′a′至′l′示于下表25中：
表25
  a   10
  b   100
  c   94
  d   1.26
  e   94
  f   7
  g   PES
  h   10,000
  i   28
  j   12.66
  k   74.02
  l   101.22
当将所述S004-J02-08A S701溶解在水中时，所得溶液(pH3.09)为透明的并颜色非常浅，如下表26中所示：
表26-S004-J02-08A S701的3.2w/v％蛋白溶液的HunterLab评分
干粉的颜色非常浅，如下表27中所示：
表27-干燥S004-J02-08A S701的HunterLab评分
实施例12
本实施例说明新颖的酸溶性大豆分离蛋白(S701)的制备。
在环境温度下，将′a′公斤经最小程度热加工的脱脂豆粉加入到′b′升0.15MCaCl2溶液中，并搅拌60分钟，得到蛋白水溶液。除去残余的豆粕，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升经过滤的蛋白溶液，其具有′d′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加入到′e′升反渗透纯化水中，用稀HCl将样品的pH降至′f′。
通过在具有′i′道尔顿截留分子量的′h′膜上浓缩，将经稀释和酸化的蛋白提取物溶液的体积减少至′g′升。用′j′升反渗透纯化水将经酸化的浓缩蛋白溶液渗滤。所得的经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液具有′k′重量％的蛋白含量，并且收率为初始经过滤的蛋白溶液的′l′重量％。然后将所述经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′m′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。将产品称为′n′S701。
用于三次运行(run)的参数′a′至′n′陈述于下表28中：
表28-用于制备S701的运行的参数
  n   S005-K18-08A   S005-K24-08A   S005-L08-08A
  a   60   60   20
  b   600   600   200
  c   410   360   170
  d   2.63   2.53   2.03
  e   410   360   170
  f   3.07   3.07   3.06
  g   70   81   49
  h   PES   PES   PES
  i   10,000   10,000   10,000
  j   350   405   250
  k   13.34   13.52   N/A
  l   89.6   91.1   N/A
  m   102.71   103.19   105.54
N/A＝未获得
实施例13
本实施例说明通过蛋白胶束团(protein micellar mass)方法制备大豆分离蛋白。
在环境温度下，将10kg经最小程度热加工的脱脂豆粉加到200L 0.5MNaCl溶液中并搅拌60分钟，以得到蛋白水溶液。除去残余的豆粉，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备165L经过滤的蛋白溶液，其具有1.34wt％的蛋白含量。
通过在具有100,000道尔顿截留分子量的PES膜上浓缩，将蛋白提取物溶液减少至12.06kg，制备具有17.51wt％蛋白含量的浓缩蛋白溶液。
将30℃的浓缩溶液以1∶5稀释入温度为4℃的冷RO水中。立即形成白色混浊物，使其沉降。除去顶部稀释水，从容器底部回收沉淀的粘性粘稠物质(PMM)，收率为经过滤的蛋白溶液的20.8wt％。发现源自干燥PMM的蛋白具有99.66％(Nx6.25)d.b.蛋白含量。将产品称为S005-K19-08A S300。
实施例14
本实施例包括评价通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和两种商业大豆分离蛋白(即，Pro Fam 825和Pro Fam 873(ADM，Decatur，IL)，被制造商指明为高度可溶的产品)在水中的溶解度。基于蛋白溶解度(称为蛋白质方法，Morr等，J.Food Sci.50：1715-1718方法的修改形式)和总产品溶解度(称为粒状沉淀(pellet)方法)测试溶解度。
将足以提供0.5g蛋白的蛋白粉称入烧杯中，然后加入少量反渗透(RO)纯化水，搅拌混合物直到形成均匀(smooth)的糊状物。然后加入额外的水使体积为约45ml。然后使用磁力搅拌器将烧杯的内容物缓慢搅拌60分钟。将蛋白分散后立即测定pH并用稀NaOH或稀HCl将pH调节至适当水平(2、3、4、5、6或7)。还在中性pH下制备样品。对于调节了pH的样品，在60分钟搅拌期间测量并校正pH两次。搅拌60分钟后，用RO水将样品补足至50ml总体积，得到1％w/v蛋白分散体。使用Leco FP528氮测定仪测量所述分散体的蛋白含量。然后将所述分散体的等分试样(20ml)转移到预称重的离心管中，已将所述离心管在100℃烘箱中干燥过夜，然后在干燥器中冷却并将所述管盖盖子。将所述样品以7,800g离心10分钟，这使不溶物沉淀并得到澄清的上清液。通过Leco分析测量所述上清液的蛋白含量，然后弃去上清液和管盖，将粒状沉淀物质在设定在100℃的烘箱中干燥。第二天早晨，将管转移到干燥器中并使其冷却。记录干燥粒状沉淀物质的重量。通过以下方式：计算初始蛋白粉的干重：所使用的粉末的重量乘以因子((100-粉末的水分含量(％))/100)。然后通过两种不同方式计算所述产品的溶解度：
1)溶解度(蛋白质方法)(％)＝(％上清液中的蛋白/％初始分散体中的蛋白)x100
2)溶解度(粒状沉淀方法)(％)＝(1-(干燥的不溶性粒状沉淀物质的重量/((20ml分散体的重量/50ml分散体的重量)x干燥蛋白粉的初始重量)))x100
实施例12和13中制备的蛋白分离物以及商业分离物在水中的天然pH值示于下表29中：
表29-在水中以1％w/v蛋白制备的分散体的天然pH。
  批次   产品   天然pH
  S005-K18-08A   S701   3.21
  S005-K24-08A   S701   3.36
  S005-L08-08A   S701   3.35
  S005-K19-08A   S300   6.76
  Pro Fam 825   7.23
  Pro Fam 873   7.19
所得到的溶解度结果陈述于下表30和31中：
表30-基于蛋白质方法，不同pH值下的产品的溶解度。
表31-基于粒状沉淀方法，不同pH值下的产品的溶解度。
从表30和31的结果可以看出，与所使用的溶解度测试方法无关，在pH2-4范围内，S701产品远比商业分离物更可溶，在pH 7下也是如此。在低pH范围内优异的溶解度是S701产品用于酸性饮料中的应用的关键因素。S300产品的溶解度与S701具有相似的模式，除了在pH 4下的溶解度不是非常好，但仍然比商业产品好。
实施例15
本实施例包括对通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和商业大豆分离蛋白ProFam 825和Pro Fam 873在水中的澄清度的评价。
通过测量600nm处的可见光的吸光度(A600)来评价如实施例14中所述制备的1％w/v蛋白分散体的澄清度，其中使用水作为(as)分光光度计空白。在HunterLab ColorQuest XE设备上以传输模式对样品进行的分析也提供百分比浑浊度读数(澄清度的另一种测量)。对于这两种试验，较低的评分表明较大的澄清度。
澄清度结果陈述于下表32和33中：
表32-通过A600所评价的不同pH值下的溶液的澄清度
表33-通过HunterLab分析所评价的不同pH值下的溶液的澄清度
N/A＝未获得
如从表32和33的结果可以看出，与用于评价澄清度的方法无关，在pH范围2-4内制备的S701溶液极其澄清。商业分离物在所测试的所有pH值下都极其浑浊。S300在pH 2-3下相当澄清，但不如S701溶液明显(sharp)。在pH 4下，S300溶液十分浑浊。在pH 7下，S701和S300溶液比商业分离物更澄清，但是在该pH下的溶液没有像酸性溶液一样澄清。
实施例16
本实施例包括评价通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)在水中的热稳定性。在水中制备S701的2％w/v蛋白溶液，并且必要时，将pH调节至3。通过用HunterLab Color Quest XE设备进行浑浊度测定来评价这些溶液的澄清度。然后将溶液加热至95℃，在该温度下保持30秒，然后立即在冰浴中冷却至室温。然后再次测量经热处理的溶液的澄清度。
加热前后蛋白溶液的澄清度陈述于下表34中：
表34-热处理对溶液的澄清度的影响
如从表34中的结果可以看出，S701溶液初始完全澄清，并且热处理后保持如此。
实施例17
本实施例包括通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和商业大豆分离蛋白ProFam 825和Pro Fam 873在软饮料(Sprite)和运动饮料(Orange Gatorade)中的溶解度的评价。测定溶解度，其中向饮料中加入蛋白而不进行pH校正，重复该操作，但将蛋白强化的饮料的pH调节至原始饮料的水平。
当评价溶解度而不进行pH校正时，将提供1g蛋白的足量蛋白粉称入烧杯中，加入少量饮料并搅拌直到形成均匀的糊状物。加入额外的饮料使体积达到50ml，然后将溶液在磁力搅拌器上缓慢搅拌60分钟，得到2％蛋白w/v分散体。使用LECO FP528氮测定仪分析样品的蛋白含量，然后将含蛋白的饮料的等分试样以7,800g离心10分钟，测量上清液的蛋白含量。
溶解度(％)＝(％上清液中的蛋白/％初始分散体中的蛋白)x100
当评价溶解度并进行pH校正时，测量不含蛋白的软饮料(Sprite)(3.39)和运动饮料(Orange Gatorade)(3.19)的pH。将提供1g蛋白的足量蛋白粉称入烧杯中，加入少量饮料并搅拌直到形成均匀的糊状物。加入额外饮料使体积达到约45ml，然后将溶液在磁力搅拌器上缓慢搅拌60分钟。测量含有蛋白的饮料的pH，然后必要时用HCl或NaOH将其调节至原始不含蛋白时的pH。然后用额外的饮料使每种溶液的总体积达到50ml，得到2％蛋白w/v分散体。使用LECO FP528氮测定仪分析样品的蛋白含量，然后将含蛋白的饮料的等分试样以7,800g离心10分钟，测量上清液的蛋白含量。
溶解度(％)＝(％上清液中的蛋白/％初始分散体中的蛋白)x100
所得结果陈述于下表35中：
表35-产品在Sprite和Orange Gatorade中的溶解度
从表35的结果可以看出，S701产品在Sprite和Orange Gatorade中极其可溶。S701是经酸化的产品并且对饮料的pH影响极小。S300和商业分离物是未经酸化的产品。通过校正所述饮料的pH有些提高这些产品的溶解度。然而，即使在pH校正后，商业分离物也远不如S701可溶。pH校正后，S300的可溶性比S701稍低。
实施例18
本实施例包括评价通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和商业大豆分离蛋白ProFam 825和Pro Fam 873在软饮料和运动饮料中的澄清度。
使用实施例15中描述的方法来评价实施例17中在软饮料(Sprite)和运动饮料(Orange Gatorade)中制备的2％w/v蛋白分散体的澄清度，但是用适当的饮料作为分光光度计空白，所述分光光度计用于测量600nm处的吸光度。
所得结果陈述于下表36和37中：
表36-在Sprite和Orange Gatorade中的产品的澄清度(A600)
表37-在Sprite和Orange Gatorade中的产品的HunterLab浑浊度读数
从表36和37的结果可以看出，S701产品对Sprite和Orange Gatorade的澄清度的影响最小。加入商业分离物和S300使这些饮料非常浑浊，即使是在pH校正后。
实施例19
本实施例包括评价通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和商业大豆分离蛋白ProFam 825和Pro Fam 873在酒精饮料中的溶解度。测定溶解度，其中对加入蛋白的饮料不进行pH校正，重复该操作，其中将蛋白强化的饮料的pH调节至原始饮料的水平。
当评价溶解度并且不进行pH校正时，将提供1g蛋白的足量蛋白粉称入烧杯中，加入少量饮料并搅拌直到形成均匀糊状物。加入额外饮料使体积达到50ml，然后将溶液在磁力搅拌器上缓慢搅拌60分钟得到2％w/v蛋白分散体。使用LECO FP528氮测定仪分析样品的蛋白含量，然后将含蛋白的饮料的等分试样以7,800g离心10分钟，测量上清液的蛋白含量。
溶解度(％)＝(％上清液中的蛋白/％初始分散体中的蛋白)x100
当评价溶解度并进行pH校正时，测量不含有蛋白的Miller Genuine Draft啤酒(4.05)、Bacardi Breezer Strawberry Daiquiri(3.60)和Pomtini Vodka和Pomegranate Cooler(3.36)的pH。将提供1g蛋白的足量蛋白粉称入烧杯中，加入少量饮料并搅拌直到形成均匀糊状物。加入额外饮的料使体积达到约45ml，然后将溶液在磁力搅拌器上缓慢搅拌60分钟。测量含有蛋白的饮料的pH，然后必要时用HCl或NaOH将其调节至原始无蛋白时的pH。然后用额外的饮料使每种溶液的总体积达到50ml，得到2％w/v蛋白分散体。使用LECOFP528氮测定仪分析样品的蛋白含量，然后将含蛋白的饮料的等分试样以7,800g离心10分钟，测量上清液的蛋白含量。
溶解度(％)＝(％上清液中的蛋白/％初始分散体中的蛋白)x100
所得结果陈述于下表38和39中：
表38-产品在酒精饮料中的溶解度(不进行pH校正)
表39-产品在酒精饮料中的溶解度(进行pH校正)
从表38和39的结果可以看出，S701产品在酒精饮料中极其可溶。由于S701为经酸化的产品，加入其对饮料的pH的改变不如中性的S300和商业分离物多。通过校正饮料的pH，在有些提高了S300的溶解度，但仍明显比S701的溶解度差。无论饮料的pH是否进行校正，商业分离物的溶解度都很差。
实施例20
本实施例包括评价通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和商业大豆分离蛋白ProFam 825和Pro Fam 873在酒精饮料中的澄清度和热稳定性。
使用实施例15中描述的方法来评价实施例19中在酒精饮料中制备的2％w/v蛋白分散体的澄清度，但使用适当的饮料作为分光光度计空白，所述分光光度计用于测量600nm处的吸光度。通过将含蛋白的酒精饮料加热至95℃并将样品在该温度下保持30秒来评价热稳定性。然后将样品在冰浴中立即冷却至室温，再次测量澄清度。使用适当的未经加热的无蛋白饮料作为分光光度计空白，所述分光光度计用于测量600nm处的吸光度。
所得结果陈述于下表40-43中：
表40热处理前和热处理后，产品在酒精饮料中的澄清度(A600)(无pH校正)
表41-热处理前和热处理后，产品在酒精饮料中的澄清度(A600)(进行pH校正)
表42-热处理前和热处理后，产品在酒精饮料中的HunterLab浑浊度读数(无pH校正)
N/A＝未获得
表43-热处理前和热处理后，产品于酒精饮料中的HunterLab浑浊度读数(进行pH校正)
N/A＝未获得
从表40-43的结果可以看出，S701的加入对酒精饮料的澄清度影响极小。然而，含有商业大豆分离蛋白和S300的饮料非常浑浊。热处理没有降低含S701的酒精饮料的澄清度，并且在很多情况下将其轻微改善。含有商业分离物和S300的饮料在热处理后保持浑浊。
实施例21
本实施例包括评价通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和商业大豆分离蛋白ProFam 825中具体元素的含量。
通过等离子体发射光谱对元素钙、磷、镁、钾、钠、铁、铜、锌和锰实施检测。
所得结果陈述于下表44中：
表44-蛋白产品中具体元素的含量
从表44的结果可以看出，S701产品中感兴趣元素的含量通常比S300或商业分离物中的低。S701产品与其它分离物相比在磷、钾、钠、锌和锰方面特别低。
实施例22
本实施例包括评价通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和商业大豆分离蛋白ProFam 825和873的肌醇六磷酸含量。
使用Latta和Eskin的方法(J.Agric.Food Chem.，28：1313-1315)来测定肌醇六磷酸含量。
所得结果陈述于下表45中：
表45-蛋白产品的肌醇六磷酸含量
  批次   产品   ％肌醇六磷酸
  S005-K18-08A   S701   0.00
  S005-K24-08A   S701   0.02
  S005-L08-08A   S701   0.00
  S005-K19-08A   S300   0.62
  Pro Fam 825   2.00
  Pro Fam 873   1.53
从表45的结果可以看出，S701样品的肌醇六磷酸含量特别低，而S300和商业分离物含有显著水平的肌醇六磷酸。
实施例23
本实施例包括评价通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和商业大豆分离蛋白ProFam 825和Pro Fam 873在经复原的运动饮料(Orange Gatorade粉)中的溶解度。测定溶解度，其中将蛋白和饮料粉末干燥共混，然后溶解在水中，不进行pH校正；重复该操作，其中将所述经复原的蛋白/饮料混合物的pH调节至不含蛋白的经复原的粉末状饮料的水平。
从Orange Gatorade粉的容器上的制备说明书确定，制备100ml饮料需要6.68g粉末。将提供2g蛋白的足量蛋白粉称入250ml烧杯中，然后加入Orange Gatorade粉(6.68g)，通过旋动所述烧杯将混合物干燥共混。向蛋白-Gatorade混合物(2％w/v蛋白)中加入反渗透(RO)纯化水(100ml)，将样品在搅拌板上缓慢搅拌60分钟。当评价所述样品并进行pH校正时，必要时用HCl或NaOH将经复原的Gatorade/蛋白饮料的pH调节至3.17(不含蛋白的经复原的Orange Gatorade粉的pH)。使用LECO FP528氮测定仪分析样品的蛋白含量，然后将饮料的等分试样以7,800g离心10分钟，测量上清液的蛋白含量。
溶解度(％)＝(％上清液中的蛋白/％初始分散体中的蛋白)x100
所得结果陈述于下表46中：
表46-用Orange Gatorade粉复原的蛋白产品的溶解度
  无pH校正   pH校正
  批次   产品   溶解度(％)   溶解度
  S005-K18-08A   S701   94.7   100
  S005-K24-08A   S701   97.4   100
  S005-L08-08A   S701   97.9   100
  S005-K19-08A   S300   49.5   94.4
  Pro Fam 825   12.9   13.1
  Pro Fam 873   14.0   12.7
从表46的结果可以看出，S701产品与Gatorade粉极其可溶。S701为经酸化的产品，因此对复原的饮料影响极小。S300是未经酸化的产品，并且仅仅当pH被校正时才是非常可溶的。商业大豆分离物也是未经酸化的产品，但无论pH是否被校正，其与Gatorade粉可溶性差。
实施例24
本实施例包括评价通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和商业大豆分离蛋白ProFam 825和Pro Fam 873在复原的运动饮料(Orange Gatorade粉)中的澄清度。测定澄清度，其中将所述蛋白与饮料粉末干燥共混，然后溶解在水中，不进行pH校正；重复该操作，其中将所述经复原的蛋白/饮料混合物的pH调节至不含蛋白的经复原的粉末状饮料的水平。
使用实施例15中描述的方法来评价在实施例23中的复原的运动饮料(Orange Gatorade粉)中制备的2％w/v蛋白分散体的澄清度，但使用适当的饮料作为分光光度计空白，所述分光光度计用于测量600nm处的吸光度。
所得结果陈述于下表47：
表47-用Orange Gatorade粉复原的蛋白产品的澄清度
从表47的结果可以看出，S701产品对经复原的Orange Gatorade粉中的浑浊水平影响极小。不论是否对pH进行校正，含有S300和商业分离物的经复原的Orange Gatorade粉都是非常浑浊的。
实施例25
本实施例包括评价通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和商业大豆分离蛋白ProFam 825和Pro Fam 873在经复原的软饮料(Raspberry Ice Crystal Light粉)中的溶解度。测定溶解度，其中将蛋白和饮料粉末干燥共混，然后溶解在水中，不进行pH校正；重复操作，其中将经复原的蛋白/饮料混合物的pH调节至不含蛋白的经复原的粉末状饮料的水平。
从Raspberry Ice Crystal Light粉的包装上的制备说明书确定，制备100ml饮料需要0.53g粉末。将提供2g蛋白的足量蛋白称入250ml烧杯中，然后加入Raspberry Ice Crystal Light粉(0.53g)，通过旋动所述烧杯将混合物干燥共混。向蛋白-Crystal Light混合物(2％w/v蛋白)中加入RO水(100ml)，将样品在搅拌板上缓慢搅拌60分钟。当评价所述样品并进行pH校正时，必要时用HCl或NaOH将经复原的Crystal Light/蛋白饮料的pH调节至3.27(不含蛋白的经复原的Raspberry Ice Crystal Light粉的pH)。使用LECO FP528氮测定仪分析样品的蛋白含量，然后将饮料的等分试样以7,800g离心10分钟，测量上清液的蛋白含量。
溶解度(％)＝(％上清液中的蛋白/％初始分散体中的蛋白)x100
所得结果列于下表48中：
表48-用Raspberry Ice Crystal Light粉复原的蛋白质产品的溶解度
 批次  产品 无pH校正的溶解度(％) pH校正的溶解度
 S005-K18-08A  S701     100     97.2
 S005-K24-08A  S701     99.0     96.0
 S005-L08-08A  S701     97.9     100
 S005-K19-08A  S300     8.5     92.3
 Pro Fam 825     11.9     23.3
 Pro Fam 873     14.8     19.2
从表48的结果可以看出，当用Crystal Light粉复原时，S701产品极其可溶。S701为经酸化的产品，因此对经复原的饮料的pH影响极小。S300是未经酸化的产品，并且仅当pH被校正时才为非常可溶的。商业大豆分离物是未经酸化的产品，但无论是否对pH进行校正，当用Crystal Light粉复原时，其可溶性都非常差。
实施例26
本实施例包括评价通过实施例12的方法制备的大豆分离蛋白(S701)、通过实施例13的PMM方法制备的大豆分离蛋白(S300)和商业大豆分离蛋白Pro Fam 825和Pro Fam 873在经复原的软饮料(Raspberry Ice Crystal Light粉)中的澄清度。测定澄清度，其中将蛋白和饮料粉末干燥共混，然后溶解在水中，不进行pH校正；重复该操作，其中将经复原的蛋白/饮料混合物的pH调节至不含蛋白的经复原的粉末状饮料的水平。
使用实施例15中描述的方法来评价实施例25中的经复原的软饮料(Raspberry Ice Crystal Light粉)中制备的2％w/v蛋白分散体的澄清度，但用适当的饮料作为分光光度计空白，所述分光光度计用于测量600nm处的吸光度。
所得结果陈述于下表49中：
表49-用Raspberry Ice Crystal Light粉复原的蛋白产品的澄清度
从表49的结果可以看出，S701产品对经复原的Raspberry Ice CrystalLight的澄清度影响极小。无论是否对pH进行校正，含有S300和商业分离物的经复原的Raspberry Ice Crystal Light都是非常浑浊的。
实施例27
本实施例描述了根据本发明的一个实施方案制备新颖大豆蛋白产品，所述大豆蛋白产品具有小于90wt％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。
在环境温度下，将′a′公斤经最小程度热加工的脱脂豆粉加入到′b′升′c′MCaCl2溶液中，搅拌30分钟，得到蛋白水溶液。除去残余的豆粉，通过离心使所得蛋白溶液部分澄清，以制备′d′升经部分澄清的蛋白溶液，其具有′e′重量％蛋白含量。将经部分澄清的蛋白溶液用1体积水稀释并用HCl调节至pH为3。
通过过滤使经稀释和酸化的蛋白溶液进一步澄清，得到′f′升溶液，其具有′g′重量％的蛋白含量。
通过在具有′j′道尔顿截留分子量的聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上浓缩，将′h′升蛋白溶液的体积减小至′i′升。在体积减小因子(VRF)为5、7和10下，取200ml保留物样品并干燥。
参数′a′至′j′陈述于下表50中：
表50
  a   20
  b   200
  c   0.15
  d   138
  e   2.57
  f   304
  g   1.20
  h   304
  i   28
  j   5,000
使用Leco FP 528氮测定仪分析干燥样品的蛋白含量。然后将样品以3.2wt％蛋白的水平溶解在水中，并在必要时将pH调节至3。使用HunterLabColorQuest XE设备测量溶液的颜色和澄清度。所得结果陈述于下表51中。
表51
从表51中的结果可以看出，在pH 3下，当溶解于水中时，经部分纯化的大豆蛋白产品给出具有可接受的颜色和非常好的澄清度的溶液。
实施例28
本实施例描述了根据本发明的一个实施方案制备新颖大豆蛋白产品，其具有小于90wt％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。
在环境温度下，将′a′克经最小程度热加工的脱脂豆粉加入到′b′毫升′c′MCaCl2溶液中，搅拌30分钟，得到蛋白水溶液。除去残余的豆粉，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′d′毫升澄清的蛋白溶液，其具有′e′重量％蛋白含量。
将′f′毫升滤液的等分试样用1体积水稀释，并用HCl调整至pH为3。然后将具有′h′重量％蛋白含量的所得′g′毫升溶液在具有′i′道尔顿截留分子量的PES膜上浓缩。在体积减小因子为1.25、2下以及在最终浓度点，取保留物样品并干燥。在用水进行2倍体积渗滤(DF)后还取另一份保留物样品并干燥。
用于运行的参数′a′至′i′陈述于下表52中：
表52
  a   100
  b   1,000
  c   0.15
  d   800
  e   2.91
  f   500
  g   1,000
  h   1.20
  i   10,000
使用Leco FP 528氮测定仪分析干燥样品的蛋白含量。然后将样品以3.2wt％蛋白的水平溶解在水中，必要时将pH调节至3。使用HunterLabColorQuest XE设备测量溶液的颜色和澄清度。所得结果陈述于下表53中：
表53
从表53中的结果可以看出，在pH 3下，当溶解于水中时，部分经纯化的大豆蛋白产品给出具有非常好的颜色和澄清度的溶液。
实施例29
本实施例说明了膜的类型和孔径对本文提供的新颖酸溶性大豆分离蛋白(S701)的胰蛋白酶抑制剂活性的影响。
使用Leco FP528氮测定仪来实施蛋白含量测定。使用Kakade等的方法(Cereal Chem.，51：376-381(1974))来测定胰蛋白酶抑制剂活性。
在环境温度下，将′a′公斤经最小程度热加工的脱脂豆粉加入到′b′升0.15MCaCl2溶液中，搅拌30分钟，得到蛋白水溶液。除去残余的豆粕，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升经过滤的蛋白溶液，其具有′d′重量％蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加入到′e′体积反渗透纯化水中，用稀HCl将样品的pH降至3.01。不对经稀释和酸化的滤液进行热处理。
通过在具有′i′道尔顿截留分子量的′h′膜上浓缩(在约′j′℃的温度下操作)，将经稀释和酸化的蛋白提取物溶液的体积从′f′升降至′g′升。用′l′升反渗透纯化水将蛋白含量′k′重量％的经酸化的蛋白溶液渗滤，其中在约′m′℃下进行所述渗滤操作。然后进一步浓缩所得的经渗滤的蛋白溶液，得到具有′n′重量％的蛋白含量的溶液，其收率为初始经过滤的蛋白溶液的′o′重量％。然后将经酸化和渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′p′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。发现该干燥产品的胰蛋白酶抑制剂活性为′q′胰蛋白酶抑制剂单位/mg蛋白(Nx6.25)。将该产品命名为′r′S701。
用于两次运行的参数′a′至′r′列于下表54中：
表54-用于在本实施例中制备S701的运行的参数
  r   S008-D01-09A   S008-D02-09A
  a   60   60
  b   600   600
  c   420   450
  d   2.41   2.87
  e   1   1
  f   840   900
  g   136   180
  h   PES   PES
  i   100,000   10,000
  j   30   30
  k   7.55   5.93
  l   400   600
  m   31   30
  n   15.28   15.13
  o   82.3   73.5
  p   100.74   100.17
  q   82   120
从表54中的数据可以看出，使用具有较大孔径的膜所制备的分离物具有较低的胰蛋白酶抑制剂活性。
实施例30
本实施例说明浓缩和渗滤步骤在降低胰蛋白酶抑制剂活性中的效力。
在环境温度下，将′a′公斤经最小程度热加工的脱脂豆粉加入到′b′升0.15M CaCl2溶液中，搅拌30分钟，得到蛋白水溶液。除去残余的豆粕，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升经过滤的蛋白溶液，其具有′d′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加入到′e′体积反渗透纯化水中，用稀HCl将样品的pH降至′f′。然后将经稀释和酸化的溶液在90℃下热处理1分钟。
通过在具有′j′道尔顿截留分子量的′i′膜上浓缩(在约′k′℃的温度下操作)，将经稀释、酸化和热处理的蛋白提取物溶液的体积从′g′升减小至′h′升。在此时间点，用′m′升反渗透(RO)纯化水将蛋白含量为′l′重量％的经酸化的蛋白溶液渗滤，其中所述渗滤操作在约′n′℃下进行。然后将经渗滤的溶液浓缩至′o′升，蛋白含量为约′p′重量％，并且用额外′q′升RO水渗滤，其中所述渗滤操作在约′r′℃下进行。在该第二次渗滤后，将蛋白溶液浓缩至蛋白含量为约′s′重量％，然后用水稀释至蛋白含量为′t′重量％，以促进喷雾干燥。回收喷雾干燥前的蛋白溶液，收率为初始经过滤的蛋白溶液的′u′重量％。然后将经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′v′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。发现所述干燥产品的胰蛋白酶抑制剂活性为′w′胰蛋白酶抑制剂单位(TIU)/mg蛋白(Nx6.25)。将所述产品命名为′x′S701H。
用于三次运行的参数′a′至′x′陈述于下表55中：
表55-用于制备S701H的运行的参数
  x   S010-G20-09A   S010-G22-09A   S010-G29-09A
  a   22.68   22.68   22.68
  b   300   300   300
  c   280   290   289
  d   1.54   1.64   1.47
  e   1   1   1
  f   3.07   3.07   2.92
  g   560   580   580
  h   99   92   93
  i   PES   PVDF   PES
  j   100,000   100,000   100,000
  k   30   30   31
  l   4.20   4.42   4.44
  m   100   100   100
  n   31   30   30
  o   49   39   46
  p   7   7.5   9
  q   300   300   300
  r   31   30   30
s 16 16 18
  t   6.90   6.92   8.39
  u   83.3   76.1   84.5
  v   100.80   99.41   101.56
  w   18.2   18.9   17.4
表56显示在所述方法中不同点的蛋白溶液的胰蛋白酶抑制剂活性的降低。
表56-在所述方法中不同点的胰蛋白酶抑制剂活性(TIU/mg蛋白(Nx6.25))
  样品   S010-G20-09A   S010-G22-09A   S010-G29-09A
  热处理后   72.5   79.8   101.9
  第一次DF前的浓缩溶液   61.0   73.8   47.3
  第一次DF后的浓缩溶液   48.5   50.3   42.0
  第二DF后的溶液   30.5   35.2   24.9
  用于喷雾干燥的稀释后   24.8   30.9   22.7
从表56中的结果可以看出，在浓缩和渗滤过程中，在所有点实现胰蛋白酶抑制剂活性的降低。
实施例31
本实施例说明包括任选的稀释步骤所导致的胰蛋白酶抑制剂活性水平的降低。使用稀释步骤导致较大的膜加工并且本质上导致超渗滤。
在环境温度下，将′a′公斤经最小程度热加工的脱脂豆粉加入到′b′升0.15M CaCl2溶液中，搅拌30分钟，得到蛋白水溶液。除去残余的豆粕，通过离心使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升澄清的蛋白溶液，其具有′d′重量％的蛋白含量。
然后将澄清的蛋白溶液加入到′e′体积反渗透纯化水中，使样品的pH为′f′。然后通过过滤来精制(polish)样品，得到′g′升经过滤的蛋白溶液，其具有′h′重量％的蛋白含量。所述样品的pH为′i′。不对滤液进行热处理。
通过在具有′m′道尔顿截留分子量的′l′膜上浓缩(在约′n′℃的温度下操作)，将经过滤的蛋白提取物溶液的体积从′j′升减小至′k′升。然后用′o′升反渗透纯化水将所述经酸化的浓缩蛋白溶液渗滤，其中所述渗滤操作在约′p′℃下进行。所得经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液具有′q′重量％的蛋白含量，并且其收率为初始澄清蛋白溶液的′r′重量％。然后将所述经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′s′％(Nx6.25)d.b.的蛋白质含量。发现所述干燥产品的胰蛋白酶抑制剂活性为′t′胰蛋白酶抑制剂单位/mg蛋白(Nx6.25)。将所述产品命名为′u′S701。
用于三次运行的参数′a′至′u′陈述在下表57中：
表57-用于制备S701的运行的参数
  u   S005-A08-09A   S005-A15-09A   S005-A 27-09A
  a   20   20   20
  b   200   200   200
  c   138   147   159
  d   2.57   2.54   2.61
  e   1   1   0
  f   用稀HCl降至3.00   用稀H3PO4降至2.91   未变化
  g   311   325   205
  h   1.2   0.88   2.09
  i   未变化   未变化   用稀HCl降至3.07
  j   304   325   205
  k   28   28   25
  l   PVDF   PVDF   PVDF
  m   5,000   5,000   5,000
  n   30   28   30
  o   140   140   125
  p   30   29   30
  q   10.03   12.87   12.04
  r   79.4   59.0   76.4
  s   100.87   102.60   102.26
  t   66   57   90
从表57中给出的结果可以看出，具有稀释步骤的运行比其中没有采用稀释步骤的运行产生具有更低胰蛋白酶抑制剂活性的产品。
实施例32
本实施例说明膜加工的温度对本文提供的新颖酸溶性大豆分离蛋白(S701H)的胰蛋白酶抑制剂活性的影响。
在环境温度下，将′a′公斤经最小程度热加工的脱脂豆粉加入到′b′升0.15MCaCl2溶液中，搅拌30分钟，得到蛋白水溶液。除去残余的豆粕，并通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升经过滤的蛋白溶液，其具有d′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加入到′e′体积反渗透纯化水中，用稀HCl将所述样品的pH降至′f′。然后将经稀释和酸化的溶液在90℃下热处理1分钟。
通过在具有′j′道尔顿截留分子量的′i′膜上浓缩(在约′k′℃的温度下操作)，将经稀释、酸化和热处理的蛋白提取物溶液的体积从′g′升降至′h′升。在此时间点，将蛋白含量为′l′重量％的经酸化的蛋白溶液用′m′升反渗透(RO)纯化水渗滤，其中所述渗滤操作在约′n′℃下进行。然后将经渗滤的溶液进一步浓缩至′o′升体积，蛋白含量为约′p′重量％，并且用额外′q′升RO水进行渗滤，其中所述渗滤操作在约′r′℃下进行。在该第二次渗滤后，将所述蛋白溶液浓缩至约′s′重量％蛋白含量，然后用水稀释至′t′重量％蛋白含量，以促进喷雾干燥。回收喷雾干燥前的蛋白溶液，收率为初始经过滤的蛋白溶液的′u′重量％。然后将所述经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′v′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。发现所述干燥产品的胰蛋白酶抑制剂活性为′w′胰蛋白酶抑制剂单位(TIU)/mg蛋白(Nx6.25)。将所述产品命名为′x′S701H。
用于两次运行的参数′a′至′x′陈述于下表58中：
表58-用于制备S701H的运行的参数
  x   S010-G06-09A   S010-G14-09A
  a   22.5   22.68
  b   300   300
  c   290   280
  d   1.45   1.71
  e   1   1
  f   2.90   3.00
  g   580   560
  h   85   85
  i   PES   PES
  j   100,000   100,000
  k   49   30
  l   4.39   4.71
  m   100   100
  n   50   30
  o   42   42
  p   8   8
  q   300   300
  r   51   30
  s   N/A   17
  t   6.94   7.48
  u   78.1   70.8
  v   102.61   100.01
  w   15.3   35.2
N/A＝未获得
从表58中的结果可以看出，其中在约50℃下进行膜加工的运行比在约30℃下进行膜加工的运行作具有更低的胰蛋白酶抑制剂活性。
实施例32
本实施例说明热处理对新颖酸溶性大豆分离蛋白(S701和S701H)的胰蛋白酶抑制剂活性的影响。
在环境温度下，将′a′公斤经最小程度热加工的脱脂豆粉加入到′b′升0.15MCaCl2溶液中，搅拌30分钟，得到蛋白水溶液。除去残余的豆粕，并通过离心使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升澄清的蛋白溶液，其具有d′重量％的蛋白含量。
然后将澄清的蛋白溶液加入到′e′体积反渗透纯化水中，用稀HCl将所述样品的pH降至′f′。将所述样品在′g′℃下热处理′h′分钟，然后通过过滤进行精制，得到′i′升经过滤的蛋白溶液，其具有′j′重量％的蛋白含量。
通过在具有′n′道尔顿截留分子量的′m′膜上浓缩(在约′o′℃的温度下操作)，将经过滤的蛋白提取物溶液的体积从′k′升降至′l′升。将经酸化的浓缩蛋白溶液用′p′升反渗透纯化水渗滤，其中所述渗滤操作在约′q′℃下进行。所得经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液具有′r′重量％的蛋白含量，并且收率为初始的澄清蛋白溶液的′s′重量％。然后将所述经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′t′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。发现所述干燥产品的胰蛋白酶抑制剂活性为′u′胰蛋白酶抑制剂单位/mg蛋白(Nx6.25)。将所述产品命名为′v′。
用于两次运行的参数′a′至′v′陈述于下表59中：
表59-用于制备S701和S701H的运行的参数
  v   S005-L09-08A S701H   S005-A08-09A S701
  a   20   20
  b   200   200
  c   142.1   138
  d   3.07   2.57
  e   1   1
  f   3.14   3.00
  g   75   ---
  h   10   ---
  i   280   311
  j   1.23   1.20
  k   280   304
  l   25   28
  m   PVDF   PVDF
n 5,000 5,000
  o   30   30
  p   125   140
  q   28   30
  r   11.74   10.03
  s   84.0   79.4
  t   102.66   100.87
  u   40.5   66
从表59中的结果可以看出，通过包括热处理步骤的方法制备的分离物具有较低胰蛋白酶抑制剂活性。
实施例33
本实施例还说明热处理对本文提供的新颖酸溶性大豆分离蛋白(S701和S701H)的胰蛋白酶抑制剂活性的影响。
在环境温度下，将′a′公斤经最小程度热加工的脱脂豆粉加入到′b′升0.15MCaCl2溶液中，搅拌30分钟，得到蛋白水溶液。除去残余的豆粕，并通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升经过滤的蛋白溶液，其具有d′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加入到′e′体积反渗透纯化水中，用稀HCl将所述样品的pH降至′f′。然后将所述经稀释和酸化的溶液在′g′℃下热处理′h′分钟。
通过在具有′l′道尔顿截留分子量的′k′膜上浓缩(在约′m′℃的温度下操作)，将蛋白提取物溶液的体积从′i′升减小至′j′升。在此时间点，将蛋白含量为′n′重量％的经酸化的蛋白溶液用′o′升反渗透(RO)纯化水渗滤，其中所述渗滤操作在约′p′℃下进行。然后将所述经渗滤的溶液进一步浓缩至体积为′q′升，蛋白含量为约′r′重量％，用额外′s′升RO水进行渗滤，其中所述渗滤操作在约′t′℃下进行。在该第二次渗滤后，将所述蛋白溶液浓缩至蛋白含量为约′u′重量％，然后用水稀释至蛋白含量为′v′重量％，以促进喷雾干燥。回收喷雾干燥前的所述蛋白溶液，其收率为初始经过滤的蛋白溶液的′w′重量％。然后将经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′x′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。发现所述干燥产品的胰蛋白酶抑制剂活性为′y′胰蛋白酶抑制剂单位(TIU)/mg蛋白(Nx6.25)。将所述产品命名为′z′。
用于两次运行的参数′a′至′z′列于下表60中：
表60-用于制备S701和S701H的运行的参数
  z   S010-G06-09A S701H   S010-G13-09A S701
  a   22.5   22.68
  b   300   300
  c   290   275
  d   1.45   1.63
  e   1   1
  f   2.90   2.89
  g   90   ---
  h   1   ---
  i   580   560
  j   85   85
  k   PES   PES
  l   100,000   100,000
  m   49   50
  n   4.39   4.37
  o   100   100
  p   50   50
  q   42   42
  r   8   8
  s   300   300
  t   51   51
  u   N/A   14
  v   6.94   6.90
  w   78.1   69.2
  x   102.61   100.54
  y   15.3   26.5
N/A＝未获得
从表60中的结果可以看出，通过包括热处理步骤的方法制备的分离物具有较低的胰蛋白酶抑制剂活性。
实施例34
本实施例说明使用暴露于不同水平的热处理的大豆蛋白源对本文提供的新颖酸溶性大豆分离蛋白(S701)的胰蛋白酶抑制剂活性的影响。
在环境温度下，将′a′公斤经最小程度热加工的脱脂豆粉(S005)、经适度热处理的脱脂豆粉(S007)或经完全热处理的脱脂豆粉(S006)加入到′b′升0.15MCaCl2溶液中，搅拌30分钟，得到蛋白水溶液。除去残余豆粕，通过离心使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升经澄清的蛋白溶液，其具有′d′重量％的蛋白含量。
然后将澄清的蛋白溶液加入到′e′体积反渗透纯化水中，用稀′g′将样品的pH降至′f′。然后通过过滤精制所述样品样品，得到′h′升经过滤的蛋白溶液，其具有′i′重量％的蛋白含量。不对所述滤液进行热处理。
通过在具有′m′道尔顿截留分子量的′l′膜上浓缩(在约′n′℃的温度下操作)，将经过滤的蛋白提取物溶液的体积从′j′升减小至′k′升。将经酸化的浓缩蛋白溶液用′o′升反渗透纯化水渗滤，其中所述渗滤操作在约′p′℃下进行。所得经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液具有′q′重量％的蛋白含量，并且其收率为初始的澄清蛋白溶液的′r′重量％。然后将所述经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′s′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。发现所述干燥产品的胰蛋白酶抑制剂活性为′t′胰蛋白酶抑制剂单位/mg蛋白(Nx6.25)。将所述产品命名为′u′S701。
用于三次运行的参数′a′至′u′陈述于下表61中：
表61-用于制备S701的运行的参数
  u   S005-A15-09A   S007-A26-09A   S006-A21-09A
  a   20   20   20
  b   200   200   200
  c   147   169   175
  d   2.54   1.50   1.00
  e   1   1   1
  f   2.91   3.00   2.86
  g   H3PO4   HCl   HCl
  h   325   390   414
  i   0.88   0.66   0.33
  j   325   390   414
  k   28   25   27
  l   PVDF   PVDF   PVDF
  m   5,000   5,000   5,000
  n   28   30   30
  o   140   125   135
  p   29   28   29
  q   12.87   9.54   4.59
  r   59.0   73.2   48.0
  s   102.60   101.07   97.25
  t   57   40.5   12
从表61中的数据可以看出，对大豆蛋白源的热处理越大，最终分离物中胰蛋白酶抑制剂的活性越低。
实施例35
本实施例说明大豆蛋白源中加入亚硫酸钠对本文提供的新颖酸溶性大豆分离蛋白(S701H)的胰蛋白酶抑制剂活性的影响。
在环境温度下，将′a′公斤经最小程度热加工的脱脂豆粉加入到′b′升0.15MCaCl2溶液中，搅拌20分钟。然后加入′c′公斤亚硫酸钠，将混合物搅拌另外10分钟，得到蛋白水溶液。除去残余豆粕，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′d′升经过滤的蛋白溶液，其具有′e′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加入到′f′体积反渗透(RO)纯化水中，用稀HCl将所述样品的pH降至′g′。然后将经稀释和酸化的溶液在90℃下热处理1分钟。
通过在具有′k′道尔顿截留分子量的′j′膜上浓缩(在约′l′℃的温度下操作)，将经稀释、酸化和热处理的蛋白提取物溶液的体积从′h′升减小至′i′升。在此时间点，用′n′升RO水将蛋白含量为′m′重量％的经酸化的蛋白溶液渗滤，其中所述渗滤操作在约′o′℃下进行。然后将经渗滤的溶液进一步浓缩至体积为′p′升，蛋白含量为约′q′重量％，并且用额外′r′升RO水渗滤，其中所述渗滤操作在约′s′℃下进行。该第二次渗滤后，将所述蛋白溶液浓缩至蛋白含量为约′t′重量％，然后用水稀释至蛋白含量为′u′重量％，以促进喷雾干燥。回收喷雾干燥前的蛋白溶液，收率为初始经过滤的蛋白溶液的′v′重量％。然后将经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液干燥，得到产品，发现所述产品具有′w′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。发现所述干燥产品的胰蛋白酶抑制剂活性为′x′胰蛋白酶抑制剂单位(TIU)/mg蛋白(Nx6.25)。将所述产品命名为′y′S701H。
用于两次运行的参数′a′至′y′列于下表62中：
表62-用于制备S701H的运行的参数
  y   S010-G21-09A   S010-G28-09A
  a   22.5   22.68
  b   300   300
  c   0.6   0
  d   280   270.4
  e   1.89   1.95
  f   1   1
  g   2.98   2.96
  h   560   535
  i   92   98
  j   PES   PES
  k   100,000   100,000
  l   31   30
  m   5.15   3.74
  n   100   100
  o   31   30
  p   46   49
  q   8   7
  r   300   300
s 30 30
  t   17   15
  u   7.45   7.16
  v   75.6   59.4
  w   100.67   100.44
  x   7.5   27.7
从表62的结果可以看出，采用所加入的亚硫酸钠的方法得到具有更低胰蛋白酶抑制剂活性的分离物。
实施例36
本实施例说明干燥前将亚硫酸钠加入到经渗滤的浓缩蛋白溶液中对本文提供的新颖酸溶性大豆分离蛋白(S701H)的胰蛋白酶抑制剂活性的影响。
在环境温度下，将′a′公斤经最小程度热加工的脱脂豆粉加入到′b′升0.15MCaCl2溶液中，搅拌30分钟，得到蛋白水溶液。除去残余豆粕，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升经过滤的蛋白溶液，其具有′d′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加入到′e′体积反渗透(RO)纯化水中，用稀HCl将所述样品的pH降至′f′。然后将经稀释和酸化的溶液在90℃下热处理1分钟。
通过在具有′j′道尔顿截留分子量的′i′膜上浓缩(在约′k′℃的温度下操作)，将经稀释、酸化和热处理的蛋白提取物溶液的体积从′g′升减少至′h′升。在此时间点，用′m′升RO水将蛋白含量为′l′重量％的经酸化的蛋白溶液渗滤，其中所述渗滤操作在约′n′℃下进行。然后将经渗滤的溶液进一步浓缩至′o′升体积，蛋白含量为约′p′重量％，并且用额外的′q′升RO水进行渗滤，其中所述渗滤操作在约′r′℃下进行。该第二次渗滤后，将所述蛋白溶液浓缩至蛋白含量为约′s′重量％，然后用水稀释至蛋白含量为′t′重量％，以促进喷雾干燥。回收喷雾干燥前的蛋白溶液，其收率为初始经过滤的蛋白溶液的′u′重量％。然后将所述经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液分成两份。将对照部分(25.1kg)干燥，得到产品，发现所述产品具有′v′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量和′w′胰蛋白酶抑制剂单位(TIU)/mg蛋白(Nx6.25)的胰蛋白酶抑制剂活性。将所述产品命名为′x′S701H-01。向另一份经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液(25.1kg)中加入′y′毫克亚硫酸钠。然后干燥该样品，得到产品，发现所述产品具有′z′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量和′aa′胰蛋白酶抑制剂单位(TIU)/mg蛋白(Nx6.25)的胰蛋白酶抑制剂活性。将所述产品命名为′x′S701H-02。
用于一次运行的参数′a′至′aa′陈述于下表63中：
表63-用于制备S701H-01和S701H-02的运行的参数
  x   S010-G16-09A
  a   22.68
  b   300
  c   280
  d   1.60
  e   1
  f   2.98
  g   560
  h   76
  i   PES
  j   100,000
  k   50
  l   4.51
  m   100
  n   50
  o   38
  p   8
  q   300
  r   50
  s   16
  t   6.94
  u   77.7
  v   102.17
  w   15.1
  y   17.57
  z   102.61
  aa   6.8
从表63的结果可以看出，干燥前向经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液中加入亚硫酸钠降低了分离物的胰蛋白酶抑制剂活性。
实施例37
本实施例说明膜加工的pH对本文提供的新颖酸溶性大豆分离蛋白(S701)的胰蛋白酶抑制剂活性的影响。
在环境温度下，将′a′公斤脱脂的白色豆片加入到′b′升0.15M CaCl2溶液中，搅拌30分钟。除去残余的豆片，通过离心和过滤使所得蛋白溶液澄清，以制备′c′升经过滤的蛋白溶液，其具有′d′重量％的蛋白含量。
然后将经过滤的蛋白溶液加入到′e′体积反渗透(RO)纯化水中，用稀HCl将样品的pH降至′f′。不对所述经稀释和酸化的溶液进行热处理。
通过在具有′j′道尔顿截留分子量的′i′膜上浓缩(在约′k′℃的温度下操作)，将经稀释和酸化的蛋白提取物溶液的体积从′g′升降至′h′升。在此时间点，用′m′升′n′RO水将蛋白含量为′l′重量％的经酸化的蛋白溶液渗滤，其中所述渗滤操作在约′o′℃下进行。然后将经渗滤的溶液进一步浓缩至体积为′p′升和蛋白含量为约′q′重量％，用额外的′r′升′s′RO水进行渗滤，其中所述渗滤操作在约′t′℃下进行。回收所述蛋白溶液，收率为初始经过滤的蛋白溶液的′u′重量％。然后将所述经酸化、渗滤的浓缩蛋白溶液′v′并干燥，得到产品，发现所述产品具有′w′％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。发现所述干燥产品的胰蛋白酶抑制剂活性为′x′胰蛋白酶抑制剂单位(TIU)/mg蛋白(Nx6.25)。将所述产品命名为′y′S701。
用于两次运行的参数′a′至′y′陈述于下表64中：
表64-用于制备S701的运行的参数
  y   S013-I15-09A   S013-I24-09A
  a   30   30
  b   300   300
  c   265   280
  d   1.87   1.90
  e   1   1
  f   2.85   2.01
  g   540   560
  h   84   93
  i   PES   PES
  j   100,000   100,000
  k   30   30
  l   5.57   5.15
  m   100   115
  n   中性pH   pH 2
  o   30   29
  p   42   47
  q   10   10
  r   300   345
  s   中性pH   pH 2
  t   29   29
  u   87.5   88.3
  v   ---   用稀NaOH调整至pH 3.00
  w   100.46   98.97
  x   70.0   55.7
从表64的结果可以看出，用约pH 2下的膜加工制备的分离物比用约pH3下的膜加工制备的分离物具有更低的胰蛋白酶抑制剂活性。
公开内容总结
本公开内容的总结中，本发明提供新颖的大豆蛋白产品，其可为分离物的形式，其是完全可溶的，在酸性pH下形成透明的热稳定溶液，并且有用于含水系统的蛋白强化而不导致蛋白沉淀，所述含水系统包括软饮料和运动饮料。在本发明的范围内进行修改是可能的。

Claims (17)

1.制备具有至少60wt％的蛋白含量的大豆蛋白产品的方法，其中蛋白含量基于干重由凯氏定氮法Nx6.25所确定，其特征在于：
(a)用任选含有抗氧化剂的钙盐水溶液提取大豆蛋白源，
(b)将大豆蛋白水溶液与残余的大豆蛋白源分离，
(c)稀释所述大豆蛋白水溶液至电导率小于70mS，
(d)任选用吸附剂处理所述大豆蛋白水溶液，以从大豆蛋白水溶液中除去有颜色和/或有臭味的化合物，
(e)将大豆蛋白水溶液的pH调节为1.5至4.4，以制备经酸化的澄清大豆蛋白溶液，
(f)任选通过使用选择性膜技术将所述澄清的大豆蛋白水溶液浓缩，同时保持离子强度基本恒定，以制备经浓缩、酸化的澄清大豆蛋白水溶液，其具有50至300g/L的蛋白浓度，
(g)任选对所述经浓缩的大豆蛋白溶液进行渗滤，
(h)任选用吸附剂处理所述任选经浓缩的和/或任选经渗滤的酸化的澄清大豆蛋白溶液，以除去有颜色和/或有臭味的化合物，
(i)任选对任选经浓缩的和/或任选经渗滤的酸化的大豆蛋白溶液进行巴氏消毒，在55℃至70℃的温度下进行30秒至60分钟，和
(j)将任选经浓缩的且任选经渗滤的大豆蛋白溶液干燥，以得到具有至少60wt％的大豆蛋白含量的大豆蛋白产品，其中大豆蛋白含量基于干重由凯氏定氮法Nx6.25所确定。
2.权利要求1所述的方法，其特征在于所述钙盐水溶液为具有少于1.0M的浓度的氯化钙水溶液，和/或将所述大豆蛋白水溶液的pH调节为2至4，和/或任选将所述澄清大豆蛋白水溶液浓缩至100至200g/L的蛋白浓度，和/或任选对任选经浓缩的和/或任选经渗滤的酸化的大豆蛋白溶液进行巴氏消毒，在55℃至70℃的温度下进行10至15分钟。
3.权利要求2所述的方法，其特征在于所述氯化钙水溶液具有0.10至0.15M的浓度。
4.权利要求1所述的方法，其特征在于所述大豆蛋白产品具有至少90wt％的大豆蛋白含量，其中大豆蛋白含量基于干重由凯氏定氮法Nx6.25所确定。
5.权利要求1所述的方法，其特征在于在15℃至35℃的温度下实施所述提取步骤，并且所述钙盐水溶液具有5至11的pH。
6.权利要求5所述的方法，其特征在于所述钙盐水溶液具有5至7的pH。
7.权利要求1所述的方法，其特征在于是用1至10体积具有2℃至70℃的温度的水来实施所述稀释步骤，以使所述大豆蛋白溶液的电导率为4至18mS。
8.权利要求7所述的方法，其特征在于是所述水具有10℃至50℃的温度。
9.权利要求1所述的方法，其特征在于所述经酸化的澄清大豆蛋白溶液具有小于70mS的电导率。
10.权利要求9所述的方法，其特征在于所述经酸化的澄清大豆蛋白溶液具有4至23mS的电导率。
11.权利要求1所述的方法，其特征在于使所述经酸化的澄清蛋白水溶液经受热处理步骤，以使热不稳定的抗营养因子失活；和/或所述热处理步骤还对所述经酸化的澄清蛋白水溶液进行巴氏消毒，所述热处理步骤在70℃至100℃的温度下实施10秒钟至60分钟。
12.权利要求11所述的方法，其特征在于将经热处理的酸化的澄清大豆分离蛋白冷却至2℃至60℃的温度，用于进一步加工。
13.权利要求1所述的方法，其特征在于任选在抗氧化剂的存在下，在将经酸化的澄清大豆蛋白溶液部分或完全浓缩之前或之后，使用水或经酸化的水对所述经酸化的澄清大豆蛋白溶液实施所述任选的渗滤步骤，使用2至40体积渗滤溶液。
14.权利要求13所述的方法，其特征在于实施所述任选的渗滤步骤直到在渗透物中不存在显著的额外量的污染物和可见颜色，和/或直到保留物已被充分纯化，以致当干燥时提供具有至少90wt％的蛋白含量的大豆分离蛋白，其中蛋白含量基于干重由凯氏定氮法Nx6.25所确定。
15.权利要求1所述的方法，其特征在于使用具有3,000至1,000,000道尔顿截留分子量的膜实施所述任选的浓缩步骤和/或所述任选的渗滤步骤。
16.权利要求15所述的方法，其特征在于在2℃至60℃的温度下进行所述任选的浓缩步骤和/或任选的渗滤步骤。
17.权利要求1至16中任一项所述的方法，其特征在于还原剂存在于以下情况中，以破坏胰蛋白酶抑制剂的二硫键或使胰蛋白酶抑制剂的二硫键重排，以实现胰蛋白酶抑制剂活性的降低：
(a)在提取步骤期间，和/或，
(b)在任选的浓缩和任选的渗滤步骤中，和/或，
(c)在干燥步骤前的任选的经浓缩和/或任选经渗滤的大豆蛋白溶液中，和/或通过干燥步骤制备的经干燥的大豆蛋白产品中。
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Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8563071B2 (en) * 2008-10-21 2013-10-22 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of soluble protein solutions from soy (“S701” CIP)
PL2389073T3 (pl) 2009-01-26 2014-12-31 Burcon Nutrascience Mb Corp Wytwarzanie rozpuszczalnego produktu z białkiem sojowym, z masy miceralnej białka sojowego ("S200Ca")
WO2010091511A1 (en) * 2009-02-11 2010-08-19 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Preparation of soy protein product using water extraction ("s803")
US9603377B2 (en) * 2009-02-11 2017-03-28 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of soy protein product using calcium chloride extraction (“S7301”)
DK2429310T3 (da) * 2009-05-14 2022-01-24 Burcon Nutrascience Mb Corp FREMSTILLING AF CANOLAPROTEINPRODUKT UDEN VARMEBEHANDLING ("C200CaC")
KR101918077B1 (ko) * 2009-06-30 2018-11-13 버콘 뉴트라사이언스 (엠비) 코포레이션 산 용해가능한 콩 단백질 분리물의 제조방법 및 그 제품(“ｓ７００”)
US8389040B2 (en) 2009-06-30 2013-03-05 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of acid soluble soy protein isolates (“S700”)
NZ597838A (en) * 2009-06-30 2014-01-31 Burcon Nutrascience Mb Corp Production of acid soluble soy protein isolates (”s800”)
US8404299B2 (en) * 2009-06-30 2013-03-26 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Preparation of soy protein isolate using calcium chloride extraction (“S703 CIP”)
KR101828360B1 (ko) * 2009-06-30 2018-02-12 버콘 뉴트라사이언스 (엠비) 코포레이션 염화칼슘 추출을 사용한 콩 단백질 분리물의 제조방법 및 그 제품(“ｓ７０３”)
US9700066B2 (en) 2009-06-30 2017-07-11 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Preparation of soy protein isolate using calcium chloride extraction (“S703 cip”)
BR112012018753A2 (pt) * 2009-12-22 2015-09-01 Burcon Nutrascience Mb Corp Proteína isolada com ph ajustado e usos
US20130040038A1 (en) * 2010-01-04 2013-02-14 Sarah Medina Stabilization of citrus fruit beverages comprising soy protein
CA2796643C (en) * 2010-05-07 2021-01-05 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of soluble protein solutions from pulses
US20120135117A1 (en) * 2010-05-07 2012-05-31 Segall Kevin I Production of soluble protein solutions from pulses
US10506821B2 (en) 2010-05-07 2019-12-17 Burcon Mutrascience (Mb) Corp. Production of soluble protein solutions from pulses
PL2605666T3 (pl) * 2010-08-18 2022-06-13 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Ulepszone wytwarzanie roztworów białkowych z soi
WO2012037651A1 (en) * 2010-09-22 2012-03-29 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Counter-current extraction of oil seed protein source
AU2011349004B2 (en) * 2010-11-24 2016-02-25 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Astringency in soy protein solutions
US20140010948A1 (en) * 2010-12-16 2014-01-09 Kevin I. Segall Soy protein products of improved water-binding capacity
KR20140030248A (ko) 2011-05-19 2014-03-11 버콘 뉴트라사이언스 (엠비) 코포레이션 용해가능한 콩단백질 제품(“ｓ７０４”)의 제조방법
WO2012159199A1 (en) * 2011-05-25 2012-11-29 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of soy protein product
EP2725913A4 (en) * 2011-06-29 2015-03-04 Solae Llc BEVERAGE COMPOSITIONS COMPRISING SOYAMOL PROTEINS ISOLATED FROM PROCESSING STREAMS
JP5698871B2 (ja) * 2011-06-29 2015-04-08 ソレイ リミテッド ライアビリティ カンパニー 加工ストリームから単離された大豆ホエータンパク質を含んでなるデザート組成物
US20140127381A1 (en) * 2011-06-29 2014-05-08 Solae Llc Liquid food compositions comprising soy whey proteins that have been isolated from processing streams
JP2015509370A (ja) * 2012-03-08 2015-03-30 バーコン ニュートラサイエンス （エムビー） コーポレイションＢｕｒｃｏｎ Ｎｕｔｒａｓｃｉｅｎｃｅ （Ｍｂ） Ｃｏｒｐ． 大豆タンパク質製品を使用するフローズンデザートミックス
US20140010940A1 (en) * 2012-06-25 2014-01-09 Brent E. Green Soy protein product with neutral or near neutral ph ("s701n2")
KR20150036370A (ko) * 2012-07-10 2015-04-07 버콘 뉴트라사이언스 (엠비) 코포레이션 Ph 조정된 콩류 단백질 제품
RU2728862C2 (ru) * 2012-08-02 2020-07-31 Баркон Ньютрасайнс (Мб) Корп. Получение продуктов растворимого белка из конопли ("н701")
US20140093626A1 (en) * 2012-10-02 2014-04-03 Kevin I. Segall Production of pulse protein product using calcium chloride extraction ("yp702")
US9635875B2 (en) * 2013-05-30 2017-05-02 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of pulse protein products with reduced astringency
CA3181156A1 (en) 2014-07-28 2016-02-04 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Preparation of pulse protein products ("yp810")
US10433571B2 (en) * 2014-08-27 2019-10-08 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Preparation of soy protein products (“S810”)
TW201616975A (zh) * 2014-10-01 2016-05-16 柏康營養科學公司 具減少澀味之大豆蛋白質產品的製法（ｉｉ）
CN106490626A (zh) * 2015-09-06 2017-03-15 青海合杰生物制品有限责任公司 一种豆类中营养物质综合提取纯化方法
CN107047926B (zh) * 2017-05-19 2020-06-26 山东禹王生态食业有限公司 一种耐高温型大豆蛋白的制备方法
CN107118360A (zh) * 2017-06-10 2017-09-01 复旦大学 一种大豆分离蛋白基天然高分子水凝胶及其制备方法
JP7142795B1 (ja) * 2022-03-02 2022-09-27 サントリーホールディングス株式会社 植物原料を含有する容器詰め飲料の製造方法
WO2024094753A1 (en) * 2022-11-03 2024-05-10 Frieslandcampina Nederland B.V. Confectionary mass rich in whey protein

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3736147A (en) * 1971-04-05 1973-05-29 Coca Cola Co Process for preparing protein products
US5874538A (en) * 1995-10-31 1999-02-23 Morinaga & Co., Ltd. Process for producing soybean protein
CN1494383A (zh) * 2001-02-28 2004-05-05 ������������ʽ���� 大豆蛋白质、其生产方法及应用它的酸性蛋白质食物
CA2564400A1 (en) * 2004-05-07 2005-11-17 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Protein isolation procedures for reducing phytic acid

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2288476A1 (fr) 1974-10-23 1976-05-21 Agronomique Inst Nat Rech Procede pour l'obtention d'isolats purifies de proteines
US4088795A (en) 1976-11-19 1978-05-09 Mead Johnson & Company Low carbohydrate oilseed lipid-protein comestible
CA1099576A (en) 1978-03-23 1981-04-21 Chester D. Myers Improved process for isolation of proteins
DE2834227A1 (de) * 1978-08-04 1980-02-28 Merck Patent Gmbh Hypo- beta -lipoproteinaemisches diaetetikum, verfahren zu seiner herstellung und verwendung
US4307118A (en) * 1979-06-08 1981-12-22 The Texas A & M University System Process for preparing a curd-like product from cottonseed and other oilseeds
US4296026A (en) 1980-09-22 1981-10-20 General Foods Inc. Production of soybean protein isolate of improved purity
US4697004A (en) 1985-09-06 1987-09-29 Bristol-Myers Company Process for preparing low phytate soy protein isolate
JPS62143653A (ja) 1985-11-26 1987-06-26 San Ei Chem Ind Ltd 食品ゲル
US5086166A (en) * 1987-02-13 1992-02-04 The Texas A&M University System Protein foods and food ingredients and processes for producing them from defatted and undefatted oilseeds
US4889921A (en) * 1987-04-29 1989-12-26 The University Of Toronto Innovations Foundation Production of rapeseed protein materials
IE914558A1 (en) 1991-02-28 1992-09-09 Abbott Lab Isolation of proteins by ultrafiltration
JP3399668B2 (ja) 1994-01-07 2003-04-21 不二製油株式会社 分画大豆蛋白の製造法及びこれを用いた食品
WO1995027406A1 (en) 1994-04-06 1995-10-19 Novo Nordisk A/S Dietetic soy based product, method for production thereof and use thereof
JP3383130B2 (ja) 1995-08-01 2003-03-04 不二製油株式会社 低アレルゲン大豆蛋白及びその製造法
US5844086A (en) 1996-01-31 1998-12-01 Stilts Corporation Oil seed protein extraction
JP3864504B2 (ja) 1997-07-23 2007-01-10 アイシン精機株式会社 サンルーフ用駆動装置
US20010018197A1 (en) 1997-12-23 2001-08-30 Protein Technologies International, Inc. Method for producing ultrapure vegetable protein materials
JP3409706B2 (ja) 1998-09-14 2003-05-26 不二製油株式会社 大豆蛋白の製造法
US7429399B2 (en) 2001-06-18 2008-09-30 Solae, Llc Modified oilseed material
US6630195B1 (en) 2000-11-21 2003-10-07 Cargill, Incorporated Process for producing oilseed protein products
US7687087B2 (en) * 2001-05-04 2010-03-30 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of oil seed protein isolate
US8048463B2 (en) * 2001-05-29 2011-11-01 Levente Laszlo Diosady Production of high-quality protein isolated from oil seeds
WO2002096214A1 (en) * 2001-05-29 2002-12-05 Levente Laszlo Diosady Production of high-quality protein isolates from defatted meals of brassica seeds
EP1489918A1 (en) * 2002-04-03 2004-12-29 Solae, Llc Process for producing a high solubility, low viscosity, isoflavone-enriched soy protein isolate and the products thereof
KR100437340B1 (ko) * 2002-05-13 2004-06-25 삼성에스디아이 주식회사 리튬 이차 전지용 양극 활물질의 제조 방법
US6720195B2 (en) * 2002-05-15 2004-04-13 Micron Technology, Inc. Methods employing elevated temperatures to enhance quality control in microelectronic component manufacture
JP4330627B2 (ja) 2003-08-01 2009-09-16 バーコン ニュートラサイエンス （エムビー） コーポレイション 亜麻タンパク質単離物の調製方法
JP2007510431A (ja) 2003-11-05 2007-04-26 ケリー グループ サーヴィシーズ インターナショナル、リミテッド 酸安定大豆タンパク及び強化食品又は飲料
EP1698239A4 (en) * 2003-12-19 2008-05-21 Fuji Oil Co Ltd SAUCE PROTEIN CONTAINING FOOD OR DRINK AND MATERIAL THEREFOR
ZA200610169B (en) * 2004-05-07 2008-06-25 Burcon Nutrascience Mb Corp Protein isolation procedures for reducing phytic acid
US8142832B2 (en) 2004-10-21 2012-03-27 Iowa State University Research Foundation, Inc. Vegetable protein fractionization process and compositions
ME01370B (me) * 2005-04-01 2010-06-30 Hamlet Protein As Produkt fermentiranog proteina
US8478947B2 (en) * 2005-07-05 2013-07-02 Arm Limited Memory controller
US20070014910A1 (en) * 2005-07-18 2007-01-18 Altemueller Andreas G Acidic, protein-containing drinks with improved sensory and functional characteristics
US20070014909A1 (en) 2005-07-18 2007-01-18 Jimbin Mai Acidic, protein-containing drinks with improved sensory and functional characteristics
NZ567517A (en) * 2005-09-21 2011-09-30 Burcon Nutrascience Mb Corp Preparation of canola protein isolate involving isoelectric precipitation
CN101686708A (zh) 2007-04-26 2010-03-31 不二制油株式会社 酸溶性大豆蛋白质的制备方法
WO2009006144A1 (en) 2007-06-29 2009-01-08 Abbott Laboratories Process for making soy protein isolates
US20100036099A1 (en) 2008-07-11 2010-02-11 Martin Schweizer Soluble canola protein isolate production ("nutratein")
EP2826383B1 (en) 2008-07-11 2017-09-06 Burcon Nutrascience (MB) Corp. Soluble canola protein isolate production
US8999426B2 (en) 2008-08-18 2015-04-07 Burcon Nutra Science (MB) Corp. Production of canola protein isolate without heat treatment
NZ591364A (en) 2008-08-19 2013-03-28 Burcon Nutrascience Mb Corp Soluble canola protein isolate production from protein micellar mass
US8011662B2 (en) * 2009-07-22 2011-09-06 David N Black Three dimensional maze puzzle and game

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3736147A (en) * 1971-04-05 1973-05-29 Coca Cola Co Process for preparing protein products
US5874538A (en) * 1995-10-31 1999-02-23 Morinaga & Co., Ltd. Process for producing soybean protein
CN1494383A (zh) * 2001-02-28 2004-05-05 ������������ʽ���� 大豆蛋白质、其生产方法及应用它的酸性蛋白质食物
CA2564400A1 (en) * 2004-05-07 2005-11-17 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Protein isolation procedures for reducing phytic acid

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