JP6516412B2

JP6516412B2 - ラムノ脂質を含む混合組成物

Info

Publication number: JP6516412B2
Application number: JP2014075144A
Authority: JP
Inventors: シリング，マルティン; ハルトゥング，クリスティアン; カビロル，ファビアン; シェーファー，ステッフェン; アレフ，ペトラ
Original assignee: Evonik Degussa GmbH
Current assignee: Evonik Operations GmbH
Priority date: 2013-04-02
Filing date: 2014-04-01
Publication date: 2019-05-22
Anticipated expiration: 2034-04-01
Also published as: EP2786743B1; CN104095765A; JP2014201589A; CA2847899C; DE102013205756A1; BR102014007948A2; US10292924B2; EP2786743A1; BR102014007948B1; CA2847899A1; CN104095765B; US20140296168A1

Description

本発明は、ラムノ脂質を含む混合組成物、その調製方法、製剤を製造するためのその使用、およびその混合組成物を含む製剤に関する。

ラムノ脂質は、自由な自然界においてある種の細菌、例えば緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）から産生される糖脂質である。微生物は、通常１分子当たり１個または２個のラムノース単位を有し、異なる長さの脂質鎖を含むことがあり得るモノ−およびジ−ラムノ脂質を含むラムノ脂質の混合物を産生する。

ＥＰ１５３６３４には、モノ−ラムノ脂質とジ−ラムノ脂質がほぼバランスのとれた重量比である混合組成物が記載されている。

同様に、ＥＰ０４９９４３４の実施例３には、２成分の重量比のバランスがとれたラムノ脂質組成物が記載されている。

ＥＰ２４１００３９には、モノ−ラムノ脂質とジ−ラムノ脂質を重量比９５：５〜４５：５５で含む清浄組成物が記載されている。

純粋なジ−ラムノ脂質、純粋なモノ−ラムノ脂質、およびそれらの混合物の表面活性の特性決定については、例えばＣｈｅｎら、Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｙａｎｄａｄｓｏｒｐｔｉｏｎａｔｔｈｅａｉｒ−ｗａｔｅｒｉｎｔｅｒｆａｃｅｏｆｔｈｅｍｏｎｏｒｈａｍｎｏｓｅａｎｄｄｉｒｈａｍｎｏｓｅｒｈａｍｎｏｌｉｐｉｄｓａｎｄｔｈｅｉｒｍｉｘｔｕｒｅｓ，Ｌａｎｇｍｕｉｒ．２０１０Ｄｅｃ７；２６（23）：１８２８１−９２に記載されている。

簡単な発酵方法で調製することができるこれまで公知のラムノ脂質の欠点は、それらの比較的ごく一部分しかジ−ラムノ脂質でないことである。

これに加えて、これらのラムノ脂質組成物は、望ましくない副生物としてアシル鎖を１本しか含まないラムノ脂質を含むことが比較的に多い。

分画法で精製された純粋なジ−ラムノ脂質組成物は、化粧品としての使用時に粗く乾燥した皮膚感触を特徴とする。

本発明の目的は、良好なフォーム特性を有し、さらにスキンケア組成物またはスキンクレンジング組成物中で使用されたとき軽い皮膚感触を有するラムノ脂質組成物を提供することであった。

驚くべきことに、以下に記載する混合組成物は本発明が取り組む目的を実現できることが明らかになった。

したがって、本発明は、ある種のラムノ脂質を定義された重量比で含む混合組成物を提供する。

本発明は、遺伝子組み換えされた細胞を使用して本発明による混合組成物を調製する方法をさらに提供する。

本発明は、本発明による混合組成物を含む製剤をさらに提供する。

本発明による混合組成物の１つの利点は、水性条件下における優れたフォーム安定性である。

本発明による混合組成物の別の利点は、水性条件下における顕著なフォーム量である。

本発明による混合組成物の別の利点は、特に優れた起泡挙動である。

本発明による混合組成物の別の利点は、任意所望の水性界面活性系において簡便に調合できることである。

本発明による混合組成物の別の利点は、製剤中の通常の増粘剤による良好な増粘性である。

別の利点は、皮膚および毛髪をよく洗い流すことができることである。

本発明による混合組成物の別の利点は、特に赤血球（RBC）試験において値が高いことを特徴とする低刺激性および良好な生理的相溶性である。

別の利点は、洗浄中および後の良好な皮膚感触である。

本発明による混合組成物の別の利点は、洗浄後に柔らかな皮膚感触が残ることである。

本発明による混合組成物の別の利点は、洗浄後に滑らかな皮膚感触が残ることである。

本発明による混合組成物の別の利点は、皮膚に加脂(refatting)効果を及ぼすことである。

本発明による混合組成物の別の利点は、油を本質的に含まない混合組成物を合成できることである。

ＳＩＴＡ測定によって表した起泡挙動を示す図である。

本発明の文脈では、「ラムノ脂質」という用語は、特に一般式（Ｉ）の化合物またはその塩の意味として理解される：

［式中、
ｍ＝２、１、または０であり、
ｎ＝１または０であり、
Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立して、２〜２４個、好ましくは５〜１３個の炭素原子を有する同一または異なる有機基であり、特に任意選択により分枝状の、任意選択により置換、特にヒドロキシ置換されている、任意選択により不飽和、特に任意選択により一、二、または三不飽和のアルキル基であり、好ましくはペンテニル、ヘプテニル、ノネニル、ウンデセニル、トリデセニル、および（ＣＨ_２）_ｏ−ＣＨ_３（式中、ｏ＝１〜２３、好ましくは４〜１２）からなる群から選択されるアルキル基である］。

本発明の文脈では、「ジ−ラムノ脂質」という用語は、ｎ＝１である一般式（Ｉ）の化合物またはその塩の意味として理解される。

本発明の文脈では、「モノ−ラムノ脂質」という用語は、ｎ＝０である一般式（Ｉ）の化合物またはその塩の意味として理解される。

異なるラムノ脂質を以下の命名法に従って略記する：
「ジＲＬ−ＣＸＣＹ」は、Ｒ^１基とＲ^２基のうちの一方が（ＣＨ_２）_ｏ−ＣＨ_３（ここでｏ＝Ｘ−４である）であり、残りのＲ^１基またはＲ^２基が（ＣＨ_２）_ｏ−ＣＨ_３（ここでｏ＝Ｙ−４である）である一般式（Ｉ）のジ−ラムノ脂質の意味として理解される。

「モノＲＬ−ＣＸＣＹ」は、Ｒ^１基とＲ^２基のうちの一方が（ＣＨ_２）_ｏ−ＣＨ_３（ここでｏ＝Ｘ−４である）であり、残りのＲ^１基またはＲ^２基が（ＣＨ_２）_ｏ−ＣＨ_３（ここでｏ＝Ｙ−４である）である一般式（Ｉ）のモノ−ラムノ脂質の意味として理解される。

このように使用される命名法は、「ＣＸＣＹ」と「ＣＹＣＸ」で異ならない。

ｍ＝０であるラムノ脂質の場合、それに応じてモノＲＬ−ＣＸまたはジＲＬ−ＣＸが用いられる。

上記の指数Ｘおよび／またはＹの一方が「：Ｚ」で記載されている場合、それぞれのＲ^１基および／またはＲ^２基は、Ｚ個の二重結合を有するＸ−３個またはＹ−３個の炭素原子を含む非分枝状非置換炭化水素基であることを意味する。

本発明の文脈では、「ｐＨ」は、ＩＳＯ４３１９（１９７７）に従って較正されたｐＨ電極を使用して、対応する物質について５分間撹拌した後２５℃で測定される値と定義される。

本発明の文脈では、「水性媒体」という用語は、考慮される全組成物に基づいて少なくとも５重量％の水を含む組成物の意味として理解される。

別段の記載のない限り、記載の百分率（％）はすべて質量による百分率である。

本発明はラムノ脂質を含む混合組成物を提供し、混合組成物が
５１重量％〜９５重量％、好ましくは７０重量％〜９０重量％、特に好ましくは７５重量％〜８５重量％、のジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０および
０．５重量％〜９重量％、好ましくは０．５重量％〜３重量％、特に好ましくは０．５重量％〜２重量％、のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０
を含み、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであることを特徴とする。

本発明による好ましい混合組成物は、混合組成物が、
０．５重量％〜１５重量％、好ましくは３重量％〜１２重量％、特に好ましくは５重量％〜１０重量％、のジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１
を含み、ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであることを特徴とする。

本発明によるさらに好ましい混合組成物は、混合組成物が、
０．５〜２５重量％、好ましくは５重量％〜１５重量％、特に好ましくは７重量％〜１２重量％、のジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２
を含み、ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであることを特徴とする。

本発明による混合組成物が、
０．１重量％〜５重量％、好ましくは０．５重量％〜３重量％、特に好ましくは０．５重量％〜２重量％、のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２および／または、好ましくは、および
０．１重量％〜５重量％、好ましくは０．５重量％〜３重量％、特に好ましくは０．５重量％〜２重量％、のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１
を含み、ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであることも好ましい。

本発明による混合組成物が、
０．１重量％〜２５重量％、好ましくは２重量％〜１０重量％、特に好ましくは４重量％〜８重量％、のジＲＬ−Ｃ８Ｃ１０
を含み、ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであることが有利であり、したがって好ましい。

本発明による特に好ましい混合組成物は、混合組成物が、
０．５重量％〜１５重量％、好ましくは３重量％〜１２重量％、特に好ましくは５重量％〜１０重量％、のジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１、
０．５〜２５重量％、好ましくは５重量％〜１５重量％、特に好ましくは７重量％〜１２重量％、のジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２、
０．１重量％〜５重量％、好ましくは０．５重量％〜３重量％、特に好ましくは０．５重量％〜２重量％、のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２および
０．１重量％〜５重量％、好ましくは０．５重量％〜３重量％、特に好ましくは０．５重量％〜２重量％、のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１
を含み、ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであることを特徴とする。

これに加えて、本発明による混合組成物が、モノＲＬ−ＣＸまたはジＲＬ−ＣＸの式のラムノ脂質を微量のみ含むことが好ましい。特に、本発明による混合組成物は、好ましくは、
０重量％〜５重量％、好ましくは０重量％〜３重量％、特に好ましくは０重量％〜１重量％、のジＲＬ−Ｃ１０を含み、ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであり、用語「０重量％」は検出可能な量が無いことを意味すると理解される。

本発明の混合組成物は、少なくとも６０重量％、好ましくは少なくとも８０重量％、特に好ましくは少なくとも９０重量％のラムノ脂質を含み、ここで、重量％は混合組成物全体の乾燥物質に対するものであることを特徴とする。

本発明によれば、好ましくは、本発明による混合組成物は、脂肪油（２０℃で液体のアシルグリセロール）を実質的に含まず、したがって脂肪油を全混合組成物に基づいて特に０．５重量％未満、特に０．１重量％未満含み、特に好ましくは検出可能な量の脂肪油を含まない。

本発明による混合組成物は、純粋な物質を混合することによって調製することができ、その場合の純粋な物質は従来通りに調製されたラムノ脂質混合物から精製することができる。対応する精製方法とは、例えば選択的結晶化およびクロマトグラフ法である。対応する方法については、Ｈｅｙｄら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｔｒｅｎｄｓｏｆｂｉｏｓｕｒｆａｃｔａｎｔａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｕｓｉｎｇｒｈａｍｎｏｌｉｐｉｄｓａｓａｎｅｘａｍｐｌｅ，ＡｎａｌＢｉｏａｎａｌＣｈｅｍ．２００８Ｊｕｌ；３９１（５）：１５７９−９０に記載されている。

特に、同様に本発明の主題である以下に記載する方法は、本発明による混合組成物を調製するのに適している。

第１の方法は、次の工程：
Ｉａ）ｒｈｌＡ、ｒｈｌＢ、およびｒｈｌＣの群の少なくとも１つの遺伝子がそれぞれの場合、過剰発現されるように遺伝子組み換えされたシュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）細胞を用意する工程と、
ＩＩａ）本発明による細胞と少なくとも１つの炭素源を含む培地とを接触させる工程と、
ＩＩＩａ）細胞が炭素源からラムノ脂質を形成するのを可能にする条件下で、細胞を培養する工程と、
ＩＶａ）任意選択により、形成されたラムノ脂質を単離する工程と
を含み、遺伝子ｒｈｌＣはｒｈｌＢに比べて多く過剰発現し、特に少なくとも１．５倍多く、好ましくは少なくとも２倍多く、特に好ましくは少なくとも１０倍多く過剰発現することを特徴とする。

上述された過剰発現の相対強度は、例えばＲＴ−ＰＣＲを利用して決定することができ、形成されたｍＲＮＡの量をそれぞれの遺伝子について決定する。

当業者は、発現強度の調節を標的化した方式で例えばプロモーターの選択または所定量の誘導物質と組み合わせた誘導性プロモーターの使用あるいは遺伝子増殖によって実現することができる。

代替方法は、次の工程：
Ｉｂ）それぞれの場合、ｒｈｌＡ、ｒｈｌＢ、およびｒｈｌＣの群の少なくとも１つの外来遺伝子を有し、その少なくとも１つが誘導性プロモーターの支配下にあるように遺伝子組み換えされたシュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）細胞を用意する工程と、
ＩＩｂ）発酵ブロス１Ｌ当たり細胞乾燥質量１〜３０ｇ、好ましくは発酵ブロス１Ｌ当たり細胞乾燥質量２〜２０ｇ、特に好ましくは発酵ブロス１Ｌ当たり細胞乾燥質量５〜１５ｇの細胞密度を実現しながら、本発明による細胞と少なくとも１つの炭素源を含む培地とを、接触させ、培養する工程と、
ＩＩＩｂ）少なくとも１つの誘導性プロモーターを誘導し、細胞がラムノ脂質を炭素源から形成するのを可能にする条件下で細胞を培養する工程と、
ＩＶｂ）任意選択により、形成されたラムノ脂質を単離する工程と
を含む。

本発明の文脈では、「誘導性プロモーター」という用語は、細胞を取り巻く培地を変化させることによってその活性を変化させるプロモーターの意味として理解される。変化としては、例えばある物質の温度変化および濃度変化を挙げることができる。

本発明の文脈では、「少なくとも１つの誘導性プロモーターを誘導する」という用語は、細胞を取り巻く培地を変化させることによって、誘導性プロモーターの活性を増加させることを意味すると理解されるものとする。

本発明の文脈で好適な誘導性プロモーターは、例えば化学的誘導物質（例えば、ラクトース、ＩＰＴＧ、ジシクロプロピルケトン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、プロピオネート、クマート（cumate）、ベンゾエート、アラビノース、ラムノース、ニコチン酸など）を添加することによって誘導されるプロモーター、環境条件の変化（例えば、ホスフェート欠乏または硫黄欠乏の発生、温度またはｐＨの変化など）によって誘導されるプロモーター、またはある種の生理的状態（例えば、ある細胞密度または増殖速度もしくは増殖相）によって誘導されるプロモーターである。

方法において特に好ましく使用される誘導性プロモーターは、ジシクロプロピルケトン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、プロピオネート、クマート、ベンゾエート、ホスフェート欠乏、硫黄欠乏、または増殖速度の低下により誘導可能なプロモーター群から選択される。

本発明の両方の方法におけるｒｈｌＡ、ｒｈｌＢ、およびｒｈｌＣ遺伝子は、緑膿菌（P. aeruginosa）に由来する遺伝子から選択されることが好ましい。

本発明による２つの方法は、好ましくは生体内変換（biotransformation）として実施されるものではない。これは、例えば、本製法に外部から導入された脂肪および油脂のような脂肪酸または脂肪酸含有化合物からラムノ脂質が形成されないことを意味し、本方法において特定される炭素源が、特に、脂肪酸または脂肪酸含有化合物以外の少なくとも１種の炭素含有化合物を主に含むことを意味すると理解される。

本発明の混合組成物は、特に化粧品製剤に有利に組み込むことができる。

したがって、本発明の更なる主題は、本発明の混合組成物の、製剤、特に化粧品製剤の製造のための使用、および本発明の混合組成物を含む製剤、特に化粧品製剤である。

本発明の混合組成物の他に、本発明による好ましい製剤は少なくとも１つの界面活性剤を含み、例えばアニオン界面活性剤、非イオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、および／または両性界面活性剤を使用することが可能である。応用に関連した観点から、アニオン界面活性剤と非イオン界面活性剤の混合物が好ましい。水性製剤の全界面活性剤含量は、全製剤に基づいて好ましくは５〜６０重量％、特に好ましくは１５〜４０重量％である。

使用される非イオン界面活性剤は、好ましくは８〜１８個の炭素原子およびアルコール１ｍｏｌ当たりエチレンオキシド（ＥＯ）平均１〜１２ｍｏｌを有する、好ましくはアルコキシル化された、有利にはエトキシル化された、特に第一級アルコールであり、アルコール基は直鎖状または好ましくは２位メチル分枝状とすることができ、あるいはオキソアルコール基に通例存在するように直鎖基とメチル分枝状基を混合物として含むことができる。しかしながら、特に１２〜１８個の炭素原子を有する天然由来のアルコールに由来する、例えばヤシ、パーム、タロウ脂、またはオレイルアルコールに由来する直鎖基を有し、アルコール１ｍｏｌ当たり平均２〜８個のＥＯを有するアルコールエトキシレートが好ましい。好ましいエトキシル化アルコールとしては、例えば３個のＥＯ、４個のＥＯ、または７個のＥＯを有するＣ１２〜Ｃ１４−アルコール、７個のＥＯを有するＣ９〜Ｃ１１−アルコール、３個のＥＯ、５個のＥＯ、７個のＥＯ、または８個のＥＯを有するＣ１３〜Ｃ１５−アルコール、３個のＥＯ、５個のＥＯ、または７個のＥＯを有するＣ１２〜Ｃ１８−アルコール、および３個のＥＯを有するＣ１２〜Ｃ１４−アルコールと７個のＥＯを有するＣ１２〜Ｃ１８−アルコールとの混合物などこれらの混合物が挙げられる。記載されたエトキシル化度は、特定の生成物について整数または分数とすることができる統計的平均値である。好ましいアルコールエトキシレートは同族体分布が狭いものである。これらの非イオン界面活性剤に加えて、１２個を超えるＥＯを有する脂肪アルコールを使用することも可能である。その例は、１４個のＥＯ、２５個のＥＯ、３０個のＥＯ、または４０個のＥＯを有するタロウ脂肪アルコールである。分子中にＥＯ基とＰＯ（プロピレンオキシド）基を一緒に含む非イオン界面活性剤も使用することができる。この点に関連して、ＥＯ−ＰＯブロック単位またはＰＯ−ＥＯブロック単位を有するブロックコポリマーを使用することが可能であるが、ＥＯ−ＰＯ−ＥＯコポリマーまたはＰＯ−ＥＯ−ＰＯコポリマーも使用することが可能である。

ＥＯ単位とＰＯ単位がブロック状ではなくランダムに分布している混合アルコキシル化非イオン界面活性剤を使用することも可能であることは当然である。このような生成物は、エチレンオキシドとプロピレンオキシドの脂肪アルコールに対する同時作用の結果として得ることができる。

さらに、アルキルグリコシドを別の非イオン界面活性剤として使用することもできる。

単独の非イオン界面活性剤としてまたは他の非イオン界面活性剤と組み合わせて使用される、別な種類の好ましく使用される非イオン界面活性剤は、例えば特開昭５８／２１７５９８に記載されているような、アルコキシル化された、好ましくはエトキシル化された、またはエトキシル化およびプロポキシ化された、好ましくはアルキル鎖中に１〜４個の炭素原子を有する脂肪酸アルキルエステル、特に脂肪酸メチルエステルであり、あるいは好ましくは国際公開第９０／１３５３３号に記載の方法で調製されるものである。

アミンオキシドタイプの非イオン界面活性剤、例えばＮ−ココアルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミンオキシドおよびＮ−タロウ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジヒドロキシエチルアミンオキシド、ならびに脂肪酸アルカノールアミドタイプの非イオン界面活性剤が好適であることもある。これらの非イオン界面活性剤の量は、好ましくはエトキシル化脂肪アルコールの量以下、特にその半量以下である。

別の好適な界面活性剤はポリヒドロキシ脂肪酸アミドである。ポリヒドロキシ脂肪酸アミドは、通常還元糖のアンモニア、アルキルアミン、またはアルカノールアミンによる還元的アミノ化とその後の脂肪酸、脂肪酸アルキルエステル、または脂肪酸塩化物によるアシル化によって得ることができる物質である。

使用されるアニオン界面活性剤は、例えばスルホネートおよびサルフェートタイプのものである。ここで好適なスルホネートタイプの界面活性剤は、好ましくはＣ９〜Ｃ１３−アルキルベンゼンスルホネート、オレフィンスルホネート、すなわちアルケンスルホネートとヒドロキシアルカンスルホネートの混合物、また例えば末端もしくは内部に二重結合を有するＣ１２〜Ｃ１８−モノオレフィンからガス状の三酸化硫黄によるスルホン化とその後のスルホン化生成物のアルカリ加水分解または酸加水分解によって得られるようなジスルホネートである。また、Ｃ１２〜Ｃ１８−アルカンから例えばスルホ塩素化(sulphochlorination)またはスルホキシド化とその後の加水分解または中和によって得られるアルカンスルホネートも好適である。同様に、α−スルホ脂肪酸（エステルスルホネート）のエステル、例えば水素化ヤシ、パーム核、またはタロウ脂肪酸のα−スルホン化メチルエステルも好適である。

別の好適なアニオン界面活性剤は、硫酸化脂肪酸グリセロールエステルである。脂肪酸グリセロールエステルは、モノグリセロールと脂肪酸１〜３ｍｏｌのエステル化による調製においてまたはトリグリセリドとグリセロール０．３〜２ｍｏｌのエステル交換において得られるようなモノエステル、ジエステル、およびトリエステル、またそれらの混合物の意味と理解されるものとする。ここで好ましい硫酸化脂肪酸グリセロールエステルは、６〜２２個の炭素原子を有する飽和脂肪酸、例えばカプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、またはベヘン酸の硫酸化生成物である。

好ましいアルキル（またはアルケニル）サルフェートは、Ｃ１２〜Ｃ１８−脂肪アルコール、例えばココナツ脂肪アルコール、タロウ脂肪アルコール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、もしくはステアリルアルコール、またはＣ１０〜Ｃ２０−オキソアルコールの硫酸半エステル、およびこれらの鎖長の第二級アルコールの硫酸半エステルのアルカリ金属、特にナトリウム塩である。さらに、石油化学に基づいて調製された合成直鎖アルキル基を含み、脂肪性化学原料に基づく好適な化合物と類似した分解挙動を有する、指定の鎖長のアルキル（またはアルケニル）サルフェートが好ましい。洗浄の観点から、Ｃ１２〜Ｃ１６−アルキルサルフェートおよびＣ１２〜Ｃ１８−アルキルサルフェート、またＣ１４〜Ｃ１８−アルキルサルフェートが好ましい。例えば、米国特許第３，２３４，２５８または第５，０７５，０４１号に従って調製され、ＤＡＮ（登録商標）という名称でＳｈｅｌｌＯｉｌＣｏｍｐａｎｙの市販製品として得ることができる２，３−アルキルサルフェートも、好適なアニオン界面活性剤である。

エチレンオキシド（ＥＯ）平均３．５ｍｏｌを有する２−メチル−分枝状Ｃ９〜Ｃ１１−アルコールまたは１〜４個のＥＯを有するＣ１２〜Ｃ１８−脂肪アルコールなどエチレンオキシド１〜６ｍｏｌでエトキシル化された直鎖または分枝状のＣ７〜Ｃ２０−アルコールの硫酸モノエステルも好適である。それらは、高い起泡挙動のために清浄組成物中で比較的少量、例えば１〜５重量％の量しか使用されない。

また、別の好適なアニオン界面活性剤は、スルホスクシナートまたはスルホコハク酸エステルと呼ばれることもあり、スルホコハク酸とアルコール、好ましくは脂肪アルコール、特にエトキシル化脂肪アルコールとのモノエステルおよび／またはジエステルを構成するアルキルスルホコハク酸の塩である。好ましいスルホスクシナートは、Ｃ８〜Ｃ１８−脂肪アルコール基またはこれらの混合物を含む。特に好ましいスルホスクシナートは、エトキシル化脂肪アルコールに由来する脂肪アルコール基を含む。この点に関連して、脂肪アルコール基が同族体分布の狭いエトキシル化脂肪アルコールに由来するスルホスクシナートが特に好ましい。同様に、アルキル（アルケニル）鎖中に好ましくは８〜１８個の炭素原子を有するアルキル（アルケニル）コハク酸またはその塩を使用することも可能である。

特に好ましいアニオン界面活性剤は石けんである。また、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、（水素化）エルカ酸、およびベヘン酸の塩などの飽和および不飽和脂肪酸石けん、また特に天然脂肪酸、例えばココナツ、パーム核、オリーブ油、またはタロウ脂肪酸に由来する石けん混合物も好適である。

石けんを含めてアニオン界面活性剤は、それらのナトリウム、カリウム、またはアンモニウム塩、およびモノ−、ジ−、またはトリエタノールアミンなど有機塩基の可溶性塩の形とすることができる。アニオン界面活性剤はそれらのナトリウムまたはカリウム塩の形、特にナトリウム塩の形をとることが好ましい。

本発明に従って使用することができる両性界面活性剤は、分子中に少なくとも１つの第四級アンモニウム基および少なくとも１つの−ＣＯＯ⁻−または−ＳＯ_３ ⁻基を有する界面活性化合物である。この文脈で特に好ましい両性界面活性剤は、アルキル−またはアルキルアミドプロピルベタインなどのベタイン界面活性剤である。特に、いずれの場合にもアルキル基またはアシル基中に８〜１８個の炭素原子を有する、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばココアルキルジメチルアンモニウムグリシネート、Ｎ−アシルアミノプロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばココアシルアミノプロピルジメチルアンモニウムグリシネート、Ｃ１２〜Ｃ１８−アルキルジメチルアセトベタイン、ココアミドプロピルジメチルアセトベタイン、２−アルキル−３−カルボキシメチル−３−ヒドロキシエチルイミダゾリン、およびスルホベタイン、またココアシルアミノエチルヒドロキシエチルカルボキシメチルグリシナートなどのベタインがここでは好ましい。特に好ましい双性イオン性界面活性剤は、ＩＮＣＩ名コカミドプロピルベタインで知られているＮ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（ラウロイルアミドプロピル）アンモニウムアセトベタインである。

別の好適な両性界面活性剤は、アンホアセテートおよびアンホジアセテート、特に例えばココ−もしくはラウリルアンホアセテートまたは−ジアセテートの群、アンホプロピオネートおよびアンホジプロピオネートの群；ならびにアシルグルタメート、特にジナトリウムココイルグルタメートおよびナトリウムココイルグルタメート、アシルグリシネート、特にココイルグリシネート、アシルサルコシネート、特にアンモニウムラウロイルサルコシネートおよびナトリウムココイルサルコシネートなどのアミノ酸系界面活性剤の群によって形成される。

さらに、本発明による製剤は、下記の群から選択される少なくとも１種の追加成分を含むことができる：
軟化剤、
乳化剤、
増粘剤／粘性調節剤／安定剤、
ＵＶ光防御フィルター、
抗酸化剤、
ヒドロトロープ（またはポリオール）、
固形剤および充填剤、
膜形成剤、
真珠光沢添加剤、
消臭剤および制汗剤活性成分、
昆虫忌避剤、
セルフタンニング剤、
保存剤、
コンディショナー、
香料、
染料、
臭気吸収剤、
化粧品活性成分、
ケア添加剤、
過脂肪剤、
溶媒。

個々の群の典型的な代表として使用することができる物質は当業者に公知であり、例えば独国特許出願第１０２００８００１７８８．４号にでている。この特許出願は、参照により本明細書に組み込まれ、したがって本開示の一部となる。

別の任意選択の成分およびこれらの成分の使用量については、当業者に公知である関連ハンドブック、例えばＫ．Ｓｃｈｒａｄｅｒ， “ＧｒｕｎｄｌａｇｅｎｕｎｄＲｅｚｅｐｔｕｒｅｎｄｅｒＫｏｓｍｅｔｉｋａ［ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓａｎｄＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓｏｆＣｏｓｍｅｔｉｃｓ］”，２ｎｄｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅ３２９ｔｏ３４１，ＨｕｔｈｉｇＢｕｃｈＶｅｒｌａｇＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇに明示されている。

各添加剤の量は所期の使用に依存している。

各用途向けの典型的な基準製剤は公知の先行技術であり、例えば各ベース材料および活性成分の製造業者のパンフレットに含まれている。これらの既存の製剤を、一般的には変更することなく採用することができる。しかし、必要に応じて、適応および最適化のために、所望の修正を複雑さを伴わずに簡単な実験によって行うことができる。

本発明による混合組成物および本発明による混合組成物を含む本発明による製剤は有利に表面の清浄に使用することができる。本発明によるこの形態の使用では、表面は生物、特にヒトの表面であることが好ましく、このような表面は皮膚および毛髪から選択されることが特に好ましい。

下記の実施例は例として本発明を説明するものであって、本発明を実施例に指定する実施形態に限定するものではなく、本出願の範囲は全体の説明および特許請求の範囲から定まる。

以下の図面は、本明細書の一部となる：
図１：ＳＩＴＡ測定によって表した起泡挙動を示す図である。

実施例１：ジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０およびモノＲＬ−Ｃ１０−Ｃ１０の調製
純粋な様々なＲＬ形の調製は、分取カラムクロマトグラフィーによって行われる。このために、シリカゲル６０（２００〜５００μｍ；３５〜７０メッシュ；Sigma-Aldrich（ドイツ））７５０ｇを水飽和酢酸エチル（1重量％の酢酸で酸性化）に懸濁し、カラム（直径＝６５ｍｍ、最大充填レベル＝６００ｍｍ、１ｌの溶媒リザーバー）に注ぎ込んだ。酸処理した海砂（Riedel de Haen、ドイツ・ゼールツエ）を２〜３ｃｍの保護層として固定相の上に載せた。使用した溶離液は、同様に１重量％の酢酸を含む水飽和酢酸エチルである。市販のＲＬ混合物（JBR 505、Jeneil Biosurfactants、全ラムノ脂質濃度：約5重量％）を凍結乾燥した。

凍結乾燥したＲＬ混合物１０ｇを溶離液に濃度５重量％で溶解した。溶液を調製したカラムに載せた。溶離液の流速を１５ｍｌ／分に調整した。溶出液を画分１００ｍｌ単位で回収し、薄膜クロマトグラフィーおよびＨＰＬＣによって分析した。様々なＲＬ形をこのようにして分離することができた。同一組成の画分を合わせ、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。次いで、残渣を水に溶解し、凍結乾燥し、粉末の形で応用試験に使用した。十分な量を得るために、この手順を数回実施した。得られた画分の純度は、^１Ｈ−ＮＭＲおよびＨＰＬＣによって＞９９重量％と決定された。

実施例２：ジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０とモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０の混合物の調製
実施例１に記載の純粋なＲＬ形を粉末の形としてジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０とモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０の比９７．５：２．５で混合した。

実施例３：ラムノシルトランスフェラーゼＲｈｌＣをコードする遺伝子の発現が、ラムノシルトランスフェラーゼＲｈｌＢをコードする遺伝子ｒｈｌＢの発現より数倍高いP. putidaにおける、緑膿菌（P. aeruginosa）ＰＡＯ１に由来するｒｈｌＡＢＣによるラムノ脂質の調製

ラムノシルトランスフェラーゼＲｈｌＣをコードする遺伝子の発現がラムノシルトランスフェラーゼＲｈｌＢをコードする遺伝子ｒｈｌＢの発現よりはるかに高いレベルで起こる、P. putida株において緑膿菌（P. aeruginosa）ＰＡＯ１由来のｒｈｌＡＢＣによりラムノ脂質を調製するために、プラスミドｐＢＢＲ１ＭＣＳ２−Ｐｌａｃ−ｒｈｌＡＢＣ−Ｔ−Ｐｔａｃ−ｒｈｌＣ−Ｔ（配列番号1）を構築した。このために、以下のＤＮＡフラグメントを合成した：
緑膿菌（P. aeruginosa）ＰＡＯ１遺伝子ｒｈｌＡ、ｒｈｌＢ、およびｒｈｌＣと、その後にターミネーターと、その後に合成ｔａｃプロモーターと、その後に緑膿菌（P. aeruginosa）ＰＡＯ１遺伝子ｒｈｌＣおよびターミネーターが続き、ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位（５’末端）またはＢｓｕ３６Ｉ制限部位（３’末端）が隣接している（配列番号2）。

ＤＮＡ合成プロバイダによって用意された合成ＤＮＡフラグメントを含むベクターを、ＦａｓｔＬｉｎｋＬｉｇａｔｉｏｎＫｉｔ（Epicentre Technologies; Madison, WI, USA）によりＨｉｎｄＩＩＩおよびＢｓｕ３６Ｉで切断し、ベクターｐＢＢＲ１ＭＣＳ−２に連結し（配列番号3）、同様にＨｉｎｄＩＩＩおよびＢｓｕ３６Ｉで切断した。得られる標的ベクターｐＢＢＲ１ＭＣＳ２−Ｐｌａｃ−ｒｈｌＡＢＣ−Ｔ−Ｐｔａｃ−ｒｈｌＣ−Ｔ（合成フラグメント配列番号2を含むpBBR1MCS-2）のサイズは９３３６塩基対である。

シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）ＫＴ２４４０のベクターｐＢＢＲ１ＭＣＳ２−Ｐｌａｃ−ｒｈｌＡＢＣ−Ｔ−Ｐｔａｃ−ｒｈｌＣ−Ｔ（配列番号1）による形質転換は上述されたように生じる（Iwasakiら、 Biosci. Biotech. Biochem. 1994. 58(5):851-854）。いずれの場合にも１０個のクローンから調製されたプラスミドＤＮＡを単離および分析した。プラスミドを有する得られた株をＰ．ｐｕｔｉｄａＫＴ２４４０ｐＢＢＲ１ＭＣＳ２−Ｐｌａｃ−ｒｈｌＡＢＣ−Ｔ−Ｐｔａｃ−ｒｈｌＣ−Ｔと呼んだ。

組換え株Ｐ．ｐｕｔｉｄａＫＴ２４４０ｐＢＢＲ１ＭＣＳ２−Ｐｌａｃ−ｒｈｌＡＢＣ−Ｔ−Ｐｔａｃ−ｒｈｌＣ−ＴをＬＢ−寒天−カナマイシン（50μg/ml）プレートで培養した。

ラムノ脂質の生成には、下記でＭ９培地と呼ばれる培地を使用した。この培地は、２％（w/v）グルコース、０．３％（w/v）ＫＨ_２ＰＯ_４、０．６７９％Ｎａ_２ＨＰＯ_４、０．０５％（w/v）ＮａＣｌ、０．２％（w/v）ＮＨ_４Ｃｌ、０．０４９％（w/v）ＭｇＳＯ_４×７Ｈ_２Ｏ、および０．１％（v/v）の微量元素溶液からなる。これは、１．７８％（w/v）ＦｅＳＯ_４×７Ｈ_２Ｏ、０．１９１％（w/v）ＭｎＣｌ_２×７Ｈ_２Ｏ、３．６５％（w/v）ＨＣｌ、０．１８７％（w/v）ＺｎＳＯ_４×７Ｈ_２Ｏ、０．０８４％（v/v）Ｎａ−ＥＤＴＡ×２Ｈ_２Ｏ、０．０３％（v/v）Ｈ_３ＢＯ_３、０．０２５％（w/v）Ｎａ_２ＭｏＯ_４×２Ｈ_２Ｏ、および０．４７％（w/v）ＣａＣｌ_２×２Ｈ_２Ｏからなる。培地のｐＨをＮＨ_４ＯＨで７．４に調整し、培地をオートクレーブ滅菌した（１２１℃、２０分）。培養時のｐＨ調整は必須ではない。

振盪フラスコ中におけるラムノ脂質の生成を調査するために、最初に前培養物を調製した。このために、ＬＢ−寒天プレートに新たに画線した株のコロニーを使用し、ＬＢ培地１０ｍｌを１００ｍｌのＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコに接種した。組換え株Ｐ．ｐｕｔｉｄａはすべて、５０μｇ／ｍｌのカナマイシンが添加されたＬＢ培地で培養した。Ｐ．ｐｕｔｉｄａ株を３０℃および２００ｒｐｍで終夜培養した。

２５０ｍｌのＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコ中のＭ９培地（＋50μg/mlのカナマイシン）５０ｍｌに接種するために、前培養物を使用した（開始時：OD₆₀₀0.1）。培養物を２００ｒｐｍおよび３０℃で培養した。２４時間後、培養液試料１ｍｌを培養用フラスコから取り出した。

発酵および精製
同様に、無機培地（Ｍ９）を本培養に使用した。発酵は、１０容量％の前培養の接種および初期に導入されたグルコースの消費に続いて、作動容量１．２Ｌの２Ｌの発酵槽において炭素制限下でグルコース供給により行った。グルコース供給は、溶存酸素シグナルを参照することにより行われる。溶存酸素を撹拌機速度により２０％飽和に調節した。ｐＨを、ｐＨ電極およびＮＨ_４ＳＯ_４の添加により７に調節した。発酵を生物乾燥質量１５ｇ／ｌになるまで４日間にわたって実施した。ラムノ脂質濃度はＨＰＬＣで確認し、９．８ｇ／ｌであった。１００００ｇで遠心することによって細胞を分離した後、濃ＨＣｌを添加することによって発酵ブロスをｐＨ４．０に調整した。次いで、同じ容量の酢酸エチルで抽出を実施した。ラムノ脂質含有有機相を分離し、さらに処理した。濃度５０重量％のＫＯＨ（水溶液）を添加することによって、溶液のｐＨをｐＨ７に調整した。これによって、２つの液相が形成される。下相は、親油性および親水性の不純物を含まないラムノ脂質を高収率で含有する。ラムノ脂質混合物の組成はこれによって影響を受けない。下相を抜き取り、溶媒の大部分をロータリーエバポレーターで除去した。次いで、水を再び添加し、ラムノ脂質水溶液を凍結乾燥した。得られた粉末をＨＰＬＣによって分析し、応用に関して特徴付けした。

ラムノ脂質の定量
以下のクロマトグラフ分析用の試料調製を以下の通り行う。ディスプレイスメントピペット（Combitip）を使用して、最初にアセトン１ｍｌを２ｍｌの反応容器に導入し、蒸発を最小限に抑えるために反応容器を直ちに閉じた。次いで、培養液１ｍｌを添加した。培養液／アセトンの混合物をボルテックスした後、１３０００ｒｐｍで３分間遠心し、上澄液８００μｌをＨＰＬＣの容器に移した。

ラムノ脂質の検出および定量のために、蒸発光散乱検出器（Sedex LT-ELSDモデル85LT）を使用した。実際の測定は、ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ１２００Ｓｅｒｉｅｓ（Santa Clara, California）およびＺｏｒｂａｘＳＢ−Ｃ８ＲａｐｉｄＲｅｓｏｌｕｔｉｏｎＣｏｌｕｍｎ（4.6×150mm、3.5μm、Agilent）により実施した。注入量は５μｌであり、方法の実行時間は２０分である。移動相として、０．１％ＴＦＡ水溶液（トリフルオロ酢酸、溶液A）とメタノール（溶液B）を使用する。カラム温度は４０℃である。検出器として、ＥＬＳＤ（検出器温度60℃）およびＤＡＤ（ダイオードアレイ、210nm）を使用する。本方法で使用したグラジエントは下記の通りである：

上述する方法で得られたＰ．ｐｕｔｉｄａＫＴ２４４０ｐＢＢＲ１ＭＣＳ２−Ｐｌａｃ−ｒｈｌＡＢＣ−Ｔ−Ｐｔａｃ−ｒｈｌＣ−Ｔ由来のラムノ脂質組成物は：
ジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０８１重量％
ジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２１０重量％
ジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１８重量％
モノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０１重量％
を含み、ジ−ラムノ脂質とモノ−ラムノ脂質の重量比が９９：１となる。

実施例４：手洗い試験によるスキンケア性能およびフォーム特性の試験
水性界面活性剤組成物（界面活性剤製剤）中における本発明による生成物例２および３のスキンケア性能およびフォーム特性を評価するために、公知のラムノ脂質組成物と比べた手洗い官能試験を行った。

訓練を受けた検査員１０名の一群が、この手洗い試験中に所定の方法で手を洗い、フォーム特性および手の感触を１（悪い）〜５（非常に良い）の評価等級を参照して評価した。使用する生成物は、いずれの場合にも標準化界面活性剤製剤で試験した（表１）。

第２の界面活性剤を添加していない界面活性剤製剤を対照製剤Ａとして使用した。界面活性剤製剤ＢおよびＣは、本発明によるものではない比較生成物であり、界面活性剤製剤ＤおよびＥは本発明による組成物である（表１）。

表２に、手洗い試験の結果を示す。

表２の測定結果から、生成物例２および３を使用した本発明による組成物ＤおよびＥは、対照Ａならびに先行技術による比較組成物ＢおよびＣに比べて、製剤での手洗い時の皮膚感触がよく、驚くべきことに起泡挙動もよく、フォームクリーム特性も向上することが明らかである。さらに、洗い流し後および乾燥後の皮膚感触（皮膚の滑らかさおよび柔らかさ）について、本発明による組成物ＤおよびＥを比較製剤より良いと評価したことが明らかである。

予想に反して、生物系界面活性剤中の特定の低い割合のモノ−ラムノ脂質が、本製剤におけるフォーム挙動および皮膚感触に好ましい影響を示した。

実施例５：ＳＩＴＡフォーム試験機によるフォーム特性の試験
界面活性剤溶液の起泡する能力は重要なパラメータである。これから、応用特性を推測することができる。迅速なフォーム形成および高いフォーム量が、多くの応用において良好な界面活性剤から期待される。このパラメータを評価する方法は、ＳＩＴＡＭｅｓｓｔｅｃｈｎｉｋＧｍｂＨ社製のＳＩＴＡフォーム試験機Ｒ−２０００に基づいている。この場合、所定量の界面活性剤溶液中に、分散ディスクにより空気を導入し、液体と得られるフォームの全量をフォームプローブによってその期間中測定した。

異なる３種のラムノ脂質調製物を、このような装置にてｐＨ＝６およびラムノ脂質全濃度０．５重量％で測定した。ラムノ脂質画分の組成を以下の表に示す。

発酵で得られた本発明による組成物Ｅ０９−Ｓ６、純粋なジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０、およびＪｅｎｅｉｌ社製市販製品を調査した。

起泡性についての測定を温度３０℃、液量３００ｍｌ、および撹拌機速度１５００ｒｐｍで実施した。

図１から、Ｅ０９Ｓ６の起泡性が他の試料の起泡性よりかなり良く、すなわち最大フォーム量がより速く実現したことが明らかである。

Claims

ラムノ脂質を含む混合組成物を含む化粧用製剤であって、前記混合組成物が、
５１重量％〜９５重量％のジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０、
０．５重量％〜９重量％のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１０、および
３重量％〜１２重量％のジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１
を含み、ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであり、
ただし、ジ−ラムノ脂質とモノ−ラムノ脂質の重量比は９７：３より大きいことを特徴とする、化粧料用製剤。
前記混合物におけるジ−ラムノ脂質とモノ−ラムノ脂質の重量比が９８：２より大きいことを特徴とする請求項１に記載の化粧用製剤。
前記混合組成物が、
０．５〜２５重量％のジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２
を含み、ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであることを特徴とする、請求項１または２に記載の化粧用製剤。
前記混合組成物が、０．１重量％〜５重量％のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２を含み、
ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化粧用製剤。
前記混合組成物が、０．１重量％〜５重量％のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１を含み、
ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化粧用製剤。
前記混合組成物が、０．１重量％〜５重量％のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２、および０．１重量％〜５重量％のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１を含み、
ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化粧用製剤。
前記混合組成物が、
０．５〜２５重量％のジＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２、
０．１重量％〜５重量％のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２、および
０．１重量％〜５重量％のモノＲＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１
を含み、ここで、重量％は存在するラムノ脂質すべての合計に対するものであることを特徴とする、請求項１に記載の化粧用製剤。
前記混合組成物が少なくとも６０重量％ラムノ脂質を含み、ここで、重量％は混合組成物全体の乾燥物質に対するものであることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化粧用製剤。
前記混合組成物が少なくとも８０重量％ラムノ脂質を含み、ここで、重量％は混合組成物全体の乾燥物質に対するものであることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化粧用製剤。
前記混合組成物が少なくとも９０重量％ラムノ脂質を含み、ここで、重量％は混合組成物全体の乾燥物質に対するものであることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化粧用製剤。
皮膚の表面及び毛髪の表面から選択される表面を清浄にするための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化粧用製剤の使用。