JP6599539B2 - 画像取得装置および画像取得方法 - Google Patents
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Description
本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、ロックインアンプを使用する場合と比較して、より短い露光時間で、必要な感度を得ることができる画像取得装置および画像取得方法を提供することを目的としている。
また、上記態様においては、前記信号制御部が、前記光制御部、前記周波数シフト手段および前記積分器のいずれか1つに入力する前記周期信号を基準として、他の2つを連動させるように、他の2つに入力する前記周期信号の位相調整を行ってもよい。
また、上記態様においては、前記信号制御部が、前記光制御部、前記周波数シフト手段および前記積分器のいずれかに設けられていてもよい。
オフセット機能を有するA/D変換器により、検出信号の分解能を向上することができる。
本実施形態に係る画像取得装置1は、共焦点顕微鏡であって、レーザ光(照明光)を射出する光源2と、光源2からのレーザ光の位置を時間的に変調する光制御部3とを備えている。また、画像取得装置1は、光制御部3により時間的に変調されたレーザ光を2次元的に走査するスキャナ(走査部)4と、該スキャナ4により走査されたレーザ光を試料Aに集光する一方、試料Aにおけるレーザ光の照射位置において発生した蛍光を集光する対物レンズ(光学系)5とを備えている。
また、光制御部3および演算部9にはこれらを同期させる所定の周期信号を発生する信号制御部11が接続されている。
検出器8により検出された検出信号は、A/D変換器によってデジタル信号に変換された後に、周波数シフト手段16に入力されるようになっている。
これにより、対物レンズ5の焦点位置において発生した蛍光と焦点外において発生した焦点外蛍光とが混合された蛍光から焦点外蛍光を減算した蛍光、すなわち、対物レンズ5の焦点位置において発生した蛍光のみを算出することができるようになっている。
本実施形態に係る画像取得方法は、信号制御部11が発生した所定の周期で繰り返される周期信号に従って、光源2から射出されたレーザ光の位置を時間的に変調する変調ステップS1と、変調されたレーザ光をスキャナ4によって試料Aにおいて走査する走査ステップS2と、走査されたレーザ光の各走査位置において発生した蛍光を検出して検出信号を生成する検出ステップS3と、生成された検出信号の周波数を、信号制御部11が発生した周期信号の周期分だけシフトする周波数シフトステップS4と、シフトされた検出信号を信号制御部11が発生した周期信号の周期の整数倍の積分時間で積分する積分ステップS5とを含んでいる。
信号制御部11は、光制御部3、周波数シフト手段16および積分器17のいずれか1つに入力する周期信号を基準として、他の2つを連動させるように他の2つに入力する周期信号の位相を調整する位相調整機能を有していてもよい。
例えば、信号制御部11が光制御部3に備えられ、光制御部3がそれ自体で発生する周期信号によって制御されるとともに、光制御部3が発生する周期信号によって周波数シフト手段16および積分器17が制御されることにしてもよい。
また、積分器17としてデジタル積分器を採用することにより、コンデンサ開放の時間が不要となり高速処理を行うことができるという利点がある。
オフセット調整によってノイズを打ち消すことができるとともに、所望の信号に多くのメモリを割り当てることができダイナミックレンジを向上できるという利点がある。
また、光制御部3として、音響光学偏光器あるいは電気光学偏光器等のレーザ光の向きを変更するデバイスを採用してもよい。
図4に示す例では、光源18は極短パルスレーザ光を射出するレーザ光源であり、蛍光を極短パルスレーザ光の光路から分岐するダイクロイックミラー6は、対物レンズ5とスキャナ4との間に配置されている。また、図1に備えられていたピンホール7が除外されている。
2,24 光源
3,20a,20b 光制御部
4,22 スキャナ(走査部)
5 対物レンズ(光学系)
8,23 検出器
9,21a,21b 演算部
11,22a,22b 信号制御部
16 周波数シフト手段
17 積分器
19a,19b レーザ光源(光源)
A 試料
S1 変調ステップ
S2 走査ステップ
S3 検出ステップ
S4 周波数シフトステップ
S5 積分ステップ
Claims (8)
- 光源から射出された照明光を走査する走査部と、
該走査部により走査される前記照明光を試料に集光する一方、該試料の各走査位置において発生した信号光を集光する光学系と、
該光学系により集光された前記信号光を検出して検出信号を生成する検出器と、
所定の周期で繰り返される周期信号を発生させる信号制御部と、
該信号制御部が発生した前記周期信号に従い、前記照明光の位置または強度を時間的に制御する光制御部と、
前記信号制御部が発生した前記周期信号に従い、前記検出器により生成された前記検出信号を処理する演算部とを備え、
該演算部が、前記信号制御部が発生した前記周期信号の周期分だけ前記検出信号の周波数をシフトする周波数シフト手段と、該周波数シフト手段によりシフトされた前記検出信号を前記周期信号の周期の整数倍の積分時間で積分する積分器とを備える画像取得装置。 - 前記光制御部が、前記周期信号に従い、前記照明光の位置または強度を2つの状態間で交互に切り替える請求項1に記載の画像取得装置。
- 前記信号制御部が、前記光制御部、前記周波数シフト手段および前記積分器のいずれか1つに入力する前記周期信号を基準として、他の2つを連動させるように、他の2つに入力する前記周期信号の位相調整を行う請求項1または請求項2に記載の画像取得装置。
- 前記信号制御部が、前記光制御部、前記周波数シフト手段および前記積分器のいずれかに設けられている請求項3に記載の画像取得装置。
- 前記検出信号をデジタル化するA/D変換器を備え、
前記周波数シフト手段が、前記周期信号に従って前記検出信号にデジタル符号割り当てを行い、
前記積分器がデジタル積分を行う請求項1から請求項4のいずれかに記載の画像取得装置。 - 前記A/D変換器が、オフセット調整機能を有する請求項5に記載の画像取得装置。
- 前記照明光が複数の経路を経由して前記試料に照射され、
前記光制御部、前記信号制御部および前記演算部の少なくとも1つが、各前記経路を経由する各前記照明光に対応して複数備えられている請求項1から請求項6のいずれかに記載の画像取得装置。 - 所定の周期で繰り返される周期信号に従って、光源から射出された照明光の位置または強度を時間的に制御する変調ステップと、
該変調ステップにおいて制御された照明光を試料において走査する走査ステップと、
該走査ステップにおいて走査された照明光の各走査位置において発生した信号光を検出して検出信号を生成する検出ステップと、
該検出ステップにおいて生成された前記検出信号の周波数を、前記周期信号の周期分だけシフトする周波数シフトステップと、
該周波数シフトステップによりシフトされた前記検出信号を前記周期信号の周期の整数倍の積分時間で積分する積分ステップとを含む画像取得方法。
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