JP6556369B2 - ピリミジン又はピリドピロドン類化合物、及びその応用 - Google Patents

Description

本発明は、薬物を調製する技術分野に関し、特にピリミジン又はピリドピリドン類化合物、及びその応用に関する。

サイクリン依存性キナーゼ（ｃｙｃｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ，ＣＤＫ）とサイクリン（ｃｙｃｌｉｎ）は、細胞周期の制御の重要な因子である。ＣＤＫは、ｃｙｃｌｉｎと結合してヘテロ二量体を形成することができる。そのうち、ＣＤＫは触媒サブユニットであり、ｃｙｃｌｉｎは調整サブユニットであり、様々なｃｙｃｌｉｎ-ＣＤＫ複合体を形成し、異なる基質をリン酸化させて、細胞周期の異なる時相に対してプロモーションと変換の機能を有している。

哺乳動物においては、少なくとも９種類のＣＤＫが存在している。細胞は、Ｇ１期からＳ期へ変換するとき、主にＧ１期のＣＤＫキナーゼにより制御される。Ｇ１期のサイクリン（ｃｙｃｌｉｎｇ）と結合するＣＤＫキナーゼは、主にＣＤＫ２、ＣＤＫ４及びＣＤＫ６を含む。ｃｙｃｌｉｎ Ｄは、主にＣＤＫ４及びＣＤＫ６と結合して後者の活性を調整する。ｃｙｃｌｉｎ ＥはＧ１／Ｓ期にＣＤＫ２と結合して、ＣＤＫ２のキナーゼ活性を呈して細胞がＳ期に入るのを促進する。Ｇ２／Ｍ期は主にＣＤＫ１キナーゼにより制御され、Ｃｙｃｌｉｎ Ａ、ｃｙｃｌｉｎ ＢはＣＤＫ１と結合し、ＣＤＫ１は基質タンパク質をリン酸化させる。ヒストンＨ１をリン酸化させると染色体の凝縮を引き起こし、また、核薄層タンパク質をリン酸化させると核膜を解体させる。Ｍ期において、Ｍ期促進因子（ＭＰＦ）は、後期促進複合体ＡＰＣを活性化し、ユビキチンをｃｙｃｌｉ Ａ及びｃｙｃｌｉｎ Ｂに接続させ、マルチユビキチン化することでこれらをプロテアソームに分解させ、１つの細胞周期を完成させる（Ｍａｌｕｍｂｒｅｓ Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １１：１２７５，２００９；Ｍａｌｕｍｂｒｅｓ Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ９：１５３，２００９）。

細胞周期の制御不能なことは、ヒト腫瘍の共通特徴の１つである。腫瘍細胞においては、通常、不規則の増殖、ゲノム不安定性（ＤＮＡの突然変異の増加、及び染色体突然変異）、及び染色体不安定性（染色体の数増加）が生じる。細胞周期は、ＣＤＫｓファミリーキナーゼにより制御される。腫瘍細胞においては、ＣＤＫｓ自身又はこれらのモジュレーター又はマイトジェンの上流通路の関連遺伝子と表遺伝子が変化するため、ＣＤＫｓ活性の異常が発生する（Ｃｉｃｅｎａｓ Ｊ．Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １４７：１４０９，２０１１；Ｒｉｚｚｏｌｉｏ Ｆ． ｅｔ ａｌ． Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ １１：２７９，２０１０）。

過去１０年間、ＣＤＫ阻害剤が抗腫瘍新薬として開発されることは、世界の製薬業界においてホットスポットとなっており、２０種類も超えるＣＤＫ阻害剤が臨床開発に移行された。ＣＤＫ阻害剤は、抗腫瘍の臨床前の薬力学結果が顕著であるが、臨床試験の結果が良くないのが多かった。主たる問題点は、固形腫瘍に対する効能の欠如と、毒性が強いことを含む（Ｇｕｈａ Ｍ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓ １１：８９２，２０１２）。効能及び毒性の原因で、ＣＤＫ阻害剤ＡＧ−２４３２２、ＺＫ−３０４７０９、ＳＮＳ−０３２、Ｒ５４７、Ｓｅｌｉｃｉｃｌｉｂ、及びＡＺＤ５４３８の臨床研究は止められてしまった。深刻な毒性副作用が発生する原因を分析したところ、これらの薬物は、ＣＤＫのサブタイプに対する阻害は選択性が欠けていたため、深刻な毒性副作用が発生したことを見出した。

近年の研究により、ＣＤＫ１は正常の細胞周期の制御に関与することが判った。他のＣＤＫｓが阻害されている場合、ＣＤＫ１の活性が守られれば正常な細胞周期が維持される。ＣＤＫ阻害剤の毒性副作用はＣＤＫ１及びＣＤＫ２の阻害に関連する。これに対して、ＣＤＫ４及びＣＤＫ６サブタイプは、哺乳動物の細胞周期に必要なものでなく、特殊な細胞タイプの増殖のみにおいて重要な役割を果たし、腫瘍を抑制する肝心なターゲットとなっている（Ｇｕｈａ Ｍ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓ １１：８９２，２０１２）。

ＣＤＫ４とＣＤＫ６とは、緊密に関連し合っており、腫瘍細胞周期においてＣｙｃｌｉｎ Ｄと結合してＧ１期からＳ期に入るのを促進し、ＤＮＡの複製と細胞分裂の細胞周期プロセスに必要な二つのキナーゼである。９０％も超えるヒト腫瘍において、各種の遺伝子及び生化学的適応によりＧ１からＳ期への移行制御メカニズムが変化してしまったことが発見された。Ｐ１６とヒト網膜芽細胞腫抑制タンパク質（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ，Ｒｂ）とは、重要な腫瘍抑制タンパク質であり、細胞周期を制御することができる。Ｐ１６遺伝子タンパク質は、ＣＤＫ４、ＣｙｃｌｉｎＤ１及びＲｂのフィードバックループを阻害し、Ｒｂのタンパク質の活性を調整することにより、細胞の過増殖を防止して、腫瘍を抑制する。ヒト腫瘍（例えば、乳がんと骨髄腫）においては、ＣＤＫ４とＣＤＫ６の活性化により細胞周期が変化することが証明された。ＣＤＫ４とＣＤＫ６を阻害することにより、腫瘍抑制タンパク質Ｒｂの不活性化を阻止し、腫瘍細胞周期の進行を干渉することができる（Ｃｈｏｉ ＹＪ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓ Ｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ３３：１８９０−９０３，２０１４）。

最近の研究により、ＣＤＫ６は、転写複合体の一部として、腫瘍抑制遺伝子ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}と血管新生促進因子ＶＥＧＦ−Ａの発現を誘発していることが見出された。ＣＤＫ６は、細胞の増殖と血管の新生を向上させることにより、腫瘍に対する促進機能を発揮する（Ｋｏｌｌｍａｎｎ Ｋ． ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２４：１６７，２０１３）。

Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ（ＰＤ−０３３２９９１）は、ＣＤＫ４とＣＤＫ６を選択的に阻害し、細胞周期の制御を回復して、腫瘍細胞の増殖を阻止することができる。輝瑞（Ｐｆｉｚｅｒ）社は、今年の５月に、その中期臨床試験の結果に基づいて、アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）にＮＤＡ（Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）を行った。輝瑞ＩＩ期研究によれば、閉経後の女性のエストロゲン受容体陽性（ＥＲ^＋）、ヒト上皮増殖因子受容体２型陽性（ＨＥＲ_２ ⁻）の局所終末期又は転移性乳がんの患者のうち、標準治療薬物であるレトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）で治療された組と比べると、ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂとｌｅｔｒｏｚｏｌｅとを並行投薬された組は、疾病の無憎悪生存期間（ＰＦＳ）が統計学的に顕著に延長し（２０．２ヶ月ｖｓ１０．２ヶ月、ｐ＝０．０００４）、研究の主な目的に達した。非選択性のＣＤＫ阻害剤と異なり、ＣＤＫ４／６阻害剤ＰＤ−０３３２９９１は副作用が少ない。主に白血球減少及び疲労（Ｐｆｉｚｅｒ Ｐｒｅｓｓ Ｒｅｌｅａｓｅ ２０１４．４．６）という副作用が少ない。薬物動態学では、ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂの経口吸収後、血液中薬物濃度が低い。Ｉ期臨床結果によれば、２５−１５０ｍｇを１回で経口投与後、血中濃度は１０−９１ｍｇ／ｍＬであり、ＡＵＣは５８−６４１ｎｇ ｈ／ｍＬである。半減期が長い（平均値は２５．９時間）ため、毎日繰り返して投与すると薬物は蓄積されてしまう（Ｋｅｉｔｈ Ｔ，ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １８：５６８，２０１１）。

選択性のＣＤＫ４及びＣＤＫ６阻害剤Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ、ＬＹ２８３５２１９及びＬＥＥ０１１は、終末期乳がんを治療するためのＩＩＩ期臨床試験に入っている。これは、ＣＤＫ４／６が各種の固形腫瘍と血液腫瘍の細胞周期の制御不能において肝心な機能を発揮しているからである。現在、これらの薬物の臨床評価は、転移性乳がん、脂肪肉腫、非小細胞肺がん、肝がん、卵巣がん、膠芽腫、黒色腫、多発性骨髄腫、リンパ腫等を更に含んでいる。

Ｍａｌｕｍｂｒｅｓ Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １１：１２７５，２００９ Ｍａｌｕｍｂｒｅｓ Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ９：１５３，２００９ Ｃｉｃｅｎａｓ Ｊ．Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １４７：１４０９，２０１１ Ｒｉｚｚｏｌｉｏ Ｆ． ｅｔ ａｌ． Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ １１：２７９，２０１０ Ｇｕｈａ Ｍ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓ １１：８９２，２０１２ Ｃｈｏｉ ＹＪ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓ Ｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ３３：１８９０−９０３，２０１４ Ｋｏｌｌｍａｎｎ Ｋ． ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２４：１６７，２０１３ Ｋｅｉｔｈ Ｔ，ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １８：５６８，２０１１

これに鑑みて、本発明は、既存の技術においてＣＤＫ阻害剤が選択性に欠ける欠陥を克服して、ピリミジン又はピリドピリドン類化合物を提供することを目的とする。このような化合物は、選択的にサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫｓ）のうちのＣＤＫ４とＣＤＫ６を阻害できる一方、ＣＤＫ２キナーゼの活性に対する阻害はほとんどなく、このため、このような化合物は、ＣＤＫ４とＣＤＫ６が関与する細胞周期の制御不能に起因する各種の疾病、特に悪性腫瘍の治療に用いられることができる。

本発明は、式（Ｉ）で示されるピリミジン又はピリドピリドン類化合物又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体を提供する。
うち、
Ｙは、Ｃ又はＮから選択されるものであり、且つＹとしてＮが選択される場合、Ｒ_６の置換がなく、
Ｒ_１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基置換メチル基から選択されるものであり、
Ｒ_２は、ハロゲン、ＣＯＲ_５、ＣＯＯＲ_５から選択されるものであり、
Ｒ_３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、
Ｒ_４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシル基置換Ｃ１−Ｃ６アルキル基、アルコキシ基置換Ｃ１−Ｃ６アルキル基、フェニル基、ハロゲン置換フェニル基から選択されるものであり、
Ｒ_５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６フッ素含有のアルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基から選択されるものであり、
Ｒ_６は、Ｈ、Ｆ、ＣＮ、ＣＨ_３から選択されるものであり、
ｍは、０、１又は２から選択されるものであり、
ｎは、１、２又は３から選択されるものであり、
ｐは、１、２又は３から選択されるものである。

実施例６に係るＣＤＫ４／６阻害剤がＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳がん細胞Ｒｂの燐酸化を阻止する模式図である。 実施例７においてＰＤ−０３３２９９１がラットに経口投与された後の、ＰＤ−０３３２９９１の血中薬物濃度の経時変化を示す血中薬物濃度−時間曲線図である。 実施例７ににおいて化合物１がラットに経口投与された後の、化合物１の血中薬物濃度の経時変化を示す血中薬物濃度−時間曲線図である。 実施例７において化合物２がラットに経口投与された後の、化合物２の血中薬物濃度の経時変化を示す血中薬物濃度−時間曲線図である。 実施例８において経口投与された後マウスの腫瘍の体積変化曲線図である。 実施例８において経口投与された後マウスの体重変化曲線図である。

本発明は、式（Ｉ）で示されるピリミジン又はピリドピリドン類化合物又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体を提供する。
うち、
Ｙは、Ｃ又はＮから選択されるものであり、且つＹとしてＮが選択される場合、Ｒ_６の置換がなく、
Ｒ_１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基置換メチル基から選択されるものであり、
Ｒ_２は、ハロゲン、ＣＯＲ_５、ＣＯＯＲ_５から選択されるものであり、
Ｒ_３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、
Ｒ_４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシル基置換Ｃ１−Ｃ６アルキル基、アルコキシ基置換Ｃ１−Ｃ６アルキル基、フェニル基、ハロゲン置換フェニル基から選択されるものであり、
Ｒ_５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６フッ素含有のアルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基から選択されるものであり、
Ｒ_６は、Ｈ、Ｆ、ＣＮ、ＣＨ_３から選択されるものであり、
ｍは、０、１又は２から選択されるものであり、
ｎは、１、２又は３から選択されるものであり、
ｐは、１、２又は３から選択されるものである。

一部の実施例において、Ｒ_４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシル基置換Ｃ１−Ｃ６アルキル基、アルコキシ基置換Ｃ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものである。そのうち、ヒドロキシル基置換Ｃ１−Ｃ６アルキル基は、ヒドロキシル基置換エチル基であることが好ましい。

一部の実施例において、Ｒ_４は、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基から選択されるものである。Ｒ_４はメチル基であることが好ましい。

一部の実施例において、ｍは１から選択され、ｎは２から選択され、ｐは１又は２から選択される。

一部の実施例において、ＹはＮである。

一実施例において、Ｒ_１はＣ３−Ｃ６シクロアルキル基から選択されるものであり、Ｒ_２はＣＯＲ_５から選択されるものであり、Ｒ_３はＣ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、Ｒ_５はＣ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、Ｒ_６はＨである。

一部の実施例において、Ｒ_１はシクロペンチル基であり、Ｒ_２はＣＯＲ_５から選択されるものであり、Ｒ_３はメチル基であり、Ｒ_５はメチル基またはエチル基であり、Ｒ_５はメチル基であることが好ましく、Ｒ_６はＨである。

一部の実施例において、本発明は下記の化合物から選択されるものである。

本発明はまた、前記ピリミジン又はピリドピリドン系化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体の、腫瘍予防・治療薬物の調製における応用を更に提供する。

一部の実施例において、前記腫瘍は固形腫瘍及び血液腫瘍である。

一部の実施例において、前記固形腫瘍及び血液腫瘍は、乳がん、脂肪肉腫、非小細胞肺がん、肝がん、卵巣がん、膠芽腫と、黒色腫、多発性骨髄腫、マントル細胞リンパ腫を含む。

一実施例において、前記乳がんは、閉経後の女性のエストロゲン受容体陽性及び／又はヒト上皮増殖因子受容体２型陰性の局所終末期又は転移性乳がんを含む。

本発明においては、有効成分として請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記ピリミジン又はピリドピリドン類化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体、並びにその薬学的に許容可能なキャリヤーを含む腫瘍を予防・治療するための医薬組成物が更に開示される。

従来技術と比べると、本発明は、次の有益な効果がある。本発明の式（Ｉ）で示されるピリミジン又はピリドピリドン類化合物は、一連の新しい化合物であり、このような化合物は、ＣＤＫ４とＣＤＫ６を選択的に阻害することができ、ＣＤＫ４とＣＤＫ６が関与する細胞周期の制御不能に起因する様々な疾病、特に悪性腫瘍の治療に用いられることができる。

本発明において、Ｒ_４がアルキル基である場合、化合物は、ＣＤＫ６及びＣＤＫ４に対する活性が高く、Ｒ_４がアリール基である場合、化合物は、ＣＤＫ６に対する活性を失ってしまう。

特に、そのうち一部の化合物は、選択性が高く、活性が高く、抗腫瘍細胞増殖効果が強い特性を持っている。酵素活性阻害実験において、ＣＤＫ４及びＣＤＫ６を阻害するＩＣ_５０は、１０ｎＭ（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）以下に達することができる一方、ＣＤＫ２を阻害するＩＣ_５０は、５００ｎＭを上回って、阻害活性がほとんどない。腫瘍細胞増殖抑制実験において、ＳＷ６２０、ＺＲ−７５−１、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍細胞株に対するＩＣ_５０は０．５μＭ、０．１μＭ以下さえにも達することができる。細胞周期阻害実験において、濃度依存で、Ｇ１期細胞の成長を停止させ、Ｓ期細胞を減少させ、ＩＣ_５０は、およそ４０ｎＭであり、陽性コントロールより少し増しである。ウエスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ）実験において、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳がん細胞に作用した後、ＲｂのＳｅｒ７８０サイトでのリン酸化を効果的に低減することができる。

且つ、そのうち一部の化合物は、薬物動態学実験において優れた特性を示し、試験対象動物に同じ投与量を投与した後、本発明の化合物のＡＵＣ値は陽性コントロールより高く、特に、化合物２は、そのＡＵＣがおよそ陽性コントロールの９倍であり、優れた経口吸収効果を挙げている。

文献に記載されている標準方法または実験室の実験で証明された標準方法以外に、下記のスキームで示される反応を用いて本発明の化合物を調製することができる。このため、下記のスキームは、本発明を説明するためのものであり、列挙される化合物又は何れかの特定の置換基に限定されるものでない。前記方法は、説明するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。

スキーム１

スキーム２

スキーム３

＜実施例１＞
６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（２−（メチルスルホニル）エチル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（６−ａｃｅｔｙｌ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌ−２−（（５−（１−（２−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物１）を調製する。

ステップ１ａにおいて、５−ヨード−２−クロロ−４−シクロペンチルアミノピリミジン（５−ｉｏｄｉｎｅ−２−ｃｈｌｏｒｏ−４−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−ａｍｉｎｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ）（化合物１０２）を調製する。

２，４−ジクロロ−５−ヨードピリミジン（化合物１０１）（８０．００ｇ、０．２９１ｍｏｌ、１．０当量）をエタノール（８００ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（８８．１８ｇ、０．８７３ｍｏｌ、３．０当量）を加える。そして、混合物をアイスバスに置いて撹拌し、温度が０℃−５℃まで下がったとき、シクロペンチルアミン（４９．５０ｇ、０．５８２ｍｏｌ、２．０当量）を滴下し始め、３０分滴下し、５℃ほどの温度のままで撹拌する。ＨＰＬＣで監視して、２，４−ジクロロ−５−ヨードピリミジンのピーク面積比が１％より小さくなるとき、反応を止める。反応液を濃縮した後、酢酸エチル（３００ｍＬ）を加えて希釈し、水（３００ｍＬ）を加えて抽出し、分液する。水相は酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出される。有機相を合併して、飽和食塩水（２００ｍＬ）で有機相を抽出した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥する。有機相を真空濃縮し、残留物をシリカゲルカラム（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝５０：１）で分離した後、化合物５−ヨード−２−クロロ−４−シクロペンチルアミノピリミジン（８７．８８ｇ、収率：９３．５％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３２４［Ｍ＋１］^＋。

ステップ１ｂにおいて、（Ｅ）−エチル−３−（２−クロロ−４−（シクロペンチルアミノ）ピリミジン−５−イル）ブタ−２−エノエート（（Ｅ）−Ｅｔｈｙｌ−３−（２−ｃｈｌｏｒｏ−４−（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−５−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｅｎｏａｔｅ）（化合物１０４）を調製する。

５−ヨード−２−クロロ−４−シクロペンチルアミノピリミジン（化合物１０２）（２０．００ｇ、０．０６１９ｍｏｌ、１．０当量）をジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）に溶解し、そして、水（２０ｍＬ）、炭酸ナトリウム（１６．４０ｇ、０．１５４７ｍｏｌ、２．５当量）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウムジクロライド（２．１７ｇ、０．００３１ｍｏｌ、０．０５当量）を順次加える。窒素の保護下で、混合物を９０℃のオイルバスに置いて撹拌し、温度が９０℃まで上がったときから、（Ｚ）−エチル−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−２−ブテノアート（化合物１０３）（１９．３２ｇ、０．０８０５ｍｏｌ、１．３当量）を３０分間滴下し、９０℃の温度のままで撹拌する。ＨＰＬＣで監視して、５−ヨード−２−クロロ−４−シクロペンチルアミノピリミジンのピーク面積比が１％より小さくなるとき、反応を停止させる。反応液を室温まで冷却し濾過する。フィルターケーキをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１００ｍＬ）で洗う。濾液にメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２００ｍＬ）と水（４００ｍＬ）とを加えて抽出し分液する。水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２００ｍＬ×２）で抽出する。有機相を合併して、飽和食塩水（２００ｍＬ）で有機相を抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥する。有機相を真空濃縮し、残留物をシリカゲルカラム（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝２０：１）で分離した後、化合物（Ｅ）−エチル−３−（２−クロロ−４−（シクロペンチルアミノ）ピリミジン−５−イル）−２−ブテノアート（１３．８５ｇ、収率：７２．４％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３１０［Ｍ＋１］^＋。

ステップ１ｃにおいて、２−クロロ−８−シクロペンチル−５−メチル−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（２−ｃｈｌｏｒｏ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌ−８Ｈ−ｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７−ｏｎｅ）（化合物１０５）を調製する。

（Ｅ）−エチル−３−（２−クロロ−４−（シクロペンチルアミノ）ピリミジン−５−イル）−２−ブテノアート（化合物１０４）（２０．００ｇ、０．０６４７ｍｏｌ、１．０当量）をジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）に溶解し、そして炭酸セシウム（４２．１６ｇ、０．１２９４ｍｏｌ、２．０当量）を加え、室温で撹拌する。ＨＰＬＣで監視して、化合物１０４のピーク面積比が１％より小さくなると、反応を停止させる。反応液を濾過し、フィルターケーキをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１００ｍＬ）で洗う。濾液にメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２００ｍＬ）と水（４００ｍＬ）とを加えて抽出し分液する。水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２００ｍＬ×２）で抽出する。有機相を合併して、飽和食塩水（２００ｍＬ）で有機相を抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥する。有機相を真空濃縮し、残留物をシリカゲルカラム（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１０：１）で分離した後、化合物２−クロロ−８−シクロペンチル−５−メチル−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（１３．９４ｇ、収率：８１．９％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２６４［Ｍ＋１］^＋。

ステップ１ｄにおいて、６−ブロモ−２−クロロ−８−シクロペンチル−５−メチル−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（６−ｂｒｏｍｏ−２−ｃｈｌｏｒｏ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌ−８Ｈ−ｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７−ｏｎｅ）（化合物１０６）を調製する。

化合物２−クロロ−８−シクロペンチル−５−メチル−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（化合物１０５）（１９．８４ｇ、０．０７５４ｍｏｌ、１．０当量）を酢酸（２００ｍＬ）に溶解し、酢酸ナトリウム（２４．７５ｇ、０．３０１７ｍｏｌ、４．０当量）を加え、室温で撹拌し、臭素（４８．２６ｇ、０．３０１７ｍｏｌ、４．０当量）を２０分間ゆっくりと滴下し、そして、混合物を５０℃のオイルバスに置いて撹拌する。ＨＰＬＣで監視して、化合物１０５のピーク面積比が１％より小さくなると、反応を停止させる。反応液を室温まで冷却した後、飽和亜硫酸ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）を加え、そしてとジクロロメタン（３００ｍＬ）を加えて、抽出して分液する。水相をジクロロメタン（１５０ｍＬ×２）で抽出する。有機相を合併して、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ×３）で有機相を抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥する。有機相を真空濃縮し、残留物をシリカゲルカラム（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝３０：１〜１０：１）で分離した後、化合物６−ブロモ−２−クロロ−８−シクロペンチル−５−メチル−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（２１．５０ｇ、収率：８３．１％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３４４［Ｍ＋１］^＋。

ステップ１ｅにおいて、ｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−アミノピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ−４−（６−ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物１０７）を調製する。

５−ブロモ−２−ニトロピリジン（１０７Ａ）（２．６ｇ、１２．８ｍｍｏｌ、１．０当量）と、ｔｅｒｔ−ブチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ−カルボキシレート（１０７Ｂ）（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ−４−（４，４，５，５−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−１，３，２−ｄｉｏｘａｂｏｒｏｌａｎ−２−ｙｌ）−３，６−ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ−１（２Ｈ）−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（４．８ｇ、１５．５ｍｍｏｌ、１．２当量）と、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウムジクロライド（０．９ｇ、１．２８ｍｍｏｌ、０．１当量）と、炭酸セシウム（８．４ｇ、２５．８ｍｍｏｌ、２当量）とを、１５ｍＬの水と１５０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解する。窒素の保護下で、反応システムを、予熱された９０℃のオイルバスに置いて１時間加熱反応する。反応が完了した後、反応システムを室温まで冷却し、酢酸エチルで抽出する。有機相を飽和食塩水で多数回洗った後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮する。最後に、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１０：１〜３：１）で精製して、黄い固体、即ちｔｅｒｔ−ブチル−６−ニトロ−３’，６’−ジヒドロ−［３，４'−ビピリジン］−１'（２'Ｈ）−カルボキシレート（１０７Ｃ）（３．５３ｇ、収率：９０％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３０６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

上記化合物１０７Ｃ（３．５３ｇ、１１．６ｍｍｏｌ、１．０当量）を１００ｍＬのメタノールに溶解し、炭素上パラジウム（０．３５３ｇ）を加え、水素環境中、室温で一晩撹拌する。反応が完了した後、濾過することで反応液の中の炭素上パラジウムを除去する。メタノールでフィルターケーキを多数回洗って、濾液を減圧濃縮する。最後、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１〜３０：１）で精製して、黄い固体、即ちｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−アミノピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２．５ｇ、収率：７８％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２７８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

ステップ１ｆにおいて、ｔｅｒｔ−ブチル ４−（６−（（６−ブロモ−８−シクロペンチル−５−メチル−７−オキソ−７，８−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ ４−（６−（（６−ｂｒｏｍｏ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌ−７−ｏｘｏ−７，８−ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物１０８）を調製する。

化合物ｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−アミノピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物１０７）（２．５ｇ、９ｍｍｏｌ、２．２５当量）を８０ｍＬの無水テトラヒドロフランに溶解し、そして氷水浴に入れる。窒素の保護下で、水素化ナトリウム（０．４５２ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、２．７当量）を加え、アイスバスで１５分間撹拌する。そして、反応システムに３０ｍＬの化合物６−ブロモ−２−クロロ−８−シクロペンチル−５−メチル−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（１０６）（１．４ｇ、４ｍｍｏｌ、１．０当量）のテトラヒドロフラン溶液を３０ｍＬ滴下し、室温で一晩撹拌して、水でクエンチングし減圧濃縮する。最後、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１〜３０：１）で精製して、黄い固体、即ちｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−（（６−ブロモ−８−シクロペンチル−５−メチル−７−オキソ−７，８−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２．１４５ｇ）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５８３［Ｍ＋１］^＋。

ステップ１ｇにおいて、ｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−（（８−シクロペンチル−６−（１−エトキシビニル）−５−メチル−７−オキソ−７，８−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）リジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ ４−（６−（（８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−６−（１−ｅｔｈｏｘｙｖｉｎｙｌ）−５−ｍｅｔｈｙｌ−７−ｏｘｏ−７，８−ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物１０９）を調製する。

化合物ｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−（（６−ブロモ−８−シクロペンチル−５−メチル−７−オキソ−７，８−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物１０８）（３００ｍｇ、０．５１５ｍｍｏｌ、１．０当量）と、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（５４ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ、０．１当量）と、トリブチル−１−エトキシビニルスズ（３７１ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ、２．０当量）とを、４０ｍＬのトルエンに溶解し、窒素の保護下で、１３０℃まで加熱し、一晩還流させる。反応が完了した後、反応システムを室温まで冷却し、減圧濃縮する。最後に、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１〜３０：１）で精製して、黄い固体、即ちｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−（（８−シクロペンチル−６−（１−エトキシビニル）−５−メチル−７−オキソ−７，８−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリジン−２−イル）アミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１５０ｍｇ、収率：５１％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５７５［Ｍ＋１］^＋。

ステップ１ｈにおいて、６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（６−ａｃｅｔｙｌ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌ−２−（（５−（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物１１０）を調製する。

ｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−（（８−シクロペンチル−６−（１−エトキシビニル）−５−メチル−７−オキソ−７，８−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリジン−２−イル）アミノ）リジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物１０９）（１５０ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのジクロロメタンに溶解し、４ｍＬの６ｍｏｌ／Ｌの塩酸を加え、室温で２時間撹拌する。反応が完了した後、飽和炭酸水素ナトリウムを加えてｐＨを８−９に調整し、濾過することで生じられた無機塩を除去し、濾液を減圧濃縮する。最後に、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１〜１５：１）で精製して、白い固体、即ち６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（８０ｍｇ、収率：６２％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ４４７［Ｍ＋Ｈ］^＋．^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ １０．２１（ｓ，１Ｈ），８．９（ｓ，１Ｈ），８．２２（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）７．６９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），５．８４（ｍ，１Ｈ），３．０３（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，２Ｈ），２．６０（ｄｄ，Ｊ＝２３．９，１１．９Ｈｚ，３Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ），１．９０（ｓ，２Ｈ），１．７９（ｓ，２Ｈ），１．７０（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ），１．５５（ｄｄｄ，Ｊ＝２１．３１１．３，７．０Ｈｚ，４Ｈ）。

ステップ１ｉにおいて、２−（メチルスルホニル）エチルメタンスルホネート（２−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（化合物１１１−１）を調製する。

窒素の保護下で、２−（メタンスルホニル）エタノール（１４３ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、室温で塩化メタンスルホニル（１４４ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下し、直後にトリエチルアミン（３４９ｍｇ、３．４５ｍｍｏｌ、３．０当量）を加える。最後に、混合物を４０℃で２０時間撹拌する。反応液を、室温まで冷却し、炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、乾燥して、次のステップに直接的に用いられる２−（メチルスルホニル）エチルメタンスルホネート（０．０５６Ｍ、２０ｍＬ）を得た。

ステップ１ｊにおいて、６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（２−（メチルスルホニル）エチル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（６−ａｃｅｔｙｌ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌ−２−（（５−（１−（２−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物１）を調製する。

化合物６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（化合物１１０）（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．０当量）をアセトニトリル（３０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（３０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、窒素の保護下で、８０℃まで昇温し、２−（メチルスルホニル）エチル メタンスルホネート（１１１−１）溶液（５０ｍＬ、０．２８ｍｍｏｌ、１．２当量）をゆっくりと滴下し、８０℃条件で４時間撹拌する。反応液を、室温まで冷却し、ジクロロメタンと水で抽出し、分液する。有機相を水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して得た黄色の固体粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１〜１０：１）で分離し精製して、白色の固体、即ち化合物６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（２−（メチルスルホニル）エチル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（８０ｍｇ、収率：６５．８％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５５３［Ｍ＋１］^＋。融点：２５６．３−２６０．２℃；^１Ｈ ＮＭ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １０．２１（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），５．８４（ｐ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．０３（ｍ，５Ｈ），２．７５（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），２．５５（ｄ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．２６（ｓ，２Ｈ），２．０９（ｔ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，２Ｈ），１．９０（ｓ，２Ｈ），１．７９（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，４Ｈ），１．６５（ｍ，４Ｈ）。

＜実施例２＞
６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（３−（メチルスルホニル）プロピル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（６−ａｃｅｔｙｌ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌ−２−（（５−（１−（３−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｐｒｏｐｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物２）を調製する。

ステップ２ａにおいて、１−ブロモ−３−（メチルスルホニル）プロパン（１−ｂｒｏｍｏ−３−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｅ）（化合物１１２−２）を調製する。窒素の保護下で、３−（メチルスルホニル）プロパノール（５０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１．０当量）を１０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、アイスバスで三臭化リン（０．０４ｍＬ、０．４３ｍｍｏｌ、１．２当量）を滴下する。そして、反応液を室温まで昇温し、１５時間撹拌する。反応液を氷水にゆっくりと入れた後、ジクロロメタンを加えて抽出し、分液する。有機相を水で洗い、乾燥して濃縮した後、無色油状液体、即ち１−ブロモ−３−（メチルスルホニル）プロパン（４９ｍｇ、収率：６８％）を得た。

ステップ２ｂにおいて、６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（３−（メチルスルホニル）プロピル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（６−ａｃｅｔｙｌ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌ−２−（（５−（１−（３−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｐｒｏｐｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物２）を調製する。

化合物６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（化合物１１０）（３０ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ、１．０当量）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（１８ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ、２．０当量）を加え、１−ブロモ−３−（メチルスルホニル）プロパン（１１２−２）溶液（２０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１．５当量）をゆっくりと滴下し、窒素の保護下で、８０℃まで昇温し４時間撹拌する。反応液を、室温まで冷却し、ジクロロメタンと水で抽出し、分液する。有機相を水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して得た粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィで（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１〜１０：１）分離し精製して、白色の固体、即ち化合物６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（３−（メチルスルホニル）プロピル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（１０ｍｇ、収率：２６．４％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５６７［Ｍ＋１］^＋。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １０．２１（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．８４（ｍ，１Ｈ），３．１３（ｍ，２Ｈ），２．９７（ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，５Ｈ），２．５５（ｄｄ，Ｊ＝９．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｍ，５Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．２７（ｍ，２Ｈ），２．０３（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），１．８７（ｍ，４Ｈ），１．７８（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，４Ｈ），１．７０（ｔｄ，Ｊ＝１２．３，３．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６０（ｍ，２Ｈ）。

＜実施例３＞
６−アセチル−２−（（５−（１−（２−（（４−クロロフェニル）スルホニル）エチル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−８−シクロペンチル−５−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（６−ａｃｅｔｙｌ−２−（（５−（１−（２−（（４−ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物４）を調製する。

ステップ３ａにおいて、１−（（２−ブロモエチル）スルホニル）−４−クロロベンゼン（１−（（２−ｂｒｏｍｏｅｔｈｙｌ）ｓｕｌｆｏｎｙｌ）−４−ｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ）（化合物１１２−４）を調製する。

１，２−ジブロモエタン（４．７ｇ、２５ｍｍｏｌ、５．０当量）を１００ｍＬのアセトニトリルに溶解し、室温で炭酸カリウム（８２８ｍｇ、６．０ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、続いて、４−クロロチオフェノール（７２０ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ、１．０当量）のアセトニトリル溶液（１０ｍＬ）をゆっくりと加え、室温で２時間撹拌する。反応液を酢酸エチルと水で抽出し、分液する。有機相を水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して得た粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：１）で分離し精製して、化合物（２−ブロモエチル）（４−クロロフェニル）スルファン（１．０ｇ、収率：８０％）を得た。得られた（２−ブロモエチル）（４−クロロフェニル）スルファン（１．０ｇ、４ｍｍｏｌ、１．０当量）を１００ｍＬのジクロロメタンに溶解し、アイスバスで３−クロロ過安息香酸（２．０６ｍｇ、１２ｍｍｏｌ、３．０当量）を複数回に分けて加え、室温で２時間撹拌する。反応液をジクロロメタンと水で抽出し、分液する。有機相を水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して得た粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：１〜３０：１）で分離し精製して、化合物１−（（２−ブロモエチル）スルホニル）−４−クロロベンゼン（５００ｍｇ、収率：４４％）を得た。

ステップ３ｂにおいて、６−アセチル−２−（（５−（１−（２−（（４−クロロフェニル）スルホニル）エチル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−８−シクロペンチル−５−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（６−ａｃｅｔｙｌ−２−（（５−（１−（２−（（４−ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物４）を調製する。

化合物６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（化合物１１０）（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．０当量）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に溶解し、窒素の保護下で、８０℃まで昇温して固体が全て溶解された後、反応液を室温まで冷却し、炭酸カリウム（３０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．０当量）を加える。その後、１−（（２−ブロモエチル）スルホニル）−４−クロロベンゼン（１１２−４）（８０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、１．２当量）のアセトニトリル溶液を２ｍＬゆっくりと滴下し、４０℃で４時間撹拌する。反応液を、室温まで冷却し、ジクロロメタンと水で抽出し、分液する。有機相を水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して得た黄色固体の粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１〜１０：１）で分離し精製して、白色固体の化合物６−アセチル−２−（（５−（１−（２−（（４−クロロフェニル）スルホニル）エチル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−８−シクロペンチル−５−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（２０ｍｇ、収率：１４％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ６４９［Ｍ＋１］^＋。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １０．２２（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｍ，３Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．３Ｈｚ，１Ｈ），５．８５（ｍ，１Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），２．７５（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６４（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．３８（ｓ，１Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．２６（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，７．９Ｈｚ，２Ｈ），１．９０（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，８．０Ｈｚ，４Ｈ），１．８０（ｍ，２Ｈ），１．５９（ｍ，４Ｈ），１．１５（ｄｄ，Ｊ＝１２．２，３．０Ｈｚ，２Ｈ）。

＜実施例４＞
６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（２−（メチルスルホニル）エチル）ピペリジン−３−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（６−ａｃｅｔｙｌ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌ−２−（（５−（１−（２−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物５）を調製する。

ステップ４ａにおいて、２−クロロ−８−シクロペンチル−６−ヨード−５−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（２−ｃｈｌｏｒｏ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−６−ｉｏｄｏ−５−ｍｅｔｈｙｌｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物２０１）を調製する。

２−クロロ−８−シクロペンチル−５−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（化合物１０５）（２０ｇ、７６ｍｍｏｌ、１．０当量）を２５０ｍＬのトリフルオロ酢酸と１０ｍＬの無水トリフルオロ酢酸の中に溶解し、窒素の保護下で、Ｎ−ヨードスクシンイミド（６８．５ｇ、３０４ｍｍｏｌ、４．０当量）を加え、８０℃まで加熱する。１時間後、反応液を減圧濃縮し、亜硫酸水素ナトリウム溶液を加えて、残りのＮ−ヨードスクシンイミドを除去し、ジクロロメタンで抽出し、飽和食塩水で２回洗う。有機相を、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧濃縮した後、白色の固体、即ち、化合物２−クロロ−８−シクロペンチル−６−ヨード−５−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（２９ｇ、収率：９８．５％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３９０［Ｍ＋１］^＋。

ステップ４ｂにおいて、２−クロロ−８−シクロペンチル−６−（１−エトキシビニル）−５−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（２−ｃｈｌｏｒｏ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−６−（１−ｅｔｈｏｘｙｖｉｎｙｌ）−５−ｍｅｔｈｙｌｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物２０２）を調製する。

窒素の保護下で、２−クロロ−８−シクロペンチル−６−ヨード−５−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（化合物２０１）（１５ｇ、３８．５６ｍｍｏｌ、１．０当量）と、（１−エトキシビニル）トリブチルスズ（１３．８ｇ、４２．４ｍｍｏｌ、１．１当量）とを、１５０ｍＬのトルエンに溶解して１２０℃まで加熱し、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウムジクロライド（２．４３ｇ、３．８ｍｍｏｌ、０．１当量）を加えて、１２５℃で３時間反応する。反応液を減圧濃縮して得た粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：酢酸エチル／石油エーテル＝１／１０〜１／５）で精製して、ブラウン色の固体、即ち化合物２−クロロ−８−シクロペンチル−６−（１−エトキシビニル）−５−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（２８２ｍｇ、収率：１８．５％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３３４［Ｍ＋１］^＋。

ステップ４ｃにおいて、ｔｅｒｔ−ブチル−３−（６−アミノピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ ３−（６−ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物２０３）を調製する。

２−ニトロ−５ブロモピリジン（１０７Ａ）（１．０ｇ、４．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）と、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウムジクロライド（１７４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、０．０５当量）と、無水炭酸セシウム（２．４３ｇ、７．４７ｍｍｏｌ、１．５当量）とを、５ｍＬの水と５０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに混合させ、窒素の保護下で、化合物ｔｅｒｔ−ブチル−５−ピナコールボロネート−３，４−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（２０３Ａ）（２．１３ｇ、６．８９ｍｍｏｌ、１．４当量）を加えて、８５℃まで加熱する。１時間後、室温まで冷却し、酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で２回洗う。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮する。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：酢酸エチル／石油エーテル＝１０／１００〜５０／１００）で精製して、黄色の固体、即ち化合物ｔｅｒｔ−ブチル−６'−ニトロ−５，６−ジヒドロ−［３，３'−ビピリジン］−１（４Ｈ）−カルボキシレート（２０３Ｂ）（２８２ｍｇ、収率：１８．５％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３０６［Ｍ＋１］^＋。

水素環境で、上記調製された化合物２０３Ｂ（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、１．０当量）と炭素上パラジウム（１０ｍｇ、１０％）とを、メタノール（１０ｍＬ）が入っている反応フラスコに加えて、３０℃で一晩撹拌する。濾過した後、濾液を真空濃縮して、化合物ｔｅｒｔ−ブチル−３−（６−アミノピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（８９ｍｇ、粗生成物であって、次のステップに直接的に用いる）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２７８［Ｍ＋１］^＋。

ステップ４ｄ：ｔｅｒｔ−ブチル−３−（６−（（８−シクロペンチル−６−（１−エトキシビニル）−５−メチル−７−オキソ−７，８−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ ３−（６−（（８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−６−（１−ｅｔｈｏｘｙｖｉｎｙｌ）−５−ｍｅｔｈｙｌ−７−ｏｘｏ−７，８−ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物２０４）を調製する。

窒素の保護下で、化合物ｔｅｒｔ−ブチル−３−（６−アミノピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物２０３）（８９ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、１．０当量）と、化合物２−クロロ−８−シクロペンチル−６−（１−エトキシビニル）−５−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（２０２）（１０６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、１．０当量）と、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（１７ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ、０．０９当量）と、炭酸セシウム（１５６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ、２．０当量）と、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（１５ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、０．０５当量）とを、トルエンが入っている反応フラスコに加えて、９０℃まで加熱する。５時間撹拌した後、反応液を真空濃縮して得た粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：メタノール／ジクロロメタン＝０／１００〜５／１００）で分離し精製して、黄色コロイドのｔｅｒｔ−ブチル−３−（６−（（８−シクロペンチル−６−（１−エトキシビニル）−５−メチル−７−オキソ−７，８−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（９６ｍｇ、収率：５２．２％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５７５［Ｍ＋１］^＋。

ステップ４ｅにおいて、６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（ピペリジン−３−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（６−ａｃｅｔｙｌ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌ−２−（（５−（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物２０５）を調製する。

化合物ｔｅｒｔ−ブチル−３−（６−（（８−シクロペンチル−６−（１−エトキシビニル）−５−メチル−７−オキソ−７，８−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物２０４）（９６ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ、１．０当量）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、塩酸メタノール溶液（５ｍＬ）をゆっくりと滴下し、３時間撹拌する。その後、減圧し溶媒を除去して、化合物６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（ピペリジン−３−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（８３ｍｇ、粗生成物）を得て、次の反応に直接用いる。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ４４７［Ｍ＋１］^＋。

ステップ４ｆにおいて、６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（２−（メチルスルホニル）エチル）ピペリジン−３−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（６−ａｃｅｔｙｌ−８−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｍｅｔｈｙｌ−２−（（５−（１−（２−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−７（８Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物５）を調製する。

化合物６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（ピペリジン−３−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（化合物２０５）（６０ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ、１．０当量）をアセトニトリル（３０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（１８ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加し、窒素の保護下で、７０℃まで昇温し、２−（メチルスルホニル）エチルメタンスルホネート（１１１−１）のジクロロメタン溶液（３ｍＬ、０．１６１ｍｍｏｌ、１．２当量）をゆっくりと滴下し、７０℃で３時間撹拌する。室温まで冷却し、反応液をジクロロメタンと水で抽出し、分液する。有機相を水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して得た黄色固体の粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１〜１０：１）で分離し精製して、黄色固体の化合物６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（（５−（１−（２−（メチルスルホニル）エチル）ピペリジン−３−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（５８ｍｇ、収率：７８．４％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５５３［Ｍ＋１］^＋。融点：１０９−１１３℃；^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １０．２４（ｓ，１Ｈ），９．００（ｓ，１Ｈ），８．２７（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．３Ｈｚ，１Ｈ），５．８５（ｍ，１Ｈ），３．３１（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．８Ｈｚ，２Ｈ），３．０３（ｓ，３Ｈ），２．９３（ｄｄ，Ｊ＝２３．９，１１．２Ｈｚ，２Ｈ），２．７７（ｍ，３Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．２７（ｍ，２Ｈ），２．０７（ｄｔ，Ｊ＝１１．３，１０．０Ｈｚ，２Ｈ），１．９２（ｄｄ，Ｊ＝７．６，５．５Ｈｚ，２Ｈ），１．７８（ｍ，４Ｈ），１．６０（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，８．９Ｈｚ，３Ｈ），１．４７（ｄｄ，Ｊ＝１２．２，３．５Ｈｚ，１Ｈ）。

＜実施例５＞
３−アセチル−１−シクロペンチル−４−メチル−７−（（５−（１−（２−（メチルスルホニル）エチル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（３−ａｃｅｔｙｌ−１−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−４−ｍｅｔｈｙｌ−７−（（５−（１−（２−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）−１，６−ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｉｎ−２（１Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物１３）を調製する。

ステップ５ａにおいて、２−クロロ−４−アミノ−５−ヨードピリジン（２−ｃｈｌｏｒｏ−５−ｉｏｄｏｐｙｒｉｄｉｎ−４−ａｍｉｎｅ）（化合物３０２）を調製する。

窒素の保護下で、２−クロロ−４−アミノピリジン（化合物３０１）（１５ｇ、０．１１６ｍｏｌ、１当量）をアセトニトリル（２００ｍＬ）に溶解し、オイルバスで７０℃まで加熱し、ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）（３３ｇ、０．１３９ｍｏｌ、１．２当量）をゆっくりと加え、１６時間撹拌する。室温まで冷却し、反応システムが乳白色になるまで飽和チオ硫酸ナトリウム溶液を加える。その後、反応システムのｐＨ値が９〜１０に調整されるように飽和炭酸ナトリウム水溶液を加える。酢酸エチル（５００ｍＬ）を加えて抽出する。有機相を分け出して、飽和食塩水（１００ｍＬ）で２回洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝２０／１）で分離し精製して、２−クロロ−５−ヨードピリジン−４−アミン（２３ｇ、収率：７８．１％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２５５［Ｍ＋１］^＋。

ステップ５ｂにおいて、２−クロロ−４−シクロペンチルアミノ−５−ヨードピリジン（２−ｃｈｌｏｒｏ−Ｎ−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−５−ｉｏｄｏｐｙｒｉｄｉｎ−４−ａｍｉｎｅ（化合物３０３）を調製する。

窒素の保護下で、２−クロロ−４−アミノ−５−ヨードピリジン（３０２）（２３ｇ、９０．６ｍｍｏｌ、１当量）と、炭酸セシウム（１７７ｇ、０．５４４ｍｏｌ、６当量）と、ブロモシクロペンタン（８１ｇ、０．５４４ｍｏｌ、６当量）とを、反応フラスコに入れ、塩化チオニル（５００ｍＬ）を溶媒として９０℃まで加熱し、３６時間撹拌する。濾過して酢酸エチルで抽出する。有機相を水（５００ｍＬ）で３回洗い、飽和食塩水（４００ｍＬ）で３回洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１）で分離し精製して、２−クロロ−４−シクロペンチルアミノ−５−ヨードピリジン（６ｇ、収率：２０．５％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３２３［Ｍ＋１］^＋。

ステップ５ｃにおいて、エチル（Ｅ）−３−（６−クロロ−４−シクロペンチルアミノ）ピリジン−３−イル）−２−ブテノアート（ｅｔｈｙｌ（Ｅ）−３−（６−ｃｈｌｏｒｏ−４−（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｅｎｏａｔｅ）（化合物３０４）を調製する。

窒素の保護下で、２−クロロ−４−シクロペンチルアミノ−５−ヨードピリジン（化合物３０３）（６ｇ、１８．６ｍｍｏｌ、１当量）と、炭酸ナトリウム（４．９３ｇ、４６．５ｍｍｏｌ、２．５当量）と、（Ｚ）−エチル−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−２−ブテノアート（化合物１０３）（５．８ｇ、２４．２ｍｍｏｌ、１．３当量）と、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウムジクロライド（１．３１ｇ、１．８６ｍｍｏｌ、０．１当量）とを、反応フラスコに入れ、ＤＭＦと水（１０：１）とを溶媒として９０℃まで加熱し、３．５時間反応する。酢酸エチル（４００ｍＬ）を加え、水（２００ｍＬ）で３回洗い、塩水（１００ｍＬ）で１回洗い、濃縮して得た粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝４／１）で分離し精製して、エチル（Ｅ）−３−（６−クロロ−４−シクロペンチルアミノ）ピリジン−３−イル）−２−ブテノアート（化合物３０４）（５．２ｇ、収率：９０．９％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３０９［Ｍ＋１］^＋。

ステップ５ｄにおいて、７−クロロ−１−シクロペンチル−４−メチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（７−ｃｈｌｏｒｏ−１−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−４−ｍｅｔｈｙｌ−１，６−ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｉｎ−２（１Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物３０５）を調製する。

エチル（Ｅ）−３−（６−クロロ−４−シクロペンチルアミノ）ピリジン−３−イル）−２−ブテノアート（化合物３０４）（５．２ｇ、１６．９ｍｍｏｌ、１当量）をトルエン（２０ｍＬ）に溶解し、ＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデカ−７−エン）（２．５７ｇ、１．６９ｍｍｏｌ、０．１当量）を加え、還流するまで加熱し、１６時間撹拌する。室温まで冷却し、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１５／１）で分離し精製して、７−クロロ−１−シクロペンチル−４−メチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（３．７ｇ、収率：８３．４％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２６３［Ｍ＋１］^＋。

ステップ５ｅにおいて、３−ブロモ−７−クロロ−１−シクロペンチル−４−メチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（３−ｂｒｏｍｏ−７−ｃｈｌｏｒｏ−１−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−４−ｍｅｔｈｙｌ−１，６−ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｉｎ−２（１Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物３０６）を調製する。

化合物７−クロロ−１−シクロペンチル−４−メチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物３０５）（３．７ｇ、１４．１ｍｍｏｌ、１当量）を氷酢酸（１０ｍＬ）に溶解し、酢酸ナトリウム（４．６２ｇ、５６．４ｍｍｏｌ、４当量）を加え、５０℃まで加熱する。臭素（４．９ｇ、１５．５ｍｍｏｌ、１．１当量）を酢酸に溶解して、反応フラスコにゆっくりと滴下する。３．５時間撹拌する。室温まで冷却し、澄むまでゆっくりと飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液を加え、その後、反応システムのｐＨが９〜１０に調整されるように飽和炭酸ナトリウム水溶液を加える。ジクロロメタン（２００ｍＬ）で抽出し、濃縮して得た粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１）で分離し精製して、３−ブロモ−７−クロロ−１−シクロペンチル−４−メチル−１，６−ナフチリジン−２（Ｈ）−オン（３ｇ、収率：６２．６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３４１［Ｍ＋１］^＋。

ステップ５ｆにおいて、７−クロロ−１−シクロペンチル−３−（１−エトキシビニル）−４−メチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（７−ｃｈｌｏｒｏ−１−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−３−（１−ｅｔｈｏｘｙｖｉｎｙｌ）−４−ｍｅｔｈｙｌ−１，６−ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｉｎ−２（１Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物３０７）を調製する。

窒素の保護下で、３−ブロモ−７−クロロ−１−シクロペンチル−４−メチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物３０６）（１．５ｇ、４．４１ｍｍｏｌ、１当量）と、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（５０９ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、０．１当量）と、トリブチル（Ｉ−エトキシビニル）スズ（２．０７ｇ、５．７３ｍｍｏｌ、１．３当量）とを、反応フラスコに入れ、トルエン（２０ｍＬ）で溶解し、還流するまで加熱し、１６時間反応する。減圧濃縮して得た粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１）で分離し精製して、７−クロロ−１−シクロペンチル−３−（１−エトキシビニル）−４−メチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１．０ｇ、収率：６８．３％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３３３［Ｍ＋１］^＋。

ステップ５ｇにおいて、ｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−（（１−シクロペンチル−３−（１−エトキシビニル）−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−７−イル）アミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ ４−（６−（（１−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−３−（１−ｅｔｈｏｘｙｖｉｎｙｌ）−４−ｍｅｔｈｙｌ−２−ｏｘｏ−１，２−ｄｉｈｙｄｒｏ−１，６−ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｉｎ−７−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物３０８）を調製する。

７−クロロ−１−シクロペンチル−３−（１−エトキシビニル）−４−メチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物３０７）（１５０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ、１．０当量）と、ｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−アミノピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物１０７）（１６５ｍｇ、０．５８５ｍｍｏｌ、１．３当量）と、炭酸セシウム（３００ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ、２．０当量）と、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（２１ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ、０．０８当量）とを、３０ｍＬのトルエンに分散させる。窒素の保護下で、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３（トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム、１６ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、０．０４当量）を加える。当該反応システムを予熱された１３０℃のオイルバスに置いて、加熱しして還流させ、６時間撹拌する。反応が完了した後、室温まで冷却し、減圧濃縮する。最後に、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１〜１５：１）で精製して、黄色の固体、即ちｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−（（１−シクロペンチル−３−（１−エトキシビニル）−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−７−イル）アミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１７６ｍｇ、収率：６８％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５７４［Ｍ＋１］^＋。

ステップ５ｈにおいて、３−アセチル−１−シクロペンチル−４−メチル−７−（（５−（ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（３−ａｃｅｔｙｌ−１−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−４−ｍｅｔｈｙｌ−７−（（５−（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）−１，６−ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｉｎ−２（１Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物３０９）を調製する。

ｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−（（１−シクロペンチル−３−（１−エトキシビニル）−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−７−イル）アミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物３０８）（１７６ｍｇ、０．３０７ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、６ｍＬの６ｍｏｌ／Ｌの塩酸を加えて、室温で２時間撹拌する。ｐＨ値が８〜９に調整されるように反応液に飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加える。そして、生じられた無機塩を濾過により除去し、濾液を減圧濃縮する。最後に、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１〜１０：１）で精製して、黄色の固体、即ち３−アセチル−１−シクロペンチル−４−メチル−７−（（５−（ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（６２ｍｇ、収率：４５％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ４４６［Ｍ＋１］^＋。融点：１９０．５−１９１．７；^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １０．０８（ｄ，Ｊ＝１７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｍ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），５．７０（ｍ，１Ｈ），３．３６（ｍ，３Ｈ），２．９８（ｔ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），２．８６（ｔ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ），２．２６（ｍ，４Ｈ），１．８５（ｍ，８Ｈ）。

ステップ５ｉにおいて、３−アセチル−１−シクロペンチル−４−メチル−７−（（５−（１−（２−（メチルスルホニル）エチル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（３−ａｃｅｔｙｌ−１−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ−４−ｍｅｔｈｙｌ−７−（（５−（１−（２−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ａｍｉｎｏ）−１，６−ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｉｎ−２（１Ｈ）−ｏｎｅ）（化合物１３）を調製する。

化合物３−アセチル−１−シクロペンチル−４−メチル−７−（（５−（ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物３０９）（１４０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ、１．０当量）をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（４３ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、５０℃まで昇温した後、２−（メチルスルホニル）エチルメタンスルホネート（１１１−１）溶液（２０．７ｍＬ、０．３７ｍｍｏｌ、１．２当量）をゆっくりと滴下し、８０℃で２時間撹拌する。室温まで冷却し、反応液をジクロロメタンと水とで抽出し、分液する。有機相を食塩水で２回洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して得た黄色の固体を、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１〜１０：１）で分離し精製して、黄色固体の化合物３−アセチル−１−シクロペンチル−４−メチル−７−（（５−（１−（２−（メチルスルホニル）エチル）ピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１１７ｍｇ、収率：６８．４％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５５２［Ｍ＋１］^＋。融点：１４０．７−１４４．９℃；^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １０．０３（ｓ，１Ｈ），８．７７（ｓ，１Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），５．６８（ｐ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ），３．０１（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，２Ｈ），２．７４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５１（ｓ，１Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），２．２４（ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，２Ｈ），２．１８（ｓ，２Ｈ），２．０８（ｔ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ），１．８９（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），１．７６（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，４Ｈ），１．６３（ｄｄ，Ｊ＝２２．７，１１．５Ｈｚ，２Ｈ）。

＜実施例６ 生物活性試験＞
一、酵素活性阻害試験
１、実験方法
（１）ＣＤＫ２活性阻害試験
キャリパー移動度シフトアッセイ（Ｃａｌｉｐｅｒ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｓｈｉｆｔ ａｓｓａｙ）を用いて、ＣＤＫ２プロテインキナーゼの活性を測定した（Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ １４：３１，２００９参照）。上記取得した化合物をＤＭＳＯで溶解した後、キナーゼ緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ｐＨ７．５、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２ｍＭ ＤＴＴ）で希釈した。３８４ウェルプレートに５μＬの１０％ＤＭＳＯで溶解された５倍の終濃度の化合物を入れ、化合物なしのコントロールウェルに５μＬの１０％ＤＭＳＯを入れ、酵素活性なしのコントロールウェルに５μＬのキナーゼ緩衝液を入れた。１０μＬの２．５倍希釈されたＣＤＫ２酵素溶液（Ｃａｒｎａ，Ｃａｔ．Ｎｏ ０４−１０３）を加えて、室温で１０分間インキュベートする。そして、１０μＬの２．５倍希釈された基質溶液Ｐｅｐｔｉｄｅ ＦＡＭ−Ｐ１８（ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｃａｔ． Ｎｏ．１１４２０２）を加えた。２８℃で６０分間インキュベートした後、２５μＬの停止液を加えて反応を停止させた。Ｃａｌｉｐｅｒ ＥＺ Ｒｅａｄｅｒ ＩＩ（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）でコンバージョン率データを読み出す。コンバージョン率データを阻害率データに変換した。そのうち、ｍａｘは、ＤＭＳＯの化合物なしのコントロールウェルでのコンバージョン率を示し、ｍｉｎは、酵素活性なしのコントロールウェルでのコンバージョン率を示す。化合物濃度と阻害率とをそれぞれ横、縦座標として、曲線を描いた。ＸＬＦｉｔ ｅｘｃｅｌ ａｄｄ−ｉｎ ｖｅｒｓｉｏｎ ４．３．１というソフトウェアを用いて曲線をフィッティングし、ＩＣ_５０を計算した。阻害率％＝（ｍａｘ−コンバージョン率）／（ｍａｘ−ｍｉｎ）×１００とする。

（２）ＣＤＫ４活性阻害試験
キャリパー移動度シフトアッセイ（Ｃａｌｉｐｅｒ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｓｈｉｆｔ ａｓｓａｙ）を用いて、ＣＤＫ４プロテインキナーゼの活性を測定した（Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ １４：３１，２００９参照）。上記取得した化合物をＤＭＳＯで溶解した後、キナーゼ緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ｐＨ７．５、０．０１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＤＴＴ）で希釈した。３８４ウェルプレートに５μＬの１０％ＤＭＳＯで溶解された５倍の終濃度の化合物を入れ、化合物なしのコントロールウェルに５μＬの１０％ＤＭＳＯを入れ、酵素活性なしのコントロールウェルに５μＬのキナーゼ緩衝液を入れた。１０μＬの２．５倍希釈されたＣＤＫ４酵素溶液（ＧＳＴ−ＣＤＫ４（１−３０３ｅｎｄ）／ＧＳＴ−ＣｙｃＤ３（１−２９２ｅｎｄ；Ｃａｒｎａ，Ｃａｔ．Ｎｏ０４−１０５））を加えた後、室温で１０分間インキュベートする。そして、１０μＬの２．５倍希釈された基質溶液Ｐｅｐｔｉｄｅ ＦＡＭ−Ｐ８（ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｃａｔ．Ｎｏ．１１２３９６）を加えた。２８℃で３時間インキュベートした後、２５μＬの停止液を加えて反応を停止させた。Ｃａｌｉｐｅｒ ＥＺ Ｒｅａｄｅｒ ＩＩ（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）でコンバージョン率データを読み出した。上記の方法によりコンバージョン率データを阻害率データに変換した。そのうち、阻害率％＝（ｍａｘ−コンバージョン率）／（ｍａｘ−ｍｉｎ）×１００とする。

（３）ＣＤＫ６活性阻害試験
キャリパー移動度シフトアッセイ（Ｃａｌｉｐｅｒ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｓｈｉｆｔ ａｓｓａｙ）を用いてＣＤＫ６プロテインキナーゼの活性を測定した（Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ １４：３１，２００９参照）。上記取得した化合物をＤＭＳＯで溶解した後、キナーゼ緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ｐＨ７．５、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２ｍＭ ＤＴＴ）で希釈した。３８４ウェルプレートに５μＬの１０％ＤＭＳＯで溶解された５倍の終濃度の化合物を入れ、化合物なしのコントロールウェルに５μＬの１０％ＤＭＳＯを入れ、酵素活性なしのコントロールウェルに５μＬのキナーゼ緩衝液を入れた。１０μＬの２．５倍希釈されたＣＤＫ６酵素溶液（ＧＳＴ−ＣＤＫ６（１−３２６ｅｎｄ）；Ｃａｒｎａ，Ｃａｔ．Ｎｏ０４−１０７）を加えて、室温で１０分間インキュベートし、そして、１０μＬの２．５倍希釈された基質溶液Ｐｅｐｔｉｄｅ ＦＡＭ−Ｐ８（ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｃａｔ．Ｎｏ．１１２３９６）を加えた。２８℃で４０分間インキュベートした後、２５μＬの停止液を加えて反応を停止させた。Ｃａｌｉｐｅｒ ＥＺ Ｒｅａｄｅｒ ＩＩ（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）でコンバージョン率データを読み出した。コンバージョン率を阻害率データに変換した。そのうち、ｍａｘはＤＭＳＯコントロール（化合物なし）のコンバージョン率を示し、ｍｉｎは、酵素活性なしのコントロールのコンバージョン率を示す。上記の方法によりコンバージョン率データを阻害率データに変換した。そのうち、阻害率％＝（ｍａｘ−コンバージョン率）／（ｍａｘ−ｍｉｎ）×１００とする。

２、実験結果
上記の実験結果は下記の表に示されている。

上記の結果からわかるように、本発明の化合物は、ＣＤＫ２を阻害するＩＣ_５０がＩ、即ち少なくとも＞５００ｎＭであって、阻害活性がほとんどない一方、ＣＤＫ６を阻害するＩＣ_５０が５０ｎＭ以下（化合物４は例外）であり、ＣＤＫ４を阻害するＩＣ_５０が１０ｎＭ以下である。即ち、このような化合物は、ＣＤＫ４とＣＤＫ６とを選択的に阻害することができ、ＣＤＫ２に対する阻害活性がほとんどなく、ＣＤＫ４とＣＤＫ６に対する阻害活性が高くて５０ｎＭ、１０ｎＭ以下さえに達することができ、高選択性と高活性の特徴を持っている。

二、腫瘍細胞増殖抑制実験
１、実験方法
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いてアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の含有量を測定することにより、細胞の活力を評価した。腫瘍細胞株（ＳＷ６２０、ＺＲ−７５−１、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）は中国上海復旦ＩＢＳ細胞資源中心とアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ）から購入されたものである。細胞を細胞培養プレートからパンクレアチンで消化されて、ＤＰＢＳ培地で再懸濁させた後、Ｓｃｅｐｔｅｒ自動セルカウンター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＃ＰＨＣＣ０００００）を用いて細胞密度を測定した。細胞を４４，０００個／ｍＬの細胞溶液に希釈した。密度が調整された細胞溶液を、９０μＬ／ウェルで細胞アッセイプレートに入れた。ウェルプレートを３７℃の５％ＣＯ_２インキュベーターで２４時間培養した後、濃度が異なる試験対象化合物を加えた。細胞は、１０％のウシ胎児血清の存在下で、化合物とともに７２時間培養された。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ（メーカーマニュアル参照）を用いて、ＡＴＰの含有量を測定することにより、細胞成長に対する阻害を評価した。簡単に言えば、ウェルあたりに３０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬を加えて、１０分間振ることにより、細胞溶解を誘導し、そしてＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて蛍光信号を検出して記録した。ジメルスルホキシドで７２時間処理された細胞から最大の信号値を得た。単独の培地（細胞数はゼロ）から最小の信号値を得た。阻害率％＝（最大の信号値−化合物の信号値）／（最大の信号値−最小の信号値）×１００。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖ５．０（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）ソフトウェアを用いてデータを処理する。Ｓ字形の投与量−反応曲線をフィッティングすることによりＩＣ_５０値を計算した。

２、実験結果
上記実験の結果は下記の表に示されている。

上記の結果からわかるように、本発明の化合物は、ＳＷ６２０、ＺＲ−７５−１、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍細胞株のいずれに対しても阻害活性を有し、且つ一部の化合物の活性が高い。

三、細胞周期阻害実験
１、実験方法
本実験で採用された細胞周期とアポトーシスアッセイキット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ，Ｃ１０５２）は、典型的なヨウ化プロピジウム染色（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｓｔａｉｎｉｎｇ、即ちＰＩ ｓｔａｉｎｉｎｇ）方法を用いて細胞周期とアポトーシスを分析するアッセイキットである。ヨウ化プロピジウム（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ、ＰＩと略称されている）は、二本鎖ＤＮＡの蛍光染料である。ヨウ化プロピジウムは二本鎖ＤＮＡと結合して蛍光を発生することができ、且つ蛍光強度が二本鎖ＤＮＡの含有量に正比例する。細胞内のＤＮＡがヨウ化プロピジウムにより染色された後、フローサイトメーターを用いて細胞のＤＮＡの含有量を測定することができ、ＤＮＡの含有量の分布状況により、細胞周期とアポトーシスを分析することができる。

ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、３×１０^５個／ウェルで６ウェル培養プレートに接種して、２４時間培養した。試験対象化合物又はコントロール化合物（ＰＤ−０３３２９９１又はＬＹ２８３５２１９）を加えて２４時間経過後、１０００ｒｃｆで３分間遠心処理をして細胞を収集し、ＰＢＳ（リン酸緩衝液）で２回洗った。予冷された７０％エタノールを加えて４℃で一晩固定し、１０００ｒｃｆで１０分間遠心処理をし、１×ＰＢＳで２回洗い、ＰＩ染色液を加えて３０分間染色し、フローサイトメーターで細胞周期Ｇ１の停止を検出し、分析した。

２、実験結果
ＣＤＫ４及びＣＤＫ６は、腫瘍細胞周期においてｃｙｃｌｉｎ Ｄと結合することにより、Ｇ１期からＳ期に入ることを促進する。ＣＤＫ４／６阻害剤は、腫瘍細胞がＧ１期からＳ期に入ることを選択的に停止させる。フローサイトメトリによりＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳がん細胞周期を測定した結果、表３に示すように、本発明のＣＤＫ４／６阻害剤化合物は、濃度依存により、Ｇ１期の細胞成長を停止させ、Ｓ期の細胞を減少させる。

四、ウエスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ）実験
１、実験方法
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を単層培養により成長させ、試験対象化合物又はコントロール化合物（ＰＤ−０３３２９９１又はＬＹ２８３５２１９）を加えて１６時間培養した後、予冷されたＰＢＳで２回洗い、細胞を収集し、生物学的サンプルホモジナイザーで２〜３回均質化し、４℃、１３，０００ｒｐｍで１０分間遠心処理をし、上清を取った。Ｂｒａｎｆｏｒ法を用いてタンパク質濃度を測定し、ローディングバッファー（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ，＃Ｐ００１５Ｌ）を加えて１００℃で８分間煮て、８％〜１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動によりタンパク質を分離してＰＶＤＦ膜に移転した。５％脱脂粉乳で膜を４５分間ブロックし、一次抗体のβ−ａｃｔｉｎ（ＣＳＴ，＃４９７０）、Ｒｂ（Ｄ２０）Ｒａｂｂｉｔ ｍＡｂ（ＣＳＴ，＃９３１３）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｒｂ（Ｓｅｒ７８０）（Ｄ５９Ｂ７）Ｒａｂｂｉｔ ｍＡｂ（ＣＳＴ，＃８１８０）を加えて４℃で一晩インキュベートし、その後、ＴＢＳＴ液で膜を洗った（３×１０分間）。蛍光二次抗体のＩＲＤｙｅ＠６８０ＣＷ Ｇｏａｔ（ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ）Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ ｌｇＧ（Ｈ＋Ｌ），Ｈｉｇｈｌｙ Ｃｒｏｓｓ Ａｄｓｏｒｂｅｄ（ＬＩ−ＣＯＲ，＃９２６−６８０７１）を用いて、室温で光を避けて２時間インキュベートした後、洗浄条件が上記の洗浄条件と同じように膜を洗った。最後に、膜をＬＩ−ＣＯＲ Ｏｄｙｓｓｅｙ赤外線蛍光スキャニングイメージングシステムに置いて検出しイメージした。結果は図１に示されている。

２、実験結果
ＣＤＫ４／６は、腫瘍抑制タンパク質であるＲｂタンパクをリン酸化することにより、細胞周期に対するＲｂタンパクの停止機能を失わせることができる。ＣＤＫ４／６阻害剤は、腫瘍抑制タンパク質Ｒｂの不活性化を阻止して、細胞周期に対するＲｂタンパクの停止機能を回復させる。図１からわかるように、本発明による化合物１、２は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳がん細胞に作用することにより、ＲｂのＳｅｒ７８０サイトでのリン酸化を効果的に低減することができる。

＜実施例７ 薬物動態学（ＰＫ）実験＞
１、実験方法
体重３００−３５０ｇの雄性ＳＤラットを用い、試験前に一晩禁食させた。試験対象化合物を、３０％スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢＥ−β−ＣＤ）に溶解させ、２０ｍｇ／ｋｇで胃管投与した。投与後１５分間、３０分間、及び１、２、３、４、６、８、２４時間の時点で、ラットの尾端から１回あたり約０．３ｍｏｌの血液を取り、Ｋ２−ＥＤＴＡが入っている遠心チューブに入れて、遠心処理（２，０００ｇ、１０ 分間、４℃）して血漿を取り、−８０℃の超低温冷蔵庫に保存した。５０μＬの血漿サンプルを５μＬの内部標準（ＩＳ）と混合させ、酢酸エチルで抽出した。真空乾燥した後、残留物をアセトニトリルに再度溶解させた。サンプルを濾過し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳに注入して分析し、試験対象化合物の濃度を測定した。

２、実験結果
結果は表４及び図２〜４に示されている。

上記結果からわかるように、本発明による化合物１、２は、胃管投与による吸収が良く、血中濃度が高い。このような化合物は、コントロール化合物であるＰＤ−０３３２９９１より、Ｃ_ｍａｘがおよそ４〜７倍高く、ＡＵＣがおよそ３〜９倍広くなった。Ｉ期臨床結果によれば、ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ（ＰＤ−０３３２９９１）の経口吸収の血液中薬物濃度は低い。半減期が長い（平均値は２５．９時間）ため、毎日繰り返して投与すると薬物の蓄積になってしまう（Ｋｅｉｔｈ Ｔ，ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １８：５６８，２０１１）。化合物１、２は、経口投与による吸収が良く、Ｃ_ｍａｘとＡＵＣが顕著に向上し、半減期が割りに短い。

＜実施例８ 薬力学実験＞
１、実験方法
中国科学院（ＣＨＩＮＥＳＥ ＡＣＡＤＥＭＹ ＯＦ ＳＣＩＥＮＣＥＳ）上海セルバンクからＭＤＡ−ＭＢ−４３５乳がん細胞を入手した。冷凍保存されていた細胞を、３７°Ｃの水浴で解凍した後、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％インスリン（上海宝曼生物科技有限公司製）のＲＰＭＩ １６４０が入っている培地に置いて、５％ＣＯ_２の組織培養インキュベーター内で培養した。細胞が所要の数量に達すると、細胞を収集し、血清のないＤｕｌｂｅｃｃｏリン酸塩緩衝液（ＤＰＢＳ）で洗った。０．１ｍＬのＲＰＭＩ １６４０に懸濁している３．５×１０^６個細胞と０．１ｍＬのＥＣＭ ｇｅｌ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）とを、各マウスの右後側部の皮下領域に、血管を避けながら注入した。移植成功のヒントは、皮膚の下に丸く膨らんだ塊が形成されたことである。移植実施から２週間ほど経過したとき、腫瘍の大きさをキャリパーを用いて測定することができる。そして、下記の数式により腫瘍の体積を計算した：腫瘍の体積＝（長さ×幅^２）／２、腫瘍の成長変化率（Ｔ／Ｃ％）＝１００×ΔＴ／ΔＣ。

２、実験結果
ＰＤ−０３３２９９１が１５０ｍｇ／ｋｇ、１日１回で経口投与されて６日目に、マウスの平均体重は明らかに下がった。その後、投与量を１００ｍｇ／ｋｇに調整して１日１回で経口投与した。化合物１は、７５ｍｇ／ｋｇ、１日２回で経口投与された。２週間の投与後、ＰＤ−０３３２９９１と化合物１の投与を停止させ、腫瘍の大きさ及びマウスの体重の変化を観察し続けた。

結果は図５及び図６に示されている。図５は腫瘍の体積変化曲線図であり、図６はマウスの体重変化曲線図である。ＰＤ−０３３２９９１と化合物１は腫瘍の成長を抑制した。１４日間の投与後、ＰＤ−０３３２９９１と化合物１のＴ／Ｃ値がそれぞれ４１％、２５％となったことは、最大耐量のとき、ＰＤ−０３３２９９１よりも、化合物１の抗がん活性と安全性が高いことを示す。投与停止後６日目（即ちＤ２０）に、ＰＤ−０３３２９９１と化合物１のＴ／Ｃ値がそれぞれ３５％、３２％であったことは、両方の機能期間が長いことを示す。

前記実施例の各技術的特徴は任意に組合せることができるが、説明の便宜上、前記実施例の各技術的特徴の全ての組合せを説明していない。これらの技術的特徴の組合せは矛盾しなければ、本明細書の記載範囲に含まれると理解されるのが当然である。

前記実施例により、本発明のいくつかの実施形態を具体的且つ詳細に説明したが、本発明はこれらに限定されていない。当業者にとって、本発明の精神を逸脱しないかぎり、様々な変形や改良も本発明の保護範囲に含まれる。よって、本発明の保護範囲は特許請求の範囲によるものとする。

Claims (12)

1. 式（Ｉ）で示されるピリミジン又はピリドピリドン類化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体であって、
   うち、
   Ｙは、Ｃ又はＮから選択されるものであり、ＹとしてＮが選択された場合、Ｒ_６の置換がなく、
   Ｒ_１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基置換メチル基から選択されるものであり、
   Ｒ_２は、ハロゲン、ＣＯＲ_５、ＣＯＯＲ_５から選択されるものであり、
   Ｒ_３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、
   Ｒ_４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシル基置換Ｃ１−Ｃ６アルキル基、アルコキシ基置換Ｃ１−Ｃ６アルキル基、フェニル基、ハロゲン置換フェニル基から選択されるものであり、
   Ｒ_５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６フッ素含有のアルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基から選択されるものであり、
   Ｒ_６は、Ｈ、Ｆ、ＣＮ、ＣＨ_３から選択されるものであり、
   ｍは、０、１又は２から選択されるものであり、
   ｎは、１、２又は３から選択されるものであり、
   ｐは、１、２又は３から選択されるものである、
   ことを特徴とするピリミジン又はピリドピリドン類化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体。
2. Ｒ_４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシル基置換Ｃ１−Ｃ６アルキル基、アルコキシ基置換Ｃ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであることを特徴とする、請求項１に記載のピリミジン又はピリドピリドン類化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体。
3. Ｒ_４は、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基から選択されるものであることを特徴とする、請求項２に記載のピリミジン又はピリドピリドン類化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体。
4. ｍは、１から選択され、
   ｎは、２から選択され、
   ｐは、１又は２から選択されることを特徴とする、請求項１に記載のピリミジン又はピリドピリドン類化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体。
5. Ｙは、Ｎであることを特徴とする、請求項１に記載のピリミジン又はピリドピリドン類化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体。
6. Ｒ_１は、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基から選択されるものであり、
   Ｒ_２は、ＣＯＲ_５から選択されるものであり、
   Ｒ_３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、
   Ｒ_５は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、
   Ｒ_６は、Ｈから選択される
   ことを特徴とする、請求項１から５の何れか１項に記載のピリミジン又はピリドピリドン類化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体。
7. Ｒ_１は、シクロペンチル基から選択されるものであり、
   Ｒ_２は、ＣＯＲ_５から選択されるものであり、
   Ｒ_３は、メチル基から選択されるものであり、
   Ｒ_５は、メチル基、エチル基から選択されるものであり、
   Ｒ_６は、Ｈから選択されるものであることを特徴とする、請求項６に記載のピリミジン又はピリドピリドン類化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体。
8. 下記の化合物から選択されるものであることを特徴とする、請求項１に記載のピリミジン又はピリドピリドン類化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体。
   
9. 腫瘍を予防・治療するための医薬組成物であって、有効成分として、請求項１から８の何れか１項に記載のピリミジン又はピリドピリドン類化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくは立体異性体、並びにその薬学的に許容可能なキャリヤーを含むことを特徴とする医薬組成物。
10. 前記腫瘍は固形腫瘍及び血液腫瘍であることを特徴とする請求項９に記載の医薬組成物。
11. 前記固形腫瘍及び血液腫瘍は、乳がんと、脂肪肉腫と、非小細胞肺がんと、肝がんと、卵巣がんと、膠芽腫と、黒色腫と、多発性骨髄腫と、マントル細胞リンパ腫とを含むことを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。
12. 前記乳がんは、閉経後の女性のエストロゲン受容体陽性及び／又はヒト上皮増殖因子受容体２型陰性の局所終末期または転移性の乳がんを含むことを特徴とする請求項１１に記載の医薬組成物。