JP6491696B2 - 形質転換されたピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）などの微生物における抗体などのマルチサブユニットタンパク質の高純度生産 - Google Patents

形質転換されたピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）などの微生物における抗体などのマルチサブユニットタンパク質の高純度生産 Download PDF

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Description

関連出願の開示
本願は、２０１１年８月１９日に提出された「形質転換されたピキア・パストリスなどの微生物における抗体などのマルチサブユニットタンパク質の高力価および抗純度生産のための多重コピー戦略（MULTI-COPY STRATEGY FOR HIGH-TITER AND HIGH-PURITY PRODUCTION OF MULTI-SUBUNIT PROTEINS SUCH AS ANTIBODIES IN TRANSFORMED MICROBES SUCH AS
PICHIA PASTORIS）」という表題の米国特許仮出願番号第６１／５２５，３０７号（代理人整理番号第６７８５８．７３０２００号）、２０１１年５月２０日に提出された「抗ＣＧＲＰ組成物とその使用（ANTI-CGRP COMPOSITIONS AND USE THEREOF）」という表題の米国特許仮出願番号第６１／４８８，６６０号（代理人整理番号第６７８５８．７３０３００号）、２０１１年６月１４日に提出された「羞明の予防または抑制を、それを必要とする対象、特に、偏頭痛の患者において行うための抗ＣＧＲＰ抗体および抗体断片の使用（USE OF ANTI-CGRP ANTIBODIES AND ANTIBODY FRAGMENTS TO PREVENT OR INHIBIT PHOTOPHOBIA IN SUBJECTS IN NEED THEREOF, ESPECIALLY MIGRAINE SUFFERERS）」 という表題の米国特許仮出願番号第６１／４９６，８７３号（代理人整理番号第６７８５８．７７００００号）、および２０１１年６月１４日に提出された「病気の対象において下痢症を治療するための抗ＣＧＲＰ抗体および抗体断片の使用、ならびにＣＧＲＰレベルを上昇させる治療（USE OF ANTI-CGRP ANTIBODIES AND ANTIBODY FRAGMENTS TO TREAT DIARRHEA IN SUBJECTS WITH DISEASES OR TREATMENTS THAT RESULT IN ELEVATED CGRP LEVELS）」 とい
う表題の米国特許仮出願番号第６１／４９６，８７３号（代理人整理番号第６７８５８．７７００００号）の利益を主張する。それらの仮出願のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本願は、２０１２年５月８日に作成された「６７８５８ｏ７１１００２．ｔｘｔ」という名称で、サイズが３１５，３９２バイトのファイルの中のＡＳＣＩＩ形式でＥＦＳ‐Ｗｅｂを介して提出されている配列表を含む。その配列表は全体の参照によりここに組み込まれる。
分野
本開示は、形質転換細胞において異種性タンパク質を生産するための方法に全般的に関する。本開示は、抗体および他のマルチサブユニットタンパク質を含む、マルチサブユニットタンパク質であって、分泌型または非分泌型でありうるものを、望まない副産物の生産を減少させたり、収量を上げたりしつつ生産する改良された方法を提供する。例示的な実施形態では、形質転換細胞は酵母、例えば、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）または出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの酵母である。
従来の抗体は、２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖から構成される四量体タンパク質である。特定の種類の純粋なヒト抗体は、多くの目的に対して十分な量を天然の供給物から精製することが困難であり得る、または不可能であり得る。結果として、バイオテクノロジー会社および製薬会社は、大規模に抗体を調製するために組換えＤＮＡ系の方法に目を向けている。機能性抗体の生産は一般に２つのポリペプチドの合成だけでなく、Ｎ末端分泌シグナル配列のタンパク質分解的プロセッシング、ポリペプチドの四量体への適切な折り畳みと構築、ジスルフィド結合の形成を含む、多数の翻訳後の事象を含み、および典型的には特定のＮ結合グリコシル化を含む。これらの事象の全ては、真核細胞に特有
のオルガネラ複合体である、真核細胞の分泌経路で起こる。
そのような複合体タンパク質の組換え合成は、通常生物活性物質を生産する高等真核細胞の培養物に依存し、培養哺乳類細胞が非常に一般的に使用される。しかしながら、哺乳類組織培養系の生産系は、微生物発酵方法と比較してかなりの費用の追加と困難な事態を招く。さらに、哺乳類細胞培養物から得られる産物は、その培養細胞または血清などの培養に使用した動物由来の製品に存在し得る（ウイルスを含む）哺乳類の病原体が存在しないことを確認するための追加的な安全性試験を必要とし得る。
先行研究は、研究用途、診断用途および治療用途に適切である可能性がある機能性抗体を生産するための費用効率が良いプラットフォームとして酵母ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）を確立するのに役立ってきた。共有されている米国特許第７，９３５，３４０号および第７，９２７，８６３号を参照のこと。それらの特許のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。方法は、細胞密度、培地の体積、基質の供給率、および各反応期の長さの最適化を含む、組換えタンパク質の発現のためのピキア・パストリスの発酵の設計と最適化についての文献においても知られている。Cregg, J. M.編, 2007, Pichia Protocols (第２版), Methods in Molecular Biology, vol. 389, Humana Press, Totowa, N.J., 43〜63頁内のZhang et al., “Rational Design and Optimization of Fed-Batch and Continuous Fermentations” を参照のこと。
組換えマルチサブユニットタンパク質は培養細胞から生産され得るが、望まない副産物も生産され得る。例えば、培養細胞は、遊離単量体と、不正確な化学量論組成を有する複合体と、または望まない、もしくは異常なグリコシル化を有するタンパク質と共に所望のマルチサブユニットタンパク質を生産し得る。その所望のマルチサブユニットタンパク質の精製が生産コストを増加させ、精製に関わるステップが活性複合体の総収量を減少させる可能性がある。また、精製の後でさえも、望まない副産物は、懸念を生じさせる量で存在し得る。例えば、グリコシル化された副産物が、投与に免疫反応のリスクを上昇させる量で存在し得るが、一方、異常な複合体または凝集体が特定の活性を低下させることがあり得、そして、免疫原性である可能性もあり得る。
ほとんどのＩｇＧ１抗体分子は、総計で１６箇所の鎖内ジスルフィド架橋および鎖間ジスルフィド架橋により安定化されている。鎖内ジスルフィド架橋が重鎖および軽鎖の両方でＩｇＧドメインの折畳みを安定化し、鎖間ジスルフィド架橋が重鎖および軽鎖の間の結合を安定化する。これらの結合の結果として、抗体は２本の重鎖と２本の軽鎖（Ｈ２Ｌ２）を含有する安定な複合体を形成する。しかしながら、誤ったジスルフィド結合形成のため、１本の軽鎖と１本の重鎖（Ｈ１Ｌ１）を有する複合体および２本の重鎖と１本の軽鎖（Ｈ２Ｌ１）を有する複合体を含む生産物関連変異体が組換え抗体調製物の中に時折見出される。さらに、追加の鎖間ジスルフィド結合が形成し、そして、共有結合されているサブユニットの数が多くなっている高次複合体も形成し得る。
下でさらに説明されるように、申請者らは、今では、異常なジスルフィド結合を有するこれらの複合体の生産を酵母培養物からの抗体の組換え生産の間に減少させる方法を特定している。具体的には、その方法は培養物へのエタノールのボーラス添加を含み、その結果、Ｈ１Ｌ１生産物関連変異体、Ｈ２Ｌ１生産物関連変異体およびＨ４Ｌ４生産物関連変異体の生産が減少し、そして、所望のＨ２Ｌ２産物の純度が上昇する。Ｈ１Ｌ１複合体とＨ２Ｌ１複合体は非還元変性ＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより検出され、Ｈ４Ｌ４複合体はサイズ排除クロマトグラフィーにより検出された。本対象の方法を用いて、適切なジスルフィド結合形成が促進され、その結果、抗体の純度が上昇した。これは３つの異なる抗体について示され、その３つの全てがエタノールをボーラス添加して生産されると、純度の向上を
示した（図１〜６）。これらの３つの抗体は配列が異なるだけでなく、３つの異なる抗原を認識する。また、エタノールを急速大量投与することなく生産されると、それらの抗体のうちの２つが、３番目の抗体（図５）と比較してより大量のＨ１Ｌ１産物を含んだ（図１〜４）。より大量のＨ１Ｌ１産物を含むその２つの抗体は非正準的ジスルフィド架橋または追加的なジスルフィド架橋を有し、その３番目の抗体はそれらを有しない。図１、２および３に例示される抗体は可変軽鎖ドメインに追加の鎖内ジスルフィド架橋を有し、図４に例示される抗体はその重鎖に追加の鎖内ジスルフィド架橋を有する。過剰発現したタンパク質におけるジスルフィド架橋の存在が宿主において細胞内ストレスを高めることが文献中に報告されている（Gasser et al., Biotechnology and Bioengineering, Vol. 94, No. 2, pg. 353-61, June 5, 2006、Inan et al., Biotechnology And Bioengineering, Vol. 93, No. 4, pg. 771-78, March 5, 2006、 Li et al., Biochem Biophys Res Commun. 2010 November 19; 402(3): 519-524 を参照のこと）。このストレスの上昇は、追
加の鎖内ジスルフィド架橋を有する両方の抗体が「ボーラス無し」条件下でより低い生存率を有する図１１、１２および１３に示されているように、生存率の低下を引き起こすこともできる。エタノールのボーラス添加は、したがって、生存率の上昇と純度の上昇を引き起こす。これは、特に複数のジスルフィド架橋を有する発現が難しいタンパク質を発現させているときに用いられ得る。
１つの態様では、本開示は、マルチサブユニット複合体を生産する方法であって、（ａ）前記のマルチサブユニット複合体のサブユニットの発現をもたらす遺伝子を含む真核細胞を含む培養物を提供すること、（ｂ）前記の培養物に大量のエタノールを急速に添加すること、および（ｃ）前記の培養物を培養して前記のマルチサブユニット複合体を生産すること、を含む方法を提供する。
エタノールの急速大量投入が、前記のエタノールの急速大量投与(bolus)が無い状態で
行われる前記の同じ方法と比べて、安定的なジスルフィド結合の形成を増強し得る。
前記のマルチサブユニット複合体は少なくとも１つのジスルフィド結合を含む１つ以上のポリペプチドを含み得る。
前記のマルチサブユニット複合体は抗体を含み得る。
前記の方法は、前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、１つ以上の生産物関連変異体の相対量を減少させ得る。
前記の方法は、前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、サイズ排除クロマトグラフィーまたはゲル電気泳動によって検出される見かけの分子量が前記の所望のマルチサブユニット複合体よりも大きい、または小さい生産物関連変異体の相対量を減少させ得る。
前記の方法は、前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、異常な化学量論組成を有する複合体の相対量を減少させ得る。
前記の方法は、前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、異常なジスルフィド結合を有する複合体の相対量を減少させ得る。
前記の方法は、前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、還元化システインを有する複合体の相対量を減少させ得る。
前記の方法は、前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法
と比べて、異常なグリコシル化を有する複合体の相対量を減少させ得る。
前記の方法は、重鎖間ジスルフィド結合の形成または安定性を調節し得る。
前記の方法は、軽鎖および重鎖を連結するジスルフィド結合の形成または安定性を調節し得る。
前記の方法は、前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、１つ以上の生産物関連変異体の相対量を減少させ得る。
前記の生産物関連変異体はＨ１Ｌ１生産物関連変異体、Ｈ２Ｌ１生産物関連変異体およびＨ４Ｌ４生産物関連変異体のうちの１つ以上を含み得る。
前記の方法は、前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の方法と比べて、前記の抗体の純度を上昇させる。
ステップ（ｂ）はステップ（ｃ）の前に行われ得る。
ステップ（ｂ）はステップ（ｃ）の後に行われ得る。
ステップ（ｂ）はステップ（ｃ）と同時に行われ得る。
ステップ（ｂ）により、前記の培養物中のエタノールの濃度が約０．０１％（重量／体積）と約４％（重量／体積）の間になり得る。
ステップ（ｂ）により、前記の培養物中のエタノールの濃度が約０．０１％と約４％の間、約０．０２％と約３．７５％の間、約０．０４％と約３．５％の間、約０．０８％と約３．２５％の間、約０．１％と約３％の間、約０．２％と約２．７５％の間、約０．３％と約２．５％の間、約０．４％と約２．２５％の間、約０．５％と約１．５％の間、約０．５％と約２％の間、約０．６％と約１．７５％の間、約０．７％と約１．５％の間、または約０．８％と約１．２５％の間になり得る。
ステップ（ｂ）により、少なくとも約０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１０％、０．２％、０．３％、０．４％、０．６％、０．６％、０．７％、０．８％または０．９％（重量／体積）であり得る前記の培養物中のエタノールの濃度になり得る。
ステップ（ｂ）により、多くても約４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．８％、１．６％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１．０％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３５％、０．３％、０．２５％、０．２％、または０．１５％（重量／体積）であり得る前記の培養物中のエタノールの濃度になり得る。
ステップ（ｂ）は、前記の培養物にエタノールを添加すること、前記の培養物にエタノールを含む担体を添加すること、エタノールを含む培地もしくは担体に前記の細胞を添加すること、または培地の一部を置き換えることを含み得る。
前記の大量のエタノールが１分と２０分の間の期間にわたって前記の培地に急速添加され得る。
ステップ（ｃ）は前記の細胞に酸素を供給することを含み得る。
前記の酸素の供給は前記の培養物を撹拌することを含み得る。
前記の酸素の供給は酸素を含むガス混合物と前記の培養物を接触させることを含み得る。
ステップ（ｃ）は、炭素源を含む供給物を前記の培養物に添加することを含み得る。
前記の供給物は少なくとも１つの発酵可能な炭素源を含み得る。
前記の供給物はグルコース、エタノール、シトレート、ソルビトール、キシロース、トレハロース、アラビノース、ガラクトース、フルクトース、メリビオース、ラクトース、マルトース、ラムノース、リボース、マンノース、マンニトール、およびラフィノースのうちの１つ以上を含み得る。
前記の方法は、ステップ（ｃ）の間に前記のエタノールの濃度を上限の設定値と下限の設定値の間に維持することをさらに含み得る。
前記の下限の設定値は約０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１０％、０．２％、０．３％、０．４％、０．６％、０．６％、０．７％、０．８％または０．９％（重量／体積）であり得る。
前記の上限の設定値は約４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．８％、１．６％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１．０％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３５％、０．３％、０．２５％、０．２％、または０．１５％（重量／体積）であり得る。
前記の上限の設定値は多くても約１．５％、１．４％、１．３、１．２％、または１．１％（重量／体積）であり得る。
前記の方法は、ステップ（ｃ）の間に前記のエタノールの濃度を設定値に維持することをさらに含み得る。
前記の設定値は約０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、０１．％、０１．１％、０１．２％、０１．３％、０１．４％、または０１．５％（重量／体積）であり得る。
ステップ（ｃ）は、前記の培養物中のエタノールの濃度を約０．０１％と約４％の間、約０．０２％と約３．７５％の間、約０．０４％と約３．５％の間、約０．０８％と約３．２５％の間、約０．１％と約３％の間、約０．２％と約２．７５％の間、約０．３％と約２．５％の間、約０．４％と約２．２５％の間、約０．５％と約２％の間、約０．６％と約１．７５％の間、約０．７％と約１．５％の間、または約０．８％と約１．２５％の間に維持することを含み得る。
前記の培養物中のエタノールの濃度は、前記の細胞によるエタノールの生産を制御することにより、または前記の培養物へのエタノールの添加により維持され得る。
前記のエタノールの生産を制御するステップは、グルコースの濃度、酸素の利用可能性
、撹拌の強度、ガス圧、供給される空気または他のガス混合物の流速、培養物の粘度、培養物の密度、供給される空気または他のガス混合物の酸素濃度、および温度のうちの１つ以上を制御することを含み得る。
ステップ（ａ）とステップ（ｂ）の間の時間は、約７２時間未満、約４８時間未満、約２４時間未満、約１２時間未満、約９時間未満、約６時間未満、約５時間未満、約４時間未満、約３時間未満、約９０分未満、約３０分未満、約５分未満、または約１分未満であり得る。
ステップ（ｂ）とステップ（ｃ）の間の時間は約１０時間未満、約９時間未満、約８時間未満、約７時間未満、約６時間未満、約５時間未満、約４時間未満、約３時間未満、約２時間未満、約９０分未満、約８０分未満、約７０分未満、約６０分未満、約５０分未満、約４０分未満、約３０分未満、約２０分未満、約１０分未満、約５分未満、または約１分未満であり得る。
ステップ（ａ）の培養物は、前記の培養物に炭素源を添加すること、およびその炭素源が消尽され得るまで前記の培養物を培養することにより作製され得る。
前記の炭素源はグリセロール、グルコース、エタノール、シトレート、ソルビトール、キシロース、トレハロース、アラビノース、ガラクトース、フルクトース、メリビオース、ラクトース、マルトース、ラムノース、リボース、マンノース、マンニトール、およびラフィノースのうちの１つ以上を含み得る。
炭素源の消尽は、前記の真核細胞の代謝活性の低下を検出することにより決定され得る。
前記の真核細胞の代謝活性の前記の低下が、前記の真核細胞による酸素の消費の減少を検出することにより、前記の培養物におけるｐＨの上昇を検出することにより、前記の細胞の湿潤質量の安定化を検出することにより、または前記の培養物におけるアンモニアの濃度の上昇を検出することにより確認され得る。
前記の真核細胞による酸素消費の前記の減少は前記の培養物中の溶存酸素の濃度の上昇を検出することにより確認されうる。
前記の真核細胞は酵母細胞を含み得る。
前記の酵母細胞はメチロトローフ酵母を含み得る。
前記のメチロトローフ酵母はピキア属のメチロトローフ酵母であり得る。
前記のピキア属のメチロトローフ酵母はピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）であり得る。
前記のピキア属のメチロトローフ酵母は、ピキア・アングスタ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ）、ピキア・グイレルモルディイ（Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｒｄｉｉ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、およびピキア・イノシトベラ（Ｐｉｃｈｉａ ｉｎｏｓｉｔｏｖｅｒａ）からなる群より選択される、
前記のマルチサブユニット複合体を発現する遺伝子は１つ以上のゲノム遺伝子座に挿入され得る。
前記のゲノム遺伝子座のうちの少なくとも１つが、ｐＧＡＰ遺伝子座、３’ＡＯＸ ＴＴ遺伝子座、ＰｐＵＲＡ５遺伝子座、ＯＣＨ１遺伝子座、ＡＯＸ１遺伝子座、ＨＩＳ４遺伝子座、ＧＡＰ遺伝子座、ｐＧＡＰ遺伝子座、３’ＡＯＸ ＴＴ遺伝子座、ＡＲＧ遺伝子座、およびＨＩＳ４ ＴＴ遺伝子座からなる群より選択され得る。
前記のマルチサブユニット複合体のサブユニットをコードする遺伝子のうちの少なくとも１つが、誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターの制御下で発現し得る。
前記の誘導性プロモーターはＡＯＸ１プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター、チアミン誘導性プロモーター、およびＦＬＤ１プロモーターからなる群より選択され得る。
前記のマルチサブユニット複合体のサブユニットをコードする遺伝子のうちの少なくとも１つが、ＣＵＰ１プロモーター、ＡＯＸ１プロモーター、ＩＣＬ１プロモーター、グリセルアルデヒド‐３‐リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰ）プロモーター、ＦＬＤ１プロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、アルコールデヒドロゲナーゼＩＩプロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＰＨＯ３プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、およびＰｙｋプロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター、チアミン誘導性プロモーター、それらに由来するキメラプロモーター、酵母性プロモーター、哺乳類性プロモーター、昆虫性プロモーター、植物性プロモーター、爬虫類性プロモーター、両生類性プロモーター、ウイルス性プロモーター、および鳥類性プロモーターからなる群より選択されるプロモーターの制御下で発現し得る。
前記の真核細胞は二倍体、四倍体細胞、または多倍数体であり得る。
前記の方法は、前記の真核細胞または前記の培地から前記のマルチサブユニット複合体を精製することをさらに含み得る。
前記のマルチサブユニット複合体は前記の真核細胞の細胞内成分、細胞質、核質、または膜から精製され得る。
前記の真核細胞が前記のマルチサブユニット複合体を前記の培地に分泌する、
前記のマルチサブユニット複合体は前記の培養物培地から精製され得る。
前記のマルチサブユニット複合体は一重特異性抗体または二重特異性抗体を含み得る。
前記のマルチサブユニット複合体はヒト抗体、またはヒト化抗体、またはそれらの断片を含み得る。
前記のヒト化抗体はマウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジまたはウシ起源のものであり得る。
前記のヒト化抗体はウサギ起源のものであり得る。
前記のマルチサブユニット複合体は一価抗体、二価抗体、または多価抗体を含み得る。
前記の抗体はプロテインＡ親和性および／またはプロテインＧ親和性により前記の培養物から精製され得る。
前記のマルチサブユニット複合体のサブユニットを前記の一団の前記の真核細胞のうちの少なくとも１つにおいて発現する遺伝子のうちの少なくとも１つが前記の真核細胞における発現のために最適化され得る。
前記のマルチサブユニット複合体は抗体を含むことができ、そして、前記の抗体の純度が、前記の真核細胞により生産される抗体であって、予測される見かけの流体力学半径を有する抗体複合体に含まれ得る、予測される分子量を有する抗体複合体に含まれ得る、および／または前記の抗体の標的に特異的に結合する前記抗体の割合を測定することにより評価され得る。
前記のマルチサブユニット複合体は抗体を含むことができ、そして、前記の抗体の収量は、前記の真核細胞によって生産される抗体の量を、異常にグリコシル化されて得る、予測される見かけの流体力学半径を有する複合体以外の抗体複合体に含まれている、予測される分子量を有する抗体複合体に含まれ得る、および／または前記の抗体の標的に特異的に結合することに失敗するあらゆる生産物関連変異体を差し引いて決定することにより評価され得る。
前記の抗体複合体の分子量は非還元ＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより決定され得る。
前記のマルチサブユニット複合体は抗体を含むことができ、前記の方法は前記の抗体を精製することをさらに含み得る。
前記の培養物細胞は、少なくとも１００ｍｇ／Ｌ、少なくとも１５０ｍｇ／Ｌ、少なくとも２００ｍｇ／Ｌ、少なくとも２５０ｍｇ／Ｌ、少なくとも３００ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌと３００ｍｇ／Ｌの間、１００ｍｇ／Ｌと５００ｍｇ／Ｌの間、１００ｍｇ／Ｌと１０００ｍｇ／Ｌの間、少なくとも１０００ｍｇ／Ｌ、少なくとも１２５０ｍｇ／リットル、少なくとも１５００ｍｇ／リットル、少なくとも約１７５０ｍｇ／リットル、少なくとも約２０００ｍｇ／リットル、少なくとも約１００００ｍｇ／リットル、またはそれより多くの上清抗体力価を生じ得る。
前記のマルチサブユニット複合体の１つ以上のサブユニットは１つよりも多くの遺伝子コピーから発現し得る。
前記のマルチサブユニット複合体は、抗体であって、前記の抗体の軽鎖をコードする遺伝子の１〜１０コピーの間のコピーから、および前記の抗体の重鎖をコードする遺伝子の１〜１０コピーから発現する前記の抗体を含み得る。
前記のマルチサブユニット複合体を発現する遺伝子は前記の細胞のゲノムに組み込まれ得る。
前記のマルチサブユニット複合体を発現する遺伝子は染色体外因子、プラスミド、または人工染色体に含まれ得る。
前記の細胞は、前記の抗体の軽鎖を発現する遺伝子のコピーを、前記の抗体の重鎖を発現する遺伝子のコピーよりも多く含み得る。
前記の細胞における前記の抗体の重鎖をコードする遺伝子のコピー数と前記の抗体の軽鎖をコードする遺伝子のコピー数のそれぞれが２と２、２と３、３と３、３と４、３と５、４と３、４と４、４と５、４と６、５と４、５と５、５と６、または５と７であり得る
。
前記の細胞における前記の抗体の重鎖をコードする遺伝子のコピー数と前記の抗体の軽鎖をコードする遺伝子のコピー数のそれぞれが２と１、３と１、４と１、５と１、６と１、７と１、８と１、９と１、１０と１、１と２、２と２、３と２、４と２、５と２、６と２、７と２、８と２、９と２、１０と２、１と３、２と３、３と３、４と３、５と３、６と３、７と３、８と３、９と３、１０と３、１と４、２と４、３と４、４と４、５と４、６と４、７と４、８と４、９と４、１０と４、１と５、２と５、３と５、４と５、５と５、６と５、７と５、８と５、９と５、１０と５、１と６、２と６、３と６、４と６、５と６、６と６、７と６、８と６、９と６、１０と６、１と７、２と７、３と７、４と７、５と７、６と７、７と７、８と７、９と７、１０と７、１と８、２と８、３と８、４と８、５と８、６と８、７と８、８と８、９と８、１０と８、１と９、２と９、３と９、４と９、５と９、６と９、７と９、８と９、９と９、１０と９、１と１０、２と１０、３と１０、４と１０、５と１０、６と１０、７と１０、８と１０、９と１０、１０と１０であり得る。
ステップ（ｃ）の培養物が産生培地で培養され得る。
前記の産生培地は最少培地であり得る。
前記の最少培地は選択用薬剤を欠く。
前記の最少培地は前もって形成されたアミノ酸または他の複雑な生体分子を欠く。
前記の産生培地は複合培地であり得る。
前記の複合培地は、酵母抽出物、大豆ペプトン、および他の植物ペプトンのうちの１つ以上を含み得る。
ステップ（ｃ）の培養物は高細胞密度まで培養され得る。
前記の高細胞密度は少なくとも５０ｇ／Ｌであり得る。
前記の高細胞密度は少なくとも１００ｇ／Ｌであり得る。
前記の高細胞密度は少なくとも３００ｇ／Ｌであり得る。
前記の高細胞密度は少なくとも４００ｇ／Ｌであり得る。
前記の高細胞密度は少なくとも５００ｇ／Ｌであり得る。
前記の高細胞密度は少なくとも７５０ｇ／Ｌであり得る。
酵母細胞は少なくとも２０回の倍化の間培養され得、そして、その酵母細胞は前記の少なくとも２０回の倍化の後に前記のマルチサブユニット複合体の高レベルの発現を維持し得る。
ステップ（ｃ）の細胞は少なくとも５０回の倍化の間培養され得、そして、その細胞は前記の少なくとも５０回の倍化の後に前記のマルチサブユニット複合体の高レベルの発現を維持し得る。
ステップ（ｃ）の細胞は少なくとも１００回の倍化の間培養され得、そして、その細胞は前記の少なくとも１００回の倍化の後に前記のマルチサブユニット複合体の高レベルの発現を維持し得る。
前記のマルチサブユニット複合体のうちの少なくとも１つのサブユニットは分泌シグナルを含み得る。
前記のマルチサブユニット複合体は抗体を含み得る。
分泌シグナルは、配列番号４１４〜４３７からなる群より選択される１つ以上のポリペプチドおよびそれらの任意の組合せを含み得る。
前記のマルチサブユニット複合体は、２０１０年１２月１日に提出された米国特許仮出願番号第６１／４１８，８３２号、２０１１年１２月１日に提出された国際特許出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ１１／６２９６３号、２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０９，２９５号、２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０９，１５３号、２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０８，６６５号、および２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０８，８３１号に開示される抗体のうちのいずれでなくてもよい。
前記のマルチサブユニット複合体はＡｂ１‐ＮＧＦ、Ａｂ２‐ＮＧＦ、Ａｂ３‐ＮＧＦ、Ａｂ４‐ＮＧＦ、Ａｂ５‐ＮＧＦ、Ａｂ６‐ＮＧＦ、Ａｂ７‐ＮＧＦ、Ａｂ８‐ＮＧＦ、Ａｂ９‐ＮＧＦ、Ａｂ１０‐ＮＧＦ、Ａｂ１１‐ＮＧＦ、Ａｂ１２‐ＮＧＦ、Ａｂ１３‐ＮＧＦ、Ａｂ１４‐ＮＧＦ、Ａｂ１５‐ＮＧＦ、Ａｂ１６‐ＮＧＦ、Ａｂ１７‐ＮＧＦ、Ａｂ１８‐ＮＧＦ、Ａｂ１９‐ＮＧＦ、Ａｂ２０‐ＮＧＦ、およびＡｂ２１‐ＮＧＦ、またはそれらのＦａｂ２断片もしくはＦａｂ１断片でなくてもよい。
前記のマルチサブユニット複合体は次の抗体、すなわち、Ａｂ１‐ＮＧＦ、Ａｂ２‐ＮＧＦ、Ａｂ３‐ＮＧＦ、Ａｂ４‐ＮＧＦ、Ａｂ５‐ＮＧＦ、Ａｂ６‐ＮＧＦ、Ａｂ７‐ＮＧＦ、Ａｂ８‐ＮＧＦ、Ａｂ９‐ＮＧＦ、Ａｂ１０‐ＮＧＦ、Ａｂ１１‐ＮＧＦ、Ａｂ１２‐ＮＧＦ、Ａｂ１３‐ＮＧＦ、Ａｂ１４‐ＮＧＦ、Ａｂ１５‐ＮＧＦ、Ａｂ１６‐ＮＧＦ、Ａｂ１７‐ＮＧＦ、Ａｂ１８‐ＮＧＦ、Ａｂ１９‐ＮＧＦ、Ａｂ２０‐ＮＧＦ、またはＡｂ２１‐ＮＧＦのいずれかに含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つ全てを含まなくてよく、かつ、ＮＧＦへの結合特異性を任意で有する。
前記のマルチサブユニット複合体は、それぞれ配列番号５１および４０１、それぞれ配列番号５３および４０２、それぞれ配列番号４０５および４０６、ならびにそれぞれ配列番号４０７および４０８の軽鎖ポリペプチド配列および重鎖ポリペプチド配列を含まなくてよい、またはそれらのポリペプチド配列から構成されなくてよい。
前記のマルチサブユニット複合体は、配列番号５５、５６、５７、５８、５９、および６０のＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つ全てを含有する抗体を含まなくてよく、かつ、ＮＧＦへの結合特異性を任意で有する。
前記のマルチサブユニット複合体は、本明細書の「抗ＮＧＦ抗体およびＮＧＦへの結合活性を有するその結合断片」および「抗ＮＧＦ抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」という表題の節において開示される抗体または抗体コード配列のうちのいずれも
含まなくてよい。１つの態様では、本開示は、マルチサブユニット複合体を作製する方法であって、前記のマルチサブユニット複合体を発現する真核細胞を含む培養物を生じる宿主細胞の培養、前記の培養物への大量のエタノールの添加、および前記のマルチサブユニット複合体を生産するための前記培養物の培養を含む方法を提供する。マルチサブユニット複合体は１つ以上のジスルフィド結合を含むことができ、それは抗体であり得る。
エタノールのボーラス濃度（％（重量／体積）で表される）は、少なくとも約０．１％、少なくとも約０．２％、少なくとも約０．３％、少なくとも約０．４％、少なくとも約０．５％、少なくとも約０．６％、少なくとも約０．７％、少なくとも約０．８％、少なくとも約０．９％、少なくとも約１％、最大で約１％、最大で約１．１％、最大で約１．２％、最大で約１．３％、最大で約１．４％、最大で約１．５％、最大で約１．６％、最大で約１．７％、最大で約１．８％、最大で約１．９％、最大で約２％、最大で約３％、最大で約４％、または最大で約５％などの約０．１％と約５％の間、例えば、約０．１％と約１．９％の間、約０．２％と約１．８％の間、約０．３％と約１．７％の間、約０．４％と約１．６％の間、約０．５％と約１．５％の間、約０．６％と約１．４％の間、約０．７％と約１．３％の間、約０．８％と約１．２％の間、または約０．９％と約１．１％の間、例えば、約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２％、約２．５％、約３％、約４％、または約５％であり得る。
前記の方法は、前記の所望のマルチサブユニット複合体の精製をさらに含み得る。
例示的な実施形態では、エタノール濃度はエタノールのボーラス添加の後に制御され得、それは所望の設定値または所望の設定範囲内にエタノール濃度を維持するために用いられ得る。設定値（％（重量／体積）で表される）は約０．１％と約４％の間、少なくとも約０．０１％、少なくとも約０．０２％、少なくとも約０．０４％、少なくとも約０．０６％、少なくとも約０．０８％、少なくとも約０．１％、少なくとも約０．１５％、少なくとも約０．２％、少なくとも約０．２５％、少なくとも約０．３％、少なくとも約０．３５％、少なくとも約０．４％、少なくとも約０．４５％、少なくとも約０．５％、少なくとも約０．６％、少なくとも約０．７％、少なくとも約０．８％、少なくとも約０．９％、少なくとも約１％、少なくとも約１．２％、少なくとも約１．４％、少なくとも約１．６％、少なくとも約１．８％、少なくとも約２％、最大で約４％、最大で約３．７５％、最大で約３．５％、最大で約３．２５％、最大で約３％、最大で約２．７５％、最大で約２．５％、最大で約２．２５％、最大で約２％、最大で約１．７５％、最大で約１．５％、最大で約１．２５％、最大で約１％、約０．０１％と約４％の間、約０．０２％と約３．７５％の間、約０．０４％と約３．５％の間、約０．０８％と約３．２５％の間、約０．１％と約３％の間、約０．２％と約２．７５％の間、約０．３％と約２．５％の間、約０．４％と約２．２５％の間、約０．５％と約２％の間、約０．６％と約１．７５％の間、約０．７％と約１．５％の間、または約０．８％と約１．２５％の間であり得る。例えば、設定値はボーラス濃度またはそのボーラス濃度のプラスマイナス１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％もしくは１００％の範囲内と同一であり得る。
エタノール濃度の設定値は発酵の間に酵母細胞によるエタノール生産を制御することにより維持され得る。例えば、エタノール濃度は、グルコースの濃度の上昇（例えば、グルコース供給速度の上昇）、酸素の利用可能性の低下、撹拌強度の低下（例えば、発酵槽の入力パワーの低下）、発酵槽におけるガス圧の低下、供給される空気または他のガス混合物の流速の低下、培養物の粘度の上昇、または供給される空気または他のガス混合物の酸素濃度の低下（例えば、酸素供給が用いられている場合）により上昇し得る。エタノール
生産は発酵温度の上昇によっても増加し得る。同様に、エタノール濃度は、グルコース濃度の低下（例えば、グルコース供給速度の低下）により低下し得、酸素の利用可能性の上昇、撹拌強度の上昇（例えば、発酵槽の入力パワーの上昇）、発酵槽におけるガス圧の上昇、供給される空気または他のガス混合物の流速の上昇、培養物の粘度の低下、または供給される空気または他のガス混合物の酸素濃度の上昇（例えば、酸素供給が用いられている場合）により低下し得る。エタノール生産は発酵温度の低下によっても減少し得る。
本開示の方法を用いて、望まない副産物の相対量が、従来の方法と比べ、最初の量的レベルと比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または検出不可能なレベルにまで減少し得る。例となる望まない副産物であって、その相対量がそのように減少し得るものは、所望のマルチサブユニット複合体と異なる見かけの分子量を有する１つ以上の種を含み得る。例えば、見かけの分子量は化学量論組成、折畳み、複合体の構築やグリコシル化の違いにより影響を受け得る。例えば、そのような望まない副産物はサイズ排除クロマトグラフィーやゲル電気泳動を用いて検出され得、そして、所望のマルチサブユニット複合体よりも大きい、または小さい見かけの分子量を有し得る。例示的な実施形態では、望まない副産物は還元条件したで検出され得る。他の例示的な実施形態では、望まない副産物は非還元条件下で検出され得る。
例示的な実施形態では、本開示は、抗体および他のマルチサブユニット複合体の組換え生産をより大きい収量と共にもたらす方法および組成物も提供する。例示的な実施形態では、収量は、本明細書において開示される方法を使用して（従来の方法と比較して）少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、またはそれより多く増加し得る。
例示的な実施形態では、マルチサブユニットタンパク質を生産し得る宿主細胞は、酵母、例えば、ピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）などのピキア属の種もしくは別のメチロトローフ酵母、または出芽酵母（Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などのサッカロミセス属の種の酵母、またはシゾサッカロミセス（例えば、Ｓ． ｐｏｍｂｅ）などの別の酵母であり得る。本発明において利用され得るメチロトローフ酵母の他の例にはピキア・アングスタ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ）（当技術分野においてハンセヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）としても知られる）、ピキア・グイレルモルディイ（Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｒｄｉｉ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピキア・イノシトベラ（Ｐｉｃｈｉａ
ｉｎｏｓｉｔｏｖｅｒａ）、オガタエア・ニトラトアベルサ（Ｏｇａｔａｅａ ｎｉｔｒａｔｏａｖｅｒｓａ）、およびカンジダ・ボインドニイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｎｉｉ）が含まれる。
宿主細胞は真核細胞、例えば、酵母細胞、例えば、メチロトローフ酵母、例えば、ピキア属の酵母であり得る。ピキア属の例となるメチロトローフ酵母には、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・アングスタ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ）、ピキア・グイレルモルディイ（Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｒｄｉｉ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、およびピキア・イノシトベラ（Ｐｉｃｈｉａ ｉｎｏｓｉｔｏｖｅｒａ）が含まれる。宿主細胞は、接合、例えば、マルチサブユニット複合体のサブユニットをコードする少なくとも１つの遺伝子の１つ以上のコピーをそれぞれ含有する２つの一倍体酵母細胞を接合させることにより作製され得る。
好ましい実施形態では、ピキア属のメチロトローフ酵母はピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）である。宿主細胞は二倍体細胞または四倍体細胞であり得る。
所望のマルチサブユニット複合体の前記のサブユニット、例えば、前記の所望の抗体軽鎖や重鎖をコードする前記の遺伝子のうちの少なくとも１つが、ＣＵＰ１（培地の銅のレベルにより誘導される； Koller et al., Yeast 2000; 16: 651-656.を参照のこと）、テトラサイクリン誘導性プロモーター（例えば、 Staib et al., Antimicrobial Agents And Chemotherapy, Jan. 2008, p. 146-156 を参照のこと）、チアミン誘導性プロモーター、ＡＯＸ１プロモーター、ＩＣＬ１プロモーター、グリセルアルデヒド‐３‐リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰ）プロモーター、ＦＬＤ１プロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、アルコールデヒドロゲナーゼＩＩプロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＰＨＯ３プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、およびＰｙｋプロモーター、それらに由来するキメラプロモーター、酵母性プロモーター、哺乳類性プロモーター、昆虫性プロモーター、植物性プロモーター、爬虫類性プロモーター、両生類性プロモーター、ウイルス性プロモーター、および鳥類性プロモーターなどの誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターの制御下で発現し得る。
宿主細胞は前記の所望のマルチサブユニット複合体を培地に分泌し得る。代わりに、または、加えて、前記の所望のマルチサブユニット複合体は前記の宿主細胞に保持され得、そして、それから単離され得る。
所望のマルチサブユニット複合体は、一重特異性抗体または二重特異性抗体などの抗体を含み得る。抗体は任意の抗原に特異的に結合する抗体であり得る。
その所望のマルチサブユニット複合体は、２０１０年１２月１日に提出された米国特許仮出願番号第６１／４１８，８３２号、２０１１年１２月１日に提出された国際特許出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ１１／６２９６３号、２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０９，２９５号、２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０９，１５３号、２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０８，６６５号、および２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０８，８３１号に開示される抗体のいずれか以外の抗体（例えば、抗ＮＧＦ抗体のいずれか以外の抗体）であり得る。例示的な実施形態では、所望のマルチサブユニット複合体は、次の抗体、すなわち、Ａｂ１‐ＮＧＦ、Ａｂ２‐ＮＧＦ、Ａｂ３‐ＮＧＦ、Ａｂ４‐ＮＧＦ、Ａｂ５‐ＮＧＦ、Ａｂ６‐ＮＧＦ、Ａｂ７‐ＮＧＦ、Ａｂ８‐ＮＧＦ、Ａｂ９‐ＮＧＦ、Ａｂ１０‐ＮＧＦ、Ａｂ１１‐ＮＧＦ、Ａｂ１２‐ＮＧＦ、Ａｂ１３‐ＮＧＦ、Ａｂ１４‐ＮＧＦ、Ａｂ１５‐ＮＧＦ、Ａｂ１６‐ＮＧＦ、Ａｂ１７‐ＮＧＦ、Ａｂ１８‐ＮＧＦ、Ａｂ１９‐ＮＧＦ、Ａｂ２０‐ＮＧＦ、およびＡｂ２１‐ＮＧＦのうちのいずれでもなくてよい。さらなる例示的な実施形態では、所望のマルチサブユニット複合体は次の抗体、すなわち、Ａｂ１‐ＮＧＦ、Ａｂ２‐ＮＧＦ、Ａｂ３‐ＮＧＦ、Ａｂ４‐ＮＧＦ、Ａｂ５‐ＮＧＦ、Ａｂ６‐ＮＧＦ、Ａｂ７‐ＮＧＦ、Ａｂ８‐ＮＧＦ、Ａｂ９‐ＮＧＦ、Ａｂ１０‐ＮＧＦ、Ａｂ１１‐ＮＧＦ、Ａｂ１２‐ＮＧＦ、Ａｂ１３‐ＮＧＦ、Ａｂ１４‐ＮＧＦ、Ａｂ１５‐ＮＧＦ、Ａｂ１６‐ＮＧＦ、Ａｂ１７‐ＮＧＦ、Ａｂ１８‐ＮＧＦ、Ａｂ１９‐ＮＧＦ、Ａｂ２０‐ＮＧＦ、およびＡｂ２１‐ＮＧＦのうちのいずれかのＦａｂ２断片でなくてよい。さらなる例示的な実施形態では、所望のマルチサブユニット複合体は次の抗体、すなわち、Ａｂ１‐ＮＧＦ、Ａｂ２‐ＮＧＦ、Ａｂ３‐ＮＧＦ、Ａｂ４‐ＮＧＦ、Ａｂ５‐ＮＧＦ、Ａｂ６‐ＮＧＦ、Ａｂ７‐ＮＧＦ、Ａｂ８‐ＮＧＦ、Ａｂ９‐ＮＧＦ、Ａｂ１０‐ＮＧＦ、Ａｂ１１‐ＮＧＦ、Ａｂ１２‐ＮＧＦ、Ａｂ１３‐ＮＧＦ、Ａｂ１４‐ＮＧＦ、Ａｂ１５‐ＮＧＦ、Ａｂ１６‐ＮＧＦ、Ａｂ１７‐ＮＧＦ、Ａｂ１８‐ＮＧＦ、Ａｂ１９‐ＮＧＦ、Ａｂ２０‐ＮＧＦ、およびＡｂ２１‐ＮＧＦのう
ちのいずれかのＦａｂ１断片でなくてよい。さらなる例示的な実施形態では、所望のマルチサブユニット複合体は次の抗体、すなわち、Ａｂ１‐ＮＧＦ、Ａｂ２‐ＮＧＦ、Ａｂ３‐ＮＧＦ、Ａｂ４‐ＮＧＦ、Ａｂ５‐ＮＧＦ、Ａｂ６‐ＮＧＦ、Ａｂ７‐ＮＧＦ、Ａｂ８‐ＮＧＦ、Ａｂ９‐ＮＧＦ、Ａｂ１０‐ＮＧＦ、Ａｂ１１‐ＮＧＦ、Ａｂ１２‐ＮＧＦ、Ａｂ１３‐ＮＧＦ、Ａｂ１４‐ＮＧＦ、Ａｂ１５‐ＮＧＦ、Ａｂ１６‐ＮＧＦ、Ａｂ１７‐ＮＧＦ、Ａｂ１８‐ＮＧＦ、Ａｂ１９‐ＮＧＦ、Ａｂ２０‐ＮＧＦ、またはＡｂ２１‐ＮＧＦのいずれかに含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つ全てを含有する抗体を含まなくてよく、かつ、ＮＧＦへの結合特異性を任意で有する。例えば、所望のマルチサブユニット複合体は、それぞれ配列番号５１および４０１、ならびに／またはそれぞれ配列番号５３および４０２、ならびに／またはそれぞれ配列番号４０５および４０６、ならびに／またはそれぞれ配列番号４０７および４０８の軽鎖ポリペプチド配列および重鎖ポリペプチド配列を含まなくてよい、またはそれらのポリペプチド配列から構成されなくてよい。さらなる例として、所望のマルチサブユニット複合体は配列番号５５、５６、５７、５８、５９、および６０のＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つ全てを含有する抗体を含まなくてよく、かつ、ＮＧＦへの結合特異性を任意で有する。
所望のマルチサブユニット複合体は、任意の種類の抗体を含み得る。例となる抗体の種類には任意の哺乳類の種、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシなどの抗体が含まれる。好ましくは、その抗体はヒト抗体またはウサギ起源のものであり得るヒト化抗体である。所望の抗体は一価抗体、二価抗体、または多価抗体であり得る。
所望のマルチサブユニット複合体のサブユニット、例えば、所望の抗体の軽鎖や重鎖を前記の一団の前記の宿主細胞のうちの少なくとも１つにおいて発現する前記の遺伝子のうちの少なくとも１つは、前記の宿主細胞における発現について（例えば、好適なコドンを選択したり、コドンの選択によりＡＴのパーセンテージを変化させたりすることにより）最適化され得る。
前記の所望のマルチサブユニット複合体、例えば、所望の抗体の純度は、グリコシル化されていない、予測される見かけの流体力学半径や（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーにより測定される）見かけの分子量を有する、（例えば、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥなどのゲル電気泳動および任意でウェスタンブロッティングにより検出される）予測される電気泳動移動度を有する複合体に含まれる、前記の宿主細胞により生産されるその所望のマルチサブユニット複合体の割合を測定したり、その所望のマルチサブユニット複合体の特定の活性（例えば、所望の抗体の標的への特異的な結合）を測定したりすることにより評価され得る。
所望のマルチサブユニット複合体は抗体であり得、そして、前記の抗体の収量は、前記の宿主細胞により生産される所望の抗体の量を、グリコシル化されている、予測される見かけの分子量もしくは流体力学半径を有する複合体以外の抗体複合体に含まれる、および／または前記の所望の抗体の標的に特異的に結合することに失敗するあらゆる生産物関連変異体を差し引いて決定することにより評価され得る。
本対象の方法は少なくとも１００ｍｇ／Ｌ、少なくとも１５０ｍｇ／Ｌ、少なくとも２００ｍｇ／Ｌ、少なくとも２５０ｍｇ／Ｌ、少なくとも３００ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌと３００ｍｇ／Ｌの間、１００ｍｇ／Ｌと５００ｍｇ／Ｌの間、１００ｍｇ／Ｌと１０００ｍｇ／Ｌの間、または１０００ｍｇ／Ｌ超、例えば、１２００ｍｇ／Ｌほど高い、１０，０００ｍｇ／Ｌほど高い、またはそれより高い上清抗体力価を生じ得る。
別の態様では、所望のマルチサブユニット複合体を生産する宿主細胞は、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）細胞などのピキア属の二倍体細胞または四倍体細胞であり得る。前記の所望のマルチサブユニット複合体のサブユニット、例えば、所望の抗体の軽鎖および重鎖を発現する遺伝子は前記の宿主細胞のゲノムに挿入され得る、および／または染色体外因子、プラスミドもしくは人工染色体に含まれ得る。
別の態様では、所望のマルチサブユニット複合体を生産する宿主細胞は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１１年８月３１日に提出された米国特許仮出願番号第６１／５２５，３０７号（代理人整理番号第６７８５８．７３０２００号）にさらに記載されるように、収量や純度を上昇させるために操作され得る。その中に記載されるように、抗体または他のマルチサブユニット複合体の収量および純度は、各サブユニットをコードする遺伝子の細胞あたりのコピー数を変えることにより大幅に改善され得る。例えば、所望のマルチサブユニット複合体が抗体である場合、宿主細胞は、重鎖を発現する遺伝子のコピーよりも多くの軽鎖を発現する遺伝子のコピーを含み得る。例示的な実施形態では、宿主細胞は、軽鎖をコードする遺伝子を１コピーから１０コピーまで、および、重鎖をコードする遺伝子を１コピーから１０コピーまで含み得る。前記の宿主細胞における重鎖をコードする遺伝子と軽鎖をコードする遺伝子のそれぞれのコピー数はそれぞれ２と２、２と３、３と３、３と４、３と５、４と３、４と４、４と５、４と６、５と４、５と５、５と６、または５と７であり得る。重鎖と軽鎖の遺伝子コピー数のさらなる例となる組合せには、Ｈ２ｘＬ１、Ｈ３ｘＬ１、Ｈ４ｘＬ１、Ｈ５ｘＬ１、Ｈ６ｘＬ１、Ｈ７ｘＬ１、Ｈ８ｘＬ１、Ｈ９ｘＬ１、Ｈ１０ｘＬ１、Ｈ１ｘＬ２、Ｈ２ｘＬ２、Ｈ３ｘＬ２、Ｈ４ｘＬ２、Ｈ５ｘＬ２、Ｈ６ｘＬ２、Ｈ７ｘＬ２、Ｈ８ｘＬ２、Ｈ９ｘＬ２、Ｈ１０ｘＬ２、Ｈ１ｘＬ３、Ｈ２ｘＬ３、Ｈ３ｘＬ３、Ｈ４ｘＬ３、Ｈ５ｘＬ３、Ｈ６ｘＬ３、Ｈ７ｘＬ３、Ｈ８ｘＬ３、Ｈ９ｘＬ３、Ｈ１０ｘＬ３、Ｈ１ｘＬ４、Ｈ２ｘＬ４、Ｈ３ｘＬ４、Ｈ４ｘＬ４、Ｈ５ｘＬ４、Ｈ６ｘＬ４、Ｈ７ｘＬ４、Ｈ８ｘＬ４、Ｈ９ｘＬ４、Ｈ１０ｘＬ４、Ｈ１ｘＬ５、Ｈ２ｘＬ５、Ｈ３ｘＬ５、Ｈ４ｘＬ５、Ｈ５ｘＬ５、Ｈ６ｘＬ５、Ｈ７ｘＬ５、Ｈ８ｘＬ５、Ｈ９ｘＬ５、Ｈ１０ｘＬ５、Ｈ１ｘＬ６、Ｈ２ｘＬ６、Ｈ３ｘＬ６、Ｈ４ｘＬ６、Ｈ５ｘＬ６、Ｈ６ｘＬ６、Ｈ７ｘＬ６、Ｈ８ｘＬ６、Ｈ９ｘＬ６、Ｈ１０ｘＬ６、Ｈ１ｘＬ７、Ｈ２ｘＬ７、Ｈ３ｘＬ７、Ｈ４ｘＬ７、Ｈ５ｘＬ７、Ｈ６ｘＬ７、Ｈ７ｘＬ７、Ｈ８ｘＬ７、Ｈ９ｘＬ７、Ｈ１０ｘＬ７、Ｈ１ｘＬ８、Ｈ２ｘＬ８、Ｈ３ｘＬ８、Ｈ４ｘＬ８、Ｈ５ｘＬ８、Ｈ６ｘＬ８、Ｈ７ｘＬ８、Ｈ８ｘＬ８、Ｈ９ｘＬ８、Ｈ１０ｘＬ８、Ｈ１ｘＬ９、Ｈ２ｘＬ９、Ｈ３ｘＬ９、Ｈ４ｘＬ９、Ｈ５ｘＬ９、Ｈ６ｘＬ９、Ｈ７ｘＬ９、Ｈ８ｘＬ９、Ｈ９ｘＬ９、Ｈ１０ｘＬ９、Ｈ１ｘＬ１０、Ｈ２ｘＬ１０、Ｈ３ｘＬ１０、Ｈ４ｘＬ１０、Ｈ５ｘＬ１０、Ｈ６ｘＬ１０、Ｈ７ｘＬ１０、Ｈ８ｘＬ１０、Ｈ９ｘＬ１０、Ｈ１０ｘＬ１０など、最大で１０コピーの重鎖遺伝子や軽鎖遺伝子の任意の組合せが含まれ、その場合、「Ｈ」の後の数は重鎖遺伝子のコピー数を表し、「Ｌ」の後の数は軽鎖遺伝子のコピー数を表す。例えば、特定の数の重鎖遺伝子コピーと軽鎖遺伝子コピーは１つの遺伝子座、または複数遺伝子座にタンデムに挿入され得る（それらのうちのいずれか、または全てが１コピーより多くを含有し得る）。任意で、各ゲノム遺伝子座は、タンデムに挿入されている３つ、または４つより多くの遺伝子コピーを含み、それにより増殖や抗体生産の間のコピー数の安定性を促進してもよい。
培養は、エネルギー源、酸素および栄養素を使用して細胞を証明することが最も典型的である。方法は、組換えタンパク質の発現のためのピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）発酵の設計と最適化についての文献においても知られており、それには細胞密度、培地の体積、基質の供給速度、および反応の各期間の長さの最適化が含まれる。 Cregg, J. M., Ed., 2007, Pichia Protocols (第２版), Methods in Molecular Biology, vol. 389, Humana Press, Totowa, N.J., 43〜63頁内のZhang et al., “Rational Design
and Optimization of Fed-Batch and Continuous Fermentations”を参照のこと。酸素
を追加した空気または追加していない空気などの酸素を含むガス混合物を培養物に供給す
ることができる。酵母培養物は、最少培地であり得る培地、選択薬剤を欠如し得る培地、および／または前もって形成されたアミノ酸または他の複雑な生体分子を欠如し得る培地で培養され得る。培地は（例えば、酵母抽出物や植物性ペプトンを含有する）複合培地でもあり得る。培地は窒素原（例えば、メチルアミンクロリド、硫酸アンモニウム、酵母抽出物、大豆ペプトン、他の植物性ペプトンなど）を含むことができる。例となる最少培地には最少ブドウ糖培地（ＭＤ）（１．３４％酵母窒素ベース（ＹＮＢ）（アミノ酸無し）、４×１０-５％ビオチン、および２％グルコース）、緩衝最少グリセロール複合培地（
ＢＭＧＹ）（１％酵母抽出物、２％ペプトン、１％グリセロール、１．３４％ＹＮＢ（アミノ酸無し）、４×１０-５％ビオチンおよび１００ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ６．０）
）が含まれる。培地は１つ以上の塩（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム塩、マグネシウム塩、およびリン酸塩）、緩衝液（例えば、リン酸カリウム緩衝液、トリス緩衝液、またはＨＥＰＥＳ緩衝液）、ヌクレオシド（例えば、アデノシンおよびチミジン）、抗生物質（例えば、混入汚染物質の増殖を抑制したり、選択マーカーを維持したりするために添加される）、微量元素、およびグルコースまたは別のエネルギー源を含み得る。任意の追加物および置換物も、当業者に知られているだろう適切な濃度で含まれ得る。
培養物は高細胞密度まで、例えば、少なくとも５０ｇ／Ｌ、少なくとも１００ｇ／Ｌ、少なくとも３００ｇ／Ｌ、少なくとも４００ｇ／Ｌ、少なくとも５００ｇ／Ｌ、または少なくとも７００ｇ／Ｌまで増殖させられ得る。これらの培養密度は限定的というよりも例示的なものであり、適切な培養密度は当業者によって容易に決定され得る。
酵母細胞は少なくとも２０回の倍化の間培養され得、そして、その酵母細胞は前記の少なくとも２０回の倍化の後に前記の抗体の高レベルの発現を維持し得る。
酵母細胞は少なくとも５０回の倍化の間培養され得、そして、その酵母細胞は前記の少なくとも５０回の倍化の後に前記の抗体の高レベルの発現を維持し得る。
酵母細胞は少なくとも１００回の倍化の間培養され得、そして、その酵母細胞は前記の少なくとも１００回の倍化の後に前記の抗体の高レベルの発現を維持し得る。
別の態様では、本開示は、前述の方法のいずれかに従って作製された安定な二倍体ピキア酵母培養物を含む培地であって、少なくとも約５０ｍｇ／リットル、１００ｍｇ／リットル、５００ｍｇ／リットル、７５０ｍｇ／リットル、１０００ｍｇ／リットル、１２５０ｍｇ／リットル、１５００ｍｇ／リットル、１７５０ｍｇ／リットル、２０００ｍｇ／リットル、またはそれよりも多くあり得る発現レベルの前記の所望の抗体を含み得る培地を提供する。これらの収量の値は限定的というよりも例示的なものである。任意で、収量は、例えば、上述のZhang et al. (2007)に記載されている方法および一般的アプローチ
を用いて最適化され得る。例えば、収量は、温度、ｐＨ、培地の組成（例えば、炭素源、炭素源の濃度、２つ以上の炭素源の混合物、窒素原および濃度、ＫＨ２ＰＯ４、Ｋ２ＨＰＯ４、ＭｇＳＯ４、硫酸カリウム、クエン酸ナトリウム、硫酸カリウム、クエン酸ナトリウム；塩化コバルト、硫酸銅、ヨウ化ナトリウム、硫酸マンガン、モリブデン酸ナトリウム、ホウ酸、塩化亜鉛、硫酸（第一）鉄などの微量金属；ビオチン、イノシトール、チアミンなどのビタミン、ペプトン、酵母抽出物、カザミノ酸、尿素、リン酸アンモニウムまたは他のアンモニウムイオン、Ｌ‐アルギニン塩酸を含む塩および栄養素の濃度）、時間、培養物の密度、酸素投与、および収量に影響する他の要因を変化させることにより最適化され得る。例えば、所望のマルチサブユニット複合体の収量、発現や純度は、いくつかの例では、温度を所望の設定値、例えば、約１７℃と約２５℃の間など、約１５℃と約３０℃の間の設定値に維持することにより改善され得る）。理論によって限定されるつもりはないが、温度の制御が折畳みおよび翻訳後プロセッシングの経路を介して細胞内移送を助けたり、細胞性プロテアーゼの活性を低下させたりすることができるという仮説が立て
られている。同様に、所望のマルチサブユニット複合体の収量、発現や純度は、いくつかの例では、培地のｐＨを所望の設定値、例えば、ｐＨ４とｐＨ７の間など、ｐＨ３からｐＨ８の間の設定値に維持することにより改善され得る。
別の態様では、本開示は、前述の方法のいずれかに従って作製された、前記の所望の抗体を培地に発現する安定な二倍体ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）酵母培養物を含む培地であって、前記の培養物中の前記の二倍体細胞の細胞密度が少なくとも約５０ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ、３００ｇ／Ｌ、４００ｇ／Ｌ、５００ｇ／Ｌ、７００ｇ／Ｌ、またはそれより多くあり得る、その培地を提供する。これらの培養密度は限定的というよりも例示的なものであり、適切な培養密度は当業者によって容易に決定され得る。
前記の抗体または他のマルチサブユニットタンパク質の少なくとも１つのサブユニットは、ニワトリサルモネラのリゾチーム（ＣＬＹ）シグナルペプチド、ＣＬＹ‐Ｌ８、出芽酵母インベルターゼ（ＳＵＣ２）シグナルペプチド、ＭＦ‐α（プレプロ）、ＭＦ‐α（プレ）‐ａｐｖ、ＭＦ‐α（プレ）‐ａｐｖ‐ＳＬＥＫＲ、ＭＦ‐α（プレプロ）‐（ＥＡ）３、αＦシグナルペプチド、ＫＩＬＭ１シグナルペプチド、抑制型酸性ホスファターゼ（ＰＨＯ１）シグナルペプチド、アスペルギルス・ニガー（Ａ． ｎｉｇｅｒ）ＧＯＸシグナルペプチド、シュワンニオミセス・オクシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）グルコアミラーゼ遺伝子（ＧＡＭ１）シグナルペプチド、プロ配列を有しないヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）シグナルペプチド、プロ配列を有するヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）シグナルペプチド、ＩＳＮシグナルペプチド、ＩＦＮシグナルペプチド、ＨＧＨシグナルペプチド、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）、カイコリゾチーム、ヒトリゾチーム（ＬＹＺ１）、１型アクチビン受容体、アクチビンＩＩ型受容体、ピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）免疫グロブリン結合タンパク質（ＰｐＢｉＰ）、ヒト抗体３Ｄ６軽鎖リーダー、およびそれらの任意の組合せなどの分泌シグナルを含み得る。
宿主細胞は、前記の抗体または他のマルチサブユニットタンパク質の１つ以上のサブユニットをコードする遺伝子の１つ以上のコピーをそれぞれ含有する２つの一倍体酵母細胞を接合させることにより作製され得る。
組換え技術で生産されたＡｂ‐Ａの純度は、抗体を生産する酵母培養物におけるグルコース供給の開始前のエタノールのボーラス添加により改善した。抗体は培養から９７時間後に回収され、プロテインＡ親和性により精製され、その後、純度が、所望の完全型抗体（矢印、「完全型抗体（Ｈ２Ｌ２）」）を望まない生産物関連変異体から分離するための非還元ゲルを使用するＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより評価された（図１Ａ）。異常な化学量論組成を有する複合体が、それらの分子量、プロテインＡへの親和性、および下でさらに説明されるその他の研究に基づいて、１本の重鎖と１本の軽鎖を含む「半抗体」種（矢印、「Ｈ１Ｌ１」）および２本の重鎖と１本の軽鎖を含む複合体（「Ｈ２Ｌ１」）と特定された。Ｈ２Ｌ１複合体とＨ１Ｌ１複合体の相対量は抗体生産中のエタノールのボーラス添加により大幅に低下した。図１Ａのレーン２〜３（ボーラス無し）をレーン５（ボーラス有り）に比較されたい。レーンの順序：レーン１、分子量マーカー；レーン２および３、エタノールをボーラス添加していない発酵培養物から調製された対照試料；レーン４、試料無し；レーン５、エタノールをボーラス添加した発酵培養物から調製された試料。 還元条件下で処理された同一の試料を示す。その処理は完全型抗体、Ｈ１Ｌ１複合体およびＨ２Ｌ１複合体のそれぞれを個々の重鎖および軽鎖に分離させた。このことは、Ｈ１Ｌ１複合体とＨ２Ｌ１複合体は全長の重鎖および軽鎖から構成されることを確認する。レーンの順序：レーン１、分子量マーカー；レーン２および３、エタノールをボーラス添加していない発酵培養物から調製された対照試料；レーン４、試料無し；レーン５、エタノールをボーラス添加した発酵培養物から調製された試料。 図１Ｃ〜Ｅは、非還元ゲルの長さに従ってプロットされたゲルバンドの濃度（図１Ａ、それぞれレーン２、３、および５）を示す。矢印はＨ１Ｌ１種に対応するピークを特定する。 同上 同上 図１Ｃ〜Ｅに示されるＨ１Ｌ１ピークに含まれる面積を表で示し、これはＨ１Ｌ１複合体の相対量の約９０％の減少を示している。Ｈ２Ｌ１複合体の量は完全型抗体のピークからの不完全な分離のため、定量されなかった。 図２Ａ〜Ｂは、酵母培養物へのエタノールのボーラス添加によるＡｂ‐Ａの純度の改善の再現性を示す。抗体は培養から８７時間後（図２）に回収され、プロテインＡ親和性により精製され、その後、純度が非還元ゲルを使用するＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより評価された。Ｈ１Ｌ１複合体とＨ２Ｌ１複合体（矢印）の量は再度、エタノールのボーラス添加により減少した。図２Ａのレーン３（ボーラス無し）をレーン２（ボーラス有り）比較のこと。図２Ａ〜Ｂのレーンの順序：レーン１、分子量マーカー；レーン２、エタノールをボーラス添加した発酵培養物から調製された試料；レーン３、エタノールをボーラス添加していない発酵培養物から調製された対照試料。 図２Ｂは、還元条件下で処理された、図２Ａにおけるものと同一の試料を示しており、観察された生産物関連変異体は全長の重鎖および軽鎖から構成されることを再度確認している。図２Ａ〜Ｂのレーンの順序：レーン１、分子量マーカー；レーン２、エタノールをボーラス添加した発酵培養物から調製された試料；レーン３、エタノールをボーラス添加していない発酵培養物から調製された対照試料。 図２Ｃおよび２Ｄは、非還元ゲルの長さに従ってプロットされたゲルバンドの濃度（図２Ａ、それぞれレーン２、および３）を示す。矢印はＨ１Ｌ１種に対応するピークを特定する。 同上 図２Ｅは図２Ｃに示されるＨ１Ｌ１ピークに含まれる面積を表で示し、図２Ａでは約８５％のＨ１Ｌ１複合体の相対量の減少を示す。 図３Ａ〜Ｂは、酵母培養物へのエタノールのボーラス添加によるＡｂ‐Ａの純度の改善の再現性を示す。抗体は培養から８６時間後（図３）に回収され、プロテインＡ親和性により精製され、その後、純度が非還元ゲルを使用するＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより評価された。Ｈ１Ｌ１複合体とＨ２Ｌ１複合体（矢印）の量は再度、エタノールのボーラス添加により減少した。図３Ａのレーン４〜６（ボーラス無し）をレーン２および４（ボーラス有り）と比較のこと。図３Ａのレーンの順序：レーン１、分子量マーカー；レーン２および４、エタノールをボーラス添加した発酵培養物から調製された試料；レーン３、試料無し；レーン５〜７、エタノールをボーラス添加していない発酵培養物から調製された対照試料。 図３Ｂは図３Ａに示されるＨ１Ｌ１ピークに含まれる面積を表で示し、図３Ａでは平均約８７％のＨ１Ｌ１複合体の相対量の減少を示す。 第２の組換え抗体（「Ａｂ‐Ｂ」）の純度も発酵過程の生産期の前でのエタノールのボーラス添加により改善した。発酵培養培地の試料が培養から６７時間後（「Ｔ６７」）または８７時間後（「Ｔ８７」）（それぞれ図４Ａ〜Ｂおよび４Ｃ〜Ｄ）に回収され、抗体がプロテインＡ親和性により精製された。その後、純度が非還元ゲルを使用するＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより評価された（図４Ａおよび４Ｃ）。評価を受けた両方の時点で、半抗体種（Ｈ１Ｌ１）とＨ２Ｌ１複合体の量は、エタノールのボーラス添加を受けなかった対照培養物と比較して、エタノールのボーラス添加を受けた調製された発酵培養物において大幅に減少した図４Ａのレーン２〜３（ボーラス無し）をレーン６〜７（ボーラス有り）と、図４Ｃのレーン２〜３（ボーラス無し）をレーン６〜７（ボーラス有り）と比較のこと。図４Ｂおよび４Ｄは、還元条件下で処理された同一の試料を示す。図４Ａ〜Ｄのレーンの順序：レーン１、分子量マーカー；レーン２〜３、エタノールをボーラス添加していない発酵培養物から調製される対照試料；レーン４〜５、試料無し；レーン６〜７、エタノールをボーラス添加した発酵培養物から調製された試料。 同上 同上 同上 図４Ｅおよび４Ｆは、それぞれに図４Ａ（Ｔ６７）および４Ｃ（Ｔ８７）に示されるＨ１Ｌ１ピークに含まれる面積を表で示し、エタノールのボーラス添加によって、図４Ａに示される早い方の時点では約７３％のＨ１Ｌ１複合体の相対量の減少が、そして、図４Ｃに示される遅い方の時点では平均約３４％のＨ１Ｌ１複合体の相対量の減少が生じたことを示している。 同上 第３の組換え抗体（Ａｂ‐Ｃ）の純度も発酵の生産期前でのエタノールのボーラス添加により改善した。抗体は培養から８６時間後に回収され、プロテインＡ親和性により精製され、その後、純度が非還元ゲルを使用するＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより評価された（図５Ａ）。Ｈ１Ｌ１複合体とＨ２Ｌ１複合体はＡｂ‐Ｃ産物ではエタノールのボーラス投与が無くともあまり多くはなく、改善の余地はあまり残っていなかった。にもかかわらず、半抗体種（Ｈ１Ｌ１）とＨ２Ｌ１複合体の量は、エタノールのボーラス添加を受けなかった対照培養物と比較して、エタノールのボーラス添加を受けた発酵培養物では明らかに減少した。図５Ａのレーン５〜６（ボーラス無し）をレーン３（ボーラス有り）と比較のこと。図５Ａ〜Ｂのレーンの順序：レーン１、分子量マーカー；レーン２、試料無し；レーン３、エタノールのボーラス添加を受けた発酵培養物から調製された試料；レーン４、試料無し；レーン５〜６、エタノールのボーラス添加を受けなかった発酵培養物から調製された対照試料。 還元条件下で処理された同一の試料を示す。図５Ａ〜Ｂのレーンの順序：レーン１、分子量マーカー；レーン２、試料無し；レーン３、エタノールのボーラス添加を受けた発酵培養物から調製された試料；レーン４、試料無し；レーン５〜６、エタノールのボーラス添加を受けなかった発酵培養物から調製された対照試料。 図５Ａに示されているＨ１Ｌ１ピークに含まれる面積を表で示し、エタノールのボーラス添加によるＨ１Ｌ１複合体の相対量の平均約６１％の減少を示している。 図６Ａ〜Ｆは、図１〜３に示されるＡｂ‐Ａ調製物の相対純度のサイズ排除クロマトグラフィーによる評価を示す。各パネルにおいて、主要なピークは２の重鎖と２本の軽鎖を含有する完全型抗体（Ｈ２Ｌ２）を含む。Ｈ１Ｌ１種はこの方法によって主要なピークから分離されることがなかった（使用された条件下で保持される非共有結合によるＨ１Ｌ１二量体形成のためと考えられる）。しかしながら、より大きい分子量種（主要なピークの左）およびより小さい分子量種（主要なピークの右）を含む、他の望まない生産物関連変異体が検出された。２つの完全型抗体を含有する抗体二量体（Ｈ４Ｌ４）に対応すると考えられる顕著なピークが検出され（矢印）、これらの相対量はエタノールのボーラス添加を受けた発酵培養物から調製された試料で減少した。図６Ａ、６Ｃ、および６Ｅ（ボーラス無し）を図６Ｂ、６Ｄ、および６Ｆ（ボーラス有り）と比較のこと。 同上 同上 同上 同上 同上 図７は、図６に示される６つのＡｂ‐Ａ試料と５つの追加の試料のＳＥＣにより検出される生産物関連変異体の量の定量を要約する。それぞれの特定されている試料（列１）について、ラン・セット番号（列２、並行して実施された発酵ランを特定する）、添加されたボーラス（１０ｇ／Ｌか無しのどちらか、列３）、および培養試料が採取され、処理される前に経過した培養時間（列４）が、主要なピーク内で検出されるタンパク質の割合（「ＳＥＣ主要ピークの％」、列５）と共に示されている。増殖期の末期でのエタノールのボーラス添加が主要なピークに含まれる平均パーセンテージを８０．３％から最大で９０．６％まで増加させた。 図８は、図４に示されるＡｂ‐Ｂ抗体試料のＳＥＣにより検出される生産物関連変異体の量の定量を要約する。それぞれの発酵ラン（列１）について、増殖期の末期に添加されたボーラス（１０ｇ／Ｌか無しのどちらか、列２）、および培養試料が採取され、処理される前に経過した培養時間（列３）が、主要なピーク内で検出されるタンパク質の割合（「ＳＥＣ主要ピークの％」、列４）と共に示されている。全体的な純度が上昇し、主要なピークはＴ６７では７６％から７９％まで、およびＴ８７では６０％から７３％まで増加した。 図９は、図５に示されるＡｂ‐Ｃ抗体試料のＳＥＣにより検出される生産物関連変異体の量の定量を要約する。それぞれの特定されている発酵ラン（列１）について、添加されたボーラス（１０ｇ／Ｌか無しのどちらか、列２）、および試料が採取され、処理される前に経過した培養時間（列３）が、主要なピーク内で検出されるタンパク質の割合（「ＳＥＣ主要ピークの％」、列４）と共に示されている。この方法により検出される全体的な純度にほとんど差は無く、産物の約８９％がエタノールをボーラス添加して、またはボーラス添加せずに主要なピークに含まれた。このことは、ボーラス添加されてなくとも高いＡｂ‐Ｃ抗体の初期純度に明らかに起因した。さらに、ＳＥＣは完全型抗体からＨ１Ｌ１種を分離せず、したがって、エタノールのボーラス添加に起因するこの種の生産の減少はＳＥＣの結果に反映されなかった。 図１０は、多量または少量のＨ１Ｌ１バンドを含有するＡｂ‐Ａ抗体試料における（２本目の重鎖へのジスルフィド結合を欠く）遊離重鎖の量のマススペクトロメトリー測定の結果を要約する。予想されたように、遊離重鎖の量はＨ１Ｌ１バンドの量と相関した。このことにより、その正体は、１本の重鎖と１本の軽鎖を含み、２本目の重鎖へのジスルフィド結合を欠くものと確認された。 図１１〜１３は、エタノールのボーラス添加と細胞生存率の間の相関を示す。エタノールのボーラス添加はＡｂ‐Ａ抗体（図１１）とＡｂ‐Ｂ抗体（図１２）の細胞生存率と抗体純度を全般的に改善した。これらの結果は、細胞生存率の改善がエタノールのボーラス添加による抗体純度の改善の少なくとも一部の原因であり得ることを示唆する。これらの結果と一致して、Ａｂ‐Ｃ抗体培養物はＡｂ‐Ａ培養物およびＡｂ‐Ｂ培養物よりも高い抗体純度および細胞生存率を示した（図１３）。明らかに、Ａｂ‐Ｃ抗体生産培養物の生存率はこれらの実験では既に高いので、改善の余地はほとんどなく、培養物はエタノールのボーラス添加による生存率の改善をほとんど示さなかった。図１１〜１３では、斜線付きのカラムはボーラス無しを示し、白色のカラムはエタノールのボーラス添加を示す。生存率は、（この前のスライドにおいて特定されている）純度の分析のために試料が収集された１．５時間の時点で採取された発酵培養物から決定された。 同上 同上 図１４は、広範囲のエタノールのボーラス濃度により抗体純度の同じ改善が生じ得ることを示す。Ａｂ‐Ａは５ｇ／Ｌ（０．５％（重量／体積））と１５ｇ／Ｌ（１．５％（重量／体積））の間のエタノールのボーラス添加を用いて生産され、プロテインＡ親和性により精製され、その後、純度が非還元ＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより分析された。各培養物は同様の低レベルのＨ２Ｌ１複合体とＨ１Ｌ１複合体を６３時間（図１４Ａ）と８６時間（図１４Ｂ）に示した。図１４Ａ〜Ｂのレーンの順序：レーン１、分子量マーカー；レーン２および７、５ｇ／Ｌのボーラス；レーン３および５、１０ｇ／Ｌのボーラス；レーン４および６、１５ｇ／Ｌのボーラス。 同上 図１５は、抗体純度の同様の改善を生じつつ、溶存酸素スパイクとエタノールのボーラス添加の間に経過した時間がかなり変化し得ることを示す。Ａｂ‐Ａは１０ｇ／Ｌ（１％（重量／体積））のエタノールのボーラス添加を用いて生産され、プロテインＡ親和性により精製され、その後、純度が非還元ＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより分析された（図１５Ａ）。溶存酸素スパイク（培養物中の炭素源の消耗を示す）とエタノールのボーラス添加の間の時間である「飢餓期」は０と３時間の間で変更された。各培養物は、飢餓期の持続時間に無関係に、同様に低レベルのＨ２Ｌ１複合体とＨ１Ｌ１複合体を示した。このことは、抗体純度は飢餓期が存在しない事、または少なくとも最大で３時間の飢餓期に対して比較的に非感受性であることを示している。同じ試料が還元ゲルで分析された（図１５Ｂ）。図１５Ａ〜Ｂのレーンの順序：レーン１、分子量マーカー；レーン２〜４、試料無し；レーン５、０時間の飢餓期；レーン６、３時間の飢餓期。 同上 図１６は平衡化期間（エタノールのボーラス添加と供給物の供給の開始の間の時間）の抗体純度に対する効果を示す。Ａｂ‐Ｂ抗体は１０ｇ／Ｌ（１％（重量／体積））のエタノールのボーラス添加を用いて生産され、プロテインＡ親和性により精製され、その後、純度が非還元ＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより分析された（図１６Ａ）。図１６Ａのレーンの順序：レーン１、分子量マーカー；レーン２および４、試料無し；レーン３、３０分の平衡化；レーン５および６、６０分の平衡化時間；レーン７および８、０分の平衡化時間。 平衡化期間の持続時間は０分、３０分、または６０分のいずれかであった。６０分の平衡化期間によって、抗体純度がより低くなった（より多量のＨ２Ｌ１複合体とＨ１Ｌ１複合体が生じた）。６０分の平衡化期間では培養生存率も著しくより低く、特に培養のより早い時期で（２３時間で、図１６Ｂ）より低かった。生存率は培養の末期では（８５時間では、図１６Ｃ）やや改善した。図１６Ｂ〜Ｃでは、斜線付きのカラムは０分の平衡化期間を示し、逆斜線付きのカラムは３０分の平衡化期間を示し、白色のカラムは６０分の平衡化期間を示す。 同上
申請者らは、酵母から発現されるマルチサブユニット複合体の純度は、培地へのエタノールのボーラス投与により非常に改善され得ることを予期せず発見した。単回のエタノールのボーラス添加が、長期の生産期間にわたって、最大で少なくとも９７時間、純度を改善させることが示された。
本開示は、抗体および他のマルチサブユニット複合体を高純度で、１つ以上の望まない副産物の生産を減少させつつ組換え生産する改良された方法および組成物を提供する。例示的な実施形態では、その所望のマルチサブユニット複合体と比較して、その望まない副産物は、変化した化学量論組成、異常なグリコシル化、見かけの分子量の違い、ジスルフィド結合の違い、流体力学半径の違い、１つ以上のサブユニットの断片や短縮化型のうちの１つ以上を示し得る。望まない副産物は、１つ以上のその他の差異も示し得る。望まない副産物は、それらの調製物への影響、例えば、特定の活性のレベル、免疫原性、またはその所望のマルチサブユニット複合体の物理的構成や機能の変化によって検出されることもできる。
例えば、その所望のマルチサブユニット複合体が抗体であるとき、望まない副産物はＨ１Ｌ１すなわち「半抗体」種（すなわち、１本の重鎖と１本の軽鎖を含み、重鎖はジスルフィド結合によって別の重鎖に連結されていない）やＨ２Ｌ１種（すなわち、２本の重鎖と１本の軽鎖を含むが、２本目の軽鎖を欠いている）を含み得る。
理論により限定されることを意図するものではないが、エタノール濃度の急速な上昇（それはエタノールのボーラス添加によりもたらされ得る）が、正確に折り畳まれ、構築されているマルチサブユニット複合体の生産を持続的に改善したり、不正確に折り畳まれ、
または誤って構築されているマルチサブユニット複合体のプロセッシングを増進させたりして、マルチサブユニット複合体の純度を改善する遺伝子発現の持続的な変化を引き起こし得るという仮説が立てられている。さらに、抗体純度の改善が培養物中の酵母の生存率の改善と相関したことが示されており、これに基づき、申請者らは、生存率の改善が（少なくとも部分的に）純度の改善の原因となり得るという仮説を立てるが、この理論は限定的であることを意図するものではない。
好ましい実施形態では、異種性マルチサブユニット複合体は、２つの重鎖サブユニットと２つの軽鎖サブユニットから構成される、ヒト化抗体などの抗体または抗体断片である。好ましい宿主細胞には酵母が含まれ、特に好ましい酵母にはメチロトローフ酵母株、例えば、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ハンセヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）（ピキア・アングスタ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ））、ピキア・グイレルオモンディイ（Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｒｄｉｉ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピキア・イノシトベラ（Ｐｉｃｈｉａｉｎｏｓｉｔｏｖｅｒａ）、および他の株（例えば、米国特許第４，８１２，４０５号、第４，８１８，７００号、第４，９２９，５５５号、第５，７３６，３８３号、第５，９５５，３４９号、第５，８８８，７６８号、および第６，２５８，５５９号を参照のこと。それらの特許のそれぞれが全体の参照により組み込まれる）。宿主細胞は、形質転換、接合、胞子形成などのような当技術分野において公知の方法によって生産され得る。
好ましい実施形態では、宿主細胞は、異種性タンパク質サブユニットをコードする遺伝子のうちの１つ以上の遺伝子について１コピーよりも多くのコピーを含み得る。例えば、複数コピーのサブユニット遺伝子は１つ以上の染色体座位にタンデムで挿入され得る。タンデムに挿入されている遺伝子コピーは、マルチサブユニット複合体の生産のための培養中に安定したコピー数で保持されることが好ましい。例えば、下記の実施例では、遺伝子コピー数は、３〜４つのタンデムに挿入されている軽鎖抗体遺伝子と重鎖抗体遺伝子のコピーを含有するピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）株では一般に安定であった。
異種性タンパク質サブユニットをコードする遺伝子のうちの１つ以上の遺伝子が宿主細胞の１つ以上の染色体座位に組み込まれることが好ましい。遺伝子間配列、プロモーター配列、コード配列、終結配列、調節性配列などを含む、あらゆる適切な染色体座位が挿入のために利用され得る。ピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）において使用することができる例となる染色体座位には、ＰｐＵＲＡ５、ＯＣＨ１、ＡＯＸ１、ＨＩＳ４、およびＧＡＰが含まれる。コード遺伝子は、標的部位に組み込まれるよりもむしろ、１つ以上の無作為の染色体座位に組み込まれることもできる。好ましい実施形態では、染色体座位はｐＧＡＰ遺伝子座、３’ＡＯＸ ＴＴ遺伝子座、およびＨＩＳ４ ＴＴ遺伝子座からなる群より選択される。その他の例示的な実施形態では、異種性タンパク質サブユニットをコードする遺伝子は、１つ以上の染色体外因子、例えば、１つ以上のプラスミドまたは人工染色体に含有され得る。
例示的な実施形態では、マルチサブユニットタンパク質は、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれより多くの非同一性サブユニットを含み得る。さらに、各サブユニットは、各マルチサブユニットタンパク質において１つ以上存在し得る。例えば、マルチサブユニットタンパク質は、２本の非同一性軽鎖と２本の非同一性重鎖を含む二特異性抗体などの多重特異性抗体であり得る。
サブユニットはモノシストロン性遺伝子、ポリシストロン性遺伝子、またはそれらの任意の組合せから発現され得る。各ポリシストロン性遺伝子は複数コピーの同一のサブユニ
ットを含み得る、または１つ以上のコピーのそれぞれ異なるサブユニットを含み得る。
ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）の操作のために用いられ得る例となる方法（培養、形質転換および接合の方法を含む）は、米国特許出願公開第２００８０００３６４３号、米国特許出願公開第２００７０２９８５００号、および米国特許出願公開第２００６０２７００４５号を含む出願公開、ならびに Higgins, D. R., and Cregg, J. M., Eds. 1998. Pichia Protocols. Methods in Molecular Biology. Humana Press, Totowa, N.J., およびCregg, J. M., Ed., 2007, Pichia Protocols (2nd edition),
Methods in Molecular Biology. Humana Press, Totowa, N.J. に開示される。それらのそれぞれは全体の参照により組み込まれる。
利用され得る例となる発現カセットは、グリセルアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子（ＧＡＰ遺伝子）プロモーター、融合されている分泌シグナルをコードする配列、その後の発現される遺伝子の配列、その後のピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）アルコールオキシダーゼＩ遺伝子（ＡＯＸ１）に由来するピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）転写終結シグナルをコードする配列から構成される。ゼオシン耐性マーカー遺伝子は、より高いレベルのゼオシンに対して耐性である形質転換体の選択により、株に複数のコピーの挿入されている発現ベクターを含有する株を濃縮するための手段を提供し得る。同様に、Ｇ４１８耐性マーカー遺伝子またはカナマイシン耐性マーカー遺伝子は、より高いレベルのジェネティシンまたはカナマイシンに対して耐性である形質転換体の選択により、株に複数のコピーの挿入されている発現ベクターを含有する株を濃縮するための手段を提供するために使用され得る。
利用され得る宿主株には、栄養要求性ピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）または他のピキア株、例えば、ｍｅｔ１、ｌｙｓ３、ｕｒａ３およびａｄｅ１もしくは他の栄養要求性関連遺伝子に変異を有する株が含まれる。好ましい変異はどのような明らかな頻度でも復帰変異体を生ずることができず、好ましくは部分欠失変異体、またはさらにより好ましくは完全欠失変異体である。原栄養性の二倍体株または四倍体株が、栄養要求性株の相補性セットを接合させることにより作製されることが好ましい。
一倍体ピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）株の形質転換とピキア・パストリスの有性生殖環の遺伝子操作は、上記のPichia Protocols (1998, 2007) に記載されているように実行され得る。
形質転換の前に、各発現ベクターは、宿主細胞内の標的遺伝子座へのベクターの挿入を導くために、標的ゲノム遺伝子座（例えば、ＧＡＰプロモーター配列）に相同な領域内の制限酵素切断により線状化され得る。各ベクターの試料は次に電気穿孔法または他の方法により所望の株の培養物に個々に形質転換され得、そして、成功した形質転換体が選択マーカー、例えば、抗生物質耐性または栄養要求性の相補を用いて選択され得る。分離株は採取され、選択条件下で単一コロニーを得るために画線され、次に、マルチサブユニット複合体（例えば、所望の抗体）のサブユニットをコードする遺伝子のコピー数を確認するために、各株から抽出されたゲノムＤＮＡのサザンブロット分析またはＰＣＲ分析により試験され得る。予想されるサブユニット遺伝子産物の発現は、例えば、ＦＡＣＳ、ウエスタンブロット、コロニーリフトおよびイムノブロット、および他の当技術分野において公知の方法により確認されてもよい。一倍体分離株は、追加の異種性遺伝子、例えば、異なる遺伝子座に組み込まれる同一のサブユニットの追加のコピーや異なるサブユニットのコピーを導入するために任意で何回も形質転換される。その後、その一倍体株が接合させられ、マルチタンパク質複合体を合成することができる二倍体株（またはより高い倍数性の株）が作製される。それぞれの予想されるサブユニット遺伝子の存在は、サザンブロッティング、ＰＣＲ、および他の検出当技術分野において公知の方法により確認され得る。そ
の所望のマルチタンパク質複合体が抗体である場合、その発現はコロニーリフト法／イムノブロット法 (Wung et al. Biotechniques 21 808-812 (1996) やＦＡＣＳにより確認されることもできる。
この形質転換プロトコルは、異種性遺伝子を第２の遺伝子座に標的挿入するために任意で繰り返される。その異種性遺伝子は第１の遺伝子座に標的挿入されたものと同一の遺伝子または異なる遺伝子であり得る。第２の遺伝子座に組み込まれるコンストラクトが第１の遺伝子座によりコードされる配列と同一、または非常に類似しているタンパク質をコードするとき、その配列は第１の遺伝子座への望まない挿入の可能性を低下させるために変更され得る。例えば、第２の遺伝子座に組み込まれる配列は、第１の遺伝子座に挿入されている配列と比べたプロモーター配列の違い、終結配列の違い、コドン使用頻度の違いや他の許容できる配列の違いを有し得る。
ピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）一倍体株を接合させるために、かけ合わせられる各株は接合用プレートにパッチ状に播種され得る。例えば、好都合なことに、接合させられる各株をその増殖に適切なプレートに画線することにより複数の接合を同時に行うことができ、そして、接合の相手は２枚目のプレート（好ましくは、そのプレートはＹＰＤなどの富栄養培地である）に画線され得る。通常、３０℃で１日または２日後にその２枚のプレートの細胞を接合用プレートに交差する線のパターンで蒔いて複製を作り、各対の共に蒔かれている株での斜交平衡模様が生じ、一対の元の画線の交差部分で接合する機会を得ることができる。その後、接合用プレートを（例えば、３０℃で）保温して株間の接合の開始を促進することができる。約２日後、接合用プレート上の細胞を所望の二倍体株に対して選択的な培地（例えば、接合させられる株が相補的な栄養要求性を有する場合、ドロップアウト培地プレートまたは最少培地プレートを使用することができる）上に画線、パッチ状播種、またはレプリカプレーティングすることができる。これらのプレートを適切な期間（例えば、約３日）（例えば、３０℃で）保温して所望の二倍体株の選択的増殖を可能にすることができる。生じるコロニーは単一コロニーを得るために採取および画線され、各二倍体株を単離および精製することができる。
本発明の方法で使用される発現ベクターは、形質転換された酵母株を特定するための選択可能栄養要求性マーカーまたは薬剤マーカーを含む、酵母特異的配列をさらに含み得る。薬剤マーカーは、例えば、薬剤の濃度を上昇させてある集団の細胞を培養し、それにより上昇したレベルのその耐性遺伝子を発現する形質転換体を選択することによって酵母宿主細胞内のベクターのコピー数を増幅するためにさらに使用され得る。
例示的な実施形態では、異種性タンパク質サブユニットをコードする遺伝子のうちの１つ以上の遺伝子は、誘導性プロモーターに結合されている。適切な例となるプロモーターにはアルコールオキシダーゼ１遺伝子プロモーター、ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子（ＦＬＤ；米国特許出願公開第２００７／０２９８５００号を参照のこと）、および当技術分野において公知の他の誘導性プロモーターが含まれる。アルコールオキシダーゼ１遺伝子プロモーターは、グルコース、グリセロールまたはエタノールなどのたいていの一般的な炭素源で酵母が増殖している間はしっかりと抑制されているが、メタノールで増殖している間は大いに誘導される (Tschopp et al., 1987; Stroman, D. W.らの米国特許第４，８５５，２３１号）。外来タンパク質の生産のため、株は最初に抑制的炭素源で増殖されてバイオマスを生成し、次に唯一（または主要な）炭素およびエネルギー源としてのメタノールに移し換えられて外来遺伝子の発現を誘導することができる。この調節系の１つの利点は、発現産物が細胞にとって有毒である外来遺伝子で形質転換されているピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）株は、抑制性条件下で増殖することにより維持され得ることである。
別の例示的な実施形態では、異種性遺伝子のうちの１つ以上の遺伝子を調節化プロモーターに結合することができ、その発現レベルは適切な条件下で上方制御され得る。例となる調節化プロモーターにはＣＵＰ１プロモーター（培地中の銅のレベルにより誘導される）、テトラサイクリン誘導性プロモーター、チアミン誘導性プロモーター、ＡＯＸ１プロモーターおよびＦＬＤ１プロモーターが含まれる。
本開示の大半が抗体の生産について説明しているが、本明細書に記載される方法は他のマルチサブユニット複合体にも容易に適用される。理論により限定される意図はないが、マルチサブユニット複合体の収量と純度は、サブユニットの濃度と化学量論組成によって大いに影響を受ける可能性が有り、サブユニットの濃度と化学量論組成は次に各サブユニットの生産に責任がある遺伝子の発現レベルによって影響を受けると考えられている。本明細書において開示される方法は、２つ以上の異なるサブユニットを含むあらゆる組換えマルチサブユニット複合体の収量や純度を改善するために容易に利用され得る。さらに、本方法は、マルチタンパク質複合体の生産に限定されず、テロメラーゼ、ｈｎＲＮＰ、リボソーム、ｓｎＲＮＰ、シグナル認識粒子、原核生物と真核生物のＲＮａｓｅＰ複合体、および複数の別個のタンパク質サブユニットやＲＮＡサブユニットを含む他の任意の複合体を含むリボヌクレオタンパク質（ＲＮＰ）複合体に関する使用に容易に適応されることもできる。マルチサブユニット複合体を発現する宿主細胞は、当技術分野において公知の方法によって作製され得る。例えば、様々な組合せの遺伝子コピー数を含有する一団の二倍体酵母細胞または四倍体酵母細胞は、異なるコピー数の個々のサブユニット遺伝子（そのコピー数は接合の前に知られていることが好ましい）を含有する細胞を接合することにより作製され得る。
定義
本発明は、記載される特定の方法論、プロトコル、細胞株、動物の種または属、および試薬に限定されることは無く、したがって変更可能であると理解されるものとする。本明細書において使用される用語は特定の実施形態の記述のみを目的としており、添付されている特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することはその用語に意図されていないことも理解されるものとする。
本明細書において使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、別途文脈が明確に指示しない限り、複数形の指示物を包含する。したがって、例えば、「細胞（ａ ｃｅｌｌ）」への言及はそのような複数の細胞を包含し、「タンパク質（ｔｈｅ
ｐｒｏｔｅｉｎ）」への言及は１つ以上のタンパク質および当業者に知られるその同等物を包含する、など。本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、別途明確に指示されない限り、本発明が属する分野の当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有する。
ボーラス添加：本開示において、「ボーラス添加」は、（例えば、培地中で）培養細胞と接触している物質（エタノールなど）の濃度の急速な変化を一般的に指す。例えば、その物質は培養細胞に１回の添加で加えられ得る、１回より多い一連の添加で加えられ得る、および／またはある期間にわたって（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、９０、または１２０分にわたって）注入され得る。その物質を、培地を部分的または全体的に換えることによって、例えば、（遠心分離、濾過、静置、または他の方法を用いて）細胞を濃縮し、培地の一部もしくは全部を取り除き、そして、その物質を添加することによって、またはその物質を含有する培地にその細胞を加えることによって添加することもできる。その物質は担体（例えば、培地、水、生理食塩水、など）と混合され得る。例えば、エタノールのボーラス添加は、純粋エタノールまたは濃縮エタノール（例えば、１００％、９５％、７０％、５０％、６０％、４０％、３０％、２０％、など）の培地への所望の濃度を作り出すのに十分な量
での添加を含み得る。別の例として、細胞はエタノールを含有する培地に、例えば、エタノールを含有する培地に細胞を含有する接種原を添加することにより加えられ得る。
ボーラス濃度：本開示において、「ボーラス濃度」は、物質（例えば、エタノール）のボーラス添加により生じる濃度を一般的に指す。
接合可能な酵母の種：本発明では、これは培養で増殖させることができるあらゆる二倍体酵母または四倍体酵母を広く包含するように意図されている。酵母のそのような種は一倍体、二倍体、または他の倍数体の形態で存在し得る。所与の倍数性を有する細胞は、適切な条件下では、その形態で無限の世代にわたり増殖することができる。二倍体細胞は胞子形成して一倍体細胞を形成することもできる。続発的な接合により、二倍体株のさらなる接合または融合を介して四倍体株が生じ得る。本発明は、一倍体酵母の使用、ならびに、例えば、接合または融合（例えば、スフェロプラストの融合）により生じた二倍体酵母細胞または他の倍数体酵母細胞の使用を企図する。
本発明の１つの実施形態では、接合可能な酵母はサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ）科のメンバーであり、それにはアルキオジマ属（Ａｒｘｉｏｚｙｍａ）、アスコボトリオジマ属（Ａｓｃｏｂｏｔｒｙｏｚｙｍａ）、キテロミセス属（Ｃｉｔｅｒｏｍｙｃｅｓ）、デバリオミセス属（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）、デッケラ属（Ｄｅｋｋｅｒａ）、エレモテシウム属（Ｅｒｅｍｏｔｈｅｃｉｕｍ）、イッサチェンキア属（Ｉｓｓａｔｃｈｅｎｋｉａ）、カザフスタニア属（Ｋａｚａｃｈｓｔａｎｉａ）、クルイヴェロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、コダマエア属（Ｋｏｄａｍａｅａ）、ロデロミセス属（Ｌｏｄｄｅｒｏｍｙｃｅｓ）、パキソレン属（Ｐａｃｈｙｓｏｌｅｎ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、サツルニスポラ属（Ｓａｔｕｒｎｉｓｐｏｒａ）、テトラピシスポラ属（Ｔｅｔｒａｐｉｓｉｓｐｏｒａ）、トルラスポラ属（Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ）、ウィリオプシス属（Ｗｉｌｌｉｏｐｓｉｓ）、およびジゴサッカロミセス属（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）が含まれる。本発明において有用である可能性がある他の種類の酵母にはヤロウィア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）、ロドスポリジウム属（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ハンセヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、フィロバシウム属（Ｆｉｌｏｂａｓｉｕｍ）、スポリジオボラス属（Ｓｐｏｒｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）、ブレラ属（Ｂｕｌｌｅｒａ）、リューコスポリジウム属（Ｌｅｕｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、およびフィロバシデラ属（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｅｌｌａ）が含まれる。
本発明の好ましい実施形態では、接合可能な酵母はピキア属のメンバーであり、または別のメチロトローフである。本発明のさらに好ましい実施形態では、ピキア属の接合可能な酵母は次の種のうちの１つである：ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、およびハンセヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）（ピキア・アングスタ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ））。本発明の特に好ましい実施形態では、ピキア属の接合可能な酵母はピキア・パストリス種である。
一倍体酵母細胞：細胞の通常のゲノム（染色体）の定量を構成する各遺伝子を１コピー有する細胞。
倍数体酵母細胞：細胞の通常のゲノム（染色体）の定量を構成する各遺伝子を１コピーよりも多く有する細胞。
二倍体酵母細胞：細胞の通常のゲノムの定量を構成する基本的に全遺伝子を２コピー（アリル）有する細胞であって、２つの一倍体細胞の融合（接合）過程により通常形成され
る細胞。
四倍体酵母細胞：細胞の通常のゲノムの定量を構成する基本的に全遺伝子を４コピー（アリル）有する細胞であって、２つの二倍体細胞の融合（接合）過程により通常形成される細胞。四倍体は、２つ、３つ、４つ、またはそれより多い異なる発現カセットを担持し得る。そのような四倍体を、ヘテロタリックでホモ接合性のａ／ａ二倍体とα／α二倍体を選択的に接合させることにより出芽酵母（Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）において得ることができ、栄養要求性二倍体を得るための一倍体の続発的な接合によりピキア属において得ることができる。例えば、［ｍｅｔ ｈｉｓ］一倍体を［ａｄｅ ｈｉｓ］一倍体と接合させて二倍体［ｈｉｓ］を得ることができ、そして［ｍｅｔ ａｒｇ］一倍体を［ａｄｅ ａｒｇ］一倍体と接合させて二倍体［ａｒｇ］を得ることができ、次に二倍体［ｈｉｓ］を二倍体［ａｒｇ］と接合させて四倍体の原栄養株を得ることができる。当業者は、二倍体細胞の利点と利用についての言及は四倍体細胞にも当てはまり得ることを理解する。
酵母の接合：２つの酵母細胞が融合して１つの酵母細胞を形成する過程。融合した細胞は一倍体細胞またはそれより高い倍数性を有する細胞であり得る（例えば、２つの二倍体細胞の接合が１つの四倍体細胞を産生する）。
減数分裂：二倍体酵母細胞が還元分裂を経て４つの一倍体胞子を形成する過程。各胞子は、その後出芽して一倍体の栄養増殖細胞株を形成し得る。
選択マーカー：選択マーカーは遺伝子または遺伝子断片であって、例えば、形質転換事象を介してその遺伝子を受容している細胞にある成長表現型（物理的な成長特性）を与える遺伝子または遺伝子断片である。選択マーカーにより細胞は、その選択マーカー遺伝子を受容していない細胞が増殖することができない条件にある選択的増殖培地で生存および増殖することができる。選択マーカー遺伝子は一般にいくつかの種類に分類され、細胞に抗生物質または他の薬品への耐性、２つの温度感受性（「ｔｓ」）変異体が交雑されるとき、またはｔｓ変異体が形質転換されるときに温度への耐性を付与する遺伝子のようなポジティブ選択マーカー遺伝子、生合成遺伝子であって、その遺伝子を持たない全ての細胞に必要とされる特定の栄養素を欠く培地で増殖する能力を細胞に付与する生合成遺伝子、または変異型生合成遺伝子であって、野生型遺伝子を持たない細胞に増殖不能性を付与する変異型生合成遺伝子のようなネガティブ選択マーカー遺伝子、などを包含する。適切なマーカーにはＺＥＯ、ＮＥＯ（Ｇ４１８）、ＬＹＳ３、ＭＥＴ１、ＭＥＴ３ａ、ＡＤＥ１、ＡＤＥ３、ＵＲＡ３などが含まれるが、これらに限定されない。
挿入物：生物の染色体に共有結合している遺伝子成分（典型的には異種性の遺伝子成分）。
タンデム挿入物：染色体中の近接する位置に挿入されている２コピー以上の遺伝子成分。その２つ以上のコピーは、例えば、転写される遺伝子について必ずしも方向性を持たず、あるコピーはワトソン鎖より転写され、他のコピーはクリック鎖より転写され得る。
宿主細胞：本開示に関連して、宿主細胞という用語は異種性遺伝子を含有する細胞（例えば、ピキア細胞などの真核細胞）を指す。例えば、その異種性遺伝子は、所望のマルチサブユニット複合体のサブユニットの発現、タンパク質の折り畳みに関与する遺伝子（例えば、シャペロン）、発現に関与する遺伝子、もしくは分泌に関与する遺伝子の発現、および／または別の所望の遺伝子の発現をもたらし得る。異種性遺伝子は真核細胞のゲノムに挿入され得る、または、プラスミドもしくは人工染色体などの染色体外エレメントに含有され得る。
発現ベクター：これらのＤＮＡベクターは、標的宿主細胞内での外来タンパク質の発現のための操作を容易にする配列を含有する。都合がよいことに、配列の操作および形質転換用のＤＮＡの産生は、細菌性宿主、例えば、大腸菌でまず実行され、たいてい、ベクターは、細菌性複製起点および適切な細菌用選択マーカーを包含する、そのような操作を容易にする配列を含む。選択マーカーは、形質転換された宿主細胞の選択培地での生存または増殖に必要なタンパク質をコードする。選択遺伝子を含有するベクターで形質転換されていない宿主細胞はその培地中で生存しない。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質または他の毒素に対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）栄養要求性欠損を相補するタンパク質、または（ｃ）複合培地から入手できない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。酵母の形質転換のためのベクターおよび方法の例は、例えば、Burke, D., Dawson, D., & Stearns, T. (2000)に記載される。 Methods in Yeast genetics: a Cold Spring Harbor Laboratory course manual. Plainview, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明の方法において使用される発現ベクターは、形質転換された酵母株を特定するための選択可能栄養要求性マーカーまたは選択可能薬品マーカーを含む、酵母特異的配列をさらに包含し得る。薬品マーカーは、酵母宿主細胞内でのベクターのコピー数の増幅について選択するためにさらに使用され得る。
目的のポリペプチドコード配列は、通常、酵母細胞でのポリペプチドの発現のための転写調節配列および翻訳調節配列に機能するように結合されている。これらのベクター成分には、次のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない：エンハンサー成分、プロモーター配列および転写終結配列。ポリペプチドの分泌のための配列、例えば、シグナル配列などを含むこともできる。発現ベクターは多くの場合、酵母ゲノムに組み込まれるので、酵母の複製起点は任意である。
任意ではあるが、本発明の１つの実施形態では、マルチサブユニット複合体の１つ以上のサブユニットは、発現したポリペプチドの培地への分泌をもたらす分泌配列に機能するように結合しており、または融合しており、それは異種性マルチサブユニット複合体の収集と精製を容易にすることができる。さらにより好ましくは、分泌配列は、例えば、好ましいコドンを選択したり、コドンの選択によりＡＴのパーセンテージを変化させたりして、宿主細胞（例えば、酵母二倍体細胞）からのポリペプチドの最適化された分泌をもたらす。分泌効率や安定性は分泌配列の選択によって影響され得ること、および最適な分泌配列は様々なタンパク質の間で異なり得る（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、 Koganesawa et al., Protein Eng. 2001 Sep;14(9):705-10 を参照のこと）
ことが当技術分野において知られている。多くの適切である可能性がある分泌シグナルが当技術分野において知られており、そして、それらは、特定の異種性マルチサブユニット複合体の収率や純度に対するそれらの効果について容易に試験され得る。酵母および他の種の分泌型タンパク質に存在する分泌配列、ならびに遺伝子操作された分泌配列を含む、あらゆる分泌配列を使用する可能性が有り得る。利用され得る分泌配列の例には、ニワトリリゾチーム（ＣＬＹ）シグナルペプチド（ＭＲＳＬＬＩＬＶＬＣＦＬＰＬＡＡＬＧ（配列番号４１４））、ＣＬＹ‐Ｌ８（ＭＲＬＬＬＬＬＬＬＬＰＬＡＡＬＧ（配列番号４１５））、出芽酵母インベルターゼ（ＳＵＣ２）シグナルペプチド（ＭＬＬＱＡＦＬＦＬＬＡＧＦＡＡＫＩＳＡ（配列番号４１６））、ＭＦ‐α（プレプロ）（ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡ−ＡＰＶＮＴＴＴＥ−ＥＧＶＳＬＥＫＲ（配列番号４１７））、ＭＦ‐α（プレ）‐ａｐｖ（ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡ−ＡＰＶ（配列番号４１８））、ＭＦ‐α（プレ）‐ａｐｖ‐ＳＬＥＫＲ（ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡ−ＡＰＶＳＬＥＫＲ（配列番号４１９））、ＭＦ‐α（プレプロ）‐（ＥＡ）３（ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡ−ＡＰＶＮＴＴＴＥ−ＥＧＶＳＬＥＫＲ−ＥＡ
ＥＡＥＡ（配列番号４２０））、αＦシグナルペプチド（ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡ−ＡＰＶＮＴＴＴＥ−ＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＳＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥ−ＥＧＶＳＬＥＫＲ（配列番号４２１））、ＫＩＬＭ１シグナルペプチド（ＭＴＫＰＴＱＶＬＶＲＳＶＳＩＬＦＦＩＴＬＬＨＬＶＶＡＬＮＤＶＡＧＰＡＥＴＡＰＶＳＬＬＰＲ（配列番号４２２））、抑制型酸性ホスファターゼ（ＰＨＯ１）シグナルペプチド（ＭＦＳＰＩＬＳＬＥＩＩＬＡＬＡＴＬＱＳＶＦＡ（配列番号４２３））、アスペルギルス・ニガー（Ａ． ｎｉｇｅｒ）ＧＯＸシグナルペプチド（ＭＱＴＬＬＶＳＳＬＶＶＳＬＡＡＡＬＰＨＹＩＲ（配列番号４２４））、シュワンニオミセス・オクシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）グルコアミラーゼ遺伝子（ＧＡＭ１）シグナルペプチド（ＭＩＦＬＫＬＩＫＳＩＶＩＧＬＧＬＶＳＡＩＱＡ（配列番号４２５））、プロ配列を有するヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）シグナルペプチド（ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＲＧＶＦＲＲ（配列番号４２６））、プロ配列を有しないヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）シグナルペプチド（ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ（配列番号４２７））、ＩＳＮシグナルペプチド（ＭＡＬＷＭＲＬＬＰＬＬＡＬＬＡＬＷＧＰＤＰＡＡＡ（配列番号４２８））、ＩＦＮシグナルペプチド（ＭＫＹＴＳＹＩＬＡＦＱＬＣＩＶＬＧＳＬＧＣＤＬＰ（配列番号４２９））、ＨＧＨシグナルペプチド（ＭＡＡＤＳＱＴＰＷＬＬＴＦＳＬＬＣＬＬＷＰＱＥＰＧＡ（配列番号４３０））、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）（ＭＫＫＮＲＭＭＭＭＩＷＳＶＧＶＶＷＭＬＬＬＶＧＧＳＹＧ（配列番号４３１））、カイコリゾチーム（ＭＱＫＬＩＩＦＡＬＶＶＬＣＶＧＳＥＡ（配列番号４３２））、ヒトリゾチーム（ＬＹＺ１）（ＭＫＡＬＩＶＬＧＬＶＬＬＳＶＴＶＱＧ（配列番号４３３））、１型アクチビン受容体（ＭＶＤＧＶＭＩＬＰＶＬＩＭＩＡＬＰＳＰＳ（配列番号４３４））、アクチビンＩＩ型受容体（ＭＧＡＡＡＫＬＡＦＡＶＦＬＩＳＣＳＳＧ（配列番号４３５））、ピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）免疫グロブリン結合タンパク質（ＰｐＢｉＰ）（ＭＬＳＬＫＰＳＷＬＴＬＡＡＬＭＹＡＭＬＬＶＶＶＰＦＡＫＰＶＲＡ（配列番号４３６））、およびヒト抗体３Ｄ６軽鎖リーダー（ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＫＣ（配列番号４３７））が挙げられる。 Hashimoto et al., Protein Engineering vol. 11
no. 2 pp.75-77, 1998、 Oka et al., Biosci Biotechnol Biochem. 1999 Nov; 63(11):1977-83、 Gellissen et al., FEMS Yeast Research 5 (2005) 1079-1096、 Ma et al., Hepatology. 2005 Dec;42(6):1355-63、 Raemaekers et al., Eur J Biochem. 1999 Oct 1;265(1):394-403、 Koganesawa et al., Protein Eng. (2001) 14 (9): 705-710、 Daly et al., Protein Expr Purif. 2006 Apr;46(2):456-67 、 Damasceno et al., Appl Microbiol Biotechnol (2007) 74:381-389、 および Felgenhauer et al., Nucleic Acids Res. 1990 Aug 25;18(16):4927 を参照のこと。それらの文献のそれぞれは、参照によ
りその全体が本明細書に組み込まれる）。マルチサブユニット複合体を、分泌シグナルに機能するように結合または融合せずに培地に分泌することもできる。例えば、いくつかの異種性ポリペプチドは、分泌シグナルに機能するように結合または融合せずともピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）で発現すると培地に分泌されることが示されている。さらに、マルチサブユニット複合体は、当技術分野において公知の方法を用いて、（例えば、その複合体がほとんど分泌されない場合に、好ましくあり得る）宿主細胞から精製され得る。
所望のマルチサブユニット複合体を含む培地または細胞は培養物から回収され得る。任意で、分泌型タンパク質が精製され得る。例えば、所望のマルチサブユニット複合体を含む細胞は、機械的方法、化学的方法、酵素的方法や浸透圧的方法（例えば、液体窒素を用いる凍結、ホモジェナイザーの使用、スフェロプラスト化、超音波処理、ガラスビーズ存在下での撹拌、界面活性剤の使用など）を用いて溶解され得る。所望のマルチサブユニット複合体は、当技術分野において公知の方法を用いて濃縮、濾過、透析などされ得る。所望のマルチサブユニット複合体は、例えば、その分子質量（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー）、等電点（例えば、等電点電気泳動）、電気泳動移動度（例えば、ゲル電気
泳動）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）、荷電（例えば、イオン交換クロマトグラフィー）、親和性（例えば、抗体の場合、プロテインＡ、プロテインＧや所望の抗体が結合するエピトープへの結合）、および／またはグリコシル化状態（例えば、レクチン結合親和性により検出される）に基づいて精製され得る。所望のレベルの純度を得るために複数の精製ステップを実行することができる。例示的な実施形態では、所望のマルチサブユニット複合体は免疫グロブリン定常ドメインを含むことができ、そして、それは、プロテインＡ親和性またはプロテインＧ親和性、サイズ排除クロマトグラフィー、および（グリコシル化形態を除去するための）レクチンへの結合の欠如を用いて精製され得る。精製の際にタンパク質分解を抑制するために、任意で、フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）などのＡプロテアーゼ阻害剤を添加してもよい。
核酸は、別の核酸配列と機能的な関係に配置されるとき、「機能するように結合」されている。例えば、シグナル配列のＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレプロテインとして発現する場合、そのポリペプチドのＤＮＡに機能するように結合している。プロモーターまたはエンハンサーは、それがコード配列の転写に影響を及ぼす場合、その配列に機能するように結合している。一般に、「機能するように結合している」は、結合されているＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーの場合は、連続的であり、読み枠に合っていることを意味する。しかしながら、エンハンサーは連続的である必要は無い。結合は、都合がよい制限部位でのライゲーションにより、あるいは当業者によく知られているＰＣＲ／組換え方法（Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カールスバード、カリフォルニア州）により達成され得る。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを従来の実施に従って使用することができる。所望の核酸（機能するように結合した配列を含む核酸を包含する）を化学合成によって作製することもできる。
プロモーターは、それらが機能するように結合している特定の核酸配列の転写および翻訳を制御する、構造遺伝子の開始コドンの（一般に約１００〜１０００ｂｐ）上流（５’側）に位置する非翻訳配列である。そのようなプロモーターはいくつかのクラス、すなわち、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、および（抑制因子の不在に応答して転写レベルを上昇させる）抑制性プロモーターに分類される。誘導性プロモーターは、培養条件のある変化、例えば、栄養素の存在もしくは不在、または温度変化に応答してそれらのプロモーターの制御下でＤＮＡからの発現レベルの上昇を開始することができる。
酵母性プロモーター断片は、酵母ゲノム内の同一の部位への発現ベクターの相同組換えまたは挿入のための部位として機能することもできる。あるいは、選択マーカーが相同組換え部位として使用される。ピキア属の形質転換は、Cregg et al. (1985) Mol. Cell. Biol. 5:3376-3385 に記載されており、その文献は参照によりその全体が本明細書に組み
込まれる。
ピキア属に由来する適切なプロモーターの例にはＣＵＰ１（培地内の銅のレベルによって誘導される）、テトラサイクリン誘導性プロモーター、チアミン誘導性プロモーター、ＡＯＸ１プロモーター (Cregg et al. (1989) Mol. Cell. Biol. 9:1316-1323); ＩＣＬ
１プロモーター (Menendez et al. (2003) Yeast 20(13):1097-108); グリセルアルデヒ
ド‐３‐リン酸デヒドロゲナーゼプロモーター (GAP) (Waterham et al. (1997) Gene 186(1):37-44); およびＦＬＤ１プロモーター (Shen et al. (1998) Gene 216(1):93-102) が挙げられる。ＧＡＰプロモーターは強力な構成的プロモーターであり、ＣＵＰ１プロモーター、ＡＯＸプロモーターおよびＦＬＤ１プロモーターは誘導性である。それぞれの前述の参照文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
他の酵母性プロモーターには、酵母に由来するＡＤＨ１プロモーター、アルコールデヒ
ドロゲナーゼＩＩプロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＰＨＯ３プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、Ｐｙｋプロモーター、およびキメラプロモーターが含まれる。さらに、哺乳類性プロモーター、昆虫性プロモーター、植物性プロモーター、爬虫類性プロモーター、両生類性プロモーター、ウイルス性プロモーター、鳥類性プロモーターなど、非酵母性プロモーターを本発明において使用することができる。最も典型的には、プロモーターは哺乳類性プロモーター（発現遺伝子にとって内在的である可能性が高い）を含み、または酵母系での効率的な転写をもたらす酵母性プロモーターもしくはウイルス性プロモーターを含むことが最も典型的である。
目的のポリペプチドは、組換え技術により直接的に作製され得るだけでなく、異種性ポリペプチド、例えば、成熟型タンパク質またはポリペプチドのＮ末端に特定の切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチドとの融合ポリペプチドとしても作製され得る。一般に、シグナル配列はベクターの要素であり得、または、それはベクターに挿入されるポリペプチドコード配列の一部であり得る。好適に選択される異種性シグナル配列は、宿主細胞内で利用可能である標準的な経路のうちの１つによって認識および処理されるシグナル配列である。出芽酵母のα因子プレプロシグナルは、様々な組換えタンパク質のピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）からの分泌に有効であることが証明されている。他の酵母シグナル配列には、α接合因子シグナル配列、インベルターゼシグナル配列、および他の分泌型酵母ポリペプチドに由来するシグナル配列が含まれる。さらに、これらのシグナルペプチド配列は操作されて二倍体酵母発現系での分泌の増強がもたらされる。他の興味深い分泌シグナルには哺乳類性シグナル配列も含まれ、それは分泌されているタンパク質にとって異種性であり得る、または、分泌されているタンパク質の固有の配列であり得る。シグナル配列にはプレペプチド配列が含まれ、いくつかの例ではプロペプチド配列が含まれ得る。多くのそのようなシグナル配列が当技術分野において公知であり、それには免疫グロブリン鎖に見出されるシグナル配列、例えば、Ｋ２８プレプロ毒素配列、ＰＨＡ‐Ｅ、ＦＡＣＥ、ヒトＭＣＰ‐１、ヒト血清アルブミンシグナル配列、ヒトＩｇ重鎖、ヒトＩｇ軽鎖などに見出されるシグナル配列が含まれる。例えば、Hashimoto et. al. Protein Eng 11(2) 75 (1998)、および Kobayashi et. al. Therapeutic Apheresis 2(4) 257 (1998) を参照のこと。それらの文献のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
転写は転写活性化配列をベクターに挿入することにより上昇し得る。これらの転写活性化配列は、ｃｉｓ作用性ＤＮＡエレメントであり、通常１０ｂｐから３００ｂｐまでであり、プロモーターに作用してその転写を上昇させる。転写エンハンサーはどちらかと言えば方向および位置に非依存的であり、転写単位の５’側および３’側、イントロン内ならびにコード配列自体の内側に見出されている。エンハンサーはコード配列の５’側および３’側の位置で発現ベクターに継ぎ足され得るが、好ましくはプロモーターの５’側部位に位置する。
真核宿主細胞内で使用される発現ベクターは、転写の終結およびｍＲＮＡの安定化に必要な配列を含有することもできる。そのような配列は通常、翻訳終止コドンの３’側、真核生物性またはウイルス性のＤＮＡまたはｃＤＮＡの非翻訳領域から入手可能である。これらの領域は、ｍＲＮＡの非翻訳部分内のポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。
上記の成分のうちの１つ以上を含有する適切なベクターの構築は標準的なライゲーション技術またはＰＣＲ／組換え方法を用いる。所望のプラスミドを作製するのに望ましい形式で、または組換え方法により、単離されたプラスミドまたはＤＮＡ断片を切断し、目的に合わせ、および再結合する。構築されたプラスミド内の配列が正しいことを確認する分析のため、ライゲーション混合物を使用して宿主細胞を形質転換し、成功した形質転換体
を、適切な場合では、抗生物質耐性（例えば、アンピシリンまたはゼオシンへの耐性）により選択する。その形質転換体に由来するプラスミドを調製し、制限エンドヌクレアーゼ消化により分析したり、塩基配列決定したりする。
断片の制限消化およびライゲーションの代わりとして、ａｔｔ部位および組換え酵素に基づく組換え方法を用いてＤＮＡ配列をベクターに挿入することができる。そのような方法は、例えば、 Landy (1989) Ann. Rev. Biochem. 58:913-949 によって記載されており、当業者に知られている。そのような方法は、ラムダファージと大腸菌がコードする組換えタンパク質の混合物が介在する分子間ＤＮＡ組換えを活用する。組換えは、相互作用するＤＮＡ分子上の特定の付着（ａｔｔ）部位の間で起こる。ａｔｔ部位の説明については、 Weisberg and Landy (1983) Site-Specific Recombination in Phage Lambda, in Lambda II, Weisberg, 編 (Cold Spring Harbor, N.Y.: Cold Spring Harbor Press), pp. 211-250 を参照のこと。組換え後にａｔｔ部位がそれぞれの親ベクターによって供与され
る配列から構成されるハイブリッド配列であるように、その組換え部位に隣接するＤＮＡセグメントが交換される。組換えはあらゆるトポロジーのＤＮＡの間で起こり得る。それぞれの前述の参照文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ａｔｔ部位は、目的の配列を適切なベクターにライゲーションすることにより、特定のプライマーの使用によりａｔｔＢ部位を含有するＰＣＲ産物を作製することにより、ａｔｔ部位を含有する適切なベクターにクローン化されているｃＤＮＡライブラリーを作製するなどにより、目的の配列に導入され得る。
モノシストロン性遺伝子およびポリシストロン性遺伝子。モノシストロン性遺伝子は、単一のタンパク質を翻訳するための遺伝情報を含有するＲＮＡをコードする。ポリシストロン性遺伝子は、１つより多いタンパク質を翻訳するための遺伝情報を含有するＲＮＡをコードする。ポリシストロン性遺伝子にコードされるタンパク質は同一もしくは異なる配列またはそれらの組合せを有し得る。ジシストロン性またはバイシストロン性は、２つのタンパク質をコードするポリシストロン性遺伝子を指す。ポリシストロン性遺伝子は任意で、翻訳のキャップ非依存的開始を促進する１つ以上の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメントを含み、そのエレメントは、ｍＲＮＡ分子の５’末端に結合している５’キャップ構造に独立して下流タンパク質コード領域の翻訳を推進し得る位置に配置され得る。あらゆる既知のＩＲＥＳ配列（例えば、ウイルス起源、真核生物起源、または人工起源の）を使用することができる。例えば、Thompson et al. (2001) PNAS 98:12972-12977 に記載されるように、遺伝子間領域（ＩＧＲ）にあるコオロギ麻痺ウイルスのＩＲＥ
Ｓ配列を使用することができる。任意で、ＩＲＥＳ機能は遺伝的変更、例えば、ｅＩＦ２キナーゼであるＧＣＮ２の恒常的発現を引き起こすことにより、または２つの開始ｔＲＮＡ（ｍｅｔ）遺伝子が破壊されること（同上）を妨害することにより、強力化され得る。
折り畳み構造は、本明細書において使用される場合、ポリペプチドおよびタンパク質の三次元構造を指し、その三次元構造ではアミノ酸残基間の相互作用が構造を安定化させるように作用している。非共有結合性相互作用が構造の決定に重要であるが、通常、目的のタンパク質は２個のシステイン残基により形成される分子内共有結合性ジスルフィド結合や分子間共有結合性ジスルフィド結合を有する。天然のタンパク質およびポリペプチドまたはそれらの誘導体および変異体について、適切な折り畳み構造は、典型的には最適な生物活性を生じる配列であり、都合がよいことに、活性、例えば、リガンド結合活性、酵素活性などのアッセイによりモニターされ得る。
いくつかの例では、例えば、所望の産物が合成由来である場合、生物活性に基づくアッセイはあまり意味がない。そのような分子の適切な折り畳み構造は、物性、エネルギー的考察、モデル化研究などに基づいて決定され得る。
発現宿主は、折り畳みおよびジスルフィド結合形成を増強する１つ以上の酵素、すなわち、フォルダーゼ（ｆｏｌｄａｓｅ）、シャペロニング酵素などをコードする配列の導入によってさらに改変され得る。そのような配列は、当技術分野において公知のベクター、マーカーなどを使用して、酵母宿主細胞において恒常的または誘導的に発現し得る。好ましくは、所望の発現パターンに十分である転写調節エレメントを包む前記の配列は、標的化方法により酵母ゲノムに安定的に組み込まれる。
例えば、真核生物性ＰＤＩは、タンパク質のシステイン参加およびジスルフィド結合異性化の効率的な触媒であるばかりでなく、シャペロン活性も示す。ＰＤＩの共発現により、複数のジスルフィド結合を有する活性型タンパク質の産生を促進することができる。ＢＩＰ（免疫グロブリン重鎖結合タンパク質）、シクロフィリンなどの発現も興味深い。本発明の１つの実施形態では、マルチサブユニット複合体を接合により形成された酵母株から発現することができ、その場合、一倍体の親株のそれぞれは別個の折り畳み酵素を発現する。例えば、１つの株がＢＩＰを発現してよく、他方の株がＰＤＩまたはそれらの組合せを発現してよい。
「所望のタンパク質」または「標的のタンパク質」という用語は互換的に使用され、本明細書に記載される抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその結合部分などの異種性マルチサブユニットタンパク質を一般的に指す。
「抗体」という用語は、エピトープに適合し、それを認識する特定の形状を有するあらゆるポリペプチド鎖含有分子構造を含み、その場合、１つ以上の非共有結合性相互作用がその分子構造とエピトープとの間の複合体を安定化させる。原型の抗体分子は免疫グロブリンであり、あらゆる供給源、例えば、ヒト、げっ歯類動物、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、他の哺乳類動物、ニワトリ、他の鳥類などに由来する全ての種類の免疫グロブリン、すなわち、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤなどが「抗体」と見なされる。本発明に従う出発物質として有用な抗体を生産するために好ましい供給源はウサギである。多数の抗体コード配列が記載されており、当技術分野において周知の方法によって他の抗体を産生することができる。その抗体の例にはキメラ抗体、ヒト抗体、および他の非ヒト哺乳類性抗体、ヒト化抗体、ｓｃＦｖなどの単鎖抗体、キャメルボディ、ナノボディ、ＩｇＮＡＲ（サメ由来の単鎖抗体）、小モジュラー型免疫薬（ｓｍａｌｌ‐ｍｏｄｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ：ＳＭＩＰ）、およびＦａｂｓ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２のような抗体断片などが含まれる。 Streltsov V A, et al., Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype, Protein Sci. 2005 November; 14(11):2901-9. Epub 2005 Sep. 30、 Greenberg A S, et al., A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks, Nature. 1995 Mar. 9; 374(6518):168-73、 Nuttall S D, et al., Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks, and use as a scaffold for the display of protein loop libraries, Mol Immunol. 2001 August; 38(4):313-26、 Hamers-Casterman C, et al., Naturally
occurring andibodies devoid of light chains, Nature. 1993 Jun. 3; 363(6428):446-8; Gill D S, et al., Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds, Curr Opin Biotechnol. 2006 December; 17(6):653-8. Epub 2006 Oct. 19 を参照のこと。それぞれの前述の参照文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
例えば、抗体または抗原結合断片は遺伝子操作により作製され得る。この技法では、他の方法と同様に、所望の抗原または免疫原に対して抗体産生細胞を感作させる。抗体産生細胞から単離されたメッセンジャーＲＮＡを鋳型として使用し、ＰＣＲ増幅を用いてｃＤＮＡを作製する。それぞれ最初の抗原特異性を保持する１つの重鎖遺伝子および１つの軽
鎖遺伝子を含有するベクターからなるライブラリーを、増幅した免疫グロブリンｃＤＮＡの適切な断片を発現ベクターに挿入することにより作製する。重鎖遺伝子ライブラリーを軽鎖遺伝子ライブラリーと組み合わせることによってコンビナトリアルライブラリーを構築する。これにより、（抗体分子のＦａｂ断片または抗原結合断片に類似する）重鎖および軽鎖を共発現するクローンからなるライブラリーが生じる。これらの遺伝子を担持するベクターは宿主細胞に共形質移入される。形質移入された宿主で抗体遺伝子の合成が誘導されると、重鎖タンパク質および軽鎖タンパク質が自己会合して、抗原または免疫原を使用するスクリーニングによって検出され得る活性型抗体を形成する。
目的の抗体コード配列には、天然の配列、ならびに開示される核酸と遺伝コードの縮重のために同一ではない核酸によってコードされるもの、ならびにそれらの変異体が含まれる。変異体ポリペプチドはアミノ酸（ａａ）の置換、付加、または欠失を包含し得る。アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換、または非必須のアミノ酸を除去する置換、例えば、グリコシル化部位を変化させる置換、または機能に必要ではない１つ以上のシステイン残基の置換もしくは欠失により誤った折り畳みを最小化する置換であり得る。変異体は、タンパク質の特定の領域（例えば、機能性ドメイン、触媒性アミノ酸残基など）の上昇した生物活性を保持するように、または有するように設計され得る。変異体は、本明細書において開示されるポリペプチドの断片、特に生物学的に活性を有する断片および／または機能性ドメインに対応する断片も包含する。クローン化された遺伝子のインビトロ突然変異形成の技法は公知である。ポリペプチドのタンパク質分解に対する耐性を向上させるように、または溶解性を最適化するように、またはそれらを治療薬としてより適切にするように従来の分子生物学的技術を用いて改変されているポリペプチドも本対象の発明に含まれる。
キメラ抗体は、１つの種の抗体産生細胞から得られる定常軽鎖領域および重鎖領域を有する可変軽鎖領域および重鎖領域（ＶＬおよびＶＨ）を別の種のものと組み合わせることによって、組換え技術により作製され得る。通常、キメラ抗体は、ヒトドメインを主に有する抗体を作製するために、げっ歯類動物またはウサギの可変領域とヒトの定常領域を利用する。そのようなキメラ抗体の作製は当技術分野において周知であり、そして、（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，６２４，６５９号に記載される）標準的な手法により達成され得る。本発明のキメラ抗体のヒト定常領域はＩｇＧ１定常領域、ＩｇＧ２定常領域、ＩｇＧ３定常領域、ＩｇＧ４定常領域、ＩｇＧ５定常領域、ＩｇＧ６定常領域、ＩｇＧ７定常領域、ＩｇＧ８定常領域、ＩｇＧ９定常領域、ＩｇＧ１０定常領域、ＩｇＧ１１定常領域、ＩｇＧ１２定常領域、ＩｇＧ１３定常領域、ＩｇＧ１４定常領域、ＩｇＧ１５定常領域、ＩｇＧ１６定常領域、ＩｇＧ１７定常領域、ＩｇＧ１８定常領域またはＩｇＧ１９定常領域から選択され得ることがさらに考えられている。
ヒト化抗体は、より多くのヒト様免疫グロブリンのドメインさえ含み、且つ、組み込まれている動物由来の抗体の領域は相補性決定領域のみであるように操作される。これは、モノクローナル抗体の可変領域にある超可変ループの配列を注意深く検討し、それらをヒト抗体鎖の構造に適合させることにより達成される。表面的には複雑だが、実際にはその処理は簡単である。例えば、参照により完全に本明細書に組み込まれる、米国特許第６，１８７，２８７号を参照のこと。抗体をヒト化する方法は、発行された米国特許第７９３５３４０号において以前に記載されている。その特許の開示の全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの例では、活性を維持するために追加のウサギフレームワーク残基が必要であるかどうかの決定が必要である。いくつかの例では、ヒト化抗体は、親和性または活性の欠如を最小化するためにいくつかの重要なウサギフレームワーク残基が保持されることをなお必要とする。これらの場合では、所望の活性を得るために、ヒト生殖系列配列由来の単一または複数のフレームワークアミノ酸を元々のウサギアミノ酸に戻す
ことが必要である。これらの変更は、どのウサギ残基が親和性および活性を保存するために必要であるか特定するための実験により決定される。
免疫グロブリン（またはそれらの組換え相対物）全体に加えて、エピトープ結合部位（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または他の断片）を含む免疫グロブリン断片が合成され得る。「断片」または最小免疫グロブリンは、組換え免疫グロブリン技法を利用して設計され得る。例えば、本発明において使用される「Ｆｖ」免疫グロブリンは、融合軽鎖可変領域と重鎖可変領域の合成により作製され得る。抗体の組合せ、例えば、２つの別個のＦｖ特異性を含むものである、ジアボディも興味深い。本発明の別の実施形態では、ＳＭＩＰ（小分子免疫薬）、キャメルボディ、ナノボディ、およびＩｇＮＡＲが免疫グロブリン断片によって包含される。
免疫グロブリンおよびその断片は、例えば、化学リンカーなどのエフェクター部分、蛍光性色素、酵素、毒素、基質、生物発光物質、放射性物質、化学発光部分などのような検出可能部分、またはストレプトアビジン、アビジンもしくはビオチンなどの特定の結合部分を付加するために翻訳後に修飾を受けることができ、その様なものは本発明の方法および組成物において利用され得る。付加的なエフェクター分子の例は上で提供されている。
生産物関連変異体：所望の産物の調製物中に存在し、所望の産物に関連する、その所望の産物（例えば、所望のマルチサブユニット複合体）以外の産物。生産物関連変異体の例には、短縮型または伸長型のペプチド、所望のグリコシル化と異なるグリコシル化を有する産物（例えば、非グリコシル化産物が所望されている場合、あらゆるグリコシル化産物は生産物関連変異体と見なされる）、異常な化学量論組成を有する複合体、不適切な集合、異常なジスルフィド結合、異常または不完全な折り畳み、凝集、プロテアーゼ切断、または他の異常が挙げられる。例となる生産物関連変異体は、分子質量（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーにより検出される）、等電点（例えば、等電点電気泳動により検出される）、電気泳動移動度（例えば、ゲル電気泳動により検出される）、リン酸化状態（例えば、マススペクトロメトリーにより検出される）、対質量荷電比率（例えば、マススペクトロメトリーにより検出される）、タンパク質分解断片の質量または正体（例えば、マススペクトロメトリーまたはゲル電気泳動により検出される）、疎水性（例えば、ＨＰＬＣにより検出される）、荷電（例えば、イオン交換クロマトグラフィーにより検出される）、親和性（例えば、抗体の場合、プロテインＡ、プロテインＧや所望の抗体が結合するエピトープへの結合により検出される）、およびグリコシル化状態（例えば、レクチン結合親和性により検出される）のうちの１つ以上の変化を示し得る。所望のタンパク質が抗体である場合、生産物関連変異体という用語は（下に記載される）グリコ重鎖変異体や半抗体種を含み得る。
例となる生産物関連変異体には、異常なジスルフィド結合を含有する変異体型が含まれる。例えば、大半のＩｇＧ１抗体分子は総計で１６個の鎖内ジスルフィド架橋および鎖間ジスルフィド架橋により安定化され、それらのジスルフィド架橋は重鎖と軽鎖の両方でＩｇＧドメインの折り畳み構造を安定化し、一方、鎖間ジスルフィド架橋は重鎖および軽鎖の間の結合を安定化させる。他の抗体種も同様に特徴的な安定化鎖内ジスルフィド結合および鎖間ジスルフィド結合を含有する。さらに、いくつかの抗体（本明細書において開示されるＡｂ‐ＡおよびＡｂ‐Ｂを含む）は、非正準ジスルフィド結合と呼ばれる追加的なジスルフィド結合を含有する。したがって、異常な鎖間ジスルフィド結合は、安定化共有結合や追加的なサブユニットへのジスルフィド結合の不在に起因する複合体の異常な化学量論組成を生じ得る。さらに、異常なジスルフィド結合（鎖間にせよ鎖内にせよ）により抗体の構造的安定性が減少する可能性があり、それにより活性の減少、安定性の減少、凝集体を形成する傾向の上昇や免疫原性の上昇が生じ得る。異常なジスルフィド結合を含有する生産物関連変異体は、非還元型変性ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ、キャピラリー電気泳動、ｃＩ
ＥＸ、マススペクトロメトリー（任意で、遊離システインに質量シフトを生じさせる化学修飾を含む）、サイズ排除クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、光散乱の変化、および当技術分野において公知の他の任意の適切な方法を含む様々な方法で検出され得る。例えば、 The Protein Protocols Handbook 2002, Part V, 581-583, DOI: 10.1385/1-59259-169-8:581 を参照のこと。
半抗体、半抗体種、またはＨ１Ｌ１は、１本の重抗体鎖および１本の軽抗体鎖を含むが、２本目の重抗体鎖および軽抗体鎖への共有結合を欠くタンパク質複合体を指す。２つの半抗体は、（完全型抗体に類似の挙動、例えば、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定される見かけの分子量を生じ得る）いくつかの条件下で非共有結合により結合され続けることができる。同様に、Ｈ２Ｌ１は、２本の重抗体鎖と１本の軽抗体鎖を含むが、２本目の軽抗体鎖への共有結合を欠くタンパク質複合体を指す。これらの複合体は別の軽抗体鎖と非共有結合により結合し得る（および同様に完全型抗体に類似の挙動を生じ得る）。完全型抗体と同様に、半抗体種およびＨ２Ｌ１種は還元性条件下で個々の重鎖および軽鎖に解離し得る。半抗体種およびＨ２Ｌ１種は、完全型抗体よりも少ない見かけの分子量で移動する種として非還元型ＳＤＳ‐ＰＡＧＥゲル上で検出され得、例えば、Ｈ１Ｌ１は完全型抗体（例えば、約７５ｋＤａ）の見かけの分子量のおよそ半分で移動する。
グリコ重鎖変異体は、抗体調製物に時折存在し、少なくとも部分的なＦｃ配列を含有するグリコシル化生産物関連変異体を指す。グリコ重鎖変異体は、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより観察可能な電気泳動移動度の（正常な重鎖と比較した）減少、レクチン結合親和性、抗Ｆｃ抗体への結合、およびサイズ排除クロマトグラフィーにより判定される、グリコ重鎖変異体を含有する抗体複合体のより大きい見かけの分子量を特徴とする。２０１１年８月３１日に提出された米国特許仮出願番号第６１／５２５，３０７号（代理人整理番号第６７８５８．７３０２００号）を参照のこと。その出願は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
「長期にわたって所望の分泌性異種性ポリペプチドを安定的に発現する、または発現する倍数体酵母」という用語は、前記のポリペプチドを通常（培養して約９０時間後に）少なくとも５０〜５００ｍｇ／リットルの閾値発現レベルで、および好ましくは実質的にそれより高いレベルで少なくとも数日から１週間、より好ましくは少なくとも１か月、さらにより好ましくは少なくとも１〜６か月間、および一層より好ましくは１年よりも長い間分泌する酵母培養物を指す。
「所望の量の組換えポリペプチドを分泌する倍数体酵母培養物」という用語は、少なくとも５０〜５００ｍｇ／リットル、および最も好ましくは５００〜１０００ｍｇ／リットル以上を安定的に、または長期間にわたり分泌する培養物を指す。
ポリヌクレオチド配列は、そのポリヌクレオチド配列の遺伝コードに従った翻訳によりポリペプチド配列が生じる（すなわち、そのポリヌクレオチド配列がポリペプチド配列を「コード」する）場合、そのポリペプチド配列に「対応」しており、２つの配列が同一のポリペプチド配列をコードする場合、１つのポリヌクレオチド配列は別のポリヌクレオチド配列に「対応」している。
ＤＮＡコンストラクトの「異種性」領域またはドメインは、より大きなＤＮＡ分子内にある特定可能なＤＮＡのセグメントであって、自然界ではそのより大きい分子と関連して見出されることがないセグメントである。したがって、異種性領域が哺乳類遺伝子をコードするとき、その遺伝子は通常、その供給生物のゲノム中ではその哺乳類ゲノムＤＮＡに隣接していないＤＮＡによって隣接される。異種性領域の別の例は、コード配列自体が自然界で見いだされないコンストラクト（例えば、ゲノム性コード配列はイントロンを含む
ｃＤＮＡ、または天然の遺伝子とは異なるコドンを有する合成配列）である。対立遺伝子変異または天然に生じる変異事象は、本明細書において定義される異種性領域のＤＮＡを生じさせない。
「コード配列」は、タンパク質またはペプチド配列に（遺伝コードの観点で）対応する、またはそれらをコードするコドンからなるインフレームの配列である。２つのコード配列またはそれらの相補配列が同一のアミノ酸配列をコードする場合、それらの２つのコード配列は互いに対応する。適切な調節配列と結合しているコード配列は転写され、ポリペプチドに翻訳される。ポリアデニル化シグナルと転写終結配列はたいていコード配列の３’側に位置する。「プロモーター配列」は、細胞内でＲＮＡポリメラーゼの結合が可能であり、下流（３’方向）のコード配列の転写を開始することができるＤＮＡ調節領域である。プロモーター配列は通常、コード配列の転写に影響を及ぼす調節性分子（例えば、転写因子）の追加の結合部位を含有する。コード配列は、ＲＮＡポリメラーゼが細胞内でプロモーター配列に結合し、そのコード配列をｍＲＮＡに転写し、次にそのｍＲＮＡがそのコード配列にコードされるタンパク質に翻訳されるとき、そのプロモーター配列の「制御下」にある、またはそのプロモーターに「機能するように結合」している。
ベクターを使用して、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質などの外来物質を生物または宿主細胞に導入する。典型的なベクターには、（ポリヌクレオチド用の）組換えウイルスおよび（ポリペプチド用の）リポソームが含まれる。「ＤＮＡベクター」は、プラスミドなどのレプリコン、ファージまたはコスミドであり、別のポリヌクレオチドセグメントを、結合したそのセグメントの複製を引き起こすようにそれらに結合させることができる。「発現ベクター」は、適切な宿主細胞によるポリペプチド合成を導く調節配列を含有するＤＮＡベクターである。これは通常、ＲＮＡポリメラーゼに結合し、ｍＲＮＡの転写を開始するプロモーター、ならびにそのｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳を導くリボソーム結合部位および開始シグナルを意味する。ポリヌクレオチド配列の適切な部位および正確な読み枠での発現ベクターへの組み込みとそれに続く適切な宿主細胞のそのベクターによる形質転換により、前記のポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの産生が可能になる。
ポリヌクレオチド配列の「増幅」は複数コピーの特定の核酸配列のインビトロ産生である。増幅された配列は通常、ＤＮＡの形態である。そのような増幅を実施するための様々な技法は次の総説に記載されており、それらのそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる： Van Brunt 1990, Bio/Technol., 8(4):291-294、および Gill and Ghaemi, Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids. 2008 Mar;27(3):224-43 。ポリメラーゼ連鎖反応、すなわちＰＣＲは核酸増幅の原型であり、本明細書におけるＰＣＲの使用は他の適切な増幅技術の例と見なされるべきである。
大半の脊椎動物（哺乳類を含む）における抗体の一般的構造は現在では充分に理解されている (Edelman, G. M., Ann. N.Y. Acad. Sci., 190: 5 (1971)) 。従来の抗体は、約
２３，０００ダルトンの分子量の２つの同一の軽ポリペプチド鎖（「軽鎖」）と５３，０００〜７０，０００の分子量の２つの同一の重鎖（「重鎖」）からなる。その４本の鎖はジスルフィド結合により「Ｙ字型」配置に結合されており、その配置では、軽鎖が「Ｙ字型」配置の口部から始まる重鎖を囲む。「Ｙ字型」配置の「分岐」部分はＦａｂ領域と呼ばれており、「Ｙ字型」配置の幹部分はＦＣ領域と呼ばれている。アミノ酸配列の方向は、「Ｙ字型」配置の頂点にあるＮ末端からそれぞれの鎖の底部にあるＣ末端へと推移する。Ｎ末端は、可変領域を誘発した抗原への特異性を有し、約１００アミノ酸長であるその可変領域を有し、軽鎖と重鎖の間で、および抗体毎にわずかな変化が存在する。
可変領域は、それぞれの鎖においてその鎖の残りの長さにわたり、特定のクラスの抗体
の範囲ではその抗体の特異性（すなわち、それを誘発する抗原）によって変化しない定常領域に結合している。免疫グロブリン分子のクラスを決定する定常領域の５つの既知の主要クラスが存在する（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥはγ重鎖定常領域、μ重鎖定常領域、α重鎖定常領域、δ重鎖定常領域、およびε重鎖定常領域に対応する）。定常領域またはクラスが、補体の活性化 (Kabat, E. A., Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry, 2nd Ed., p. 413-436, Holt, Rinehart, Winston (1976))、 および他の細胞応答 (Andrews, D. W., et al., Clinical Immunobiology, pp 1-18,
W. B. Sanders (1980); Kohl, S., et al., Immunology, 48: 187 (1983))を含む、抗体の以後のエフェクター機能を決定し、一方、可変領域が、抗体が反応する抗原を決定する。軽鎖はκまたはλのどちらかとして分類される。各重鎖クラスはκ軽鎖かλ軽鎖のどちらかと対合され得る。免疫グロブリンがハイブリドーマかＢ細胞のどちらかによって作製されるとき、軽鎖および重鎖は互いに共有結合されており、２つの重鎖の「尾部」は共有ジスルフィド結合によって互いに結合されている。
「可変領域」または「ＶＲ」という表現は、抗体の抗原への結合に直接的に関与する、その抗体の軽鎖と重鎖の各対内のドメインを指す。各重鎖は一端に単数の可変ドメイン（ＶＨ）とそれに続く多数の定常ドメインを有する。各軽鎖は一端に単数の可変ドメイン（ＶＬ）とその他方の末端に単数の定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一定常ドメインと並列しており、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと並列している。
「相補性決定領域」、「超可変領域」または「ＣＤＲ」という表現は、抗体の軽鎖または重鎖の可変領域に見出される超可変領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つ以上を指す (Kabat, E. A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987) を参照のこと）。これらの
表現にはＫａｂａｔらによって定義される超可変領域 ("Sequences of Proteins of Immunological Interest," Kabat E., et al., US Dept. of Health and Human Services, 1983) または抗体の三次元構造中の超可変ループ (Chothia and Lesk, J Mol. Biol. 196 901-917 (1987)) が含まれる。各鎖中のＣＤＲはフレームワーク領域によって極近傍に保
持され、他方の鎖のＣＤＲと共に抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲ内には、選択性決定領域（ＳＤＲ）と説明されており、抗体抗原間相互作用においてＣＤＲによって用いられる重要な接触残基を表す選択アミノ酸が存在する (Kashmiri, S., Methods, 36:25-34 (2005)) 。
「フレームワーク領域」または「ＦＲ」という表現は、抗体の軽鎖と重鎖の可変領域内の１つ以上のフレームワーク領域を指す (Kabat, E. A. et al., Sequences of Proteins
of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)
を参照のこと）。これらの表現には、抗体の軽鎖と重鎖の可変領域内のＣＤＲ間に挿入
されているアミノ酸配列領域が含まれる。
抗ＮＧＦ抗体およびＮＧＦへの結合活性を有するその結合断片
抗体Ａｂ１
本発明は、抗体Ａｂ１もしくはその断片、またはＡｂ１と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する抗体もしくは抗体断片を、例えば、以下に示されるように、単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害したり、疼痛を抑制もしくは予防したりする治療的有効量で使用して疼痛および特定の疼痛を伴う障害を治療する方法を企図する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体を包含する：
ＡＬＶＭＴＱＴＰＳＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＲＰＧＱＲＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＬＤＡＧＶＰＳＲＦＲＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＤＬＥＣＤＤＶＧＴＹＹＣＱＳＡＦＤＳＤＳＴＥＮＴＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号１）。
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有するキメラ抗体を包含する：
ＡＬＶＭＴＱＴＰＳＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＲＰＧＱＲＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＬＤＡＧＶＰＳＲＦＲＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＤＬＥＣＤＤＶＧＴＹＹＣＱＳＡＦＤＳＤＳＴＥＮＴＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２）。
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有するキメラ抗体を包含する：
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＴＳＩＧＳＴＶＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＹＤＤＹＤＥＭＴＹＦＮＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３）。
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有するキメラ抗体を包含する：
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＴＳＩＧＳＴＶＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＹＤＤＹＤＥＭＴＹＦＮＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４）。
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、配列番号１の可変軽鎖配列もしくは配列番号２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５、配列番号６、および配列番号７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号３の可変重鎖配列もしくは配列番号４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号８、配列番号９、および配列番号１０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、または
これらのポリペプチド配列の組合せを含む。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する断片である。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１または配列番号２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号３または配列番号４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる実施形態では、疼痛の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１の可変軽鎖配列または配列番号２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５、配列番号６、および配列番号７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチドのうちの１つ以上からなる。
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する断片を含み、配列番号３の可変重鎖配列または配列番号４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号８、配列番号９、および配列番号１０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を含む抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１の可変軽鎖領域；配列番号３の可変重鎖領域；配列番号１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号５、配列番号６、および配列番号７）；および配列番号３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号８、配列番号９、および配列番号１０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、キメラ抗ＮＧＦ抗体は、配列番号２および配列番号４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、本明細書において使用される抗体断片は、Ａｂ１と同一の、または重複するエピトープに結合する、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）または別のＦａｂ断片または一価抗体断片を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ１に関して、Ｆａｂ断片は配列番号１の可変軽鎖配列および配列番号３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１および／または配列番号３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、Ｆａｂ断片はＡｂ１の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例
えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ２
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有するキメラ抗体またはヒト化抗体であって、その抗体が抗体Ａｂ２もしくはその断片である、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ２と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する抗体もしくは抗体断片である、その抗体を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体またはヒト化抗体を包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＬＤＡＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＳＡＦＤＳＤＳＴＥＮＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＬＤＡＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＳＡＦＤＳＤＳＴＥＮＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体をさらに任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＴＳＩＧＳＴＶＹＡＳＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＤＤＹＤＥＭＴＹＦＮＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＴＳＩＧＳＴＶＹＡＳＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＤＤＹＤＥＭＴＹＦＮＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹ
ＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号１１の可変軽鎖配列もしくは配列番号１２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号１３の可変重鎖配列もしくは配列番号１４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１１または配列番号１２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１３または配列番号１４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１１の可変軽鎖配列または配列番号１２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を任意で含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上から任意でなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１３の可変重鎖配列または配列番号１４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を含む抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１１の可変軽鎖領域；配列番号１３の可変重鎖領域；配列番号１１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７）；および配列番号１３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体またはヒト化抗ＮＧＦ抗体は任意で、配列番号１２および配列番号１４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ２である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）、またはＡｂ２と同一、もしくは重複するエピトープに結合するＦａｂ断片もしくは他の一価抗体断片を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ２に関して、Ｆａｂ断
片は配列番号１１の可変軽鎖配列および配列番号１３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１１および／または配列番号１３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、Ｆａｂ断片はＡｂ２の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ２などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ３
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有するキメラ抗体またはヒト化抗体であって、その抗体がｉｓＡｂ３もしくはその断片である、またはＮＧＦのｐ７５との結合を認識できるほど阻害することなく、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ３と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片である、その抗体を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体を包含する：
ＡＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＭＧＤＴＶＴＩＫＣＱＳＳＱＳＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＤＹＤＤＤＡＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号２１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も包含する：ＡＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＭＧＤＴＶＴＩＫＣＱＳＳＱＳＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＤＹＤＤＤＡＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体をさらに包含する：
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＶＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＩＴＷＳＡＧＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＧＧＧＧＳＩＹＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も包含する：ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＶＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＩＴＷＳＡＧＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＧＧＧＧＳＩＹＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴ
ＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号２１の可変軽鎖配列もしくは配列番号２２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号２３の可変重鎖配列もしくは配列番号２４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片も企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号２１または配列番号２２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号２３または配列番号２４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号２１の可変軽鎖配列または配列番号２２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号２３の可変重鎖配列または配列番号２４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を含む抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号２１の可変軽鎖領域；配列番号２３の可変重鎖領域；配列番号２１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７）；および配列番号２３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体は、配列番号２２および配列番号２４を含み、ある
いはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ３である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）、またはＡｂ３と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ３に関して、Ｆａｂ断片は配列番号２１の可変軽鎖配列および配列番号２３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号２１および／または配列番号２３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、Ｆａｂ断片はＡｂ３の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ３などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ４
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有するキメラ抗体またはヒト化抗体であって、その抗体が抗体Ａｂ４もしくはその断片である、またはＮＧＦのｐ７５との結合を認識できるほど阻害することなく、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合を阻害したり、疼痛の予防または効率的な治療のためにＮＧＦのＴｒｋＡとの結合を阻害したりする治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ４と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片である、その抗体を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのヒト化抗体を包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＳＳＱＳＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＬＧＤＹＤＤＤＡＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号３１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＳＳＱＳＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＬＧＤＹＤＤＤＡＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのヒト化抗体をさらに包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＳＹＶＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＩＴＷＳＡＧＴＹＹＡＳＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＧＧＧＧＳＩＹＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＳＹＶＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＩＴＷＳＡＧＴＹＹＡＳＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＧＧＧＧＳＩＹＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号３１の可変軽鎖配列もしくは配列番号３２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号３５、配列番号３６、および配列番号３７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号３３の可変重鎖配列もしくは配列番号３４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号３８、配列番号３９、および配列番号４０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号３１または配列番号３２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号３３または配列番号３４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号３１の可変軽鎖配列または配列番号３２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号３５、配列番号３６、および配列番号３７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号３３の可変重鎖配列または配列番号３４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号３８、配列番号３９、および配列番号４０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号３１の可変軽鎖領域；配列番号３３の可変重鎖領域；配列番号３１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号３５、配列番号３６、および配列番号３７）；および配列番号３３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号３８、配列番号３９、および配列番号４０）。
本発明の特に好ましい実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体またはヒト化抗ＮＧＦ抗体は、配列番号３２および配列番号３４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ４である。
本発明のさらなる特に好ましい実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）、またはＡｂ１４と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ４に関して、Ｆａｂ断片は配列番号３１の可変軽鎖配列および配列番号３３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号３１および／または配列番号３３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ４の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ４などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ５
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を企図し、その中で抗体は、Ａｂ５もしくはその断片を任意で包含する、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ５と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を任意で包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体を包含する：
ＡＹＤＭＴＱＴＰＡＳＶＥＶＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＳＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＲＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＧＶＥＣＡＤＡＡＳＹＹＣＱＱＧＦＴＶＳＤＩＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号４１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＡＹＤＭＴＱＴＰＡＳＶＥＶＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＳＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＲＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＧＶＥＣ
ＡＤＡＡＳＹＹＣＱＱＧＦＴＶＳＤＩＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＮＹＡＶＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＧＲＮＧＮＴＷＹＡＳＷＡＲＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＳＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＹＧＲＳＶＡＹＹＶＦＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＮＹＡＶＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＧＲＮＧＮＴＷＹＡＳＷＡＲＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＳＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＹＧＲＳＶＡＹＹＶＦＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号４１の可変軽鎖配列もしくは配列番号４２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号４３の可変重鎖配列もしくは配列番号４４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号４８、配列番号４９、および配列番号５０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含んでよい、あるいはそれらの組合せからなってよい。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号４１または配列番号４２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体断片は、配列番号４３または配列番号４４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号４１の可変軽鎖配列または配列番号４２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７のポリ
ペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号４３の可変重鎖配列または配列番号４４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号４８、配列番号４９、および配列番号５０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を任意で含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上から任意でなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を含む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号４１の可変軽鎖領域；配列番号４３の可変重鎖領域；配列番号４１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７）；および配列番号４３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号４８、配列番号４９、および配列番号５０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、任意で含まれる、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体は、配列番号４２および配列番号４４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ５である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、Ａｂ５と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）または別のＦａｂまたは抗体断片を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ５に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号４１の可変軽鎖配列および配列番号４３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号４１および／または配列番号４３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ５の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ５などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ６
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、Ａｂ６もしくはその断片を包含する、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ６と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体またはヒト化抗体を包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＦＴＶＳＤＩＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＦＴＶＳＤＩＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号５２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体キメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＮＹＡＶＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＩＩＧＲＮＧＮＴＷＹＡＳＳＡＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＧＲＳＶＡＹＹＶＦＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５３）。
本発明は、キメラ抗体ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＮＹＡＶＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＩＩＧＲＮＧＮＴＷＹＡＳＳＡＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＧＲＳＶＡＹＹＶＦＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号５１の可変軽鎖配列もしくは配列番号５２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号５３の可変重鎖配列もしくは配列番号５４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の選択的な実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療
または予防のための抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号５１または配列番号５２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号５３または配列番号５４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号５１の可変軽鎖配列または配列番号５２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号５３の可変重鎖配列または配列番号５４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号５１の可変軽鎖領域；配列番号５３の可変重鎖領域；配列番号５１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７）；および配列番号５３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体またはヒト化抗ＮＧＦ抗体は、配列番号５２および配列番号５４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ６である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）、またはＡｂ６と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ６に関して、Ｆａｂ断片は配列番号５１の可変軽鎖配列および配列番号５３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの選択的な実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号５１および／または配列番号５３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ６の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ６などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ７
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、Ａｂ７もしくはその断片を包含し、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ７と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体を包含する：
ＡＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＶＳＱＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＥＤＩＹＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＳＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＧＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＮＮＹＬＶＴＴＹＧＶＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号６１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＡＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＶＳＱＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＥＤＩＹＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＳＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＧＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＮＮＹＬＶＴＴＹＧＶＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号６２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＱＥＱＬＫＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＡＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＹＩＤＴＤＴＳＡＹＹＡＳＷＶＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＳＹＡＡＹＧＧＹＰＡＴＦＤＰＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＱＥＱＬＫＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＡＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＹＩＤＴＤＴＳＡＹＹＡＳＷＶＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＳＹＡＡＹＧＧＹＰＡＴＦＤＰＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配
列番号６１の可変軽鎖配列もしくは配列番号６２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号６５、配列番号６６、および配列番号６７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号６３の可変重鎖配列もしくは配列番号６４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号６８、配列番号６９、および配列番号７０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号６１または配列番号６２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号６３または配列番号６４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片は、配列番号６１の可変軽鎖配列または配列番号６２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号６５、配列番号６６、および配列番号６７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片は、配列番号６３の可変重鎖配列または配列番号６４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号６８、配列番号６９、および配列番号７０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号６１の可変軽鎖領域；配列番号６３の可変重鎖領域；配列番号６１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号６５、配列番号６６、および配列番号６７）；および配列番号６３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号６８、配列番号６９、および配列番号７０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体は、配列番号６２および配列番号６４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ７である。
本発明のさらなる特に選択的に好ましい実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）、またはＡｂ７と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ７に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号６１の可変軽鎖配列および配列番号６３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号６１および／または配列番号６３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する
。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ７の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ７などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ８
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、Ａｂ８もしくはその断片を包含し、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ８と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは断片を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体またはヒト化抗体を包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＥＤＩＹＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＳＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＮＮＹＬＶＴＴＹＧＶＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号７１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＥＤＩＹＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＳＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＮＮＹＬＶＴＴＹＧＶＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号７２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体キメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＹＩＤＴＤＴＳＡＹＹＡＳＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＹＡＡＹＧＧＹＰＡＴＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）。
本発明は、キメラ抗体ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＹＩＤＴＤＴＳＡＹＹＡＳＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＹＡＡＹＧＧＹＰＡＴＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴ
ＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号７１の可変軽鎖配列もしくは配列番号７２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号７５、配列番号７６、および配列番号７７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号７３の可変重鎖配列もしくは配列番号７４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号７８、配列番号７９、および配列番号８０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の選択的な実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号７１または配列番号７２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号７３または配列番号７４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号７１の可変軽鎖配列または配列番号７２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号７５、配列番号７６、および配列番号７７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号７３の可変重鎖配列または配列番号７４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号７８、配列番号７９、および配列番号８０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号７１の可変軽鎖領域；配列番号７３の可変重鎖領域；配列番号７１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号７５、配列番号７６、および配列番号７７）；および配列番号７３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号７８、配列番号７９、および配列番号８０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体またはヒト化抗ＮＧＦ抗体は、配列番号７２および配列番号７４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のう
ちの少なくとも１つを有するＡｂ８である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ８に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号７１の可変軽鎖配列および配列番号７３の可変重鎖配列、またはＡｂ８と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号７１および／または配列番号７３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ８の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ８などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ９
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、Ａｂ９もしくはその断片を包含し、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ９と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を包含する。１つの選択的な実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体を包含する：
ＡＹＤＭＴＱＴＰＡＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＥＮＩＧＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＥＬＬＩＹＲＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＮＳＥＮＬＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号８１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＡＹＤＭＴＱＴＰＡＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＥＮＩＧＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＥＬＬＩＹＲＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＮＳＥＮＬＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号８２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＳＭＹＳＭＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＷＩＳＹＧＧＴＡＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＥＬＫＩＴＳＰＴＩＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＥＴＰＶＮＹＹＬＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号
８３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＳＭＹＳＭＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＷＩＳＹＧＧＴＡＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＥＬＫＩＴＳＰＴＩＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＥＴＰＶＮＹＹＬＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号８１の可変軽鎖配列もしくは配列番号８２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号８３の可変重鎖配列もしくは配列番号８４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の選択的な実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号８１または配列番号８２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号８３または配列番号８４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号８１の可変軽鎖配列または配列番号８２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号８３の可変重鎖配列または配列番号８４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施
形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号８１の可変軽鎖領域；配列番号８３の可変重鎖領域；配列番号８１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７）；および配列番号８３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体は、配列番号８２および配列番号８４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ９である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ９に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号８１の可変軽鎖配列および配列番号８３の可変重鎖配列、またはＡｂ９と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号８１および／または配列番号８３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ９の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の選択的な実施形態では、Ａｂ９などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１０
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、Ａｂ１０もしくはその断片を包含し、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ１０と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体を包含する：
ＡＹＤＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＥＮＩＧＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＲＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＮＳＥＮＬＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＡＹＤＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＥＮＩＧＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＲＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＮＳＥＮＬＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩ
ＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体キメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＭＹＳＭＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＷＩＳＹＧＧＴＡＹＹＡＳＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴＰＶＮＹＹＬＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９３）。
本発明は、キメラ抗体ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＭＹＳＭＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＷＩＳＹＧＧＴＡＹＹＡＳＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴＰＶＮＹＹＬＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号９１の可変軽鎖配列もしくは配列番号９２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号９５、配列番号９６、および配列番号９７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号９３の可変重鎖配列もしくは配列番号９４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号９８、配列番号９９、および配列番号１００のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号９１または配列番号９２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号９３または配列番号９４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号９１の可変軽鎖配列または配列番号９２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号９５、配列番号９６、および配列番号９７のポリペプチド配列のうちの１つ以
上を任意で含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上から任意でなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号９３の可変重鎖配列または配列番号９４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号９８、配列番号９９、および配列番号１００のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を含む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号９１の可変軽鎖領域；配列番号９３の可変重鎖領域；配列番号９１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号９５、配列番号９６、および配列番号９７）；および配列番号９３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号９８、配列番号９９、および配列番号１００）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体またはヒト化抗ＮＧＦ抗体は、配列番号９２および配列番号９４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１０である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ１０に関して、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、配列番号９１の可変軽鎖配列および配列番号９３の可変重鎖配列、またはＡｂ１０と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号９１および／または配列番号９３への付加、欠失、およびそれらの変異体をさらに任意で企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ１０の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１０などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１１
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、Ａｂ１１もしくはその断片を包含し、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ１１と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体を包含する：
ＡＦＥＬＴＱＴＰＳＳＶＥＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＮＩＶＴＮＬＡＷＹＱＱＫＰ
ＧＱＰＰＫＬＬＩＹＧＡＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＦＣＱＳＹＤＧＦＮＳＡＧＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号１０１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＡＦＥＬＴＱＴＰＳＳＶＥＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＮＩＶＴＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＧＡＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＦＣＱＳＹＤＧＦＮＳＡＧＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＧＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＬＩＳＹＤＧＮＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＳＬＹＡＧＰＮＡＧＩＧＰＦＮＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＧＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＬＩＳＹＤＧＮＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＳＬＹＡＧＰＮＡＧＩＧＰＦＮＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号１０１の可変軽鎖配列もしくは配列番号１０２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１０５、配列番号１０６、および配列番号１０７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号１０３の可変重鎖配列もしくは配列番号１０４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１０８、配列番号１０９、および配列番号１１０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の選択的な実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含んでよい、あるいはそれらの組合せからなってよい。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する
結合特異性を有する抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１０１または配列番号１０２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の選択的な実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１０３または配列番号１０４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１０１の可変軽鎖配列または配列番号１０２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１０５、配列番号１０６、および配列番号１０７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片は、配列番号１０３の可変重鎖配列または配列番号１０４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１０８、配列番号１０９、および配列番号１１０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１０１の可変軽鎖領域；配列番号１０３の可変重鎖領域；配列番号１０１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１０５、配列番号１０６、および配列番号１０７）；および配列番号１０３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１０８、配列番号１０９、および配列番号１１０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１０２および配列番号１０４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１１である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ１１に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号１０１の可変軽鎖配列および配列番号１０３の可変重鎖配列を含み、またはＡｂ１１と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１０１および／または配列番号１０３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ１１の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の選択的な実施形態では、Ａｂ１１などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉ
ｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１２
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、Ａｂ１２もしくはその断片を包含し、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ１２と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体を包含する：
ＡＦＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＩＶＴＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＧＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＳＹＤＧＦＮＳＡＧＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１１１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＡＦＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＩＶＴＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＧＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＳＹＤＧＦＮＳＡＧＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体キメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＳＧＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＬＩＳＹＤＧＮＴＹＹＡＴＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＹＡＧＰＮＡＧＩＧＰＦＮＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１３）。
本発明は、キメラ抗体ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＳＧＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＬＩＳＹＤＧＮＴＹＹＡＴＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＹＡＧＰＮＡＧＩＧＰＦＮＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号１１１の可変軽鎖配列もしくは配列番号１１２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号１１３の可変重鎖配列もしくは配列番号１１４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の選択的な実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１１１または配列番号１１２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１１３または配列番号１１４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１１１の可変軽鎖配列または配列番号１１２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１１３の可変重鎖配列または配列番号１１４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を含む抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１１１の可変軽鎖領域；配列番号１１３の可変重鎖領域；配列番号１１１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７）；および配列番号１１３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体またはヒト化抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１１２および配列番号１１４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１２である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ１２に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号１１１の可変軽鎖配列および配列番号１１３の可変重鎖配列を含み、また
はＡｂ１２と同一の、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む。本発明のこの選択的な実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１１１および／または配列番号１１３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ１２の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＡｂ１２などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１３
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、Ａｂ１３もしくはその断片を包含し、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ１３と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体を包含する：
ＡＡＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＧＴＶＳＩＳＣＱＳＳＱＮＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＧＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＤＶＱＣＤＡＡＡＴＹＹＣＡＧＧＹＴＳＳＳＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号１２１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＡＡＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＧＴＶＳＩＳＣＱＳＳＱＮＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＧＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＤＶＱＣＤＡＡＡＴＹＹＣＡＧＧＹＴＳＳＳＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１２２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＱＳＶＥＡＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＹＦＳＮＥＥＴＮＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＮＶＩＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＳＰＤＶＤＩＧＩＤＭＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含
する：
ＱＳＶＥＡＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＹＦＳＮＥＥＴＮＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＮＶＩＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＳＰＤＶＤＩＧＩＤＭＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１２４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号１２１の可変軽鎖配列もしくは配列番号１２２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１２５、配列番号１２６、および配列番号１２７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号１２３の可変重鎖配列もしくは配列番号１２４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１２８、配列番号１２９、および配列番号１３０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の選択的な実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１２１または配列番号１２２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１２３または配列番号１２４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１２１の可変軽鎖配列または配列番号１２２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１２５、配列番号１２６、および配列番号１２７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１２３の可変重鎖配列または配列番号１２４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１２８、配列番号１２９、および配列番号１３０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配
列番号１２１の可変軽鎖領域；配列番号１２３の可変重鎖領域；配列番号１２１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１２５、配列番号１２６、および配列番号１２７）；および配列番号１２３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１２８、配列番号１２９、および配列番号１３０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１２２および配列番号１２４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１３である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ１３に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号１２１の可変軽鎖配列および配列番号１２３の可変重鎖配列を含み、またはＡｂ１３と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む。本発明のこの選択的な実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１２１および／または配列番号１２３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ１３の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１３などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１４
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有するキメラ抗体であって、その抗体がＡｂ１４もしくはその断片であり、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ１４と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは断片である、その抗体を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体またはヒト化抗体を包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＳＳＱＮＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＡＧＧＹＴＳＳＳＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１３１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＳＳＱＮＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＡＧＧＹＴＳＳＳＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳ
ＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１３２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体キメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＤＩＹＦＳＮＥＥＴＮＹＡＳＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＳＰＤＶＤＩＧＩＤＭＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３３）。
本発明は、キメラ抗体ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＤＩＹＦＳＮＥＥＴＮＹＡＳＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＳＰＤＶＤＩＧＩＤＭＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１３４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号１３１の可変軽鎖配列もしくは配列番号１３２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１３５、配列番号１３６、および配列番号１３７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号１３３の可変重鎖配列もしくは配列番号１３４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１３８、配列番号１３９、および配列番号１４０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の選択的な実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１３１または配列番号１３２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１３３または配列番号１３４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１３１の可変軽鎖配列または配列番号１３２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１３５、配列番号１３６、および配列番号１３７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を任意で含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以
上から任意でなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１３３の可変重鎖配列または配列番号１３４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１３８、配列番号１３９、および配列番号１４０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１３１の可変軽鎖領域；配列番号１３３の可変重鎖領域；配列番号１３１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１３５、配列番号１３６、および配列番号１３７）；および配列番号１３３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１３８、配列番号１３９、および配列番号１４０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体またはヒト化抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１３２および配列番号１３４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１４である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ１４に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号１３１の可変軽鎖配列および配列番号１３３の可変重鎖配列またはＡｂ１４と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１３１および／または配列番号１３３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ１４の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＡｂ１４などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１５
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有するキメラ抗体であって、その抗体が例えば、以下に示されるようにＡｂ１５もしくはその断片であり、またはＮＧＦのｐ７５との結合を認識できるほど阻害することなく、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合を阻害する治療的有効量でＡｂ１５と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を含む、そ
の抗体を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体を包含する：
ＡＡＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＤＴＶＴＩＫＣＱＳＳＱＳＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＤＹＤＤＤＴＤＮＧＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号１４１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も包含する：ＡＡＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＤＴＶＴＩＫＣＱＳＳＱＳＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＤＹＤＤＤＴＤＮＧＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１４２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体をさらに包含する：
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＳＳＹＡＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＩＩＷＳＧＧＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＱＩＴＳＰＴＴＥＤＡＡＴＹＦＣＡＡＧＧＧＳＩＹＤＶＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も包含する：ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＳＳＹＡＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＩＩＷＳＧＧＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＱＩＴＳＰＴＴＥＤＡＡＴＹＦＣＡＡＧＧＧＳＩＹＤＶＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号１４１の可変軽鎖配列もしくは配列番号１４２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１４５、配列番号１４６、および配列番号１４７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号１４３の可変重鎖配列もしくは配列番号１４４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１４８、配列番号１４９、および配列番号１５０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む
、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１４１または配列番号１４２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１４３または配列番号１４４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１４１の可変軽鎖配列または配列番号１４２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１４５、配列番号１４６、および配列番号１４７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１４３の可変重鎖配列または配列番号１４４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１４８、配列番号１４９、および配列番号１５０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包含する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も企図する。本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１４１の可変軽鎖領域；配列番号１４３の可変重鎖領域；配列番号１４１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１４５、配列番号１４６、および配列番号１４７）；および配列番号１４３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１４８、配列番号１４９、および配列番号１５０）。
本発明の特に好ましい実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１４２および配列番号１４４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１５である。
本発明のさらなる特に好ましい実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＮＧＦへの結合特異性を有する抗体断片は、Ｆａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ１５に関して、Ｆａｂ断片は、ｉｎｃｌｕｄｅｓ配列番号１４１の可変軽鎖配列および配列番号１４３の可変重鎖配列を含み、またはＡｂ１５と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１４１および／または配列番号１４３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ１５の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１５などの疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）お
よび他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１６
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有するキメラ抗体であって、その抗体が、例えば、以下に示されるように、Ａｂ１６もしくはその断片であり、またはＮＧＦのｐ７５との結合を認識できるほど阻害することなく、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合を阻害する治療的有効量でＡｂ１６と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を含む、その抗体を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体を包含する：
ＡＬＶＭＴＱＴＰＳＳＴＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＮＩＧＮＤＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＥＬＬＩＹＳＴＳＫＬＡＴＧＶＰＫＲＦＳＧＳＲＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＶＹＳＹＩＳＤＤＧＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号１５１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も包含する：
ＡＬＶＭＴＱＴＰＳＳＴＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＮＩＧＮＤＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＥＬＬＩＹＳＴＳＫＬＡＴＧＶＰＫＲＦＳＧＳＲＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＶＹＳＹＩＳＤＤＧＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１５２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体をさらに包含する：
ＱＳＶＥＥＦＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＮＮＹＡＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＧＳＩＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＦＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＩＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＤＡＧＶＴＶＤＧＹＧＹＹＦＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も包含する：
ＱＳＶＥＥＦＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＮＮＹＡＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＧＳＩＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＦＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＩＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＤＡＧＶＴＶＤＧＹＧＹＹＦＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ
ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１５４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号１５１の可変軽鎖配列もしくは配列番号１５２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１５５、配列番号１５６、および配列番号１５７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号１５３の可変重鎖配列もしくは配列番号１５４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１５８、配列番号１５９、および配列番号１６０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１５１または配列番号１５２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体断片は、配列番号１５３または配列番号１５４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１５１の可変軽鎖配列または配列番号１５２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１５５、配列番号１５６、および配列番号１５７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１５３の可変重鎖配列または配列番号１５４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１５８、配列番号１５９、および配列番号１６０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包含する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１５１の可変軽鎖領域；配列番号１５３の可変重鎖領域；配列番号１５１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１５５、配列番号１５６、および配列番号１５７）；および配列番号１５３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１５８、配列番号１５９、および配列番号１６０）。
本発明の特に好ましい実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体またはヒト化抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１５２および配列番号１５４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１６である。
本発明のさらなる特に好ましい実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＮＧＦへの結合特異性を有する抗体断片は、Ｆａｂ断片（抗原結合断片
）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ１６に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号１５１の可変軽鎖配列および配列番号１５３の可変重鎖配列を含み、またはＡｂ１６と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは二価もしくは一価の抗体断片を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１５１および／または配列番号１５３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ１６の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１６などの疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１７
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有するキメラ抗体であって、その抗体が例えば、以下に示されるように、Ａｂ１７もしくはその断片であり、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量でＡｂ１７と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を含む、その抗体を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体を包含する：
ＡＩＥＭＴＱＴＰＦＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＴＩＳＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＴＩＳＮＶＤＮＮＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号１６１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＡＩＥＭＴＱＴＰＦＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＴＩＳＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＴＩＳＮＶＤＮＮＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１６２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＧＳＬＴＬＴＣＡＡＳＧＦＳＬＴＧＹＮＬＶＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＦＩＳＹＧＤＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＴＬＴＩＴＤＬＱＰＳＤＴＧＴＹＦＣＡＲＥＴＡＮＴＹＤＹＧＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＧＳＬＴＬＴＣＡＡＳＧＦＳＬＴＧＹＮＬＶＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＦＩＳＹＧＤＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＴＬＴＩＴＤＬＱＰＳＤＴＧＴＹＦＣＡＲＥＴＡＮＴＹＤＹＧＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１６４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号１６１の可変軽鎖配列もしくは配列番号１６２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１６５、配列番号１６６、および配列番号１６７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号１６３の可変重鎖配列もしくは配列番号１６４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１６８、配列番号１６９、および配列番号１７０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１６１または配列番号１６２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の選択的な実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１６３または配列番号１６４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１６１の可変軽鎖配列または配列番号１６２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１６５、配列番号１６６、および配列番号１６７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１６３の可変重鎖配列または配列番号１６４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１６８、配列番号１６９、および配列番号１７０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を
伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１６１の可変軽鎖領域；配列番号１６３の可変重鎖領域；配列番号１６１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１６５、配列番号１６６、および配列番号１６７）；および配列番号１６３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１６８、配列番号１６９、および配列番号１７０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１６２および配列番号１６４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１７である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ１７に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号１６１の可変軽鎖配列および配列番号１６３の可変重鎖配列を含み、またはＡｂ１５と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価もしくは二価の抗体断片を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１６１および／または配列番号１６３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ１７の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１７などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１８
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有するキメラ抗体であって、その抗体が例えば、以下に示されるように、Ａｂ１８もしくはその断片であり、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量でＡｂ１８と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を含む、その抗体を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体を包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＴＩＳＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＹＴＩＳＮＶＤＮＮＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１７１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化
抗体も任意で包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＴＩＳＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＹＴＩＳＮＶＤＮＮＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１７２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体キメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＧＹＮＬＶＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＳＹＧＤＴＴＹＹＡＳＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴＡＮＴＹＤＹＧＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）。
本発明は、キメラ抗体ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＧＹＮＬＶＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＳＹＧＤＴＴＹＹＡＳＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴＡＮＴＹＤＹＧＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１７４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号１７１の可変軽鎖配列もしくは配列番号１７２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１７５、配列番号１７６、および配列番号１７７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号１７３の可変重鎖配列もしくは配列番号１７４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１７８、配列番号１７９、および配列番号１８０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１７１または配列番号１７２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１７３または配列番号１７４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１７１の可変軽鎖配列または配列番号１７２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１７５、配列番号１７６、および配列番号１７７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１７３の可変重鎖配列または配列番号１７４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１７８、配列番号１７９、および配列番号１８０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１７１の可変軽鎖領域；配列番号１７３の可変重鎖領域；配列番号１７１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１７５、配列番号１７６、および配列番号１７７）；および配列番号１７３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１７８、配列番号１７９、および配列番号１８０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体またはヒト化抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１７２および配列番号１７４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１８である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、抗体断片ｓＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ１８に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号１７１の可変軽鎖配列および配列番号１７３の可変重鎖配列を含み、またはＡｂ１８と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは抗体断片を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１７１および／または配列番号１７３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ１８の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１８などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１９
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、
ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有するキメラ抗体であって、その抗体が例えば、以下に示されるように、Ａｂ１９もしくはその断片であり、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量でＡｂ１９と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を含む、その抗体を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体を包含する：
ＡＡＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＧＴＶＳＩＳＣＱＳＳＱＮＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＤＶＱＣＤＡＡＡＴＹＹＣＡＧＧＹＳＳＳＳＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号１８１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＡＡＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＧＴＶＳＩＳＣＱＳＳＱＮＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＤＶＱＣＤＡＡＡＴＹＹＣＡＧＧＹＳＳＳＳＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１８２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＱＳＶＥＡＳＧＧＲＬＶＭＰＧＧＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＹＦＳＮＥＥＴＮＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＮＶＩＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＳＰＤＶＥＩＡＩＤＭＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１８３）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体も任意で包含する：
ＱＳＶＥＡＳＧＧＲＬＶＭＰＧＧＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＹＦＳＮＥＥＴＮＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＮＶＩＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＳＰＤＶＥＩＡＩＤＭＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号１８１の可変軽鎖配列もしくは配列番号１８２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１８５、配列番号１８６、および配列番号
１８７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号１８３の可変重鎖配列もしくは配列番号１８４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１８８、配列番号１８９、および配列番号１９０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１８１または配列番号１８２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１８３または配列番号１８４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１８１の可変軽鎖配列または配列番号１８２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１８５、配列番号１８６、および配列番号１８７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１８３の可変重鎖配列または配列番号１８４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１８８、配列番号１８９、および配列番号１９０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を含む抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１８１の可変軽鎖領域；配列番号１８３の可変重鎖領域；配列番号１８１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１８５、配列番号１８６、および配列番号１８７）；および配列番号１８３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１８８、配列番号１８９、および配列番号１９０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１８２および配列番号１８４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１９である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ１９に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号１８１の可変軽鎖配列および配列番号１８３の可変重鎖配列を含み、またはＡｂ１９と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは抗体断片を含む。本発明のこの選択的な実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままで
の、前記Ｆａｂ中の配列番号１８１および／または配列番号１８３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ１９の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１９などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ２０
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有するキメラ抗体であって、その抗体が例えば、以下に示されるように、Ａｂ２０もしくはその断片であり、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量でＡｂ２０と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片を含む、その抗体を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体を包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＳＳＱＮＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＡＧＧＹＴＳＳＳＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１９１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＳＳＱＮＶＹＫＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＡＧＧＹＴＳＳＳＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１９２）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体キメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＤＩＹＦＳＮＥＥＴＮＹＡＴＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＳＰＤＶＥＩＡＩＤＭＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）。
本発明は、キメラ抗体ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡ
ＰＧＫＧＬＥＷＶＧＤＩＹＦＳＮＥＥＴＮＹＡＴＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＳＰＤＶＥＩＡＩＤＭＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１９４）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号１９１の可変軽鎖配列もしくは配列番号１９２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１９５、配列番号１９６、および配列番号１９７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号１９３の可変重鎖配列もしくは配列番号１９４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１９８、配列番号１９９、および配列番号２００のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体断片は、配列番号１９１または配列番号１９２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１９３または配列番号１９４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１９１の可変軽鎖配列または配列番号１９２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１９５、配列番号１９６、および配列番号１９７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１９３の可変重鎖配列または配列番号１９４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号１９８、配列番号１９９、および配列番号２００のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１９１の可変軽鎖領域；配列番号１９３の可変重鎖領域；配列番号１９１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１９５、配列番号１９６、および配列番号１９７）；
および配列番号１９３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１９８、配列番号１９９、および配列番号２００）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体またはヒト化抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１９２および配列番号１９４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ２０である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ２０に関して、Ｆａｂ断片は配列番号１９１の可変軽鎖配列および配列番号１９３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１９１および／または配列番号１９３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ２０の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ２０などの疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ２１
本発明は、疼痛および特定の疼痛を伴う障害を単独で、または別の活性薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤもしくはオピオイド系鎮痛剤と共同で治療する方法を任意で企図し、その中で抗体は、ＮＧＦに対する結合特異性を有するキメラ抗体であって、その抗体がＡｂ２１もしくはその断片であり、またはＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で、例えば、以下に示されるように、Ａｂ５と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別の抗体もしくは抗体断片である、その抗体を包含する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体またはヒト化抗体を包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＦＴＶＳＤＩＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＦＴＶＳＤＩＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４０１）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体キメラ抗体をさらに任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＮＹＡＶＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＩＩＧＲＮＧＮＴＷＹＡＳＳＡＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＧＲＳＶＡＹＹＶＦＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５３）。
本発明は、キメラ抗体ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗体またはヒト化抗体も任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＮＹＡＶＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＩＩＧＲＮＧＮＴＷＹＡＳＳＡＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＧＲＳＶＡＹＹＶＦＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＡＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４０２）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体であって、配列番号５１の可変軽鎖配列もしくは配列番号４０１の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号５３の可変重鎖配列もしくは配列番号４０２の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに任意で企図する。本発明の別の選択的な実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体断片は、配列番号５１または配列番号４０１のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体断片は、配列番号５３または配列番号４０２のポリペプチド配列を含む、あるいはポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号５１の可変軽鎖配列または配列番号４０１の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または
予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号５３の可変重鎖配列または配列番号４０２の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号５１の可変軽鎖領域；配列番号５３の可変重鎖領域；配列番号５１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７）；および配列番号５３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのキメラ抗ＮＧＦ抗体またはヒト化抗ＮＧＦ抗体は、配列番号４０１および配列番号４０２を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ２１である。
本発明のさらなる特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ２１に関して、Ｆａｂ断片は、配列番号５１の可変軽鎖配列および配列番号５３の可変重鎖配列、またはＡｂ５と同一、もしくは重複するエピトープに結合する別のＦａｂ断片もしくは一価抗体断片を含む。本発明のこの実施形態は、ＮＧＦへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号５１および／または配列番号５３への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、Ａｂ２１の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ２１などの疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体断片Ｆａｂ１
本発明は、例えば、以下に示されるように、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で抗体断片Ｆａｂ１またはその断片を使用して疼痛を治療する方法を任意で企図する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ抗体断片を任意で包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＦＴＶＳＤＩＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧ
ＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４０５）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ抗体断片をさらに任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＮＹＡＶＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＩＩＧＲＮＧＮＴＷＹＡＳＳＡＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＧＲＳＶＡＹＹＶＦＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＡＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨ（配列番号４０６）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片であって、配列番号５１の可変軽鎖配列もしくは配列番号４０５の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号５３の可変重鎖配列もしくは配列番号４０６の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体断片をさらに任意で企図する。本発明の別の選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号５１または配列番号４０５のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号５３または配列番号４０６のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、配列番号５１の可変軽鎖配列または配列番号４０５の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、配列番号５３の可変重鎖配列または配列番号４０６の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号５１の可変軽鎖領域；配列番号５３の可変重鎖領域；配列番号５１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７）；および配列番
号５３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗ＮＧＦ抗体断片は、配列番号４０５および配列番号４０６を含むＦａｂ１、またはＦａｂ１と同一の、もしくは重複するエピトープに結合し、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有する別のＦａｂもしくは抗体断片である。本発明の１つの実施形態では、抗体断片Ｆａｂ１はＡｂ２１の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。
抗体断片Ｆａｂ２
本発明は、例えば、以下に示されるように、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する治療的有効量で抗体断片Ｆａｂ２またはその断片を使用して疼痛を治療する方法を任意で企図する。１つの実施形態では、本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ抗体断片を包含する：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＦＴＶＳＤＩＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４０７）。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ抗体断片をさらに任意で包含する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＮＹＡＶＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＩＩＧＲＮＧＮＴＷＹＡＳＳＡＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＧＲＳＶＡＹＹＶＦＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＡＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨ（配列番号４０８）。
本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片であって、配列番号５１の可変軽鎖配列もしくは配列番号４０７の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７のポリペプチド配列のうちの１つ以上、ならびに／または配列番号５３の可変重鎖配列もしくは配列番号４０８の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０のポリペプチド配列のうちの１つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体断片をさらに任意で企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ以上、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列の（全てを包含する）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体の断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本発明の抗体断片は、配列番号５１または配列番号４０７のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための
本発明の抗体断片は、配列番号５３または配列番号４０８のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、配列番号５１の可変軽鎖配列または配列番号４０７の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片は、配列番号５３の可変重鎖配列または配列番号４０８の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）に対応する配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０のポリペプチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つ以上を包む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号５１の可変軽鎖領域；配列番号５３の可変重鎖領域；配列番号５１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７）；および配列番号５３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号５８、配列番号５９、および配列番号６０）。
本発明の特に好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗ＮＧＦ抗体断片は、配列番号４０７および配列番号４０８を含むＦａｂ２、またはＦａｂ２と同一の、もしくは重複するエピトープに結合し、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有する別のＦａｂもしくは抗体断片である。
本明細書において（下に）記載される本発明の別の選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、植物系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ
ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本発明の１つの実施形態では、抗体断片Ｆａｂ２は、本明細書の実施例に記載されるプロトコルを用いてピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）における発現により作製され得る。
別の実施形態では、抗体断片は、次の非限定的な形態、すなわち、Ｆａｂ抗体形態、Ｆａｂ’抗体形態、Ｆ（ａｂ’）２抗体形態、Ｆｖおよび単鎖Ｆｖ抗体形態のうち１つ以上の形態で存在し得る。好ましい実施形態では、本明細書に記載される抗ＮＧＦ抗体は以下に示される配列を含むκ定常軽鎖配列をさらに含む：
ＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４１２）。
本発明の別の好ましい選択的な実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための本明細書に記載される抗ＮＧＦ抗体は、以下に示される配列を含むγ１
定常重鎖ポリペプチド配列をさらに含む：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４１３）。
別の選択的な実施形態では、本発明は、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、１６３、１７３、１８３、１９３もしくは４０２から選択されるＶＨポリペプチド配列またはその変異体を含み、そして、配列番号１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１６１、１７１、１８１、１９１、もしくは４０１から選択されるＶＬポリペプチド配列またはその変異体をさらに含む、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための単離抗ＮＧＦ抗体であって、前記のＶＨポリペプチドまたはＶＬポリペプチド中のフレームワーク残基（ＦＲ残基）のうちの１個以上が別のアミノ酸残基で置換されており、ＮＧＦに特異的に結合する抗ＮＧＦ抗体がその結果生じる、その単離抗ＮＧＦ抗体を企図する。本発明は、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのこれらの抗体のヒト化形態およびキメラ形態を企図する。キメラ抗体は、ＩｇＧ１定常領域、ＩｇＧ２定常領域、ＩｇＧ３定常領域、ＩｇＧ４定常領域、ＩｇＧ５定常領域、ＩｇＧ６定常領域、ＩｇＧ７定常領域、ＩｇＧ８定常領域、ＩｇＧ９定常領域、ＩｇＧ１０定常領域、ＩｇＧ１１定常領域、ＩｇＧ１２定常領域、ＩｇＧ１３定常領域、ＩｇＧ１４定常領域、ＩｇＧ１５定常領域、ＩｇＧ１６定常領域、ＩｇＧ１７定常領域、ＩｇＧ１８定常領域またはＩｇＧ１９定常領域に由来するＦｃを含み得る。
本発明の１つの実施形態では、前記の抗体またはＶＨポリペプチドまたはＶＬポリペプチドは、本明細書において言及されるヒト化処理の開始前に１つ以上のウサギＢ細胞集団に起源を発する、またはその１つ以上のウサギＢ細胞集団から選択される。
本発明の別の実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗ＮＧＦ抗体およびその断片は、ｐ７５またはＴｒｋＡへの結合特異性を有しない。本発明のさらなる実施形態では、ＮＧＦのｐ７５やＴｒｋＡとの結合を阻害する抗ＮＧＦ抗体およびその断片の使用を含む、疼痛を治療するための熟慮された方法が存在する。本発明の別の実施形態では、ＮＧＦのＴｒｋＡやそのマルチマーとの結合を阻害する、および／またはそれらの生物学的効果を中和するＮＧＦ抗体およびその断片の使用を含む、疼痛を治療するための熟慮された方法が存在する。本発明の別の実施形態では、ＮＧＦのｐ７５やそのマルチマーとの結合およびＮＧＦのＴｒｋＡやそのマルチマーとの結合を阻害する、ならびにｐ７５とＴｒｋＡの生物学的効果を中和するＮＧＦ抗体およびその断片の使用を含む、疼痛を治療するための熟慮された方法が存在する。
上で述べられているように、抗体およびその断片を翻訳後に修飾して、化学リンカーなどのエフェクター部分、例えば蛍光性色素、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質および化学発光部分などの検出可能部分、または、例えばストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒素、細胞傷害剤および放射性物質などの機能性部分を付加することができる。
検出可能部分に関して、さらに例となる酵素にはホースラディッシュペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリホスファターゼ、β‐ガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼが含まれるが、これらに限定されない。さらに例となる蛍光性物質にはローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリンおよびダンシルクロリドが含まれるが、これらに限定されない。さらに例となる化学発光部分にはルミノールが含まれるが、これに限定されない。さらに例となる生物発光物質にはルシフェリンおよびイクオリンが含まれるが、これらに限定されない。さらに例となる放射性物質にはヨウ素１２５（１２５Ｉ）、炭素１４（１４Ｃ）、イオウ３５（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）およびリン３２（３２Ｐ）が含まれるが、これらに限定されない。
機能性部分に関して、例となる細胞傷害剤には、メトトレキサート、アミノプテリン、６‐メルカプトプリン、６‐チオグアニン、シタラビン、５‐フルオロウラシル デカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）；メクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ） クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１‐メチルニトロソウレア、シクロトスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ｃｉｓ‐ジクロロジアミンプラチナ（ＩＩ）（ＤＤＰ） シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン）などのアルキル化剤；ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含むアントラサイクリン類；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリケアマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む抗生物質；ならびにビンカアルカロイド、ビンクリスチンおよびビンブラスチンなどの抗有糸分裂剤が含まれるが、これらに限定されない。他の細胞傷害剤にはパクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎ）、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、１‐デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’‐（ＤＤＤ））、インターフェロン、およびこれらの細胞傷害剤の混合物が含まれる。
さらなる細胞傷害剤には、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリケアマイシン、ドキソルビシン、５‐フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびブレオマイシンなどの化学療法剤が含まれるが、これらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素および緑膿菌毒素などの植物および細菌に由来する毒性酵素をヒト化抗体またはキメラ抗体、またはそれらの結合断片と複合体化して細胞種特異的殺滅剤を作製することができる (Youle, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5483 (1980)、 Gilliland, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:4539 (1980)、 Krolick, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5419 (1980)) 。
他の細胞傷害剤には、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇにより米国特許第６，６５３，１０４号に記載される細胞傷害性リボヌクレアーゼが含まれる。本発明の実施形態は、α粒子またはβ粒子を放射する放射性核種が、複合体形成剤を使用して、または使用せずに安定的に抗体またはその結合断片に結合されている放射性免疫複合体にも関する。そのような放射性核種には、リン‐３２（３２Ｐ）、スカンジウム‐４７（４７Ｓｃ）、銅‐６７（６７Ｃ
ｕ）、ガリウム‐６７（６７Ｇａ）、イットリウム‐８８（８８Ｙ）、イットリウム‐９０（９０Ｙ）、ヨウ素‐１２５（１２５Ｉ）、ヨウ素‐１３１（１３１Ｉ）、サマリウム‐１５３（１５３Ｓｍ）、ルテチウム‐１７７（１７７Ｌｕ）、レニウム‐１８６（１８６Ｒｅ）またはレニウム‐１８８（１８８Ｒｅ）などのβ放射体、およびアスタチン‐２１１（２１１Ａｔ）、鉛‐２１２（２１２Ｐｂ）、ビスマス‐２１２（２１２Ｂｉ）もしくは‐２１３（２１３Ｂｉ）またはアクチニウム‐２２５（２２５Ａｃ）などのα放射体が含まれる。
さらに例となる放射性物質にはヨウ素１２５（１２５Ｉ）、炭素１４（１４Ｃ）、イオウ３５（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）およびリン３２（３２Ｐ）が含まれるが、これらに限定されない。
機能性部分に関して、例となる細胞傷害剤には、メトトレキサート、アミノプテリン、６‐メルカプトプリン、６‐チオグアニン、シタラビン、５‐フルオロウラシル デカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）；メクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ） クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１‐メチルニトロソウレア、シクロトスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ｃｉｓ‐ジクロロジアミンプラチナ（ＩＩ）（ＤＤＰ） シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン）などのアルキル化剤；ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含むアントラサイクリン類；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリケアマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む抗生物質；ならびにビンカアルカロイド、ビンクリスチンおよびビンブラスチンなどの抗有糸分裂剤が含まれるが、これらに限定されない。他の細胞傷害剤にはパクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎ）、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、１‐デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’‐（ＤＤＤ））、インターフェロン、およびこれらの細胞傷害剤の混合物が含まれる。
さらなる細胞傷害剤には、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリケアマイシン、ドキソルビシン、５‐フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびブレオマイシンなどの化学療法剤が含まれるが、これらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素および緑膿菌毒素などの植物および細菌に由来する毒性酵素をヒト化抗体またはキメラ抗体、またはそれらの結合断片と複合体化して細胞種特異的殺滅剤を作製することができる (Youle, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5483 (1980)、 Gilliland, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:4539 (1980)、 Krolick, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5419 (1980)) 。
他の細胞傷害剤には、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇにより米国特許第６，６５３，１０４号に記載される細胞傷害性リボヌクレアーゼが含まれる。本発明の実施形態は、α粒子またはβ粒子を放射する放射性核種が、複合体形成剤を使用して、または使用せずに安定的に抗体またはその結合断片に結合されている放射性免疫複合体にも関する。そのような放射性核種には、リン‐３２（３２Ｐ）、スカンジウム‐４７（４７Ｓｃ）、銅‐６７（６７Ｃ
ｕ）、ガリウム‐６７（６７Ｇａ）、イットリウム‐８８（８８Ｙ）、イットリウム‐９０（９０Ｙ）、ヨウ素‐１２５（１２５Ｉ）、ヨウ素‐１３１（１３１Ｉ）、サマリウム‐１５３（１５３Ｓｍ）、ルテチウム‐１７７（１７７Ｌｕ）、レニウム‐１８６（１８６Ｒｅ）またはレニウム‐１８８（１８８Ｒｅ）などのβ放射体、およびアスタチン‐２１１（２１１Ａｔ）、鉛‐２１２（２１２Ｐｂ）、ビスマス‐２１２（２１２Ｂｉ）もしくは‐２１３（２１３Ｂｉ）またはアクチニウム‐２２５（２２５Ａｃ）などのα放射体が含まれる。
抗体またはその結合断片を検出可能部分などに複合体化するための方法、例えば、Hunter et al, Nature 144:945 (1962)、 David et al, Biochemistry 13:1014 (1974)、 Pain et al, J. Immunol. Meth. 40:219 (1981)、および Nygren, J., Histochem. and Cytochem. 30:407 (1982) によって記載される方法などは当技術分野において公知である。
本明細書に記載される実施形態は、本明細書に記載される抗体、抗体断片、ジアボディ、ＳＭＩＰ、キャメルボディ、ナノボディ、ＩｇＮＡＲ、ポリペプチド、可変領域およびＣＤＲと実質的に相同である変異体および同等物をさらに包含する。これらは、例えば、保存的置換型変異（すなわち、１つ以上のアミノ酸の類似のアミノ酸による置換）を含むことができる。例えば、保存的置換は同一の一般的分類内での１つのアミノ酸の別のアミノ酸での置換、例えば、１つの酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸での置換、１つの塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸での置換、または１つの中性アミノ酸の別の中性アミノ酸による置換を指す。保存的アミノ酸置換によって企図されることは、当技術分野において周知である。
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体断片、可変領域およびＣＤＲのポリペプチド配列のうちのいずれか１つ以上に対して少なくとも９０％以上の配列相同性を有するポリペプチド配列を企図する。より好ましくは、本発明は、本明細書に記載される抗体断片、可変領域およびＣＤＲのポリペプチド配列のうちのいずれか１つ以上に対して少なくとも９５％以上の配列相同性を有するポリペプチド配列を企図し、さらにより好ましくは少なくとも９８％以上の配列相同性を企図し、およびさらに一層好ましくは少なくとも９９％以上の配列相同性を企図する。核酸配列間およびアミノ酸配列間で相同性を決定するための方法は、当業者に良く知られている。
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体断片、可変領域およびＣＤＲの上に列挙したポリペプチド相同物であって、抗ＮＧＦ活性をさらに有する相同物をさらに企図する。抗ＮＧＦ活性の非限定的な例は本明細書において示されている。
別の実施形態では、本発明は、前述の配列のいずれかに結合する抗イディオタイプ抗体の作製と使用をさらに企図する。例示的な実施形態では、そのような抗イディオタイプ抗体は、抗ＮＧＦ抗体を受容したことがある対象に投与されてその抗ＮＧＦ抗体の効果を調節する、低下させる、または中和化することができるだろう。そのような抗イディオタイプ抗体は抗ＮＧＦ抗体の存在を特徴とする自己免疫疾患の治療にも有用であるだろう。そのような抗イディオタイプ抗体のさらなる使用例は本発明の抗ＮＧＦ抗体の検出のための使用であり、例えば、対象の血液または他の体液の中に存在する抗ＮＧＦ抗体のレベルをモニターするための使用である。
本発明は、本明細書に記載されるポリペプチド配列のいずれかを含む、または本明細書に記載されるポリヌクレオチド配列のうちのいずれかであって、本明細書に記載される他のポリヌクレオチド配列のうちのいずれかに対して置換されているものを含む抗ＮＧＦ抗体も企図する。例えば、それらに限定されず、本発明は、本明細書に記載される可変軽鎖配列および可変重鎖配列のいずれかよりなる組合せを含む抗体を企図し、ならびに本明細
書に記載されるＣＤＲ配列のいずれかによる本明細書に記載される他のＣＤＲ配列のうちのいずれかの置換により生じる抗体をさらに企図する。
抗ＮＧＦ抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
抗体Ａｂ１
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体Ａｂ１ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ１ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＣＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＣＡＴＴＴＡＣＡＧＣＡＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＧＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＧＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＴＴＧＧＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＡＧＴＧＣＴＴＴＴＧＡＴＡＧＴＧＡＴＡＧＴＡＣＴＧＡＡＡＡＴＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号２０１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＣＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＣＡＴＴＴＡＣＡＧＣＡＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＧＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＧＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＴＴＧＧＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＡＧＴＧＣＴＴＴＴＧＡＴＡＧＴＧＡＴＡＧＴＡＣＴＧＡＡＡＡＴＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２０２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリ
ヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＴＣＡＴＴＡＣＴＡＧＴＡＴＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＧＴＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＣＴＡＣＧＡＴＧＡＣＴＡＴＧＡＴＧＡＧＡＴＧＡＣＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号２０３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＴＣＡＴＴＡＣＴＡＧＴＡＴＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＧＴＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＣＴＡＣＧＡＴＧＡＣＴＡＴＧＡＴＧＡＧＡＴＧＡＣＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧ
ＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号２０４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１の軽鎖可変配列または配列番号２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２０５、配列番号２０６、および配列番号２０７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３の重鎖可変配列または配列番号４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２０８、配列番号２０９、および配列番号２１０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２０１のポリヌクレオチド；配列番号２の軽鎖配列をコードする配列番号２０２のポリヌクレオチド；配列番号３の重鎖可変配列をコードする配列番号２０３のポリヌクレオチド；配列番号４の重鎖配列をコードする配列番号２０４のポリヌクレオチド；配列番号１の軽鎖可変配列または配列番号２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２０５、配列番号２０６、および配列番号２０７）；および配列番号３の重鎖可変配列または配列番号４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２０８、配列番号２０９、および配列番号２１０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ１に関して、全長のＡｂ１抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２の軽鎖配列をコードする配列番号２０２のポリヌクレオチドおよび配列番号４の重鎖配列をコードする配列番号２０４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ１の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ１ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃ
ｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ２
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体Ａｂ２ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ２ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ２ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＣＡＴＴＴＡＣＡＧＣＡＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＴＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＡＡＧＴＧＣＴＴＴＴＧＡＴＡＧＴＧＡＴＡＧＴＡＣＴＧＡＡＡＡＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号２１１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＣＡＴＴＴＡＣＡＧＣＡＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＴＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＡＡＧＴＧＣＴＴＴＴＧＡＴＡＧＴＧＡＴＡＧＴＡＣＴＧＡＡＡＡＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２１２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＧＴＣＡＴＴＡＣＴＡＧＴＡＴＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＧＴＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＡＧＣＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＣＴＡＣＧＡＴＧＡＣＴＡＴＧＡＴＧＡＧＡＴＧＡＣＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号２１３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＧＴＣＡＴＴＡＣＴＡＧＴＡＴＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＧＴＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＡＧＣＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＣＴＡＣＧＡＴＧＡＣＴＡＴＧＡＴＧＡＧＡＴＧＡＣＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番
号２１４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１１の軽鎖可変配列または配列番号１２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２１５、配列番号２１６、および配列番号２１７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１３の重鎖可変配列または配列番号１４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２１８、配列番号２１９、および配列番号２２０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２１１のポリヌクレオチド；配列番号１２の軽鎖配列をコードする配列番号２１２のポリヌクレオチド；配列番号１３の重鎖可変配列をコードする配列番号２１３のポリヌクレオチド；配列番号１４の重鎖配列をコードする配列番号２１４のポリヌクレオチド；配列番号１１の軽鎖可変配列または配列番号１２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２１５、配列番号２１６、および配列番号２１７）；および配列番号１３の重鎖可変配列または配列番号１４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２１８、配列番号２１９、および配列番号２２０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ２に関して、全長のＡｂ２抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１２の軽鎖配列をコードする配列番号２１２のポリヌクレオチドおよび配列番号１４の重鎖配列をコードする配列番号２１４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ２の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ２などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ２ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定さ
れない。
抗体Ａｂ３
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ３ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ３ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのｐ７５との結合を認識できるほど阻害することなく、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合を阻害する、その抗体Ａｂ３ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号２１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＡＣＣＡＴＣＧＣＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＡＴＧＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＣＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＡＧＧＣＧＡＴＴＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＣＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号２２１）。
本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号２２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＡＣＣＡＴＣＧＣＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＡＴＧＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＣＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＡＧＧＣＧＡＴＴＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＣＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２２２）。
本発明の別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号２３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＴＡＡＴＧＡＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＣＴＴＧＧＡＧＴＧＣＴＧＧＴＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＴＡＴＧＡＴＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号２２３）。
本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号２４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＴＡＡＴＧＡＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＣＴＴＧＧＡＧＴＧＣＴＧＧＴＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＴＡＴＧＡＴＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号２２４）。
本発明のさらなる実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体断片をコード
するポリヌクレオチドは、配列番号２１の軽鎖可変配列または配列番号２２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２２５、配列番号２２６、および配列番号２２７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２３の重鎖可変配列または配列番号２４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２２８、配列番号２２９、および配列番号２３０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号２１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２２１のポリヌクレオチド；配列番号２２の軽鎖配列をコードする配列番号２２２のポリヌクレオチド；配列番号２３の重鎖可変配列をコードする配列番号２２３のポリヌクレオチド；配列番号２４の重鎖配列をコードする配列番号２２４のポリヌクレオチド；配列番号２１の軽鎖可変配列または配列番号２２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２２５、配列番号２２６、および配列番号２２７）；および配列番号２３の重鎖可変配列または配列番号２４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２２８、配列番号２２９、および配列番号２３０）。
本発明の好ましい実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ３に関して、全長のＡｂ３抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２２の軽鎖配列をコードする配列番号２２２のポリヌクレオチドおよび配列番号２４の重鎖配列をコードする配列番号２２４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ３の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ３などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ３ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ４
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ４ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ４ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのｐ７５との結合を認識できるほど阻害することなく、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合を阻害する、その抗体Ａｂ４ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号３１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＧＧＴＴＡＴＡＣＣＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号２３１）。
本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号３２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＧＧＴＴＡＴＡＣＣＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２３２）。
本発明の別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号３３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＴＡＡＴＧＡＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＣＴＴＧＧＡＧＴＧ
ＣＴＧＧＴＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＡＧＴＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＣＴＡＴＧＡＴＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号２３３）。
本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号３４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＴＡＡＴＧＡＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＣＴＴＧＧＡＧＴＧＣＴＧＧＴＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＡＧＴＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＣＴＡＴＧＡＴＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号２３４）。
本発明のさらなる実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３１の軽鎖可変配列または配列番号３２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２３５、配列番号２３６、および配列番号２３７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるい
はそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３３の重鎖可変配列または配列番号３４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２３８、配列番号２３９、および配列番号２４０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号３１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２３１のポリヌクレオチド；配列番号３２の軽鎖配列をコードする配列番号２３２のポリヌクレオチド；配列番号３３の重鎖可変配列をコードする配列番号２３３のポリヌクレオチド；配列番号３４の重鎖配列をコードする配列番号２３４のポリヌクレオチド；配列番号３１の軽鎖可変配列または配列番号３２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２３５、配列番号２３６、および配列番号２３７）；および配列番号３３の重鎖可変配列または配列番号３４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２３８、配列番号２３９、および配列番号２４０）。
本発明の好ましい実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ４に関して、全長のＡｂ４抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３２の軽鎖配列をコードする配列番号２３２のポリヌクレオチドおよび配列番号３４の重鎖配列をコードする配列番号２３４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ４の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ４などの疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ４ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ５
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体Ａｂ５ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ５ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦ
のＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ５ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号４１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＡＧＧＴＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＡＧＣＡＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＴＴＡＣＴＧＴＴＡＧＴＧＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号２４１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号４２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＡＧＧＴＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＡＧＣＡＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＴＴＡＣＴＧＴＴＡＧＴＧＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２４２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号４３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＧＧＴＣＧＴＡＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＧＧＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣ
ＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＡＴＡＴＧＧＣＣＧＴＡＧＴＧＴＴＧＣＴＴＡＴＴＡＣＧＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号２４３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号４４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＧＧＴＣＧＴＡＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＧＧＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＡＴＡＴＧＧＣＣＧＴＡＧＴＧＴＴＧＣＴＴＡＴＴＡＣＧＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号２４４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４１の軽鎖可変配列または配列番号４２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２４５、配列番号２４６、および配列番号２４７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４３の重鎖可変配列または配列番号４４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２４８、配列番号２４９、および配列番号２５０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号４１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２４１のポリヌクレオチド；配列番号４２の軽鎖配列をコードする配列番号２４２のポリヌクレオチド；配列番号４３の重鎖可変配列をコードする配列番号２４３のポリヌクレオチド；配列番号４４の重鎖配列をコードする配列番号２４４のポリヌクレオチド；配列番号４１の軽鎖可変配列または配列番号４２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２４５、配列番号２４６、および配列番号２４７）；および配列番号４３の重鎖可変配列または配列番号４４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２４８、配列番号２４９、および配列番号２５０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ５に関して、全長のＡｂ５抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４２の軽鎖配列をコードする配列番号２４２のポリヌクレオチドおよび配列番号４４の重鎖配列をコードする配列番号２４４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ５の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の選択的な実施形態では、Ａｂ５などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ５ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ６
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ６ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ６ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ６ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使
用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号５１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＡＧＣＡＡＴＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＴＴＡＣＴＧＴＴＡＧＴＧＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号２５１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号５２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＡＧＣＡＡＴＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＴＴＡＣＴＧＴＴＡＧＴＧＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２５２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号５３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＧＧＴＣＧＴＡＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＧＧＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＡＴＡＴＧＧＣＣＧＴＡＧＴＧＴＴＧＣＴＴＡＴＴＡＣＧＴ
ＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号２５３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号５４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＧＧＴＣＧＴＡＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＧＧＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＡＴＡＴＧＧＣＣＧＴＡＧＴＧＴＴＧＣＴＴＡＴＴＡＣＧＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号２５４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５１の軽鎖可変配列または配列番号５２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２５５、配列番号２５６、および配列番号２５７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５３の重鎖可変配列または配列番号５４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２５８、配列番号２５９、および配列番号２６０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号５１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２５１のポリヌクレオチド；配列番号５２の軽鎖配列をコードする配列番号２５２のポリヌクレオチド；配列番号５３の重鎖可変配列をコードする配列番号２５３のポリヌクレオチド；配列番号５４の重鎖配列をコードする配列番号２５４のポリヌクレオチド；配列番号５１の軽鎖可変配列または配列番号５２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２５５、配列番号２５６、および配列番号２５７）；および配列番号５３の重鎖可変配列または配列番号５４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２５８、配列番号２５９、および配列番号２６０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ６に関して、全長のＡｂ６抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５２の軽鎖配列をコードする配列番号２５２のポリヌクレオチドおよび配列番号５４の重鎖配列をコードする配列番号２５４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ６の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ６などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ６ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ７
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ７ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ７ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ７ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用を任意でさらに対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛およ
び疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号６１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＧＡＴＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＣＡＡＣＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＧＡＣＡＴＴＴＡＴＡＡＣＴＴＡＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＣＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＡＡＣＡＡＴＴＡＴＣＴＴＧＴＴＡＣＴＡＣＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号２６１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号６２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＧＡＴＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＣＡＡＣＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＧＡＣＡＴＴＴＡＴＡＡＣＴＴＡＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＣＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＡＡＣＡＡＴＴＡＴＣＴＴＧＴＴＡＣＴＡＣＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２６２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号６３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＴＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＴＡＣＡＴＴＧＡＴＡＣＴＧＡＴＡＣＴＡＧＣＧＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＣＡＡＡＡＴＣＡＣＴＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＴＣＴＴＡＴＧＣＴＧＣＴＴＡＴＧＧＴＧＧＴＴＡＴＣＣＴＧＣＴＡＣＴＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ
（配列番号２６３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号６４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＴＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＴＡＣＡＴＴＧＡＴＡＣＴＧＡＴＡＣＴＡＧＣＧＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＣＡＡＡＡＴＣＡＣＴＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＴＣＴＴＡＴＧＣＴＧＣＴＴＡＴＧＧＴＧＧＴＴＡＴＣＣＴＧＣＴＡＣＴＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号２６４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６１の軽鎖可変配列または配列番号６２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２６５、配列番号２６６、および配列番号２６７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛お
よび疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６３の重鎖可変配列または配列番号６４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２６８、配列番号２６９、および配列番号２７０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号６１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２６１のポリヌクレオチド；配列番号６２の軽鎖配列をコードする配列番号２６２のポリヌクレオチド；配列番号６３の重鎖可変配列をコードする配列番号２６３のポリヌクレオチド；配列番号６４の重鎖配列をコードする配列番号２６４のポリヌクレオチド；配列番号６１の軽鎖可変配列または配列番号６２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２６５、配列番号２６６、および配列番号２６７）；および配列番号６３の重鎖可変配列または配列番号６４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２６８、配列番号２６９、および配列番号２７０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ７に関して、全長のＡｂ７抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６２の軽鎖配列をコードする配列番号２６２のポリヌクレオチドおよび配列番号６４の重鎖配列をコードする配列番号２６４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ７の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ７などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ７ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ８
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ８ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ８ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ８ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに任意で対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレ
オチドは、配列番号７１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＧＡＣＡＴＴＴＡＣＡＡＣＴＴＡＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＣＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＡＡＣＡＡＣＴＡＴＣＴＴＧＴＴＡＣＴＡＣＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号２７１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号７２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＧＡＣＡＴＴＴＡＣＡＡＣＴＴＡＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＣＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＡＡＣＡＡＣＴＡＴＣＴＴＧＴＴＡＣＴＡＣＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２７２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号７３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＴＡＣＡＴＴＧＡＴＡＣＴＧＡＴＡＣＴＡＧＣＧＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＴＣＴＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＴＣＴＴＡＴＧＣＴＧＣＴＴＡＴＧＧＴＧＧＴＴＡＴＣＣＴＧＣＴＡＣＴＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号２７３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号７４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＴＡＣＡＴＴＧＡＴＡＣＴＧＡＴＡＣＴＡＧＣＧＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＴＣＴＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＴＣＴＴＡＴＧＣＴＧＣＴＴＡＴＧＧＴＧＧＴＴＡＴＣＣＴＧＣＴＡＣＴＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号２７４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号７１の軽鎖可変配列または配列番号７２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２７５、配列番号２７６、および配列番号２７７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号７３の重鎖可変配列または配列番号７４の重鎖配列の相補性決定領域（Ｃ
ＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２７８、配列番号２７９、および配列番号２８０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号７１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２７１のポリヌクレオチド；配列番号７２の軽鎖配列をコードする配列番号２７２のポリヌクレオチド；配列番号７３の重鎖可変配列をコードする配列番号２７３のポリヌクレオチド；配列番号７４の重鎖配列をコードする配列番号２７４のポリヌクレオチド；配列番号７１の軽鎖可変配列または配列番号７２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２７５、配列番号２７６、および配列番号２７７）；および配列番号７３の重鎖可変配列または配列番号７４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２７８、配列番号２７９、および配列番号２８０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ８に関して、全長のＡｂ８抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号７２の軽鎖配列をコードする配列番号２７２のポリヌクレオチドおよび配列番号７４の重鎖配列をコードする配列番号２７４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ８の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ８などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ８ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ９
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ９ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ９ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ９ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに任意で対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号８１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド
配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＡＡＣＡＴＴＧＧＴＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＧＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＧＧＧＣＧＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＡＴＡＧＴＧＡＧＡＡＴＣＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号２８１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号８２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＡＡＣＡＴＴＧＧＴＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＧＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＧＧＧＣＧＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＡＴＡＧＴＧＡＧＡＡＴＣＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２８２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号８３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＧＡＣＣＴＣＡＧＴＡＴＧＴＡＴＴＣＡＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＧＴＧＧＴＡＣＴＧＣＡＴＡＴＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＴＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＡＣＴＣＣＴＧＴＴＡＡＴＴＡＴＴＡＴＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号２８３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号８４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリ
ヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＧＡＣＣＴＣＡＧＴＡＴＧＴＡＴＴＣＡＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＧＴＧＧＴＡＣＴＧＣＡＴＡＴＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＴＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＡＣＴＣＣＴＧＴＴＡＡＴＴＡＴＴＡＴＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号２８４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号８１の軽鎖可変配列または配列番号８２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２８５、配列番号２８６、および配列番号２８７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号８３の重鎖可変配列または配列番号８４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２８８、配列番号２８９、および配列番号２９０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号８１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２８１のポリヌクレオチド；配列番号８２の軽鎖配列をコードする配列番号２８２のポリヌクレオチド；配列番号８３の重鎖可変配列をコードする配列番号２８３のポリヌクレオチド；配列番号８４の重鎖配列をコードする配列番号２８４のポリヌクレオチド；配列番号８１の軽鎖可変配列または配列番号８２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２８５、配列番号２８６、および配列番号２８７）；および配列番号８３の重鎖可変配列または配列番号８４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２８８、配列番号２８９、および配列番号２９０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ９に関して、全長のＡｂ９抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号８２の軽鎖配列をコードする配列番号２８２のポリヌクレオチドおよび配列番号８４の重鎖配列をコードする配列番号２８４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ９の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ９などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ９ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１０
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ１０ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１０ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ１０ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに任意で対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号９１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴ
ＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＡＡＣＡＴＴＧＧＴＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＣＡＡＴＡＧＴＧＡＧＡＡＴＣＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号２９１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号９２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＡＡＣＡＴＴＧＧＴＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＣＡＡＴＡＧＴＧＡＧＡＡＴＣＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２９２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号９３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＴＧＴＡＴＴＣＡＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＧＴＧＧＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＴＡＧＣＡＧＣＧＣＴＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＴＣＴＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＧＡＣＴＣＣＴＧＴＴＡＡＴＴＡＣＴＡＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号２９３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号９４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＴＧＴＡＴＴＣＡＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＧＴＧＧＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＴＡＧＣＡＧＣＧＣＴＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＴＣＴＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＧＡＣＴＣＣＴＧＴＴＡＡＴＴＡＣＴＡＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号２９４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号９１の軽鎖可変配列または配列番号９２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２９５、配列番号２９６、および配列番号２９７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号９３の重鎖可変配列または配列番号９４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２９８、配列番号２９９、および配列番号３００のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のた
めの抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号９１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２９１のポリヌクレオチド；配列番号９２の軽鎖配列をコードする配列番号２９２のポリヌクレオチド；配列番号９３の重鎖可変配列をコードする配列番号２９３のポリヌクレオチド；配列番号９４の重鎖配列をコードする配列番号２９４のポリヌクレオチド；配列番号９１の軽鎖可変配列または配列番号９２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２９５、配列番号２９６、および配列番号２９７）；および配列番号９３の重鎖可変配列または配列番号９４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２９８、配列番号２９９、および配列番号３００）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ１０に関して、全長のＡｂ１０抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号９２の軽鎖配列をコードする配列番号２９２のポリヌクレオチドおよび配列番号９４の重鎖配列をコードする配列番号２９４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ１０の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１０などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ１０ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１１
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ１１ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１１ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ１１ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１０１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＡＴＴＣＧＡＡＴＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＡＧＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＣＡＴＴＧＴＴＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡ
ＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＴＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＧＡＧＣＴＡＴＧＡＴＧＧＴＴＴＴＡＡＴＡＧＴＧＣＴＧＧＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号３０１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１０２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＡＴＴＣＧＡＡＴＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＡＧＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＣＡＴＴＧＴＴＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＴＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＧＡＧＣＴＡＴＧＡＴＧＧＴＴＴＴＡＡＴＡＧＴＧＣＴＧＧＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号３０２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１０３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＣＴＣＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＴＴＡＴＧＣＴＧＧＴＣＣＴＡＡＴＧＣＴＧＧＴＡＴＣＧＧＡＣＣＧＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号３０３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１０４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣ
ＣＣＴＣＡＧＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＣＴＣＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＴＴＡＴＧＣＴＧＧＴＣＣＴＡＡＴＧＣＴＧＧＴＡＴＣＧＧＡＣＣＧＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡｃＣＣＴＣＣＴＣＣａＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号３０４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１０１の軽鎖可変配列または配列番号１０２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３０５、配列番号３０６、および配列番号３０７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１０３の重鎖可変配列または配列番号１０４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３０８、配列番号３０９、および配列番号３１０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチ
ド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１０１の軽鎖可変配列をコードする配列番号３０１のポリヌクレオチド；配列番号１０２の軽鎖配列をコードする配列番号３０２のポリヌクレオチド；配列番号１０３の重鎖可変配列をコードする配列番号３０３のポリヌクレオチド；配列番号１０４の重鎖配列をコードする配列番号３０４のポリヌクレオチド；配列番号１０１の軽鎖可変配列または配列番号１０２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３０５、配列番号３０６、および配列番号３０７）；および配列番号１０３の重鎖可変配列または配列番号１０４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３０８、配列番号３０９、および配列番号３１０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ１１に関して、全長のＡｂ１１抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１０２の軽鎖配列をコードする配列番号３０２のポリヌクレオチドおよび配列番号１０４の重鎖配列をコードする配列番号３０４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ１１の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の選択的な実施形態では、Ａｂ１１などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ１１ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１２
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ１２ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１２ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ１２ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに任意で対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１１１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＡＴＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＣＡＴＴＧＴＴＡＣＣＡＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣ
ＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＧＣＴＡＴＧＡＴＧＧＴＴＴＣＡＡＴＡＧＴＧＣＴＧＧＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号３１１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１１２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＡＴＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＣＡＴＴＧＴＴＡＣＣＡＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＧＣＴＡＴＧＡＴＧＧＴＴＴＣＡＡＴＡＧＴＧＣＴＧＧＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号３１２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１１３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＧＡＣＴＣＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＣＣＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＴＣＴＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＡＧＴＣＴＴＴＡＴＧＣＴＧＧＴＣＣＴＡＡＴＧＣＴＧＧＴＡＴＣＧＧＡＣＣＧＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号３１３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１１４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴ
ＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＧＡＣＴＣＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＣＣＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＴＣＴＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＡＧＴＣＴＴＴＡＴＧＣＴＧＧＴＣＣＴＡＡＴＧＣＴＧＧＴＡＴＣＧＧＡＣＣＧＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号３１４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１１１の軽鎖可変配列または配列番号１１２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３１５、配列番号３１６、および配列番号３１７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１１３の重鎖可変配列または配列番号１１４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３１８、配列番号３１９、および配列番号３２０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有
する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１１１の軽鎖可変配列をコードする配列番号３１１のポリヌクレオチド；配列番号１１２の軽鎖配列をコードする配列番号３１２のポリヌクレオチド；配列番号１１３の重鎖可変配列をコードする配列番号３１３のポリヌクレオチド；配列番号１１４の重鎖配列をコードする配列番号３１４のポリヌクレオチド；配列番号１１１の軽鎖可変配列または配列番号１１２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３１５、配列番号３１６、および配列番号３１７）；および配列番号１１３の重鎖可変配列または配列番号１１４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３１８、配列番号３１９、および配列番号３２０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ１２に関して、全長のＡｂ１２抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１１２の軽鎖配列をコードする配列番号３１２のポリヌクレオチドおよび配列番号１１４の重鎖配列をコードする配列番号３１４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ１２の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１２などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ１２ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１３
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ１３ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１３ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ１３ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに任意で対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１２１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＧＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＧＧ
ＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＧＴＧＴＧＡＣＧＣＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＧＧＴＴＡＴＡＣＣＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号３２１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１２２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＧＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＧＴＧＴＧＡＣＧＣＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＧＧＴＴＡＴＡＣＣＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡ（配列番号３２２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１２３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＡＣＡＴＴＴＡＴＴＴＴＡＧＴＡＡＴＧＡＡＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＴＧＴＣＡＴＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＴＴＣＴＣＣＴＧＡＴＧＴＴＧＡＴＡＴＴＧＧＴＡＴＡＧＡＴＡＴＧＴＧＧＧＧＣＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号３２３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１２４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＡＣＡＴＴＴＡＴＴＴＴＡＧＴＡ
ＡＴＧＡＡＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＴＧＴＣＡＴＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＴＴＣＴＣＣＴＧＡＴＧＴＴＧＡＴＡＴＴＧＧＴＡＴＡＧＡＴＡＴＧＴＧＧＧＧＣＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号３２４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１２１の軽鎖可変配列または配列番号１２２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３２５、配列番号３２６、および配列番号３２７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１２３の重鎖可変配列または配列番号１２４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３２８、配列番号３２９、および配列番号３３０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、
または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１２１の軽鎖可変配列をコードする配列番号３２１のポリヌクレオチド；配列番号１２２の軽鎖配列をコードする配列番号３２２のポリヌクレオチド；配列番号１２３の重鎖可変配列をコードする配列番号３２３のポリヌクレオチド；配列番号１２４の重鎖配列をコードする配列番号３２４のポリヌクレオチド；配列番号１２１の軽鎖可変配列または配列番号１２２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３２５、配列番号３２６、および配列番号３２７）；および配列番号１２３の重鎖可変配列または配列番号１２４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３２８、配列番号３２９、および配列番号３３０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ１３に関して、全長のＡｂ１３抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１２２の軽鎖配列をコードする配列番号３２２のポリヌクレオチドおよび配列番号１２４の重鎖配列をコードする配列番号３２４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ１３の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１３などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ１３ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１４
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ１４ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１４ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ１４ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに任意で対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１３１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＧＧＴＴ
ＡＴＡＣＣＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号３３１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１３２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＧＧＴＴＡＴＡＣＣＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号３３２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１３３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＧＡＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＡＧＴＡＡＴＧＡＡＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＡＧＣＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＴＴＣＴＣＣＴＧＡＴＧＴＴＧＡＴＡＴＴＧＧＴＡＴＡＧＡＴＡＴＧＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号３３３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１３４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＧＡＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＡＧＴＡＡＴＧＡＡＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＡＧＣＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴ
ＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＴＴＣＴＣＣＴＧＡＴＧＴＴＧＡＴＡＴＴＧＧＴＡＴＡＧＡＴＡＴＧＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号３３４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１３１の軽鎖可変配列または配列番号１３２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３３５、配列番号３３６、および配列番号３３７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１３３の重鎖可変配列または配列番号１３４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３３８、配列番号３３９、および配列番号３４０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１３１の
軽鎖可変配列をコードする配列番号３３１のポリヌクレオチド；配列番号１３２の軽鎖配列をコードする配列番号３３２のポリヌクレオチド；配列番号１３３の重鎖可変配列をコードする配列番号３３３のポリヌクレオチド；配列番号１３４の重鎖配列をコードする配列番号３３４のポリヌクレオチド；配列番号１３１の軽鎖可変配列または配列番号１３２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３３５、配列番号３３６、および配列番号３３７）；および配列番号１３３の重鎖可変配列または配列番号１３４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３３８、配列番号３３９、および配列番号３４０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ１４に関して、全長のＡｂ１４抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１３２の軽鎖配列をコードする配列番号３３２のポリヌクレオチドおよび配列番号１３４の重鎖配列をコードする配列番号３３４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ１４の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１４などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ１４ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１５
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ１５ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１５ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのｐ７５との結合を認識できるほど阻害することなく、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合を阻害する、その抗体Ａｂ１５ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１４１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＡＣＣＡＴＣＧＣＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＣＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＡＧＧＣＧＡＴＴＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＣＴＧＡＴＡＡＴＧＧＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡ
ＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号３４１）。
本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１４２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＡＣＣＡＴＣＧＣＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＣＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＡＧＧＣＧＡＴＴＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＣＴＧＡＴＡＡＴＧＧＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号３４２）。
本発明の別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１４３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＧＡＣＣＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＴＧＧＡＧＴＧＧＴＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＧＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＧＣＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＴＡＴＧＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＣＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号３４３）。
本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１４４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＧＡＣＣＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＴＧＧＡＧＴＧＧＴＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＧＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＧＣＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＴＡＴＧＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＣＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴ
ＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号３４４）。
本発明のさらなる実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４１の軽鎖可変配列または配列番号１４２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３４５、配列番号３４６、および配列番号３４７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４３の重鎖可変配列または配列番号１４４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３４８、配列番号３４９、および配列番号３５０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１４１の軽鎖可変配列をコードする配列番号３４１のポリヌクレオチド；配列番号１４２の軽鎖配列をコードする配列番号３４２のポリヌクレオチド；配列番号１４３の重鎖可変配列をコードする配列番号３４３のポリヌクレオチド；配列番号１４４の重鎖配列をコードする配列番号
３４４のポリヌクレオチド；配列番号１４１の軽鎖可変配列または配列番号１４２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３４５、配列番号３４６、および配列番号３４７）；および配列番号１４３の重鎖可変配列または配列番号１４４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３４８、配列番号３４９、および配列番号３５０）。
本発明の好ましい実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ１５に関して、全長のＡｂ１５抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４２の軽鎖配列をコードする配列番号３４２のポリヌクレオチドおよび配列番号１４４の重鎖配列をコードする配列番号３４４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ１５の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１５などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ１５ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１６
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体Ａｂ１６ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１６ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのｐ７５との結合を認識できるほど阻害することなく、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合を阻害する、その抗体Ａｂ１６ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１５１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＣＴＧＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＡＣＧＴＣＴＧＡＡＣＣＡＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＴＧＣＣＡＧＧＣＴＡＧＴＣＡＧＡＡＴＡＴＴＧＧＴＡＡＣＧＡＣＣＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＧＡＧＣＴＣＣＴＡＡＴＣＴＡＴＴＣＴＡＣＡＴＣＣＡＡＡＣＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＡＡＧＣＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＡＧＧＴＧＴＴＴＡＴＡＧＴＴＡＴＡＴＴＡＧＴＧＡＴＧＡＴＧＧＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号３５１）。
本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１５２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＣＴＧＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＡＣＧＴＣＴＧＡＡＣＣＡＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＴＧＣＣＡＧＧＣＴＡＧＴＣＡＧＡＡＴＡＴＴＧＧＴＡＡＣＧＡＣＣＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＧＡＧＣＴＣＣＴＡＡＴＣＴＡＴＴＣＴＡＣＡＴＣＣＡＡＡＣＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＡＡＧＣＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＡＧＧＴＧＴＴＴＡＴＡＧＴＴＡＴＡＴＴＡＧＴＧＡＴＧＡＴＧＧＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号３５２）。
本発明の別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１５３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＴＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＡＴＡＡＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＧＡＴＣＡＴＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＴＴＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＴＴＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＴＧＣＴＧＧＣＧＴＴＡＣＴＧＴＴＧＡＴＧＧＴＴＡＴＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号３５３）。
本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１５４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＴＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＡＴＡＡＣＴＡＴＧＣＡＡＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＧＡＴＣＡＴＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＴＴＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＴＴＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＴＧＣＴＧＧＣＧＴＴＡＣＴＧＴＴＧＡＴＧＧＴＴＡＴＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ
ＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号３５４）。
本発明のさらなる実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１５１の軽鎖可変配列または配列番号１５２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３５５、配列番号３５６、および配列番号３５７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１５３の重鎖可変配列または配列番号１５４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３５８、配列番号３５９、および配列番号３６０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１５１の軽鎖可変配列をコードする配列番号３５１のポリヌクレオチド；配列番号１５２の軽鎖配列をコードする配列番号３５２のポリヌクレオチド；配列番号１５３の重鎖可変配列をコードする配列番号３５３のポリヌクレオチド；配列番号１５４の重鎖配列をコードする配列番号
３５４のポリヌクレオチド；配列番号１５１の軽鎖可変配列または配列番号１５２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３５５、配列番号３５６、および配列番号３５７）；および配列番号１５３の重鎖可変配列または配列番号１５４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３５８、配列番号３５９、および配列番号３６０）。
本発明の好ましい実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ１６に関して、全長のＡｂ１６抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１５２の軽鎖配列をコードする配列番号３５２のポリヌクレオチドおよび配列番号１５４の重鎖配列をコードする配列番号３５４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ１６の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１６などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ１６ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１７
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ１７ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１７ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのｐ７５との結合を認識できるほど阻害することなく、ＮＧＦのＴｒｋＡとの結合を阻害する、その抗体Ａｂ１７ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに任意で対象とする。本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１６１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＡＴＣＧＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＴＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＣＴＡＴＣＡＧＴＡＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号３６１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１６２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＡＴＣＧＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＴＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＣＴＡＴＣＡＧＴＡＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号３６２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１６３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＧＧＡＴＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＣＴＧＧＣＴＡＣＡＡＣＴＴＧＧＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＴＴＣＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＡＣＴＣＴＧＡＣＧＡＴＣＡＣＣＧＡＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＴＣＡＧＡＣＡＣＧＧＧＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＡＣＴＧＣＴＡＡＴＡＣＴＴＡＴＧＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号３６３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１６４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＧＧＡＴＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＣＴＧＧＣＴＡＣＡＡＣＴＴＧＧＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＴＴＣＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＡＣＴＣＴＧＡＣＧＡＴＣＡＣＣＧＡＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＴＣＡＧＡＣＡＣＧＧＧＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＡＣＴＧＣＴＡＡＴＡＣＴＴＡＴＧＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴ
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本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１６１の軽鎖可変配列または配列番号１６２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３６５、配列番号３６６、および配列番号３６７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１６３の重鎖可変配列または配列番号１６４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３６８、配列番号３６９、および配列番号３７０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１６１の軽鎖可変配列をコードする配列番号３６１のポリヌクレオチド；配列番号１６２の軽鎖配列をコードする配列番号３６２のポリヌクレオチド；配列番号１６３の重鎖可変配列をコードする配列番号３６３のポリヌクレオチド；配列番号１６４の重鎖配列をコードする配列番号３６４のポリヌクレオチド；配列番号１６１の軽鎖可変配列または配列番号１６２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３６５、配列番号
３６６、および配列番号３６７）；および配列番号１６３の重鎖可変配列または配列番号１６４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３６８、配列番号３６９、および配列番号３７０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ１７に関して、全長のＡｂ１７抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１６２の軽鎖配列をコードする配列番号３６２のポリヌクレオチドおよび配列番号１６４の重鎖配列をコードする配列番号３６４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ１７の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１７などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ１７ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１８
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ１８ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１８ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ１８ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１７１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＡＧＧＣＴＡＧＴＣＡＧＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＣＴＡＴＣＡＧＴＡＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号３７１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１７２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＡＧＧＣＴＡＧＴＣＡＧＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＣＴＡＴＣＡＧＴＡＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号３７２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１７３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＧＧＣＴＡＣＡＡＣＴＴＧＧＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＴＣＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＴＡＧＣＴＣＴＧＣＴＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＧＡＣＴＧＣＴＡＡＴＡＣＴＴＡＴＧＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号３７３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１７４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＧＧＣＴＡＣＡＡＣＴＴＧＧＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＴＣＡＴＴＡＧＴＴＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＴＡＧＣＴＣＴＧＣＴＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＧＡＣＴＧＣＴＡＡＴＡＣＴＴＡＴＧＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣ
ＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号３７４）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１７１の軽鎖可変配列または配列番号１７２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３７５、配列番号３７６、および配列番号３７７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１７３の重鎖可変配列または配列番号１７４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３７８、配列番号３７９、および配列番号３８０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１７１の軽鎖可変配列をコードする配列番号３７１のポリヌクレオチド；配列番号１７２の軽鎖配列をコードする配列番号３７２のポリヌクレオチド；配列番号１７３の重鎖可変配列をコードする配列番号３７３のポリヌクレオチド；配列番号１７４の重鎖配列をコードする配列番号３７４のポリヌクレオチド；配列番号１７１の軽鎖可変配列または配列番号１７２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３７５、配列番号３７６、および配列番号３７７）；および配列番号１７３の重鎖可変配列または配列番号１７４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３
７８、配列番号３７９、および配列番号３８０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ１８に関して、全長のＡｂ１８抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１７２の軽鎖配列をコードする配列番号３７２のポリヌクレオチドおよび配列番号１７４の重鎖配列をコードする配列番号３７４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ１８の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１８などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ１８ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ１９
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ１９ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１９ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ１９ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに任意で対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１８１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＧＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＧＴＧＴＧＡＣＧＣＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＧＧＴＴＡＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号３８１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１８２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＣＣＧＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＧＴＧＴＧＡＣＧＣＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＧＧＴＴＡＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号３８２）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１８３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＴＣＴＧＧＴＣＡＴＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＴＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＡＣＡＴＴＴＡＴＴＴＴＡＧＴＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＴＧＴＣＡＴＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＧＴＴＣＴＣＣＴＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＴＴＧＣＴＡＴＡＧＡＴＡＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号３８３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１８４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＴＣＴＧＧＴＣＡＴＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＴＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＡＣＡＴＴＴＡＴＴＴＴＡＧＴＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＴＧＴＣＡＴＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＧＴＴＣＴＣＣＴＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＴＴＧＣＴＡＴＡＧＡＴＡＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣ
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本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１８１の軽鎖可変配列または配列番号１８２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３８５、配列番号３８６、および配列番号３８７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１８３の重鎖可変配列または配列番号１８４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３８８、配列番号３８９、および配列番号３９０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１８１の軽鎖可変配列をコードする配列番号３８１のポリヌクレオチド；配列番号１８２の軽鎖配列をコードする配列番号３８２のポリヌクレオチド；配列番号１８３の重鎖可変配列をコードする配列番号３８３のポリヌクレオチド；配列番号１８４の重鎖配列をコードする配列番号３８４のポリヌクレオチド；配列番号１８１の軽鎖可変配列または配列番号１８２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３８５、配列番号３８６、および配列番号３８７）；および配列番号１８３の重鎖可変配列または配列番号１８４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３８８、配列番号３８９、および配列番号３９０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ１９に関して、全長のＡｂ１９抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１８２の軽鎖配列をコードする配列番号３８２のポリヌクレオチドおよび配列番号１８４の重鎖配列をコードする配列番号３８４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ１９の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１９などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ１９ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ２０
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体Ａｂ２０ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ２０ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ２０ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１９１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＧＧＴＴＡＴＡＣＣＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号３９１）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１９２の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡ
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本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１９３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＧＡＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＡＧＴＡＡＴＧＡＡＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＴＴＣＴＣＣＴＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＴＴＧＣＴＡＴＡＧＡＴＡＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号３９３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１９４の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＧＡＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＡＧＴＡＡＴＧＡＡＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＴＴＣＴＣＣＴＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＴＴＧＣＴＡＴＡＧＡＴＡＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣ
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本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１９１の軽鎖可変配列または配列番号１９２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３９５、配列番号３９６、および配列番号３９７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１９３の重鎖可変配列または配列番号１９４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号３９８、配列番号３９９、および配列番号４００のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号１９１の軽鎖可変配列をコードする配列番号３９１のポリヌクレオチド；配列番号１９２の軽鎖配列をコードする配列番号３９２のポリヌクレオチド；配列番号１９３の重鎖可変配列をコードする配列番号３９３のポリヌクレオチド；配列番号１９４の重鎖配列をコードする配列番号３９４のポリヌクレオチド；配列番号１９１の軽鎖可変配列または配列番号１９２の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３９５、配列番号３９６、および配列番号３９７）；および配列番号１９３の重鎖可変配列または配列番号１９４の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号３９８、配列番号３９９、および配列番号４００）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ２０に関して、全長のＡｂ２０抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１９２の軽鎖配列をコードする配列番号３９２のポリヌクレオチドおよび配列番号１９４の重鎖配列をコードする配列番号３９４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ２０の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ２０などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ２０ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体Ａｂ２１
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する抗体Ａｂ２１ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ２１ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡとの結合およびＮＧＦのｐ７５との結合を阻害する、その抗体Ａｂ２１ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに任意で対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号５１の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＡＧＣＡＡＴＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＴＴＡＣＴＧＴＴＡＧＴＧＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴ（配列番号２５１）。
本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号４０１の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を任意で含む、あるいはそのポリペプチド配列から任意でなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＡＧＣＡＡＴＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡ
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本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号５３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＧＧＴＣＧＴＡＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＧＧＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＡＴＡＴＧＧＣＣＧＴＡＧＴＧＴＴＧＣＴＴＡＴＴＡＣＧＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ（配列番号２５３）。
本発明の１つの選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号４０２の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＧＧＴＣＧＴＡＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＧＧＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＡＴＡＴＧＧＣＣＧＴＡＧＴＧＴＴＧＣＴＴＡＣＴＡＣＧＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡ
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本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５１の軽鎖可変配列または配列番号４０１の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２５５、配列番号２５６、および配列番号２５７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５３の重鎖可変配列または配列番号４０２の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２５８、配列番号２５９、および配列番号２６０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上からなる。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号５１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２５１のポリヌクレオチド；配列番号４０１の軽鎖配列をコードする配列番号４０３のポリヌクレオチド；配列番号５３の重鎖可変配列をコードする配列番号２５３のポリヌクレオチド；配列番号４０２の重鎖配列をコードする配列番号４０４のポリヌクレオチド；配列番号５１の軽鎖可変配列または配列番号４０１の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２５５、配列番号２５６、および配列番号２５７）；および配列番号５３の重鎖可変配列または配列番号４０２の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２５８、配列番号２５９、および配列番号２６０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結
合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体Ａｂ２１に関して、全長のＡｂ２１抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４０１の軽鎖配列をコードする配列番号４０３のポリヌクレオチドおよび配列番号４０２の重鎖配列をコードする配列番号４０４のポリヌクレオチドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
本発明の別の選択的な実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの選択的な実施形態では、Ｆａｂ断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ａｂ２１の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ２１などの抗ＮＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＡｂ２１ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
抗体断片Ｆａｂ２
本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片Ｆａｂ２ポリペプチドであって、個体において疼痛を治療する方法であり、前記の個体に抗体Ａｂ１ポリペプチドを投与することを含む方法においてＮＧＦのＴｒｋＡおよびｐ７５との結合を阻害する、その抗体断片Ｆａｂ２ポリペプチドを作製するための以下に示されるポリヌクレオチドの使用をさらに任意で対象とする。本発明は、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の１つの実施形態では、本発明のＦａｂポリヌクレオチドは、配列番号４０７の軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＡＧＣＡＡＴＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＴＴＡＣＴＧＴＴＡＧＴＧＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号４０９）。
本発明の別の選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号４０８の重鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＧＧＴＣＧＴＡＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＧＧＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＡＴＡＴＧＧＣＣＧＴＡＧＴＧＴＴＧＣＴＴＡＣＴＡＣＧＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＧＣＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＴＡＧ（配列番号４１０）。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有するＦａｂ抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５１の軽鎖可変配列または配列番号４０９の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２５５、配列番号２５６、および配列番号２５７のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む。
本発明のさらなる選択的な実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のためのＦａｂ抗体断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５３の重鎖可変配列または配列番号４１０の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号２５８、配列番号２５９、および配列番号２６０のポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む。
本発明は、本明細書に記載される疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むポリヌクレオチド配列も任意で企図する。本発明の１つの実施形態では、ＮＧＦに対する結合特異性を有する、疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療または予防のための抗体断片をコードするポリヌクレオチド抗体断片をコードする次のポリヌクレオチドのうちの１つ、２つ、３つ、または全てを含むそれより多くを包含する、あるいはそれらからなる：配列番号５１の軽鎖可変配列をコードする配列番号２５１のポリヌクレオチド；配列番号４０７の軽鎖配列をコードする配列番号４０９のポリヌクレオチド；配列番号５３の重鎖可変配列をコードする配列番号２５３のポリヌクレオチド；配列番号４０８の重鎖配列をコードする配列番号４１０のポリヌクレオチド；配列番号５１の軽鎖可変配列または配列番号４０７の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２５５、配列番号２５６、および配列番号２５７）；および配列番号５３の重鎖可変配列または配列番号４０８の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２５８、配列番号２
５９、および配列番号２６０）。
本発明の好ましい選択的な実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＧＦへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）をコードするポリヌクレオチドを含む、あるいはそのポリヌクレオチドからなる。抗体断片Ｆａｂ２に関して、Ｆａｂ断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４０７の軽鎖配列をコードする配列番号４０９のポリヌクレオチドおよび配列番号４０８の重鎖配列をコードする配列番号４１０のポリヌクレオチドを含む。
本発明の別の実施形態は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、ピキア酵母などの酵母細胞における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。本明細書において（下に）記載される本発明の１つの実施形態では、Ｆａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞もしくはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、または真菌系、昆虫系、植物系または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）および他の酵母株におけるＦａｂ２ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれるが、これに限定されない。
１つの実施形態では、本発明は、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、１６３、１７３、１８３、１９３もしくは４０２から選択される抗ＮＧＦ ＶＨ抗体のアミノ酸配列をコードする、または少なくとも１つのフレームワーク残基（ＦＲ残基）がウサギ抗ＮＧＦ抗体のＶＨポリペプチド中の対応する位置に存在するアミノ酸で置換されている、もしくは保存的アミノ酸置換により置換されている変異体をコードするポリヌクレオチドを含む単離ポリヌクレオチドを任意で対象とする。
別の選択的な実施形態では、本発明は、１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１６１、１７１、１８１、１９１もしくは４０１の抗ＮＧＦ ＶＬ抗体のアミノ酸配列をコードする、または少なくとも１つのフレームワーク残基（ＦＲ残基）がウサギ抗ＮＧＦ抗体のＶＬポリペプチド中の対応する位置に存在するアミノ酸で置換されている、もしくは保存的アミノ酸置換により置換されている変異体をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチドを対象とする。
さらに別の選択的な実施形態では、本発明は、配列番号１および配列番号３、配列番号１１および配列番号１３、配列番号２１および配列番号２３、配列番号３１および配列番号３３、配列番号４１１および配列番号４３、配列番号５１および配列番号５３、配列番号６１および配列番号６３、配列番号７１および配列番号７３、配列番号８１および配列番号８３、配列番号９１および配列番号９３、配列番号１０１および配列番号１０３、配列番号１１１および配列番号１１３、配列番号１２１および配列番号１２３、配列番号１３１および配列番号１３３、配列番号１４１および配列番号１４３、配列番号１５１および配列番号１５３、配列番号１６１および配列番号１６３、配列番号１７１および配列番号１７３、配列番号１８１および配列番号１８３、配列番号１９１および配列番号１９３、または配列番号４０１および配列番号４０３に含まれるポリペプチドをコードする配列を含む１つ以上の異種性ポリヌクレオチドを対象とする。
別の実施形態では、本発明は、抗ＮＧＦ抗体に由来する少なくとも１つのＣＤＲポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記の発現したポリペプチドだけでＮＧＦに特異的
に結合するポリペプチド、または疼痛および疼痛を伴う健康状態の治療もしくは予防のための抗ＮＧＦ抗体に由来する少なくとも１つのＣＤＲポリペプチドを含むポリペプチドを発現する別のポリヌクレオチド配列と併せて発現すると、前記の発現したポリペプチドがＮＧＦに特異的に結合する、前記の少なくとも１つのＣＤＲが配列番号１、３、１１、１３、２１、２３、３１、３３、４１、４３、５１、５３、６１、６３、７１、７３、８１、８３、９１、９３、１０１、１０３、１１１、１１３、１２１、１２３、１３１、１３３、１４１、１４３、１５１、１５３、１６１、１６３、１７１、１７３、１８１、１８３、１９１、１９３、４０１または配列番号４０３のＶＬポリペプチドまたはＶＨポリペプチドに含まれるＣＤＲから選択される、そのポリペプチドを発現する単離ポリヌクレオチドを任意で対象とする。
前記のポリヌクレオチドを含む宿主細胞およびベクターも企図される。
本発明は、本明細書に記載される重鎖可変ポリペプチド配列および軽鎖可変ポリペプチド配列ならびに個々の相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち超可変領域）をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクター、ならびに前記ベクター配列を含む宿主細胞をさらに企図してもよい。本発明の１つの実施形態では、その宿主細胞は酵母細胞である。本発明の別の実施形態では、その酵母宿主細胞はピキア属に属する。
次の実施例は、当業者に本対象発明の作製法および使用法についての完全な開示と説明を提供するように提示されており、発明と見なされるものの範囲を制限することを意図するものではない。使用される数（例えば、量、温度、濃度など）に関して正確性を保証するための努力がなされているが、いくらかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。別途指示されない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度はセルシウス温度であり、そして、圧力は大気圧付近である。
この実施例は、培養ピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）細胞から生産される組換え抗体の純度を改善する培養方法について説明する。培養中に大量のエタノールが添加されると、その結果生じた抗体は、望まない生産物関連変異体の濃度の大幅な低下を示した。
方法
接種原を作製するため、二倍体ピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）を、次の栄養素から構成される培地（パーセンテージは重量／体積として表される）を使用して増殖させた：酵母抽出物３％、無水ブドウ糖２％、ＹＮＢ１．３４％、ビオチン０．００４％および１００ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ６．０）。ランＬ３５５、Ｌ３５７、Ｌ３５８、Ｌ３５９およびＬ３６０のための接種原培地は次の栄養素（パーセンテージは重量／体積として表される）から構成された：酵母抽出物３％、グリセロール２％、ＹＮＢ１．３４％、ビオチン０．００４％、２００ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ６．０）。その接種原を３０℃と３００ｒｐｍの浸透培養器で約２４時間〜２９時間増殖させた。その後、１０％の接種原を、１Ｌの無菌成長培地を含む、２．５Ｌの作業体積を有するＬａｂｆｏｒｓ２．５Ｌ容器に添加した。成長培地は次の栄養素から構成された：硫酸カリウム１８．２ｇ／Ｌ、第一リン酸アンモニウム３６．４ｇ／Ｌ、リン酸水素二カリウム１２．８ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム七水和物３．７２ｇ／Ｌ、クエン酸ナトリウム二水和物１０ｇ／Ｌ、グリセロール４０ｇ／Ｌ、酵母抽出物３０ｇ／Ｌ、ＰＴＭ１微量金属４．３５ｍＬ／Ｌ、および消泡剤２０４ １．６７ｍＬ／Ｌ。ＰＴＭ１微量金属溶液は次の成分から構成された：硫酸銅六水和物６ｇ／Ｌ、ヨウ化ナトリウム０．０８ｇ／Ｌ、硫酸マンガン一水和物３ｇ／Ｌ、モリブデン酸ナトリウム二水和物０．２ｇ／Ｌ、ホウ酸０．０２ｇ／Ｌ、塩化
コバルト０．５ｇ／Ｌ、塩化亜鉛２０ｇ／Ｌ、硫酸（第一）鉄七水和物６５ｇ／Ｌ、ビオチン０．２ｇ／Ｌ、および硫酸５ｍＬ／Ｌ。酵母株は、挿入された４ゲノムコピーの重鎖コード配列（配列番号４４１）および３コピーの軽鎖コード配列（配列番号４４０）からＡｂ‐Ａ抗体を発現するように操作された。重鎖遺伝子コピーはｐＧＡＰ遺伝子座（３コピー）とＨＩＳ４ ＴＴ遺伝子座（１コピー）に挿入され、３コピーの軽鎖遺伝子はｐＧＡＰ遺伝子座に挿入された。抗体鎖遺伝子コピーはそれぞれＧＡＰプロモーターの制御下にある。バイオリアクター工程管理パラメータは次のように設定された：撹拌１０００ｒｐｍ、エアフロー１．３５標準リットル／分、温度２８℃およびｐＨは水酸化アンモニウムを使用して（６に）制御された。酸素補給は提供されなかった。
接種原の添加の後、発酵培養物を約１２〜１６時間（「増殖期」）増殖させた。増殖期は、培地中の最初のグリセロールが消費されたときであって、溶存酸素（「ＤＯ」）のスパイク（溶存酸素濃度の突然の上昇）によってそれが検出されたときに終わった。その後、その培養物を、ランＬ３０６について溶存酸素のスパイクから約３時間飢餓状態に置いた（「飢餓期」）。他のランについて、ＤＯスパイクの直後にエタノールをボーラス添加した。その後、大量のエタノールをリアクターに添加して終濃度１（重量／体積）％のエタノールを生じた。対照培養物は、エタノールのボーラス添加が省略されたことを除いて、同様に処理された。発酵培養物は、１５〜３０分間平衡化するようにされた（「平衡期」）。その平衡期の後、４０分間、３０ｇ／Ｌ／時間の一定速度で供給物が添加された（「転換期」）。その培養の残りの部分（「生産期」）に関して、エタノール濃度がエタノール感知プローブ（Ｒａｖｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）を使用して検出され、それは供給速度を制御するために使用され、エタノール濃度が設定値よりも低いときに供給速度は１５ｇ／Ｌ／時間に設定され、または、エタノール濃度が設定値よりも高いときに供給速度は７．５ｇ／Ｌ／時間に設定された。１５ｇ／Ｌ／時間という高供給速度がエタノールを設定値に維持するには十分に速くない事例では（それはＬ３１５発酵ランで生じた）、高供給速度は２２．５ｇ／Ｌ／時間に設定されたが、低供給速度は１５ｇ／Ｌ／時間に設定された。同じ設定値が、エタノールが培養物にボーラス添加されても、さらなくても（酵母によるエタノールの生産は、エタノールのボーラス添加無しで設定値に到達される原因となった）維持された。供給物は次の成分から構成された：酵母抽出物５０ｇ／Ｌ、無水ブドウ糖５００ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム七水和物３ｇ／Ｌ、ＰＴＭ１微量金属１２ｍＬ／Ｌ、およびクエン酸ナトリウム二水和物０．５ｇ／Ｌ。総発酵時間はこれらの実験では通常８５時間〜９７時間であったが、より長い時間もより短い時間も用いられ得る。
生産期の後、発酵培養物にＰＥＩ（ポリエチレンイミン）とＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラ酢酸）がそれぞれ０．０５（重量／体積）％および３ｍＭの終濃度まで添加された。その後、培養物が遠心分離機で遠心分離され、そして、抗体が培養上清からプロテインＡ親和性によって精製された。簡単に説明すると、回収した発酵培地からの約２０ｍＬの０．２マイクロン清澄上清を同一の体積の平衡化緩衝液（２０ｍＭヒスチジンｐＨ６）で希釈した。次にこの希釈した培地より２０ｍＬを平衡化してあった１ｍＬのＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅカラム（ＧＥ社、ピスカタウェイ、ニュージャージー州）に負荷した。その後、そのカラムを、４０カラム体積の平衡化緩衝液を用いて洗浄した。カラムに結合した抗体を、１００％溶出緩衝液（１００ｍＭクエン酸ｐＨ３．０）へのステップグラジエントを用いて溶出した。１ｍＬの画分を収集し、１００μＬの２Ｍトリス緩衝液ｐＨ８．０を用いてそれを直ぐに中性化した。タンパク質含有画分を、２８０ｎＭの吸光度を測定することにより決定し、タンパク質含有画分をプールした。
プロテインＡ精製された抗体はＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより純度について分析された。非還元試料について、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥは、４％〜１２％のポリアクリルアミド濃度勾配を含有するプレキャストポリアクリルアミドゲル（ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ビス‐トリスゲル）を使用し、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ＭＥＳ ＳＤＳ泳動緩衝液およびＮｕＰＡＧＥ
（登録商標）ＬＤＳ試料緩衝液を使用して（全てＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カールスバード、カリフォルニア州より）、製造業者の使用説明書に従って実行された。その後、タンパク質をクマシーブルー染色により可視化した。還元試料は、試料が負荷前にＮｕＰＡＧＥ（登録商標）試料還元剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カールスバード、カリフォルニア州）を使用して、製造業者の使用説明書に従って還元されたことを除いて同様に処理された。
結果
培養中のエタノールのボーラス添加の抗体純度への効果を判定するため、抗体Ａｂ‐Ａが、増殖期の末期および生産期の前に１％（１０ｇ／Ｌ）の終濃度までエタノールをボーラス投与して、または投与せずに酵母培養物から生産された。生産期は９７時間（図１）、８７時間（図２）、または８６時間（図３）続いた。次に、各培養物により生産された抗体は培地から回収され、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーにより精製された。
ＳＤＳ‐ＰＡＧＥが完全型抗体、「半抗体」すなわちＨ１Ｌ１複合体（１本の重鎖と１本の軽鎖を含む）およびＨ２Ｌ１複合体（２本の重鎖と１本の軽鎖を含む）の相対量を検出するために用いられた。Ｈ１Ｌ１複合体とＨ２Ｌ１複合体の量はエタノールのボーラス添加を用いて生産された培養物では非常に減少した。この改善は図１Ａ（レーン２と３（ボーラス有り）をレーン５（ボーラス無し）と比較されたい）、図２Ａ（レーン２（ボーラス有り）をレーン３（ボーラス無し）と比較されたい）、図３Ａ（レーン２と４（ボーラス有り）をレーン５〜７（ボーラス無し）と比較されたい）に示されている３回の実験で再現された。還元条件下では、Ｈ１Ｌ１種、Ｈ２Ｌ１種および完全型抗体種はそれぞれ個々の重鎖および軽鎖に分離され、７５ｋＤａのバンドの正体はジスルフィド結合により連結されている１本の軽鎖と１本の重鎖から構成されているものと確認された（図１Ｂおよび２Ｂ；レーンの順序はそれぞれ図１Ａおよび１Ｂと同一である）。
次に、ＩｍａｇｅＪを使用してＨ１Ｌ１種の量の減少を定量し、ゲルバンドの濃度を非還元ゲルの長さに沿ってプロットした（図１Ｃ〜Ｅおよび２Ｃ〜Ｄはそれぞれ図１Ａのレーン２、３および５、ならびに図２Ａのレーン２および３に対応し、図３Ｂは図３Ａのレーン２および４〜６に対応する）。Ｈ１Ｌ１ピークの下の面積を測定した。結果は図１Ｆ、２Ｅおよび３Ｂにおいて表で表されている。これらの測定値に基づくと、抗体生産前のエタノールのボーラス添加により７５ｋＤａのバンドの相対量が図１Ａでは約９０％、図２Ａでは約８５％、および図３Ａでは約８７％減少した。
まとめると、これらの結果は、培養物へのエタノールのボーラス添加によって、Ｈ１Ｌ１種の濃度が大いに低下し、結果、Ｈ１Ｌ１種の生産は約８５％〜９０％の間だけ減少したことを示している。
この実施例は、同じ方法が２つの他の抗体の生産の際に用いられると、抗体純度の同様の改善が生じることを示すことによって、実施例１で得られた結果を拡張する。
方法
抗体Ａｂ‐ＢおよびＡｂ‐Ｃは、実施例１で説明された方法を用いて組換え技術で生産された。抗体Ａｂ‐Ｃは、４コピーの重鎖コード配列（配列番号４３９）と３コピーの軽鎖コード配列（配列番号４３８）を含むように操作されている酵母株から発現した。試料をリアクターから回収し、抗体を含む培養上清をＡｂ‐Ｂ抗体については総計で６７時間（Ｔ６７）または８７時間（Ｔ８７）の発酵時間、およびＡｂ‐Ｃ抗体については総計で８６時間（Ｔ８６）の発酵時間の後に収集し、プロテインＡ親和性により精製し、そして、実施例１において説明されているようにＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより分析した。
結果
抗体Ａｂ‐Ｂ（図４）およびＡｂ‐Ｃ（図５）が、増殖期の末期および生産期の前に１％の終濃度までエタノールをボーラス投与して、または投与せずに生産された。エタノールをボーラス添加せずに生産された抗体では、Ｈ１Ｌ１種すなわち半抗体種、およびＨ２Ｌ１種はそれぞれ顕著なバンドとして観察された（図４Ａのライン６および７、図４Ｃのレーン６および７、図５Ａのレーン５および６）。これらのバンドの強度は、エタノールのボーラス添加を用いて生産された培養物では非常に減少した（図４Ａのレーン２〜３、図４Ｃのレーン２〜３、図５Ａのレーン３）。還元条件下では、Ｈ１Ｌ１のバンドとＨ２Ｌ１のバンドは個々の重鎖および軽鎖に分離され、これらの種の正体は全長型の重鎖および軽鎖から構成されるものと確認された（図４Ｂ、４Ｄ、および５Ｂ；レーンの順序はそれぞれ図４Ａ、４Ｄ、および５Ａと同一である）。
次に、ＩｍａｇｅＪを使用してＨ１Ｌ１種の量の減少を定量し、ゲルバンドの濃度を非還元ゲルの長さに沿ってプロットした。図４Ｅおよび４Ｆはそれぞれ図４Ａ（Ｔ６７）および４Ｃ（Ｔ８７）に示されているＨ１Ｌ１ピークに含まれる面積を表で示しており、エタノールのボーラス添加によって、図４Ａに示される早い方の時点ではＨ１Ｌ１複合体の相対量の約７３％の減少、および図４Ｃに示される遅い方の時点ではＨ１Ｌ１複合体の相対量の平均約３４％の減少が生じたことを示している。同様に、図５Ｃは図５Ａに示されているＨ１Ｌ１ピークに含まれる面積を表で示しており、エタノールのボーラス添加によるＨ１Ｌ１複合体の相対量の平均約６１％の減少を示している。
まとめると、これらの結果は、異なる標的への結合特異性を有する２つの他の抗体のための培養物へのエタノールのボーラス添加によって、Ｈ１Ｌ１種およびＨ２Ｌ１種の濃度が約６１％と７３％の間だけ減少したことを示している。
この実施例は、培養中のエタノールのボーラス投与により、培養ピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）細胞から生産される組換え抗体の純度が改善されたことについてさらに説明する。この実施例は、Ｈ１Ｌ１種とＨ２Ｌ１種の量の大幅な減少に加えて、他の生産物関連変異体の濃度の減少をさらに示す。
方法
組換え抗体Ａｂ‐Ａ、Ａｂ‐Ｂ、およびＡｂ‐Ｃが、実施例１および２において説明されているようにピキア・パストリス（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）培養物から調製および精製された。抗体が、増殖期の末期および生産期の前に１（重量／体積）％の終濃度までエタノールをボーラス投与して、または投与せずに生産された。プロテインＡ精製した抗体調製物の純度を分析するため、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ‐ＨＰＬＣ）を用いた。簡単に説明すると、ＵＶ検出器付きのＡｇｉｌｅｎｔ社（サンタクララ、カリフォルニア州）１２００シリーズＨＰＬＣを使用した。試料の分離のため、東ソーバイオサイエンス社（キング・オブ・プロシア、ペンシルバニア州）のＴＳＫゲルガードＳＷＸＬ ６ｘ４０ｍｍに連結されているＴＳＫゲル３０００ＳＷＸＬ ７．８ｘ３００ｍｍカラムを使用した。１００ｍＭリン酸ナトリウム、２００ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．５の溶液を０．５ｍＬ／ｍｉｎの流速の均一濃度モードで移動相として使用し、そして、ＵＶ２１５ｎｍの吸光度をモニターした。試料の注入の前に、安定的な基線が達成されるまでカラムを平衡化した。移動相を用いて試料を１ｍｇ／ｍＬの濃度にまで希釈し、そして、３０μＬの体積の試料を注入した。カラム性能をモニターするため、ＢｉｏＲａｄ社（ハーキュリーズ、カリフォルニア州）ゲル濾過標準物質を使用した。
結果
実施例１に記載されるＡｂ‐Ａ抗体調製物および同じ方法を用いて生産された他の調製物が酵母において発現し、プロテインＡ親和性により精製され、その後、純度がサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いて分析された。使用した条件下では、半抗体（Ｈ１Ｌ１）種は完全型抗体と共溶出し、このことは半抗体の対の間での非共有結合に起因すると考えられる。しかしながら、この方法は他の生産物関連変異体の純度を評価することができ、そのような複合体は異常な化学量論組成、断片、グリコシル化形態、および凝集体を有する。
エタノールをボーラス添加せずに（図６Ａ、６Ｃ、および６Ｅ）、またはボーラス添加して（図６Ｂ、６Ｄ、および６Ｆ）生産されたＡｂ‐Ａ試料についてのＳＥ‐ＨＰＬＣデータが示されている。２つの完全型抗体の凝集体（４本の重鎖および４本の軽鎖を含む）からなる生産物関連変異体が検出され（矢印）、その量はボーラス添加して調製された試料では平均して減少した。図７は、（完全型抗体を含む）主要ピークに含まれるＡｂ‐Ａ抗体調製物の割合（パーセンテージ）の決定によるＡｂ‐Ａの純度の定量を示す。エタノールのボーラス添加によって、主要ピークに含まれるその抗体調製物の平均パーセンテージが８０．３％から最大で９０．６％まで増加した。
同様な分析が、実施例２に記載されるＡｂ‐Ｂ抗体調製物およびＡｂ‐Ｃ抗体調製物について実行された。それぞれ図８および９において定量されている。Ａｂ‐Ｂ抗体の全体的な純度が改善され、主要ピーク中の平均比率がＴ６７では７６％から７９％まで、およびＴ８７では６０％から７３％まで上昇した。Ａｂ‐Ｃ抗体では、この方法によって評価される抗体純度に検出可能な差異はほとんど存在しなかった。これは、ボーラス添加しなくとも高いＡｂ‐Ｃ抗体の初期純度に明らかに起因する。
まとめると、これらの結果は、培養物へのエタノールのボーラス添加が半抗体種に加えて他の生産物関連変異体の濃度を低下させ得ることを示している。
この実施例は、７５ｋＤａの生産物関連変異体の正体を、１本だけの抗体重鎖と１本だけの抗体軽鎖を含有する半抗体種であるとさらに確認したことについて説明する。この仮説はいくつかの観察に基づいた。第一に、７５ｋＤａのバンドがプロテインＡ精製された試料の中に存在しており（実施例１を参照のこと）、このことは、それが少なくとも抗体重鎖のプロテインＡ結合部分を含んでいたことを示している。第二に、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥで分析された非還元試料では７５ｋＤａのバンドが顕著であるが（例えば、図１Ａのレーン２〜３を参照のこと）、還元条件下では同じ試料が同等の強度を有するどのようなバンドも（予想される軽鎖および重鎖の他に）含まなかった。このことは、７５ｋＤａのバンドが抗体重鎖および軽鎖（または同一の電気泳動移動度を有する他の種）の他のどのような成分も含んでいないことを示している。第三に、還元化試料からの７５ｋＤａのバンドの消失は、その構成成分が少なくとも１つのジスルフィド結合によって結合されていることも示している。第四に、ＳＥＣ分析により７５ｋＤａの種の完全型抗体との共溶出が示しされた。このことは、７５ｋＤａの種が非共有結合的に自己結合して完全型抗体（または同一の見かけの流体力学半径を有する別の複合体）を形成しうることを強く示唆している。最後に、約７５ｋＤａという（電気泳動標準物質の参照により決定される）見かけの分子量は、この複合体はただ全長型の抗体鎖から構成されているだけであるという（変性ゲルからの）観察と併せて、１本だけの抗体重鎖と１本だけの抗体軽鎖を含有する複合体と一致するが、他の複合体とは一致しなかった。
方法
マススペクトロメトリーが、様々な試料における、重鎖間ジスルフィド結合（通常、アミノ酸２２０と２２３に見出される）を欠く重鎖の相対量を検出するために使用された。
エッペンドルフチューブに２５０μｇの各試料を添加した。適切な量（約４５０μＬ）の変性緩衝液（６Ｍグアニジン塩酸、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２５Ｍトリス、ｐＨ７．５）をそのチューブに添加して５００μＬの最終体積と０．５ｍｇ／ｍＬの試料濃度を得た。各試料に２０．５μＬの２Ｍヨードアセトアミドを添加してあらゆる遊離システインをアルキル化した。その試料をボルテックスで混合し、その後、暗所で３０±５分間室温で保温した。その後、消化緩衝液（０．１Ｍトリス塩酸、ｐＨ７．５）で平衡化してあったＮＡＰ‐５カラムを使用して試料を脱塩した。各試料溶液を別々の（平衡化してあった）カラムに添加し、カラムのベッドに進入させた。各カラムに１ｍＬの消化緩衝液を添加し、溶出物をエッペンドルフチューブに収集した。約５０μｇの物質を含む等量のアリコットに試料を分割した（５つの２００μＬのアリコット）。アルキル化され、脱塩化されたアリコットは必要になるまで−２０℃で保管された。各試料（アルキル化および脱塩化）の１つのアリコットをそれぞれの消化に使用した。それぞれの試料アリコットに０．５ｍｇ／ｍＬのトリプシン溶液を、１：２５（重量：重量）というトリプシン：タンパク質の比率で添加した（４μＬ）。全てのトリプシンチューブを３７±２℃で４時間保温した。保温後、１μＬのトリフルオロ酢酸を各チューブに添加して酵素消化を停止した。その後、試料を等量で２部に分割し、還元化および非還元化した。試料の半分は１ＭのＤＴＴの存在下、３７±２℃で１時間還元化された。還元化試料と非還元化試料の両方の内容物をＨＰＬＣバイアルに移し、分析のためにオートサンプラーに設置した。
ＭＳおよびＭＳ／ＭＳデータを、ポジティブイオンモードでエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）を用いるＭｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑ‐ＴＯＦ Ｕｌｔｉｍａ質量分析機で収集した。データはＭＳモードで２００〜１９５０のｍ／ｚ値から取得された。分析の前に質量分析機は５次フィットを用いて１７５から１２８５までのｍ／ｚ値の範囲にわたる［Ｇｌｕ１］‐フィブリノペプチドの断片イオンに対して較正された。注入体積は、約２０ｐｍｏｌｅのタンパク質のオンカラム負荷が達成されるように調整された。
結果
上で論じた観察に基づき、申請者らは、７５ｋＤａのバンドはジスルフィド結合を介して互いに共有結合している１本の抗体重鎖と１本の抗体軽鎖を含む「半抗体」種であって、半抗体複合体の対が非共有結合して、完全型抗体（２本の重鎖と２本の軽鎖）と同じ化学量論組成を有するが、２本の重鎖の間にジスルフィド結合を欠く（「非結合重鎖」）複合体を形成することができると仮説を立てた。その仮説に基づき、７５ｋＤａのバンドの相対量は非結合重鎖の相対的な割合と相関すると予測され、その割合がトリプシン消化抗体試料のマススペクトロメトリー分析を用いて決定された。
この研究の目的のペプチド断片は、それぞれ、重鎖のアミノ酸２１７〜２４２から構成される重鎖のＴ１７トリプシン断片（Ｔ１７Ｈ）であった。アミノ酸２２０および２２３は、抗体重鎖の間のジスルフィド結合形成に関与する。典型的には、遊離システイン分析は、トリプシン消化後の還元化試料におけるアルキル化システイン残基の非アルキル化残基に対する比率を決定することにより実行され得る。しかしながら、アルキル化種はどのロットの材料にも存在しなかった。目的のペプチド断片であるＴ１７Ｈの２つのシステイン残基は互いに結合している、またはそれらのシステインは抗体の四次構造によって保護されているという仮説が立てられた。どちらの場合も、それらのシステイン残基はアルキル化のためにアクセス可能ではなかったのだろう。その代わりとして、分析アプローチは、両方のロットにおける非還元種の還元種に対する比率を利用してパーセントの違いを計算することであった。非還元試料では２Ｄａの分子量が減少していることが観察された。このことは、ジスルフィド結合形成を示している。この挙動が遊離Ｔ１７Ｈのパーセントを計算するために利用された。非還元型Ｔ１７Ｈ種の理論上の質量は２７２７．４１Ｄａ（システイン２２０とシステイン２２３の間のジスルフィド結合形成）であり、還元型ペプチドについては２７２９．４１Ｄａである。
還元型試料および非還元型試料について得られるイオンクロマトグラムが代表的な荷電状態について分析された。非還元型試料と還元型試料の間のカウントの比率により、エタノールをボーラス添加して生産された抗体では遊離Ｔ１７Ｈ種が２．３％と計算され、そして、エタノールをボーラス添加せずに生産された試料では遊離Ｔ１７Ｈ種が２６．１％と計算される。これらの結果は、図９に表の形式で提示されている。
このように、重鎖間ジスルフィド結合を欠く重鎖の量は、エタノールをボーラス添加せずに生産された試料では大いに増加した。このことは、この種の正体を１本の重鎖と１本の軽鎖を含むが、重鎖間ジスルフィド結合を欠くものとさらに確認した。また、予想される質量よりも２Ｄａ軽い種の検出は、Ｈ１Ｌ１種の重鎖が、正常な重鎖間ジスルフィド結合の形成を妨害し得る自己に対する余分なジスルフィド結合を含み得ることを示した。
この実施例は細胞生存率と抗体純度の間の相関を示す。Ａｂ‐Ａ抗体とＡｂ‐Ｂ抗体について、エタノールのボーラス添加は細胞生存率と抗体純度を全般的に改善した。さらに、Ａｂ‐Ｃ抗体はボーラス添加されずとも高純度を既に示しており、それもより高い培養生存率を示した。まとめると、これらの結果は、エタノールのボーラス添加の結果生じる抗体の純度の改善は少なくとも部分的には培養生存率の上昇に原因があることを示唆している。
方法
培養生存率はＣｅｌｌｏｍｅｔｅｒ（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ社）を使用して決定された。培養試料はＰＢＳで希釈され、最終細胞数が１×１０７〜５×１０７細胞／ｍＬの範囲内になる。次にその試料の半分をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色の陽性対照として７５℃、１０分間の加熱条件で処理した。その後、非処理試料と処理試料をＰＩと混合した（２０μＬの試料に２０μＬのＰＩを加えた）。次に試料をスライドカセットに乗せ、蛍光を発しない細胞の数を数え、そして細胞の総数で除算することにより生存率を決定した。死んでいる細胞はヨウ化プロピジウムを取り込んでおり、蛍光を発しているので、陽性対照加熱殺滅試料は１％未満の細胞が生きていることを示すだろう。
結果
細胞生存率が、実施例１および２に記載されるようにエタノールをボーラス添加して、またはボーラス添加せずに増殖された抗体産生培養物について決定された。上で説明されているように、Ａｂ‐Ａ抗体とＡｂ‐Ｂ抗体の純度は酵母培養物へのエタノールのボーラス添加により大幅に改善した（実施例１〜２および図１〜４を参照のこと）。エタノールのボーラス添加はこれらの培養物の細胞生存率も改善した。Ａｂ‐Ａ抗体について生存率は平均して９１．９％から９７．２％まで改善し（図１１）、一方、Ａｂ‐Ｂ抗体について生存率は平均して８４．８％から９５．１％まで改善した（図１２）。Ａｂ‐Ｃ抗体はエタノールをボーラス添加しなくとも既に高純度であるため、エタノールのボーラス添加の結果生じるこの抗体の純度の改善はより控えめであった（実施例３および図５を参照のこと）。高細胞生存率がより高い抗体純度と相関したという観察と一致して、Ａｂ‐Ｃ抗体培養物はエタノールのボーラス添加無しで高い細胞生存率（平均して９５．８％）を示し、細胞生存率はエタノールのボーラス添加によってほとんど変化しなかった（９６．８％）。
まとめると、これらの結果は、エタノールのボーラス添加の結果生じる抗体純度の改善は部分的には細胞生存率の改善によって引き起こされ得る（または少なくともそれと相関する）ことを示している。
この実施例は、抗体純度の同様の改善はエタノールのボーラス濃度を変化させて達成され得ることを示す。
方法
Ａｂ‐Ａ抗体が、エタノールのボーラス添加が５ｇ／Ｌ（０．５（重量／体積）％）、１０ｇ／Ｌ（１（重量／体積）％）、または１５ｇ／Ｌ（１．５（重量／体積）％）であったことを除いて、実施例１で行われたように生産された。抗体試料は６３時間と８６時間で培地から精製され、プロテインＡ親和性により精製され、その後、純度が、実施例１で行われたように非還元ＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより分析された。
結果
抗体純度は、添加されたボーラス濃度（０．５（重量／体積）％と１．５（重量／体積）％の間）と無関係に、試験した両方の時点である６３時間（図１４Ａ）と８６時間（図１４Ｂ）で同様に高かった。Ｈ１Ｌ１種とＨ２Ｌ１種の検出レベルは各培養物で同様に低かった。
これらの結果は、抗体純度の改善は、エタノールのボーラス濃度を変化させて達成され得ることを示している。
この実施例は、抗体純度の同様の改善が、溶存酸素スパイクと培養物へのエタノールのボーラス添加の間の「飢餓期」の持続時間を変えて達成され得ることを示す。
方法
Ａｂ‐Ａ抗体が、飢餓期の持続時間、すなわち、溶存酸素スパイク（培養物中の炭素源の消耗を示す）とエタノールのボーラス添加の間の時間が０時間か３時間のどちらかであったことを除いて、実施例１で行われたように生産された。抗体試料が培地から精製され、プロテインＡ親和性により精製され、その後、純度が、実施例１で行われたように非還元ＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより分析された。
結果
抗体純度は０時間と３時間の間の飢餓期の変化に無関係に同様に高かった（図１５Ａ、レーン５（０時間の飢餓）およびレーン６（３時間の飢餓）を比較されたい）。Ｈ１Ｌ１種とＨ２Ｌ１種の検出レベルは各培養物で同様に低かった。
これらの結果は、抗体純度の改善は、飢餓期の持続時間を変化させて達成され得ることを示している。
この実施例は、エタノールのボーラス添加と培養物への供給物の添加の開始の間の「平衡化期間」の持続時間を変化させることの抗体純度への効果を試験する。
方法
Ａｂ‐Ｂ抗体が、平衡化期間の持続時間、すなわち、エタノールのボーラス添加と培養物への供給物の添加の開始の間の時間が０分、３０分、または６０分であったことを除いて、実施例２で行われたように生産された。さらに、Ａｂ‐Ｂ抗体を生産する酵母株は、４コピーの代わりに３コピーの軽鎖遺伝子を含有した。抗体試料が培地から精製され、プロテインＡ親和性により精製され、その後、純度が、実施例１で行われたように非還元ＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより分析された。生存率も、実施例５において記載される方法を用いて
評価された。
結果
抗体純度は０分または３０分の平衡化期間では同様に高かった（図１６Ａのレーン７およびレーン８（０分の平衡化時間）およびレーン３（３０分の平衡化時間））。しかしながら、Ｈ１Ｌ１種とＨ２Ｌ１種の検出レベルは６０分の平衡化期間を有する培養物で上昇した（図１６Ａ、レーン５および６）。
生存率は、各培養物について２３時間と８５時間の時点でも評価された。６０分の平衡化期間では、生存率は２３時間の時点で７５％と８０％の間であったが、０分と３０分の平衡化期間では同じ時点での生存率は約８８〜９０％であった（図１６Ｂ）。その後、８５時間の時点では、生存率は改善したが、０分と３０分の平衡化期間と比較して６０分の平衡化期間ではやや低下した（図１６Ｃ）。
これらの結果は、抗体純度の改善は、少なくとも０分と３０分の間で平衡化期間を変化させて達成され得るが、６０分以上の平衡化期間では（純度は、エタノールをボーラス添加しない対照培養物と比較してなお改善され得るが）生存率と純度のいくらかの損失が生じ得ることを示している。
本発明の様々な例示された実施形態についての上の説明は全てを網羅している訳ではなく、開示されるそのままの形態に本発明を限定するものではない。本発明の特定の実施形態およびその実施例は例示目的のために本明細書において記載されるが、関連の技術分野の当業者が理解するように、様々な同等の変更が本発明の範囲内で可能である。本明細書において提供される本発明の教示は上で説明されている実施例の以外にも他の目的に適用され得る。
本発明は、前述の説明および実施例において特定的に記載されているもの以外の方法で実施され得る。上の教示を考慮すると、多数の本発明の変形と変更が可能であり、それ故、それらは、添付されている特許請求の範囲の範囲内である。
上の詳細な説明を考慮するとこれらの変更および他の変更を本発明に行うことができる。一般に、次の特許請求の範囲では、使用される用語が本発明を明細書および特許請求の範囲に記載される特定の実施形態に限定するものと解釈されてはならない。したがって、本発明は本開示によって限定されないが、代わりに本発明の範囲は次の特許請求の範囲によって完全に決定される。
抗原特異的Ｂ細胞のクローン集団を得るための方法に関連するある特定の教示は、２００６年５月１９日に提出された米国特許仮出願第６０／８０１，４１２号に開示された。その仮出願の開示は全体の参照により本明細書に組み込まれる。
ウサギ由来モノクローナル抗体のヒト化と抗原結合親和性を維持する好ましい配列修飾に関連するある特定の教示は、２００８年５月２１日に提出された「新しいウサギ抗体のヒト化方法とヒト化ウサギ抗体（Novel Rabbit Antibody Humanization Methods and Humanized Rabbit Antibodies）」という表題の国際公開第２００８／１４４７５７号に対応する国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４４２１号において開示された。その公開の開示は全体の参照により本明細書に組み込まれる。
接合可能酵母を使用する抗体またはその断片の作製と対応する方法に関連するある特定の教示は２００６年５月８日に提出された米国特許出願番号第１１／４２９，０５３号（米国特許出願公開第２００６／０２７００４５号）に開示された。それの開示は全体の参
照により本明細書に組み込まれる。
背景技術、発明の概要、発明を実施するための形態、および実施例を含む本明細書において引用されている各文献（特許、特許出願、論文、紀要、操作説明書、書籍または他の開示）の全開示は、ここに参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
一態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］ マルチサブユニット複合体を生産する方法であって、
（ａ）前記のマルチサブユニット複合体のサブユニットの発現をもたらす遺伝子を含む真核細胞を含む培養物を提供すること、
（ｂ）前記の培養物に大量のエタノールを急速に添加すること、および
（ｃ）前記の培養物を培養して前記のマルチサブユニット複合体を生産すること、を含む前記方法。
［態様２］ 前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、前記のエタノールの急速大量投与が安定的なジスルフィド結合の形成を増強する、態様１に記載の方法。
［態様３］ 前記のマルチサブユニット複合体が、少なくとも１つのジスルフィド結合を含む１つ以上のポリペプチドを含有する、態様１に記載の方法。
［態様４］ 前記のマルチサブユニット複合体が抗体を含む、態様１に記載の方法。
［態様５］ 前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、１つ以上の生産物関連変異体の相対量を減少させる、態様１〜４のいずれか１項に記載の方法。
［態様６］ 前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、サイズ排除クロマトグラフィーまたはゲル電気泳動によって検出される見かけの分子量が前記の所望のマルチサブユニット複合体よりも大きい、または小さい生産物関連変異体の相対量を減少させる、態様１〜４のいずれか１項に記載の方法。
［態様７］ 前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、異常な化学量論組成を有する複合体の相対量を減少させる、態様１〜４のいずれか１項に記載の方法。
［態様８］ 前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、異常なジスルフィド結合を有する複合体の相対量を減少させる、態様１〜４のいずれか１項に記載の方法。
［態様９］ 前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、還元化システインを有する複合体の相対量を減少させる、態様１〜４のいずれか１項に記載の方法。
［態様１０］ 前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、異常なグリコシル化を有する複合体の相対量を減少させる、態様１〜４のいずれか１項に記載の方法。
［態様１１］ 重鎖間ジスルフィド結合の形成または安定性を調節する、態様４に記載の方法。
［態様１２］ 軽鎖および重鎖を連結するジスルフィド結合の形成または安定性を調節する、態様４または１１に記載の方法。
［態様１３］ 前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、１つ以上の生産物関連変異体の相対量を減少させる、態様４または１１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１４］ 前記の生産物関連変異体がＨ１Ｌ１生産物関連変異体、Ｈ２Ｌ１生産物関連変異体およびＨ４Ｌ４生産物関連変異体のうちの１つ以上を含む、態様１３に記載の方法。
［態様１５］ 前記のエタノールの急速大量投与が無い状態で行われる前記の方法と比べて、前記の抗体の純度を上昇させる、態様４または１１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
［態様１６］ ステップ（ｃ）の前にステップ（ｂ）が行われる、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様１７］ ステップ（ｃ）の後にステップ（ｂ）が行われる、態様１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
［態様１８］ ステップ（ｃ）と同時にステップ（ｂ）が行われる、態様１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
［態様１９］ ステップ（ｂ）により、前記の培養物中のエタノールの濃度が約０．０１％（重量／体積）と約４％（重量／体積）の間になる、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様２０］ ステップ（ｂ）により、前記の培養物中のエタノールの濃度が約０．０１％と約４％の間、約０．０２％と約３．７５％の間、約０．０４％と約３．５％の間、約０．０８％と約３．２５％の間、約０．１％と約３％の間、約０．２％と約２．７５％の間、約０．３％と約２．５％の間、約０．４％と約２．２５％の間、約０．５％と約１．５％の間、約０．５％と約２％の間、約０．６％と約１．７５％の間、約０．７％と約１．５％の間、または約０．８％と約１．２５％の間になる、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様２１］ ステップ（ｂ）により、前記の培養物中のエタノールの濃度が少なくとも約０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１０％、０．２％、０．３％、０．４％、０．６％、０．６％、０．７％、０．８％または０．９％（重量／体積）になる、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様２２］ ステップ（ｂ）により、前記の培養物中のエタノールの濃度が多くても約４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．８％、１．６％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１．０％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３５％、０．３％、０．２５％、０．２％、または０．１５％（重量／体積）になる、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様２３］ ステップ（ｂ）が前記の培養物にエタノールを添加すること、前記の培養物にエタノールを含む担体を添加すること、エタノールを含む培地もしくは担体に前記の細胞を添加すること、または培地の一部を置き換えることを含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様２４］ 前記の大量のエタノールが１分と２０分の間の期間にわたって前記の培地に急速添加される、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様２５］ ステップ（ｃ）が前記の細胞に酸素を供給することを含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様２６］ 前記の酸素の供給が前記の培養物を撹拌することを含む、態様２５に記載の方法。
［態様２７］ 前記の酸素の供給が酸素を含むガス混合物と前記の培養物を接触させることを含む、態様２５または２６に記載の方法。
［態様２８］ ステップ（ｃ）が炭素源を含む供給物を前記の培養物に添加することを含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様２９］ 前記の供給物が少なくとも１つの発酵可能な炭素源を含む、態様２８に記載の方法。
［態様３０］ 前記の供給物が、グルコース、エタノール、シトレート、ソルビトール、キシロース、トレハロース、アラビノース、ガラクトース、フルクトース、メリビオース、ラクトース、マルトース、ラムノース、リボース、マンノース、マンニトール、およびラフィノースのうちの１つ以上を含む、態様２８に記載の方法。
［態様３１］ ステップ（ｃ）の間に前記のエタノールの濃度を上限の設定値と下限の設定値の間に維持することをさらに含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様３２］ 前記の下限の設定値が約０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１０％、０．２％、０．３％、０．４％、０．６％、０．６％、０．７％、０．８％、または０．９％（重量／体積）である、態様３１に記載の方法。
［態様３３］ 前記の上限の設定値が約４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．８％、１．６％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１．０％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３５％、０．３％、０．２５％、０．２％、または０．１５％（重量／体積）である、態様３１または３２に記載の方法。
［態様３４］ 前記の上限の設定値が多くても約１．５％、１．４％、１．３、１．２％、または１．１％（重量／体積）である、態様３１または３２に記載の方法。
［態様３５］ ステップ（ｃ）の間に前記のエタノールの濃度を設定値に維持することをさらに含む、態様１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
［態様３６］ 前記の設定値が約０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、０１．％、０１．１％、０１．２％、０１．３％、０１．４％、または０１．５％（重量／体積）である、態様３５に記載の方法。
［態様３７］ ステップ（ｃ）が前記の培養物中のエタノールの濃度を約０．０１％と約４％の間、約０．０２％と約３．７５％の間、約０．０４％と約３．５％の間、約０．０８％と約３．２５％の間、約０．１％と約３％の間、約０．２％と約２．７５％の間、約０．３％と約２．５％の間、約０．４％と約２．２５％の間、約０．５％と約２％の間、約０．６％と約１．７５％の間、約０．７％と約１．５％の間、または約０．８％と約１．２５％の間に維持することを含む、態様１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
［態様３８］ 前記の培養物中のエタノールの濃度が前記の細胞によるエタノールの生産を制御することにより、または前記の培養物へのエタノールの添加により維持される、態様２１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
［態様３９］ エタノールの生産を制御するステップが、グルコースの濃度、酸素の利用可能性、撹拌の強度、ガス圧、供給される空気または他のガス混合物の流速、培養物の粘度、培養物の密度、供給される空気または他のガス混合物の酸素濃度、および温度のうちの１つ以上を制御することを含む、態様２８に記載の方法。
［態様４０］ ステップ（ａ）とステップ（ｂ）の間の時間が約７２時間未満、約４８時間未満、約２４時間未満、約１２時間未満、約９時間未満、約６時間未満、約５時間未満、約４時間未満、約３時間未満、約９０分未満、約３０分未満、約５分未満、または約１分未満である、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様４１］ ステップ（ｂ）とステップ（ｃ）の間の時間が約１０時間未満、約９時間未満、約８時間未満、約７時間未満、約６時間未満、約５時間未満、約４時間未満、約３時間未満、約２時間未満、約９０分未満、約８０分未満、約７０分未満、約６０分未満、約５０分未満、約４０分未満、約３０分未満、約２０分未満、約１０分未満、約５分未満、または約１分未満である、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様４２］ ステップ（ａ）の培養物が、前記の培養物に炭素源を添加すること、および前記の炭素源を消尽するまで前記の培養物を培養することにより生産される、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様４３］ 前記の炭素源が、グリセロール、グルコース、エタノール、シトレート、ソルビトール、キシロース、トレハロース、アラビノース、ガラクトース、フルクトース、メリビオース、ラクトース、マルトース、ラムノース、リボース、マンノース、マンニトール、およびラフィノースのうちの１つ以上を含む、態様４２に記載の方法。
［態様４４］ 前記の炭素源の消尽が前記の真核細胞の代謝活性の低下を検出することにより決定される、態様４２または４３に記載の方法。
［態様４５］ 前記の真核細胞の代謝活性の前記の低下が、前記の真核細胞による酸素消費の減少を検出することにより、前記の培養物におけるｐＨの上昇を検出することにより、前記の細胞の湿潤質量の安定化を検出することにより、または前記の培養物におけるアンモニアの濃度の上昇を検出することにより確認される、態様４４に記載の方法。
［態様４６］ 前記の真核細胞による酸素消費の前記の減少が、前記の培養物中の溶存酸素の濃度の上昇を検出することにより確認される、態様４５に記載の方法。
［態様４７］ 前記の真核細胞が酵母細胞を含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様４８］ 前記の酵母細胞がメチロトローフ酵母を含む、態様４７に記載の方法。
［態様４９］ 前記のメチロトローフ酵母がピキア属のメチロトローフ酵母である、態様４８に記載の方法。
［態様５０］ 前記のピキア属のメチロトローフ酵母がピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）である、態様４９に記載の方法。
［態様５１］ 前記のピキア属のメチロトローフ酵母が、ピキア・アングスタ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ）、ピキア・グイレルモルディイ（Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｒｄｉｉ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、およびピキア・イノシトベラ（Ｐｉｃｈｉａ ｉｎｏｓｉｔｏｖｅｒａ）からなる群より選択される、態様４９に記載の方法。
［態様５２］ 前記のマルチサブユニット複合体の発現をもたらす前記の遺伝子が１つ以上のゲノム遺伝子座に組み込まれる、態様４９に記載の方法。
［態様５３］ 前記のゲノム遺伝子座のうちの少なくとも１つが、ｐＧＡＰ遺伝子座、３’ＡＯＸ ＴＴ遺伝子座、ＰｐＵＲＡ５遺伝子座、ＯＣＨ１遺伝子座、ＡＯＸ１遺伝子座、ＨＩＳ４遺伝子座、ＧＡＰ遺伝子座、ｐＧＡＰ遺伝子座、３’ＡＯＸ ＴＴ遺伝子座、ＡＲＧ遺伝子座、およびＨＩＳ４ ＴＴ遺伝子座からなる群より選択される、態様４９に記載の方法。
［態様５４］ 前記のマルチサブユニット複合体のサブユニットをコードする遺伝子のうちの少なくとも１つが、誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターの制御下で発現する、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様５５］ 前記の誘導性プロモーターが、ＡＯＸ１プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター、チアミン誘導性プロモーター、およびＦＬＤ１プロモーターからなる群より選択される、態様５４に記載の方法。
［態様５６］ 前記のマルチサブユニット複合体のサブユニットをコードする遺伝子のうちの少なくとも１つが、ＣＵＰ１プロモーター、ＡＯＸ１プロモーター、ＩＣＬ１プロモーター、グリセルアルデヒド‐３‐リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰ）プロモーター、ＦＬＤ１プロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、アルコールデヒドロゲナーゼＩＩプロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＰＨＯ３プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、およびＰｙｋプロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター、チアミン誘導性プロモーター、それらに由来するキメラプロモーター、酵母性プロモーター、哺乳類性プロモーター、昆虫性プロモーター、植物性プロモーター、爬虫類性プロモーター、両生類性プロモーター、ウイルス性プロモーター、および鳥類性プロモーターからなる群より選択されるプロモーターの制御下で発現する、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様５７］ 前記の真核細胞が二倍体、四倍体細胞、または多倍数体である、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様５８］ 前記の真核細胞または前記の培地から前記のマルチサブユニット複合体を精製することをさらに含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様５９］ 前記のマルチサブユニット複合体が前記の真核細胞の細胞内成分、細胞質、核質、または膜から精製される、態様５８に記載の方法。
［態様６０］ 前記の真核細胞が前記のマルチサブユニット複合体を前記の培地に分泌する、態様５８に記載の方法。
［態様６１］ 前記のマルチサブユニット複合体が前記の培養物培地から精製される、態様６０に記載の方法。
［態様６２］ 前記のマルチサブユニット複合体が一重特異性抗体または二重特異性抗体を含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様６３］ 前記のマルチサブユニット複合体がヒト抗体、またはヒト化抗体、またはそれらの断片を含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様６４］ 前記のヒト化抗体がマウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジまたはウシ起源のものである、態様６３に記載の方法。
［態様６５］ 前記のヒト化抗体がウサギ起源のものである、態様６２に記載の方法。
［態様６６］ 前記のマルチサブユニット複合体が一価抗体、二価抗体、または多価抗体を含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様６７］ 前記の抗体がプロテインＡ親和性および／またはプロテインＧ親和性により前記の培養物から精製される、態様４または態様６１〜６６のいずれか１項に記載の方法。
［態様６８］ 前記のマルチサブユニット複合体のサブユニットを前記の一団の前記の真核細胞のうちの少なくとも１つにおいて発現する遺伝子のうちの少なくとも１つが前記の真核細胞における発現のために最適化される、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様６９］ 前記のマルチサブユニット複合体が抗体を含み、そして、前記の抗体の純度が、前記の真核細胞により生産される前記抗体であって、予測される見かけの流体力学半径を有する抗体複合体に含まれる、予測される分子量を有する抗体複合体に含まれる、および／または前記の抗体の標的に特異的に結合する前記抗体の割合を測定することにより評価される、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様７０］ 前記のマルチサブユニット複合体が抗体を含み、前記の抗体の収量が、前記の真核細胞によって生産される抗体の量を、異常にグリコシル化されている、予測される見かけの流体力学半径を有する複合体以外の抗体複合体に含まれている、予測される分子量を有する抗体複合体に含まれる、および／または前記の抗体の標的に特異的に結合することに失敗するあらゆる生産物関連変異体を差し引いて決定することにより評価される、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様７１］ 前記の抗体複合体の分子量が非還元ＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより決定される、態様５８または５９に記載の方法。
［態様７２］ 前記のマルチサブユニット複合体が抗体を含み、前記の方法が前記の抗体を精製することをさらに含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様７３］ 前記の培養物細胞が、少なくとも１００ｍｇ／Ｌ、少なくとも１５０ｍｇ／Ｌ、少なくとも２００ｍｇ／Ｌ、少なくとも２５０ｍｇ／Ｌ、少なくとも３００ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌと３００ｍｇ／Ｌの間、１００ｍｇ／Ｌと５００ｍｇ／Ｌの間、１００ｍｇ／Ｌと１０００ｍｇ／Ｌの間、少なくとも１０００ｍｇ／Ｌ、少なくとも１２５０ｍｇ／リットル、少なくとも１５００ｍｇ／リットル、少なくとも約１７５０ｍｇ／リットル、少なくとも約２０００ｍｇ／リットル、少なくとも約１００００ｍｇ／リットル、またはそれより多くの上清抗体力価を生ずる、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様７４］ 前記のマルチサブユニット複合体の１つ以上のサブユニットが１つよりも多くの遺伝子コピーから発現する、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様７５］ 前記のマルチサブユニット複合体が、抗体であって、前記の抗体の軽鎖をコードする遺伝子の１〜１０コピーの間のコピーから、および前記の抗体の重鎖をコードする遺伝子の１〜１０コピーから発現する前記の抗体を含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様７６］ 前記のマルチサブユニット複合体を発現する遺伝子が前記の細胞のゲノムに組み込まれる、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様７７］ 前記のマルチサブユニット複合体を発現する遺伝子が染色体外因子、プラスミド、または人工染色体に含まれる、態様１〜７５のいずれか１項に記載の方法。
［態様７８］ 前記の細胞が、前記の抗体の軽鎖を発現する遺伝子のコピーを、前記の抗体の重鎖を発現する遺伝子のコピーよりも多く含む、態様７６または７７に記載の方法。
［態様７９］ 前記の細胞における前記の抗体の重鎖をコードする遺伝子のコピー数と前記の抗体の軽鎖をコードする遺伝子のコピー数のそれぞれが、２と２、２と３、３と３、３と４、３と５、４と３、４と４、４と５、４と６、５と４、５と５、５と６、または５と７である、態様７６または７６に記載の方法。
［態様８０］ 前記の細胞における前記の抗体の重鎖をコードする遺伝子のコピー数と前記の抗体の軽鎖をコードする遺伝子のコピー数のそれぞれが、２と１、３と１、４と１、５と１、６と１、７と１、８と１、９と１、１０と１、１と２、２と２、３と２、４と２、５と２、６と２、７と２、８と２、９と２、１０と２、１と３、２と３、３と３、４と３、５と３、６と３、７と３、８と３、９と３、１０と３、１と４、２と４、３と４、４と４、５と４、６と４、７と４、８と４、９と４、１０と４、１と５、２と５、３と５、４と５、５と５、６と５、７と５、８と５、９と５、１０と５、１と６、２と６、３と６、４と６、５と６、６と６、７と６、８と６、９と６、１０と６、１と７、２と７、３と７、４と７、５と７、６と７、７と７、８と７、９と７、１０と７、１と８、２と８、３と８、４と８、５と８、６と８、７と８、８と８、９と８、１０と８、１と９、２と９、３と９、４と９、５と９、６と９、７と９、８と９、９と９、１０と９、１と１０、２と１０、３と１０、４と１０、５と１０、６と１０、７と１０、８と１０、９と１０、１０と１０である、態様７６または７７に記載の方法。
［態様８１］ ステップ（ｃ）の培養物が産生培地で培養される、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様８２］ 前記の産生培地が最少培地である、態様８１に記載の方法。
［態様８３］ 前記の最少培地が選択用薬剤を欠く、態様８１に記載の方法。
［態様８４］ 前記の最少培地が前もって形成されたアミノ酸または他の複雑な生体分子を欠く、態様８１に記載の方法。
［態様８５］ 前記の産生培地が複合培地である、態様８１に記載の方法。
［態様８６］ 前記の複合培地が、酵母抽出物、大豆ペプトン、および他の植物性ペプトンのうちの１つ以上を含む、態様８５に記載の方法。
［態様８７］ ステップ（ｃ）の培養物が高細胞密度まで培養される、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様８８］ 高細胞密度が少なくとも５０ｇ／Ｌである、態様８７に記載の方法。
［態様８９］ 高細胞密度が少なくとも１００ｇ／Ｌである、態様８７に記載の方法。
［態様９０］ 高細胞密度が少なくとも３００ｇ／Ｌである、態様８７に記載の方法。
［態様９１］ 高細胞密度が少なくとも４００ｇ／Ｌである、態様８７に記載の方法。
［態様９２］ 高細胞密度が少なくとも５００ｇ／Ｌである、態様８７に記載の方法。
［態様９３］ 高細胞密度が少なくとも７５０ｇ／Ｌである、態様８７に記載の方法。
［態様９４］ 前記の酵母細胞が少なくとも２０回の倍化の間培養され、そして、前記の酵母細胞が前記の少なくとも２０回の倍化の後に前記のマルチサブユニット複合体の高レベルの発現を維持する、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様９５］ ステップ（ｃ）の細胞が少なくとも５０回の倍化の間培養され、そして、前記の細胞が前記の少なくとも５０回の倍化の後に前記のマルチサブユニット複合体の高レベルの発現を維持する、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様９６］ ステップ（ｃ）の細胞が少なくとも１００回の倍化の間培養され、そして、前記の細胞が前記の少なくとも１００回の倍化の後に前記のマルチサブユニット複合体の高レベルの発現を維持する、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様９７］ 前記のマルチサブユニット複合体のうちの少なくとも１つのサブユニットが分泌シグナルを含む、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様９８］ 前記のマルチサブユニット複合体が抗体を含む、態様９７に記載の方法。
［態様９９］ 前記の分泌シグナルが、配列番号４１４〜４３７およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される１つ以上のポリペプチドを含む、態様９７または９８に記載の方法または組成物。
［態様１００］ 前記のマルチサブユニット複合体が、２０１０年１２月１日に提出された米国特許仮出願番号第６１／４１８，８３２号、２０１１年１２月１日に提出された国際特許出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ１１／６２９６３号、２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０９，２９５号、２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０９，１５３号、２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０８，６６５号、および２０１１年１２月１日に提出された米国特許出願番号第１３／３０８，８３１号に開示される抗体のうちのいずれでもない、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様１０１］ 前記のマルチサブユニット複合体がＡｂ１‐ＮＧＦ、Ａｂ２‐ＮＧＦ、Ａｂ３‐ＮＧＦ、Ａｂ４‐ＮＧＦ、Ａｂ５‐ＮＧＦ、Ａｂ６‐ＮＧＦ、Ａｂ７‐ＮＧＦ、Ａｂ８‐ＮＧＦ、Ａｂ９‐ＮＧＦ、Ａｂ１０‐ＮＧＦ、Ａｂ１１‐ＮＧＦ、Ａｂ１２‐ＮＧＦ、Ａｂ１３‐ＮＧＦ、Ａｂ１４‐ＮＧＦ、Ａｂ１５‐ＮＧＦ、Ａｂ１６‐ＮＧＦ、Ａｂ１７‐ＮＧＦ、Ａｂ１８‐ＮＧＦ、Ａｂ１９‐ＮＧＦ、Ａｂ２０‐ＮＧＦ、およびＡｂ２１‐ＮＧＦ、またはそれらのＦａｂ２断片もしくはＦａｂ１断片ではない、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様１０２］ 前記のマルチサブユニット複合体が、次の抗体、すなわち、Ａｂ１‐ＮＧＦ、Ａｂ２‐ＮＧＦ、Ａｂ３‐ＮＧＦ、Ａｂ４‐ＮＧＦ、Ａｂ５‐ＮＧＦ、Ａｂ６‐ＮＧＦ、Ａｂ７‐ＮＧＦ、Ａｂ８‐ＮＧＦ、Ａｂ９‐ＮＧＦ、Ａｂ１０‐ＮＧＦ、Ａｂ１１‐ＮＧＦ、Ａｂ１２‐ＮＧＦ、Ａｂ１３‐ＮＧＦ、Ａｂ１４‐ＮＧＦ、Ａｂ１５‐ＮＧＦ、Ａｂ１６‐ＮＧＦ、Ａｂ１７‐ＮＧＦ、Ａｂ１８‐ＮＧＦ、Ａｂ１９‐ＮＧＦ、Ａｂ２０‐ＮＧＦ、またはＡｂ２１‐ＮＧＦのいずれかに含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つ全てを含まず、かつ、ＮＧＦへの結合特異性を任意で有する、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様１０３］ 前記のマルチサブユニット複合体が、それぞれ配列番号５１および４０１の、それぞれ配列番号５３および４０２の、それぞれ配列番号４０５および４０６の、ならびにそれぞれ配列番号４０７および４０８の軽鎖ポリペプチド配列および重鎖ポリペプチド配列を含まない、またはそれらのポリペプチド配列から構成されない、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様１０４］ 前記のマルチサブユニット複合体が、配列番号５５、５６、５７、５８、５９、および６０のＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つ全てを含有する抗体を含まず、かつ、ＮＧＦへの結合特異性を任意で有する、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。
［態様１０５］ 前記のマルチサブユニット複合体が、明細書の「抗ＮＧＦ抗体およびＮＧＦへの結合活性を有するその結合断片」および「抗ＮＧＦ抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」という表題の節において開示される抗体または抗体コード配列のうちのいずれも含まない、前述の態様のいずれか１項に記載の方法。

Claims (9)

  1. マルチサブユニットポリペプチドを生産する方法であって、
    （ａ）前記のマルチサブユニットポリペプチドの発現をもたらす遺伝子を含むピキア・パストリス（Pichia pastoris）細胞を含む培養物を提供すること、
    （ｂ）単回のボーラス添加により前記の培養物にエタノールを添加して、前記の培養物におけるエタノール濃度を０．５％〜１．５％の間とすること、および、
    （ｃ）前記の培養物を培養して前記のマルチサブユニットポリペプチドを生産すること、
    を含む、但し、前記のマルチサブユニットポリペプチドの発現をもたらす遺伝子は、アルコール誘導性プロモーターには機能可能に連結されていない；前記マルチサブユニットポリペプチドは完全長抗体ではなく；前記マルチサブユニットポリペプチドは複数のジスルフィド結合を含む、前記方法。
  2. 前記の培養方法は、前記のエタノールのボーラス添加が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、１つ以上の生産物関連変異体の相対量を減少させる、請求項１に記載の方法。
  3. 前記のエタノールのボーラス添加が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、サイズ排除クロマトグラフィーまたはゲル電気泳動によって検出される見かけの分子量が前記の所望のマルチサブユニットポリペプチドよりも大きい、または小さい生産物関連変異体の相対量を減少させる、請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記のエタノールのボーラス添加が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、異常な化学量論組成を有する生産物関連変異体の相対量を減少させる、請求項１または２に記載の方法。
  5. 前記のエタノールのボーラス添加が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、異常なジスルフィド結合を有する生産物関連変異体の相対量を減少させる、請求項１または２に記載の方法。
  6. 前記のエタノールのボーラス添加が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、還元化システインを有する生産物関連変異体の相対量を減少させる、請求項１または２に記載の方法。
  7. 前記のエタノールのボーラス添加が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、異常なグリコシル化を有する生産物関連変異体の相対量を減少させる、請求項１または２に記載の方法。
  8. 前記のエタノールのボーラス添加が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、１つ以上の生産物関連変異体の相対量を減少させる、請求項３に記載の方法。
  9. 前記のエタノールのボーラス添加が無い状態で行われる前記の同じ方法と比べて、前記のマルチサブユニットポリペプチドの純度を上昇させる、請求項３または８に記載の方法。
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