JP6538286B2 - 口腔バイオフィルムの組成を変化させるプロバイオティクス - Google Patents
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Description
多くのプロバイオティクス菌株の候補である、ラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus casei)、ラクトバチルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス・パラカゼイ(Lactobacillus paracasei)、ラクトバチルス・ブルガリクス(Lactobacillus bulgaricus)及びラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)についてスクリーニングを行った。
一般的な無菌の管の中に喀出することにより、5ミリリットルの唾液を実験参加者から得た。唾液を氷上に置き、採集から1時間以内に植菌のために用いた。CBDプレートの植菌のためにサンプルを等量で混合した。
混合された唾液を15秒間ボルテックスし、必要とするウェルの数に到達するまで、96ウェルマイクロプレート中に1ウェルに対し200μlをピペットで入れた。マイクロプレートの外側付近のウェルは使用しなかった。ペグを有するCBDの蓋を、ヒドロキシアパタイトでコーティングされたペグが唾液中に浸るようにマイクロプレートの上に取り付けた。それからCBDプレートを37℃、+5%二酸化炭素の空気中で18時間インキュベートし、その後、蓋をブタ胃由来のムチン(1g/L)、ヘミン(10mg/L)及びビタミンK(0.5mg/L)で補われた200μlの予備還元されたブレインハートインフュージョン(BHI)ブロス(Fluka Analytical)成長培地を含む新しいベースプレートに移した。ペグを+5%二酸化炭素の空気中で14日間インキュベートし、成長培地を3.5日ごとに交換した。
7日間の成長後、BHI中に懸濁された1×108CFUs/mlの濃度の生きた若しくは熱弱毒化されたプロバイオティクス菌株、ネガティブコントロール(無菌BHI)、又はポジティブコントロール(0.1%v/vチモール)を用いて、バイオフィルムを7日間、毎日2回処理した。プロバイオティクス菌株の熱弱毒化は、細菌懸濁液をTechne社製のブロックヒーター中に80℃で30分間置くことで行った。インキュベート後、懸濁液を氷上に5分間置き、それから要求があるまで−70℃で保管した。生きたプロバイオティクス調製物は要求があるまで−70℃で保管し、使用前にブロックヒーター上で、37℃で30分間インキュベートすることにより解凍した。
14日目に、バイオフィルムを備えるペグを、殺菌されたプライヤを用いて蓋から折り取り、殺菌されたPBSに3回浸すことで洗浄した。それから全ての目に見えるバイオフィルム素材を、殺菌されたキュレットを用いて除去し、500μlのPBS中に懸濁させた。3つのペグからの素材が解析のための1サンプルを作るために混合され、3つのサンプルを各処理群に対して処理した。細胞外DNA及び死細胞又は損傷細胞からのDNAのその後のPCR増幅を抑制するために、各サンプルをプロピジウムモノアジド(PMA)処理した(参考文献14)。1.25μlのPMAをPBS中に懸濁された細胞に加え(最終濃度は50μM)、暗闇中で時折振とうしながら5分間室温でインキュベートした。それからサンプルがPMAとDNAとの間の共有結合を形成するために、500Wのハロゲンランプから20cmの距離で5分間露光した。暴露時間の間、過剰な加熱を回避するためにサンプルを氷上に置き、時折振とうした。PMA処理の直後、DNA抽出のためにサンプルを使用した。
GenElute細菌DNA抽出キット(Sigma−Aldrich社製)を用いて、混合された唾液及びバイオフィルムサンプルからDNAを抽出した。DNA抽出を、製造元の指示に従って行うとともに、さらにグラム陽性細胞からのDNAの回収を増加させるため、追加の細胞溶解工程を行い、サンプルを45mg/mlのリゾチーム溶液中で、37℃で30分間インキュベートした。
以前述べたように、部分的な16S rRNA遺伝子のいくつかの微修正を加えた454パイロシークエンスを用いて、バイオフィルム及び唾液の細菌組成を測定した(参考文献6)。合成融合プライマー(composite fusion primers)を用いて、V1−V3の超可変領域をカバーする約500塩基対の長さの16S rRNA遺伝子の断片のPCR増幅を各DNAサンプルに対して行った。融合プライマーは、Lib−LのエマルジョンPCR法を用いた454パイロシークエンスのためのロシュ社製GS−FLXチタニウムシリーズのアダプター配列(A及びB)とともに、広範囲の16S rRNA遺伝子プライマーである27FYM(参考文献15)及び519R(参考文献16)で構成されていた。フォワードプライマーは、既述した12塩基のエラー修正ゴレイバーコード(error−correcting Golay barcodes)を含んでいた。PCR反応を、適切にバーコードされたフォワードプライマー及びリバースプライマーとともに、Extensor Hi−fidelity PCRマスターミックス(Thermo−Scientific社製)を用いて行った。PCR条件は次の通りであった。95℃で5分間の初期変性に続いて95℃で45秒間、53℃で45秒間及び72℃で45秒間を25サイクル行い、最終伸張を72℃で5分間行った。それからPCR増幅産物をQIAquick PCR精製キット(Qiagen社製)を用いて製造元の指示に従って精製した。増幅産物のサイズ及び純度を、Agilent DNA 1000キット及びAgilent 2100 バイオアナライザを用いて確認した。増幅産物の定量を、Quant−iT Picogreen蛍光核酸染色液(Invitrogen社製)を用いた蛍光アッセイを用いて行った。それから増幅産物を等モル濃度(1×109分子/μl)で混合した。エマルジョンPCR及びサンプルの一方向配列決定を、イギリス、ケンブリッジのケンブリッジ大学生化学部にあるLib−Lキット及びロシュ社製の454 GS−FLX+ チタニウムシリーズシーケンサーを用いて行った。
バージョン1.34の‘mothur’ソフトウェア一式(参考文献17)を用いて、mothur.orgにある454標準操作手順(参考文献18)に従って配列解析を行った。mothurにより実行されるように、AmpliconNoiseアルゴリズム(参考文献19)を用いて配列のノイズを除去した。配列は400塩基未満の長さであり、及び/又は以下の一つ:2個を超える(>2)プライマーとのミスマッチ、1個を超える(>1)バーコード領域とのミスマッチ、及び8個を超える(>8)塩基の長さのホモポリマー、を有しており、これらを廃棄した。プライマーとバーコードを除去するために残った配列をトリムし、SILVA 16S rRNA参照アライメント(参考文献20)に合わせて並べた。キメラ配列を同定するためにUChimeアルゴリズム(参考文献21)を用い、それからキメラ配列をデータセットから除去した。配列を平均近傍アルゴリズム(average neighbour algorithm)を用いて0.015の遺伝的距離(おおよそ種のレベル)で操作的分類単位(OTUs)にクラスター化し、ヒト口腔マイクロバイオーム・データベース(Human Oral Microbiome Database)(HOMD)リファレンスセット(バージョン13)と共に単純ベイズ分類器(Naive Bayesian classifier)(参考文献22)を用いて同定した。
統計学的なOTUベースの多様度の比較のために、各サンプルの配列を同じ数(最も少ない配列数を有するサンプルの数)ランダムにサブサンプリングした。Goodのノンパラメトリックな被覆率(coverage)推定器(参考文献23)を用いて群集の試料採取の範囲を評価した。Simpsonの逆数多様度指数(参考文献24)を用いて群集の多様度を計算した。thetaYC計算器(参考文献25)を用いて生成される距離行列を用いてサンプル/処理群の群集構造を比較した。R(r−project.org)中に生成される非計量多次元尺度構成法(non−metric multidimensional scaling)(NMDS)プロットを用いて距離行列を可視化した。thetaYC距離行列に基づく処理群間に統計学的に著しい差異があるかどうかを測定するために、mothurで実行されるように、分子分散解析(AMOVA)(参考文献26)を使用した。‘vegan’パッケージを用いて、細菌属の割合に基づくヒートマップ及び樹状図をR中に生成した。樹状図は、veganパッケージにより実行されるような群集構造中の‘Bray−Curtis’非類似指数に基づいていた。線形判別解析効果量(Linear Discriminant Analysis Effect Size)(LEfSe)(参考文献27)解析を用いて、ネガティブコントロールバイオフィルムと処理群との間での有意差が十分な種レベルのOTUsを検出した。
うまく増幅された複製は、熱弱毒化処理実験のポジティブコントロール処理に由来していた。キメラ配列のフィルタリング及び除去後の解析に対して、合計468,261個の16S rDNA配列が得られ、427塩基の平均長さであった。バイオフィルムサンプル中に検出された種レベルのOTUsの平均数は、混合した唾液接種源中で213.3(±24.7)個及び284(±1.4)個であった。
・成分1及び6を50℃の真空箱型乾燥機中、最大圧力10mbarで16時間乾燥する。
・全ての成分を正確に秤量する。
成分1、2、3、4及び5を合わせ、十分に混合した(ブロックA)。プロバイオティクス材料は、1グラムあたり約105〜1012コロニー形成単位(CFU)の活性を有する凍結乾燥の形態で用いる。
・次にブロックAを成分6に加え、5分間十分に混合する。
・タブレットプレスEK0(Korsch AG社製、ベルリン)の中で、15〜20kNの調整圧力で粉末混合物をタブレットへと圧縮する。
目標パラメータは:
・タブレット直径:20mm
・タブレット重さ:2.0g
・密封したアルミニウムの小袋に室温で保管する。5個のトローチ剤に対し1gの乾燥剤を除湿のために用いる(真空箱型乾燥機中で、105℃で3時間保管することにより活性化する)。
・成分7を50℃の真空箱型乾燥機中、最大圧力10mbarで16時間乾燥する。
・全ての成分を正確に秤量する。
・成分1、2、3及び4を合わせ、十分に混合する(ブロックA)。
・必要であれば、成分5及び6を合わせ、十分に混合する(ブロックB)。プロバイオティクス材料は、1グラムあたり約105〜1012コロニー形成単位(CFU)の活性を有する凍結乾燥の形態で用いる。
・続いてブロックA及びBを合わせ、十分に混合する。
・混合物に成分7を追加し、十分に5分間混合する。
・粉末混合物がそれぞれ0.5gの割り当てとなるように調製し、密閉されたアルミニウムの小袋中の1割り当てに対し1gの乾燥剤(真空箱型乾燥機中で、105℃で3時間保管することにより活性化する)とともに室温で保管する。
・成分6、9及び10を、50℃の真空箱型乾燥機中、最大圧力10mbarで16時間乾燥する。
・全ての成分を正確に秤量する。
・成分1、2、3、4、5及び6を合わせ、十分に混合する(ブロックA)。
・成分7及び8を合わせ、十分に混合する(ブロックB)。プロバイオティクス材料は、1グラムあたり約105〜1012コロニー形成単位(CFU)の活性を有する凍結乾燥の形態で用いる。
・続いてブロックA及びBを合わせ、十分に混合する。
・成分9及び10を合わせ、十分に混合する(ブロックC)。
・2つの混合物(ブロックA/B及びブロックC)を合わせ、5分間十分に混合する。
・タブレットプレスEK0(Korsch AG、ベルリン)の中で、15〜20kNの調整圧力で粉末混合物をタブレットへと圧縮する。
目標パラメータ
・タブレット直径:9mm
・タブレット重さ:0.3g
・密封したアルミニウムの小袋に室温で保管する。3個のタブレットに対し1gの乾燥剤を除湿のために用いる(真空箱型乾燥機中で、105℃で3時間保管することにより活性化する)。
・成分2を50℃の真空箱型乾燥機中、最大圧力10mbarで16時間乾燥する。
・全ての成分を正確に秤量する。
・成分1を、均一な塊が得られるまで加熱ニーダーを備えるチューイングガムラボニーダー中で45〜59℃で混錬する。加熱は混合プロセスの間中行われる。
・続いて成分2、3及び4を加え、混合物が均一になり、粉末がもはや見えなくなるまで混錬する。
・成分6を、成分5(ブロックC)又は成分7(ブロックD)のいずれかに入れ込む。プロバイオティクス材料は、1グラムあたり約105〜1012コロニー形成単位(CFU)の活性を有する凍結乾燥の形態で用いる。一様な懸濁液が得られるまで成分を混合する。
・まず、ブロックCをチューイングガムの塊に加え、均一な塊が得られるまで再度混錬する。
・最後に、ブロックDを適宜処理する。追加後、組成物は均一なチューイングガムの塊が得られるまで混錬しなければならない。
・ミキサーから塊を取り出し、エンボス加工セット“slabs”を用いて、エンボスローラーによりミニスティックに加工する。
・密封したアルミニウムの小袋に室温で保管する。7個のチューイングガムに対し1gの乾燥剤を除湿のために用いる(真空箱型乾燥機中で、105℃の3時間保管することにより活性化する)。
アルギン酸塩ビーズレットの沈殿のための塩化カルシウム溶液の製造:
・2%の塩化カルシウム溶液を蒸留水及び塩化カルシウムから製造する。CaCl2が完全に溶解するように注意しなければならない。
・撹拌機を備え、バッチサイズに適した反応容器の中に水を供給する。
・撹拌機を作動させ、高レベルで撹拌しながら、アルギン酸塩、アラビアガム、小麦繊維及びプロバイオティクスに加えて任意で要求されるゲランガムのそれぞれの量を追加する。
・混合物を撹拌しながら80℃に加熱し、5分間この温度を維持する。この工程の間、ゲル形成成分が溶解する。
・その後、加熱をやめ、塊がなくなるまで更に少なくとも30分間熱いゲル溶液を撹拌する。
・続いて、溶液を撹拌しながら39〜43℃に冷蔵により冷却する。
・必要であれば、別の容器の中に芳香剤及び染料を供給し、十分に混合する。芳香剤を用いない場合、染料をグリセロールと混合する。
・染料分散液が均一に混合されたら、アルギン酸塩溶液とともにバッチ容器に加える。混合容器を約10%の量のアルギン酸塩水溶液で数回洗浄し、懸濁液に加える。
・アルギン酸塩懸濁液を少なくとも更に5分間撹拌する。
・続いて、潜在的に存在する空気を除去するために、バッチを少なくとも更に15分低スピードで撹拌する。
・2つの排出口を備える堅く密閉可能な圧力安定反応容器にアルギン酸塩懸濁液を移す。1つの排出口には加圧空気を適用する。第2の排出口はチューブを経由して滴下ユニットのノズルへと導く。
・アルギン酸塩溶液が約45℃の温度に到達するように、反応容器を加熱プレート上で調節する。溶液をマグネチックスターラーで僅かに撹拌する。
・反応容器に圧力を適用した後、アルギン酸塩溶液を発振器により振動を設定したノズルに向かって押し出する。圧力及び発振器の周波数の適応により、ノズル先端で得られる液滴の大きさを調節してもよい。
・ノズル先端に形成するアルギン酸塩溶液の液滴が、最初に調製される塩化カルシウム溶液が循環する漏斗状の回収容器に落ちる。
・硬化したアルギン酸塩ビーズレットが漏斗を通して塩化カルシウム溶液と共に通過し、ふるいに集められ、回収された塩化カルシウム溶液をドリッピングユニットの下の漏斗に戻して再利用する。
1. van Essche M, Loozen G, Godts C, Boon N, Pauwels M, et al. (2013) Bacterial antagonism against periodontopathogens. J Periodontol 84: 801-811. doi:10.1902/jop.2012.120261.
2. Nyvad B, Fejerskov O (1987) Scanning electron microscopy of early microbial colonization of human enamel and root surfaces in vivo. Scand J Dent Res 95: 287-296.
3. Dewhirst FE, Chen T, Izard J, Paster BJ, Tanner AC, et al. (2010) The Human Oral Microbiome. J Bacteriol. doi:10.1128/JB.00542-10.
4. Griffen AL, Beall CJ, Campbell JH, Firestone ND, Kumar PS, et al. (2012) Distinct and complex bacterial profiles in human periodontitis and health revealed by 16S pyrosequencing. Isme J 6: 1176-1185. doi:10.1038/ismej.2011.191.
5. Abusleme L, Dupuy AK, Dutzan N, Silva N, Burleson JA, et al. (2013) The subgingival microbiome in health and periodontitis and its relationship with community biomass and inflammation. Isme J 7: 1016-1025. doi:10.1038/ismej.2012.174.
6. Kistler JO, Booth V, Bradshaw DJ, Wade WG (2013) Bacterial community development in experimental gingivitis. PLoS ONE 8: e71227. doi:10.1371/journal.pone.0071227.
7. Kinniment SL, Wimpenny J, Adams D, Marsh PD (1996) The effect of chlorhexidine on defined, mixed culture oral biofilms grown in a novel model system. J Appl Bacteriol 81: 120-125.
8. Bradshaw DJ, Marsh PD, Schilling KM, Cummins D (1996) A modified chemostat system to study the ecology of oral biofilms. J Appl Bacteriol 80: 124-130.
9. Guggenheim B, Giertsen E, Schupbach P, Shapiro S (2001) Validation of an in vitro biofilm model of supragingival plaque. J Dent Res 80: 363-370.
10. Ceri H, Olson ME, Stremick C, Read RR, Morck D, et al. (1999) The Calgary Biofilm Device: New technology for rapid determination of antibiotic susceptibilities of bacterial biofilms. J Clin Microbiol 37: 1771-1776.
11. Ali L, Khambaty F, Diachenko G (2006) Investigating the suitability of the Calgary Biofilm Device for assessing the antimicrobial efficacy of new agents. Bioresour Technol 97: 1887-1893. doi:10.1016/j.biortech.2005.08.025.
12. Kistler JO, Pesaro M, Wade WG (2015) Development and pyrosequencing analysis of an in-vitro oral biofilm model. BMC Microbiol 15: 364. doi:10.1186/s12866-015-0364-1.
13. Madhwani T, McBain AJ (2011) Bacteriological effects of a Lactobacillus reuteri probiotic on in vitro oral biofilms. Arch Oral Biol 56: 1264-1273. doi:10.1016/j.archoralbio.2011.04.004.
14. Nocker A, Sossa-Fernandez P, Burr MD, Camper AK (2007) Use of propidium monoazide for live/dead distinction in microbial ecology. Appl Environ Microbiol 73: 5111-5117. doi:10.1128/AEM.02987-06.
15. Frank JA, Reich CI, Sharma S, Weisbaum JS, Wilson BA, et al. (2008) Critical evaluation of two primers commonly used for amplification of bacterial 16S rRNA genes. Appl Environ Microbiol 74: 2461-2470. doi:10.1128/AEM.02272-07.
16. Lane DJ, Pace B, Olsen GJ, Stahl DA, Sogin ML, et al. (1985) Rapid determination of 16S ribosomal RNA sequences for phylogenetic analyses. Proc Natl Acad Sci U S A 82: 6955-6959.
17. Schloss PD, Westcott SL, Ryabin T, Hall JR, Hartmann M, et al. (2009) Introducing mothur: open-source, platform-independent, community-supported software for describing and comparing microbial communities. Appl Environ Microbiol 75: 7537-7541. doi:10.1128/AEM.01541-09.
18. Schloss PD, Westcott SL (2011) Assessing and improving methods used in operational taxonomic unit-based approaches for 16S rRNA gene sequence analysis. Appl Environ Microbiol 77: 3219-3226. doi:10.1128/AEM.02810-10.
19. Quince C, Lanzen A, Davenport RJ, Turnbaugh PJ (2011) Removing noise from pyrosequenced amplicons. BMC Bioinformatics 12: 38. doi:10.1186/1471-2105-12-38.
20. Pruesse E, Quast C, Knittel K, Fuchs BM, Ludwig W, et al. (2007) SILVA: a comprehensive online resource for quality checked and aligned ribosomal RNA sequence data compatible with ARB. Nucleic Acids Res 35: 7188-7196. doi:10.1093/nar/gkm864.
21. Edgar RC, Haas BJ, Clemente JC, Quince C, Knight R (2011) UCHIME improves sensitivity and speed of chimera detection. Bioinformatics 27: 2194-2200. doi:10.1093/bioinformatics/btr381.
22. Wang Q, Garrity GM, Tiedje JM, Cole JR (2007) Naive Bayesian classifier for rapid assignment of rRNA sequences into the new bacterial taxonomy. Appl Environ Microbiol 73: 5261-5267. doi:10.1128/Aem.00062-07.
23. Good IJ (1953) The Population Frequencies of Species and the Estimation of Population Parameters. Biometrika 40: 237-264.
24. Simpson EH (1949) Measurement of Diversity. Nature 163: 688-688.
25. Yue JC, Clayton MK (2005) A similarity measure based on species proportions. Commun Stat-Theor M 34: 2123-2131. doi:10.1080/Sta-200066418.
26. Excoffier L, Smouse PE, Quattro JM (1992) Analysis of molecular variance inferred from metric distances among DNA haplotypes: application to human mitochondrial DNA restriction data. Genetics 131: 479-491.
27. Segata N, Izard J, Waldron L, Gevers D, Miropolsky L, et al. (2011) Metagenomic biomarker discovery and explanation. Genome Biol 12: R60. doi:10.1186/gb-2011-12-6-r60.
28. Loe H, Theilade E, Jensen SB (1965) Experimental Gingivitis in Man. J Periodontol 36: 177-187.
29. Moore WE, Holdeman LV, Smibert RM, Good IJ, Burmeister JA, et al. (1982) Bacteriology of experimental gingivitis in young adult humans. Infect Immun 38: 651-667.
30. Diaz PI, Chalmers NI, Rickard AH, Kong C, Milburn CL, et al. (2006) Molecular characterization of subject-specific oral microflora during initial colonization of enamel. Appl Environ Microbiol 72: 2837-2848. doi:10.1128/AEM.72.4.2837-2848.2006.
31. Kolenbrander PE, Palmer RJJ, Rickard AH, Jakubovics NS, Chalmers NI, et al. (2006) Bacterial interactions and successions during plaque development. Periodontol 2000 42: 47-79. doi:10.1111/j.1600-0757.2006.00187.x.
Claims (14)
- 口腔医薬組成物、口腔ケア製品又は栄養若しくは楽しみのための製品であって、
CCTCC M 2013691として寄託されたラクトバチルス・パラカゼイLPc−G110を含み、
CCTCC M 2013691として寄託されたラクトバチルス・パラカゼイLPc−G110の合計量が、歯周病の治療及び/又は予防に十分であり、
歯周病の治療及び/又は予防に用いるための、
前記組成物又は製品。 - CCTCC M 2013691として寄託されたラクトバチルス・パラカゼイLPc−G110が、弱毒化されている又は死んでいる、請求項1に記載の組成物又は製品。
- CCTCC M 2013691として寄託されたラクトバチルス・パラカゼイLPc−G110の合計量が、前記組成物又は製品の合計質量に対し、0.01〜100%の範囲内である、請求項1又は2に記載の組成物又は製品。
- CCTCC M 2013691として寄託されたラクトバチルス・パラカゼイLPc−G110の合計量が、前記組成物又は製品の合計質量に対し、0.1〜50%の範囲内である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物又は製品。
- CCTCC M 2013691として寄託されたラクトバチルス・パラカゼイLPc−G110の合計量が、前記組成物又は製品の合計質量に対し、1〜10%の範囲内である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組成物又は製品。
- CCTCC M 2013691として寄託されたラクトバチルス・パラカゼイLPc−G110の合計量が、1×10 3 〜1×10 11 コロニー形成単位(CFU)の範囲内である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の組成物又は製品。
- CCTCC M 2013691として寄託されたラクトバチルス・パラカゼイLPc−G110の合計量が、1×10 5 〜1×10 10 コロニー形成単位(CFU)の範囲内である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組成物又は製品。
- 唾液由来の口腔バイオフィルムの細菌組成を変化させることによって歯周病の治療及び/又は予防に用いるための、請求項1〜7のいずれか1項に記載の組成物又は製品。
- グラム陰性の嫌気性属の割合を減少させるための、及び/又は好気性属又は通性嫌気性属の割合を増加させるための、請求項1〜8のいずれか1項に記載の組成物又は製品。
- バクテロイデス属、フソバクテリウム属、プレボテラ属及びピラミドバクター属からなる群から選択される1種以上の細菌の割合を減少させるための、及び/又はコリネバクテリウム属及び/又はナイセリア属の割合を増加させるための、請求項1〜9のいずれか1項に記載の組成物又は製品。
- 担体、賦形剤及び更に活性成分からなる群から選択される1種以上の成分を更に含む、請求項1〜10のいずれか1項に記載の組成物又は製品。
- 前記組成物又は製品が、コーティング又はカプセル化されている、請求項1〜11のいずれか1項に記載の組成物又は製品。
- 前記組成物又は製品が、溶液、懸濁液、乳液、錠剤、顆粒、粉末又はカプセルの形態である、請求項1〜12のいずれか1項に記載の組成物又は製品。
- 前記組成物又は製品が、練り歯磨き、歯磨きジェル、歯磨き粉、歯クリーニング液体、歯クリーニング泡、マウスウォッシュ、マウススプレー、デンタルフロス、チューイングガム及びトローチ剤からなる群から選択される、請求項1〜13のいずれか1項に記載の組成物又は製品。
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---|---|---|---|---|
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---|---|---|---|---|
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WO2000009080A1 (en) | 1998-08-12 | 2000-02-24 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Incorporation of exogenous lactic bacteria into the oral microflora |
IT1306716B1 (it) | 1999-06-21 | 2001-10-02 | Mendes S U R L | Associazione di batteri lattici e suo uso per la prevenzione e/o iltrattamento terapeutico di infezioni e di stati infiammatori. |
US6986709B2 (en) | 2001-09-21 | 2006-01-17 | Igt | Gaming device having games with variable game functions |
DK1659885T3 (da) | 2003-08-11 | 2013-04-02 | Oragenics Inc | Sammensætninger til vedligeholdelsen af mundsundhed |
EP1634948A1 (en) | 2004-09-10 | 2006-03-15 | Basf Aktiengesellschaft | Means and methods for preventing and/or treating caries |
SE528382C2 (sv) | 2004-10-05 | 2006-10-31 | Probi Ab | Probiotiska lactobacillusstammar för förbättrad vaginal hälsa |
EP1934328A1 (en) | 2005-09-19 | 2008-06-25 | Basf Se | Microorganisms inhibiting the formation of foot malodor |
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ITMI20060860A1 (it) | 2006-05-02 | 2007-11-03 | Truffini & Regge Farmaceutici Srl | Composizioni per lasalute di denti e gengive contenenti microrganismi eubiotici deidratati rivivificabili |
WO2007140613A1 (en) | 2006-06-06 | 2007-12-13 | Mcgill University | Fermented milk product and use thereof |
CN101190239B (zh) | 2006-11-28 | 2010-11-03 | 景岳生物科技股份有限公司 | 含有类干酪乳杆菌的产品 |
CN101563447A (zh) | 2006-12-19 | 2009-10-21 | 巴斯夫欧洲公司 | 用于预防和/或治疗变形链球菌群引起的龋的用途和方法 |
CA2729072A1 (en) | 2008-06-24 | 2010-01-21 | Wm. Wrigley Jr. Company | Probiotic chewing gum method of manufacture |
WO2010064373A1 (ja) | 2008-12-04 | 2010-06-10 | 国立大学法人広島大学 | Il-8阻害剤およびその製造方法 |
CN102245191A (zh) | 2008-12-16 | 2011-11-16 | 雀巢产品技术援助有限公司 | 用于改善口腔健康的组合物和方法 |
DK2403510T3 (da) | 2009-03-05 | 2020-03-23 | Probiotical Spa | Bakteriestammer med en høj antiinflammatorisk aktivitet |
EP2455095B1 (en) * | 2009-07-16 | 2017-06-07 | Hiroshima University | Prophylactic, ameliorating or therapeutic agent for oral diseases |
DE202009011370U1 (de) | 2009-08-21 | 2009-11-19 | Dreyer Gmbh | Vorrichtung zur Oberflächenbehandlung einer sich bewegenden Kunststoffschicht |
CN101703179A (zh) | 2009-12-11 | 2010-05-12 | 江南大学 | 一种清除食品中微囊藻毒素的方法 |
CN101715908A (zh) | 2009-12-11 | 2010-06-02 | 江南大学 | 一种提高益生菌清除微囊藻毒素效率的方法 |
DK2364712T3 (da) | 2010-03-11 | 2013-05-21 | Kloarys Invest Ltd | Topisk, kosmetisk eller farmaceutisk sammensætning, der omfatter probiotiske Lactobacillus-stammer, og anvendelse heraf |
EP2420580A1 (en) | 2010-08-18 | 2012-02-22 | AB-Biotics, S.A. | Probiotic composition for oral health |
EP2612904B1 (en) | 2010-08-31 | 2016-09-21 | Centro Superior de Investigación en Salud Pública (CSISP) | Anticaries compositions and probiotics/prebiotics |
TWI572354B (zh) | 2010-09-09 | 2017-03-01 | 明治股份有限公司 | 抑制發炎之組成物 |
EP3424516A1 (en) | 2011-01-24 | 2019-01-09 | Basf Se | Oral health improving compositions |
CN103547670B (zh) | 2011-05-16 | 2017-06-16 | 有机平衡医疗股份公司 | 新的乳酸菌和含有其的抗细菌性感冒的组合物 |
JP5904028B2 (ja) | 2012-06-19 | 2016-04-13 | ライオン株式会社 | 乳酸菌及びその培養由来物、ならびにこれらを含有する組成物 |
CA2783414A1 (en) | 2012-07-22 | 2014-01-22 | Integral Medical Inc. | Probiotic composition |
US8906668B2 (en) | 2012-11-23 | 2014-12-09 | Seres Health, Inc. | Synergistic bacterial compositions and methods of production and use thereof |
US20160015627A1 (en) | 2013-03-14 | 2016-01-21 | Nestec S.A. | Lactobacillus plantarum ncc 2936 preparations and oral health |
US9587284B2 (en) | 2014-02-21 | 2017-03-07 | Asian Probiotics and Prebiotics Ltd. | Lactic acid bacterium having immunomodulatory and anti-allergic effects and pharmaceutical composition containing the same |
TWI505832B (zh) | 2014-02-21 | 2015-11-01 | Genmont Biotech Inc | 乳酸菌、其組合物與彼等於治療自體免疫疾病暨其倂發症之用途 |
US9399048B2 (en) | 2014-03-05 | 2016-07-26 | Asian Probiotics And Prebiotics Ltd | Lactic acid bacteria and its applications in immunomodulation and anti-inflammation |
WO2016053003A1 (ko) | 2014-09-30 | 2016-04-07 | 주식회사 알엔에이 | 비배당체가 세포내에 축적되어 있는 미생물 제제의 제조방법 및 이에 의해 제조된 미생물 제제 |
CN111888369A (zh) | 2015-08-25 | 2020-11-06 | 卡莱多生物科技有限公司 | 聚糖组合物及其用途 |
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2019502737A (ja) * | 2016-01-19 | 2019-01-31 | シムライズ アーゲー | 口腔内の抗炎症剤として用いるためのプロバイオティクス |
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