HRP20211873T1 - Proizvodnja visoke čistoće proteina s više podjedinica kao što su protutijela u transformiranim mikrobima kao što je pichia pastoris - Google Patents

Proizvodnja visoke čistoće proteina s više podjedinica kao što su protutijela u transformiranim mikrobima kao što je pichia pastoris Download PDF

Info

Publication number
HRP20211873T1
HRP20211873T1 HRP20211873TT HRP20211873T HRP20211873T1 HR P20211873 T1 HRP20211873 T1 HR P20211873T1 HR P20211873T T HRP20211873T T HR P20211873TT HR P20211873 T HRP20211873 T HR P20211873T HR P20211873 T1 HRP20211873 T1 HR P20211873T1
Authority
HR
Croatia
Prior art keywords
antibody
culture
seq
nos
cdr sequences
Prior art date
Application number
HRP20211873TT
Other languages
English (en)
Inventor
Patricia Dianne Mcneill
Nicole Janson
Gary L. Lesnicki
Pei Qi
John A. Latham
Leon F. Garcia-Martinez
Original Assignee
H. Lundbeck A/S
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by H. Lundbeck A/S filed Critical H. Lundbeck A/S
Publication of HRP20211873T1 publication Critical patent/HRP20211873T1/hr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C12N1/18—Baker's yeast; Brewer's yeast
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Claims (11)

1. Postupak za proizvodnju kompleksa s više podjedinica, koji sadrži: (a) osiguravanje kulture koja sadrži stanice Pichia pastoris koje sadrže gene koji osiguravaju ekspresiju podjedinica navedenog kompleksa s više podjedinica; (b) dodavanje bolusa etanola u navedenu kulturu, što rezultira koncentracijom etanola u navedenoj kulturi od između 0,5% i 1,5% (m/v); i (c) dodavanje hrane koja sadrži najmanje jedan izvor ugljika koji se može fermentirati u navedenu kulturu, i uzgoj navedene kulture radi proizvodnje navedenog kompleksa s više podjedinica, naznačen time što navedeni kompleks s više podjedinica sadrži cijelo ili antitijelo pune duljine koje sadrži polipeptide teškog i lakog lanca, pri čemu navedeni kompleks s više podjedinica nije anti-NGF protutijelo koje sadrži polipeptidne sekvence SEQ ID NO: 401 i SEQ ID NO: 402.
2. Postupak prema patentnom zahtjevu 1, naznačen time što: (i) bolus etanola pospješuje stvaranje stabilnih disulfidnih veza u odnosu na isti postupak koji se provodi u odsutnosti bolusa etanola; (ii) postupak kultiviranja smanjuje relativno obilje jedne ili više varijanti povezanih s proizvodom u odnosu na isti postupak koji se provodi u odsutnosti bolusa etanola; (iii) postupak kultiviranja smanjuje relativno obilje varijanti povezanih s proizvodom koje imaju veću ili nižu prividnu molekularnu masu od navedenog željenog protutijela kako je otkriveno kromatografijom isključivanja veličine ili gel elektroforezom u odnosu na isti postupak koji se provodi u odsutnosti bolusa etanola; (iv) postupak kultiviranja smanjuje relativno obilje protutijela koja imaju aberantnu stehiometriju u odnosu na isti postupak koji se provodi u odsutnosti bolusa etanola; (v) postupak kultiviranja smanjuje relativno obilje protutijela koja imaju aberantne disulfidne veze u odnosu na isti postupak koji se provodi u odsutnosti bolusa etanola; (vi) postupak kultiviranja smanjuje relativno obilje protutijela koja imaju smanjeni cistein u odnosu na isti postupak koji se provodi u odsutnosti bolusa etanola; (vii) postupak kultiviranja smanjuje relativno obilje protutijela koja imaju aberantnu glikozilaciju u odnosu na isti postupak koji se provodi u odsutnosti bolusa etanola; (viii) postupak kultiviranja modulira stvaranje ili stabilnost disulfidnih veza između teških lanaca; (ix) postupak kultiviranja modulira stvaranje ili stabilnost disulfidnih veza koje povezuju lake i teške lance navedenog protutijela; (x) postupak kultiviranja smanjuje relativno obilje jedne ili više varijanti H1L1, H2L1, i H4L4 pridruženih proizvoda; ili (xi) postupak kultiviranja povećava čistoću navedenog protutijela u odnosu na navedeni postupak koji se provodi u odsutnosti navedenog bolusa etanola.
3. Postupak prema patentnom zahtjevu 1 ili 2, naznačen time što: (i) korak (b) rezultira koncentracijom etanola u navedenoj kulturi od između 0,7% i 1,5%, ili između 0,8% i 1,25% (m/v); (ii) korak (b) rezultira koncentracijom etanola u navedenoj kulturi koja iznosi 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8% ili 0,9% (m/v); (iii) korak (b) rezultira koncentracijom etanola u navedenoj kulturi koja iznosi 1,5%, 1,4%, 1,3%, 1,2%, 1,1%, 1,0%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, ili 0,5% (m/v); (iv) korak (b) obuhvaća dodavanje etanola u navedenu kulturu, dodavanje nosača koji sadrži etanol u navedenu kulturu, dodavanje navedenih stanica u medij ili nosač koji sadrži etanol, ili zamjenu dijela medija za uzgoj; (v) bolus etanola se dodaje u medij za uzgoj tijekom vremenskog razdoblja između 1 i 20 minuta; (vi) korak (c) obuhvaća opskrbu kisikom navedenih stanica; (vii) korak (c) obuhvaća opskrbu kisikom navedenih stanica miješanjem kulture; (viii) korak (c) obuhvaća opskrbu kisikom navedenih stanica dovođenjem u kontakt navedene kulture sa smjesom plinova koja sadrži kisik; (ix) korak (c) uključuje dodavanje hrane koja sadrži jednu ili više od glukoze, etanola, citrata, sorbitola, ksiloze, trehaloze, arabinoze, galaktoze, fruktoze, melibioze, laktoze, maltoze, ramnoze, riboze, manoze, manitola i rafinoze; (x) postupak kultiviranja nadalje uključuje održavanje koncentracije etanola između gornje zadane vrijednosti i donje zadane vrijednosti tijekom koraka (c); (xi) postupak kultiviranja nadalje uključuje održavanje koncentracije etanola između gornje zadane vrijednosti i donje zadane vrijednosti tijekom koraka (c), pri čemu je navedena donja zadana vrijednost 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8% ili 0,9% (m/v); (xii) postupak kultiviranja nadalje uključuje održavanje koncentracije etanola između gornje zadane vrijednosti i donje zadane vrijednosti tijekom koraka (c) pri čemu je navedena gornja zadana vrijednost 1,5%, 1,4%, 1,3%, 1,2%, 1,1%, 1,0%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, ili 0,6% (m/v); ili (xiii) postupak kultiviranja nadalje uključuje održavanje koncentracije etanola između gornje zadane vrijednosti i donje zadane vrijednosti tijekom koraka (c), pri čemu je navedena donja zadana vrijednost 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8% ili 0,9% (m/v) i navedena gornja zadana vrijednost je 1,5%, 1,4%, 1,3%, 1,2%, 1,1%, 1,0%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, ili 0,6% (m/v).
4. Postupak prema bilo kojem od patentnih zahtjeva 1 do 3, naznačen time što: (i) koncentracija etanola se održava na zadanoj vrijednosti tijekom koraka (c); (ii) koncentracija etanola se održava na zadanoj vrijednosti koja je 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1%, 1,1%, 1,2%, 1,3%, 1,4%, ili 1,5% (m/v) tijekom koraka (c); (iii) korak (c) uključuje održavanje koncentracije etanola u navedenoj kulturi između 0,7% i 1,5%, ili između 0,8% i 1,25% (m/v); (iv) koncentracija etanola u kulturi iz koraka (c) održava se kontroliranjem proizvodnje etanola s navedenim stanicama ili dodavanjem etanola u navedenu kulturu; (v) koncentracija etanola u kulturi iz koraka (c) održava se kontroliranjem proizvodnje etanola s navedenim stanicama ili dodavanjem etanola u navedenu kulturu, pri čemu korak kontrole proizvodnje etanola uključuje kontrolu jedne ili više od koncentracije glukoze, dostupnosti kisika, intenziteta miješanja, tlaka plina, brzine protoka dovedenog zraka ili druge plinske smjese, viskoznosti kulture, gustoće kulture, koncentracije kisika u dovedenom zraku ili drugoj plinskoj smjesi i temperature; (vi) vrijeme između koraka (a) i koraka (b) je manje od 72 sata, manje od 48 sati, manje od 24 sata, manje od 12 sati, manje od 9 sati, manje od 6 sati, manje od 5 sati, manje od 4 sata, manje od 3 sata, manje od 90 minuta, manje od 30 minuta, manje od 5 minuta, ili manje od 1 minute; (vii) vrijeme između koraka (b) i koraka (c) je manje od 10 sati, manje od 9 sati, manje od 8 sati, manje od 7 sati, manje od 6 sati, manje od 5 sati, manje od 4 sata, manje od 3 sata, manje od 2 sata, manje od 90 minuta, manje od 80 minuta, manje od 70 minuta, manje od 60 minuta, manje od 50 minuta, manje od 40 minuta, manje od 30 minuta, manje od 20 minuta, manje od 10 minuta, manje od 5 minuta, ili manje od 1 minute; (viii) kultura iz koraka (a) se proizvodi dodavanjem izvora ugljika u navedenu kulturu i uzgojem navedene kulture dok se ne iscrpi izvor ugljika; (ix) kultura iz koraka (a) se proizvodi dodavanjem izvora ugljika u navedenu kulturu i uzgojem navedene kulture dok se ne iscrpi izvor ugljika, pri čemu navedeni izvor ugljika sadrži jedno ili više od: glicerola, glukoze, etanola, citrata, sorbitola, ksiloze, trehaloze, arabinoze, galaktoze, fruktoze, melibioze, laktoze, maltoze, ramnoze, riboze, manoze, manitola i rafinoze; (x) kultura iz koraka (a) se proizvodi dodavanjem izvora ugljika u navedenu kulturu i uzgojem navedene kulture dok se ne iscrpi izvor ugljika pri čemu se iscrpljivanje izvora ugljika određuje otkrivanjem smanjenja metaboličke aktivnosti navedenih stanica Pichia pastoris; (xi) kultura iz koraka (a) se proizvodi dodavanjem izvora ugljika u navedenu kulturu i uzgojem navedene kulture dok se ne iscrpi izvor ugljika pri čemu se iscrpljivanje izvora ugljika određuje otkrivanjem smanjenja metaboličke aktivnosti navedenih stanica Pichia pastoris, pri čemu se navedeno smanjenje metaboličke aktivnosti navedenih stanica Pichia pastoris identificira otkrivanjem smanjenja potrošnje kisika od strane navedenih stanica Pichia pastoris, otkrivanjem povećanja pH u kulturi, otkrivanjem stabilizacije mase vlažnih stanica, ili otkrivanjem povećanja koncentracije amonijaka u kulturi; ili (xii) kultura iz koraka (a) se proizvodi dodavanjem izvora ugljika u navedenu kulturu i uzgojem navedene kulture dok se ne iscrpi izvor ugljika pri čemu se iscrpljivanje izvora ugljika određuje otkrivanjem smanjenja metaboličke aktivnosti navedenih stanica Pichia pastoris, pri čemu se navedeno smanjenje metaboličke aktivnosti navedenih stanica Pichia pastoris identificira otkrivanjem smanjenja potrošnje kisika od strane navedenih stanica Pichia pastoris, otkrivanjem povećanja pH u kulturi, otkrivanjem stabilizacije mase vlažnih stanica, ili otkrivanjem povećanja koncentracije amonijaka u kulturi, pri čemu se navedeno smanjenje potrošnje kisika od strane stanica Pichia pastoris identificira otkrivanjem povećanja koncentracije otopljenog kisika u navedenoj kulturi.
5. Postupak prema bilo kojem od patentnih zahtjeva 1-4, naznačen time što: (i) stanice Pichia pastoris sadrže gene integrirane u njihov genom koji osiguravaju ekspresiju navedenog protutijela pri čemu su navedeni geni integrirani u jedan ili više genomskih lokusa; (ii) stanice Pichia pastoris sadrže gene integrirane u njihov genom na lokusima odabranim iz skupine koju čine pGAP lokus, 3' AOX TT lokus; PpURA5; OCHl; AOX1; HIS4; GAP; pGAP; 3' AOX TT; ARG; i lokus HIS4 TT; (iii) geni koji kodiraju podjedinice protutijela su eksprimirani pod kontrolom inducibilnog ili konstitutivnog promotora; (iv) geni koji kodiraju podjedinice protutijela su eksprimirani pod kontrolom inducibilnog promotora odabranog iz skupine koju čine AOX1, CUP1, tetraciklinom inducibilni, tiaminom inducibilni i FLDl promotori; (v) najmanje jedan od gena koji kodiraju navedene podjedinice protutijela su eksprimirani pod kontrolom promotora odabranog iz skupine koju čine: CUP1, AOX1, ICL1, gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaza (GAP), FLD1, ADH1, alkoholna dehidrogenaza II, GAL4, PHO3, PHO5, i Pyk promotori, tetraciklinom inducibilni promotori, tiaminom inducibilni promotori, kimerni promotori izvedeni iz njih, promotori kvasca, promotori sisavaca, promotori insekata, promotori biljaka, promotori gmazova, promotori vodozemaca, virusni promotori, i ptičji promotori; i/ili (xi) stanice Pichia pastoris su diploidne, tetraploidne ili poliploidne stanice.
6. Postupak prema bilo kojem od patentnih zahtjeva 1-5, naznačen time što nadalje sadrži najmanje jedno od slijedećeg: (i) pročišćavanje navedenog protutijela iz navedenih stanica Pichia pastoris ili iz medija za uzgoj; (ii) pročišćavanje navedenog protutijela iz unutarstanične komponente, citoplazme, nukleoplazme, ili membrane navedenih stanica Pichia pastoris; (iii) stanice Pichia pastoris izlučuju navedeno protutijelo u medij za uzgoj; (iv) pročišćavanje navedenog protutijela iz navedenog medija za uzgoj; (v) protutijelo sadrži monospecifično ili bispecifično protutijelo; (vi) protutijelo sadrži ljudsko protutijelo ili humanizirano protutijelo; (vii) protutijelo sadrži humanizirano protutijelo pri čemu je navedeno humanizirano protutijelo mišjeg, štakorskog, zečjeg, kozjeg, ovčjeg ili kravljeg podrijetla; (viii) protutijelo sadrži humanizirano protutijelo zečjeg podrijetla; (ix) protutijelo sadrži jednovalentno, dvovalentno ili multivalentno protutijelo; (x) protutijelo je pročišćeno iz navedene kulture pomoću afiniteta za protein A i/ili protein G; (xi) najmanje jedan od gena koji osiguravaju ekspresiju podjedinice navedenog protutijela u najmanje jednoj od navedenih stanica Pichia pastoris u navedenoj ploči optimiziran je za ekspresiju u navedenoj stanici kvasca; (xii) čistoća navedenog protutijela procjenjuje se mjerenjem udjela protutijela proizvedenog od strane navedene stanice kvasca koji se nalazi u kompleksima protutijela koji imaju očekivani prividni hidrodinamički radijus, sadržan je u kompleksima protutijela očekivane molekularne mase, i / ili specifično veže metu navedenog protutijela; (xiii) prinos navedenog protutijela procjenjuje se određivanjem količine protutijela proizvedenog od strane navedene stanice kvasca bez obzira na sve varijante povezane s proizvodom koje su abnormalno glikozilirane, sadržane u kompleksima protutijela, osim u kompleksima koji imaju očekivani prividni hidrodinamički radijus, sadržane u kompleksima antitijela imaju očekivanu molekularnu masu, i / ili da se ne mogu specifično vezati na cilj navedenog protutijela i molekularna masa navedenih kompleksa protutijela je izborno određena s ne-reducirajućim SDS-PAGE; (xiv) navedeni postupak nadalje uključuje pročišćavanje navedenog protutijela; (xv) stanice kulture proizvode titar supernatanta protutijela od najmanje 100 mg/L, najmanje 150 mg/L, najmanje 200 mg/L, najmanje 250 mg/L, najmanje 300 mg/L, između 100 i 300 mg/L, između 100 i 500 mg/L, između 100 i 1000 mg/L, najmanje 1000 mg/L, najmanje 1250 mg/litri, najmanje 1500 mg/litri, najmanje 1750 mg/litri, najmanje 2000 mg/litri, najmanje 10000 mg/litri, ili više; (xvi) jedna ili više podjedinica navedenog protutijela su eksprimirane iz više od jedne kopije gena; (xvii) protutijelo je eksprimirano iz između 1-10 kopija gena koji kodira laki lanac navedenog protutijela i iz 1-10 kopija gena koji kodira teški lanac navedenog protutijela, po izboru integriranih u genom navedenih stanica; (xviii) geni koji osiguravaju ekspresiju navedenog protutijela nalaze se na ekstrakromosomskom elementu, plazmidu ili umjetnom kromosomu; (xix) stanice Pichia pastoris sadrže više kopija gena koji osiguravaju ekspresiju lakog lanca navedenog protutijela nego kopije gena koji osiguravaju ekspresiju teškog lanca navedenog protutijela; (xx) kultivirane stanice sadrže više kopija gena koji osiguravaju ekspresiju lakog lanca navedenog protutijela nego kopije gena koji osiguravaju ekspresiju teškog lanca navedenog protutijela, pri čemu odgovarajući broj kopija gena koji kodiraju teški lanac navedenog protutijela i broj kopija gena koji kodira laki lanac navedenog protutijela u navedenim stanicama je: 2 i 2, 2 i 3, 3 i 3, 3 i 4, 3 i 5, 4 i 3, 4 i 4, 4 i 5, 4 i 6, 5 i 4, 5 i 5, 5 i 6, ili 5 i 7; i (xxi) kultivirane stanice sadrže više kopija gena koji osiguravaju ekspresiju lakog lanca navedenog protutijela nego kopije gena koji osiguravaju ekspresiju teškog lanca navedenog protutijela, i nadalje pri čemu odgovarajući broj kopija gena koji kodira teški lanac navedenog protutijela i broj kopija gena koji kodira laki lanac navedenog protutijela u navedenim stanicama je: 2 i 1, 3 i 1, 4 i 1, 5 i 1, 6 i 1, 7 i 1, 8 i 1, 9 i 1, 10 i 1, 1 i 2, 2 i 2, 3 i 2, 4 i 2, 5 i 2, 6 i 2, 7 i 2, 8 i 2, 9 i 2, 10 i 2, 1 i 3, 2 i 3, 3 i 3, 4 i 3, 5 i 3, 6 i 3, 7 i 3, 8 i 3, 9 i 3, 10 i 3, 1 i 4, 2 i 4, 3 i 4, 4 i 4, 5 i 4, 6 i 4, 7 i 4, 8 i 4, 9 i 4, 10 i 4, 1 i 5, 2 i 5, 3 i 5, 4 i 5, 5 i 5, 6 i 5, 7 i 5, 8 i 5, 9 i 5, 10 i 5, 1 i 6, 2 i 6, 3 i 6, 4 i 6, 5 i 6, 6 i 6, 7 i 6, 8 i 6, 9 i 6, 10 i 6, 1 i 7, 2 i 7, 3 i 7, 4 i 7, 5 i 7, 6 i 7, 7 i 7, 8 i 7, 9 i 7, 10 i 7, 1 i 8, 2 i 8, 3 i 8, 4 i 8, 5 i 8, 6 i 8, 7 i 8, 8 i 8, 9 i 8, 10 i 8, 1 i 9, 2 i 9, 3 i 9, 4 i 9, 5 i 9, 6 i 9, 7 i 9, 8 i 9, 9 i 9, 10 i 9, 1 i 10, 2 i 10, 3 i 10, 4 i 10, 5 i 10, 6 i 10, 7 i 10, 8 i 10, 9 i 10, 10 i 10.
7. Postupak prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahtjeva, naznačen time što: (i) kultura iz koraka (c) se uzgaja u mediju za proizvodnju; (ii) kultura iz koraka (c) se uzgaja u mediju za proizvodnju koji sadrži minimalni medij; (iii) kultura iz koraka (c) se uzgaja u mediju za proizvodnju koji sadrži minimalni medij kojem nedostaju selektivna sredstva; (iv) kultura iz koraka (c) se uzgaja u mediju za proizvodnju koji sadrži minimalni medij kojem nedostaju prethodno formirane aminokiseline ili druge složene biomolekule; (v) kultura iz koraka (c) se uzgaja u mediju za proizvodnju koji sadrži složeni medij; (vi) kultura iz koraka (c) se uzgaja u mediju za proizvodnju koji sadrži složeni medij koji sadrži jedan ili više ekstrakta kvasca, sojinih peptona i drugih biljnih peptona; (vii) kultura iz koraka (c) uzgaja se do visoke gustoće stanica; (viii) kultura iz koraka (c) uzgaja se do gustoće stanica koja je najmanje 50 g/L; (ix) kultura iz koraka (c) uzgaja se do gustoće stanica koja je najmanje 100 g/L; (x) kultura iz koraka (c) uzgaja se do gustoće stanica koja je najmanje 300 g/L; (xi) kultura iz koraka (c) uzgaja se do gustoće stanica koja je najmanje 400 g/L; (xii) kultura iz koraka (c) uzgaja se do gustoće stanica koja je najmanje 500 g/L; (xiii) kultura iz koraka (c) uzgaja se do gustoće stanica koja je najmanje 750 g/L; (xiv) stanice Pichia pastoris iz koraka (c) uzgajaju se tijekom najmanje 20 udvostručenja i održavaju visoke razine ekspresije navedenog protutijela nakon navedenih najmanje 20 udvostručenja; (xv) stanice Pichia pastoris iz koraka (c) uzgajaju se tijekom najmanje 50 udvostručenja i održavaju visoke razine ekspresije navedenog protutijela nakon navedenih najmanje 50 udvostručenja; ili (xvi) stanice Pichia pastoris iz koraka (c) uzgajaju se tijekom najmanje 100 udvostručenja i održavaju visoke razine ekspresije navedenog protutijela nakon navedenih najmanje 100 udvostručenja.
8. Postupak prema bilo kojem od patentnih zahtjeva 1-7, naznačen time što je najmanje jedna podjedinica protutijela kodirana genom koji sadrži signal sekrecije pri čemu opcijski signal izlučivanja sadrži jedan ili više polipeptida odabranih iz skupine koju čine: SEQ ID NOS: 414 do 437 i bilo koja njihova kombinacija.
9. Postupak prema bilo kojem od patentnih zahtjeva 1 do 8, naznačen time što kompleks s više podjedinica ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:5-10, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs: 15-20, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:25-30, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:35-40, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:45-50, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:55-60, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:65-70, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:75-80, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:85-90, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:95-100, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs: 105-110, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs: 115-120, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs: 125-130, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:135-140, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs: 145-150, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs: 155-160, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:165-170, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:175-180, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:185-190, ne sadrži svih šest CDR sekvenci iz SEQ ID NOs:195-200.
10. Postupak prema bilo kojem od patentnih zahtjeva 1 do 9, naznačen time što kompleks s više podjedinica nije anti-NGF protutijelo.
11. Postupak prema bilo kojem od patentnih zahtjeva 1 do 8 ili 10, naznačen time što kompleks s više podjedinica ne sadrži najmanje jedan, najmanje dva, najmanje tri, najmanje četiri, ili najmanje pet CDR-ova sadržanih u bilo kojem od sljedećih protutijela: protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs 5-10, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs:15-20, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 25-30, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 35-40, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 45-50, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 55-60, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 65-70, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 75-80, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 85-90, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 95-100, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 105-110, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 115-120, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 125-130, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 135-140, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 145-150, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 155-160, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 165-170, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 175-180, protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 185-190, ili protutijelu koje ima CDR sekvence iz SEQ ID NOs: 195-200 i po izboru ima specifičnost vezanja za NGF.
HRP20211873TT 2011-05-20 2012-05-08 Proizvodnja visoke čistoće proteina s više podjedinica kao što su protutijela u transformiranim mikrobima kao što je pichia pastoris HRP20211873T1 (hr)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161488660P 2011-05-20 2011-05-20
US201161496860P 2011-06-14 2011-06-14
US201161496873P 2011-06-14 2011-06-14
US201161525307P 2011-08-19 2011-08-19
PCT/US2012/036953 WO2012161956A2 (en) 2011-05-20 2012-05-08 High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as pichia pastoris
EP12789187.7A EP2710114B1 (en) 2011-05-20 2012-05-08 High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as pichia pastoris

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HRP20211873T1 true HRP20211873T1 (hr) 2022-03-04

Family

ID=47217961

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HRP20211873TT HRP20211873T1 (hr) 2011-05-20 2012-05-08 Proizvodnja visoke čistoće proteina s više podjedinica kao što su protutijela u transformiranim mikrobima kao što je pichia pastoris

Country Status (21)

Country Link
EP (1) EP2710114B1 (hr)
JP (2) JP6193220B2 (hr)
KR (1) KR101981662B1 (hr)
CN (2) CN110408644A (hr)
BR (1) BR112013029902A2 (hr)
CA (1) CA2837000C (hr)
CY (1) CY1124796T1 (hr)
DK (1) DK2710114T3 (hr)
EA (1) EA028913B9 (hr)
ES (1) ES2899381T3 (hr)
HR (1) HRP20211873T1 (hr)
HU (1) HUE060418T2 (hr)
IL (1) IL229430B (hr)
LT (1) LT2710114T (hr)
MX (2) MX368546B (hr)
PL (1) PL2710114T3 (hr)
PT (1) PT2710114T (hr)
RS (1) RS62628B1 (hr)
SG (1) SG194937A1 (hr)
SI (1) SI2710114T1 (hr)
WO (1) WO2012161956A2 (hr)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111973740A (zh) * 2014-03-21 2020-11-24 泰华制药国际有限公司 针对降钙素基因相关肽的拮抗剂抗体及其使用方法
TW202140776A (zh) * 2016-04-26 2021-11-01 美商美國泰福生技股份有限公司 細胞培養基
GB201803832D0 (en) * 2018-03-09 2018-04-25 Syndermix Ag Methods and compositions for lectin production
CN108913732B (zh) * 2018-07-31 2022-02-08 华东理工大学 一种莫纳可林j异源生产的方法及应用

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4855231A (en) 1984-10-30 1989-08-08 Phillips Petroleum Company Regulatory region for heterologous gene expression in yeast
US4818700A (en) 1985-10-25 1989-04-04 Phillips Petroleum Company Pichia pastoris argininosuccinate lyase gene and uses thereof
US4812405A (en) 1986-02-18 1989-03-14 Phillips Petroleum Company Double auxotrophic mutants of Pichia pastoris and methods for preparation
US4929555A (en) 1987-10-19 1990-05-29 Phillips Petroleum Company Pichia transformation
AU6445894A (en) 1993-03-19 1994-10-11 Duke University Method of treatment of tumors with an antibody binding to tenascin
IL114909A (en) 1994-08-12 1999-10-28 Immunomedics Inc Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
US5955349A (en) 1996-08-26 1999-09-21 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for producing heterologous polypeptides in Pichia methanolica
US5736383A (en) 1996-08-26 1998-04-07 Zymogenetics, Inc. Preparation of Pichia methanolica auxotrophic mutants
US6653104B2 (en) 1996-10-17 2003-11-25 Immunomedics, Inc. Immunotoxins, comprising an internalizing antibody, directed against malignant and normal cells
US6730499B1 (en) 1998-07-03 2004-05-04 Research Corporation Technologies, Inc. Promoter for the Pichia pastoris formaldehyde dehydrogenase gene FLD1
WO2000056903A2 (en) * 1999-03-22 2000-09-28 Zymogenetics, Inc. IMPROVED METHODS FOR PRODUCING PROTEINS IN TRANSFORMED $i(PICHIA)
US6258559B1 (en) 1999-03-22 2001-07-10 Zymogenetics, Inc. Method for producing proteins in transformed Pichia
US7560249B2 (en) * 2000-12-13 2009-07-14 Unilever Bestfoods, North America, Division Of Conopco, Inc. Method for the production of a heterologous protein by a fungus
SI1678314T1 (sl) 2003-10-22 2013-01-31 Keck Graduate Institute Metode za sintetiziranje heteromultimernih polipeptidov pri kvasovkah s strategijo razmnoĺ˝evanja haploidnih celic
WO2008063302A2 (en) * 2006-10-10 2008-05-29 Keck Graduate Institute Novel p. pastoris pastoris promoters, and the use thereof to direct expression of proteins in yeast, preferably using a haploid mating strategy
SI2164514T1 (sl) 2007-05-21 2017-04-26 Alderbio Holdings Llc Protitelesa proti IL-6 in njihova uporaba
CA2688829A1 (en) 2007-05-21 2008-11-27 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
AU2011336470B8 (en) * 2010-12-01 2017-09-14 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF compositions and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP2710114B1 (en) 2021-11-03
WO2012161956A3 (en) 2013-01-17
MX368546B (es) 2019-10-07
EP2710114A4 (en) 2014-11-19
CN103827290A (zh) 2014-05-28
ES2899381T3 (es) 2022-03-11
EA028913B1 (ru) 2018-01-31
EA201301294A1 (ru) 2014-05-30
IL229430A0 (en) 2014-01-30
KR20140033445A (ko) 2014-03-18
JP2018007656A (ja) 2018-01-18
HUE060418T2 (hu) 2023-02-28
RS62628B1 (sr) 2021-12-31
NZ718187A (en) 2017-10-27
EA028913B9 (ru) 2018-03-30
IL229430B (en) 2020-07-30
PT2710114T (pt) 2021-12-09
LT2710114T (lt) 2021-12-10
KR101981662B1 (ko) 2019-05-23
JP6193220B2 (ja) 2017-09-06
CA2837000A1 (en) 2012-11-29
SI2710114T1 (sl) 2022-01-31
DK2710114T3 (da) 2021-12-06
CY1124796T1 (el) 2022-11-25
WO2012161956A2 (en) 2012-11-29
CN110408644A (zh) 2019-11-05
NZ618635A (en) 2016-09-30
EP2710114A2 (en) 2014-03-26
SG194937A1 (en) 2013-12-30
MX2019012022A (es) 2019-11-18
MX2013013532A (es) 2015-08-20
CA2837000C (en) 2021-09-14
WO2012161956A9 (en) 2013-09-06
PL2710114T3 (pl) 2022-01-17
JP2014517698A (ja) 2014-07-24
JP6491696B2 (ja) 2019-03-27
BR112013029902A2 (pt) 2016-12-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11447540B2 (en) Pichia pastoris yeast cultures comprising reduced antibody-associated variants
US20200385444A1 (en) Cell culture medium
TWI666318B (zh) 在經轉形的微生物如巴斯德畢赤氏酵母中的多－複製策略用於多－次級單元的蛋白質如抗體之高效價且高純度生產技術
US11225667B2 (en) Multi-copy strategy for high-titer and high-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as Pichia pastoris
CN105229154A (zh) 组成型启动子
HRP20211873T1 (hr) Proizvodnja visoke čistoće proteina s više podjedinica kao što su protutijela u transformiranim mikrobima kao što je pichia pastoris
US9802993B2 (en) Method for producing a cell for protein production by treating a cell overexpressing a taurine transporter with methotrexate
EP2684948B1 (en) Method for producing antibodies or antibody fragments using yeast having knocked out vps gene
US20190390239A1 (en) Temperature shift for high yield expression of polypeptides in yeast and other transformed cells
Felber et al. Strains and molecular tools for recombinant protein production in Pichia pastoris
Ningaraju et al. Pichia pastoris-A Model System for Expression of Recombinant Proteins
CN117467682A (zh) 一种基于n端编码序列增强l-色氨酸合成的方法
EA014422B1 (ru) ШТАММ ДРОЖЖЕЙ PICHIA PASTORIS PS107(pPIC9HAbIL-2), ЯВЛЯЮЩИЙСЯ ПРОДУЦЕНТОМ ГИБРИДНОГО БЕЛКА, СОСТОЯЩЕГО ИЗ АЛЬБУМИНА ПЛАЗМЫ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА И ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 ЧЕЛОВЕКА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pPIC9HAbIL-2 И СПОСОБ ЕЕ КОНСТРУИРОВАНИЯ
NZ711400B2 (en) Temperature shift for high yield expression of polypeptides in yeast and other transformed cells
Ojito Magaz et al. Development of a Fed-Batch Strategy for the Production of NS0-Derived Humanised Mab in Protein Free Medium