JP6520940B2 - 標識化レクチンを用いるサンドイッチ型アッセイおよびそのためのキット - Google Patents
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Description
本発明のサンドイッチ型アッセイは、標識化レクチンおよび測定領域に固相化された捕捉物質を用いて、検出対象物質としての糖タンパク質を定量するためのサンドイッチ型アッセイであって、測定領域に非特異的に吸着した夾雑物が有する、検出対象物質と同じ糖鎖への標識レクチンの結合を抑制する処理を含む。なお、「測定領域」は、詳細は後述するが、そこから発せられる蛍光の強度が測定される領域(空間)であって、固相化された捕捉物質、それを担持している支持体、さらにそれらを載せている部材の表面などを含む領域を指す。
本発明の典型的な実施形態において、測定領域に非特異的に吸着した夾雑物は、検出対象物質と同じ糖鎖を有する糖タンパク質である。この場合、その糖鎖への標識化レクチンの結合を抑制する処理は、ジスルフィド結合を開裂する作用を呈する物質(本明細書において「SS結合開裂剤」と称する。)を夾雑物としての糖タンパク質に接触させることにより、検出対象物質と同じ糖鎖を含むドメインを遊離させる処理であることが好適である。
本発明では、適切なレクチンが認識して結合する特定の糖残基を含む糖鎖を有し、かつ適切な抗体が認識して結合する部位(特にタンパク質部分)を有する糖タンパク質を検出対象物質とする。
本発明において、検出対象物質の定量に対する影響を抑制するための対象とする夾雑物は、検出対象物質と同じ糖鎖を有する物質である。具体的には、検出対象物質とともに検体中に存在する、検出対象物質以外の糖タンパク質、糖脂質、その他の糖鎖を有する生体関連物質(低分子等)がそのような夾雑物となり得る。
本発明では、検出対象物質および夾雑物を含む可能性のある検体を用いる。検出対象物質および夾雑物を含む可能性のある検体は、現実にそれらを含む検体であってもよいし、現実にはそれらを含まない検体であってもよい。具体的には、たとえば、検出対象物質(および夾雑物)を含む可能性の高い特定の疾患の患者に由来する検体であってもよいし、検出対象物質(および夾雑物)を含む可能性の低い健常者に由来する検体であってもよい。また、検体を採取する対象は、典型的にはヒトであるが、ヒトの疾患のモデル動物、たとえばマウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヤギ、ネコ、イヌ、ブタ、サルといったヒト以外の哺乳動物であってもよい。
本発明では、検出対象物質が有する糖鎖に含まれる特定の糖残基を認識しそれに結合できるレクチンを標識化して、サンドイッチ型アッセイのために用いる。なお、レクチンには、凝集素〔agglutinin〕と呼ばれている物質も含まれるが、本明細書においてはレクチンという呼び方で統一する。
本発明では、検出対象物質としての糖タンパク質に特異的に結合する物質を、測定領域に固相化して用いる。それにより、測定領域に検出対象物質を捕捉し、捕捉物質−検出対象物質−標識化レクチンの複合体(サンドイッチ型複合体)を形成することができるようになる。
サンドイッチ型アッセイでは、測定部材の表面に測定領域を設け、そこに捕捉物質−検出対象物質−標識化レクチンの複合体(サンドイッチ型複合体)を形成させたときに、測定領域の内部に存在する標識化レクチンから発せられるシグナルの強度を測定し、その測定値によって検体中の検出対象物質の含有量(濃度)を定量する。そのようなサンドイッチ型アッセイは、一般的に、シグナルを測定する前にサンドイッチ型複合体を形成させるための各種の処理を行う「測定前工程」と、サンドイッチ型複合体を形成した後、シグナルを測定するための各種の処理を行う「測定工程」とに大別される。
夾雑物が検出対象物質と同じ糖鎖を有する「糖タンパク質」である場合、測定前工程は、ジスルフィド結合を開裂する作用を呈する物質(SS結合開裂剤)を夾雑物に作用させる処理を含むことが好ましい。この場合、測定前工程は一般的に、下記(A)〜(C)の3つの処理を含むことになる:
(A)標識化レクチンを検出対象物質に接触させる処理(標識処理);
(B)SS結合開裂剤を夾雑物に接触させる処理(開裂処理);および、
(C)捕捉物質に検出対象物質(および夾雑物)を接触させる処理(捕捉処理)。
(1)(標識処理+開裂処理)→捕捉処理
(2)標識処理→開裂処理→捕捉処理
(3)開裂処理→標識処理→捕捉処理
(4)開裂処理→捕捉処理→標識処理
(5)標識処理→捕捉処理→開裂処理
(6)捕捉処理→(標識処理+開裂処理)
(7)捕捉処理→標識処理→開裂処理
(8)捕捉処理→開裂処理→標識処理
測定前工程における開裂処理の順序は、(1)〜(4)の順序に対応する、捕捉処理を行う前に開裂処理を行うグループ(I)と、(5)〜(8)の順序に対応する、捕捉処理を行った後に開裂処理を行うグループ(II)の2つに大きく分けることができる。
測定工程は、標識化レクチンから発せられるシグナルの強度を測定する工程であり、その実施形態はサンドイッチ型アッセイを用いた測定系に準じたものとなる。
本発明のサンドイッチ型アッセイは、SPFS(Surface Plasmon-field enhanced fluorescence spectroscopy:表面プラズモン共鳴励起増強蛍光分光法)測定系に準じて実施されることが好適である。以下に述べるように、SPFSは標識化レクチンから発せられる蛍光の強度を高感度で測定することができるが、その分、蛍光強度の測定値(シグナル:S)には、検出対象物質に結合した標識化レクチンに由来する測定されるべきシグナルだけでなく、夾雑物に結合した標識化レクチンなどに由来する、測定されるべきでないバックグラウンド(B)も含まれやすくなる。前述したような測定前工程で行われる開裂処理は、そのようなノイズを著しく低減することにより、検出対象物質の定量値の指標となるS/B比を向上させ、検出対象物質をより正確に定量することができるようになる。
本発明のサンドイッチ型アッセイは、検出対象物質の定量が必要とされる様々な用途に対して利用することができるものであり、その利用の目的は特に限定されるものではない。
本発明のキットは、標識化レクチンおよび測定領域に固相化された捕捉物質を用いて、検出対象物質としての糖タンパク質を定量するためのサンドイッチ型アッセイを実施することのできるキットであって、少なくとも、夾雑物としての糖タンパク質を処理するためのジスルフィド結合を開裂する作用を呈する物質(SS結合開裂剤)を含む。このような本発明のキットは、前述したような開裂処理を含む本発明のサンドイッチ型アッセイを効率的に実施するために好適なものとなっている。
図2Bおよび図3Bに示す構成を有するSPFS用測定装置を作製した(以下の記載中の符号は図2Bおよび図3Bと同じである)。また、誘電体部材12としてシグマ光機(株)製の60度プリズムを用い、この誘電体部材12の上面に、次に述べる作製例2により得られた、透明平面基板13を用いて作製され、測定領域38に抗PSA抗体が固相化された、流路36を備えたセンサーチップ16を固定した。光源20としては波長635nmの光を照射することができるレーザーダイオード(LD)を用いた。光源20と誘電体部材12との間には、光学フィルタとして減光フィルタ(中性濃度フィルタ)を設けてフォトン量を調整できるようにした。センサーチップ16の測定領域38の上部に、集光レンズとして対物レンズを備え付け、さらに光検出器として光電子増倍管(PMT)を備え付け、光検出手段32とした。
屈折率1.72、厚さ1mmのガラス製の透明平面基板「S−LAL 10」((株)オハラ)をプラズマ洗浄し、この基板の片面にクロム薄膜をスパッタリング法によって形成した。その後、その表面にさらに金薄膜をスパッタリング法によって形成した。クロム薄膜の厚さは1〜3nm、金薄膜の厚さは44〜52nmであった。
上記のようにしてプラズモン励起センサーの上に構築した流路にペリスタポンプを接続し、超純水を10分間、その後リン酸緩衝生理食塩水(PBS)を20分間、室温(25℃)で、流量500μL/分で循環送液させて、プラズモン励起センサーの表面を平衡化した。
蛍光標識化レクチン(Alexa Fluor 647標識WFA)を、蛍光物質ラベリングキット「Alexa Fluor(商標名)647タンパク質ラベリングキット」(インビトロジェン社製)を利用して作製した。WFA(ノダフジレクチン)「L-1350」(Vector社)100μg相当と、0.1M重炭酸ナトリウムと、Alexa Fluor 647 reactive dyeとを混合し、室温で1時間反応させた後、ゲル濾過クロマトグラフィーおよび限外濾過を行い、標識に利用されなかったAlexa Fluor 647 reactive dyeを取り除いて、蛍光標識化WFAを回収した。得られた蛍光標識化WFA溶液の吸光度を測定して濃度を定量し、PBSで希釈して1μg/mLの濃度となるよう調整した。
陽性試料として、PSAフリープール血清(正常ヒトプール血清、コージンバイオ社、ELISAにてPSA濃度が0.01ng/mL以下であることを確認)に、LNCaP(ヒト前立腺癌細胞培養株)培養上清を、全PSA濃度が2ng/mLとなるように添加した血清サンプルを調製し、シグナル(S)を取得するための試料として用いた。
(シグナル値の測定)
還元剤としてメタ重亜硫酸ナトリウムを3.5wt%含有するPBS(pH7.4)溶液を調製し、処理溶液として用いた。この処理液100μLを、シグナル取得用試料50μLに添加し、チューブ内でよく撹拌して、室温にて5分間放置した。
シグナル取得用試料の代わりにバックグラウンド取得用試料を用いたこと以外は上記「シグナル値の測定」と同様の手順で、Alexa Fluor 647の蛍光の発光強度を測定し、その測定値をバックグラウンド値とした。
上記の手順で取得したバックグラウンド値に対する、上記の手順で取得したシグナル値の比の値であるS/B比を算出した。
メタ重亜硫酸ナトリウムの代わりにチオグリセロールを添加した処理溶液を用いたこと以外は実施例1と同様の手順でシグナル値およびバックグラウンド値を取得し、S/B比を算出した。
メタ重亜硫酸ナトリウムの代わりにトルエンチオスルフィン酸ナトリウムを添加した処理溶液を用いたこと以外は実施例1と同様の手順でシグナル値およびバックグラウンド値を取得し、S/B比を算出した。
メタ重亜硫酸ナトリウムを添加していない処理溶液を用いたこと以外は実施例1と同様の手順でシグナル値およびバックグラウンド値を取得し、S/B比を算出した。
実施例1〜3および比較例の結果を表1および図4に示す。表中のシグナル値(S)は実測値であり、特定PSA由来のシグナル値とバックグラウンド(B)に相当するシグナル値の合計に相当する。
前立腺癌患者由来のサンプル35例、前立腺肥大症患者由来のサンプル(前立腺肥大症検体)30例、および健常者由来のサンプル(健常者検体)25例について、まず、還元剤を用いない比較例1と同様にして、SPFSのシグナル値を求めた。結果を図5(左)に示す。次に、そのSPFSのシグナル値が高値であった、前立腺肥大症検体および健常者検体について、ELISA法に準じて全PSA量を定量した。結果を図5(右)に示す。前立腺肥大症検体および健常者検体の結果について、図5(左)の四角枠内のデータを対比すると、健常者検体は前立腺肥大症検体に比べて、全PSA含量が低いにもかかわらず、特定の糖鎖を有するPSA(LacdiNAc−PSA)を測定しようとしたSPFSのシグナルが高値化していることが分かる。
12 誘電体部材
12a 上面
12b 側面
12c 側面
13 透明平面基板
14 金属薄膜
14a 上面
16 センサーチップ
16a 基板状部材
16b 流路部材
18 測定部材装填部
20 光源
22 入射光
24 反射光
26 受光手段
28 SPR測定部
30 蛍光
32 光検出手段
34 SPFS測定部
36 流路
38 測定領域
40 定量演算手段
50 捕捉物質
52 標識化レクチン
52a 蛍光物質
54 支持体
60 検出対象物質
60a 糖鎖
62 夾雑物
62a 糖鎖
62b ドメイン(断片化された夾雑物)
Claims (7)
- 標識化レクチンおよび測定領域に固相化された捕捉物質を用いて、検出対象物質としての糖タンパク質を定量するためのサンドイッチ型アッセイであって、前記測定領域に非特異的に吸着した夾雑物が有する、検出対象物質と同じ糖鎖への標識化レクチンの結合を抑制する処理を含み、
前記測定領域に非特異的に吸着した夾雑物が、前記検出対象物質と同じ糖鎖を有する糖タンパク質であって、その糖鎖への標識化レクチンの結合を抑制する前記処理が、ジスルフィド結合を開裂する作用を呈する物質を前記夾雑物としての糖タンパク質に接触させることにより、前記検出対象物質と同じ糖鎖を含むドメインを遊離させる処理であり、
前記検出対象物質としての糖タンパク質が、N−アセチル−D−ガラクトサミンβ1−4Nアセチルグルコサミン残基を含む糖鎖を有する糖タンパク質であり、
前記ジスルフィド結合を開裂する作用を呈する物質が、メタ重亜硫酸ナトリウムおよびトルエンチオスルフィン酸ナトリウムの少なくとも1種である、サンドイッチ型アッセイ。 - 前記検出対象物質が、前記夾雑物としての糖タンパク質と同じ糖鎖および前記捕捉物質との結合部位を同一のドメイン内に含む糖タンパク質である、請求項1に記載のサンドイッチ型アッセイ。
- 前記標識化レクチンが、ノダフジレクチン(WFA)、ダイズレクチン(SBA)、キカラスウリレクチン−II(TJA−II)またはカラスノエンドウレクチン(VVL)を標識化したものである、請求項1または2に記載のサンドイッチ型アッセイ。
- 前記夾雑物が、免疫グロブリンM(IgM)、インターαトリプシンインヒビター(IαI)、α2−マクログロブリン(α2M)、ハプトグロビン(HP)および免疫グロブリンG(IgG)からなる群より選ばれる少なくとも一種である、請求項1〜3のいずれか一項に記載のサンドイッチ型アッセイ。
- 前記夾雑物としての糖タンパク質を前記捕捉物質に接触させる前に、前記ジスルフィド結合を開裂する作用を呈する物質を前記夾雑物としての糖タンパク質と接触させるようにする、請求項1〜4のいずれか一項に記載のサンドイッチ型アッセイ。
- 固相化抗体および標識化レクチンを用いて、検出対象物質としての糖タンパク質を定量するためのサンドイッチ型アッセイを実施するためのキットであって、夾雑物としての糖タンパク質を処理するためのジスルフィド結合を開裂する作用を呈する物質を含み、
前記検出対象物質としての糖タンパク質が、N−アセチル−D−ガラクトサミンβ1−4Nアセチルグルコサミン残基を含む糖鎖を有する糖タンパク質であり、
前記ジスルフィド結合を開裂する作用を呈する物質が、メタ重亜硫酸ナトリウムおよびトルエンチオスルフィン酸ナトリウムの少なくとも1種であるキット。 - さらに、ノダフジレクチン(WFA)、ダイズレクチン(SBA)、キカラスウリレクチン−II(TJA−II)またはカラスノエンドウレクチン(VVL)を用いた標識化レクチンを含む、請求項6に記載のキット。
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Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2013161614A1 (ja) * | 2012-04-27 | 2013-10-31 | コニカミノルタ株式会社 | 酵素処理工程を含むレクチンを用いた抗原検出方法 |
US20170328912A1 (en) * | 2016-05-10 | 2017-11-16 | Regents Of The University Of Minnesota | Glycopolymer capture matrix for use with surface-enhanced raman spectroscopy detection and related systems and methods |
ES2953096T3 (es) * | 2016-11-25 | 2023-11-08 | Academisch Ziekenhuis Leiden | Glicanos ligados a Fab como biomarcadores para la transición desde una "fase de riesgo" previa a la enfermedad a la artritis reumatoide; AAV o síndrome de Sjögren |
JPWO2018101328A1 (ja) * | 2016-11-29 | 2019-10-24 | コニカミノルタ株式会社 | 診療補助情報の取得方法 |
US20200408753A1 (en) * | 2018-03-07 | 2020-12-31 | Konica Minolta, Inc. | Specimen diluent, method for preparing sample, sample, and sandwich method |
CN111868529A (zh) | 2018-04-25 | 2020-10-30 | 松下知识产权经营株式会社 | 传感器基板、传感器基板的制造方法及检测装置 |
EP3933405A4 (en) * | 2019-02-28 | 2023-03-15 | Sysmex Corporation | METHODS FOR DETECTING TARGET SUBSTANCE, REAGENTS FOR DETECTING TARGET SUBSTANCE AND REAGENT KIT FOR DETECTING TARGET SUBSTANCE |
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Family Cites Families (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5653465A (en) * | 1979-10-05 | 1981-05-13 | Toyo Jozo Co Ltd | Improved method in measurement of enzyme immunity |
JPS5797451A (en) * | 1980-12-09 | 1982-06-17 | Amano Pharmaceut Co Ltd | Measuring method for enzyme immunity by both sides combination method of proteinic high molecular antigen using regenerable immune adsorption body |
JPH06100604B2 (ja) | 1985-06-06 | 1994-12-12 | 和光純薬工業株式会社 | α−フェトプロテインの分画検出試薬キットおよび分画検出方法 |
JPS6416964A (en) * | 1987-07-11 | 1989-01-20 | Yamasa Shoyu Kk | Method for immunoassay of specific saccharogenic protein |
EP0399464A3 (en) * | 1989-05-24 | 1992-03-25 | Eiji Ishikawa | Assay method for a substance with a specific sugar chain |
JP4278123B2 (ja) * | 1999-09-06 | 2009-06-10 | 栄研化学株式会社 | 免疫学的測定方法、免疫反応干渉物質の除去方法および測定試薬 |
JP2001255325A (ja) | 2000-03-07 | 2001-09-21 | Internatl Reagents Corp | 免疫学的測定法及び試薬 |
JP2006112834A (ja) * | 2004-10-12 | 2006-04-27 | Abbott Japan Co Ltd | 安定性の向上した還元試薬を用いた免疫学的測定法 |
JP2008050279A (ja) * | 2006-08-23 | 2008-03-06 | Tohoku Univ | ケラチン水溶液の製造方法 |
US8617820B2 (en) | 2007-08-28 | 2013-12-31 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Use of glycosaminoglycans to reduce non-specific binding in immunoassays |
JP5131095B2 (ja) * | 2008-09-01 | 2013-01-30 | 富士レビオ株式会社 | 免疫測定法 |
JP2010127827A (ja) | 2008-11-28 | 2010-06-10 | Abbott Japan Co Ltd | 非特異的相互作用抑制剤及びその診断測定系への応用 |
CN102246043B (zh) | 2008-12-25 | 2016-06-08 | 环球生物研究株式会社 | 试样的预处理方法和生物相关物质的测定方法 |
CA2751400C (en) | 2009-02-04 | 2018-04-17 | Tokyo Institute Of Technology | A method for analyzing psa, and a method for distinguishing prostate cancer from prostatic hypertrophy using that method for analyzing psa |
JP5031928B2 (ja) | 2009-07-14 | 2012-09-26 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 糖タンパク質の測定方法、肝疾患の検査方法、糖タンパク質定量用試薬および肝疾患病態指標糖鎖マーカー糖タンパク質 |
WO2011052244A1 (en) * | 2009-10-30 | 2011-05-05 | Tokyo Institute Of Technology | A method for analyzing PSA, and a method for distinguishing prostate cancer from prostatic hypertrophy using that method for analyzing PSA |
JP5726038B2 (ja) | 2011-09-30 | 2015-05-27 | コニカミノルタ株式会社 | 表面プラズモン励起増強蛍光分光法を用いた前立腺特異抗原の定量方法 |
WO2013161614A1 (ja) * | 2012-04-27 | 2013-10-31 | コニカミノルタ株式会社 | 酵素処理工程を含むレクチンを用いた抗原検出方法 |
JP5991032B2 (ja) * | 2012-06-07 | 2016-09-14 | コニカミノルタ株式会社 | レクチンを用いたアナライトの検出方法 |
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