EA028913B1 - Получение антител высокой чистоты в pichia pastoris - Google Patents

Получение антител высокой чистоты в pichia pastoris Download PDF

Info

Publication number
EA028913B1
EA028913B1 EA201301294A EA201301294A EA028913B1 EA 028913 B1 EA028913 B1 EA 028913B1 EA 201301294 A EA201301294 A EA 201301294A EA 201301294 A EA201301294 A EA 201301294A EA 028913 B1 EA028913 B1 EA 028913B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
pain
sequence
ngf
binding
Prior art date
Application number
EA201301294A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201301294A1 (ru
EA028913B9 (ru
Inventor
Патрисия Дайэн МакНейл
Николь Дженсон
Гэри Л. Лесники
Пэй Ци
Джон А. Лэтам
Леон Ф. Гарсия-Мартинес
Original Assignee
Олдербайо Холдингз Ллк
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Олдербайо Холдингз Ллк filed Critical Олдербайо Холдингз Ллк
Publication of EA201301294A1 publication Critical patent/EA201301294A1/ru
Publication of EA028913B1 publication Critical patent/EA028913B1/ru
Publication of EA028913B9 publication Critical patent/EA028913B9/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C12N1/18—Baker's yeast; Brewer's yeast
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Раскрыты способы получения гетерологических мультисубъединичных белков в трансформированных клетках. В частности, в настоящем раскрытии предлагаются усовершенствованные способы получения мультисубъединичных белков, включая антитела и другие мультисубъединичные белки, которые могут подвергаться или не подвергаться секреции, с повышением выхода и понижением продукции нежелательных побочных продуктов. В типичных вариантах воплощения трансформированными клетками являются дрожжи, например метанольные дрожжи, такие как Pichia pastoris.

Description

настоящее изобретение не ограничивается конкретными описанными способами, протоколами, линиями клеток, видами или родами животных и реагентами, поскольку они могут варьироваться. Также следует понимать, что терминология, используемая здесь, предназначена для описания только конкретных вариантов воплощения и не предназначена для ограничивания объема настоящего изобретения, которое ограничено только прилагаемой формулой изобретения.
При использовании здесь существительные в единственном числе включают формы множественного числа, если только из контекста не следует явным образом иное. Таким образом, к примеру, обозначение "клетка" включает множество таких клеток, а обозначение "белок" включает обозначения одного или более белков и их эквивалентов, известных специалисту в данной области техники и т.д. Все технические и научные термины, используемые здесь, обладают тем же значением, под которым их обычно понимают обычные специалисты в данной области техники, к которой относится изобретение, если только явным образом не заявлено иное.
Болюсное добавление
В настоящем раскрытии "болюсное добавление" обычно обозначает быстрое изменение концентрации вещества (например, этанола), контактирующего с культивируемыми клетками (к примеру, в питательной среде). К примеру, вещество может добавляться к культивируемым клеткам разово, несколько раз последовательно, и/или инфузией в течение определенного периода времени (например, в течение более чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 90 или 120 мин). Помимо этого вещество может добавляться путем полного или частичного замещения питательной среды, к примеру, путем концентрирования клеток (при помощи центрифугирования, фильтрования, осаждения или иных способов), удаления части или всей среды и добавления вещества, или путем добавления клеток в среду, содержащую вещество. Вещество может быть подмешано к носителю (например, питательной среде, воде, солевому раствору и т.д.). К примеру, болюсное добавление этанола может включать добавление в питательную среду чистого или концентрированного этанола (например, 100, 95, 70, 50, 60, 40, 30, 20% и т.д.) в количестве, достаточном для достижения желаемой концентрации. В качестве другого примера, клетки могут быть добавлены в среду, содержащую этанол, например, путем добавления инокулята, содержащего клетки, в среду, содержащую этанол.
Болюсная концентрация:
В настоящем раскрытии "болюсная концентрация" обычно обозначает концентрацию, которая получается при болюсном добавлении вещества (например, этанола).
Спаривание компетентных видов дрожжей:
Подразумевается, что настоящее изобретение в широком плане охватывает любые диплоидные или тетраплоидные дрожжи, которые могут выращиваться в культуре. Такие виды дрожжей могут существовать в гаплоидной, диплоидной или иной полиплоидной форме. Клетки с заданной плоидностью могут в соответствующих условиях пролиферировать в течение неопределённого количества поколений в эту форму. Диплоидные клетки также могут спорулировать в гаплоидные клетки. Последовательное спаривание может приводить к тетраплоидным штаммам при дальнейшем скрещивании или сливании диплоидных штаммов. В настоящем изобретении предполагается использование гаплоидных дрожжей, а также диплоидных или иных полиплоидных клеток дрожжей, полученных, к примеру, посредством спаривания или слияния (например, слияния сферопластов).
В одном варианте воплощения изобретения спариваемые компетентные дрожжи принадлежат к семейству §ассЬаготусе1асеае, которое включает роды Аг.\ю/ута: АхсоЪоОуо/ута: Сбеготусек; ЭеЪагуотусс5: Эеккега: ЕгетоШесшт; ПзаЮкепИа; Ка/асНЧаша: К1иууеготусе8; Кобатаеа: Еоббеготусех: РасЬу8о1еп; Рю1иа: БассЬаготусек; §а1игт8рога; ТеЦарбброга: Тоги1а8рога; ХУППоршх и ЕудокассЬаготусе8. Другие типы дрожжей, потенциально пригодные для использования по изобретению, включают УаггоМа; КЬобокропбшт; Сапб1ба; Натетба: ЕПоЪашит: §ропбюЪо1и8; Ви11ега; Ьеисокропбшт и ЕПоЬа81бе11а.
В предпочтительном варианте воплощения изобретения компетентными при спаривании дрожжами
- 17 028913
служит член рода ИеЫа или иного метанолъного рода. В другом предпочтительном варианте воплощения изобретения, компетентными при спаривании дрожжами рода ИеЫа является один из следующих видов: ИеЫа рахЮпх. ИеЫа тейаиойеа и Наи8еии1а ро1утотрйа (ИеЫа аиди81а). В особенно предпочтительном варианте воплощения изобретения, компетентными при спаривании дрожжами рода ИеЫа является вид ИеЫа раЧогш.
Гаплоидная клетка дрожжей:
Клетка, имеющая по одной копии каждого гена из нормального геномного (хромосомного) комплемента.
Полиплоидная клетка дрожжей:
Клетка, обладающая более чем одной копией нормального геномного (хромосомного) комплемента.
Диплоидная клетка дрожжей:
Клетка, обладающая двумя копиями (аллелями) практически каждого гена нормального геномного комплемента, обычно образующаяся в процессе слияния (спаривания) двух гаплоидных клеток.
Тетраплоидная клетка дрожжей:
Клетка, обладающая четырьмя копиями (аллелями) практически каждого гена нормального геномного комплемента, обычно образующаяся в процессе слияния (спаривания) двух диплоидных клеток. Тетраплоиды могут нести две, три, четыре или более различных кассет экспрессии. Такие тетраплоиды могу быть получены у 8. еегетыае посредством селективного спаривания гомозиготных гетероталломных а/а и альфа/альфа диплоидов, а у ИеЫа путем последовательного спаривания гаплоидов с получением ауксотрофных диплоидов. К примеру, гаплоид [мет гис] может быть спарен с гаплоидом [аде гис] для получения диплоида [гис]; а гаплоид [мет арг] может быть спарен с гаплоидом [аде арг] для получения диплоида [арг]; затем диплоид [гис] может быть спарен с диплоидом [арг] для получения тетраплоидного прототрофа. Специалистам в данной области техники понятно, что указание на выгодность и использование диплоидных клеток может также применяться к тетраплоидным клеткам.
Спаривание дрожжей:
Процесс, при котором две клетки дрожжей сливаются, образуя единую дрожжевую клетку. Слитые клетки могут быть гаплоидными клетками или клетками более высокой плоидности (например, при спаривании двух диплоидных клеток получается тетраплоидная клетка).
Мейоз:
Процесс, при котором диплоидная дрожжевая клетка подвергается редукционному делению с образованием четырех гаплоидных споровых продуктов. Каждая спора затем может прорастать, образуя гаплоидную вегетативно растущую клеточную линию.
Селектируемый маркер:
Селектируемый маркер является геном или фрагментом гена, придающим фенотип роста (харктеристику физического роста) клетке, получившей этот ген, например, через событие трансформации. Селектируемый маркер позволяет этой клетке выживать и развиваться в селективной среде в условиях, в которых клетки, не получившие селектируемого маркера, не способны развиваться. Гены селектируемых маркеров обычно подразделяются на несколько типов, включая гены положительных селектируемых маркеров, такие как ген, придающий клетке устойчивость к антибиотику или иному лекарственному средству, температуре, если скрещиваются два мутанта, чувствительные к температуре ("ΐδ") или если трансформируется ΐδ-мутант; гены отрицательных селектируемых маркеров, такие как ген биосинтеза, который придает клетке способность развиваться на среде без конкретного питательного вещества, необходимого всем клеткам, не имеющим гена биосинтеза, или мутагенизированный ген биосинтеза, который придает клетке неспособность расти с клетками, не обладающими геном дикого типа; и т.д. Подходящие маркеры включают, не ограничиваясь перечисленным, следующие: ΖΕΟ; ΝΕΟ (0418); ЬУ83; МЕТ1; МЕТЗа; ΛΌΕ1; ΛΌΕ3; ИКАЗ и т.п.
Встроенный:
Генетический элемент (обычно гетерологический генетический элемент), который ковалентно связан с хромосомой организма.
Тандемно интегрированный:
Две или более копий генетического элемента, которые встроены в соседних положениях в хромосому. Две или более копии необязательно должны обладать ориентацией; например, в случае транскрибируемых генов, некоторые копии могут транскрибироваться с нити Уотсона, а остальные - с нити Крика.
Клетка-хозяин:
В контексте настоящего раскрытия, термин "клетка-хозяин" обозначает клетку (например, эукариотическую клетку, такую как клетка ИеЫа), содержащую гетерологический ген. К примеру, гетерологический ген может обеспечивать экспрессию субъединицы желаемого мультисубъединичного комплекса, гена, участвующего в укладке белка (например, шаперона), экспрессии, или секреции и/или иного желаемого гена. Гетерологический ген может быть интегрирован в геном эукариотической клетки или содержаться во внехромосомном элементе, таком как плазмида или искусственная хромосома.
- 18 028913
Вектор экспрессии:
Эти ДНК-вектора содержат элементы, которые облегчают манипулирование экспрессией чужеродного белка в целевой клетке-хозяине. Для удобства, манипулирование последовательностями и получение ДНК для трансформации выполняют вначале в бактериальном хозяине, например Е. соН. и векторы обычно включают последовательности для облегчения подобных манипуляций, включая бактериальный источник репликации и подходящий бактериальный селектируемый маркер. Селектируемые маркеры кодируют белки, необходимые для выживания или развития трансформированных клеток-хозяев в селективной питательной среде. Клетки-хозяева, не трансформированные вектором, содержащим селектируемый ген, не выживают в питательной среде. Типичные гены селекции кодируют белки, которые (а) придают устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, (б) компенсируют ауксотрофную недостаточность, или (в) предоставляют критически важные питательные вещества, не представленные в питательной среде. Типичные векторы и способы трансформации дрожжей описаны, к примеру, в Вигке, Ό., Оа\У5оп, Ό., & §1еат8, Т. (2000). МеЙюШ ίη уеаЧ депеДск: а Со1Д ЗрДпд НагЪог ДаЪогаЮгу сошке тапиа1. Ркитаесу, Ν.Υ.: Со1Д ЗрДпд НагЪог ЬаЪогаФгу Ргекк, включенном в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки.
Векторы экспрессии для использования по способам изобретения могут дополнительно включать специфические для дрожжей последовательности, включая селектируемый маркер ауксотрофности или препарата для идентификации трансформированных штаммов дрожжей. Маркер препарата может дополнительно использоваться для селективной амплификации по количеству копий вектора в дрожжевой клетке-хозяине.
Интересующая последовательность, кодирующая полипептид, обычно функционально связана с последовательностями регуляции транскрипции и трансляции, которые обеспечивают экспрессию полипептида в дрожжевых клетках. Эти векторные компоненты могут включать, не ограничиваясь перечисленным, одно или более из следующего: энхансерного элемента, промотора и терминаторной транскрипционной последовательности. Также могут быть включены последовательности для секреции полипептида, например, сигнальная последовательность и т.п. Источник репликации дрожжей необязателен, поскольку векторы экспрессии часто встраиваются в геном дрожжей.
Хотя это и необязательно, в одном варианте воплощения изобретения одна или более субъединиц мультисубъединичного комплекса функционально соединена или слита с секреционной последовательностью, обеспечивающей секрецию экспрессируемого полипептида в питательную среду, что может облегчать извлечение и очистку гетерологического мультисубъединичного комплекса. Еще более предпочтительно, секреционные последовательности введены для оптимизированной секреции полипептида из клеток-хозяев (например, диплоидных дрожжевых клеток), например, посредством выбора предпочтительных кодонов и/или изменения процентного содержания АТ в выборке кодонов. В данной области техники известно, что на эффективность и/или стабильность секреции может влиять выбор секреционной последовательности и для различных белков оптимальные секреционные последовательности могут отличаться (см., к примеру, Кодапекаиа е1 а1., Рго1еш Епд. 2001 Зер;14(9):705-10, включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки). В данной области техники известно множество потенциально пригодных секреционных сигналов, влияние которых на выход и/или чистоту конкретного гетерологического мультисубъединичного комплекса легко может быть установлено. Потенциально могут использоваться любые секреционные последовательности, включая те, которые присутствуют в секретируемых белках дрожжей и других видов, а также сконструированные секреционные последовательности. Типичные секреционные последовательности, которые могут использоваться, включают сигнальный пептид куриного лизоцима ^Υ) (МКЗЬиЬУЬСРЕРЕААЬО (ЗЕО ГО N0:414)), С^Υ-^8
(МКЕЕЕЕЕЕЕЕРЕААЬО (ЗЕО ГО N0:415)), сигнальный пептид инвертазы З. сегеу181ае (ЗИС2) (МЕЬОАЕЕЕЕЕАОЕААГОЗА (ЗЕО ГО N0:416)), МР-альфа (Ргерго) (МКРРЗ1РТАУЬРААЗЗАЬААРУЭТТТЕ-ЕОУЗЬЕКК (ЗЕО ГО N0:417)), МР-альфа (Рге)-ару (МКРРЗ1РТАУЬРААЗЗАЬА-АРУ (ЗЕО ГО N0:418)), МР-альфа (Рге)-ару-ЗЬЕКК (МКРРЗ1РТАУЬРААЗЗАЬА-АРУЗЬЕКК (ЗЕО ГО N0:419)), МР-альфа (Ргерго)-(ЕА)3 (МКРРЗШТАУЬРААЗЗАЬА-АРУЭТТТЕ-ЕОУЗЬЕКК-ЕАЕАЕА (ЗЕО ГО N0:420)), сшнал.ный пептид аР (ΜΚРРЗIРТΑУ^РΑΑЗЗΑ^Α-ΑРУNТТТЕ^ЕТΑ^IРΑЕΑУIОΥЗ^^ЕО^Р^УΑ\ЬРЕЗЮТ^'С1ЕЕЕ1М'Т1АЗ1ААКЕ-ЕС,УЗЕЕКН (ЗЕО ГО N0:421)), сшнал.ный пептид КТОМ1 (МТКРТрУЕУКЗУЗГОРРПЪЕНЕ^АичГОУАОРАЕТАРУЗЕЬРК (ЗЕО ГО N0:422)), сигнальный пептид подавляемой кислой фосфатазы (РН01) (МРЗРГОЗЬЕПЕАЬАТЬрЗУРА (ЗЕО ГО N0:423)), О0Х-сигнальный пептид А. шдег (Μ^Т^^УЗЗ^\VЗ^ΑΑΑ^РНΥIΚ (ЗЕО ГО N0:424)), сигнальный пептид гена глюкоамилазы ЗсШуаппютусек оссШеЫайк (0АМ1) (М1РЬКЬ1КЗ1У1ОЕОЕУЗА1рА (ЗЕО ГО N0:425)), сигнальный пептид человеческого сывороточного альбумина (ЧСА) с про-последовательностью (МК^УТР1ЗЬЕРЬРЗЗΑΥЗΚОУРΚΚ (ЗЕО ГО N0:426)), сигнальный пептид человеческого сывороточного альбумина (ЧСА) без про-последовательности (ΜΚ^УТРIЗ^^Р^РЗЗΑΥЗ (ЗЕО ГО N0:427)), сигнальный пептид IЗN (МАЬАМНЕЕРЕЕАЕЕАШОРОРААА (ЗЕО ГО N0:428)), сигнальный пептид интерферона (ΜΚΥТЗΥI^ΑР^^СЛУЕОЗЕОСГОЕР (ЗЕО ГО N0:429)), сигнальный пептид человеческого гормона роста (МААОЗОТР^ЬЕТРЗЬЕСЬЕ^РрЕРОА (ЗЕО ГО N0:430)), фитогемагглютинина (ФГА) (\11К^Ь\1\1\1\11\\'ЗУС,\\А\Л1ЕЕЕУС,СЮХ... (ЗЕО ГО N0:431)), лизоцима шелкопряда (МОКЬП- 19 028913
кА1.\\'1.С\Т.8ЕА (δΕΟ ΙΌ N0:432)), человеческого лизоцима (ΡΥΖΙ) (МКАПУЬСЬУЬЬ8УТУрС (8ЕО ΙΌ N0:433)), рецептора активина типа 1 (МУОСУМ1РРУР1М1АРР8Р8 (8Е0 ГО N0:434)), рецептора активина типа II (МОАААКРАРАУРЬ18С88О (8Е0 ГО N0:435)), иммуноглобулинсвязывающего белка Р. раЧогш (РрВ1Р) (\1Е8Е1КЮ\ТТЕААЕ\%А\1ЕЕ\Л\'РкАКРСКА (8ЕО ГО N0:436)) и лидерной легкой цепи человеческого антитела 3Ό6 (МОМРУРАОЩ-СЕРРВЛУЕРСАКС (8Е0 ГО N0:437)). См. НаБнтоЮ е! а1., Рто!еш Епдшееппд νοί. 11 по. 2 рр.75-77, 1998; 0ка е! а1., Βίοδοί Вю!ескпо1 Вюскет. 1999 Εον: 63(11): 1977-83; СеШккеп е! а1., РЕМ8 Υеа5ΐ Кекеагск 5 (2005) 1079-1096; Ма е! а1., Нера!о1оду. 2005 Эес;42(6):1355-63; Каетаекегк е! а1., Еиг 1 Вюскет. 1999 0с! 1;265(1):394-403; Кодапе5а\уае1ак, Рго!еш Епд. (2001) 14 (9): 705-710; Эа1у е! а1., Рто!еш Ехрг РштЕ 2006 Арг;46(2):456-67 ; Эатаксепо е! а1., Арр1 М1сгоЫо1 Вю!ескпо1 (2007) 74:381-389; и Ре1депкаиет е! а1., Шскю Ααάδ Кек. 1990 Аид 25;18(16):4927, каждый из которых включен в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки). Мультисубъединичный комплекс также может секретироваться в питательную среду без функционального связывания или слияния с секреционным сигналом. К примеру, было показано, что некоторые гетерологические полипептиды при экспрессии в Р. раЧогш секретируются в питательную среду даже не будучи связанными или слитыми с секреционным сигналом. Помимо этого, мультисубъединичный комплекс может быть выделен из клеток-хозяев (что, к примеру, может быть предпочтительно, если комплекс плохо поддается секреции) по способам, известным в данной области техники.
Среда или клетки, содержащие желаемый мультисубъединичный комплекс, могут быть восстановлены из культуры. Необязательно, секретируемые белки могут быть очищены. К примеру, клетки, содержащие желаемый мультисубъединичный комплекс, могут быть лизированы механическими, химическими, ферментативными и/или осмотическими способами (например, замораживанием в жидком азоте, при помощи гомогенизатора, сферопластированием, ультразвуком, перемешиванием в присутствии стеклянных гранул, при помощи поверхностно-активных веществ и т.д.). Желаемый мультисубъединичный комплекс может быть сконцентрирован, профильтрован, диализирован и т.д. по способам, известным в данной области техники. Желаемый мультисубъединичный комплекс может быть очищен, исходя из, к примеру, его молекулярной массы (например, эксклюзионной хроматографией), изоэлектрической точки (например, изоэлектрическим фокусированием), электрофоретической подвижности (например, гельэлектрофорезом), хроматографии гидрофобного взаимодействия (например, ВЭЖХ), заряда (например, ионообменной хроматографией), аффинности (например, в случае антитела, связыванием с белком А, белком С, и/или эпитопом, с которым связывается желаемое антитело) и/или состояния гликозилирования (например, выявляемого по лектинсвязывающей аффинности). Для достижения желательного уровня чистоты этапы очистки могут выполняться многократно. В типичном варианте воплощения желаемый мультисубъединичный комплекс может содержать константный домен иммуноглобулина и может быть очищен с использованием аффинности к белку А или белку С, эксклюзионной хроматографии и недостаточного связывания с лектином (для удаления гликозилированных форм). Необязательно, может добавляться ингибитор протеазы А, такой как фенилметилсульфонилфторид (ФМСФ), чтобы ингибировать протеолитическую деградацию во время очистки.
Нуклеиновые кислоты являются "функционально связанными" при их расположении в функциональном взаимодействии с другой нуклеиновокислотной последовательностью. К примеру, ДНК сигнальной последовательности является функционально связанной с ДНК полипептида, если она экспрессируется в качестве пробелка, участвующего в секреции полипептида; промотор или энхансер является функционально связанным с кодирующей последовательностью, если он влияет на транскрипцию последовательности. Как правило, "функционально связанный" обозначает, что связываемые ДНКпоследовательности являются смежными и, в случае секреторного лидера, смежными и в рамке считывания. Однако энхансеры не обязательно должны быть смежными. Связывание может выполняться путем сшивания в подходящих сайтах рестрикции или, иначе, посредством ПЦР/рекомбинационного способа, известного специалисту в данной области техники (Са1е\\ау® Тескпо1оду; ктуйгодеп, Карлсбад Калифорния). Если такие сайты не существуют, то в соответствии с принятой практикой могут использоваться синтетические олигонуклеотидные адаптеры или линкеры. Желаемые нуклеиновые кислоты (включая нуклеиновые кислоты, содержащие функционально связанные последовательности) могут также быть получены химическим синтезом.
Промоторы являются нетранслируемыми последовательностями, расположенными перед (5') стартовым кодоном структурного гена (обычно они имеют от 100 до 1000 пар оснований), контролирующими транскрипцию и трансляцию конкретных нуклеиновокислотных последовательностей, с которыми они функционально связаны. Такие промоторы подразделяются на несколько классов: индуцируемые, конститутивные и подавляемые промоторы (которые повышают уровни транскрипции в ответ на отсутствие репрессора). Индуцируемые промоторы могут повышать уровни транскрибирования ДНК, находящейся под их контролем, в ответ на определенные изменения условий культивирования, например, в присутствии или в отсутствие питательного вещества или при изменении температуры.
Промоторный фрагмент дрожжей может также служить сайтом гомологической рекомбинации и встраивания вектора экспрессии в тот же сайт генома дрожжей; альтернативно, может использоваться селектируемый маркер в качестве сайта для гомологической рекомбинации. Трансформация РюЫа опи- 20 028913
сана в Сгедд е1 а1. (1985) Мо1. Се11. Вю1. 5:3376-3385, включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки).
Примеры подходящих промоторов от Р1сйа включают СиР1 (индуцируемый по уровню меди в среде), тетрациклин-индуцируемые промоторы, тиамин-индуцируемые промоторы, промотор АОХ1 (Сгедд е1 а1. (1989) Мо1. Се11. Вю1. 9:1316-1323); промотор 1СЬ1 (МеиеиДе/ е1 а1. (2003) Υеа8ΐ 20(13): 1097108); промотор глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ОАР) (ААаЮгНат е1 а1. (1997) Оеие 186(1):37-44); и промотор РЬИ1 (Бйеи е1 а1. (1998) Оеие 216(1):93-102). Промотор ОАР является сильным конститутивным промотором, а промоторы СиР1, АОХ и РЬИ1 являются индуцируемыми. Каждый упомянутый источник включен в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки.
Другие дрожжевые промоторы включают ΑΌΗ1, алкогольдегидрогеназы II, ОАЬ4, РНО3, РНО5, Рук и химерные промоторы, производные от них. Помимо этого, по изобретению могут использоваться недрожжевые промоторы, такие как промоторы млекопитающих, насекомых, растений, пресмыкающихся, амфибий, вирусов и птиц. Как правило, промотор будет содержать промотор млекопитающего (потенциально эндогенный для экспрессируемых генов) или будет содержать дрожжевой или вирусный промотор, который обеспечивает эффективную транскрипцию в дрожжевых системах.
Интересующие полипептиды могут продуцироваться рекомбинантно не только прямым образом, но и в виде полипептида, слитого с гетерологическим полипептидом, например, сигнальной последовательностью или иным полипептидом со специфическим сайтом расщепления на Ν-конце зрелого белка или полипептида. В общем, сигнальная последовательность может быть компонентом вектора или может быть частью полипептид-кодирующей последовательности, внедренной в вектор. Выбранная гетерологическая сигнальная последовательность, предпочтительно, является такой последовательностью, которая распознается и процессируется по одному из стандартных путей, имеющихся в клетке-хозяине. Препро сигнал альфа-фактора Б. сегеу181ае показал свою эффективность при секреции различных рекомбинантных белков Р. ра81оп8. Другие сигнальные последовательности дрожжей включают сигнальную последовательность альфа-фактора спаривания, сигнальную последовательность инвертазы и сигнальные последовательности, происходящие из других секретируемых полипептидов дрожжей. Помимо этого, данные сигнальные пептидные последовательности могут быть сконструированы так, чтобы обеспечить повышенную секрецию в диплоидных дрожжевых системах экспрессии. Другие интересующие секреционные сигналы также включают сигнальные последовательности млекопитающих, которые могут быть гетерологическими для секретируемого белка или могут иметь нативную последовательность для секретируемого белка. Сигнальные последовательности включают препептидные последовательности, а в некоторых случаях могут включать пропептидные последовательности. В данной области техники известно множество таких сигнальных последовательностей, включая сигнальные последовательности, обнаруживаемые в цепях иммуноглобулинов, например, последовательность препротоксина К28, ΡΗΑ-Ε, РАСЕ, человеческий МСР-1, сигнальные последовательности человеческого сывороточного альбумина, человеческая тяжелая цепь 1д, человеческая легкая цепь 1д и т.д. Например, см. Ηа8Ь^тοΐο е1. а1. Рго1еш Еид 11(2) 75 (1998); и КоЬауа8Й е1. а1. ΤЬе^ареийс АрЬеге818 2(4) 257 (1998), каждый из которых включен в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки).
Транскрипция может усиливаться при введении в вектор последовательности активатора транскрипции. Эти активаторы являются цис-действующими элементами ДНК, как правило, примерно от 10 до 300 пар оснований, которые воздействуют на промотор для усиления его транскрипции. Транскрипционные энхансеры относительно независимы по ориентации и положению, располагаются 5' и 3' к транскрипционной единице в интроне, а также в самой кодирующей последовательности. Энхансер может быть разрезан на вектор экспрессии в положении 5' или 3' к кодирующей последовательности, но предпочитительно расположение с 5' стороны от промотора.
Векторы экспрессии, использующиеся в эукариотических клетках-хозяевах, также могут содержать последовательности, необходимые для остановки транскрипции и для стабилизации мРНК. Такие последовательности обычно присутствуют с 3' стороны кодона остановки трансляции в нетранслируемых областях эукариотической или вирусной ДНК или кДНК. Эти области содержат нуклеотидные сегменты, транскрибируемые как полиаденилорованные фрагменты в нетранслируемой части мРНК.
Для конструирования подходящих векторов, содержащих один или более из перечисленных выше компонентов, используются стандартные техники сшивания или ПЦР/рекомбинантные способы. Изолированные плазмиды или ДНК-фрагменты разрезаются, подгоняются и заново сшиваются в форму, желательную для получения необходимых плазмид или рекомбинационными способами. Для анализа в целях подтверждения правильности последовательностей в сконструированных плазмидах, смеси для сшивания использовались для трансформации клеток-хозяев, и клетки, которые успешно прошли трансформацию, выбирались по устойчивости к антибиотикам (например, ампициллину или Зеоцину), где это было необходимо. Из трансформантов изготавливались плазмиды, которые анализировались путем расщепления рестрикционной эндонуклеазой и/или секвенированием.
В качестве альтернативы рестрикции и сшиванию фрагментов, для внедрения ДНКпоследовательностей в вектор могут использоваться рекомбинационные способы, которые основываются на ай-сайтах и рекомбинационных ферментах. Такие способы описаны, к примеру, в ЬаиДу (1989) Аии.
- 21 028913
Кеу. ВюсНст. 58:913-949; и известны специалистам в данной области техники. В таких способах используется межмолекулярная ДНК-рекомбинация, опосредованная смесью ламбда и Е. соН-кодированного рекомбинационных белков. Рекомбинация происходит между специфическими сайтами прикрепления (а11) взаимодействующих молекул ДНК. Описание ай-сайтов представлено в АеЕЬегд апб Ьаибу (1983) Зйе-ЗреаПс КесотЫиайои ίη РНаде ЬатЬба, ίη ЬатЬба II, Ае18Ьегд, еб. (Со1б 8ргшд НагЬог, Ν.Υ.: Со1б 8ргш§ НагЬог Рге88), рр. 211-250. ДНК-сегменты, фланкирующие сайты рекомбинации, переключаются так, чтобы после рекомбинации ай-сайты были гибридными последовательностями, составленными из последовательностей, донированных каждым родительским вектором. Рекомбинация может происходить между ДНК любой топологии. Каждый вышеупомянутый источник включен в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки.
Ай-сайты могут быть внедрены в интересующую последовательность вшиванием интересующей последовательности в подходящий вектор; получением ПЦР-продукта, содержащего ай В сайты при использовании специфических праймеров; получением кДНК библиотеки, клонированной в подходящий вектор, содержащий ай-сайты; и т.д.
Моноцистронные и полицистронные гены.
Моноцистронный ген кодирует РНК, содержащую генетическую информацию для трансляции только одного белка. Полицистронный ген кодирует мРНК, содержащую генетическую информацию для трансляции более чем одного белка. Белки, кодируемые полицистронным геном, могут иметь одинаковые или различные последовательности, либо комбинацию перечисленного. "Дицистронный" или "бицистронный" обозначает полицистронный ген, который кодирует два белка. Полицистронные гены, необязательно, включают один или более элементов-участков внутренней посадки рибосомы (ГКЕ§), обегчающих кэп-независимое инициирование трансляции, которые могут быть расположены в положении, которое может управлять трансляцией расположенной после кодирующей белок области независимо от структуры 5'-кэпа, связанного с 5'-концом молекулы мРНК. Может применяться любая известная 1КЕ§последовательность (например, вирусная, эукариотическая или искусственная по происхождению). К примеру, в интергенной области (ΙΟΚ) может применяться ГКЕ§-последовательность вируса паралича сверчков, как описано в ТНотркои е! а1. (2001) РNΑ§ 98:12972-12977. Необязательно, функция 1КЕ§ может быть усилена генетическим видоизменением, например, путем конститутивной экспрессии е1Б2 киназы ΟСN2 или разрывом двух инициаторных генов тРНК(мет) (ί6.).
Фолдинг, при использовании здесь, обозначает трехмерную структуру полипептидов и белков, в которой взаимодействия остатков аминокислот стабилизируют структуру. Хотя нековалентные взаимодействия играют важную роль в формировании структуры, обычно интересующие белки имеют внутрии/или межмолекулярные ковалентные дисульфидные связи, образованные двумя остатками цистеина. Для встречающихся в природе белков и полипептидов или производных и их вариантов правильный фолдинг обычно является схемой, при которой наблюдается оптимальная биологическая активность, и может легко отслеживаться анализами на активность, например на связывание лиганда, ферментативную активность и т.д.
В некоторых случаях, к примеру, если желаемый продукт имеет синтетичекое происхождение, анализы, основанные на биологической активности, обладают меньшей значимостью. Правильный фолдинг таких молекул может определяться исходя из физических свойств, энергетических соображений, моделирующих исследований и т.д.
Хозяин экспрессии может дополнительно быть модифицирован введением последовательностей, кодирующих один или более ферментов, которые способствуют фолдингу и образованию дисульфидных связей, т.е., фолдаз, шаперонов и т.д. Такие последовательности могут быть конститутивно или индуцированно экспрессированы в дрожжевой клетке-хозяине при помощи векторов, маркеров и т.д., как известно в данной области техники. Предпочтительно, чтобы последовательности, включая элементы, регулирующие транскрипцию, достаточные для желаемой схемы экспрессии, были стабильно интегрированы в геном дрожжей по методологии нацеливания.
К примеру, эукариотическая ΡΌΙ является не только эффективным катализатором окисления белкового цистеина и изомеризации дисульфидных связей, но проявлет и шаперонную активность. Коэкспрессия ΡΌΙ может ускорять продуцирование активных белков с множественными дисульфидными связями. Также интересны экспрессия ΒΙΡ (белка, связывающего тяжелую цепь иммуноглобулина); циклофилина; и т.п. В одном варианте воплощения изобретения, мультисубъединичный комплекс может быть экспрессирован из штамма дрожжей, полученного спариванием, при котором каждый из гаплоидных родительских штаммов экспрессирует особенный фермент фолдинга, например, один штамм может экспрессировать ΒΙΡ, а другой штамм может экспрессировать ΡΌΙ или их комбинации.
Термины "желательный белок" или "целевой белок" используются взаимозаменяемо и, в общем, обозначают гетерологический мультисубъединичный белок, такой как антитело (например, гуманизированное антитело) или их связывающий участок, описанный здесь.
Термин "антитело" включает любую молекулярную структуру, содержащую полипептидную цепь со специфической формой, которая соответствует и распознает эпитоп, и в которой одно или более нековалентных связывающих взаимодействий стабилизируют комплекс между молекулярной структурой и
- 22 028913
эпитопом. Архетипной молекулой антитела является иммуноглобулин, и все типы иммуноглобулинов: 1дС, 1дМ, 1дА, 1дЕ, 1дО и т.д., из всех источников, например человека, грызуна, кролика, коровы, овцы, свиньи, собаки, других млекопитающих, курицы, других птиц и т.д., могут рассматриваться как "антитела". Предпочтительным источником для получения антител, пригодных в качестве исходного материала согласно данному изобретению, являются кролики. Было описано множество последовательностей, кодирующих антитела; другие могут быть составлены по способам, хорошо известным в данной области техники. Их примеры включают химерные антитела, человеческие антитела и иные нечеловеческие антитела млекопитающих, гуманизированные антитела, одноцепочечные антитела, такие как ксРук, камелизированные антитела, нанотела, ΙβΝΛΡ. (одноцепочечные антитела, происходящие от акул), низкомодулярные иммунофармацевтические средства (δΜΙΡ) и такие фрагменты антител как РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2 и т.д. См. §1гейкоу V. А., с! а1., %1гнс1игс оГ а кйагк 1^АК аийЬобу уапаЫс боташ апб тобейпд оГ ап еаг1убеуе1ортеп1а1 1ко1уре, Рго!ет §ск 2005 ШуетЬег; 14(11):2901-9. ЕриЬ 2005 §ср. 30; СгеепЬегд А. δ., с! а1., А пси апйдеп гесерЮг депе ГатПу 1ка1 ипбегдоек геаггапдетеп! апб ехЮпЬуе котайс Лусгайсайоп ш ккагкк, №!иге. 1995 Маг. 9; 374(6518): 168-73; №.Ша11 δ Ό, с! а1., 1ко1айоп оГ 1ке пси апйдеп гесерЮг Ггот иоЬЬедопд ккагкк, апб икс ак а ксаГГо1б Гог 1ке бйр1ау оГ рго!еш 1оор кЬгапек, Мо1 1ттипо1. 2001 Аидик!; 38(4):313-26; Натегк-Сак!егтап С., е! а1., №!ига11у осситпд апйЬоб1ек беуо1б оГ кдк! скатк, №Пигс. 1993 йнп 3; 363(6428):446-8; СШ Ό δ, е! а1., Вюрйагтасеийса1 бгид бйсоусгу икшд поуе1 рго!еш ксаГГо1бк, Сигг Орш Вю!ееЬпо1. 2006 ЭссетЬег; 17(6):653-8. ЕриЬ 2006 Ос!. 19. Каждый упомянутый источник включен в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки.
К примеру, антитела или антигенсвязывающие фрагменты могут быть получены генным конструированием. По этой технике, как и по другим способам, продуцирующие антитело клетки сенсибилизируются к желаемому антигену или иммуногену. Информационная РНК, выделенная из клеток, продуцирующих антитело, используется в качестве шаблона для получения кДНК при помощи ПЦРамплификации. Библиотеку векторов, каждый из которых содержит ген одной тяжелой цепи и ген одной легкой цепи, сохраняющие исходную антигенную специфичность, продуцируют путем внедрения подходящих участков амплифицированной кДНК иммуноглобулина в вектора экспрессии. Комбинаторную библиотеку конструируют путем совмещения библиотеки генов тяжелых цепей и библиотеки генов легких цепей. Это дает библиотеку клонов, которые экспрессируют совместно тяжелую и легкую цепь (напоминающие РаЬ-фрагмент или антигенсвязывающий фрагмент молекулы антитела). Векторы, несущие эти гены, совместно трансфицируются в клетку-хозяина. Если синтез гена антитела индуцируется в трансфицированном хозяине, то белки тяжелой и легкой цепей самособираются с образованием активных антител, которые могут детектироваться скринингом с антигеном или иммуногеном.
Интересующие последовательности, кодирующие антитела, включают те, которые закодированы нативными последовательностями, а также нуклеиновыми кислотами, которые, вследствие вырожденности генетического кода, не идентичны последовательности раскрытых нуклеиновых кислот, и их варианты. Вариантные полипептиды могут включать аминокислотные (ак) замещения, вставки или делеции. Аминокислотные замещения могут быть консервативными аминокислотными замещениями или замещениями для элиминирования необязательных аминокислот, например, для изменения сайта гликозилирования или для минимизации неправильного фолдинга посредством замещения или делеции одного или более остатков цистеина, которые не являются необходимыми для функционирования. Варианты могут быть разработаны так, чтобы сохранялась или усиливалась биологическая активность конкретной области белка (например, функционального домена, каталитических аминокислотных остатков и т.д.). Варианты также включают фрагменты полипептидов, раскрытых здесь, в частности, биологически активные фрагменты и/или фрагменты, соответствующие функциональным доменам. Известны техники для мутагенеза клонированных генов ш уйго. Также в предмет изобретения включены полипептиды, которые были модифицированы по обычным техникам молекулярной биологии для улучшения их устойчивости к протеолитической деградации или для оптимизации свойств растворимости, либо для того, чтобы сделать их более пригодными в качестве терапевтического агента.
Химерные антитела могут быть изготовлены рекомбинантно путем кобинирования вариабельных областей легкой и тяжелой цепей (V и Уд), полученных от антитело-продуцирующих клеток одного вида, с константными областями легкой и тяжелой цепей, полученных от другого вида. Как правило, в химерных антителах используют вариабельные области грызунов или кроликов и человеческие константные области, чтобы получить антитело с преимущественно человеческими доменами. Получение таких химерных антител хорошо известно в данной области техники, и может быть достигнуто стандартными способами (как описано, например, в патенте США № 5624659, который включен сюда во всей полноте посредством ссылки). Помимо этого, предполагается, что человеческие константные области химерных антител по изобретению могут быть выбраны из константных областей 1дС1, 1дС2, 1дС3, 1дС4, 1дС5, 1дС6, 1дС7, 1дС8, 1дС9, 1дС10, 1дС11, 1дС12, 1дС13, 1дС14, 1дС15, 1дС16, 1дС17, 1дС18 или 1дС19.
Гуманизированные антитела сконструированы так, чтобы содержать еще больше похожих на человеческие доменов, и от животного антитела включают только области, определяющие комплементарность. Это сопровождается тщательным исследованием последовательности гипервариабельных петель
- 23 028913
вариабельных областей моноклонального антитела с их подгонкой под структуру цепей человеческих антител. Хотя он и кажется сложным, этот способ прост на практике. К примеру, см. Патент США № 6187287, который включен сюда в полном объеме посредством ссылки. Способы гуманизации антител были описаны ранее в выданном патенте США № 7935340, раскрытие которого включено сюда во всей полноте посредством ссылки. В некоторых случаях необходимо определение того, необходимы ли дополнительные кроличьи каркасные остатки для сохранения активности. В некоторых случаях для минимизации утраты аффинности или активности, в гуманизированных антителах все же необходимо сохранять некоторые критически важные кроличьи каркасные остатки. В этих случаях, чтобы добиться желаемой активности, необходимо изменить одну или несколько каркасных аминокислот в человеческой зародышевой последовательности на исходные кроличьи аминокислоты. Эти изменения определяются экспериментально, чтобы идентифицировать, какие кроличьи остатки необходимы для сохранения аффинности и активности.
Помимо целых иммуноглобулинов (или их рекомбинантных аналогов) могут синтезироваться фрагменты иммуноглобулинов, содержащие эпитоп-связывающий сайт (например, РаЬ', Р(аЬ')2 или иные фрагменты). "Фрагментарные" или минимальные иммуноглобулины могут быть сконструированы при помощи рекомбиантных иммуноглобулиновых техник. К примеру, "Ρν''-иммуноглобулины для использования по настоящему изобретению могут быть получены синтезом слитых вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи. Также интересны комбинации антител, например диатела, которые содержат две отдельные специфические Ρν-области. В другом варианте воплощения изобретения иммуноглобулиновые фрагменты охватывают 8М1Р (низкомолекулярные иммунофармацевтические средства), камелизированные антитела, нанотела и Ι§ΝΛΚ.
Иммуноглобулины и их фрагменты могут быть модифицированы послетрансляционно, например, чтобы внедрить эффекторные фрагменты, такие как химические линкеры, детектируемые группы, такие как флуоресцентные красители, ферменты, токсины, субстраты, биолюминесцентные материалы, радиоактивные материалы, хемилюминесцентные группы и т.п., или специфически связывающиеся фрагменты, такие, как, к примеру, стрептавидин, авидин или биотин и т.д. могут использоваться в способах и композициях по настоящему изобретению. Примеры дополнительных эффекторных молекул представлены ниже.
Продукт-ассоциированый вариант: продукт, отличающийся от желаемого продукта (например, желаемого мультисубъединичного комплекса), который присутствует в препарате желаемого продукта и связан с желаемым продуктом. Типичные продукт-ассоциированные варианты включают обрезанные или элонгированные пептиды, продукты с отличающимся гликозилированием от желаемого гликозилирования (например, если желателен агликозилированый продукт, то любой гликозилированный продукт будет расцениваться продукт-ассоциированным вариантом), комплексы с аномальной стехиометрией, неправильной сборкой, аномальными дисульфидными связями, аномальным или неполным фолдингом, агрегацией, протеазным расщеплением или иными аномалиями. Типичные продукт-ассоциированные варианты могут отличаться в одном или более из молекулярной массы (например, определенной эксклюзионной хроматографией), изоэлектрической точки (например, определенной изоэлектрическим фокусированием), электрофоретической подвижности (например, определенной гель-электрофорезом), состояния фосфорилирования (например, определенного масс-спектрометрией), соотношения заряда к массе (например, определенного масс-спектрометрией), массы или принадлежности протеолитических фрагментов (например, определенных масс-спектрометрией или гель-электрофорезом), хроматографии гидрофобного взаимодействия (например, определенной ВЭЖХ), заряда (например, определенного ионообменной хроматографией), аффинности (например, в случае антитела, определенной связыванием с белком А, белком О, и/или эпитопом, с которым связывается желаемое антитело) и состояния гликозилирования (например, определенного по лектинсвязывающей аффинности). Если желаемый белок является антителом, то термин "продукт-ассоциированный вариант" может включать глико-утяжеленный вариант и/или половинный вид антител (описаны ниже).
Типичные продукт-ассоциированные варианты включают вариантные формы, которые содержат отклоняющиеся от нормы дисульфидные связи. К примеру, большинство молекул 1дО1-антител стабилизировано, совокупно, 16-ю внутрицепочечными и межцепочечными дисульфидными мостиками, которые стабилизируют фолдинг 1§О-доменов тяжелой и легкой цепей, а межцепочечные дисульфидные мостики стабилизируют связь между тяжелыми и легкими цепями. Иные типы антител аналогично содержат характеристические стабилизирующие межцепочечные и внутрицепочечные дисульфидные связи. Помимо этого, некоторые антитела (включая АЬ-А и АЬ-В, раскрытые здесь) содержат дополнительные дисульфидные связи, обозначаемые как неканонические дисульфидные связи. Таким образом, отклоняющиеся от нормы межцепочечные дисульфидные связи могут приводить к аномальной стехиометрии комплекса, вследствие отсутствия стабилизирующего ковалентного связывания и/или дисульфидного связывания с дополнительными субъединицами. Помимо этого, отклоняющиеся дисульфидные связи (межцепочечные или внутрицепочечные) могут снижать структурную стабильность антитела, что может приводить к снижению активности, снижению стабильности, повышению склонности к образованию агрегатов и/или повышению иммуногенности. Продукт-ассоциированные варианты, содержащие отклоняющиеся от
- 24 028913
нормы дисульфидные связи, могут быть обнаружены множеством способов, включая невосстановительный денатурирующий ДСН-ПААГ-электрофорез, капиллярный электрофорез, ионообменную хроматографию, масс-спектрометрию (необязательно с химическим модифицированием для достижения массового сдвига свободных цистеинов), эксклюзионную хроматографию, ВЭЖХ, изменения в рассеивании света, и любыми другими подходящими способами, известными в данной области техники. См., к примеру, ТЬе Рго1еш РгоЮсо18 НаийЬоок 2002, Рай V, 581-583, ΌΟΙ: 10.1385/1-59259-169-8:581;
Половинное антитело, половинный вид антитела, или Н1Ь1 обозначают белковый комплекс, который включает одиночную тяжелую и одиночную легкую цепь антитела, но в котором отсутствует ковалентная связь со вторыми тяжелой и легкой цепями антитела. Два половинных антитела могут оставаться нековалентно связанными в некоторых условиях (в таком случае они могут вести себя аналогично полному антителу, например, проявлять его кажущуюся молекулярную массу при анализе способом эксклюзионной хроматографии). Аналогично, Н2Ь1 обозначает белковый комплекс, который включает две тяжелых цепи антитела и одиночную легкую цепь антитела, но в котором отсутствует ковалентная связь со второй легкой цепью антитела; эти комплексы тоже могут нековалентно связываться с другой легкой цепью антитела (и аналогичным образом вести себя подобно полному антителу). Как и полные антитела, половинные виды антител и вид Н2Ь1 могут диссоциировать в восстановительных условиях на отдельные тяжелые и легкие цепи. Половинные виды антител и вид Н2Ь1 могут быть обнаружены невосстановительным ДСН-ПААГ-электрофорезом в геле как виды, мигрирующие с более низкой кажущейся молекулярной массой, нежели полное антитело, например, Н1Ь1 мигрирует при приблизительно половинной кажущейся молекулярной массе от полного антитела (т.е. примерно 75 кДа).
Глико-утяжеленный вариант обозначает гликозилированный продукт-ассоциированный вариант, который иногда присутствует в препаратах антител и который содержит по меньшей мере частично, Рспоследовательность. Глико-утяжеленный вариант характеризуется пониженной электрофоретической подвижностью, наблюдаемой при ДСН-ПААГ-электрофорезе (в сравнении с нормальной тяжелой цепью), лектинсвязывающей аффинностью, связыванием с анти-Рс антителом и повышенной кажущейся молекулярной массой комплексов антитела, содержащих глико-утяжеленный вариант, судя по данным эксклюзионной хроматографии. См. Предварительную заявку США № 61/525307 (№ дела у поверенного 67858.730200), поданную 31 августа 2011 г., которая включена в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки.
Термин "полиплоидные дрожжи, которые стабильно экспрессируют или экспрессируют желаемый секретируемый гетерологический полипептид в течение длительного времени" обозначает культуру дрожжей, которая секретирует указанный полипептид в течение по меньшей мере нескольких дней до недели, более предпочтительно по меньшей мере месяц, еще более предпочтительно по меньшей мере 16 месяцев, и еще более предпочтительно, в течение более чем года на пороговых уровнях экспрессии, как правило, по меньшей мере 50-500 мг/л (спустя примерно 90 ч культивации), а предпочтительно на гораздо высших.
Термин "культура полиплоидных дрожжей, секретирующая желаемые количества рекомбинантного полипептида" обозначает культуры, которые стабильно или в течение длительных периодов секретируют, по меньшей мере 50-500 мг/л, а наиболее предпочтительно, 500-1000 мг/л или более.
Полинуклеотидная последовательность "соответствует" полипептидной последовательности, если при трансляции полинуклеотидной последовательности в соответствии с генетическим кодом получается полипептидная последовательность (т.е., полинуклеотидная последовательность "кодирует" полипептидную последовательность), а одна полинуклеотидная последовательность "соответствует" другой полинуклеотидной последовательности, если две последовательности кодируют одну и ту же полипептидную последовательность.
"Гетерологические" область или домен ДНК-конструкции являются идентифицируемым сегментом ДНК в более крупной молекуле ДНК, не находящейся в связи с более крупной молекулой в природе. Таким образом, если гетерологическая область кодирует ген млекопитающего, то ген обычно будет фланкирован ДНК, которая не фланкирует ДНК генома млекопитающего в геноме организма-источника. Другим примером гетерологической области является конструкция, кодирующая последовательность которой сама по себе не обнаруживается в природе (например, кДНК, в которой геномная кодирующая последовательность содержит интроны или синтетические последовательности, обладающие кодонами, отличными от нативного гена). Аллельные вариации встречающихся в природе мутационных событий не приводят к гетерологической области ДНК, как определено здесь.
"Кодирующая последовательность" является внутрирамочной последовательностью кодонов, которая (в соответствии с генетическим кодом) соответствует или кодирует белок или пептидную последовательность. Две кодирующие последовательности соответствуют друг другу, если последовательности или их комплементарные последовательности кодируют одинаковые аминокислотные последовательности. Кодирующая последовательность при участии соответствующих регуляторных последовательностей может быть транскрибирована и транслирована в полипептид. Сигнал полиаденилирования и последовательность остановки транскрипции обычно располагаются 3' по отношению к кодирующей последовательности. "Промоторная последовательность" является ДНК-регуляторной областью, способной к свя- 25 028913
зыванию РНК-полимеразы в клетке и инициированию транскрипции расположенной ниже (в 3' направлении) кодирующей последовательности. Промоторные последовательности обычно содержат дополнительные сайты для связывания регуляторных молекул (например, факторов транскрипции), которые влияют на транскрипцию кодирующей последовательности. Кодирующая последовательность "находится под контролем" промоторной последовательности или "функционально связана" с промотором, если РНК-полимераза связывает промоторную последовательность в клетке и транскрибирует кодирующую последовательность в мРНК, которая, в свою очередь, затем транслируется в белок, закодированный кодирующей последовательностью.
Векторы используются для введения чужеродного вещества, такого как ДНК, РНК или белок, в организм или в клетку-хозяина. Типичные векторы включают рекомбинантные вирусы (для полинуклеотидов) и липосомы (для полипептидов). "ДНК-вектор" является репликоном, таким как плазмида, фаг или космида, к которому может быть присоединен другой полинуклеотидный сегмент так, чтобы обеспечить репликацию прикрепленного сегмента. "Вектор экспрессии" является ДНК-вектором, содержащим регуляторные последовательности, которые будут направлять синтез полипептида в соответствующей клетке-хозяине. Этим обычно обозначаются промотор для связывания РНК-полимеразы и начала транскрипции мРНК, а также рибосомсвязывающие сайты и сигналы инициализации для прямой трансляции мРНК в полипептид(ы). Включение полинуклеотидной последовательности в вектор экспрессии в подходящем сайте и в правильной рамке считывания с последующей трансформацией соответствующей клеткихозияна вектором позволяет продуцировать полипетид, кодируемый упомянутой полинуклеотидной последовательностью.
"Амплификация" полинуклеотидных последовательностей является получением ίη νίΙΐΌ множества копий конкретной нуклеиновокислотной последовательности. Амплифицированная последовательность обычно находится в форме ДНК. Множество техник для выполнения такой амплификации описано в последующих обзорных статьях, каждая из которых включена в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки: Уап ΒπιηΙ 1990, Вю/Тесйпо1., 8(4):291-294; и ОШ апб Сйаетц №.1с1еоыбе5 №с1еойбе§ №с1ею АсШк. 2008 Маг; 27(3):224-43. Полимеразная цепная реакция, или ПЦР, является прототипной амплификацией нуклеиновой кислоты, и использование ПЦР здесь должно считаться типичным для других подходящих техник амплификации.
Общее строение антител у большинства позвоночных (включая млекопитающих) в настоящее время хорошо изучено (Ебе1тап, С. М., Апп. Ν.Υ. Асаб. 8сЦ 190: 5 (1971)). Обычные антитела состоят из двух идентичных легких полипептидных цепей с молекулярной массой приблизительно 23000 Да ("легкая цепь") и двух идентичных тяжелых цепей с молекулярной массой 53000-70000 ("тяжелая цепь"). Четыре цепи соединяются дисульфидными связями в конфигурации "Υ", в которой легкие цепи закрывают по бокам тяжелые цепи в верхней части конфигурации "Υ". "Разветвленная" часть конфигурации "Υ" обозначается как РаЬ область; стволовая область конфигурации "Υ" обозначается как РС область. Аминокислотная последовательность ориентирована от Ν-терминального конца наверху конфигурации "Υ" до С-терминального конца в нижней части каждой цепи. Ν-терминальный конец несет вариабельную область, обладающую специфичностью к выявившему её антигену, и имеет длину приблизительно 100 аминокислот, причем между антителами, а также между легкой и тяжелой цепями наблюдаются небольшие вариации.
Вариабельная область связана в каждой цепи с константной областью, что увеличивает оставшуюся длину цепи и что в пределах конкретного класса антител не варьируется со специфичностью антитела (т.е., выявляющего её антигена). Известно пять основных классов константных областей, которые определяют класс иммуноглобулиновой молекулы (1дС, 1дМ, 1§А, Ι§Ό и 1дЕ, которые соответствуют гамма-, мю-, альфа-, дельта- и эпсилон-константным областям тяжелых цепей). Константная область или класс определяют последующую эффекторную функцию антитела, включая активацию комплемента (КаЬаЦ Е. А., 81гис1ига1 СопсерЪ ш 1ттипо1оду апб 1гптипосйет181гу, 2пб Еб., р. 413-436, Ной, ВтеНаП, ХУтЫоп (1976)) и другие виды клеточного ответа (Апбгете Ό. е1 а1., Сйтса1 1ттипоЬю1оду, рр 1-18, В. 8апбег8 (1980); КоН1, 8., е1 а1., 1ттипо1оду, 48: 187 (1983)); в то время как вариабельная область определяет антиген, с которым она будет взаимодействовать. Легкие цепи подразделяются на каппа и лямбда. Каждый класс тяжелых цепей может быть спарен либо с каппа-, либо с лямбда-легкой цепью. Легкая и тяжелая цепи ковалентно связаны друг с другом, и "хвостовые" участки двух тяжелых цепей связаны друг с другом ковалентными дисульфидными связями, если иммуноглобулины образуются или гибридомами, или В-клетками.
Выражение "вариабельная область" или "УВ" обозначает домены в каждой паре легких и тяжелых цепей в антителе, которые непосредственно вовлечены в связывание антитела с антигеном. Каждая тяжелая цепь несет на одном конце вариабельный домен (УН), после которого следует ряд константных доменов. Каждая легкая цепь несет вариабельный домен (Уъ) на одном конце и константный домен на другом конце; константный домен легкой цепи выровнен с первым константным доменом тяжелой цепи, а вариабельный домен легкой цепи выровнен с вариабельным доменом тяжелой цепи.
Выражения "определяющая комплементарность область", "гипервариабельная область" или "СОВ" обозначают одну или более гипервариабельных или определяющих комплементарность областей (СОВ),
- 26 028913
обнаруживаемых в вариабельных областях легкой или тяжелой цепей антитела (См. КаЬа! Е. А. е1 а1., Зесцкпсез о£ РгоШпз о£ 1ттипо1од1са1 1п1еге5Е Ыайопа1 1пзШи1ез о£ НеаНЬ, ВеШезйа, Мй., (1987)). Эти выражения включают гипервариабельные области, как определено КаЬа! е1 а1. ("Зесцкпсез о£ РгоШпз о£ 1ттипо1ощса1 1п1еге51," КаЬа! Е., е1 а1., ИЗ Эер1. о£ НеаИЬ апй Нитап Зегуюез, 1983) или гипервариабельные петли в 3-мерных структурах антител (СНоЙиа апй Ьезк, 1 Мо1. Вю1. 196 901-917 (1987)). СЭР в каждой цепи удерживаются в тесной близости каркасными областямя и, с СЭР другой цепи, вносят вклад в образование антигенсвязывающего сайта. В пределах СЭР имеются определенные аминокислоты, которые были описаны как области, определяющие селективность (ЗЭР), то есть критические важные для контактирования остатки, используемые СЭР при взаимодействии антитело-антиген (КакЬтш, З., МеГЬойз, 36:25-34 (2005)).
Выражения "каркасная область" или "РР" обозначают одну или более из каркасных областей, обнаруживаемых в вариабельных областях легкой и тяжелой цепей антитела (См. КаЬа! Е. А. е1 а1., Зециепсез о£ РгоШпз о£ 1ттипо1одюа1 1п1еге51, Ыайопа1 1п81йи1е5 о£ НеаЬЬ, ВеШезйа, Мй., (1987)). Эти выражения включают области аминокислотных последовательностей, расположенные между СЭР в вариабельных областях легкой и тяжелой цепей антитела.
Антитела против ФРН и их связывающие фрагменты, обладающие активностью связывания с ФРН
Антитело АЬ1.
В изобретении предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, при помощи антитела АЬ1 или его фрагментов, или антитела либо фрагмента антитела, связывающихся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ1, к примеру, как определено ниже, по отдельности или вместе с другим активным агентом, например НСПВП или опиатным анальгетиком, и которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75 и/или ингибируют либо предотвращают боль. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΑΕνΜΤ0ΤΡ33ν3ΑΑνθΟΤνΤΙΝ00Α30ΝΙΥ3ΝΕΑ\νΥ00ΚΡΟ0ΚΡΚΕΕΙΥΟΑ3ΝΕΟΑθν Ρ5ΕΡΕ.ΟδΟ5ΟΤΕΥΤΕΤΙ8ΟίΕ0ϋθνθΤΥΥ€03ΑΡΟ8Ο5ΤΕΝΤΡθα0ΤΕνννΚΚ (ЗЕО П)
ΝΟ: 1).
По изобретению, необязательно, предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или вместе с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, в которых антитела включают химерные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΑΕνΜΤ0ΤΡ85ν8ΑΑνθ6ΤνΤΙΝ€0Α50ΝΙΥ5ΝΕΑΨΥ00ΚΡα0Ι^ΚΕΕΙΥαΑ3ΝΙΙ>Αθν РЗКРКСЗОЗОТЕУТЕТКОЕЕСООУСТУУСОЗАРОЗОЗТЕШРОООТЕУУУККТУААРЗУ ΡΙΡΡΡ8ϋΕ0ΕΚ3ΟΤΑ5ννεΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚν0\νκνϋΝΑΕ08ΟΝ80Ε3νΤΕ0Ο3ΚΏ3ΤΥ5 Ε33ΤΕΤΕ8ΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑΟΕνΤΗΟΟΕ38ΡνΤΚ8ΡΝΕ.αΕ€ (ЗЕО ΙθΝΟ: 2).
По изобретению, необязательно, предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или вместе с другим активным агентом, например НСПВП или опиатным анальгетиком, в которых антитела включают химерные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
05ΕΕΕ5ΟΟΙ^νΤΡαΤΡΕΤΕΤετν8ΟΡ8Ε85ΥΑΜ5\ννΚ0ΑΡΟΚΟΕΕ’νν[θνΐΤ5ΙΟ8Τ νΥΑ3λνΑΚΟΡΡΤΙ3ΚΤ3ΤΤνΏΕΚΙΤ8ΡΊΤΕΟΤΑΊΎΡΟΑΚΟΥϋΟΥϋΕΜΤΥΡΝΙ5ν(ΪΟΟΤΕνΤ УЗЗ (ЗЕО Ю N0:3).
По изобретению, необязательно, предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или вместе с другим активным агентом, например НСПВП или опиатным анальгетиком, в которых антитела включают химерные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΟδΕΕΕδΟΟΕΕνΤΡΟΤΡΕΤΕΤΟΤνδΟΡδΕδδΥΑΜδλννΚΟΑΡΟΚΟΕΕλνίΟνίΤδΙΟδΤ νΥΑΚΧνΑΚΟΚΤΤΐΧΚΊ'ΧΤΙ'νϋΕΚΙΤΧΡΤΤΒΟΤΑΤΥΡΟΑΚΟΥΰϋ'ιΌΕΜΤΥΡΝίνΟρΟΤΕνΤ УЗЗАЗТКОРЗУРРЕАРЗЗКЗТЗООТААЕОСЕУКПУРРЕРУТУЗ^ТЧЗОАЕТЗОУНТРРАУЬ 0886ΕΥ5Ε85νντνΡ5δ8Ε0Τ0ΤΥΙ0ΝνΝΗΚΡ8ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ80ΟΚ.ΤΗΤ0ΡΡ0ΡΑΡΕΙ, ΕΟΟΡ8νΡΕΡΡΡΚΡΚΤ)ΤΕΜΙ8ΚΤΡΕνΤθνννην5ΗΕηΡΕλΤ6ΡΝ\νΥνθθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕ ΕΟΥΛΧΤΥΚννΗνΕΤνΕΗΟΟΧνί,ΝΟΚΡ.ΥΚΕΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΚΚΛΚΟρΡΚ-ΕΡΟνΥΤΕΡ Ρ8ΚΕΕΜΤΚΝ0ν8ΕΤ€ΕνΚΟΡΥΡ8ΜΑνΕ\νΕ8ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ8ηθ8ΡΡΕΥ8ΚΕΤ νΕ>Κ5Κ\ν00ΟΝνΓδ€3νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤ<3Κ3Ε5Ε3ΡΟΚ. (3Ε<3 Π> ΝΟ: 4).
По изобретению, необязательно, предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или вместе с другим активным агентом, например, НСПВП или опи- 27 028913
атным анальгетиком, в которых антитела включают одну или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 5; 8ЕО ΙΌ ΝΟ: б; и 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 7, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СЭК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 1 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 2, и/или одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО ΝΟ: 8; 8Е0 ГО ΝΟ: 9; и 8Е0 ГО ΝΟ: 10, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: З или последовательности тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 4, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СГОК, вариабельной последовательности тяжелой цепи и вариабельной последовательности легкой цепи, и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению, необязательно, предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или вместе с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, в которых антитело является фрагментом, проявляющим специфичность связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8ЕО ГО ΝΟ: 1 или 8ЕО ГО ΝΟ: 2. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8ЕО ГО ΝΟ: З или 8ЕО ГО ΝΟ: 4.
В дополнительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕО ГО ΝΟ: 5; 8ЕО ГО ΝΟ: б и 8ЕО ГО ΝΟ: 7, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 1 или последовательности легкой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 2.
По изобретению, необязательно, предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или вместе с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, в которых антитела включают фрагменты, обладающие специфичностью связывания с ФРН, и которые содержат или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕО ГО ΝΟ: 8; 8ЕО ГО ΝΟ: 9; и 8ЕО ГО ΝΟ: 10, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: З или последовательности тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 4.
По изобретению, также, необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8ЕО ГО ΝΟ: 1, вариабельная область тяжелой цепи с 8ЕО ГО ΝΟ: З; определяющие комплементарность области (8ЕО ГО ΝΟ: 5; 8ЕО ГО ΝΟ: б; и 8ЕО ГО ΝΟ: 7) вариабельной области легкой цепи с 8ЕО ГО ΝΟ: 1; и определяющие комплементарность области (8ЕО ГО ΝΟ: 8; 8ЕО ГО ΝΟ: 9 и 8ЕО ГО ΝΟ: 10) вариабельной области тяжелой цепи с 8ЕО ГО ΝΟ: З.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное антитело против ФРН является АЬ1, содержащим, или, иначе, состоящим из 8ЕО ГО ΝΟ: 2 и 8ЕО ГО ΝΟ: 4, и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для использования здесь включают или, иначе, состоят из ΡаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН или иным ΡаЬ или фрагментом моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ1. По отношению к антителу АЬ1, ΡаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8ЕО ГО ΝΟ: 1 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8ЕО ГО ΝΟ: З. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8ЕО ГО ΝΟ: 1 и/или 8ЕО ГО ΝΟ: З в указанном ΡаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Ρ;Φфрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ1. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ1 или его ΡаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, Ν8Ο или НЕК 29З, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Ρίαίιία включают, не ограничиваясь перечисленным, Ρίαίιία раЦогй.
Антитело АЬ2.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают химерные или гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, причем антитело является антителом АЬ2 или его
- 28 028913
фрагментами, или антителом либо фрагментом антитела, связывающимися с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ2, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные или гуманизированные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
□[рМТрЗРЗТЕЗАЗУООКУЛТСОАЗОМУЗЖЛ^УЬСКРСКЛРКШУСАЗЖПАОУР 3ΡΡ3Ο3<35ΟΤΕΥΤΕΤΙ83Ε0ΡΟΟΓΑΤΥΥΟ03ΑΡΟ8Ο5ΤΕΝΤΕΟΟ(ΓΙ'ΚνΕίΚ1< (8Ер ГО ΝΟ:
И).
Изобретение также, необязательно, включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ϋΐρΜΐρ3Ρ3ΤΕ3Α3νθΟΚνΤΙΤΕΡΑ8ΡΝΙΥ3ΝΕΑ\νγρ<ΚΡ0ΚΑΡΚΕΕΙΥ(.ιΑ8ΝΕΟΑ(·.τνΡ 5ΕΡ5Ο303ΟΊΈΥΤΕΤΙ83ΕρΡΟΟΡΑΤΥΥ0ρ3ΑΡ03Ώ3ΤΕΝΤΡ000ΤΚνΕΙΚΚΤνΑΑΡ3νΡΙ РРРЗОЕрЕКЗСтТАЗУУСЕЕЖ1РУРКЕАКУр\\''КУОНАЕрЗСКЗрЕЗУТЕрОЗКЦЗТУЗЕЗ ЗТЕТЕЗКАОУЕКНКУУАСЕУТНООЬЗЗРУТКЗРККОЕС (ЗЕО ГО N0: 12).
Изобретение также, необязательно, включает химерные или гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, и которые обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ЕУОЕУЕЗОООЕУОРООЗЬКЕЗСААЗОРТУЗЗУАМЗЗУУКОАРОКОЕЕУУУОУТТЗЮЗТУ ΥΑ55ΑΚΟΚΕΤΤ8ΚΌΝ3ΚΝΤΕΥΕΟΜΝ5ΕΕΑΕΌΤΑνΥΥΟΑΚΟΥΤΐηΥΕιΕΜΤΥΡΝΤ\νθΟΟΤ БУТУЗЗ (ЗЕО ГО ΝΟ: 13).
Изобретение также, необязательно, включает химерные или гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, и которые обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
Εν0ΕνΕ8ΟΟΟΕν0ΡΟΟ8ΕΚΕ30ΑΑ8ΟΡτν83ΥΑΜ3\ννκ0ΑΡΟΚΟΕΕ\ννθνΐΤ3ΙΟ5Τν
ΥΑ55ΑΚαΕΕΤΙ3ΡΌΝ5ΚΝΤΕΥΕΟΜΝ3ΕΚΑΕΕ)ΊΑνΥΥΟΑΚΟΥΟΟΥηΕΜΤΥΡΝΙ\νϋΟϋΤ
ЕУТУ83АЗТКОРЗУГРЕАР83КЗТЗООТААЕОСЕУКЕ>УГРЕРУТУ8ЖК8ОАЕТ8ОУНТРР
АУЕ088ОЕУ8Е88УУТУР838ЕОТ0ТУ1СМУ№1КРЗЦТКУОККУЕРКЗСПКТНТСРРСРА
РЕЕЕООР8УРЕРРРКРКОТЕМ18КТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУКРМ\УУУООУЕУНМАКТК
ΡΚΕΕΟΥΑδΤΥΚννδνΕΤνΕΗΟϋλνΕΝΟΚΕΥΚΟΚνΒΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟΟΡΚΕΡΟν
ΥΐΕΡΡ3ΚΕΕΜΤΚΝ0ν3ΕΤ0ΕνΚ0ΕΥΡ3ΰΙΑνΕ\νΕ8ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ8ΟΕΓ3ΡΕΕΥ8
КЕТУЕ>К5ГОУ00ОКУРЗСЗУМНЕАЕНКНУТ0К5Е8Е5РаК (δΕΟ ГО ΝΟ: 14).
По изобретению, также, необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей δΕφ ΙΌ N0: 15; δΕΟ ΙΌ N0: 16 и δΕΟ ΙΌ N0: 17, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Ε0 ГО N0: 11 или последовательности легкой цепи 8Ε0 ГО N0: 12, и/или одной или более из полипептидных последовательностей 8Ε0 ГО N0: 18; 8Ε0 ГО N0: 19 и 8Ε0 ГО N0: 20, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Ε0 ГО N0: 13 или последовательности тяжелой цепи 8Ε0 ГО N0: 14, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СИК, вариабельной последовательности тяжелой цепи и вариабельной последовательности легкой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также, необязательно, предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Ε0 ГО N0: 11 или 8Ε0 ГО N0: 12. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Ε0 ГО N0: 13 или 8Ε0 ГО N0: 14.
В дополнительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, необязательно включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Ε0 ГО N0: 15; 8Ε0 ГО N0: 16 и 8Ε0 ГО N0: 17, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности лег- 29 028913
кой цепи δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 11 или последовательности легкой цепи δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 12.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 18; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 19 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 20, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СЭР. или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 13 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 14.
По изобретению, также, необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все, из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 11; вариабельная область тяжелой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 13; определяющие комплементарность области (δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 15; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 16 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 17) вариабельной области легкой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 11; и определяющие комплементарность области (δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 18; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 19 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 20) вариабельной области тяжелой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 13.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное или гуманизированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний необязательно является АЬ2, содержащим, или, иначе, состоящим из δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 12 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 14, и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН или РаЬ либо иным фрагментом моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ2. По отношению к антителу АЬ2, РаЬфрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 11 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 13. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 11 и/или δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 13 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬфрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ2. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ2 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, ΝδΟ или ΗΕΚ 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РЫйа включают, не ограничиваясь перечисленным, РЫйа рахЮпх.
Антитело АЬ3.
В изобретении предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают химерные или гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, причем антитело является АЬ3 или его фрагментами, или другим антителом либо фрагментом антитела, связывающимися с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ3, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА без выраженного ингибирования связывания ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ЛУЬТ9ТРаРУЯЛЛМС,ОТУТ1КСр8й9КУУК№<¥1_5;У/¥0(ЗКГСС,1РРКШ¥ОА5ЦЕР5ОУ Ρ8ΡΤ3ϋ8ί;5ϋΤ9ΡΤΓΤΙ«;ν<.)€ΟΟΑΑΤΥΥϋΤΟΟΥΟΟΟΑϋΝΑΡ<ί(;<:;ΤΕνννΚΚ (8ЕО ГО ΝΟ: 21).
Изобретение также включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΑνΕΤΟΤΡδΡνδΑΑΜΟϋΤνΤΙΚΟΟδδΟδνΥΚΝΝΥΙ,δ№Υ(3(3ΚΡΟΟΡΡΚΙ.Ι.ΙΥϋΑδΝΙ.Ρ8θν ΡδΚΡδΟδαδΟΤΟΡΤΕΤΙδΟνΟΟΟϋΑΑΤΥΥΟΕΟΟΥΡΟΟΑΟΝΑΡΟΟΟΤΕνννΚΚΤνΑΑΡδ νΡΙΡΡΡδϋΕΟΕΚδαΤΑδννΟΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚνΟ’ννκνΟΝΑΕΟδΟΝδΟΕδντΕΟΟδΚΟδΤΎ 8Εδ5ΤΕΤΕ5ΚΛΟΥΕΚΗΚνΥΑΟΕνΤΗΟΟΕδ3Ρ\4Κ5ΡΝΚΌΕΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 22).
Изобретение дополнительно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
- 30 028913
05УЕЕ5ООаЬУТРОТРЕТЕТСТУ5ОР31.35УУМ1\УУК0АР(ЖОЕЕУ1От¥5АОТУУАЗ \\'АК(,;КРТ18КТ88ТТУПГК1ТЗРТТРПТАТУРСАСССС81УШ1А’ОРОТЕУТУЗЗ (5Е<3 ПЗ N0: 23).
Изобретение также включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ОЗУЕЕ8ССЫ^УТТСТРЕТЕТСТУ5СР31,85УУМ[5УУКОАРОКСг1.ЕУ1СП'\УЗАСгТУУА5 ^АКСКЕТ13КТЗЗТТУПЬК1Т8РТТЕОТАТУГСАСССО81УИ\УОРОТЕУТУЗЗАЗТКаР5 УРРЬАР55К8Т5ООТААЬОСЬУКОУРРЕРУТУ8\УК5ОАЬТ5ОУНТРРАУЬ<253ОЕУЗЕ58 νντνΡ833ΕαΤ9ΤΥΙΟΝνΝΗΚΡ3ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ3εθΚΤΗΤΟΡΡ€ΡΑΡΕΕΕΟΟΡ3νΡΕΡΡ ΡΚΡΚηΤΙΛ1Ι$ΚΤΡΕνΤ€νννην$ΗΕ[)ΡΕνΚΡΝ\νΥνβΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ()ΥΑ8ΊΥΤΚν ν8νΐ;ΐνΐ,Ηί)Ι)\νΡΝΟΚΕΥΚΓΚν8ΝΚΑΙ,ΡΑΡΙΕΚΐΙ3ΚΛΚΟΟΡΕΕΡ()νΥΊ1.ΡΡ8Ι<ΕΕΜΤΚΝ 0ν8ΕΤ0ΕνΚΟΡΥΡ5ΟΙΑνΕΨΕ5ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΌ3ΟΟ5ΓΡΕΥ5ΚΕΤνπΚ3Κ.\¥00α Ν УГ5С8 УМПЕАЫΙΝΙΙ ΥΊ'0Κ8Ι.8Ε8ΡϋΚ (ЗЕО ПЗ N0: 24).
По изобретению также предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 25; 8ЕЦ ГО N0: 26; и 8ЕЦ ГО N0: 27, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 21 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 22, и/или одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 28; 8ЕЦ ГО N0: 29; и 8ЕЦ ГО N0: 30, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 23 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 24, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СИР, вариабельной последовательности тяжелой цепи и вариабельной последовательности легкой цепи, и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также предлагаются фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8ЕЦ ГО N0: 21 или 8ЕЦ ГО N0: 22. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8ЕЦ ГО N0: 23 или 8ЕЦ ГО N0: 24.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 25; 8ЕЦ ГО N0: 26; и 8ЕЦ ГО N0: 27, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 21 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 22.
В дополнительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 28; 8ЕЦ ГО N0: 29 и 8ЕЦ ГО N0: 30, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 23 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 24.
По изобретению, также, необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 21; вариабельная область тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 23; определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 25; 8ЕЦ ГО N0: 26; и 8ЕЦ ГО N0: 27) вариабельной области легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 21; и определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 28; 8ЕЦ ГО N0: 29; и 8ЕЦ ГО N0: 30) вариабельной области тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 23.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является ЛЬ3, содержащим, или, иначе, состоящим из 8ЕЦ ГО N0: 22 и 8ЕЦ ГО N0: 24 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специ- 31 028913
фичностью связывания с ФРН или другим РаЬ либо фрагментом моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ3. По отношению к антителу 3, РаЬфрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 21 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 23. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8ЕЦ ГО N0: 21 и/или 8ЕЦ ГО N0: 23 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬфрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ3. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ3 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ракЮпк.
Антитело АЬ4.
В изобретении предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают химерные или гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, причем антитело является антителом АЬ4 или его фрагментами, или другим антителом либо фрагментом антитела, связывающимися с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ4, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА без выраженного ингибирования связывания ФРН с р75 и/или для профилактики или эффективного лечения боли. В одном варианте воплощения изобретение включает гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ϋΚ)ΜΤ(]8Ρ5ΤΕ5Α5νθΟΚ.νΤΠΌ055Ε>5νΥΚΝΝΥΕ5\νΥ<30ΚΡΟΚΑΡΚΕΕΙΥΙ)Α5Ν ЕРЗОУРЗРРЗСтЗЛЗС.ТЕРТЕЛЗЗЕрРОПРАТУУСТ.ОПУООПАОНАРСООТКУЕТКК (5Εζ)ΙΟΝΟ: 31).
Изобретение также включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
Γ)ΐρΜΤΌ8Ρ8ΤΕ3Α5νθΟΚν'1ΓΓΟ()38ί^8νΥΚΝΝΥΕ8\νΥ(2()ΚΡΟΚΑΡΚΙ,ΡΙΥΟΑ3ΝΙ.Ρ8(.ι νΡ3ΚΓ5Ο8Ο3ΟΤΕΡΤΕ’Π35Ε<3Ρϋ0ΡΑΊΎΥ0Ε0ΟΥΕ>ΟΟΑΟΝΑΡ00αΤΚνΕΙΚΚΤνΑΑΡ5ν ΡΙΡΡΡ8ϋΕΓ)ΕΚδ0ΤΛ5ννΕΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚνφ\νκνϋΝΑΕί]80Ν5ΡΕ3νΤΕρΏ8ΚΟ3ΤΥ8 ЕЗЗТЕТЕЗКАОУЕКНКУУАСЕУТНЦОЕЗЗРУТКЗРМКОЕС (3Ε()1ϋΝ0: 32).
Изобретение дополнительно включает гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΕνρΕνΕ8Ο<3<3Εν0ΡΟΟ5ΕΚΙ.50ΑΑ5ΟΡΤν55ΥνΜΙ'Λ'ΓνΚΟΑΡΟΚΟΓ.ΕΥ1Ο1Τ%’3ΑΟΤΥΥ Α83ΑΚαΚΡΤΙ8ΚϋΝ8ΚΝΤΕΥΕΟΜΝ8ΕΚΑΕΟΤΑνΥΥΟΑΟΟ(Χ}8ΙΥϋΙ\νθΟΟΤΕντν38 (8Ε<3 Ю ΝΟ: 33).
Изобретение также включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ЕУрЕУЕЗОООЕУЦР005ЕКЕЗСААЗОРТУЗЗУУМ1\УУЕ.ОАРОКОЕЕУЮ1Т\УЗАОТУУ
Α33ΑΚΟΚΡΤΙ3ΕΟΝ3ΚΝΤΕΥΕ0ΜΝ3ΕΚΑΕΟΤΑνΥΥΕΑθαθΟ3ΙΥ0№Ο0ΟΤΕντν88Α3
ТКОРЗУРРЕАРЗЗКЗТЗООТААЕОСЕУКОУРРЕРУТУЗТО/ЗОАЕТЗОУНТРРАУЕЦЗЗОЕ
УЗЕЗЗУУТУРЗЗЗЕОТфТУЮКУКНКРЗКТКУОКЕУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕЕЕОаРЗ
νΡΕΡΡΡΚΡΚΟΤΕΜΙ3ΚΤΡΕνΤθνν\Ί)ν3ΗΕηΡΕνΚΡΝ\νΥνηθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕΟΥΑ
5ΤΥΚνν5νΕΤνΕΗ9Ο(νΕΝΟΚ£ΥΚΌΚν5ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚΟ(3ΡΚΕΡ<3νΥΤΕΡΡ8ΚΕ
ΕΜΤΚΝ9ν5ΕΤσΕνΚ0ΡΥΡ5ΟΙΑνΕλνΕ5ΝΟ(3ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ3θα5ΡΡΕΥ5ΚΕΤνθΚ8
Κ1Υ6φΟΝνΡδ05νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤς>Κ5Ε5Ε5ΡΟΚ (5Ε0 ΙΌ ΝΟ: 34).
По изобретению также предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 35; 8ЕЦ ГО N0: 36; и 8ЕЦ ГО N0: 37, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 31 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 32, и/или одной или более из полипептид- 32 028913
ных последовательностей 8Еф ГО N0: 38; 8Еф ГО N0: 39; и 8Еф ГО N0: 40, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 33 или последовательности тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 34, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СГОК. вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Еф ГО N0: 31 или 8Еф ГО N0: 32. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Еф ГО N0: 33 или 8Еф ГО N0: 34.
В дополнительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Еф ГО N0: 35; 8Еф ГО N0: 36; и 8Еф ГО N0: 37, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Еф ГО N0: 31 или последовательности легкой цепи 8Еф ГО N0: 32.
В дополнительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Еф ГО N0: 38; 8Еф ГО N0: 39; и 8Еф ГО N0: 40, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 33 или последовательности тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 34.
По изобретению, также, необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8Еф ГО N0: 31; вариабельная область тяжелой цепи с 8Еф ГО N0: 33; определяющие комплементарность области (8Еф ГО N0: 35; 8Еф ГО N0: 36; и 8Еф ГО N0: 37) вариабельной области легкой цепи с 8Еф ГО N0: 31; и определяющие комплементарность области (8Еф ГО N0: 38; 8Еф ГО N0: 39; и 8Еф ГО N0: 40) вариабельной области тяжелой цепи с 8Еф ГО N0: 33.
В особенно предпочтительном варианте воплощения изобретения, химерное или гуманизированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является ЛЬ4, содержащим, или, иначе, состоящим из 8Еф ГО N0: 32 и 8Еф ГО N0: 34, и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН или другим РаЬ, либо фрагментом моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ14. По отношению к антителу АЬ4, РаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8Еф ГО N0: 31 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8Еф ГО N0: 33. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8Еф ГО N0: 31 и/или 8Еф ГО N0: 33 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ4. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ4 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раПогю.
Антитело АЬ5.
В изобретении предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела необязательно включают АЬ5 или его фрагменты, или другое антитело либо фрагмент антитела, связывающиеся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ5, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие вариабельной последо- 33 028913
вательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΑΥϋΜΤςΤΡΑδνΕνΑναΟΤνΤΙΚεφΑδφδΙΥδΝΕΑΥνΥΟφΚΡΟΟΡΡΚΙΧΙΥΏΑδΤΕΕδΟνΡ δΕΓΚΟδΟδΟΤΕΥΤΕΤΙδΟνΕΟΑϋΑΑδΥΥϋΟφΟΡΤνδΟΙΟΝΑΡΌΟΟΤΕνννΚΚ (δΕφ Ιϋ ΝΟ: 41).
Изобретение также, необязательно, включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΑΥΠΜΤΟΤΡΑδνΕνΑνθΟΤνΤΙΚΟ{3Αδ<3δΙΥδΝΕΑ\νΥΟ(3ΚΡα<)ΡΡίίΕΕΙΥΕ)ΑδΤΕΕδθνΡ δΡΡΚΟδΟδΟΤΕΥΤΕΤΙδΟνΕΟΑϋΑΛδΥΥΟΟΟΟΡΤνδΓΗΟΝΑΡΟΟΟΊΈνννΚΚΤνΑ ΑΡδν ΡΙΡΡΡδΟΕΟΕΚδΟΤΑδννΕΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚνΟΥνχνΟΝΑΕΟδσΝδΟΕδνΤΡ.ΟηδΚΓΚΤΥδ ΕδδΤΕΤΕδΚΑϋΥΕΚΗΚνΥΑΟΕνΤΗΟΟΕδδΡνΤΚδΡΝΚΟΕΟ (δΕΟ Ю ΝΟ: 42).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
φδνΕΕδΟΟΕΕνΤΡΟΤΡΕΤΕΤΟΤνδΟΡδΕδΝΥΑνΟΨνΕφΑΡΟΚΟΕΕΥνίΟΙΙΟΚΝΟΝΤΥνΥΑ δΙΥΑΕΟΚΡΤΙδΚΤδΤΤνϋΕΚΙΤδΡΤδΕϋΤΑΤΥΡΟΑΚΟΥΟΕδνΑΥΥνΡΝΡΥΟΡΟΤΕντνδδ (5Е<3 Ю ΝΟ: 43).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
φδνΕΕδΟΟΚΕνΤΡΟΤΡΕΤΕΤΟΤνδΟΡδΕδΝΥΑνΟίννΚΟΑΡΟΚΟΕΕΥνίΟΙίαΚΝΟΝΤν/ΥΑ
δν/ΑΚΟΕΕΤΙδΚΤδΤΤνΟΕΚΙΤδΡΤδΕϋΤΑΤΥΡΟΑΚΟΥΟΚδνΑΥΥνΡΝίν/ΟΡΟΤΕντνδδΑ
δΤΚΟΡδνΡΡΕΑΡδδΚδΤδΟΟΤΑΑΕσΟΕνΚϋΥΓΡΕΡντνδΥνΝδΟΑΕΤδΟνΗΤΡΡΑνΕφδδΟ
ΕΥδΕδδνντνΡδδδΕΟ'ΡφΤΥΙΟΝνΝΗΚΡδΝΤΚνΟΚΚνΡΐΡΚδΟΟΚΤΗΤΟΡΡΟΡΑΡΕΙ.ΕΟΟΡ
δνΡΕΡΡΡΚΡΚΟΤΕΜΙδΚΤΡΕνΤΟνννονδΗΕΟΡΕνΚΡΝίνΥνϋΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕφΥ
ΑδΤΥΚννδνΕΤνΕΗφΟν/ΕΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟφΡΚΕΡφνΥΤΕΡΡδΡ.
ΕΕΜΤΚΝφνδΕΤΟΕνΚΟΡΥΡδΟΙΑνΕΥνΕδΝΟφΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟδΟΟδΡΡΕΥδΚΕΤνΟΚ
5ΚΥνφφΟΝνΡδΟδνΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤφΚδΕδΕ8ΡΟΚ (δΕφΙΟΝΟ: 44).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 45; 8Е0 ГО N0: 46; и 8Е0 ГО N0: 47, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 41 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 42, и/или одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 48; 8Е0 ГО N0: 49; и 8Е0 ГО N0: 50, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 43 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 44, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты необязательно содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СИР, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также, необязательно, предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО N0: 41 или 8Е0 ГО N0: 42. В другом необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО N0: 43 или 8Е0 ГО N0: 44.
В дополнительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 45; 8Е0 ГО N0: 46; и 8Е0 ГО N0: 47, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 41 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 42.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, необязательно включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 48; 8Е0 ГО N0: 49 и 8Е0 ГО N0: 50, которые соответствуют опреде- 34 028913
ляющим комплементарность областям (СЭР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕО ГО N0: 43 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 44.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 41; вариабельная область тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 43; определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 45; 8Е0 ГО N0: 46 и 8ЕЦ ГО N0: 47) вариабельной области легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 41 и определяющие комплементарность области (ЪЕЦ ГО N0: 48; 8ЕЦ ГО N0: 49 и 8ЕЦ ГО N0: 50) вариабельной области тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 43.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения необязательно включенное химерное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, является АЬ5, содержащим, или, иначе, состоящим из 8ЕЦ ГО N0: 42 и 8ЕЦ ГО N0: 44 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН, или другим РаЬ либо фрагментом антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ5. По отношению к антителу АЬ5, РаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 41 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 43. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8Е0 ГО N0: 41 и/или 8ЕЦ ГО N0: 43 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ5. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ5 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные Рюйт) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз.
Антитело АЬ6.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают АЬ6 или его фрагменты, или другое антитело либо фрагмент антитела, связывающийся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ6, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные или гуманизированные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΟΙΟΜΤΟδΡδΤΈδΑδνΟϋΚνΤΙΤΟΟΑδρδΙΥδΝΕΑΨΥΟΟΚΡΟΚΑΡΚΙΧητίΑδΤΕΕδΟνΡδ ΚΡδΟδαδΟΤΕΥΤΕΤΙδδΕΟΡΟΟΡΑΤΥΥΟΟΟΟΡΤνδΟΙΟΝΑΡΟΟΟΤΚνΕΙΚΚ (8Е<3 ГО N0:
51).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΟΙΟΜΤςδΡδΤΕδΑδναΟΚνΤΙΤερΑδΟδΙΥδΝΕΑλνΥΟΟΚΡΟΚΑΡΚΕΕΙΥϋΑδΤΕΕδΟνΡδ ΕΓδΟδΟδΟΤΕΥΤΕ’ΠδδΓ.ΟΡΠΠΓΑΤΥΥΟΟΟΟΡΤνδΟΙΟΝΑΡΩΟΟΤΚνΕΙΚΚΤνΑ ΑΡδ νΡΙΡ ΡΡδϋΕΟΕΚδΟΤΑδννΟΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚνΟΨΚνΟΝΑΕΟδΟΝδΟΕδνΤΕΟΟδΚϋδΤΥδΕδδ ΤΕΤΕδΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑΟΕντΗΟΟΙ.58ΡνΤΚδΡΝΚ(.ίΕα (8Ε<3 ΓΟΝΟ: 52).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΗνφΙ..νΕ5(300Ι,νφΡ008ΕΚΙ.80ΑΑ80ΡΤν8ΝΥΑνΰ\ννΚφΑΡΟΚΟΕΕ\ννθ[10ΚΝΟΝΤ \νΥΑ88ΑΚΟΚΓΤΙ8ΚΌΝ8ΚΝΤΕΥΕφΜΝδΕΚΑΕϋΤΑνΥΥΕΑΚϋΥ<3Κ8νΑΥΥνΡ'ΝΙ'ΛΌΡΟΤ Ι/ντν88 (δΕφΙΟΝΟ: 53).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность свя- 35 028913
зывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ЕУРЬУЕЗОСОЬУОРООЗЬКЬЗСААЗОРТУКЦУАУО^ГУКОАРОКОЬЕУУУОИОКМООТ
ΐνΥΑ33ΑΚαΕΡΤΙ8ΚϋΝ8ΚΝΤΕΥΕ0ΜΝ8ΕΚΑΕΟΤΑνΥΥεΑΚΟΥΟΚ8νΑΥΥνΡΝΙΨΟΡΟΤ
ЬУТУ55А5ТКСР5УРРЬАР58К8Т8ССТААЕОСЕУКОУГРЕРУТУ8ТО18САЕТЗСУНТРР
ΑνΕ033ΟΕΥ8Ε88νντνΡ838ΕΟΤ0ΤΥΐεΝνΝΗΚΡ8ΝΤΚνΒΚΚ.νΕΡΚ5ΟΟΚΤΗΤΟΡΡεΡΑ
ΡΕΕΕΟΟΡ3νΡΕΗΡΡΚΡΚυΊ’ΕΜΙ5ΚΤΡΡ.νΤθνννΓ)ν8ΙΙΡ,ΠΡΕνΚΡΝ\νΥνηθνΡ.νΐΙΝΑΚΤΚ
ΡΚΕΕ0ΥΑ3ΤΥΚνν3νΕΤνΕΗ0ΏλνΕΝΟΚΕΥΚΟΚν3ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ8ΚΑΚΟ0ΡΚΕΡ0ν
ΥΤΕΡΡ8ΚΕΕΜΤΚΝ0ν8ΕΤ0ΕνΚΟΡΥΡ8ΟΙΑνΕνΈ8Ν00ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ3ΟΟ3ΡΡΕΥ3
КЕТУОКЗК^ОООХУРЗСЗУМНЕАЬИМНУТОКЗЬЗЕЗРОК (ЗЕО Ιύ ΝΟ: 54).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ΙΌ N0: 55; δΕΟ ΙΌ N0: 56 и δΕΟ ΙΌ N0: 57, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 51 или последовательности легкой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 52, и/или одной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ΙΌ N0: 58; δΕΟ ΙΌ N0: 59 и δΕΟ ΙΌ N0: 60, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 53 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 54, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 51 или δΕΟ ΙΌ N0: 52. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности δΕΟ ГО N0: 53 или δΕΟ ГО N0: 54.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ГО N0: 55; δΕΟ ГО N0: 56 и δΕΟ ГО N0: 57, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи δΕΟ ГО N0: 51 или последовательности легкой цепи δΕΟ ГО N0: 52.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ГО N0: 58; δΕΟ ГО N0: 59 и δΕΟ ГО N0: 60, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО N0: 53 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО N0: 54.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с δΕΟ ГО N0: 51; вариабельная область тяжелой цепи с δΕΟ ГО N0: 53; определяющие комплементарность области (δΕΟ ГО N0: 55; δΕΟ ГО N0: 56 и δΕΟ ГО N0: 57) вариабельной области легкой цепи с δΕΟ ГО N0: 51 и определяющие комплементарность области (δΕΟ ГО N0: 58; δΕΟ ГО N0: 59 и δΕΟ ГО N0: 60) вариабельной области тяжелой цепи с δΕΟ ГО N0: 53.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное или гуманизированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЪ6, содержащим, или, иначе, состоящим из δΕΟ ГО N0: 52 и δΕΟ ГО N0: 54 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из ЕаЪ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН или другим ЕаЪ либо фрагментом моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЪ6. По отношению к антителу АЪ6, ЕаЪфрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с δΕΟ ГО N0: 51 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с δΕΟ ГО N0: 53. Данный необязательный вариант воплощения изо- 36 028913
бретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8ЕО ГО N0: 51 и/или 8Е0 ГО N0: 53 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ6. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ6 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные Иска) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Иска включают, не ограничиваясь перечисленным, Иска раЧогк
Антитело АЬ7.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают АЬ7 или его фрагменты, или другое антитело либо фрагмент антитела, связывающийся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ7, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΑΓ3ννΜΤρΤΡΑ8ν5ρΡνθΟΤνΤΠίΕΡΑ3ΕΟΙΥΝΕΕΑ\νΥΕ)Γ)ΚΡΟζ)ΓΡΚΕΕΙΥ5Α3ΤΕΑ56ν Ρ8ΕΡΚ(33Ο8ΕίΤΕΥΤΕ'Ι'Ι3ϋΕΕΟΑΙ>Α ΑΤΥΥΌρΝΝΥΕνΤΤΥΟνΛΕΟΟΟΤΕ.νννΚΚ (8 ЕЕ)
ГО ΝΕΕ 61).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΑΌννΜΪΕ)ΤΡΑ3ν8ρΡνθΟΤν'ΠΚ.€ρΛ3ΕΟΙΥΝΕΕΛ\νΥΕ)ζ)ΚΡθρΡΡΚΕΕΙΥ8Α3ΤΕΑ8ϋν РЗЫГООЗОЗСТЕУТЕНЗОЕЕСАОААТУУСрЖУЕУТТУОУАГСООТЕУУУККТУААРЗ УПРРРЗОЕРЕКЗОТАЗУУСЕЕМКРУРРЕАКУрХУКУПКЛЕрЗОКЗрЕЗУТЕрОЗКПЗТУ ЗЕЗЗТЬТЕЗКАОУЕКНКУУАСЕУТНРСЕЗЗРУТКЗРККСЕС (ЗЕр ГО N0: 62).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ρΕρΕΚΕ8ΟΟΚΕνΤΡΟΤΡΕΐΕΤΡΐν3ΟΓ5Ε83ΥΑΜΙ\ννκρΑΡϋΚαί.ΕΥΙϋΥΙϋτθΤ5ΛΥΥΑ 5λνΎΚ(ίΚΡΐΙ3ΚΤΚΤΤνυΕΚ[Τ8ΡΤΤΕΟΤΑΤΥΡαΑΚ8ΥΑΑΥαθΥΡΑΤΓΏΡ\ν(/Ρ6ΤΕντν58 (8Е<3 ГО N0: 63).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
рЕрЕКЕЗООК.ЕУТРОТРЕТЕТСТУ8СР8ЕЗЗУАМТ\УУК0АРСКОЕЕУ1ОУГОТОТ5АУУА 81УУКОКРТ13КТ5ТТУОЕК1ТЗРТТЕПТАТУРСАК5УААУОО¥РАТРОР\УОРСТЕУТУЗЗ ΑδΤΚΟΡδνΡΡΕΑΡδδΚδΤδΟΟΤΑΑΕΟσΕνΚϋΥΡΡΕΡντνδΧνΝδΟΑΕΤδΟνΗΤΡΡΑνΕρδδ ОЕУЗЕЗЗУУТУРЗЗЗЕОТрТУГОКХЛТНКРЗНТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕЕЕОО ΡδνΡΕΡΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙδΚΤΡΕνΤΟνννϋνδΗΕΟΡΕνΚΡΝΨΥνΏΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕρΥ ΑδΤΥΚννδνΕΤνΕΗρθ\νΕΝΟΚΕΥΚεκνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤ18ΚΑΚΟ<3ΡΚΕΡ<3νΥΤΙ,ΡΡδϊ< ΕΕΜΤΚΝφνδΕΤΟΕνΚΟΡΥΡδΟΙΑνΕλνΕδΝΟρΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟδΟΟδΡΡΕΥδΚΙ,ΤνΕίΚ 5ΚΨφρθΝνΡ8Ε8νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤρΚ5Ε8Ε5ΡΟΚ (8ЕЦ ГО N0: 64).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ΙΌ N0: 65; 8Е0 ΙΌ N0: 66 и 8Е0 ΙΌ N0: 67, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОИ или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 61 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 62, и/или одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 68; 8Е0 ГО N0: 69 и 8Е0 ГО N0: 70, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОК или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 63 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 64, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций
- 37 028913
одной или более СЭР, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО N0: 61 или 8Е0 ГО N0: 62. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО N0: 63 или 8Е0 ГО N0: 64.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 65; 8Е0 ГО N0: 66; и 8Е0 ГО N0: 67, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 61 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 62.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 68; 8Е0 ГО N0: 69; и 8Е0 ГО N0: 70, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 63 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 64.
По изобретению, также, необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 61; вариабельная область тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 63; определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 65; 8Е0 ГО N0: 66; и 8Е0 ГО N0: 67) вариабельной области легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 61; и определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 68; 8Е0 ГО N0: 69; и 8Е0 ГО N0: 70) вариабельной области тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 63.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения химерное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЬ7, содержащим, или, иначе, состоящим из 8Е0 ГО N0: 62 и 8Е0 ГО N0: 64 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН или другим РаЬ либо фрагментом моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ7. По отношению к антителу АЬ7, РаЬфрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 61 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 63. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8Е0 ГО N0: 61 и/или 8Е0 ГО N0: 63 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ7. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ7 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раЫопк.
Антитело АЬ8.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают АЬ8 или его фрагменты, или другое антитело либо фрагмент, связывающийся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ8, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные или гуманизированные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
- 38 028913
Οΐς)ΜΤ03Ρ83Ε3Α3νθΌΡνΤΤΤΟΟΑ5ΕΟΤΛ7ΝΕΕΑ\\·ΎρρΚΡΟΚνΡΚΕΕΙΥ8Α3ΓΕΑ3ΘΥΤ3 ΚΡ8Ο5Ο8αΤϋΥΤΕΤΙ85Ε0ΡΕθνΑΤΥΥσ0ΝΝΥΕνΤΤΥθνΑΡαθΟΤΚνΕΙΚΚ (ЗЕф Π3 N0: 71).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
ΟΐςΜΤ(25Ρ83Ε8Α3νθΟΚν'ΠΤαρΑ8ΕΟΙΥΝΕΕΑ\νΥ<3ς>ΚΡΟΚνΡΚΕΕΙΥ3Α3ΤΕΑ3θνΡ3 ΚΡ3Ο5Ο5ΟΤΟΥΤΕΤΙ35Ε0ΡΕθνΑΤΥΥ€ρΝΝΥΕνΤΤΥθνΑΡίϊΟΟΤΚνΈΙΚΚΤνΑΑΡ3νΡΙ ΡΡΡ3ΟΕΡΕΚ3ΟΤΑ3ννθΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚνρ)νκνϋΝΑΕρ5ΟΝ3ρΕ3νΤΕρθ3Κϋ3ΤΥ3Ε5 ЗТЕТЕЗКЛОУЕКНКУУЛСЕУТНрСЕЗЗРУТКЗРКРОЕС (8Ер ГОКО: 72).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
<3ν<3ΕνΕ3600ννζ)Ρ0Κ8ΕΚΕ80ΑΑ80ΡΤΡ88ΥΑΜΡΥνΚ.ζ)ΑΡ6Κ0ΕΕΥΙ0ΥΙ0Τ0Τ8ΑΥΥ
Α33νΚΟΚΡΤΙ8Γ;ΐ>Ν8ΚΝΤΙ.ΥΕ()Μ38Ι.ΚΑΕ[ΪΙΆνΥΥίΆΚ3ΥΑΑΥΟΟΥΡΑΊΓΌΡ\\Ό<;)ΟΤΙ,
УТУ88 (5Е<3 Ю ΝΟ: 73).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
ρνρΕνΕ5ΟΟθννζ)ΡΟΚ3ΕΚΕ8σΑΑ3αΡΤΓ83ΥΑΜΙΧννΚ(3ΑΡαΚαΕΕΥΙΟΥΙΟΤΟΤ5ΑΥΥ Α83νΚΟΚΕΤΙ3ΚϋΝ5ΚΝΤΕΥΕρΜ88ΕΕΑΕΟΤΑλΓγγθΑΚ8ΥΑΑΥΟΟΥΡΑΤΡΟΡ\νορθτΕ ντν33Α5ΤΚαΡ8νΡΡΕΑΡ83Κ3Τ866ΤΑΑΕΟ€ΕνΚϋΥΡΡΕΡντν3ΧνΝ3ΟΑΕΤ8θνΗΤΡΡΑ νΕρδδΟΕΥδΕ.δδννΤΥΨδδδΕΟΤρΊΎΙΓΝνΝΗΚΡδΝΓΚ νΐ^ΚΚνΡΡΚδΕΌΚΤΗΊ'ΕΡΡΕ’ΡΑΡ ΕΕΕΟΟΡδνΡΕΡΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙδΚΤΡΕνΤΟνννϋνδΗΕΟΡΕνΚΡΝΨΥνϋΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡ ΚΕΕρΥΑ3ΊΥΚνν3νΕΓνΕΗρϋν«ΈΝ0ΚΕΥΚ0Κν8ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚ0ρΡ[<ΕΡρνΥ ΊΈΡΡ5ΚΕΕΜΤΚΝρν5ΕΤ€ΕνΚΟΡΥΡ8ΠΙΑνΕ\νΕ5ΝθρΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ5ΟΟ5ΡΓΕΥ3Κ. ΕΤνθΚ8Κ-\\'ΡΡΟΝνΡ5€5νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤρΚ.3Ε3Ε3ΡΟΚ (3Ερ ΙϋΝΟ: 74).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей БЕф ΙΌ ΝΘ: 75; БЕф ΙΌ ΝΘ: 76 и БЕф ΙΌ ΝΘ: 77, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи БЕф ΙΌ ΝΘ: 71 или последовательности легкой цепи БЕф ГО ΝΘ: 72 и/или одной или более из полипептидных последовательностей БЕф ГО ΝΘ: 78; БЕф ГО ΝΘ: 79; и БЕф ГО ΝΘ: 80, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи БЕф ГО ΝΘ: 73 или последовательности тяжелой цепи БЕф ГО ΝΘ: 74, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СИК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности БЕф ГО ΝΘ: 71 или БЕф ГО ΝΘ: 72. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности БЕф ГО ΝΘ: 73 или БЕф ГО ΝΘ: 74.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей БЕф ГО ΝΘ: 75; БЕф ГО ΝΘ: 76; и БЕф ГО ΝΘ: 77, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи БЕф ГО ΝΘ: 71 или последовательности легкой цепи БЕф ГО ΝΘ: 72.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей БЕф ГО ΝΘ: 78; БЕф ГО ΝΘ: 79; и БЕф ГО ΝΘ: 80, которые соответствуют определяющим компле- 39 028913
ментарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 73 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 74.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 71; вариабельная область тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 73; определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 75; 8ЕЦ ГО N0: 76; и 8ЕЦ ГО N0: 77) вариабельной области легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 71; и определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 78; 8ЕЦ ГО N0: 79; и 8ЕЦ ГО N0: 80) вариабельной области тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 73.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное или гуманизированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЬ8, содержащим, или, иначе, состоящим из 8ЕЦ ГО N0: 72 и 8ЕЦ ГО N0: 74, и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ8, РаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 71 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 73 или другой РаЬ или фрагмент моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ8. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8ЕЦ ГО N0: 71 и/или 8ЕЦ ГО N0: 73 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬфрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ8. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ8 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ра8Юп8.
Антитело АЬ9.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают АЬ9 или его фрагменты, или другое антитело либо фрагмент антитела, связывающийся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ9, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном необязательном варианте воплощения изобретение включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΑΥΡΜΤρΤΡΑδνδΑΑνΟΟΤνΤΙΚΟΌΑδΕΝΙΟδΥΕΑλνΥφρΚΡΟρΡΡΕΕΕΙΥΚΑδΤΕΑδΟνΡ δΚΡΚΟδΟδΟΤφΕΙΕΤΙδΟνΕΟΛϋΑΑΤΥΥερρυΥΝδΕΝΕϋΝΑΕίίΟΰΊΈνννΚΚ (δΕΟ ΙΟ N0: 81).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
ΑΥϋΜΤΟΤΡΑδνδΑΑνΓΚί’Γ νΤΙΚ€0Α5ΕΝΙΟ5ΥΕΑ\νΥ0ρΚΡΟί)ΡΡΡ.ί,Ι.ΙΥΡ ΑδΤΙ,ΑδίΐνΡ δΚΕ'ΚΟδΰδΟΊ'φΕΤΕΊ'ΙδΟνΕΕΑΌΑΑΤΥΥΟρρϋΥΝδΕΝΕΟΝΑΓϋαϋΤΕνννΚΚΤνΑΑΡδ νΡΙΕΡΡδϋΕΡΕΚδΟΓΑ5νν€ΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚνί9\νΚ.νΏΝΑΕρ5ΟΝ5Γ^ΕδνΤΕ<)Ο5ΚβδΤΥ 5Ε88ΤΕΤΕ5ΚΑϋΥΡΚΤΤΚνΥΑΕΕνΤΗρ0Ε88ΡνΤΚ8ΡΝΚ0ΕΕ (8Ер ГО N0: 82).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
ςδνΕΕδΟΟΚΕνΤΡΟΤΡΕΤΕΤετνδΟΙΟΕδΜΥδΜΟΐννΚφΑΡΟΚΟΕΕΥΙΟλνίδΥΟΟΤΑΥΥ Α5\νΑΚΟΚΕΊΊ8ΚΤ8ΤΤνΕΕΚΙΤ5ΡΤίΡ.ηΤΑΤΥΚ.ΆΚΕΤΡνΝΥΥΕϋΙ\ν('ίρθΤΕνΤ\·88 (3Ε<3 ГО N0: 83).
- 40 028913
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
рдУЕЕ8СЮЮ.УТРОТРЕТЕТСГУЗОШЬЗМУЗМС\УУкрЛРОКСЬЕУЮА18УОСгТАУУ
Α3\νΑΚαΚΡΤΙ3ΚΤ3ΤΤνΕΕΚΙΊ·3ΡΊΊΕυΐΛΊΎΪ·0ΛΚΕΤΡνΝΥΥΕϋΙ\νθ90ΤΕντν33Α3ΊΚ
ΟΡ5νΡΡΕΑΡ53Κ5Τ30ΟΤΑΑΕ0€ΕνΚΟΥΕΡΕΡντν5λΥΝ5ΟΑΕΤ5θνΗΤΡΡΑνΕί>5δ0ΕΥ5
Ε83νντνΡ335ΕΟΤΌΊΎΙΟΝνΝΗΚΡ3ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ300ΚΤΗΤΟΡΡΟΡΑΡΕΕΕΟΟΡ3νΡ
ΕΡΡΡΚΡΚϋΤΕΜΒΚΤΡΕνΤΟνννΏνδΗΕΟΡΕνΚΡΝνΥνοανΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕρΥΑδΤ
ΥΕννδνΕΤνΕΗΟΟλνΕΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟςΡΕΕΡφνΥΤΕΡΡδΕΕΕΜ
ΤΚΝφν8ΕΤσΕνΚΟΡΥΡ3ΟΙΑνΕλνΕ3Ν0(3ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ3Ο03ΡΡΕΥ3ΚΕΤνϋΚ3Κ\ν
ςφΟΝνΡδσδνΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤςΚδΕδΕδΡΟΚ (3Εζ) Ю ΝΟ: 84).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 85; 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 86; и §Еф ГО Ν0: 87, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи §Еф ГО Ν0: 81 или последовательности легкой цепи §Еф ГО Ν0: 82, и/или одной или более из полипептидных последовательностей §Еф ГО Ν0: 88; §Еф ГО Ν0: 89 и §Еф ГО Ν0: 90, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи §Еф ГО Ν0: 83 или последовательности тяжелой цепи §Еф ГО Ν0: 84, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СИК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности §Еф ГО Ν0: 81 или §Еф ГО Ν0: 82. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности §Еф ГО Ν0: 83 или §Еф ГО Ν0: 84.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей §Еф ГО Ν0: 85; §Еф ГО Ν0: 86 и §Еф ГО Ν0: 87, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи §Еф ГО Ν0: 81 или последовательности легкой цепи §Еф ГО Ν0: 82.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей §Еф ГО Ν0: 88; §Еф ГО Ν0: 89 и §Еф ГО Ν0: 90, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи §Еф ГО Ν0: 83 или последовательности тяжелой цепи §Еф ГО Ν0: 84.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8ЕЦ ГО Ν0: 81; вариабельная область тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО Ν0: 83; определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО Ν0: 85; §Еф ГО Ν0: 86; и §Еф ГО Ν0: 87) вариабельной области легкой цепи с 8ЕЦ ГО Ν0: 81 и определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО Ν0: 88; §Еф ГО Ν0: 89 и §Еф ГО Ν0: 90) вариабельной области тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО Ν0: 83.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЬ9, содержащим, или, иначе, состоящим из 8ЕЦ ГО Ν0: 82 и §Еф ГО Ν0: 84, и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из ΡаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН.
По отношению к антителу АЬ9, ΡаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой
- 41 028913
цепи с 8ЕЦ ΙΌ N0: 81 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 83 или другой РаЬ или фрагмент моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ9. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8ЕЦ ГО N0: 81 и/или 8ЕЦ ГО N0: 83 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ9. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ9 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раЫогЪ.
Антитело АЬ10.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают АЬ10 или его фрагменты, или другое антитело либо фрагмент антитела, связывающийся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ10, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΑΥΏΜΤΟδΡδδΕδΑδνΟϋΚνΤΠ'ΟΟΑδΕΝΙΟδΥΕΑΨΥΟΟΚΡΟΚνΡΚΕΕΙΥΒΑδΤΕΑδΟνΡδ ΚΕδΟδΟδΟΤυΐ'ΤΙ.τίδδΕφΡΕηνΑΤΥΥερρΟΥΝδΕΝΕϋΝΑΡΟϋΕΙΤΚνΕΙΚΒ (5ЕР го N0: 91).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
ΑΥΟΜΤρ8Ρδ8ΗΑδνϋΟΕνΤΙΤΕρΑ8ΕΝΙϋ8ΥΕΑΨΥ(Κ^ΡΟΚνΡΚΕΠΥΡΑ8ΤΕΑ8ανΡ8
ΚΕ8ϋ3Ο8ΟΤΟΡΤΙ^δ5ΕρΡΕηνΑΤΥΥ€ρρ<3ΥΝ8ΕΝΙ.ηΝΑΕ000ΤΚνΕΙΚΚΐνΑΑΡ8νΡΙ
ΡΡΡδϋΕΟΕΚδΟΤΑδννΟΕΕΝΝΡΥΡΒΕΑΚνΟίνκνϋΝΑΕΟδΟΝδΟΕδνΤΕΟΟδΚΟδΤΥδΕδ
δΤΕΤΕδΚΑϋΥΕΚΗΚνΥΑΟΕνΤΗρΟΕδδΡνΤΚδΡΝΚΟΕΌ (δΕΟ ГО N0: 92).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
0ν0ΕνΕδΟθανν0ΡΟΚ5ΕΚΕδ€ΑΑδΟΡΤΡδΜΥ3ΜΟΐννΚ0ΑΡΟΚΟΕΕΥΙΟλνΐ8ΥΟΟΤΑΥ ΥΑδδΑΚΟΕΡΤΙδΒΟΝδΚΝΤΕΥΕΟΜδδΕΚΑΕϋΤΑνΥΥΟΑΒΕΤΡνΝΥΥΕϋΙΨΟΟΟΤΕντν δδ (ЗЕО ГО N0:93).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
0ν0ΕνΕ5ΟΟθνν0ΡΟΚ8ΕΚΕ8σΑΑ5ΟΡΤΡ8ΜΥ5ΜΟ3ννΚ0ΑΡΟΚΟΕΕΥΙΟ\νΐ3ΥΟΟΤΑΥ
ΥΑ88ΑΚΟΚΕΤΙ8ΚΟΝ5ΚΝΤΕΥΕΟΜ55ΕΡΑΕΠΤΑνΥΥ€ΑΕΕΤΡνΝΥΥΕΠΙ\νθΟϋΤΕντν
53Α5ΤΚΟΡ8νΡΡΕΑΡδ8ΚδΤδΟΟΤΑΑΕΟΟΕνΚΟΥΡΡΕΡντν8\νΝδΟΑΕΤ5θνΗΤΡΡΑνΕΟ
88ΟΕΥ3Ε88νντνΐ,888ΕΟΊ’0ΊΥΙΕΝνΝΗΚΡ8ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ.8€ϋΚΊΉΤΕΡΡ€ΡΑΡΕΕΕ
ΟαΡδνΡΕΡΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙδΚΤΡΕνΤΟνννϋνδΗΕΟΡΕνΚΓΝΜΎνυανΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ
0ΥΑ8ΤΥΚνν3νΕΤνΕΗ0Ο3νΕΝαΚΕΥΚΕΚν8ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚΟ0ΡΡΕΡ0νΥΤΕΡΡ
3ΕΕΕΜΤΚΝ0νδΕΤΟΕνΚΟΡΥΡ8ΟΙΑνΕΨΕ8ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΕΡΡνΕΟδΟΟδΕΡΕΥ8ΚΕΤν
ϋΚ3Κ\ν00ϋΝνΡ8Ε8νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤ0Κ5Ε8Ε3ΡαΚ (3Ε0 ΙΟΝΟ: 94).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ΙΌ N0: 95; 8ЕЦ ΙΌ N0: 96 и 8ЕЦ ΙΌ N0: 97, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОВ, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 91 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 92 и/или одной или более из
- 42 028913
полипептидных последовательностей 8Е0 ΙΌ N0: 98; 8Е0 ΙΌ N0: 99 и 8Е0 ΙΌ N0: 100, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 93 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 94, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО N0: 91 или 8Е0 ГО N0: 92. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО N0: 93 или 8Е0 ГО N0: 94.
В дополнительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний необязательно включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 95; 8Е0 ГО N0: 96 и 8Е0 ГО N0: 97, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 91 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 92.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 98; 8Е0 ГО N0: 99 и 8Е0 ГО N0: 100, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 93 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 94.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 91; вариабельная область тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 93; определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 95; 8Е0 ГО N0: 96; и 8Е0 ГО N0: 97) вариабельной области легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 91; и определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 98; 8Е0 ГО N0: 99 и 8Е0 ГО N0: 100) вариабельной области тяжелой цепи с 8ЕО ГО N0: 93.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное или гуманизированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЫ0, содержащим, или, иначе, состоящим из 8Е0 ГО N0: 92 и 8Е0 ГО N0: 94 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ10, РаЬ-фрагмент для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 91 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 93 или другой РаЬ или фрагмент моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ10. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно необязательно подразумевает добавления, делеции и варианты 8Е0 ГО N0: 91 и/или 8Е0 ГО N0: 93 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ10. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ10 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ра8!от18.
Антитело АЬ11.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают АЬ11 или его фрагменты, или другое антитело либо фрагмент антитела, связывающиеся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ11, к
- 43 028913
примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном необязательном варианте воплощения антитело включает химерные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
ΑΡΕΕΤφΤΡδδνΕΑΑναατνΤΙΚερΑδρΝίνΤΝΕΑΑνΥφΟΚΡΟΟΡΡΚΣΠΥΟΑδΤΕΑδΟνδδ ΚΡΚΟδΟδΟΤρΡΤΕΤΙδϋΕΕΟΑΟΑΑΤΥΡΟφδΥΌΟΡΝδΑΟΓΟΟΟΤΕνννΚΚ (δΕΟ ГО ΝΟ:
101).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
ΑΡΕΕΤ0ΤΡ2δνΕΑΑνθαΤνΤΤΚ00Α30ΝΐνΤΝΕΑ%Ύ00ΚΡ<30ΡΡΚΕΕΙΥΟΑδΤΕΑ5θν55 ΚΡΚΟδΟδΟΤΟΡΤΕΤΙδϋΕΕΟΑϋΑΑΊΎΡΟΟδΥΌΟΡΝδΑΟΡΟΟΟΤΕνννΚΚΤνΑΑΡδνΡΙΡΡ ΡδΟΕΟΕΚδΟΤΑδννΟΕΕΝΝΓΥΡΚΕΑΚνονκνϋΝΛΕΟδΟΝδΟΕδνΤΕΟηδΚΟδΤΥδΕδδΤ ΕΤΕ8ΚΑΟΥΈΚΗΚνΥΑΟΈνΤΗΟΟΕ53ΡνΤΚ8ΡΝΗΟΕΟ (5ΕΟΙΟΝΟ: 102).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
ΟδΕΕΕδΟΟΚΕνΤΡΟΤΡΕΤΕΤΟΤΑδΟΡδΕδΟΥΟΜδΨνΚΟΑΡΟΚΟΕΕΥΙΰΕΙδΥϋΟΝΤΥΥΑ ΠνΑΚΟΚΡΤΙδΚΤδΤΤνΟΕΚΙΤδΡΤΤΕΟΤΑΤΥΡΟΑΚδΕΥΑΟΡΝΑΟΙΟΡΡΝΙΨΟΟΟΤΕντνδ δ (8Ер ΙΓ) ΝΟ: 103).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
ΟδΕΕΕδΟΟΚΕνΤΡΟΤΡΕΤΕΤΟΤΑδΟΡδΕδΟΥϋΜδλννκΟΑΡΟΚΟΕΕΥΙΟΕΙδΥΟΟΝΤΥΥΑ
ΤλνΑΚΟΚΡΤΙδΚΤδΤΤνΟΕΚΙΤδΡΓΓΕΟΤΑΤΥΡΟΑΚδΕΥΑΟΡΝΑΟΙΟΡΡΝΙλνΟΟΟΤΕντνδ
8Α5ΤΚΟΡ8νΡΡΕΑΡδδΚ8Τ3ΟΟΤΑΑΕΟ0ΕνΚΟΥΡΡΕΡντνδΐνΝδΟΑΕΤδθνΗΤΡΡΑνΕ08
δΟΕΥδΕδδννΤνΡδδδΕΟΤΟΤΥΚΝνΝΗΚΡδΝΤΚνϋΚΚνΕΡΚδΟΟΚΤΗΤΟΡΡαΡΑΡΕΕΕΟ
ΟΡδνΡΕΡΡΡΚΡΚΟΓΕΜΙδΚΤΡΕνΤΟνλΤνϋνδΗΕϋΡΕνΚΕΝλνΥνϋΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕΟ
ΥΑδΤΥΚννδνΕΤΧΈΗΟΟΨΕΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟΟΡΚΕΡΟνΥΤΕΡΡδ
ΕΕΕΜΤΚΝΟνδΕΤΟΕνΚΟΡΥΡδΟΙΑνΕνΕδΝΟΟΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟδΟΟδΡΡΕΥδΚΕΤνΏ
Κ3Ε.ΐν006ΝνΡδΟδνΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤ0ΚδΕδΕ8ΡΟΚ (8Εζ>ΙΟΝΟ: 104).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 105; 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 10б; и 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 107, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СЭК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 101 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 102, и/или одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО ΝΟ: 108; 8Е0 ГО ΝΟ: 109 и 8Е0 ГО ΝΟ: 110, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 10З или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 104, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты необязательно содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СГОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО ΝΟ: 101 или 8Е0 ГО ΝΟ: 102. В другом необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО ΝΟ: 10З или 8Е0 ГО ΝΟ: 104.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕО ГО ΝΟ: 105; 8ЕО ГО ΝΟ: 10б и 8ЕО ГО ΝΟ: 107, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 101 или последовательности легкой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 102.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обла- 44 028913
дающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей δΕφ ΙΌ ΝΟ: 108; δΕφ ΙΌ ΝΟ: 109 и δΕφ ΙΌ ΝΟ: 110, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕφ ΙΌ ΝΟ: 103 или последовательности тяжелой цепи δΕφ ΙΌ ΝΟ: 104.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с δΕφ ΙΌ ΝΟ: 101; вариабельная область тяжелой цепи с δΕφ ΙΌ ΝΟ: 103; определяющие комплементарность области (δΕφ ΙΌ ΝΟ: 105; δΞφ ГО ΝΟ: 106; и δΞφ ГО ΝΟ: 107) вариабельной области легкой цепи с δΞφ ГО ΝΟ: 101; и определяющие комплементарность области (δΕφ ГО ΝΟ: 108; δΕφ ГО ΝΟ: 109 и δΕφ ГО ΝΟ: 110) вариабельной области тяжелой цепи с δΕφ ГО ΝΟ: 103.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЬ11, содержащим,или, иначе, состоящим из δΕφ ГО ΝΟ: 102 и δΕφ ГО ΝΟ: 104, и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ11, РаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с δΕφ ГО ΝΟ: 101 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с δΕφ ГО ΝΟ: 103 или содержит другой РаЬ или фрагмент моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ11. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты δΕφ ГО ΝΟ: 101 и/или δΕφ ГО ΝΟ: 103 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬфрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ11. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ11 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, ΝδΟ или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ракЮпк.
Антитело АЬ12.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают АЬ12 или его фрагменты, или другое антитело либо фрагмент антител, связывающиеся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ12, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
АРЦМТОйРЗЗЬЗАКУООКУЗТГСОАЗОМУТНЬАиУЦЦЫ’ОКУРКШУОАЗТЪАЗОТР δΚΡδΟδΟδΟΤΌΡΤΕΤΙδΒΕρΡΕΟνΑΤΥΥΟρδΥϋΟΡΝδΑΟΡΟΟΟΤΚνΕΙΚΚ. (ЗЕ<2 ГО ΝΟ:
111).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
АРГ^МТС^ЗРЗЗТ.ЗАЗУООКУТТТСрАЗРЖУТОЬАиУреКРСКУРКЕЫУОАЗТТ.АЗСУР 8ΚΡ803080ΤΟΡΤΕΤΙ83ΕΟΡΕθνΑΤΥΥ008ΥϋΟΡΝ3ΑΟΡΟΟΟΤΚνΕ1ΚΚ.ΤνΑΑΡ3νΡΙΡΡ Ρ3ΟΕ0ΕΚ5αΤΑ8νν0ΕΕΝΝΨΥΡΚΡ.ΑΚν0%ΧνηΝΑΕ08ΟΝ3Γ)Ε5νΤΕ0ΟδΚΠ5ΤΥ5Ε55Τ ЕТЕЗКАОУЕКНКУУАСЕУТНрОЕЗЗРУТКЗРМКОЕС ( 8ЕС) ГО ΝΟ: 112).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
- 45 028913
ΟνΟΕνΕδΟΟΟννΟΡΟΚδΕΚΕδΟΑΑΒΟΓδΕδΟΥΟΜδΥΥνΚΟΑΡΟΚΟΕΕΥννΟΕΙδΥΟαΝΤ ΥΥΑΤδΑΚΟΚΡΤΙδΕΠΝδΚΝΤΕΥΕΟΜδδΕΚΑΕΟΤΑνΥΥσΑΚδΕΥΑΟΡΝΑΟΙΟΡΡΝίνΟΟα ΤΕντνδδ (δΕΟΙϋΝΟ: 113).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже
О УрЕУЬЗСОО νν(')ΡΟΙΐ31_Ι<Εδί’ΑΑ8("τΡ3Ι,8ΟΥΕΜδ\ννΐ<0ΛΡ<3Κί'ϊΕΕ’'Λ'’ν(3ΕΙ8ΥΙΧϊΝΤ
ΥΥΑΤδΑΚΟΕΡΤΙδΚϋΝδΚΝΤΕΥΕρΜδδΕΚΑΕϋΤΑνΥΥαΑΚδΕΥΑΟΡΝΑΟΙΟΡΡΝΙΨΟρΟ
ΤΕντνδδΑδΤΚΟΡδνρΡΕΑΡδδΚδΤδΟΟΤΑΑΕΟΟΕνκΟΥΡΡΕΡντνδΧνΝδΟΑΕΤδΟνΗΤΡ
ΡΛνΐ<,)δ8(ϊΕΥδΙ-δδννΤνΡ8δδΕ0ΤΕ>ΤΥ1ΕΝ\Τ<11ΚΡδΝΤΚν0ΚΡνΕΡΚδΕ0Κ'ΓΗΊΕ'ΡΡΕΡ
ΑΡΕΕΕΟΟΡδνΡΕΡΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙδΚΤΡΕνΤϋνννονδΗΕηΡΕνΚΓΝνΥνϋΟνΕνΗΝΑΚΤ
ΚΡΚΕΕΟΥΛ5ΤΥΡνν5νΐ.Τ\ΈΗθην,ΤΝΩΚΕΥΚεΚν5ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ5ΚΑΚΟζιΡΚΕΡΟ
νΥΤΕΡΡ3ΚΕΕΜΤΚΝρνδΕΤ0ΕνΚΟΡΥΡδΟΙΑνΕ\νΕ3ΝΟ<3ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ3ΟΟ8ΡΡΕ
ΥδΚΕΤνΟΚδΚννΟΟΟΝνΡδΕδνΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤςΚδΕδΕδΡΟΚ (δΕρ/ΟΝΟ: 114).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 115; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 116; и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 117, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 111 или последовательности легкой цепи δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 112, и/или одной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ГО ΝΟ: 118; δΕΟ ГО ΝΟ: 119; и δΕΟ ГО ΝΟ: 120, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 113 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 114, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности δΕΟ ГО ΝΟ: 111 или δΕΟ ГО ΝΟ: 112. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности δΕΟ ГО ΝΟ: 113 или δΕΟ ГО ΝΟ: 114.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ГО ΝΟ: 115; δΕΟ ГО ΝΟ: 116 и δΕΟ ГО ΝΟ: 117, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 111 или последовательности легкой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 112.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ГО ΝΟ: 118; δΕΟ ГО ΝΟ: 119 и δΕΟ ГО ΝΟ: 120, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 113 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 114.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь. В одном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с δΕΟ ГО ΝΟ: 111; вариабельная область тяжелой цепи с δΕΟ ГО ΝΟ: 113; определяющие комплементарность области (δΕΟ ГО ΝΟ: 115; δΕΟ ГО ΝΟ: 116 и δΕΟ ГО ΝΟ: 117) вариабельной области легкой цепи с δΕΟ ГО ΝΟ: 111; и определяющие комплементарность области (δΕΟ ГО ΝΟ: 118; δΕΟ ГО ΝΟ: 119 и δΕΟ ГО ΝΟ: 120) вариабельной области тяжелой цепи с δΕΟ ГО ΝΟ: 113.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное или гуманизированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЬ12, содержащим, или, иначе, состоящим из δΕΟ ГО ΝΟ: 112 и δΕΟ ГО ΝΟ: 114, и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний вклю- 46 028913
чают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ12 РаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8Еф ГО N0: 111 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8Еф ГО N0: 113 или содержит другой РаЬ или фрагмент моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ12.
Данный необязательный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8Еф ГО N0: 111 и/или 8Еф ГО N0: 113 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬфрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ12. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ12 или его РаЬ-фрагменты, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ра81ог18.
Антитело АЬ13.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают АЬ13 или его фрагменты, или другое антитело либо фрагмент антитела, связывающиеся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ13, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΑΑV^Τ^ΤΡδΡVδΑΑVΟΟΤVδI5С^δδ^NVΥΚNNΥ^δ^VΥ^^ΚΡС^ΡΡΚ^^IΥΚΑЗΤ^ΑδΟ νΡδΚΡΚΟΟΟδΟΤΟΡΤΕΤΙδΟνΰΟΟΑΑΑΤΥΥεΑΟΟΥΤδδδΟΝΑΡΟΟΟΤΕνννΚΚ (ЗЕС>
ΙΏΝΟ: 121).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ААУЬТЦТР8РУ8ААУООТУ513СЦ38ЦХУУКММУЬЗ^ЦРКРСЦРРК1,ЫУКА8ТЬА8С
УР8КРКООО5ОТОРТЕТ15ОУ0СОАААТУУСАООУТ385ОМАРОООТЕУУУККТУААР
5УР1РРР5Г>РЮЕК5СТА5УУСЬРМХРУРКЕАКУр%ТСУПЧА1Ц5ОИ5рЕ5УТЕС.Ю5КО5Т
У81,88ТЕТЕ8КАГ)УР,КНКУУАСЕУТН(Х"г1_38РУТКЗР>;К.СЕС (ЗЕЦГОИО: 122).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
φδνΕΑδΟΟΚΕνΤΡΟΤΡΕΤΕΤεΤΑδΟΡδΕδΤΥ\νΜδΧννΚ9ΑΡΟΚΟΕΕ\νΐΟΜΥΡδΝΕΕΤΝΥ ΑδΧνΑΚΟΕΡΤΙδΚΤδΤΤνϋΕΝνίδΡΤΤΕΟΤΑΤΥΡΟΑΚΟδΡΟνΠΙΟΙϋΜΧνΟΡΟΤΕντνδδ (3Εζ> Ιϋ N0: 123).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ρ8νΕΑ8ΟΟΙ^νΤΡΟΤΡΕΤΕΤσΓΑδαΡ5Ε8ΤΥ\νΜΒ4ννΚ<3ΑΡΟΚΟΕΕνΗΟΟΙΥΓ5ΝΕΕΤΝΥ
А8\УАКОКЕТ18КТЗТТУОЕИУ18РТТЕОТАТ¥РСАКО8РОУИ1ОЮМтеРОТЕУТУ38А8
ТКОР5УГРЕАР83КЗТ8ССТААЕОСГ.УКЮТРЕРУТУ5та8САЕТ8СУ11ТГРАУ1Ь55ОЕ
Υ5[.88ννΤνΡ555ΕΟΤρΤΥΙΟΝνΝΙΙΚΡ5ΝΤΚνθΚΕνΕΡΚ$€ΟΚΤΗΤ€ΡΡί’.ΡΑΡΠΙ.Ι.ϋϋΡ8
νΡΈΡΡΡΚΡΚϋΤ[.ΜΙ3ΚΤΡΕνΤΕνννύν8ΗΕ.ηΡΕνΚΡΝ№ΎνΓ)θνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕρΥΑ
3ΊΎΙ<νν3νΕΤνΕΗΟΕν»Ί.ΝΟΚΕΥΚΕΚν8ΝΚΑίΡΑΡΙΕΚΤΙ5ΚΑΚϋρΡΚΕΡΡνΥΤΙ.ΡΡ5ΚΕ
ΕΜΤΚΝ0ν5ΕΤ0ΕνΚΟΓΥΡ3ΟΙΑνΕ\νΕ5ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ8ΟΟ8ΓΡΕΥδΚΕΊΎΏΚ8
Ρ\νρρθΝνΕ3ΕδνΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤΕ,)ΚδΕδΕ3Ρ(8Κ (8Ε<2 ΙΈ> N0: 124).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ΙΌ N0: 125; 8Еф ΙΌ N0: 126; и 8Еф ΙΌ N0: 127, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СГОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Еф ГО N0: 121 или последовательности легкой цепи 8Еф ГО N0: 122, и/или одной или бо- 47 028913
лее из полипептидных последовательностей ЗЕО ГО N0: 128; ЗЕО ГО N0: 129 и ЗЕО ГО N0: 130, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 123 или последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 124, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности ЗЕО ГО N0: 121 или ЗЕО ГО N0: 122. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности ЗЕО ГО N0: 123 или ЗЕО ГО N0: 124.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей ЗЕО ГО N0: 125; ЗЕО ГО N0: 126; и ЗЕО ГО N0: 127, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 121 или последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 122.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей ЗЕО ГО N0: 128; ЗЕО ГО N0: 129; и ЗЕО ГО N0: 130, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 123 или последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 124.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с ЗЕО ГО N0: 121; вариабельная область тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 123; определяющие комплементарность области (ЗЕО ГО N0: 125; ЗЕО ГО N0: 126 и ЗЕО ГО N0: 127) вариабельной области легкой цепи с ЗЕО ГО N0: 121; и определяющие комплементарность области (ЗЕО ГО N0: 128; ЗЕО ГО N0: 129 и ЗЕО ГО N0: 130) вариабельной области тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 123.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЪ13, содержащим или, иначе, состоящим из ЗЕО ГО N0: 122 и ЗЕО ГО N0: 124 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЪ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЪ13, РаЪ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с ЗЕО ГО N0: 121 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 123 или содержит другой РаЪ или фрагмент моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЪ13. Данный необязательный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты ЗЕО ГО N0: 121 и/или ЗЕО ГО N0: 123 в указанном РаЪ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЪфрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЪ13. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЪ13 или его РаЪ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N50 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ракЮпк.
Антитело АЪ14.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают химерные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, отличающиеся тем, что антитело является АЪ14 или его фрагментами, или другим антителом либо фрагментом, связывающимся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что
- 48 028913
и АЬ14, к примеру, как определено ниже, такими, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном необязательном варианте воплощения изобретение включает химерные или гуманизированные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΟΙ0ΜΤρ5Ρ5515Α5ναθΚλΠΊΤσ9589ΝνΥΚΝΝΥΤ3ΑνγρφΚΡΟΚνΡΚΐυΥΚΑ3ΤΕΑ5Ο νΡδΚΡδΟδΟδΟΤΟΡΤΕΤΙδδΕΟΡΕϋνΑΤΥΥΟΑΟΟΥΤδδδΟΝΑΡΟΟατκνΕΙΚΚ (ЗЕ() ГО N0: 131).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
Ο^ΜΤρ8Ρ55Ε5Α5ν6ΟΡνΤΙΤ€ρδ50ΝνΥΚΝΝΥΕ5ΨΥρρΚΡΟΚνΡΚΕΕΙΥΚΛ8ΤΕΑ8α УР8РГ5О565ОТПРТЕТ188[.(ЗРЕОУАТУУСАОСУТ885ОНАТОааТКУЕ1К.КТУААР8У ΡΙΡΡΡ8ΟΕ9ΕΚ8(3ΤΑ5νν€1.Τ.ΝΝΨΥΡΡΡ.ΑΚν0λνΚνΓ)ΝΑΕ08ΟΝ80Ε8νΤΕρθ8Κη8ΤΥΚ Е83ТЕТЕ8КАЕ^ЕКНКУУАСЕУТН<20Е83РУТК8Р1ЧКО!ЕС (ЗЕЦГОЫО: 132).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ЕУЦЬУЕ8О(МЕУрРОаЗЕ1ГО8САА8ОРТУ8ТУ\УМ8\УУ1«2АРСгКОЕЕ\УУО1Э1УРЗКЕЕТ ΝΥΑ88ΑΚ6ΚΡΤΙ8ΚϋΝ8ΚΝΤΕΥΕ9ΜΝ8ΕΚΑΕΟΤΑνΥΥ€ΑΚ08Ρθνΐ3Ι0Ι0Μΐν0Ρ0ΤΕν ТУ88 (3Εζ) ГО ΝΟ: 133).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
Εν9ΕνΕ3ΟΟΟΕν9Ραα3Π^30ΑΑ8ΟΡΤν3ΤΥ\νΜ3%№Κ(3ΑΡΟΚαΕΕ\νν0ϋΙΥΡ8ΝΕΕΤ
NΥΑ88ΑΚΟΚΡΤIЗΕ^N8ΚNΤ^Υ^^ΜNЗ^IίΑΕ^ΤΑVΥΥСΑΚΟ8Ρ^V^I0ГОΜV/αΡ0Τ^V
Τν58Α8ΤΚΟΡδνΡΡΕΑΡδ8ΚδΤδΟΟΤΑΑΕΟΕΕνΚΟΥΡΡΕΡνΤνδ)νΝ8ΟΑΕΤ8θνΗΤΡΡΑν
Ε9880ΕΥ3Ε83νν'ΓνΡ835ΕΟ'Γ9ΤΥΚ'ΝνΝΗΚΡ5ΝΤΚνθΚΚ.νΕΡΚ5ΕΟΚΤΗΤ€ΡΡΕΡΛΡΕ
Τ,ΕαθΡ3νΡΕΡΡΡΚΡΚηΤΕΜΙ8ΡΤΡΕνΤΕΥΓννυν8ΗΕϋΡΕνΚΡΝ\νΥνησνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚ
ΕΕ^ΥΑ5ΤΥΚVV8V^ΤV^Η^^\V^NΟΚΕΥΚСΚV8NΚΑ^ΡΑΡIΕΚΤIδΚΑΚΟ^ΡΕΕΡ^VΥΤ
ΕΡΡδΡΕΕΜΤΚΝρνδΕΤΕΕνΚΟΡΥΡδΜΑνΕν/ΕδΝΟρΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡλΤΟδΟΟδΡΡΕΥδΚΕ
ТУЕ>КЗК\У90ОМУРЗСЗУМНЕАЕНКНУТ(2КЗЕЗЕ8РОК (δΕςίϋΝΟ: 134).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ΙΌ N0: 135; 8Е0 ΙΌ N0: 136 и 8Е0 ΙΌ N0: 137, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 131 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 132, и/или одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 138; 8Е0 ГО N0: 139 и 8Е0 ГО N0: 140, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 133 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 134, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СИР, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО N0: 131 или 8Е0 ГО N0: 132. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО N0: 133 или 8Е0 ГО N0: 134.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний необязательно включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 135; 8Е0 ГО N0: 136 и 8Е0 ГО N0: 137, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИР, или гипервариабельным областям) вариабельной после- 49 028913
довательности легкой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 131 или последовательности легкой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 132.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ГО N0: 138; δΕΟ ГО N0: 139; и δΕΟ ГО N0: 140, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО N0: 133 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО N0: 134.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с δΕΟ ГО N0: 131; вариабельная область тяжелой цепи с δΕΟ ГО N0: 133; определяющие комплементарность области (δΕΟ ГО N0: 135; δΕΟ ГО N0: 136 и δΕΟ ГО N0: 137) вариабельной области легкой цепи с δΕΟ ГО N0: 131; и определяющие комплементарность области (δΕΟ ГО N0: 138; δΕΟ ГО N0: 139 и δΕΟ ГО N0: 140) вариабельной области тяжелой цепи с δΕΟ ГО N0: 133.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное или гуманизированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЪ14, содержащим, или, иначе, состоящим из δΕΟ ГО N0: 132 и δΕΟ ГО N0: 134 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из ЕаЪ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЪ14, ЕаЪ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с δΕΟ ГО N0: 131 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с δΕΟ ГО N0: 133 или другой ЕаЪ или фрагмент моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЪ14. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты δΕΟ ГО N0: 131 и/или δΕΟ ГО N0: 133 в указанном ЕаЪ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), ЕаЪфрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЪ14. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЪ14 или его ЕаЪ-фрагменты, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, Ж0 или ΗΕΚ 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные Р1сЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Р1сЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, Р1сЫа раз1ог15.
Антитело АЪ15.
В изобретении предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают химерные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, причем антитело является АЪ15 или его фрагментами, к примеру, как указано ниже, либо включает другое антитело либо фрагмент антитела, связывающиеся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЪ15, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА без выраженного ингибирования связывания ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
АЛУЕТрТРЗРУЗАА ν0ΟΤνΤ[ΚΕρ58Ρ$νΥΚΝΝΥΕ3\νΥρρΚΡ("ίρΡΡΚΕΕΙ ΥΕ>Α3ΝΕΡδ('ί νΡ5ΚΡ303050τρρτΕτΐδ0νςεϋϋΑΑΤΥΥεΕ00Υϋ00Τ0Ν0Ρ000ΤΕνννκκ (δες)
ГОРЮ: 141).
Изобретение также включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΛΛνΕτρΤΡ8ΡνΚΛΑν(.ιΠΤνΤΙΚ0ρ55ρ5νΥΚ.ΡίΝΥΕ5\νΥρρΚΡ0ρΡΡΚΕΕΙΥΓ)Α8ΝΕΡ5Ο νΡδΚΡδΟδΟδΟΤρΡΤΕΤΙδΟνρΟΟΟΑΑΤΥΥΟΕΟΟΥΟΟΟΤΟΝΟΡΟΟΟΤΕνννΚΚΤνΑΑΡ δνΡΙΡΡΡδΟΕρΕΚδΟΓΑδννΟΕΕΚΝΡΥΡΚΕΑΚνρίνΚνϋΝΑΕρδΟΝδρΕδνΤΕρΟδΚΟδΤ Υ5Ε53ΤΕΤΕ5ΚΑΌΥΕΚΙ1ΚνΎΑ€ΕνΤΉρ0Ε5δΡντΚδΡΝΚ.0Ε€ (ЗАГОРЮ: 142).
Изобретение дополнительно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают
- 50 028913
вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже. ^δVΕΕδССΚ^VΤΡΟΤΡ^Τ^ΤСΤVδ<^I^^δδΥΑΜI\УVΚ^ΑΡΟΚΟ^ΕΥIΟΠ\УδΟΟΤΥΥΑΤ\У ΑΚΟΕΡΤI8ΚΤδΤΤV^^^IΤ8ΡΤΓΕ^ΑΑΤΥΡСΑΑΟСС8IΥ^V^VΟΡСΤ^V^ΓVδ8 (8Ер ΙΟ N0: 143).
Изобретение также включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
р8УЕЕ8СОКЕУГР0ТРЕТЕТСТУ80ШЕ88УАМНУУКЦАР0КОЕЕУ10ЩУ80СТУУА™
АКОКРТ18КТ8ТТУЛЕ01Т8РТТЕОААТУРСААеОО81УОУ№ОРОТЕУТУ83А8ТКОР8У
РРЬАР55К5ТХСаТААТ.ОСТ,УКНУРРЕРУТУ$%Ъ‘:;аАЬТ5ОУНТРРАУ£.0ХЗОЬУ8ЬЗЗУ
УТУР588ЬОТрТУ1СНУННКР8НТКУШЩУЕРК8СИСТНТСРРСРАРЕЬЕООР8УРЬРРР
ΚΡΚΩΤΙ.ΜΙ8ΡΤΡΕν'[ΌνννΌν5ΙΙΕΗΡΕνΚΡΝλνΥνϋθνΕνΐΙΝΑΚΤΚΡΚΕΕρΥΛ3Τ¥Ρν
ν5νΕΤνΕΗΟΟ№ΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ8ΚΑΚα<2ΡΚΕΡ<2νΥΤΕΡΡ3ΚΕΕΜΤΚΝ
ρν5Ι.Τ6Ι.νκαΓΥΡ8Γ}1ΑνΕνιΈ5Να(3ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνίΰ5θα8ΡΠ,ΥΚΚΕΤνηΚ8Κ\ν<3ςΐΟ
ΝνΡ5€5νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤ<3Κ5Ε5Ε5ΡΟΚ (ЗЕрГОИО: 144).
По изобретению также предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 145; 8Е0 ГО N0: 146 и 8Е0 ГО N0: 147, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 141 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 142, и/или одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 148; 8Е0 ГО N0: 149 и 8Е0 ГО N0: 150, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 143 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 144, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО N0: 141 или 8Е0 ГО N0: 142. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8Е0 ГО N0: 143 или 8Е0 ГО N0: 144.
В дополнительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 145; 8Е0 ГО N0: 146 и 8Е0 ГО N0: 147, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 141 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 142.
В дополнительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8Е0 ГО N0: 148; 8Е0 ГО N0: 149; и 8Е0 ГО N0: 150, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 143 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 144.
По изобретению также предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 141; вариабельная область тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 143; определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 145; 8Е0 ГО N0: 146; и 8Е0 ГО N0: 147) вариабельной области легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 141; и определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 148; 8Е0 ГО N0: 149; и 8Е0 ГО N0: 150) вариабельной области тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 143.
В особенно предпочтительном варианте воплощения изобретения, химерное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЬ15, содержащим или, иначе, состоящим из 8Е0 ГО N0: 142 и 8Е0 ГО N0: 144 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе,
- 51 028913
состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ15, РаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 141 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 143 или содержит другой РаЬ, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ15. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8ЕЦ ГО N0: 141 и/или 8ЕЦ ГО N0: 143 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ15. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, такие как АЬ15 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раЛогЫ
Антитело АЬ16.
В изобретении предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают химерные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, причем антитело является АЬ16 или его фрагментами, к примеру, как указано ниже, либо включает другое антитело либо фрагмент антитела, связывающиеся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ16, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА без выраженного ингибирования связывания ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
АЕ\'М'1'ОТР55'ГЙЕРУОСТУТ1НСЦА8Ц\'ЮКОЬ8'Л'¥ОЦКРедРРЕЬЫ¥£ТЗКЬАТО\'РК. Ι4503Ρ<8ϋΤ0ΡΤΓΤΙ3ΟίΕεθΟΑΑΤΥΥ0ΕανΥ3ΥΙ5ΟΒαΝΑΓ<3Ο6ΤΕνννΚΚ. (ЗЕО ГО N0: 151).
Изобретение также включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΑΕνΜΤ0ΤΡ88Τ8ΕΡνθαΤνΤΙΝ€0Α80ΝΙΟΝΠΕ5\νΥ00ΚΡθρΡΡΕΕΠΥ.8Τ$ΚΕΑτσνΡΚ ΚΕ8Ο8Κ50Τ0ΡΤΕΤΙ8ΟΕΕ0ΟΟΑΑΤΥΥ0Ε0νΥδΥΙδΟΠσΝΑΡθαθΤΕνννΚΚΤνΑΑΡ8ν Ε1ΕΡΡ8Ι)Ε0Ι.Κ8ΟΐΑ8νναΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚν0\νΚνηΝΑ1/)8(ΪΝ8()Ε8νΊ'Ε0υ8Κη5ΊΎ8 ЕЗЗТЫЕЗКАГОУЕКИКУУАСЕУТНООЕЗЗРУТКЗЕМЕОЕС (8Εζ)ΙΟΝΟ: 152).
Изобретение дополнительно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
08νΕΕΡΟΟΚΕνΤΡαΤΡΕΤΕΤετν8ΟΡ8ΕΝΝΥΑΜΤ№νκρΑΡΟΚ0ΕΕΐνΐΟΠΟ8ΙΟΤΤΥΥΑ8 \νΑΚ0ΡΡΡΙ8ΚΤ8ΤΤν0ΕΚ1Ι8ΡΤΓΕ0ΤΑΤΥΓΕΑΚΠΑ0νΊ'νϋ0ΥΩΥ ΥΡΝΙ\ν0ΡΩΤΕνΤν£8 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 153).
Изобретение также включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
08νΕΕΡΟΟΚΕνΤΡΟΤΡΕΤΕΤστν8ΟΡ8ΕΝΝΥΑΜ'ΠννΚ0ΑΡΟΚΟΕΕλνΐ0ΙΙ08ΙΟΤΊΎΥΑδ )УАКО!<РР18КТ8ТТУОЕК118РТТЕОТАТУРСА1ШАОУТУООУО¥УР№\УОРаТЕУТУ88 Α8ΤΚ6Ρ8νΡΡΕΑΡ55Κ8Τ5ΟΟΤΑΑΕ06ΕνΚβΥΡΡΕΡντν8Υ'Ν8ΟΑΕΤ8ΰνΗΊ'ΕΡΛνΕ(;)88 ΟΕΥδΕδδνντνΡδδδΕΟΤΟΤΥΙΟΝνΝΗΚΡδΝΤΚνΟΚΚνΕΡΚδΟΟΚΤΗΤΟΡΡΟΡΑΡΕΕΕΟΟ Ρ8νΡΕΡΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙ8ΚΤΡΕνΤθνννϋν8ΗΕϋΡΕνΚΡΝ5νΥνθθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕφΥ Α8ΤΥΚ.\Γ/8νΕΤνΕΗ0Ο\νΤ.ΝΟΚΕΥΚεκν8ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ8ΚΑΚσ0ΡΚΕΡρνΥΤΕΡΡ8Ρ ΕΕΜΤΚΝ0ν8ΕΤ€ΕνκαΡΥΡ£ΟΙΑνΕ1Α-Έ8ΝΟ()ΡΕΝΝΥΚΤΓΡΡνΕΟ8ϋΟ5ΡΡΕΥ8Κ£ΤνθΚ 8Ι<\νφ0ΟΝνΓ3Ο3νΜΗΕΛΕΗΝΠΥΤφΚ8Ε3Ε3ΡΟΚ (ΈΕΕΙΙΟΝΟ: 154).
По изобретению также предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 155; 8ЕЦ ГО N0: 156 и 8ЕЦ ГО N0: 157, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 151 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 152, и/или одной или более из полипептид- 52 028913
ных последовательностей ЗЕО ГО N0: 158; ЗЕО ГО N0: 159 и ЗЕО ГО N0: 160, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 153 или последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 154, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности ЗЕО ГО N0: 151 или ЗЕО ГО N0: 152. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из полипептидной последовательности ЗЕО ГО N0: 153 или ЗЕО ГО N0: 154.
В дополнительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей ЗЕО ГО N0: 155; ЗЕО ГО N0: 156; и ЗЕО ГО N0: 157, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 151 или последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 152.
В дополнительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей ЗЕО ГО N0: 158; ЗЕО ГО N0: 159 и ЗЕО ГО N0: 160, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 153 или последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 154.
По изобретению также предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с ЗЕО ГО N0: 151; вариабельная область тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 153; определяющие комплементарность области (ЗЕО ГО N0: 155; ЗЕО ГО N0: 156; и ЗЕО ГО N0: 157) вариабельной области легкой цепи с ЗЕО ГО N0: 151; и определяющие комплементарность области (ЗЕО ГО N0: 158; ЗЕО ГО N0: 159 и ЗЕО ГО N0: 160) вариабельной области тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 153.
В особенно предпочтительном варианте воплощения изобретения, химерное или гуманизированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЪ16, содержащим, или, иначе, состоящим из ЗЕО ГО N0: 152 и ЗЕО ГО N0: 154 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЪ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЪ16, РаЪ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с ЗЕО ГО N0: 151 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 153, или содержит другой РаЪ или фрагмент другого бивалентного либо моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЪ16. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты ЗЕО ГО N0: 151 и/или ЗЕО ГО N0: 153 в указанном РаЪ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЪ-фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЪ16. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, такие как АЪ16 или его РаЪ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N50 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ракЮпк.
Антитело АЪ17.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают химерные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, причем антитело является АЪ17 или его фрагментами, к примеру, как ука- 53 028913
зано ниже, либо включает другое антитело либо фрагмент антитела, связывающиеся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ17, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΑΙΕΜΤρΤΡΡ8ν3ΑΑνθΟΤνΤ[Κ€ρΑ5φΉ8ΝΥΕΑ\νΥΟφΚΡΟζ>ΡΡΚΙ±ΙΥΟΑ5ΝΕΕδθνΡ5 ΚΕΚΟδΟδϋΤφΡΤΕΤΙδΟΕΕΕΟΟΑΑΤΥΥΌΌΌΟΥΤΙδΝνηΝΝνΡΟϋϋΤΡ,νννκΚ (ЯРО ΙΟ ΝΟ: 161).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΑΙΕΜΤ0ΤΡΡ8ν8ΑΑνθΟΤνΤΙΚεΰΑ30ΤΙ8ΝΥΕΑ\νΥ00ΚΡΟ0ΡΡΚΕΕΙΥΟΑ3ΝΕΕ8θνΡ5 ΚΓΚΟδΟδΟΤΟΡΤΕΤΙδΟΕΕΟΟΟΑΑΤΥΥΟςΟΟΥΤΙδΝνϋΝΝνΡΟΟΟΤΕνννΚΚΤνΑΑΡδν ΡΙΡΡΡ8ΟΕ0ΕΚ8ΟΤΑ8νναΕΡΝΝΡΥΡΕΕΑΚν0\νκνηΝΑΕ08ΟΝ30Ε8νΤΕ0Ό3ΚΟ8ΤΥ8 Г.ЗЗТГЛЕЗКАОУЕКНКУУАСРУТНООЕЗКРУТКЗЕЛЖОЕС (8Εζ) Ю ΝΟ: 162),
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
03ΕΕΕδΟΟΚΕνΤΤΟΟ8ΕΤΕΤΕΑΑ5ΟΡ5ΕΤαΥΝΕνλννΚ0ΑΡΟΚΟΕΕ·\νΐ6ΡΙ8ΥΟΟΤΤΥΥΑ δΨΑΚΟΚΡΤΙδΚΤδΤΤνΤΕΤΙΤϋΕΟΡδΟΤΟΤΥΡΟΑΚΕΤΑΝΤΥΏΥΟΙΧνΟΡΟΤΕντνδδ (ЗЕО ΙΟΝΟ: 163).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
08ί.ΕΕ8αθΚΙ.νΊ'Ραα8ΡτΡΤ(:ΑΑ8Ο1'8ΡΤΟΥΝ1.ν\ννΚ0ΑΡΟΚΟΕΕ\ν[ΟΡΙ3Υα[)ΤΤΥΥΑ 8\νΑΚαΚΡΤ[8ΚΤ8πνΤΕΤΐπΧ^Ρ8ηΤαΤΥΡΕΑΚΈΤΑΝΤΥΟΥΟΐν·'ϋΡϋΤ!,νΤν88Α5ΤΚ ОРЗУРРЬАРКЗКЗТЗСОТААЬОСЬУКОУРРЕРУТУЗТОЧЗОАЬТЗОУНТРРАУЬОЗЗОЬУЗ Е58УУТУР888ЕОТОТ¥1СКУХНКР8ЧТКУПККУЕРК8СОКТНТСРРСРАРЕЬЬООР8УР [.РРРКРКВТЕМ18КТРЕУТСУУУОУ8НЕПРЕ\Т<РХ\УУУПО\'ЕУННАКТКРКЕЕОУАЗТ ΥΚνν8νΐ.ΤνΕΙΙΟΟΥ·ΈΝΟΚΕΥΚΕ'Κν8ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ8ΚΑΚΟΟΡΚΕΡρνΥΤ[.ΡΡ3ΚΕΕΜ ткмоузетсе νκορ урзша νΕ\νΕ3Ν0<)ΡΕΝΝ уктгрруеизоозеееузкетупкзк^/ 00аЯУР8С8УКШЕАЬНЬ1НУТ<ЭК8Е31_ЗРОК. (8ЕЦЮЫО: 164).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 165; 8ЕЦ ГО N0: 166 и 8ЕЦ ГО N0: 167, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 161 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 162, и/или одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 168; 8ЕЦ ГО N0: 169 и 8ЕЦ ГО N0: 170, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 163 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 164, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8ЕЦ ГО N0: 161 или 8ЕЦ ГО N0: 162. В другом необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8ЕЦ ГО N0: 163 или 8ЕЦ ГО N0: 164.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 165; 8ЕЦ ГО N0: 166 и 8ЕЦ ГО N0: 167, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 161 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 162.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обла- 54 028913
дающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей §Еф ΙΌ Ν0: 168; §Еф ΙΌ Ν0: 169 и §Еф ГО Ν0: 170, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи §Еф ΙΌ Ν0: 163 или последовательности тяжелой цепи §Еф ΙΌ Ν0: 164.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 161; вариабельная область тяжелой цепи с 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 163; определяющие комплементарность области (8ЕЦ ΙΌ Ν0: 165; §Еф ΙΌ Ν0: 166 и §Еф ΙΌ Ν0: 167) вариабельной области легкой цепи с 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 161 и определяющие комплементарность области (8ЕЦ ΙΌ Ν0: 168; §Еф ΙΌ Ν0: 169 и §Еф ΙΌ Ν0: 170) вариабельной области тяжелой цепи с 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 163.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения химерное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЬ17, содержащим или, иначе, состоящим из 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 162 и §Еф ΙΌ Ν0: 164 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из ΡаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ17, ΡаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 161 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с §Еф ΙΌ Ν0: 163, или содержит другой ΡаЬ или фрагмент моновалентного или бивалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ15. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты §Еф ΙΌ Ν0: 161 и/или §Еф ΙΌ Ν0: 163 в указанном ΡаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), ΡаЬ-фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ17. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ17 или его ΡаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, Ν80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные ΡΚ1ιί3) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды ΡΠΙιίη включают, не ограничиваясь перечисленным, ΡκΗϊη ракЮпк.
Антитело АЬ18.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают химерные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, причем антитело является АЬ18 или его фрагментами, к примеру, как указано ниже, либо включает другое антитело либо фрагмент антитела, связывающиеся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ18, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
^I^ΜΤ^δΡ8Τ^ЗΑЗVΟ^ΚVΤIΤС^Α8^ΤIδNΥ^Α^VΥ^^ΚΡΟΚΑΡΚ^^IΥΟΑЗN^ΕЗΟVΡЗ ΚΡδΟδΟδαΤΕΡΤΕΤΙδδΕΌΡΟΟΡΑΤΥΥΟφφΟΥΤΙδΝνϋΝΝνΡΟΟΟΤΚνΕΙΚΚ (ЗЕф Ю ΝΟ: 171),
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
ΟΙΟΜΤρ5Ρ3ΤΕ5Α5ναθΚνΤΙΤ€<2Α5<3ΊΊ8ΝΥΕΑλνΥ<30ΚΡΟΚΑΡΚΕΕΙΥαΑ5ΝΕΕ5θνΡ3 ΚΡδΟδΟδΟΤΕΡΤΕπδδΕΟΡΟΟΡΑΤΥΥερρΟΥΠδΝνϋΝΝνΡΟΟΟΤΚνΕΙΚΚΤνΑΑΡδνΡΙ ΡΡΡ5ΟΕρΕΚ8ΟΤΑ5νναΠΝΝΡΥΡ1^ΑΚν0\νκνθΝΑΕζ>3ΟΝ3<3Ε3νΤΕΓ>Ο8ΚΕ>3ΤΥ8Ε8 5ΤΕΤΕ8ΚΑΒΥΕΚΗΚνΎΑ€ΕνΤΗρ<3Ε38ΡνΤΚ8ΓΝΚ<ΐΕΟ ΙδΕΓΙΙΠΝΟ: 172).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специ- 55 028913
фичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδϋΑΑδΟΡΤνδΟΥΝΕνΥννΚΟΑΡΟΚΟΕΕΥνναΡΙδΥΟΟΤΤΥ ΥΑ88ΑΚαΚΕΊ'[3ΚϋΝ8ΚΝΊΕΥΕΟΜΝ3ΕΚΑΕϋΤΑνΥΥΟΑβΕΤΑΝΤΥΟΥΟί\νθΟΌΤΕντν 88 (ЗЕО ΙϋΝΟ: 173).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
Εν0ΕνΕ8ΟΟΟΕν0ΡΟΟ3ΕΙ^30ΑΑδ0ΡΤν5ΟΥΝΕν\Υνβ<3ΑΡσΚΟΕΕΥνν0ΡΙ8ΥαθΤΤΥ
ΥΑδδΑΚΟΚΡΤ1δΚΙ)Ν8ΚΝτΕΥΕΟΜΝ3ΕΚΑΕϋΤΑνΥΥΟΑΚΕΤΑΝΤΥΏΥαΐΨΟΟΟΤΕντν
88АЗТКОР8УРРЕАР88К8Т800ТААЕОСЕУКОУГРЕРУТУ8\УК5САЕТ50УНТРРАУЕО
δδΟΕΥδΕδδνντνΡδδδΕΟΤΟΤΥΐεΝνΝΗΚΡδΝΤΚνϋΚκνΕΡΚδεΠΚΤΗΤσΡΡΟΡΑΡΕΕΕ
ΟΟΡδνΡΕΡΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙδΚΤΡΕνΤϋνννονδΗΕΟΡΕλ/ΚΡΝλνΥνΟΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ
ΟΥΑδΤΥΡννδνΕΤνΕΗΟΟΆΈΝΟΚΕΥΚί’ΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΛΚΩρΡΚΕΡΟνΥΤΕΡΡ
5ΒΕΕΜΤΚΝ0ν8ΕΤΕΕνΚ0ΓΥΡδΟ1ΑνΕΆΈ8Ν(.ί0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ8ΟΟ8ΡΡΕΥδΚΙ,Τν
ΟΚ8Ρ\ν00ΟΝνΡδεδνΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤ0ΚδΕδΕδΡΟΚ (3ΕΟΗΤΝΟ: 174).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ΙΌ N0: 175; 8ЕЦ ΙΌ N0: 176 и 8ЕЦ ΙΌ N0: 177, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 171 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 172 и/или одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 178; 8ЕЦ ГО N0: 179 и 8ЕЦ ГО N0: 180, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 173 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 174, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОР, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8ЕЦ ГО N0: 171 или 8ЕЦ ГО N0: 172. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности 8ЕЦ ГО N0: 173 или 8ЕЦ ГО N0: 174.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 175; 8ЕЦ ГО N0: 176 и 8ЕЦ ГО N0: 177, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 171 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 172.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 178; 8ЕЦ ГО N0: 179; и 8ЕЦ ГО N0: 180, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 173 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 174.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 171; вариабельная область тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 173; определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 175; 8ЕЦ ГО N0: 176 и 8ЕЦ ГО N0: 177) вариабельной области легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 171; и определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 178; 8ЕЦ ГО N0: 179 и 8ЕЦ ГО N0: 180) вариабельной области тяжелой цепи с 81 к) ГО N0: 173.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное или гуманизированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с бо- 56 028913
лью состояний является АЬ18, содержащим, или, иначе, состоящим из 8Ε0 ГО N0: 172 и 8Ε0 ГО N0: 174 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ18, РаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8Ε0 ГО N0: 171 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8Ε0 ГО N0: 173 или содержит другой РаЬ или фрагмент антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ18. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8Ε0 ГО N0: 171 и/или 8Ε0 ГО N0: 173 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬфрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ18. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ18 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или ΗΕΚ 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз.
Антитело АЬ19.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например, НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают химерные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, причем антитело является АЬ19 или его фрагментами, к примеру, как указано ниже, либо включает другое антитело либо фрагмент антитела, связывающиеся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ19, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΑΑνΕΓ0ΤΡ3Ρν8ΑΑνθΟτν3Ι800850ΝνΥΚΝΝΥΕ3ΨΥ00ΚΡΟ0ΡΡΚΕΕΙΥΚΑ8ΤΕΑ3Ο УР8КРКО8030ТОРТЕТ18ОУ0СОАААТУУСАООУ3888ОКАРаООТЕУУУКЕ. (5Е0 ГО N0: 181).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΑΑΥΈτ0ΤΡ5Ρν5ΑΑνοστν5Ι3Ερ380ΝνΥΚΝΝΥΕ3ν/Υ00ΚΙ>6ς>ΡΡΙ<ΕΕΙΥΚΛ3ΙΕΛ3Ο νΡ8ΚΕΚ(18Ο8ΟΤΟΡΤΕΤΙ8θν00ΟΛΛΛΤΥΥ0ΑΟΟΥ8833ΟΝΑΕΟΟ0ΤΕ\'ΎνΚΚΤνΑΑΡ3 νΡΙΡΡΡδΟΕΟΕΚδΟΤΑδννΟΕΕΝΝΡΥΡΡΕΑΚνΟίνΚνΟΝΑΕΟδΟΝδΟΕδνΤΕΟΟδΚΟδΊΎ 8Ι,38ΤΕΤΕ8ΚΑΕΥΕΚΕΙΚνΥΑ€ΕνΤΗ0ΟΕ3δΡνΤΚ5ΓΝΚΟΕΕ (ЗЕО ГО N0: 182).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
03νΕΑ8αθΚΕνΜΡθα8ΕΤΕΤΟΤΑ3αΡ3Ε3ΙΎλνΜ8λννΚΟΑΡΟΚΟΕΕ)νΐΟΟΙΥΡ3ΝΕΕΤΝ ΥΑΤν/ΑΚ6ΚΡΤ13ΚΤ3ΤΤνΏΕΝνΐ5ΡΤΤΕΟΤΑΤΥΡ€ΑΚ.Ο3ΡΠνΕΙΑΙΟΜΐνθ0ΟΤΕντν38 (ЗЕОГОЫО: 183).
Изобретение также необязательно включает химерные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
08УЕА8СОКЬУМРОа5ЫЪТСТА8аР8Ь5ТУ\™8№УК0АРСКОЬЕУ¥1ОО1УР8НЕЕТН
УАТ\УАКСКГТ15КТ8ТТЛГОЕЖ18РТТЕОТАТ¥РСАИО8РОУЕ1АГОМ\УО0СТЬУТУ88А
ЗТКОРЗУРРЕАРЗЗКЗТЗСОТААЬССЬУКОУРРЕРУТУЗтаЗОАЕТЗСУНТРРАУЕОЗЗО
ΕΥ5Ε8δνντνΡ85δΕΟΤ0ΤΥΚΝνΝΗΚΡ8ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ80ΟΚΤΗΤσΡΡ0ΡΑΡΕΕΕ0ΟΡ
8νΡΕΡΡΡΚΡΚΟΤΕΜ13ΚΤΡΕντενννθν8ΗΕΟΡΕνΚΡΝ\ΥΥνΏθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ0Υ
ΑδΤΥΚννδνΕΤνΕΗΟΟ^ΝΟΚΕΥΚεκνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟΟΡΚΕΡΟνΥΤΙ,ΡΡδΚ
ΕΕΜΤΚΝΟνδΕΤΟΕνΚΟΡΥΡΪΟΙΑνΕΥΈδΝΟΟΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟδΟΟδΡΡΕΥδΚΕΤΥΟΚ
8ΚΨ00ΟΝνΡ8Ο5νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤ0Κ8Ε8Ε3ΡΟΚ (ЗЕО ГО N0: 184).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательно- 57 028913
стей ЗЕО ΙΌ N0: 185; ЗЕО ΙΌ N0: 186 и ЗЕО ГО N0: 187, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 181 или последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 182, и/или одной или более из полипептидных последовательностей ЗЕО ГО N0: 188; ЗЕО ГО N0: 189 и ЗЕО ГО N0: 190, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 183 или последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 184, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОР, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности ЗЕО ГО N0: 181 или ЗЕО ГО N0: 182. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности ЗЕО ГО N0: 183 или ЗЕО ГО N0: 184.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей ЗЕО ГО N0: 185; ЗЕО ГО N0: 186 и ЗЕО ГО N0: 187, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 181 или последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 182.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей ЗЕО ГО N0: 188; ЗЕО ГО N0: 189 и ЗЕО ГО N0: 190, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОР, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 183 или последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 184.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с ЗЕО ГО N0: 181; вариабельная область тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 183; определяющие комплементарность области (ЗЕО ГО N0: 185; ЗЕО ГО N0: 186 и ЗЕО ГО N0: 187) вариабельной области легкой цепи с ЗЕО ГО N0: 181; и определяющие комплементарность области (ЗЕО ГО N0: 188; ЗЕО ГО N0: 189 и ЗЕО ГО N0: 190) вариабельной области тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 183.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, химерное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЬ19, содержащим, или, иначе, состоящим из ЗЕО ГО N0: 182 и ЗЕО ГО N0: 184 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ19, РаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с ЗЕО ГО N0: 181 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 183 или содержит другой РаЬ или фрагмент антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ19. Данный необязательный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты ЗЕО ГО N0: 181 и/или ЗЕО ГО N0: 183 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬфрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ19. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ19 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, ЬЗ0 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раЧогю.
Антитело АЬ20.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например НСПВП или
- 58 028913
опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают химерные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, причем антитело является АЬ20 или его фрагментами, к примеру, как указано ниже, либо включает другое антитело либо фрагмент антитела, связывающиеся с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ20, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΟΙ0ΜΤ08Ρ55Ε8Α8νθΟΚνΤΙΤΟφ58φΝνΥΚΝΝΥΤ5)νΥΡφΚΡΟΚνΡΚΧΕ[ΥΚΑδΤΕΑ8Ο νΡ3ΚΡ3αδΟ3ΟΤϋΡΤΕΤΙ8δΕ(3ΡΕθνΑΤΥΥ0ΑΟΟΥΤ333ΟΝΑΡσσσΤΚνΕΙΚΚ (5Н? Го ΝΟ: 191).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΏΙ0ΜΤ03Ρ55Ε3Α3ναθΚνΤ1Τ€0330ΝνΥΚΝΝΥΕ3λνΥ00ΚΡαΚνΡΚΕΕΙΥΚΑ£ΤΕΑ3α νΡ5ΚΡ5α3α5ΟΊΌΡΤΕΤΙ53Ε0ΡΕθνΑΊΎΥ0Α0ΟΥΤ553ΟΝΑ№ΟΟΤΚ.νΕΙΚΚΤνΑΑΡ8ν πΡΡΡ3ΟΕ0Τ.Κ8ΟΤΑ8ν\Τ:ΐ.,ΕΝΝΡΥΡΗΕΑΚν0λνΚ\Τ>ΝΑΕ050Ν80Ε8νΤΕ0Ο8ΚΟ3ΤΥδ Т.53Т1ЛЕ5КАОУЕКЦКУУЛСЕУТНООЕ53РУТК5РЖГгЕС (δΕΟΙϋΝΟ: 192),
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
Εν0ΕνΕ3Γ;αΓ;Εν0ΡΟΓ;8ΕΚΕ5Γ:ΑΑ3ΟΡΤΎ8ΤΥ\™3\ννΚΓ>ΑΡΟΚΟΕΕ\ννθΟΙΥΓ8ΝΕΕΤ ΝΥΑΤ3ΑΚΟΚΡΤΙ3ΚϋΝ8ΚΝΤΕΥΕΟΜΝ5ΕΚΑΕΟΤΑνΥΥΟΑΕ08ΡθνΕΙΑΙΟΜνθΟΟΤΕν ТУ38 (ЗЕО ГО ΝΟ: 193).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
Εν0ΕνΕ5ΟΟΟΕν0ΡΟΟ8ΕΚΕ8ΕΑΑ5ΟΡΤν8ΤΥΨΜ5\ννΚ0ΑΡΟΚΟΕΕλνν6ΟΙΥΡδΝΕΕΤ
ΝΥΛΓδΛΚΟΚΡΤΙδΚΟΝδΚΝΤΕΥΕΟΜΝΚΕΚΛΕϋΤΑνΥΥΓΆΙίΟΚΡηνΕΙΑΙΟΜννΟΟΟΤΙ.ν
ТУЗЗАЗТКОРЗУРРЬАРЗЗКЗТЗООТААЕОСЕУКОУРРЕРУТУЗтХЗОАЕТЗОУНТРРАУ
Ε08δΟΕΥ8Ε88νντνΡ888ΕΟΤΟΤΥΙΟΝνΝΗΚΡ8ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ30ΏΚΤΗΤΟΡΡΟΡΑΡΕ
ΕΕΟΟΡ8νΡΕΡΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙ8ΕΓΡΕντενννΏν3ΗΕϋΡΕνΚΡΝΐνΥνοανΕνΗΝΑΚΤΚΡΚ.
ΕΕΟΥΑδΤΥΚννδνΕΤνΕΗΟΟνΕΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟΟΡΚΕΡΟνΥΤ
Ι,ΡΡ5ΚΕΕΜΤΚΝ(3ν3Ι.ΊΌΙ,νΚΟΡΥΡ5ΟΙΑνΕΨΕ8ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚ.ΤΤΡΡν[Χ>5ΟΟ3ΡΡΕΥ5ΚΙ.
ΤνθΚ8ΚΨ006ΝνΡ503νΜΗΈΑΕΗΝΗΥΤ0Κ5Ε3Ε3ΡΟΚ (δΕΟΙϋΝΟ: 194).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей δΕρ ΙΌ ΝΟ: 195; δΕρ ΙΌ ΝΟ: 196 и δΕρ ΙΌ ΝΟ: 197, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи δΕρ ΙΌ ΝΟ: 191 или последовательности легкой цепи δΕρ ΙΌ ΝΟ: 192 и/или одной или более из полипептидных последовательностей δΕρ ГО ΝΟ: 198; δΕρ ГО ΝΟ: 199 и δΕρ ГО ΝΟ: 200, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕρ ГО ΝΟ: 193 или последовательности тяжелой цепи δΕρ ГО ΝΟ: 194 или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из полипептидной последовательности δΕρ ГО ΝΟ: 191 или δΕρ ГО ΝΟ: 192. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности δΕρ ГО ΝΟ: 193 или δΕρ ГО ΝΟ: 194.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с
- 59 028913
болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ΙΌ N0: 195; 8ЕЦ ΙΌ N0: 196 и 8ЕЦ ΙΌ N0: 197, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 191 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 192.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 198; 8ЕЦ ГО N0: 199 и 8ЕЦ ГО N0: 200, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 193 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 194.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 191; вариабельная область тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 193; определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 195; 8ЕЦ ГО N0: 196 и 8ЕЦ ГО N0: 197) вариабельной области легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 191 и определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 198; 8ЕЦ ГО N0: 199 и 8ЕЦ ГО N0: 200) вариабельной области тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 193.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения химерное или гуманизированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЬ20, содержащим или, иначе, состоящим из 8ЕЦ ГО N0: 192 и 8ЕЦ ГО N0: 194 и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ20, РаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 191 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 193. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты 8ЕЦ ГО N0: 191 и/или 8ЕЦ ГО N0: 193 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬфрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ20. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, такие как АЬ20 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные Р1сЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Р1сЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ракЮпк.
Антитело АЬ21.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли и специфических нарушений, связанных с болью, по отдельности или совместно с другим активным агентом, например НСПВП или опиатным анальгетиком, при условии, что антитела включают химерные антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, отличающиеся тем, что антитело является АЬ21 или его фрагментами, или другим антителом либо фрагментом антитела, связывающимися с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ5, к примеру, как определено ниже, такими, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает химерные или гуманизированные антитела, проявляющие специфичность связывания с ФРН и обладающие вариабельной последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
О1фМ'1Ц8Р8ТЕ8АЗУС0К νΕΙΊ<’ζ)Α5ζ)8Ι ΥδΝΕΑν/ΥΡφΚΙΌΚΑΡΚΕΕΙΥϋΑδΤΕΕδΟνΡδ ΚΡδΟδΟδΟΤΕΥΤΕΤΙδδΕφΡΏΟΡΑΤΥΥΟφφΟΡΤνδΟΙϋΝΑΡΟΟΟΤΚνΕΙΚΚ (8Е<3 Ιϋ ΝΟ:
51).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
- 60 028913
ΟΚ>ΜΠ.)5Ρ4ΤΓ8Α3νθΟΚνΤΙΤ€0ΑΚΡ5;!Υ3ΝΙΑ\νΥΓ,>(2ΚΡΟΚΑ?Κ£ΕΙΥϋΑ8ΤΕΕ8θνΐ>8 Ι^508Ο$<ΠΕΥΤΕΤΙ55Ε()Ρϋ0ΡΛΤΥΥΕ<)<)0ΗΤν3ΟΙΟΝΑΡ(ι€ίΟΤΚνΕΙΚΡΠ'νΑΑΡ8νΐ·ΊΡ ΡΡδΟΕ9ΕΚ36ΤΑδννΕΡΕΝΝΡΥΡΙ^ΑΚν9ΐνΚ.νΕ>ΝΑΕ<3δΟΝ3(}ΕδνΤΕ<3Ο3ΚΕ>δΤΥδΕδ5 ΊΕΊΕδΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑΕΕντΗΟΟΙ.δδΡνΤΚδΡΝΚΟΕΕ (5Ε<3 Ю ΝΟ: 401).
Изобретение дополнительно необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают вариабельной последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
Εν0ΕνΕ5ΟΟΟΕν0ΡΟΟ8ΕΚΕ3ΕΑΑ5αΡΤν8ΝΥΑνθ\ννΚ<2ΑΡΟΚΟΕΕλννθΙΙΟΚΝΟΝΤ \νΥΑ88ΑΡΟΚΡΤΙδΚΟΝδΚΝΤΕΥΕΟΜΝ8ΕΚΑΕηΤΑνΥΥ€ΑΡΟΥΟΡ5νΑΥΥνΡΝΙ\ναΡΟΤ ЬУТУЗЗ (ЗЕС) Ш ΝΟ: 53).
Изобретение также необязательно включает химерные или гуманизированные антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΕνςΕνΕ8ΟΟΟΕνςΡΟΟ3ΕΚΕ30ΑΑ5ΟΡΤν3ΝΥΑνθ\ννΚΒΑΡΟΚ0ΕΕ\ννοΠΟΚΝσΝΤ
'Λ'ΎΑ88ΑΚΟΚΓΤΙ3ΚηΝ3ΚΝΤΕΥΕρΜΝ3ΕΚΑΕΟΤΑνΥΥΟΑΚΟΥΟΚ5νΑΥΥνΓΝ(\νθΡΟΤ
Εντν38Α5ΤΚΟΓ3νΕΡΕ?\Ρ33Κ3Τ3Ο0ΤΑΑΕΟ€ΕνΚϋΥΕΡΕΡνΊ,ν3\νΝ3ΟΑΕΤ3θνΗΤΡΡ
ΑνΕ933ΟΕΥ8Εδ8νντνΡ388Ε0Τ9ΤΥΙ0ΝνΝΗΚΡ8ΝΤΚνθΑΕ.νΕΡΚ5€ΟΚΊΉΤεΡΡεΡΑ
ΡΕΙΕΟΟΡ3νΡΕΡΡΡΚΡίίΟΤΕΜ13Ι<ΤΡΕνΤΓ_·νννϋν8ΗΕΟΡΕνΚΕΝ\νΥν[ΧινΡ.νΗΝΑΚΊΚ
ΡΚΕΕ6ΥΑ5ΤΥΚ\Α3νΕτνΕΗάΟΨΕΝΟΚΕΥΚΕΚν.3ΝΚΛΕΡΛΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚϋ(.)ΡΙ<ΕΡ0ν
ΥΤΕΡΡ8ΚΕΕΜΤΚΝ9ν3ΕΤ0ΕνΚ0ΡΥΡ8ΟΙΑνΕ\νΕ8Ν09ΡΕΝΝΥΚΤΓΡΡνΕΟ30Ο8ΡΡΕΥ3
ΚΕΤνϋΚ3Κ5ν00ΟΝνΡ8€8νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤζ)Κ8Ε8Ε8ΡΟΚ (3Εζ> 10 N0: 402).
По изобретению также необязательно предлагаются антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей ЗЕО ΙΌ N0: 55; ЗЕО ΙΌ N0: 56 и ЗЕО ΙΌ N0: 57, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 51 или последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 401, и/или одной или более из полипептидных последовательностей ЗЕО ГО N0: 58; ЗЕО ГО N0: 59 и ЗЕО ГО N0: 60, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 53 или последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 402, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела по изобретению или их фрагменты содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из полипептидной последовательности ЗЕО ГО N0: 51 или ЗЕО ГО N0: 401. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из полипептидной последовательности ЗЕО ГО N0: 53 или ЗЕО ГО N0: 402.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей ЗЕО ГО N0: 55; ЗЕО ГО N0: 56 и ЗЕО ГО N0: 57, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 51 или последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 401.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей ЗЕО ГО N0: 58; ЗЕО ГО N0: 59 и ЗЕО ГО N0: 60, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 53 или последовательности тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 402.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих
- 61 028913
специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 51; вариабельная область тяжелой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 53; определяющие комплементарность области (δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 55; δΕΟ ГО ΝΟ: 56 и δΕΟ ГО ΝΟ: 57) вариабельной области легкой цепи с δΕΟ ГО ΝΟ: 51 и определяющие комплементарность области (δΕΟ ГО ΝΟ: 58; δΕΟ ГО ΝΟ: 59 и δΕΟ ГО ΝΟ: 60) вариабельной области тяжелой цепи с δΕΟ ГО ΝΟ: 53.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения химерное или гуманизированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является АЬ21, содержащим или, иначе, состоящим из δΕΟ ГО ΝΟ: 401 и δΕΟ ГО ΝΟ: 402, и обладающим по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В дополнительном особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из РаЬ-фрагментов (фрагментов антигенного связывания), обладающих специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ21 РаЬ-фрагмент содержит вариабельную последовательность легкой цепи с δΕΟ ГО ΝΟ: 51 и вариабельную последовательность тяжелой цепи с δΕΟ ГО ΝΟ: 53 или другой РаЬ или фрагмент моновалентного антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и АЬ5. Данный вариант воплощения изобретения дополнительно подразумевает добавления, делеции и варианты δΕΟ ГО ΝΟ: 51 и/или δΕΟ ГО ΝΟ: 53 в указанном РаЬ при сохранении специфичности связывания с ФРН.
В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬфрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ21. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, такие как АЬ21 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, ΝδΟ или ΗΕΚ 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз.
РаЬ1-фрагмент антитела.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли при помощи РаЬ1-фрагмента антитела или его фрагментов, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение необязательно включает фрагменты антитела РаЬ для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже:
Ο^ΜΤΌδΡδΤΕδΑδνΟΟΚνΤΙΤσρΑδρδΙΥδΝΕΑίνΥΌΌΚΡΟΚΑΡΚΕΠΥϋΑδΤΕΕδΟνΡδ ΚΡδαδΟδΟΤΕΥΤΕΤΙδδΕΟΡΟΟΡΑΤΥΥΟΟΟΟΡΤνδϋΙϋΝΑΡΟΟΟΤΚνΕΙΚΚΤνΑΑΡδνΡΙΡ ΡΡδΟΕ0ΕΚδΟΤΑδνν€ΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚνΌΑνκνθΝΑΕ<2δΟΝ5<)ΕδνΤΕ<3ΟδΚϋδΤΥδΕδδ ΤΕΤΕ5Κ_'\ΟΥΕΚΗΚνΥΑ€ΕνΤΗΟ(3Ε55ΡνΤΚδΡΝΕΟΕσ (5ЕЦ ГО ΝΟ: 405).
Изобретение, помимо этого, необязательно включает фрагменты антитела РаЬ для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
Εν0ΕνΕ8ΟϋαΕν0ΡΰΟ5ΕΚΕ8€ΑΑ8ΟΡΤν5ΝΥΑνα\ν™0ΑΡϋΚΟΕΕ\ννθΙΙΟΚΝαΝΤ \νΥΑδδΑΚαΚΡΤΙδΚΟΝδΚΝΤΕΥΕΟΜΝδΕΚΑΕΟΤΑνΥΥ€ΑΚ.ΟΥαΚδνΑΥΥνΡΝΙ\νθΡΟΤ ΕντνδδΑδΤΚΟΡδνΡΡΕΑΡδδΚδΤδΟΟΤΑΑΕΟΟΕνΚΠΥΡΡΕΡντνδΧνΝδΟΑΕΤδΟνΗΤΡΡ ΑνΕ08δΟΕΥδΕ3δνντνΡ5δ3ΕΟΤΟΤΥΙ€ΝνΝΗΚΡδΝΓΚνθΑΚνΕΡΚδεθΚΤΗ (δΕΟ Ιθ ΝΟ: 406).
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ГО ΝΟ: 55; δΕΟ ГО ΝΟ: 56 и δΕΟ ГО ΝΟ: 57, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 51 или последовательности легкой цепи δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 405, и/или одной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 58; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 59 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 60, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 53 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 406, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности
- 62 028913
легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности БЕф ΙΌ ΝΘ: 51 или БЕф ГО ΝΘ: 405. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из полипептидной последовательности БЕф ГО ΝΘ: 53 или БЕф ГО ΝΘ: 406.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей БЕф ГО ΝΘ: 55; БЕф ГО ΝΘ: 56 и БЕф ГО ΝΘ: 57, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи БЕф ГО ΝΘ: 51 или последовательности легкой цепи БЕф ГО ΝΘ: 405.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей БЕф ГО ΝΘ: 58; БЕф ГО ΝΘ: 59 и БЕф ГО ΝΘ: 60, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи БЕф ГО ΝΘ: 53 или последовательности тяжелой цепи БЕф ГО ΝΘ: 406.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с БЕф ГО ΝΘ: 51; вариабельная область тяжелой цепи с БЕф ГО ΝΘ: 53; определяющие комплементарность области (БЕф ГО ΝΘ: 55; БЕф ГО ΝΘ: 56 и БЕф ГО ΝΘ: 57) вариабельной области легкой цепи с БЕф ГО ΝΘ: 51; и определяющие комплементарность области (БЕф ГО ΝΘ: 58; БЕф ГО ΝΘ: 59 и БЕф ГО ΝΘ: 60) вариабельной области тяжелой цепи с БЕф ГО ΝΘ: 53.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, фрагментом антитела против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является РаЬ1, содержащий БЕф ГО ΝΘ: 405 и БЕф ГО ΝΘ: 406, или иной РаЬ или фрагмент антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и РаЬ1, и обладает по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь. В одном варианте воплощения изобретения РаЬ1-фрагмент антитела может быть получен ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ21.
РаЬ2-фрагмент антитела.
В изобретении необязательно предлагаются способы лечения боли при помощи РаЬ2-фрагмента антитела или его фрагментов, к примеру, как определено ниже, которые в терапевтически эффективном количестве ингибируют связывание ФРН с ΤιΊ<Α и связывание ФРН с р75. В одном варианте воплощения изобретение включает фрагменты антитела РаЬ для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью легкой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΟΙΟΜΤ05Ρ5ΤΕ5Α5νθΟΚνΤΙΤΟΟΑ305ΙΥ5ΝΕΑ\νΥΟ()ΚΡΟΚΑΡΚΕΕΙΥϋΑ5ΤΕΕ3θνΡ3 ΕΡ3Ο3Ο8Ο1ΕΥΤΕ'ΓΊ35ΕρΡΟϋΡΑΊΎΥΕρρθΡΤν8ϋΙΰΝΑΡϋΟΟΤΚνΕΙΚΚΤνΑΑΡ8νΠΡ ΡΡ30ΕρΕΚ30ΤΑ3νν0ΕΕΝΝΨΥΡΚΕΑΚνρ\νκντιΝΑΙ,ρ30Ν3ρΕ3νΤΕρθ8ΚΟ8ΤΥ5Ε53 ΤΕΤΕ8ΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑΟΕνΤΗρθΕ33ΡνΤΚ8ΡΝΚ.ΟΕΟ (ЗЕГ) ΙΟΝΟ: 407).
Изобретение, помимо этого, необязательно включает фрагменты антитела РаЬ для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, которые проявляют специфичность связывания с ФРН и обладают последовательностью тяжелой цепи, содержащей последовательность, указанную ниже.
ΕνρΕνΕ3000ΕνρΡαθ3ΕΚΕ8€ΑΑ8αΡΤν3ΝΥΑνθνΛΤ^ΑΡακαΕΕ\νναΠ0ΚΝ6ΝΤ
\νΥΑ38ΑΚΟΚΡΤΙ3ΚϋΝ5ΚΝΤΕΥΕ9ΜΝ5ΕΚΑΕηΤΑνΥΥεΑΚΟΥΟΚ8νΑΥΥνΡΝΒνθΡΟΤ
ЕУТУЗЗА8ТКСгРЗУРРЕАР88КЗТ8ООТААЕаСЕУЫЭ¥РРЕРУТУ8ТО48ОАЕТЗОУНТРР ΑνΕρδδΟΕΥδΕδδνντνΡδδδΕΟτςτΥΚΝνΝΗΚΡδΝΤΚνϋΑΕνΕΡΚδεοΚΤΗ (δΕΟ 1ϋ ΝΟ: 408).
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, содержащие одну или более из полипептидных последовательностей БЕф ГО ΝΘ: 55; БЕф ГО ΝΘ: 56 и БЕф ГО ΝΘ: 57, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СИК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи БЕф ГО ΝΘ: 51 или последовательности легкой цепи БЕф ГО ΝΘ: 407 и/или од- 63 028913
ной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ΙΌ N0: 58; δΕΟ ΙΌ N0: 59 и δΕΟ ΙΌ N0: 60, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 53 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 408, или комбинации этих полипептидных последовательностей. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению содержат или, иначе, состоят из комбинаций одной или более СОК, вариабельной последовательности тяжелой и вариабельной последовательности легкой цепей и последовательностей тяжелой и легкой цепей, указанных выше, включая все из них.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из полипептидной последовательности δΕΟ ΙΟ N0: 51 или δΕΟ ГО N0: 407. В другом варианте воплощения изобретения фрагменты антитела по изобретению для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, включают или, иначе, состоят из полипептидной последовательности δΕΟ ГО N0: 53 или δΕΟ ГО N0: 408.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ГО N0: 55; δΕΟ ГО N0: 56 и δΕΟ ГО N0: 57, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности легкой цепи δΕΟ ГО N0: 51 или последовательности легкой цепи δΕΟ ГО N0: 407.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний включают или, иначе, состоят из одной или более из полипептидных последовательностей δΕΟ ГО N0: 58; δΕΟ ГО N0: 59; и δΕΟ ГО N0: 60, которые соответствуют определяющим комплементарность областям (СОК, или гипервариабельным областям) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО N0: 53 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО N0: 408.
По изобретению также необязательно предлагаются фрагменты антител, которые содержат один или более фрагментов антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих фрагментов антител: вариабельная область легкой цепи с δΕΟ ГО N0: 51; вариабельная область тяжелой цепи с δΕΟ ГО N0: 53; определяющие комплементарность области (δΕΟ ГО N0: 55; δΕΟ ГО N0: 56 и δΕΟ ГО N0: 57) вариабельной области легкой цепи с δΕΟ ГО N0: 51 и определяющие комплементарность области (δΕΟ ГО N0: 58; δΕΟ ГО N0: 59 и δΕΟ ГО N0: 60) вариабельной области тяжелой цепи с δΕΟ ГО N0: 53.
В особенно предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения, фрагментом антитела против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний является ЕаЪ2, содержащий δΕΟ ГО N0: 407 и δΕΟ ГО N0: 408, или иной ЕаЪ или фрагмент антитела, который связывается с тем же или перекрывающимся эпитопом, что и ЕаЪ2, и обладает по меньшей мере одним из видов биологической активности, установленных здесь.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), ЕаЪфрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний могут быть получены путем экспрессии в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N50 или ΗΕΚ 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные Р1сЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Р1сЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, Р1сЫа разГОпз. В одном варианте воплощения изобретения ЕаЪ2фрагмент антитела может быть получен экспрессией в Р1сЫа раЧогш по протоколам, описанным здесь в примерах.
В другом варианте воплощения фрагменты антитела могут присутствовать в одной или более из следующих неограничивающих форм: ЕаЪ, ЕаЪ', Е(аЪ')2, Εν и одноцепочечных форм антител Εν. В предпочтительном варианте воплощения, антитела против ФРН, описанные здесь, дополнительно содержат каппа-костантную последовательность легкой цепи, содержащую последовательность, указанную ниже.
УААРЗУИРРРЗОЕрЬКЗОТАЗУУСЬЕНМРУРКЕАКУр^КУОНАЬрЗСКЗрЕЗУ ТЕрОЗКОЗТУЗЕЗЗТЬТЕЗКАОУЕКНКУУАСЕУТНрОЬЗЗРУТКЗРМКОЕС (ЗЕО ГО N0:412).
В другом предпочтительном необязательном варианте воплощения антитела против ФРН, описанные здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний дополнительно включают гамма-1 константную полипептидную последовательность тяжелой цепи, содержащую после- 64 028913
довательность, указанную ниже.
А8ТКОР8УРРЕАР85К5Т8ОСТААЬОСЬУКО¥ГРЕРУТУ8%ТЧ8ОАЬТ8ОУНТРРА
УЪ088ОЬУ8Ь88УУТУР888ЬОТ0ТУ1СГЛТЧНКР8НТКУПККУЕРК8СПКТНТСРРСРАР ЕЕЬССРЗУРЕРРРКРКОТЬМККТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУКт^УУУОСУЕУННАКТКР ΚΕΕΟΥΑδΤΥΚννδνΕΤνΕΗΟϋΥνΕΝΟΚΕΥΚϋΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟΟΡΚΕΡΟνΥ ΤΕΡΡδΚΕΕΜΤΚΝΟνδΕΤΟΕνκαΡΥΡδΜΑνΕνΕδΝΟΟΡΕΝΝΥΚΤΊΡΡνΕΟδΟΟδΡΡΕΥδΚ ΕΤνϋΚδΚλνΟΟΟΝνΡδσδνΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤΟΚδΕδΕδΡΟΚ (8Е0 ГО ΝΟ: 413).
В другом необязательном варианте воплощения, по изобретению предлагается изолированное антитело против ФРН для лечения или профилактики боли и состояний, связанных с болью, содержащее Унполипептидную последовательность, выбранную из: 5>Е0 ГО N0: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123, 133, 143, 153, 163, 173, 183, 193 или 402, либо их варианта; и дополнительно содержащее Уьполипептидную последовательность, выбранную из: 5>Е0 ГО N0: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121, 131, 141, 151, 161, 171, 181, 191 или 401, либо его варианта, в котором один или более из каркасных остатков (РР-остатков) в упомянутом Ун- или Уъ-полипептиде был замещен на другой аминокислотный остаток, образуя антитело против ФРН, которое специфически связывается с ФРН. По изобретению предлагаются гуманизированные и химерные формы этих антител для лечения или профилактики боли и состояний, связанных с болью. Химерные антитела могут включать Рс, происходящий из константных областей 1дС1, 1дС2, 1дС3, 1дС4, 1дС5, 1дС6, 1дС7, 1дС8, 1дС9, 1дС10. 1§С11, 1§012, 1§013, 1§014, 1§015, 1§016, 1§017, 1§018 или 1§019.
В одном варианте воплощения изобретения антитела или Ун- или У[-полипептиды происходят или выбраны из одной или более популяций кроличьих В-клеток до начала процесса гуманизации, обозначенного здесь.
В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН и их фрагменты для лечения или профилактики боли и состояний, связанных с болью, не обладают специфичностью связывания с р75 или ТгкА. В дополнительном варианте воплощения
изобретения предлагаются способы лечения боли, содержащие использование антител против ФРН и их фрагментов для ингибирования связывания ФРН с р75 и/или ТгкА. В другом варианте воплощения изобретения предлагаются способы лечения боли, содержащие использование антител против ФРН и их фрагментов для ингибирования связывания ФРН с ТгкА и/или его мультимерами и/или антагонизирования его биологических эффектов. В другом варианте воплощения изобретения предлагаются способы лечения боли, содержащие использование антител против ФРН и их фрагментов для ингибирования связывания ФРН с р75 и/или его мультимерами и связывания ФРН с ТгкА и/или его мультимерами, а также антагонизирования биологических эффектов р75 и ТгкА.
Как говорилось выше, антитела и их фрагменты могут быть модифицированы послетрансляционно, чтобы внедрить эффекторные фрагменты, такие как химические линкеры, детектируемые группы, как, например, флуоресцентные красители, ферменты, субстраты, биолюминесцентные материалы, радиоактивные материалы и хемилюминесцентные группы, или функциональные фрагменты, такие, как, к примеру, стрептавидин, авидин, биотин, цитотоксин, цитотоксический агент и радиоактивные материалы.
Рассматривая детектируемые группы, дополнительные типичные ферменты включают, не ограничиваясь перечисленным, пероксидазу хрена, ацетилхолинэстеразу, щелочную фосфатазу, бетагалактозидазу и люциферазу. Дополнительные типичные флуоресцентные материалы включают, не ограничиваясь перечисленным, родамин, флуоресцеин, флуоресцеина изотиоцианат, умбеллиферон, дихлортриазиниламин, фикоэритрин и дансил хлорид. Дополнительные типичные хемилюминесцентные группы включают, не ограничиваясь перечисленным, люминол. Дополнительные типичные биолюминесцентные материалы включают, не ограничиваясь перечисленным, люциферин и экворин. Дополнительные типичные радиоактивные материалы включают, не ограничиваясь перечисленным, Иод-125 (1251), Углерод-14 (14С), Серу-35 (35§), Тритий (3Н) и Фосфор-32 (32Р).
Рассматривая функциональные группы, типичные цитотоксические агенты включают, не ограничиваясь перечисленным, метотрексат, аминоптерин, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин, 5фторурацил декарбазин; алкилирующие средства, такие как мехлорэтамин, тиотепа, хлорамбуцил, мелфалан, кармустин (Β§Nυ), митомицин С, ломустин (ССКи), 1-метилнитрозомочевина, циклофосфамид, мехлорэтамин, бусульфан, дибромоманнитол, стрептозотоцин, митомицин С, цис-дихлордиамин платина (II) (ΌΌΡ) цисплатин и карбоплатин (параплатин); антрациклины, включая даунорубицин (ранее дауномицин), доксорубицин (адриамицин), деторубицин, карминомицин, идарубицин, эпирубицин, митоксантрон и бисантрен; антибиотики, включая дактиномицин (актиномицин И), блеомицин, калихеамицин, митрамицин и антрамицин (АМС); и антимитотические агенты, такие как алкалоиды барвинка, винкристин и винбластин. Другие цитотоксические агенты включают паклитаксел (таксол), рицин, псевдомонадный экзотоксин, гемцитабин, цитохалазин В, грамицидин И, этидия бромид, эметин, этопозид, тенопозид, колхицин, дигидроксиантрациндион, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол, пуромицин, прокарбазин, гидроксимочевину, аспарагиназу, кортикостероиды, митотан (0,Ρ'-(ΌΌΌ)), интерфероны и смеси этих цитотоксических агентов.
- 65 028913
Помимо этого, цитотоксисические агенты включают, не ограничиваясь перечисленным, химиотерапевтические агенты, такие как карбоплатин, цисплатин, паклитаксел, гемцитабин, калихеамицин, доксорубицин, 5-фторурацил, митомицин С, актиномицин Ό, циклофосфамид, винкристин и блеомицин. Токсические ферменты из растений и бактерий, такие как рицин, дифтерийный токсин и псевдомонадный токсин, могут конъюгироваться с гуманизированными или химерными антителами или их связывающими фрагментами, с образованием специфических к клеточному типу убивающих реагентов (Уои1е, е! а1., Ргос. №11 Асаб. 8οΐ. И8А 77:5483 (1980); СПШапб, е! а1., Ргос. №1'1 Асаб. 8сЁ И8А 77:4539 (1980); Кго1юк, е! а1., Ргос. №!1 Асаб. 8сЁ И8А 77:5419(1980)).
Иные цитотоксические агенты включают цитотоксические рибонуклеазы, как описано Со1бепЬег§ в патенте США № 6 653 104. Варианты воплощения изобретения также относятся к радиоиммуноконъюгатам, в которых радионуклид, испускающий альфа- или бета-частицы, стабильно связан с антителом или его связывающими фрагментами с использованием комплексообразователя или без него. Такие радионуклиды включают бета-излучатели, такие как Фосфор-32 (32Р), Скандий-47 (478с), Медь-67 (67Си), Галлий-67 (67Оа), Иттрий-88 (88Υ), Иттрий-90 (90Υ), Иод-125 (125Ι), Иод-131 (131Ι), Самарий-153 (1538т), Лютеций-177 ( Ьи), Рений-186 ( Ве) или Рений-188 ( Ве), и альфа-излучатели, такие как Астат-211 (211АЕ), Свинец-212 (212РЬ), Висмут-212 (212Βί) или -213 (213Βί) или Актиний-225 (225Ас).
Дополнительные типичные радиоактивные материалы включают, не ограничиваясь перечисленным, Иод-125 (125Ι), Углерод-14 (14С), Серу-35 (358), Тритий (3Н) и Фосфор-32 (32Р).
Что касается функциональных групп, типичные цитотоксические агенты включают, не ограничиваясь перечисленным, метотрексат, аминоптерин, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин, 5-фторурацил декарбазин; алкилирующие средства, такие как мехлорэтамин, тиотепа, хлорамбуцил, мелфалан, кармустин ^§N0), митомицин С, ломустин (ССNυ), 1-метилнитрозомочевина, циклофосфамид, мехлорэтамин, бусульфан, дибромоманнитол, стрептозотоцин, митомицин С, цис-дихлордиамин платина (ΙΙ) (ЭЭР) цисплатин и карбоплатин (параплатин); антрациклины, включая даунорубицин (ранее дауномицин), доксорубицин (адриамицин), деторубицин, карминомицин, идарубицин, эпирубицин, митоксантрон и бисантрен; антибиотики, включая дактиномицин (актиномицин Ό), блеомицин, калихеамицин, митрамицин и антрамицин (АМС); и антимитотические агенты, такие как алкалоиды барвинка, винкристин и винбластин. Другие цитотоксические агенты включают паклитаксел (таксол), рицин, псевдомонадный экзотоксин, гемцитабин, цитохалазин В, грамицидин Ό, этидия бромид, эметин, этопозид, тенопозид, колхицин, дигидроксиантрациндион, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол, пуромицин, прокарбазин, гидроксимочевину, аспарагиназу, кортикостероиды, митотан (0,Р'(ΌΌΌ)), интерфероны и смеси этих цитотоксических агентов.
Помимо этого, цитотоксисические агенты включают, не ограничиваясь перечисленным, химиотерапевтические агенты, такие как карбоплатин, цисплатин, паклитаксел, гемцитабин, калихеамицин, доксорубицин, 5-фторурацил, митомицин С, актиномицин Ό, циклофосфамид, винкристин и блеомицин. Токсические ферменты из растений и бактерий, такие как рицин, дифтерийный токсин и псевдомонадный токсин, могут конъюгироваться с гуманизированными или химерными антителами или их связывающими фрагментами, с образованием специфических к клеточному типу убивающих реагентов ^оШе е! а1., Ргос. N311 Асаб. 8сЁ И8А 77: 5483 (1980); СПШапб е! а1., Ргос. №11 Асаб. 8сЁ И8А 77: 4539 (1980); Кго1юк, е! а1., Ргос. №!1 Асаб. 8сЁ И8А 77: 5419(1980)).
Иные цитотоксические агенты включают цитотоксические рибонуклеазы, как описано Со1бепЬег§ в патенте США № 6 653 104. Варианты воплощения изобретения также относятся к радиоиммуноконъюгатам, в которых радионуклид, испускающий альфа- или бета-частицы, стабильно связан с антителом или его связывающими фрагментами с использованием комплексообразователя или без него. Такие радионуклиды включают бета-излучатели, такие как Фосфор-32 (32Р), Скандий-47 (478с), Медь-67 (67Си), Галлий-67 (67Оа), Иттрий-88 (88Υ), Иттрий-90 (90Υ), Иод-125 (125Ι), Иод-131 (131Ι), Самарий-153 (1538т), Лютеций-177 ( Ьи), Рений-186 ( Ве) или Рений-188 ( Ве), и альфа-излучатели, такие как Астат-211 (211АЕ), Свинец-212 (212РЬ), Висмут-212 (212Βί) или -213 (213Βί) или Актиний-225 (225Ас).
В данной области техники известны способы для связывания антитела или его связывающего фрагмента с детектируемой группой и т.д., такие как, к примеру, способы, описанные в Нип!ег е! а1, №Лиге 144:945 (1962); Эау|б е! а1, ВюсНеипЫгу 13:1014 (1974); Рат е! а1., 1. Iттиηо1. МеШ. 40:219 (1981) и Xдгеп, 1., НМосНет. апб С’уЮсНет. 30:407 (1982).
Варианты воплощения, описанные здесь, дополнительно включают варианты и эквиваленты, которые в значительной степени гомологичны антителам, фрагментам антител, диателам, 8МГР, камелизированным телам, нанотелам, ЦНАВ полипептидам, вариабельным областям и СОВ, описанным здесь. Они могут содержать, например, мутации консервативного замещения (т.е. замещения одной или более аминокислот похожими аминокислотами). К примеру, консервативное замещение обозначает замещение аминокислоты на другую в пределах одного общего класса, например, одной кислотной аминокислоты на другую кислотную аминокислоту, одной основной аминокислоты на другую основную аминокислоту, или одной нейтральной аминокислоты на другую нейтральную аминокислоту. То, что понимается под консервативным замещением аминокислоты, хорошо известно в данной области техники.
В другом варианте воплощения, по изобретению предлагаются полипептидные последовательно- 66 028913
сти, обладающие по меньшей мере 90%-й или большей гомологией последовательности с любой одной или более из полипептидных последовательностей фрагментов антител, вариабельных областей и СГОК, описанных здесь. Более предпочтительно, по изобретению предлагаются полипептидные последовательности, обладающие по меньшей мере 95%-й или большей гомологией последовательности, более предпочтительно по меньшей мере 98%-й или большей гомологией последовательности, и еще более предпочтительно по меньшей мере 99%-й или большей гомологией последовательности с любой одной или более из полипептидных последовательностей фрагментов антител, вариабельных областей и СГОК, описанных здесь. Способы для определения гомологии между нуклеиновокислотной и аминокислотной последовательностями хорошо известны обычным специалистам в данной области техники.
В другом варианте воплощения по изобретению дополнительно предлагаются вышеуказанные полипептидные гомологи фрагментов антител, вариабельных областей и СГОК, описанных здесь, дополнительно обладающие активностью против ФРН. Неограничительные примеры активности против ФРН представлены здесь.
В другом варианте воплощения по изобретению дополнительно предлагается получение и использование антиидиотипических антител, которые связывают любую из указанных выше последовательностей. В типичном варианте воплощения такое антиидиотипическое антитело может вводиться субъекту, который получал антитело против ФРН для модулирования, снижения или нейтрализации эффекта антитела против ФРН. Такие антиидиотипические антитела могут также быть полезными для лечения аутоиммунного заболевания, характеризующегося наличием антител против ФРН. Еще один типичный способ использования таких антиидиотипических антител заключается в детектировании антител против ФРН по настоящему изобретению, к примеру, для отслеживания уровней антител против ФРН, присутствующих в крови субъекта или иных жидкостях тела.
По настоящему изобретению также предлагаются антитела против ФРН, в которых одна из полипептидных или полинуклеотидных последовательностей, описанных здесь, была замещена на любую из других полинуклеотидных последовательностей, описанных здесь. К примеру, не ограничиваясь перечисленным, по настоящему изобретению предлагаются антитела, содержащие комбинацию любой из вариабельной последовательности легкой цепи и вариабельной последовательности тяжелой цепи, описанных здесь, и дополнительно предлагаются антитела, полученные при замещении любой из СГОКпоследовательностей, описанных здесь, на любую другую из СОК-последовательностей, описанных здесь.
Полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител против ФРН
Антитело АЬ1.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование с целью лечения или профилактики боли и состояний, связанных с болью, полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ1, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ1. В одном варианте воплощения изобретения, полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО ΝΟ: 1.
ОСССТТОТОАТОАСССАОАСТССАТССТССОТОТСТОСАССТОТОООАООСАС
АОТСАССАТСААТТОССАООССАОТСАОААСАТТТАСАОСААТТТАОССТООТАТСА
АСАОАОАССАОООСАОСОТСССААОСТССТОАТСТАТООТОСАТССААТСТООАТО
СТОССОТСССАТСОСООТТСАСАООСАОТОСАТСТОООАСАСАОТАСАСТСТСАСС
АТСАОСОАССТСОАОТОТОАСОАТОТТООСАСТТАСТАСТОТСАААОТССТТТТОАТ
АОТОАТАОТАСТОААААТАСТТТСООССОАОООАССОАООТООТООТСАААСОТ (ЗЕО 10 N0:201).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО ΝΟ: 2.
- б7 028913
ОСССТТОТОАТОАСССАОАСТССАТССТССОТСТСТОСАОСТОТОООАСОСАС АОТСАССАТСААТТСССАОСССАОТСАОААСАТГГАСАОСААТТТАОССГООГАТСА АСАОАОАССАОООСАОСОТСССААССТССТОАТСТАТООТОСАТССААТСТООАТО СТСООСТСССАТСОСССТТСАОАааСАОТООАТСТССОАСАаАСТАСАСТСТСАСС АТСАОССАССТССАСТСТСАССАТСТТОССАСТГАСТАСТСТСАААСТССТТТТСАТ АОТОАТАОТАСТОААААТАСТТТСООСООАОООАССОАООТООТООТСАААСОТАС ООТАОССОССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАААТСТОО ААСТСССТСТОТТОТОТСССТОСТОААТААСТТСТАТСССАОАОАООССАААОТАСА отооааоотооатаасоссстссаатсосотаастсссаооасаототсасаоаос АООАСАОСААООАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТСАОСАААОСА ОАСТАССАОАААСАСАААОТСТАСОССТОСОААОТСАСССАТСАСССССТОАССТС ОСССОТСАСАААОАОСТТСААСАООООАОАОТОТТАО (8ЕГ) ΟΝΟ: 202).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 3.
САОТСОСТООАООАОТССООаООТСОССТООТСАСаССТОООАСАССССТОА САСТСАССТОСАСАОТСТСТООСТТСТСССТСАОТАОСТАТОСААТОАОСТООаТСС ОССАООСТССАОООААОООаСТООААТООАТСООАОТСАТТАСТАОТАТТООТАОС АСАОТСТАСОСОАОСТОООСОАААООСССАТТСАССАТСТССААААССТССАССАС ООТООАТСТОААААТСАССАОТССОАСААССОАООАСАСООССАССТАГГТСТОТО ССАОАООСТАСОАТОАСТАТОАТОАОАТОАССТАСТТТААСАТСТООООССАОООО АСССТСОТСАССОТСТСОАОС (5Ер ГО ΝΟ: 203).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 4.
САОТСОСТООАООАОТССОООООТСОССТООТСАСОССТОООАСАССССТОА
САСТСАССТОСАСАОТСТСТООСТТСТСССТСАОТАОСТАТОСААТОАОСТОООТСС
ОССАООСТССАОООААООООСТООААТООАТСООАОТСАТТАСТАОТАТТООТАОС
АСАОТСТАСОСОАОСТОООССАААООСССАТТСАССАТСТССААААССТСОАССАС
ООТООАТСТОААААТСАССАОТССОАСААССОАООАСАСООССАССТАТТТСТОТО
ССАОАООСТАССАТСАСТАТОАТОАОАТОАССТАСГГТААСАТСТООООССАОООО
АСССТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСССССТООСА
СССТССТССААОАОСАССТСТОООООСАСАОСООСССТОООСТОССТООТСААООА
СТАСТТССССОААССООТОАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАССАОСООСОТ
ОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТООТ
ОАССОТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТСАСА
АОСССАОСААСАССААООТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОАСААААСТ
САСАСАТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТООООООАССОТСАОТСТТССТС
ТТССССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСАСАТОС
ОТООТООТООАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСААСТООТАСОТООА
СООСОТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСОССАОС
АСОТАССОТОТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАООАСТООСТОААТООСААО
ОАОТАСААОТОСААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОААААССАТ
СТССАААОССАААОООСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОСССССАТССС
ОООАООАОАТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТОССТООТСАААООСТТСТАТ
СССАОСОАСАТСОССОТООАОТОООАОАОСААТОООСАОССООАОААСААСТАСА
АОАССАСОССТСССОТОСТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТСА
ССОТООАСААОАОСАОСТООСАОСАООООААСОТСТТСТСАТОСТССОТОАТОСАТ
ОАООСТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТАААТО
Α (8Ες ГО N0: 204).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с ЗЕО ГО N0: 205; ЗЕО ГО N0: 206 и ЗЕО ГО N0: 207, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОР, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 1 или последо- 68 028913
вательности легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 2.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Ер Ιϋ N0: 208; 8Ер Ιϋ N0: 209 и 8Ер Ιϋ N0: 210, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОН, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 3 или последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 4.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Ер Ιϋ N0: 201, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 1; полинуклеотид 8Ер Ιϋ N0: 202, кодирующий последовательность легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 2; полинуклеотид 8Ер Ιϋ N0: 203, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 3; полинуклеотид 8Ер Ιϋ N0: 204, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 4; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Ер Ιϋ N0: 205; 8Ер Ιϋ N0: 206 и 8Ер Ιϋ N0: 207) вариабельной последовательности легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 1 или последовательности легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 2; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Ер Ιϋ N0: 208; 8Ер Ιϋ N0: 209 и 8Ер Ιϋ N0: 210) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 3 или последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 4.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания) для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ1, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ1, содержат, или или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Ер Ιϋ N0: 202, кодирующего последовательность легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 2 и полинуклеотида с 8Ер Ιϋ N0: 204, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 4.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа.
Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЫпз. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ1 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ1 или его РаЬфрагменты, могут быть получены путем экспрессии АЬ1 полинуклеотидов в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раз1опз.
Антитело АЬ2.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование с целью лечения или профилактики боли и состояний, связанных с болью, полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ2, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которые ингибируют связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ2. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Ер Ιϋ N0: 11.
ОАСАТССАОАТОАСССАОТСТССТТССАСССТОТСТССАТСТОТАООАСАСАО АОТСАССАТСАСТТОССАООССАОТСАОААСАТТТАСАОСААСТТАОССТООТАТСА ОСАОАААССАООААААОССССТААОСТССТОАТСТАТООТОСАТССААТСТООАТС СТССАСТСССАТСААООТТСТСТООСАОТООАТСТОООАСАОАОТАСАСТСТСАССА ТСАОСАОССТОСАОССТОАТОАТТТТОСААСТТАСТАСТОССАААОТОСТТТТОАТА ОТСАТАСТАСТОААААСАСТТТСОСССОАООААССААООТООАААТСАААСОТ (8Е<3 ГО N0:211).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению со- 69 028913
держат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 12.
ОАСАТССАОАТаАСССАОТСТССТТССАСССТатСТОСАТСТОТАООАОАСАО АСТСАССАТСАСТТОССАООССАОТСАОААСАТГТАСАОСААСТТАОССТаОТАТСА аСАОАААССАООААААОССССТААОСТССТСАТСТАТСОТОСАТССААТСТООАТО СТООАСТСССАТСААОатТСТСТООСАОТООАТСТОООАСАОАОТАСАСТСТСАССА ТСАаСАОССТССАОССТаАТаАТТТТОСААСТТАСТАСТаССАААОТОСТТТТОАТА ОТСАТАОТАСТОААААСАСТТТСООСООАООААССААаСТааАААТСАААСОТАСО СТАССаОССССАТСТатСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАААТСТООА АСТаССТСТОТТОТОТаССТОСТаААТААСТТСТАТСССАОАОАСОССАААаТАСАО ТСОААООТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАООАОАОТСТСАСАаАОСА аОАСАОСААООАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТОАОСАААОСАа АСТАСОАОАААСАСАААОТСТАССгССТОСОААОТСАСССАТСАСгСгОССТОАОСТСО СССОТСАСАААаАОСТТСААСАОСООАОАОТатТАО (ЗЕО 10 N0: 212).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 13.
ОАСОТОСАОСТООТООАОТСТОООООАОССТТСОТССАОССТООООООТССС ТаАОАСТСТССТОТОСАОССТСТСОАТТСАССОТСАОТАОСТАТОСААТОАОСТСаО ТССОТСАООСТССАОООААООООСТСОАОТОССТСОСАОТСАТТАСТАОТАТТООТ АОСАСАОТСТАСОСОАОСАОСОСОАААОаССОАТТСАССАТСТССАОАОАСААТТС СААОААСАСССТОТАТСТГСАААТОААСАОССТОАОАОСТОАООАСАСТОСТОТОТ АТТАСТОТОСТАОАООСТАССАТОАСТАТОАТОАОАТОАССТАСТГТААСАТСТООО ОССААОООАСССТСОТСАССОТСТСОАОС (ЗЕЦ III N0: 213).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 14.
ОАООТОСАОСТООТООАОТСТОООООАООСТТООТССАОССТООООООТССС ТОАОАСТСТССТОТОСАОССТСТООАТТСАССОТСАОТАОСТАТОСААТОАОСТООО ТССОТСАООСТССАОООААООООСТООАОТОООТСООАОТСАТГАСТАОТАТТОСТ АОСАСАОТСТАСОСОАОСАОСОСОАААООССОАТТСАССАТСТССАОАОАСААТТС СААОААСАСССТОТАТСТТСАААТОААСАОССТОАСАОСТОАООАСАСТССТОТСТ АТТАСТОТОСТАОАОаСТАСОАТОАСТАТОАТОАОАТОАССТАСПТААСАТСТООО ОССААОООАСССТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСС СССТООСАСССТССТССААОАОСАССТСТОООООСАСАОСООСССТОООСТОССТОО ТСААООАСТАСТТССССОААССООТОАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАСС АОСООСОТОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОС АОСОТООТОАССОТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТО ААТСАСААОСССАОСААСАССААООТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОА СААААСТСАСАСАТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТООООООАССОТСАО ТСТТССТСТТССССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАОО ТСАСАТОСОТООТССТООАСОТОАОССАСОААОАСССТОАаОТСААОТТСААСТОО ТАСОТООАСООСОТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАСТ АСОССАОСАСОТАССОТОТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАООАСТООСТОА АТОаСААСОАСТАСААОТОСААСОТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАО ААААССАТСТССАААОССАААОООСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОСС СССАТСССОООАООАОАТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТОССТООТСАААО ОСТТСТАТСССАОСОАСАТСОССОТООАОТОООАОАОСААТОООСАОССООАОААС ААСТАСААОАССАСОССТСССОТОСТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОС ААОСТСАССОТООАСААОАОСАООТООСАОСАООООААСОТСТТСТСАТОСТССОТ ОАТОСАТОАООСТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССООО ТАААТОА (ЗЕО ΙϋΝΟ: 214).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8ЕЦ ГО N0: 215; 8ЕЦ ГО N0: 216 и 8ЕЦ ГО N0: 217, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 11 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 12.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью,
- 70 028913
обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с ЗЕф ΙΌ Ν0: 218; ЗЕф ГО Ν0: 219 и ЗЕф ГО Ν0: 220, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СИК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 13 или последовательности тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 14.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с ЗЕф ГО Ν0: 211, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 11; полинуклеотид ЗЕф ГО Ν0: 212, кодирующий последовательность легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 12; полинуклеотид ЗЕф ГО Ν0: 213, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 13; полинуклеотид ЗЕф ГО Ν0: 214, кодирующий последовательность тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 14; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (ЗЕф ГО Ν0: 215; ЗЕф ГО Ν0: 216 и ЗЕф ГО Ν0: 217) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 11 или последовательности легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 12; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (ЗЕф ГО Ν0: 218; ЗЕО ГО Ν0: 219 и ЗЕф ГО Ν0: 220) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 13 или последовательности тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 14.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих ΡаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания) для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ2, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ2, включают или, иначе, состоят из полинуклеотида с ЗЕф ГО Ν0: 212, кодирующего последовательность легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 12, и полинуклеотида с ЗЕф ГО Ν0: 214, кодирующего последовательность тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 14.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, Ж0, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи ΡΚ1ιί;·ι. Подходящие виды ΡΚΙιίΗ включают, не ограничиваясь перечисленным, ΡΚΙιίΗ ракЮпк. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), ΡаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ2 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ2 или его ΡаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ2 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, Ж0 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные ΡΚΙιίΗ) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды ΡΚΙιίΗ включают, не ограничиваясь перечисленным, ΡΚΙιίΗ ракЮпк.
Антитело АЬ3.
Изобретение дополнительно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ3, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА без существенного ингибирования связывания ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ3. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с ЗЕф ГО Ν0: 21.
ОСАСССОТСЗСТОАСССАОАСАССАТСОССССТОТСТОСАОСТАТОООАОАСА САСТСАССАТСААСТСССАОТССАаТСАОАСТСТТТАТААСААСААСТАСТТАТССТ ааТАТСАОСАОАААССАООССАОССТСССАаОСТССТСАТСТАТОАТССАТССААТС ТОССАТСТОСООТСССАТСАСООТТСАОСООСАОТООАТСТОаОАСАСАОТТСАСТС ТСАССАТСАСССОССТаСАОТСТСАССАТССТСССАСТТАСТАСТСТСТАССССАТТ АТОАТОАТаАТССТСАТААТССПТССССССАООСАСССАСОТССТаСТСАААСОТ (ЗЕЦГОЫО: 221).
В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с ЗЕф ГО Ν0: 22.
- 71 028913
аСАОССОТОСТОАСССАОАСАССАТСОСССОТСТСТССАОСТАТОаОАОАСА
САОТСАССАТСААОТОССАОТССАОТСАОАаТСТТТАТААОААСААСТАСТГАТССТ
ООТАТСАОСАОАААССАООССАОССТСССАООСТССТОАТСТАТОАТОСАГССААТС
ТОССАТСТООООТСССАТСАСООТТСАОСаОСАОТаОАТСТООаАСАСАОТГСАСТС
ТСАССАТСАОСООСОТОСАОТСТОАСОАТССГОССАСТТАСТАСТатСТАООСОАТГ
АТСАТОАТСАТССТСАТЛАТаСТТТСООСаОАОаОАСеОАООТООТООТСАААСОТ
АСООТАОСООССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАААТСТ
ООААСТОССТСТОТТОТОТОССТОСТОААТААСТТСТАТСССАОАОАООССАААОТА
САОТСЮААООТООАТААСОСССТССААТСаООТААСТСССАОаАОАататСАСАаА
ОСАООАСАОСААООАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТОАОСАААО
САОАСТАСОАОАААСАСАААОТСТАСОССТОСОААОТСАСССАТСАООаССТОАОС ТСОСССОТСАСАААОАОСТТСААСАСОООАОАОТОТТАО (5Е0 Ш N0: 222).
В другом варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Еф ГО N0: 23.
САОТСООТООАООАОТССОООООТСОССТООТСАСОССтаООАСАССССТСА САСТСАССТОСАСАОТСТСТООАТТСТСССТСАОТАОСТАТОТААТОАТСТСООТСС ОССАООСТССАОООААООООСТООААТАСАТСООААТСАСТТООАОТОСТООТАСА ТАСТАСОСОАОСТОООСаАААаОССаАТТСАССАТСТССААААССТСаТСОАССАС ООТСОАТСТаААААТСАССАОТССОАСААССОАООАСАССОССАССТАТТТСТОТО ссаоАсстсатостАатАтттАТСАТАтттоосасссооосАссстоатсАСсатст СОАСС (8Е<2 Ю N0:223).
В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Еф ГО N0: 24.
САаТСаОТОаАООАОТССОООООТСОССТООТСАСОССТОООАСАССССТОА
САСТСАССТОСАСАСТСТСТаОАТТСТСССТСАОТАССТАТОТААТаАТСТСаОТСС
ОССАООСТССАОООААООаОСТООААТАСАТСООААТСАСТТОаАОТОСТаОТАСА
ТАСТАСОСОАОСТааОСОАААООССОАТТСАССАТСТССААААССТСОТСОАССАС
аатаОАТСТСААААТСАССАОТССОАСААССОАООАСАСаОССАССТАТТТСТОТа
ССааАООТООТООТАОТАТТТАТОАТАТТТООООСССОООСАСССТООТСАССОТСТ
СОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСССССТООСАСССТССТССААОАОСА
ССТСТОООООСАСАОСООСССТаООСТСССТООТСААООАСТАСТТССССОААССО
ОТОАСООТОТСОТаОААСТСАООСОСССТаАССАССООСОТОСАСАССТТСССОаСТ
аТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТООТОАССаТОСССТССАОС
АОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТСАСААаСССАССААСАССАА
ОаТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОАСААААСТСАСАСАТОСССАССОГ
ОСССАОСАССТОААСТССТООаааОАССОТСАаТСТТССТСТТССССССААААСССА
АООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСАСАТССОТООТССТООАСОТО
АОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСААСТООТАСОТааАСООСОТООАООТОСА
ТААТОССААОАСАААОССОСОООАаОАОСАОТАСОССАОСАСОТАССОТОТСОТСА
ОСОТССТСАССОТССТОСАССАООАСТСОСТОААТООСААООАОТАСААатаСААО
ОТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОААААССАТСТССАААОССАААСО
ОСАОССССОАСААССАСАООТОТАСАСССТаСССССАТСССООаАООАОАТОАССА
АаААССАСОТСАОССТОАССТОССТООТСАААООСТТСТАТСССАОССАСАТСОССО ТСОАОТООСАОАОСААТОООСАОССССАОААСААСТАСААОАССАСОССТСССОТО СТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТСАССОТСОАСААОАОСАОа ТООСАОСАаОООААСОТСТТСТСАТ(ЗСТССОТОАТОСАТОАООСТСТаСАСААССАС ТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТАААТСА (ЗЕО ΙϋΝΟ: 224).
В дополнительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Еф ГО N0: 225; 8Еф ГО N0: 226 и 8Еф ГО N0: 227, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СГОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8Еф ГО N0: 21 или последовательности легкой цепи 8Еф ГО N0: 22.
В дополнительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Еф ГО N0: 228; 8Еф ГО N0: 229 и 8Еф ГО N0: 230, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СГОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 23 или последовательности
- 72 028913
тяжелой цепи 8ЕО ГО N0: 24.
По изобретению также предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанных здесь, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающих специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Е0 ГО N0: 221, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 21; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 222, кодирующий последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 22; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 223, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 23; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 224, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 24; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 225; 8Е0 ГО N0: 226 и 8Е0 ГО N0: 227) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 21 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 22 и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 228; 8Е0 ГО N0: 229 и 8Е0 ГО N0: 230) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 23 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 24.
В предпочтительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания) для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ3, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ3, включают, или, иначе состоят из полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 222, кодирующего последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 22, и полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 224, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 24.
В другом варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК-293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раЫопк. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ3 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ3 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ3 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ра8(ог18.
Антитело АЬ4.
Изобретение дополнительно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ4, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА без существенного ингибирования связывания ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ4. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 31.
ОАСАТССАОАТОАСССАОТСТССАТССТСССТОТСТОСАТСТСТАООАОАСАСг АОТСАССАТСАСТТОССАОТССАОТСАОААТОТТТАТААОААСААСТАСТТАТССТО ОТАТСАОСАОАААССАОООАААОТСССТААОСТССТаАТСТАТААаОСАТССАСТСТ аасАтстоооотсссАтстсатттсАатаосАатаоАтстаооАСАОАтттсАстст САССАТСАОСАОССТОСАОССТОААОАТОТТОСААСТТАТТАСТОТаСАООССОТТА ТАССАОТАОТАОТОАТААТОСПТСООСОаАООААССААаОТОаАААТСАААСОТ (Ж) ГО N0:231).
В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 32.
- 73 028913
ОАСАТССАОАТОАСССАОТСТССАТССТСССТОТСТОСАТСТОТАООАОАСАО АОТСАССАТСАСТТОССАОТССАОТСАОААТОТТТАТААОААСААСТАСТТАТССТО ОТАТСАССАСАААССАОСОАААОТСССТААОСТССТСАТСТАТААОаСАТССАСТСТ СОСАТСТООООТСССАТСТСаТТТСАОТООСАОТООАТСТОООАСАОАТТТСАСТСТ САССАТСАОСАОССТОСАОССТОААОАТОТТаСААСТТАТТАСТОТОСАОСЗСООТТА ТАССАОТАОТАОТОАТААТОСТТТСООСООАООААССААООТООАААТСАААСОТА СООТАОСОСССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТаАТСАССАОТТОАААТСТО ОААСТОССТСТСТТОТОТОССТССТОААТААСТТСТАТСССАаАОАССССАААОТАС АОТООААООТОСАТААСОСССТССААТССОСТААСТСССАООАОАОТОТСАСАОАО САООАСАОСААООАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТОАОСАААОС АОАСТАСОАОАААСАСАААОТСТАСОССТССОААОТСАСССАТСАОаОССТОАОСТ СССССОТСАСАААОАОСТТСААСАООООАСАОТСТТАО (8ЕР ГО ΝΟ: 232).
В другом варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с δΕΟ ΙΌ N0: 33.
ОАССтасАастоатооАотстсооооАаасттоотссАссстоооооотссс ТОАОАСТСТССТаТССАОССТСТСОАТТСАССОТСАОТАОСТАТОТААТОАТСТООС ТССОТСАООСТССАОаОААООООСТООАОТАСАТСаОААТСАСТТООАОТОСТСОТ АСАТАСТАСОСОАОСАОТОССААЛаОССОАТТСАССАТСТССАСАОАСААТТССАА ОААСАСССТОТАТСТТСАААТОААСАОССТОАОАОСТОАООАСАСТОСТОТОТАТТА СТОТССТСОАООТСОТООТАОТАТСТАТОАТАТТТОООаССААОООАСССТСОТСАС СОТСТСОАОС (ЗЕр ГО N0:233).
В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с δΕΟ ΙΌ N0: 34.
ОАООТОСАОСТООТООАОТСТОООООАСЗОСТГООТССАОССТООООООТССС ТОАОАСТСТССТОТОСАОССТСТООАТТСАССОТСАОТАОСТАТОТААТОАТСТООО ТССОТСАООСТССАОООААООООСТООАОТАСАТСООААТСАСТГООАатаСТСОТ АСАТАСТАСОСОАОСАОТОСОАААООССОАТТСАССАТСТССАОАОАСААТТССАА ОААСАСССТОТАТСТТСАААТСААСАОССТОАОАОСТОАООАСАСТОСТОТСТАТТА СТОТССТООАООТООТООТАОТАТСТАТОАТАТТГООООССААОООАСССТСаТСАС СОТСТССАССОССТССАССААОСОСССАТССОТСТТСССССТООСАСССТССТССАА ОАОСАССТСТОССООСАСАОСООСССТССССТОССТСОТСААООАСТАСТТССССС ААССООТОАССЗОТОТСОТаОААСТСАООСОСССТСАССАОСООССТОСАСАССТТС СССОСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТООТОАССОТСССС ТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТСАСААОСССАССАА САССААООТООАСААОАСАОТТОАОСССАААТСТТОТОАСААААСТСАСАСАТССС САССОТОСССАОСАССТОААСТССТООООООАССОТСАОТСТТССТСТТССССССАА ААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСАСАТОСОТООТООТО ОАСОТОАаССАСОААОАСССТОАОаТСААОГГСААСТООТАСОТаОАСОаСОТООА ООТОСАТААтеССААОАСАААОССОСООаАООАОСАОТАСОССАССАСаТАССОТа ТООТСАОСОТССТСАССОТССТаСАССАООАСТаССТОААТааСААааАОТАСААО ТССААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОААААССАТСТССАААаС САААОООСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОСССССАТССССООАООАОА ТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТОССТООТСАААООСТТСТАТСССАОСОАС АТСОССОТООАОТСООАОАОСААТОООСАОССООАОААСААСТАСААСАССАСОС СТСССОТССТООАСТСССАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТСАССОТООАСА АОАОСАООТООСАССАОООСААССТСТТСТСАТССТССОТОАТОСАТОАООСТСТС САСААССАСТАСАСОСАаААСАОССТСТСССТОТСТССООСТАААТОА <5Εζ) Ю ΝΟ:
234).
В дополнительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с δΕΟ ГО N0: 235; δΕΟ ГО N0: 236 и δΕΟ ГО N0: 237, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи δΕΟ ГО N0: 31 или последовательности легкой цепи δΕΟ ГО N0: 32.
В дополнительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты
- 74 028913
антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Ер Ιϋ N0: 238; 8Ер Ιϋ N0: 239 и 8Ер ГО N0: 240, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СБК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 33 или последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 34.
По изобретению также предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Ер Ιϋ N0: 231, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 31; полинуклеотид 8Ер Ιϋ N0: 232, кодирующий последовательность легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 32; полинуклеотид 8Ер Ιϋ N0: 233, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 33; полинуклеотид 8Ер Ιϋ N0: 234, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 34; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Ер Ιϋ N0: 235; 8Ер Ιϋ N0: 236 и 8Ер Ιϋ N0: 237) вариабельной последовательности легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 31 или последовательности легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 32; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Ер Ιϋ N0: 238; 8Ер Ιϋ N0: 239; и 8Ер Ιϋ N0: 240) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 33 или последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 34.
В предпочтительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания) для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ4, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ4, включают, или, иначе состоят из полинуклеотида с 8Ер Ιϋ N0: 232, кодирующего последовательность легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 32, и полинуклеотида с 8Ер Ιϋ N0: 234, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 34.
В другом варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессиив клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК-293, или в системе от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раз!опз. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ4 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, такие как АЬ4 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ4 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РРскРа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раз!ог13.
Антитело АЬ5.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование с целью лечения или профилактики боли и состояний, связанных с болью, полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ5, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ5. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения, полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Ер Ιϋ N0: 41.
СССТАТСАТАТОАСССАОАСТССАОССТСТСТССАООТАОСТСТОСОАСССА САОТСАССАТСААОТОССАООССАОТСАОАОСАТГТАСАОСААТТТАСССТООТАТС АССАСАСАССАОСССАСССТСССААОСТССТОАТСТАТОАТОСАТССАСТСТООААТ СТОСООТСССАТСОСООТТСАААООСАОТООАТСТОООАСАОАОТАСАСТСТСАСС АТСАСССОССТССАСТСТССССАТССТСССТСТТАСТАСТСТСААСАССОТТТТАСТ СТТАОТОАТАТТСАТААТССТТТСООСООАОООАССОАОСТООТСОТСАААССТ (8Ες>Ιϋ N0: 241).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Ер Ιϋ N0: 42.
- 75 028913
ОССТАТСАТАТОАСССАОАСТССАСССТСТОТССАСОТАССТОТОСОАСаСА САСТСАССАТСААОТОССАСОССАОТСАСАОСАТТТАСАОСААТТТАСССТООТАТС АССАОАОАССАОСОСАОССТСССААССТССТСАТСТАТОАТОСАТССАСТСТОСААТ СТООООТСССАТСОСООТГСАААаОСАОТООАТСТОООАСАОАОТАСАСТСТСАСС АТСАССООСОТООАОТОТОССОАТССТОССТСТТАСТАСТОТСААСАОООТТТТАСТ СТТАОТОАТАТТаАТААТаСТТТССССССАСОСАСССАССТССТССТСАААССТАС ССТАОССаССССАТСТОТСТТСАТСТТССССССАТСТСАТОАОСАОТТОАААТСТОО ААСТОССТСТаТТОТОТаССТОСТОААТААСТТСТАТСССАОАОАОСССАААСТАСА ОТООААООТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАООАОАОТаТСАСАОАОС АООАСАОСААООАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТОАОСАААОСА ОАСТАСОАСАААСАСАААОТСТАССССТССОААОТСАСССАТСАСОСССТОАССТС ОСССОТСАСАААСАССТТСААСАСОСОАОАСТОТТАО (ЗЕ<2 ΙΟΝΟ: 242).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 43.
САОТСОаТООАООАОТССОООООТСОССТООТСАСОССТОООАСАССССТОА САСТСАССТОСАСАОТСТСТООАТТСТСССТСАСТААСТАТССАСТСООСТОСОТСС СССАООСТССАОООААООООСТСОААТООАТСООААТСАТТООТСОТААТООТААС АСАТООТАСОСОАОСТОООСААОАООССОАТТСАССАТСТССААААССТСОАССАС ОаТСОАТСТСААААТСАССАОТССОАСААОСОАСОАСАСООССАСАТАТТТСТОТа ССАОАООАТАТООССОТАОТОТТОСТТАТТАСОТСТТТААСАТСТССООСССАООСА СССТСОТСАСССТСТСОАОС (8Εζ) ГО ΝΟ: 243).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 44.
САОТСООТООАООАОТССОООООТСОССТООТСАСОССТОООАСАССССТСА САСТСАССТОСАСАОТСТСТООАТТСТСССТСАОТААСТАТОСАОТОООСТСССТСС ОССАООСТССАОООААООООСТООААТООАТСООААТСАТТООТСОТААТООТААС АСАТООТАСОСОАОСТОООСААОАООССОАТТСАССАТСТССААААССТСОАССАС ООТСОАТСТОААААТСАССАОТССОАСААОСОАООАСАСООССАСАТАТТТСТОТО ССАОАООАТАТООССОТАОТОТТОСТТАТТАСОТСГГГААСАТСТООООСССАООСА СССТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСССССТООСАС ССТССТССААОАОСАССТСТаООаОСАСАОСООСССТОООСТОССТООТСААООАС ТАСТТССССОААССООТОАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАССАОСООСОГ ОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТООТ ОАССОТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТСАСА АОСССАОСААСАССААООТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОАСААААСТ САСАСАТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТООООООАССОТСАОТСТТССТС ТТССССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСАСАТОС ОТССТООТООАСОТОАОССАССААСАСССТОАССТСААОТТСААСТООТАСаГООА СООСОТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСОССАОС АСОТАССОТОТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАООАСТООСТОААТООСААО ОАОТАСААОТОСААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОААААССАТ СТССАААОССАААОООСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОСССССАТССС ОООАООАОАТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТОССТООТСАААООСТТСТАТ СССАОСОАСАТСОССОТООАОТОООАОАОСААТОООСАОССООАОААСААСТАСА АОАССАСОССТСССОТОСТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТСА ССОТООАСААОАОСАООТООСАОСАООООААСОТСТГСТСАТОСТССОТОАТОСАТ ОАООСТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТАААТО А (8Е0 ГО N0: 244).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8ЕЦ ГО N0: 245; 8ЕЦ ГО N0: 246; и 8ЕЦ ГО N0: 247, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 41 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 42.
- 76 028913
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 248; 8Е0 ГО ΝΟ: 249 и 8Е0 ГО ΝΟ: 250, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 4З или последовательности тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 44.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8ЕО ГО ΝΟ: 241, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 41; полинуклеотид 8ЕО ГО ΝΟ: 242, кодирующий последовательность легкой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 42; полинуклеотид 8ЕО ГО ΝΟ: 24З, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 4З; полинуклеотид 8ЕО ГО ΝΟ: 244, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 44; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8ЕО ГО ΝΟ: 245; 8ЕО ГО ΝΟ: 24б и 8ЕО ГО ΝΟ: 247) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 41 или последовательности легкой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 42 и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8ЕО ГО ΝΟ: 248; 8ЕО ГО ΝΟ: 249 и 8ЕО ГО ΝΟ: 250) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 4З или последовательности тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 44.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих ΡаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ5, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ5, включают, или, иначе состоят из полинуклеотида с 8ЕО ГО ΝΟ: 242, кодирующего последовательность легкой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 42, и полинуклеотида с 8ЕО ГО ΝΟ: 244, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 44.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, Ν8Ο, НЕК29З, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раЦогЫ В одном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), ΡаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ5 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ5 или его ΡаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ5 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, Ν8Ο или НЕК 29З, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раЦогЫ
Антитело АЬб.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬб, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬб. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, обладающие специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8ЕО ГО ΝΟ: 51.
ОАСАТССАОАТСАСССАОТСТССТГССАСССТОТСТОСАТСТОТАООАОАСАа АОТСАССАТСАСТТОССАССССАОТСАОАОСАТТГАСАССААТСТТОССТООТАТСА ОСАОАААССАООААААОССССТААОСТССТОАТСТАТОАТССАТССАСТСТООААТ СТОСАОТСССАТСААСОТТСАОСаОСАОТООАТСТаСОАСАОАОТАСАСТСТСАСС АТСАОСАОССТОСАОССТОАТОАТТТТССААСТТАСТАСТОССААСАОООТТТТАСТ ОТТАСТОАТАТТОАТААТОСТТТСООСООАаОААССААООТООАААТСАААСОТ (8Εί)ΙϋΝΟ: 251).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8ЕО ГО ΝΟ: 52.
- 77 028913
ОАСАТССАОАТОАСССАОТСТССТТССАСССТОТСТОСАТСТОТАООАОАСАО АОТСАССАТСАСТТОССАООССАОТСАОАОСАТТТАСАОСААТСТТОССТОСТАТСА ОСАОАААССАООААААОССССТААОСТССТОАТСТАТОАТОСАТССАСТСТОаААТ СТаОАСТСССАТСААООТТСАОСООСАСТООАТСТОООАСАОАОТАСАСТСТСАСС АТСАССАСССТОСАОССТОАТСАТТТТОСААСТТАСТАСТОССААСАОООТТТТАСТ СТТАСТОАТАТТСАТААТССТТТСОССООАСОААССААООТООАААТСАААССТАС ООТАОСООССССАТСТСТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТСАОСАОТТСАААТСТСС ААСТОССТСТОТТОТОТСССТОСТСААТААСТТСТАТСССАОАОАСОССАААОТАСА ОТООААООТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАООАОАОТСТСАСАСАСС АООАСАОСААООАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТОАОСАААОСА ОАСТАССАОАААСАСАААОТСТАССССТаССААОТСАСССАТСАОаОССТОАОСТС ОССССТСАСАААОАОСГГСААСАСОССАСАОТСТТАС (ЗЕО ГО N0: 252).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 53.
ОАСОТОСАССТОСТООАОТСТОСОООАОССТТООТССАОССТСОООООТССС ТОАСАСТСТССТаТОСАОССТСТОСАТГСАССОТСАОТААСТАТОСАОТОаОСТОаО ТСССТСАООСТССАООСААСОСССТООАОТОООТССОААТСАТТССТСОТААТСОТ ААСАСАТООТАСССОАОСТСТССААСАСОСССАТТСАССАТСТССАОАОАСААТТС СААОААСАСССТОТАТСТТСАААТОААСАОССТОАОАОСТОАСОАСАСТаСТОТСТ АТТАСТОТССТАСАООАТАТОСССОТАОТОТТОСТТАТТАССТСТТТААСАТСТОСО ССССАССОАСССТСОТСАССОТСТСОАСС (ЗЕО ПЗ ΝΟ: 253).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 54.
ОАООТОСАССТСОТССАСТСТСССССАОССТТООТССАСССТОСОССОТССС
ТОАОАСТСТССТОТОСАСССТСТОСАТТСАССОТСАОТААСТАТОСАОТССССТаОа
ТССОТСАООСТССАОООААООООСТООАОТОООТСООААТСАТТООГСОТААТООТ
ААСАСАТООТАСОСОАОСТСТССААОАОаССОАТТСАССАТСТССАОАОАСААТГС
СААОААСАСССТОТАТСТТСАААТОААСАОССТОАОАОСТОАООАСАСТОСТОТОТ
АТТАСТОТОСТАОАООАТАТООССОТАОТОТТОСТТАТТАСОТСТТТААСАТСТОСС
ОСССАОООАСССТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСС
СССТООСАСССТССТССААОАОСАССТСТССССОСАСАОСООСССТООССТСССТОС
ТСААООАСТАСТГССССОААССООТОАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАСС
АОСООССТССАСАССТТСССООСТОТССГАСАОТССТСАССАСТСТАСТСССТСАОС
аосотоотоассотоссстссаосаосттооосасссаоасстасатсгосаасото
ААТСАСААССССАССААСАССААССТССАСААСАСАОТТСАССССАААТСТТСТСА
саааастсасасатосссассотосссаосасстоаастсстооооооассотсао
ТСТТССТСТТССССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАОО
тсасатосотоотоотооасотоаоссасоааоассстоаоотсааоттсаастоо
ТАСОТООАСООСОТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТ
асоссаосасотассототоотсаосотсстсассотсстосассаооастоостоа
АТООСААОСАОТАСААОТОСААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАО
аааассатстссаааоссаааооосаоссссоаоаассасаоототасассстосс
сссатсссоооаосаоатоассааоаассаоотсаосстоасстосстсотсааао
осттстатсссаосоасатсоссотооаотоооаоаосаатооосаоссооаоаас
аастасааоассасосстсссотостооастссоасоостссттсттсстстасаос
ааостсассотооасааоаосаоотоосаосаооооаасотсттстсатостссот
оатосатоаоостстосасаассастасасосаоааоаосстстссстотстссооо
ΤΑΑΑΤΟΑ (ЗЕО ПЗ N0: 254).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8ЕЦ ГО N0: 255; 8ЕЦ ГО N0: 256 и 8ЕЦ ГО N0: 257, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОР, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 51 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 52.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирую- 78 028913
щие фрагменты для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 258; δΕΟ ГО ΝΟ: 259 и δΕΟ ГО ΝΟ: 260, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 53 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 54.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с δΕΟ ГО ΝΟ: 251, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 51; полинуклеотид δΕΟ ГО ΝΟ: 252, кодирующий последовательность легкой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 52; полинуклеотид δΕΟ ГО ΝΟ: 253, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 53; полинуклеотид δΕΟ ГО ΝΟ: 254, кодирующий последовательность тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 54; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (δΕΟ ГО ΝΟ: 255; δΕΟ ГО ΝΟ: 256 и δΕΟ ГО ΝΟ: 257) вариабельной последовательности легкой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 51 или последовательности легкой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 52 и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (δΕΟ ГО ΝΟ: 258; δΕΟ ГО ΝΟ: 259 и δΕΟ ГО ΝΟ: 260) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 53 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 54.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ6, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ6, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с δΕΟ ГО ΝΟ: 252, кодирующего последовательность легкой цепи δΕΟ ГО ΝΟ: 52, и полинуклеотида с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 254, кодирующего последовательность тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 54.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, ΝδΟ, ΗΕΚ293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз. В одном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ6 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ6 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ6 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, ΝδΟ или ΗΕΚ 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз.
Антитело АЬ7.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ7, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ7. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 61.
ОСССАТОТТОТСАТСАСССАОАСТССАСССТССОТСТСТСААССТОТСССАО ССАСАОТСАССАТСААОТОССАООССАОТОАООАСАТТТАТААСТГАТТССССТОСТ АТСАССАОАААССАССОСАОССТСССААОСТССТОАТСТАТТСТОСАТССАСТСТСО САТСТООСОТСССАТСаСОСТТСАААООСАСТООАТСТСССАСАОАОТАСАСТСТС АССАТСАОСООССТООАОТОТОССОАТОСТСССАСТТАСТАСТОТСААААСААТТАТ СТТОТТАСТАСТТАТООТОТТОСТТТСССССаАОООАССаАООТаатаОТСАААСОТ (5Ε0ΙΟΝΟ: 261).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ:62.
- 79 028913
ОССОАТОТТОТСАТСАСССАСАСТССАСССТСССТОТСТСААССТСТОаОАС ОСАСАОТСАССАТСААОТОССАССССАСТОАССАСАТТТАТААСТТАТТСОССТООТ АТСАОСАОАААССАОООСАСССТСССААОСТССТОАТСТАТТСТОСАТССАСТСТОО САТСТООССТСССАТСОСООТТСАААООСАОТСОАТСТООСАСАСАСТАСАСТСТС АССАТСАОСООССТООАОТСТОСССАТССТОССАСТТАСТАСТОТСААААСААТТАТ СТТОТТАСТАСТТАТОСТОТТССТТТССОСОСАСССАСССАССТССТООТСАААССТ АСОСТАСССЗСССССАТСТСТСТТСАТСТТСССОССАТСТСАТСАССАСТТСАААТСТ ООААСТОССТСТОТТОТОТОССТССТСААТААСТТСТАТСССАСАСАССССАААОТА САОТООААООТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАООАОАОТОТСАСАОА ОСАООАСАОСААССАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТОАССАААО САОАСТАСОАСАААСАСАААОТСТАСОССТОСОААОТСАСССАТСАОООССТОАОС ТСОССССТСАСАААСАОСТТСААСАСССОАОАСТСТТАО (5ЕЦ ГО N0:262).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 63.
САООАОСАОСТСААСОАСТССООаСОТСОССТОСТСАСОССТООСАСАСССС ТСАСАСТСАССТОТАСАСТСТСТОСАТТСТСССТСАОТАССТАТССААТСАТСТСОО ТССОССАООСТССАОООААООООСТООААТАСАТСООАТАСАТТОАТАСТОАТАСТ АОСОСАТАСТАСОСОАОСТОООТОАААООССОАТТСАССАТСТССАОААССТСОАС САСООТООАТСТСААААТСАСТАОТССОАСААССОАООАСАСООССАССТАТТТСТО ТОССАОАТСТТАТОСТССТТАТааТООТТАТССТОСТАСТТТТСАТСССТОСООСССА ООСАСССТСОТСАСССТСТССАОС (8ЕЦ ГО N0:263).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 64.
САСОАССАССТОААООАСТССОООССТСОССТООТСАСОССТООСАСАСССС ТОАСАСТСАССТОТАСАСТСТСТООАГГСТСССТСАОТАОСТАТОСААТОАТСТОСО ТСССССАСССТССАСССААСССССТСОААТАСАТСОСАТАСАТТОАТАСТСАТАСТ АОСОСАТАСТАСОСОАОСТОСОТОАААООССОАТТСАССАТСТССАОААССТСОАС САСООТССАТСТСААААТСАСТАОТССОАСААССОАООАСАСООССАССТАТТТСТО ТОССАСАТСТТАТОСТОСТТАТООТООТТАТССТОСТАСТТТТОАТСССТООООСССА СССАСССТССТСАСССТСТСОАССОССТССАССААССОСССАТСООТСТТСССССТС ОСАСССТССТССААСАССАССТСТОСОООСАСАССООСССТССОСТСССТООТСАА ООАСТАСТТССССОААССООТОАСООТОТССТООААСТСАаОСССССТСАССАССО ОСОТОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАОСАСТСТАСТСССТСАОСАОСО ТОаТОАССОТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТС АСААОСССАОСААСАССААООТОСАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОАСААА АСТСАСАСАТССССАСССТССССАОСАССТСААСТССТОССООСАСССТСАОТСТТС СТСТТССССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТССССОАССССТОАСОТСАСА ТОСОТООТООТООАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСААСТСОТАСОТ ООАСООСОТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСОСС АССАСОТАСССТСТССТСАСССТССТСАССОТССТОСАССАООАСТОССТСААТСОС ААССАСТАСААСТССААСОТСТССААСАААССССТСССАССССССАТСОАОААААС САТСТССАААОССАААОООСАОССССОАОААССАСАОСТСТАСАСССТОСССССАТ СССОСОАСОАСАТОАССААОААССАССТСАСССТОАССТСССТССТСАААООСТТС ТАТСССАОСОАСАТСССССТСОАСТСССАОАССААТССССАСССССАОААСААСТА СААСАССАСОССТСССОТССТСОАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТ САССОТСОАСААОАОСАООТООСАОСАООСОААСОТСТТСТСАТОСТССОТОАТОС АТОАОССТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТАААТ СА (5ЕЦ ГО N0:264).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8ЕЦ ГО N0: 265; §ЕЦ ГО N0: 266 и §ЕЦ ГО N0: 267, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОВ, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 61 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 62.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью,
- 80 028913
обладающие специфичностью связывания с ФРН включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ГО N0: 268; 8Е0 ГО N0: 269 и 8Е0 ГО N0: 270, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СИР, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 63 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 64.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Е0 ГО N0: 261, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 61; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 262, кодирующий последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 62; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 263, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 63; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 264, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 64; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 265; 8Е0 ГО N0: 266 и 8Е0 ГО N0: 267) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 61 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 62 и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 268; 8Е0 ГО N0: 269 и 8Е0 ГО N0: 270) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 63 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 64.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЪ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЪ7 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЪ7, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 262, кодирующего последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 62 и полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 264, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 64.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раНогй. В одном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), РаЪ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЪ7 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЪ7 или его РаЪ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЪ7 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раНогй.
Антитело АЪ8.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЪ8, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЪ8. Изобретение дополнительно необязательно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 71.
ОАСАТССАОАТОАСССАОТСТССАТССТСССТОТСТОСАТСТОТАОСАОАСАО АОТСАССАТСАСТТОССАООССАОТОАООАСАТТТАСААСТТАТТООССТООТАТСА ОСАОАААССАОООАААОТСССТААОСТССТОАТСТАТТСТОСАТССАСТСТООСАТС ТООООТСССАТСТСОТТТСАОТООСАОТООАТСТОСОАСАОАТТАСАСТСТСАССАТ САОСАОССТОСАОССТСААОАТОТТОСААСТТАТТАСТОТСААААСААСТАТСТТОТ ТАСТАСТТАТССТСТТССТТТСОаСООАООААССААООТООАААТСАААСОТ (ЗЕО ΙϋΝΟ: 271).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 72.
- 81 028913
ОАСАТССАОАТСАСССАСТСТССАТССТСССТСТСТОСАТСТСТАОСАСАСАО АОТСАССАТСАСТТОССАООССАОТСАООАСАТТТАСААСТТАТГООССТООТАТСА ССАОАААССАОООАААОТСССТААОСТССТОАТСТАТТСТОСАТССАСТСТСССАТС ТООООТСССАТСТСОТТТСАОТООСАОТООАТСТОООАСАОАТТАСАСТСТСАССАТ САОСАОССТОСАОССТОААОАТСгТТССААСТТАТТАСТОТСААААСААСТАТСТТОТ ТАСТАСТТАТСЮТСгТТОСТТТСССССОАООААССААООТООАААТСАААСОТАСООТ АОСООССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТГОАААТСТООААС ТСССТСТОТТОТОТСССТОСТОААТААСТТСТАТСССАОАОАООССАААОТАСАаТО ОААаСТССАТААСОСССТССААТССОСТААСТСССАООАОАОТОТСАСАОАОСАОО АСАОСААаОАСАОСАССГАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТСАОСАААОСАОАС ТАСаАОАААСАСАААОТСТАССССТСССААОГСАСССАТСАОООССТОАОСТСОСС СОТСАСАААОАОСТТСААСАССССАОАСТСТГАО ί$Εζ>ΤΟΝΟ: 272).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с БЕф ΙΌ ΝΘ: 73.
САООТАСАОСТОСТСОАОТСТООТССАСОССТООТССАОССТОСОАООТССС
ТОАОАСТСТССТСТССАОСТТСТООАТТСАССТТСАСТАССТАТССААТОАТСТСОО
ТСССССАООСТССАОООААООООСТООААТАСАТСООАТАСАТТОАТАСТОАТАСТ
АОСОСАТАСТАСОСААОСАОТОТОАААООССОАТТСАССАТСТССАОАСАСААТТС
СААОААСАСССТОТАССТОСАААТСТСТАСССТОАСАОСССАООАСАСООСТОТОТ АТТАСТОТОСТАСАТСТТАТОСТОСТТАТООТСОТТАТССТОСТАСТТТТОАТСССТа ОСОССААСОТАСССТСОТСАССОТСТСОАОС (8Е<3 ΙϋΝΟ: 273).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с БЕф ГО ΝΘ: 74.
САОаТАСАОСТООТООАОТСТООТООАаОСОТООТССАаССТОООАООТССС ТОАОАСТСТССТОТОСАССТТСТООАТТСАССТТСАаТАССТАТОСААТОАТСТСЗОО ТССОССАООСТССАОООААСССОСТСОААТАСАТСООАТАСАТТСАТАСТСАТАСТ АОСССАТАСТАСОСААОСАОТОТОАААООССОАТТСАССАТСТССАОАОАСААТТС СААОААСАСОСТОТАССТОСАААТОТСТАОССТОАОАОССОАООАСАСООСТОТОТ АТТАСТОТОСТАОАТСТТАТОСТОСТТАТООТООТТАТССТОСТАСТГТТОАТСССТО ООаССААООТАСССТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТ СССССТСССАСССТССТССААСАССАССТСТОСССОСАСАССааСССТОООСТОССТ ООТСААООАСТАСТТССССОААССООТОАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТСА ССАОСООСОТОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСА ОСАОСОТООТОАССОТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААС СТОААТСАСААССССАОСААСАССААООТСОАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТГа ТОАСААААСТСАСАСАТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТОаООООАССОТ САОТСТТССТСТТССССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТО АООТСАСАТОСОТСОТСОТООАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСААС ТООТАСОТСОАСООСОТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОС АОТАСОССАОСАССТАССОТОТООТСАОСОТССТСАССОТССТССАССАООАСТСОС ТОААТаОСААОаАаТАСААОТОСААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТС ОАОААААССАТСТССАААОССАААООаСАОССССОАОААССАСАСОТОТАСАСССТ ОСССССАТСССООСАООАОАТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТОССТООТСА ААООСТТСТАТСССАОСОАСАТСОССОТООАОТОООАОАОСААТОООСАОССООАО ААСААСТАСААОАССАСОССТСССОТОСТССАСТССОАССССТССТГСТТССТСТАС АОСААОСТСАССОТООАСААОАОСАООТООСАОСАСОООААСОТСТТСТСАТОСТС СОТОАТОСАТОАСОСТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАСССТСТСССТОТСТСС ОООТАААТОА (5Е0 ПЭ ΝΟ: 274).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с БЕф ГО ΝΘ: 275; БЕф ГО ΝΘ: 276 и БЕф ГО ΝΘ: 277, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СИК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи БЕф ГО ΝΘ: 71 или последовательности легкой цепи БЕф ГО ΝΘ: 72.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью,
- 82 028913
обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8ЕЦ ГО N0: 278; 8ЕЦ ГО N0: 279 и 8ЕЦ ГО N0: 280, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 73 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 74.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8ЕЦ ГО N0: 271, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 71; полинуклеотид 8ЕЦ ГО N0: 272, кодирующий последовательность легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 72; полинуклеотид 8ЕЦ ГО N0: 273, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 73; полинуклеотид 8ЕЦ ГО N0: 274, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 74; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 275; 8ЕЦ ГО N0: 276 и 8ЕЦ ГО N0: 277) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 71 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 72; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 278; 8ЕЦ ГО N0: 279 и 8ЕЦ ГО N0: 280) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 73 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 74.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ8 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ8, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8ЕЦ ГО N0: 272, кодирующего последовательность легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 72, и полинуклеотида с 8ЕЦ ГО N0: 274, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 74.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ра81оп8. В одном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ8 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ8 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ8 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ра81оп8.
Антитело АЬ9.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ9, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ9. Изобретение дополнительно необязательно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 81.
ОССТАТОАТАТОАСССАОАСТССАОССТСССТОТСТОСАОСТСГОООАООСА САОТСАССАТСААОТОССАООССАОТОАСААСАТТОСТАОСТАСТТАОССТООТАТС АОСАОАААССАОСОСАОССТСССОААСТССТСАТСТАСАОООСОТССАСТСТСССА ТСТСОООТСССАТСССООТТСАААООСАОТООАТСТСООАСАСАаТГСАСТСТСАСС АТСАССООСОТООАОТаТСССОАТОСТСССАСТТАСТАСТОТСААСАОООТТАТААТ АОТОАОААТСТТОАТААТОСТТТСООСООАОООАСССАООТООТООТСАААСОТ (8Е<ЗГОТТО: 281).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 82:
- 83 028913
ОССТАТОАТАТОАСССАОАСТССАОССТССОТОТСТОСАОСТОТОООАООСА САОТСАССАТСААОТОССАООССАОТОАОААСАТТСОТАОСТАСТТАОССТООТАТС АССАОАААССАОООСАСССТСССОААСТССТОАТСТАСАОООСОТССАСТСТООСА ТСТООООТСССАТСОСООТГСАААООСАОТСОАТСТОООАСАСАОТТСАСТСТСАСС АТСАОССаСаТООАСТОТСССОАТОСТОССАСТТАСТАСТОТСААСАООаТТАТААТ АОТОАОААТСТТОАТААТОСТТТСООСООАОООАССОАООТСОТООТСАААССТАС ОаТАОСООССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАААТСТОО ААСТОССТСТаТТОТатОССТОСТОААТААСТТСТАТСССАОАОАаОССАААОТАСА ОТООААООТООАТААСССССТССААТСОООТААСТСССАСОАОАОТОТСАСАОАОС АООАСАОСААСОАСАОСАССТАСАСССТСАОСАССАСССТСАСОСТОАОСАААОСА ОАСТАСОАОАААСАСАААОТСТАСОССТОСОААОТСАСССАТСАОООССТОАОСТС ОСССОТСАСАААОАОСТТСААСАООООАОАОТОТТАО (ЗЕО ГО N0:282).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Ε0 ГО N0: 83:
САОТСООТООАООАОТССОООООТСОССТСОТСАСОССТОООАСАССССТОА САСТСАССТОСАСАОТСТСТООААТСОАССТСАОТАТСТАТТСААТОООСТСООТСС ОССАОССТССАОООААОООССТСОААТАСАТСООАТООАТТАОТТАТСОТООТАСТ ОСАТАТТАСОСОАОСТОООСОААОООССОАТТСАССАТСТССААААССТССАССАС ООТООАОСТОААОАТСАССАОТССОАСААТСОАООАСАСООССАССТА'ПТСТОТО ССАОАОАОАСТССТОТТААТТАТТАТТТООАСАТТТООООССАОООаАСССТСОТСА ССОТСТСОАОС (ЗЕО ГО N0:283).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Ε0 ГО N0: 84:
САОТСООТООАООАОТССОООООТСОССТООТСАСОССТОООАСАССССТОА САСТСАССТОСАСАОТСТСТСОААТСОАССТСАОТАТОТАТТСААТОООСТОСОТСС ОССАОССТССАОООААООООСТООААТАСАТСООАТООАТТАОТТАТООТООТАСТ ОСАТАТТАСОСОАОСТОООСОААОООССОАТТСАССАТСТССААААССТСОАССАС ООТаОАОСТОААОАТСАССАОТССОАСААТСОАССАСАССОССАССТАТТТСТОТО ССАОАСАОАСТССТОТТААТТАТТАТТТООАСАТТТООООССАООООАСССТСОТСА ССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСССТСТТСССССТООСАСССТССТССА АОАОСАССТСТОООООСАСАОСООСССТОООСТОССТСОТСААОСАСТАСТТСССС ОААСССОТСАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАССАОСООСОТОСАСАССТТ СССООСТОТССТАСАОТССТСАСОАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТООТОАССОТССС СТССАОСАОСТТОСОСАСССАСАССТАСАТСТОСААСОТОААТСАСААОСССАОСА АСАССААООТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОАСААААСТСАСАСАТОС ССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТООООООАССОТСАОТСТТССТСТТССССССА АААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСАСАТОСОТООТООТ ООАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСААСТООТАСОТООАСООСОТОО АООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСОССАОСАСОТАССОТ ОТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАООАСТООСТОААТООСААСОАОТАСАА ОТОСААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОААААССАТСТССАААО ССАААОООСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОСССССАТСССОООАООАО АТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТСССТСОТСАААООСТТСТАТСССАОСОА САТСОССОТООАОТОООАОАОСААТООаСАОССООАОААСААСТАСААОАССАСС ССТСССОТОСТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТСАССОТООАС ААСАОСАООТООСАОСАООООААСОТСТТСТСАТОСТССОТОАТОСАТОАООСТСТ ОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТАААТОА (ЗЕО Ш N0: 284).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Ε0 ГО N0: 285; 8Ε0 ГО N0: 286 и 8Ε0 ГО N0: 287, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СИК, или
- 84 028913
гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 81 или последовательности легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 82.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Ер Ιϋ N0: 288; 8Ер Ιϋ N0: 289 и 8Ер Ιϋ N0: 290, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СВР, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 83 или последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 84.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Ер Ιϋ N0: 281, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 81; полинуклеотид 8Ер Ιϋ N0: 282, кодирующий последовательность легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 82; полинуклеотид 8Ер Ιϋ N0: 283, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 83; полинуклеотид 8Ер Ιϋ N0: 284, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 84; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Ер Ιϋ N0: 285; 8Ер Ιϋ N0: 286 и 8Ер ГО N0: 287) вариабельной последовательности легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 81 или последовательности легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 82; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Ер Ιϋ N0: 288; 8Ер Ιϋ N0: 289 и 8Ер Ιϋ N0: 290) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 83 или последовательности тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 84.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ9 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ9, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Ер Ιϋ N0: 282, кодирующего последовательность легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 82, и полинуклеотида с 8Ер Ιϋ N0: 284, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Ер Ιϋ N0: 84.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ра^опз. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ9 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ9 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ9 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные Р1сЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раз1ог18.
Антитело АЬ10.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ10, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ10. Изобретение дополнительно необязательно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Ер Ιϋ N0: 91:
СССТАТСАТАТСАСССАСТСТССАТССТСССТОТСТССАТСТОТАОСАОАСАО АОТСАССАТСАСТТОССАООССАОТОАОААСАТГООТАОСТАСТТАОССТООТАТСА ОСАОАААССАСССАААОТСССТААОСТССТОАТСТАТАССССТТССАСТСТСОСАТС ТСОООТСССАТСТСОГГТСАОТОССАОТОСАТСТССОАСАСАТТТСАСТСТСАССАТ САОСАСССТССАОССТСААОАТОТТОСААСТТАТТАСТСТСААСАСОСТТАСААТАО ТОАОААТСТГОАТААТССТТТСООСООАООААССААОСТООАААТСАААСОТ (ЗЕф ΙΩΝΟ: 291).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Ер Ιϋ N0: 92:
- 85 028913
ОССТАТСАТАТСАСССАОТСТССАТССТСССТОТСТОСАТСТОТАОСАОАСАО
АОТСАССАТСАСТТОССАООССАОТОАОААСАТТООТАОСТАСТГАОССТООТАТСА
ОСАСАААССАСОСАААСТСССТААОСТССТСАТСТАТАООССТТССАСТСТООСАТС
ТОООСТСССАТСТСОТТТСАОТООСАОТССАТСТОООАСАОАТТТСАСТСТСАССАТ
САОСАОССТОСАОССТСААОАТОТТОСААСТТАТТАСТОТСААСАОСОТТАСААТАО
ТОАОААТСГГОАТААТССТТТСООСООАООААССААООТООАААТСАААСОТАСОО
ТАОСООССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАААТСТООАА
СТОССТСТаТТОТОТОССТОСТОААТААСТТСТАТСССАСАОАССССАААОГАСАОТ
ООААаОТООАТААССЗСССТССААТССООТААСТСССАООАОАОТОТСАСАСАССАС
ОАСАОСААССАСАССАССТАСАОССТСАССАОСАСССТОАСОСТОАОСАААОСАОА
СТАСОАОАААСАСАААОТСТАСОССТССОААОТСАСССАТСАОООССТОАаСТСОС
ССОТСАСАААСАОСТТСААСАООООАОАОТОТТАО (К ЕС) ГО ΝΟ: 292).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с ЗЕф ΙΌ Ν0: 93:
САООТАСАОСТОаТССАСТСТООТООАООССТОСТССАОССТОаОАООТССС ТСАОАСТСТССТОТОСАОСТТСТООАТТСАССТТСАОТАТОТАТТСААТОООСТОООТ СССССАООСТССАОООААООООСТООААТАСАТСООАТООАТТАОТТАТООТООТА СТОСАТАСТАСОСТАОСАОСОСТААОООССОАТТСАССАТСТССАОАОАСААТТССА АОААСАСОСТОТАССТОСАААТСТСТАОССТОАОАОССОАСОАСАСОССТОТОТАТ ТАСТОТОСТАСАСАСАСТССТОТТААТТАСТАСТТООАСАТТТООООССААООТАСС СТСОТСАССОТСТСОАОС (КЕС) ГО ΝΟ: 293).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с ЗЕф ГО Ν0: 94:
САООТАСАОСТООТООАОТСТООТООАООССТСОТССАОССТОООАООТССС ТОАОАСТСТССТОТОСАОСТТСТООАТТСАССТТСАОТАТОТАТТСААТОООСТОООТ СССССАООСТССАОООААООООСТООААТАСАТСООАТООАТТАОТТАТООТООТА СТОСАТАСТАСОСТАОСАОСОСТААОООССОАТТСАССАТСТССАСАОАСААТГССА АОААСАСОСТОТАССТОСАААТОТСТАОССТОАОАОССОАООАСАСООСТОТОТАТ ТАСТОТОСТАОАОАОАСТССТОТТААТТАСТАСТТООАСАТТТООООССААООТАСС СТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСССССТООСАССС ТССТССААОАОСАССТСТОООООСАСАОСООСССТОСССТСССТССТСААССАСТА СТТССССОААССООТОАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАССАОСООСОТОС АСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТООТОА ССОТССССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТСАСААОС ССАССААСАССААООТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОАСААААСТСАС АСАТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТООООООАССОТСАОТСТТССТСТТС СССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСАСАТОСОТО ОТООТООАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСААСТООТАСОТООАСОО СОТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСОССАОСАСО ТАССОТОТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАСОАСТООСТОААТООСААООА ОТАСААОТОСААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОААААССАТСТ ССАААСССАААОООСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОСССССАТСССОО ОАООАОАТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТОССТООТСАААООСТТСТАТСС САОССАСАТСОССОТООАОТОООАОАОСААТОООСАОССООАОААСААСТАСААО АССАСОССТСССОТОСТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТСАСС ОТООАСААОАОСАООТООСАОСАООООААСОТСТТСТСАТССТССОТОАТОСАТОА ООСТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТАААТОА (8Е<3 ГО N0: 294).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с ЗЕф ГО Ν0: 295; ЗЕф ГО Ν0: 296 и ЗЕф ГО Ν0: 297, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СИК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 91 или после- 86 028913
довательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 92.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ГО N0: 298; 8Е0 ГО N0: 299 и 8Е0 ГО N0: 300, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 93 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 94.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Е0 ГО N0: 291, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 91; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 292, кодирующий последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 92; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 293, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 93; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 294, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 94; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 295; 8Е0 ГО N0: 296 и 8Е0 ГО N0: 297) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 91 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 92; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 298; 8Е0 ГО N0: 299 и 8Е0 ГО N0: 300) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 93 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 94.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ10 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ10, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 292, кодирующего последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 92, и полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 294, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 94.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ10 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ10 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ10 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз.
Антитело АЬ11.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ11, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ11. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 101:
ОСАТТСОААТТОАСССАОАСТССАТССТССОТООАООСАОСТОТССОАСОСА САОТСАССАТСААОТОССАООССАОТСАОААСАТГОТТАССААТТТАОССТООТАТС ААСАОАААССАОСССАОССТСССААОСТССТОАТСТАТООТОСАТССАСТСТООСАТ СТООООТСТСАТССССОТТСАААООСАОТООАТСТОООАСАСАОТГСАСТСТСАССА ТСАОСОАССТООАСгТаТСССОАТОСТОССАСТТАТТТСТОТСАОАССТАТСАТССТГТ ТТААТАОТОСТООаТТСООСООАООСАСССАОСТСЗСТСОТСАААСОТ (ЗЕр Ιϋ ΝΟ:
301).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 102:
- 87 028913
ОСАТТСОААТТОАСССАОАСТССАТССТССОТССАСССАССТОТСССАСССА
САОТСАССАТСААОТОССАООССАОТСАОААСАТТОТТАССААТТТАОССТООТАТС
ААСАОАААССАОООСАОССТСССААССТССТСАТСТАТаСТОСАТССАСТСТОССАТ
СТООООТСТСАТСОСОаГГСАААООСАОТООАТСТОООАСАСАОТТСАСТСТСАССА
ТСАОСаАССТООАОТаТОССОАТаСТаССАСТТАТТТСТСТСАаАССТАТОАТОСТТ
ТТААТАОТОСТОООТТСООСООАОООАССОАООТООТООТСАААСОТАСООТАОСО
СССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТСАААТСТОСААСТОССТ
СТОТТОТОТСССТОСТОААТААСТТСТАТСССАОАОАООССАААОТАСАОТООААОО
ТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАООАОАОТОГСАСАОАОСАОСАСАСС
ААООАСАОСАССТАСАОССТСАаСАОСАСССТОАСССТСАОСАААССАСАСТАССА
ОАААСАСАААОТСТАСОССТаСОААОТСАСССАТСАОООССТОАОСТСОСССОТСА
САААОАССТТСААСАООООАОАОТОТТАО (8Е<3 10 N0: 302).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 103:
САОТСОСТООАООАОТССОООООТСОССТООТСАСОССТОООАСАССССТОА САСТСАССТОСАСАОССТСТСОАТТСТСССТСАОТООСТАСОАСАТаАОСТОООТСС ОССАООСТССАООАААОООаСТООААТАСАТСаСАСТСАТТАОТТАТОАТОаТААС АСАТАСТАСаСОАССТОООСОАААООССОАТГСАССАТСТССААААССТСОАССАС ООТаОАТСТаААААТСАССАОТССОАСААССОАаОАСАСООССАССТАТТТСТОТа ССАОААОТСТТТАТОСТОаТССТААТаСТООТАТСООАССОТТТААСАТСТООООСС АООСОАСССТСОТСАССОТСТСОАОС (ЗЕГ) ПЗ N0: 303).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 104:
САОТСОСТООАООАОТССОаООаТСОССТООТСАСОССТОаОАСАССССТОА САСТСАССТОСАСАОССТСТООАТТСТСССТСАОТООСТАСОАСАТОАОСТОООТСС ОССАООСТССАССАААСССОСТООААТАСАТСООАСТСАТТАОТТАТОАТСОТААС АСАТАСТАСОСОАССТОООСОАААООССОАТТСАССАТСТССААААССТСОАССАС ООТООАТСТОААААТСАССАОТССОАСААССОАООАСАСООССАССТАТТТСТОТО ССАОААОТСТТГАТОСТООТССТААТОСТООТАТСООАССОТТТААСАТСТООООСС АООООАСССТСОТСАССОТСТССАСССССТССАССААСООСССАТСССТСТТССССС ТООСАсССТССТССаАОАОСАССТСТОООООСАСАОСООСССТОООСТОССТООТСА АООАСТАСТТССССОААССООТОАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАССАОС ООСОТОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАСТССТСАСОАСТСТАСТСССТСАОСАСС ОТООТОАССОТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАСАССТАСАТСТССААСОТОААТ САСААОСССАОСААСАССААООТООАСААаАОАСТТОАОСССАААТСТТОТОАСАА ААСТСАСАСАТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТаООССОАСССТСАОТСТТ ССТСТТССССССААААСССААОСАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСАС АТОСОТООТООТООАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСААСТООТАСО ТаОАСООСОТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСОС САОСАСОТАССОТОТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАООАСТСССТОААТОО СААООАОТАСААОТОСААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОАААА ССАТСТССАААОССАААОООСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОСССССА ТСССОООАООАОАТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТОССТООТСАААООСТТ СТАТСССАОСОАСАТСОССОТООАОТОООАОАОСААТОООСАССССОАОААСААСТ АСААОАССАСОССТСССОТОСТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОС ТСАССОТООАСААОАОСАООТООСАОСАаОООААСОТСТТСТСАТОСТССОТСАТО САТОАООСТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТААА ТОА (КЕО Ш N0:304).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с ЗЕО ГО N0: 305; ЗЕО ГО N0: 306 и ЗЕО ГО N0: 307, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 101 или последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 102.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, фрагменты, обладаю- 88 028913
щие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ГО N0: 308; 8Е0 ГО N0: 309 и 8Е0 ГО N0: 310, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 103 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 104.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Е0 ГО N0: 301, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 101; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 302, кодирующий последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 102; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 303, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 103; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 304, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 104; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 305; 8Е0 ГО N0: 306 и 8Е0 ГО N0: 307) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 101 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 102; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 308; 8Е0 ГО N0: 309 и 8Е0 ГО N0: 310) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 103 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 104.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ11 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ11, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 302, кодирующего последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 102, и полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 304, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 104.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз. В одном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ11 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом необязательном варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ11 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ11 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз.
Антитело АЬ12.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ12, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ12. Изобретение дополнительно необязательно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 111:
ОСАТТССАОАТОАСССАОТСТССАТССТСССТОТСТОСАТСТаТАООАОАСАО АОТСАССАТСАСТТОССАООССАОТСАОААСАТТОТТАССААСТТАОССТООТАТСА аСАОАААССАОООАААОТСССТААОСТССТОАТСТАТСОТОСАТССАСТСТСОСАТС ТОССОТСССАТСТССТТТСАОТООСАОТаОАТСТСОаАСАаАТТТСАСТСТСАССАТ САОСАОССТОСАОССТСААОАТОТТОСААСТТАТТАСТОТСАОАОСТАТОАТООТТТ СААТАОТОСТООТТГСООСООАООААССААаОТООАААТСАААСОТ (ЙЕО Ш N0:
311).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 112:
- 89 028913
ССАТТССАОАТОАСССАОТСТССАТССТСССТОТСТОСАТСТОТАООАОАСАО АОТСАССАТСАСТТаССАООССАОТСАОААСАТТОТТАССААСТТАОССТСОТАТСА ОСАОАААССАОООАААОТСССТААОСТССТОАТСТАТООТССАТССАСТСТОССАТС ТСООСТСССАТСТСОТТТСАатаОСАОТООАТСТОООАСАОАГГТСАСТСТСАССАТ САОСАОССТОСАОССТСААОАТСТТОСААСТТАТТАСТатСАОАаСТАТОАТОСТТТ СААТАОТОСТОаТТТСООСООАООААССААООТООАААТСАААСОТАСООТАОСОО ССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТСАААТСТООААСТаССТС ТОТТаТСтасСТОСТОААТААСТТСТАТСССАОАОАООССАААОТАСАОТаОААООТ ООАТААСОСССТССААТСОаОТААСТСССАООАОАОТОТСАСАОАОСАООАСАОСА АаОАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТаАОСАААОСАаАСТАСОАО АААСАСАААОТСТАСОССТОСОААОТСАСССАТСАССОССТОАОСТСаСССОТСАС АААОАОСТТСААСАОаОСАСАОТОТТАО (8ЕЦ Ю N0: 312).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с δΕρ ΙΌ ΝΟ: 113:
САООТАСАОСТООТаОАОТСТССТСОАООСОТОаТССАСССТСССАССТССС
ТОАОАСТСТССТОТОСАОСТТСТООАТТСТСССТСАОТООСТАСОАСАТОАОСТООО
ТСССТСАООСТССАОССААОООАСТООАаТОаОТОООАСТСАТТАОТТАТСАТООТ
ААСАСАТАСТАСОСОАССТССОССАААООССОАТТСАССАТСТССАОАОАСААТТС
СААОААСАСОСТСТАССТССАААТСТСТАОССТОАОАСССОАООАСАСООСТОТОТ
АТТАСТОТОСТАОААОТСТТТАТССТООТССТААТОСТООТАТСООАССОТТТААСАТ
СТООООССААООТАСССТСОТСАССОТСТСОАОС (ЗЕС) ГО N0: 313).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с δΕρ ΙΌ ΝΟ: 114:
САООТАСАОСТООТООАОТСТСОТООАООСОТООТССАОССТСЗООАОСТССС ТОАОАСТСТССТОТОСАОСТТСТООАТТСТСССТСАОТаОСТАСОАСАТОАОСТООО ТССОТСАООСТССАООСААОООАСТООАОТОООТОООАСГСАТТАОТТАТОАТООТ ААСАСАТАСТАСОСОАССТССОСОАААООССОАТГСАССАТСТССАОАОАСААТТС СААОААСАСОСТОТАССТОСАААТОТСТАОССТОАОАОССОАООАСАССОСТОТСТ АТТАСТСТОСТАОААОТСТТТАТССТООТССТААТССТСЮТАТСООАССОТТТААСАТ СТСОООССААООТАСССТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТ СТГСССССТООСАСССТССТССААОАОСАССТСТОООООСАСАОСООСССТСООСТО ССТООТСААСОАСТАСТТССССОААССООТОАССОТОТСОТООААСТСАООСОСССТ ОАССАОСООСОТОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТ САОСАОСОТООТОАССОТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТССА АСОТОААТСАСААОСССАОСААСАССААООТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТ ТСТОАСААААСТСАСАСАТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТООООООАСС ОТСАОТСТТССТСТТССССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАСССС ТОАООТСАСАТССОТООТООТСОАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСА АСТООТАСОТООАСООСОТООАООТОСАТААТСССААОАСАААОССОСОООАООА ССАСТАССССАССАССТАСССТОТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАООАСТО ССТОААТООСААОСАОТАСААОТССААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССА ТССАОААААССАТСТССАААОССАААОООСАОССССОАОААССАСАООТСТАСАСС СТОСССССАТСССОООАООАОАТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТОССТООТ САААООСТТСТАТСССАОССАСАТСОССОТОСАОТОООАОАОСААТОООСАОССОО АОААСААСТАСААСАССАССССТССССТССТССАСТСССАССОСТССТТСТТССТСТ АСАССААССТСАССОТООАСААСАССАССТСССАССАОСООААССТСТТСТСАТСС ТССОТОАТОСАТОАООСТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТ ССОООТАААТСА (ЗЕр ГО N0:314).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с δΕρ ГО ΝΟ: 315; δΕρ ГО ΝΟ: 316 и δΕρ ГО ΝΟ: 317, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи δΕρ ΙΌ ΝΟ: 111 или после- 90 028913
довательности легкой цепи 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 112.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ГО ΝΟ: З18; 8Е0 ГО ΝΟ: З19 и 8Е0 ГО ΝΟ: З20, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 11З или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 114.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Е0 ГО ΝΟ: З11, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 111; полинуклеотид 8Е0 ГО ΝΟ: З12, кодирующий последовательность легкой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 112; полинуклеотид 8Е0 ГО ΝΟ: З1З, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 11З; полинуклеотид 8Е0 ГО ΝΟ: З14, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 114; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО ΝΟ: З15; 8Е0 ГО ΝΟ: З1б; и 8Е0 ГО ΝΟ: З17) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 111 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 112; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО ΝΟ: З18; 8Е0 ГО ΝΟ: З19 и 8Е0 ГО ΝΟ: З20) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 11З или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 114.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих ΡаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ12 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ12, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Е0 ГО ΝΟ: З12, кодирующего последовательность легкой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 112, и полинуклеотида с 8Е0 ГО ΝΟ: З14, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО ΝΟ: 114.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, Ν8Ο, НЕК29З, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раЦогЫ В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), ΡаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ12 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ12 или его ΡаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ12 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, Ν8Ο или НЕК 29З, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раЦогЫ
Антитело АЬ1З.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ1З, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ1З. Изобретение дополнительно необязательно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО ΝΟ: 121:
ОССОССОТОСТОАСССАОАСТССАТСТСССОТОТСТОСАОСТОТОООАООСА САОТСАССАТСАОТТОССАОТССАСТСАОААТОТТТАТААСААСААСТАСТТАТССТ СОТАТСАССАОАААССАСООСАСССТСССААССТССТОАТСТАСААООСАТССАСТ СТОССАТСТОаООТСССАТСОСОСТТСАААООСОСТООАТСТСООАСАОАТТТСАСТ СТСАССАТСАОСОАСОТОСАОТОТОАСОСТОСТОССАСТТАСТАСТОТОСАООСОСТ ТАТАССАОТАОТАОТОАТААТОСТТТСООСООАОООАССОАОСТООТООТСАААСО Τ (КЕр Ю N0: 321).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО ΝΟ: 122:
- 91 028913
ОССОССОТОСТОАСССАСАСТССАТСТСССОТСТСТОСАОСТОТОООАООСА САСТСАССАТСАОТТОССАОТССАСТСАОААТОТТТАТААОААСААСТАСТТАТССТ ССТАТСАССАОАААССАССССАСССТСССААССТССТСАТСТАСААСССАТССАСТ СТСОСАТСТОСССТСССАТСОССОТТСАААаОСССТСОАТСТСОСАСАОАТТТСАСТ стсассатсассоасотосаототсасостсстсссасттастастотосаоосоот ТАТАССАСТАОТАОТОАТААТОСТТТССССССАСССАССОАООТСОТООТСАААСО ТАСОСТАССООССССАТСТСТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАСТТОАААТС ТООААСТСССТСТОТТОТОТОССТОСТОААТААСГГСТАТСССАОАОАООССАААОТ АСАОТООААСОТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАООАОАОТОТСАСАО АОСАССАСАОСААСОАСАОСАССТАСАОССТСАОСАССАСССТОАСОСТОАССААА ОСАаАСТАССАОАААСАСАААОТСТАССССТОСОААОТСАСССАТСАООСССТСАС СТСОСССОТСАСАААОАОСТТСААСАООООАОАОТОТТА (5Εζ) ГО N0: 322).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 123:
САСТСССТССАООССТССОООООТСОССТСОТСАСОССТООСАСАССССТОА САСТСАССТОСАСАОССТСТаОАТТСТСССТСАСТАССТАСТаОАТОАОСТСОаТСС ОССАСССТССАСССААООСССТаОААТООАТСООАСАСАТГГАТТТТАОТААТОАА ОАААСАААСТАСОСОАОСТООСССАААСССССАТТТАССАТСТССААААССТССАС САСООТООАТСТОААТОТСАТСАСТССОАСААСССАОаАСАСОСССАССТАТТТСТС ТОССАОАООТТСТССТСАТСТТСАТАТТСОТАТАСАТАТСТСССОСССООССАСССТ СОТСАССОТСТСОАОС (5Е<3 ГО N0:323).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 124:
САОТСООТООАООСОТССОООООТСОССТООТСАСОССТОООАСАССССТОА САСТСАССТОСАСАОССТСТООАТТСТСССТСАОТАССТАСТООАТОАОСТОООТСС ОССАООСТССАОООААООООСТООААТООАТСОСАОАСАТТТАТПТАОТААТОАА ОАААСАААСТАСОСОАОСТОООСОАААООССОАТТТАССАТСТССААААССТСОАС САСООТООАТСТОААТОТСАТСАОТССОАСААССОАООАСАСООССАССТАТТТСТО ТОССАОАООТТСТССТОАТОТТОАТАТТООТАТАОАТАТОТООООСССОООСАСССТ СОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСССССТООСАСССТС СТССААОАОСАССТСТОООООСАСАОСООСССТОООСТОССТООТСААООАСТАСТ ТССССОААССООТСАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАССАОСООССТССАС АССТТССССССТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТООТСАСС ОТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТСАСААОССС АОСААСАССААООТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОАСААААСТСАСАС АТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТООООООАССОТСАОТСТТССТСТТССС СССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСАСАТОСОТООТ ООТООАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСАА01ТСААСТООТАСОТООАСООСО ТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСОССАОСАСОТА СССТОТООТСАСССТССТСАССОТССТОСАССАООАСТСССТОААТООСААООАОТ АСААСТССААССТСТССААСАААССССТСССАОСССССАТСОАОААААССАТСТСС АААОССАААОООСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОСССССАТСССОООА ООАОАТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТОССТООТСАААООСТТСТАТСССА ОСОАСАТСОССОТООАОТОООАОАОСААТОООСАОССООАОААСААСТАСААСАС САСОССТСССОТОСТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТСАССОТ ООАСААОАОСАООТООСАОСАООООААСОТСТТСТСАТОСТССОТОАТОСАТОАОО СТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТАААТОА (8ЕЦ ГО N0: 324).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 325; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 326 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 327, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или
- 92 028913
гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 121 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 122.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ГО N0: 328; 8Е0 ГО N0: 329 и 8Е0 ГО N0: 330, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СИР, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 123 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 124.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Е0 ГО N0: 321, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 121; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 322, кодирующий последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 122; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 323, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 123; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 324, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 124; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 325; 8Е0 ГО N0: 326 и 8Е0 ГО N0: 327) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 121 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 122; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 328; 8Е0 ГО N0: 329 и 8Е0 ГО N0: 330) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 123 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 124.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЪ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЪ13 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЪ13, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 322, кодирующего последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 122, и полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 324, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 124.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раНогщ В одном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), РаЪ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЪ13 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЪ13 или его РаЪ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЪ13 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раНогй.
Антитело АЪ14.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЪ14, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЪ14. Изобретение дополнительно необязательно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 131:
ОАСАТССАСАТСАСССАОТСТССАТССТСССТОТСТОСАТСТОТАООАОАСАО АСТСАССАТСАСТТОССАОТССАОТСАСААТОТТТАТААСААСААСТАСТТАТССТО ОТАТСАОСАОАААССАОООАААОТСССТААОСТССТОАГСТАТААООСАТССАСТСТ ООСАТСТООаОТСССАТСТСОГГТСАОТОССАСТСОАТСТОООАСАОАТТТСАСТСТ САССАТСАОСАОССТССАОССТОААОАТСТТаСААСТТАТТАСТОТОСАаОСаОТТА ТАССАОТАСТАОТОАТААТССТТТССОСООАООААССААООТССАААТСАААСОТ (ЗЕО Ю N0: 331).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей поли- 93 028913
пептидную последовательность легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 132:
ОАСАТССАОАТСАСССАСТСТССАТССТСССТОТСТОСАТСТСТАООАСАСАО
АОТСАССАТСАСТТОССАОТССАОТСАОААТОТТТАТААОААСААСТАСТТАТССТО
СТАТСАОСАОАААССАОООАААОТСССТААОСТССТОАТСТАТААООСАТССАСТСТ
ОССАТСТООООТСССАТСТСОТТТСАОТООСАОТООАТСТООСАСАОАТТТСАСТСТ
САССАТСАОСАОССТОСАСССТОААОАТОТТОСААСТТАТТАСТОТОСАООСООТТА
ТАССАОТАОТАОТОАТААТОСТТТСООСООАООААССААООТООАААТСАААСОТА
СООТАССООССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТСАТОАОСАСТТСАААТСТС
ОААСТОССТСТОТТОТОТОССТОСТОААТААСТТСТАТСССАОАОАСОССАААСТАС
АОТООААаОТОалТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАаОАОАОТОТСАСАСАС
САООАСАССААООАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТСАСССТСАОСАААОС
АОАСТАСОАОАААСАСАААОТСТАСОССТОССААОТСАСССАТСАОаОССТОАОСТ
СОСССОТСАСАААОАОСТТСААСАООСОАОАОТСТТАО (5ЕЦ ΙϋΝΟ: 332).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 133:
ОАООТОСАОСТСКЗТСОАОТСТОООООАООСТТООТССАОССТООООООТССС ТСАСАСТСТССТСТССАСССТСТССАТТСАССОТСАСТАССТАСТОСАТСАОСТООО ТСССТСАООСТССАОСОААООООСТООАОТОООТСООАОАСАТТТАСТТТАОТААТ ОААОАААСАААСТАССССАССАОСОСОАААОСгССОАТТСАССАТСТССАОАОАСА АТТССААОААСАСССТСТАТСТТСАААТОААСАСССТСАСАОСТСАССАСАСТОСТ СТСТАТТАСТОТОСТАОАООТТСТССТСАТСТТСАТАТТООТАТАСАТАТОТООССС ССАОООАСССТСОТСАССОТСТСОАОС (ЗЕОΙΟΝΟ: 333).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 134:
ОАООТОСАОСТООТССАСТСТОООООАООСТТСОТССАОССТООООООТССС
ТОАОАСТСТССТОТОСАОССТСТООАТТСАССОТСАОТАССТАСТООАТОАОСТООО
ТССОТСАООСТССАООСААООСОСТООАОТОООТСООАСАСАТТТАСТТТАОТААТ
ОААОАААСАААСТАСССОАССАОСОСОАААООССОАТТСАССАТСТССАОАОАСА
АТТССААОААСАСССТОТАТСТТСАААТОААСАОССТОАОАССТСАСОАСАСТОСТ
ОТОТАТТАСТОТОСТАОАОСТТСТССТОАТОТТОАТАТТОСТАТАОАТАТОТООООС
ССАОСОАСССТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСССС
СТОССАСССТССТССААОАОСАССТСТОООООСАСАОСООСССТОООСТОССТООТС
ААООАСТАСТТССССОААССООТОАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАССАО
СООСОТОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОСАО
СОТООТОАССОТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОАА
ТСАСААОСССАОСААСАССААООТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОАСА
АААСТСАСАСАТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТОССССОАССаТСАОТСТ
ТССТСТТССССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСА
САТОСОТООТООТООАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСААСТООТАС
СТСОАСООСОТССАСОТССАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСО
ССАОСАСОТАССОТОТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАООАСТООСТОААТО
ССААОСАаТАСААОТаСААООТСТССААСАААССССТСССАССССССАТСОАОААА
АССАТСТССАААОССАААОООСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОССССС
АТСССОООАОСАСАТСАССААОААССАааТСАОССТОАССТОССТааТСАААСССТ
ТСТАТСССАСССАСАТССССОТООАСТаааАСАССААТаааСАОССООАОААСААС
ТАСААОАССАСОССТСССОТОСТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААО
СТСАССаТОСАСААСАССАССТаССАОСАООООААСОТСТТСТСАТОСТССОТОАТ
ОСАТОАООСТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТАА
АТОА (8Е0 ГО N0:334).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8ЕЦ ГО N0: 335; 8ЕЦ ГО N0: 336 и 8ЕЦ ГО N0: 337, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 131 или после- 94 028913
довательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 132.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ГО N0: 338; 8Е0 ГО N0: 339 и 8Е0 ГО N0: 340, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 133 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 134.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Е0 ГО N0: 331, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 131; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 332, кодирующий последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 132; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 333, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 133; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 334, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 134; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 335; 8Е0 ГО N0: 336 и 8Е0 ГО N0: 337) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 131 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 132; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 338; 8Е0 ГО N0: 339 и 8Е0 ГО N0: 340) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 133 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 134.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ14 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ14, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 332, кодирующего последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 132, и полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 334, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:134.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ14 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ14 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ14 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз.
Антитело АЬ15.
Изобретение дополнительно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ15, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА без существенного ингибирования связывания ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ15. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 141:
ОСАОССОТОСТСАСССАОАСАССАТСОССССТОТСТССАОСТОТООСАОАСА САОТСАССАТСААОТОССАОТССАОТСАОАОТОТТТАТААОААСААСТАСТТАТССТ ООТАТСАОСАОАААССАССССАОССТСССААСЗСТССТОАТСТАТОАТССАТССААТС ТОССАТСТООООТСССАТСАСООТТСАОСООСАОГООАТСТОООАСАСАОТТСАСТС ТСАССАТСАОСаОСОТССАаТОТаАСОАТССТОССАСТТАСТАСТСТСГАООССАТТ АТОАТОАТОАТАСТОАТААТООТТТСООСООАОООАССОАООТООТООТСАААСОТ (ЗЕС) Ю ΝΟ: 341).
В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 142:
- 95 028913
ОСАОССОТОСТОАСССАОАСАССАТСОСССОТОТСТОСАОСТОТОООАОАСА САОТСАССАТСААСТОССАОТССАОТСАОАОТОТТТАТААОААСААСТАСТТАТССТ аОТАТСАОСАОАААССАОООСАОССТСССААОСТССТОАТСТАТОАТОСАТССААТС ТОССАТСТОООаТСССАТСАСООТТСАОСООСАОТОСАТСТОООАСАСАОТТСАСТС ТСАССАТСАССССССТССАСТОТСЛССАТССТСССЛСТТАСТЛСТСТСТАССССАТТ АТОАТОАТОАТАСТОАТААТООТТТСООССОАОООАССОАООТООТООТСАААСОТ АССОТАОСООССССАТСТСТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАААТСТ ООААСТСССТСТОТТОТОТСССТОСТСААТААСТТСТАТСССАСАОАОСССАААОТА САОТООААООТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАСОАаАОТОТСАСАОА ОСАССАСАССААООАСАССАССТАСАОССТСАССАОСАСССТОАСССТОАССАААО САОАСТАСОАОАААСАСАААОТСТАСОССТОСОААОТСАСССАТСАОООССТОАОС ТСОСССОТСАСАААОАОСТТСААСАООСОАОАОТОТТАО (ЗЕС) Ιϋ ΝΟ: 342).
В другом варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 143:
САСТСООТООАСОАОТСССООСОТСОССТСОТСАСОССТОООАСАССССТОА САСТСАССТССАСАОТСТСТООААТССАССТСАСТАССТАТОСААТОАТСТОССТСС оссАООстссАоаоААООоастаоААТАСАтсаоААтсАттгооАатаатсасАсс ТАСТАСОССАССТСССССАААССССОАТТСАССАТСТССААААССТСОАССАСООТ ООАТСТОСАААТСАССАСТССОАСААСССАОСАСССССССАССТАТТТСТОТОССОС АООГСОТСОТАСТАТТТАТОАТОТТТООСОССССООСАСССТООТСАССОТСТСОАО С (ЗЕр ГО N0: 343).
В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 144:
САОТСОСТаОАООАОТССОООСОТСОССТООТСАСаССТСООАСАССССТОА
САСТСАССТОСАСАОТСТСТООААТСОАССТСАОТАОСТАТаСААТаАТСТОООТСС
ОССАСССТССАООаААСООССТСОААТАСАТССОААТСАТТТОСАСТОСТООСАСС
ТАСТАСОСОАССТОООСОАААСЗОССОАТТСАССАТСТССААААССТСаАССАСОаТ
ООАТСТССАААТСАССАСТСССАСААССОАССАСОСООССАССТАТТТСТОТССССС
АООТООТООТАОТАТТТАТОАТОТТТООаОСССОООСАСССТСаТСАССОТСТСОАО
СОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСССССТООСАСССТССТССААОАОСАССТС
ТСОСООСАСАОСОССССТаСССТОССТООТСААСОАСТАСТТССССОААСССОТОА
СООТОТСОТСОААСТСАООСОСССТОАССАОСООСОТОСАСАССТТСССООСТОТСС
ТАСАОТССТСАССАСТСТАСТСССТСАОСАССОТОСТСАСССТССССТССАССАССТ
ТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТСАСААОСССАОСААСАССААООТС
ОАСААСАОАОТГаАОСССАААТСТТОТОАСААААСТСАСАСАТаСССАССОТОССС
АОСАССТОААСТССТООООООАССОТСАОТСТТССТСТТССССССААААСССААСОА
САСССТСАТОАТСТССССОАССССТОАООТСАСАТОСОТООТООТООАСОТОАОССА
ССААСАСССТОАСОТСААОТТСААСТСОТАССТССАСССССТООАООТССАТААТО
ССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСОССАОСАСОТАССОТСТСОТСАОСОТС
СТСАССОТССТОСАССАСОАСТООСТСААТООСААСОАСТАСААОТОСААССТСТС
СААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОААААССАТСТССАААОССАААОСОСАСС
СССОАОААССАСАаОТОТАСАСССТОСССССАТСССОООАООАОАТОАССААОААС
САООТСАСССТОАССТСССТОСТСАААООСТТСТАТСССАОСОАСАТСОССОТООАО
ТОООАОАОСААТСОССАОССООАОААСААСТАСААОАССАСОССТСССеТССТССА СТСССАССЗОСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТСАССОТССАСААСАОСАССТООСА ССАССССААССТСТТСТСАТОСТССОТОАТССАТОАОССТСТОСАСААССАСТАСАС ССАСААОАСССТСТСССТОТСТССОООТАААТОА (8ЕЦ ГО N0: 344).
В дополнительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ГО N0: 345; 8Е0 ГО N0: 346 и 8Е0 ГО N0: 347, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОР, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 141 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 142.
В дополнительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотид- 96 028913
ных последовательностей с 8Е0 ГО N0: 348; 8Е0 ГО N0: 349 и 8Е0 ГО N0: 350, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 143 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 144.
По изобретению также предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Е0 ГО N0: 341, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 141; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 342, кодирующий последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 142; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 343, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 143; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 344, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 144; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 345; 8Е0 ГО N0: 346 и 8Е0 ГО N0: 347) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 141 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 142; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 348; 8Е0 ГО N0: 349 и 8Е0 ГО N0: 350) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 143 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 144.
В предпочтительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ15 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ15, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 342, кодирующего последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 142, и полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 344, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 144.
В другом варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК-293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раз!опз. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ15 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ15 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ15 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз.
Антитело АЬ16.
Изобретение дополнительно направлено на использование с целью лечения или профилактики боли и состояний, связанных с болью, полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ16, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА без выраженного ингибирования связывания ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ16. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 151:
ОСССТССТОАТОАСССАОАСТССАТССТССАСОТСТОААССАОТОССАСССА САСТСАССАТСААТТОССАОССТАСТСАСААТАТТОСТААСОАССТАТССТССТАТС АССАСАААССАССОСАОССТССССАССТССТААТСТАТТСТАСАТССАААСТООСА АСТООООТСССАААОСООТТСАОТООСАОСАОАТСТОООАСАСАОТТСАСТСТСАС САТСАОСОАССТООАОТСтеАСОАТОСТСССАСТТАСТАСТОТСТАССТСТТТАТАС ТТАТАТТАОТОАТОАТааТААТОСТТТСООСООАОООАССаАООТООТООТСАААС СТ (8Е<ЗЮ N0:351).
В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 152:
- 97 028913
ОСССТООТОАТОАСССАОАСТССАТССТССАСОТСТОААССАОТОООАООСА САОТСАССАТСААТГОССАОаСТАСТСАОААТАТТООТААСОАССТАТССТООТАТС АОСАСАААССАСгООСАОССТСССОАОСТССТААТСТАТТСТАСАТССАААСТООСА АСТООООТСССАААССООТТСАОТООСАОСАОАТСТОООАСАСАОТТСАСТСТСАС САТСАОСОАССТСОАОТОТОАСОАТОСТОССАСТТАСТАСТОТСТАООТОТТТАТАО ТГАТАТТАОТСАТСАТООТААТОСТТТСОССООАОООАССОАООТООТаОТСАААС ОТАСааТАОСООССССАТСТаТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАААТ СТООААСТОССТСТОТТОТОТОССТССТОААТААСТТСТАТСССАОАОАООССАААО ТАСАОТООААООТООАТААСОСССТССААТСООаТААСТСССАООАОАОТСТСАСА САОСАСОАСАССААСОАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТОАОСАА АССАСАСТАССАСАААСАСАААОТСТАСОССТССОААОТСАСССАТСАОООССТСА ОСТС6СССОТСАСАААОАОСТТСААСАООООАОАОТОТТАО (8 ЕС) Ю ΝΟ: 352).
В другом варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 153:
САОТСООТООАООАОТТСаОСООТССССТаОТСАССССТОСОАСАССССТСА
САСТСАССТОСАССОТСТСТООАТТСТСССТСААТААСТАТОСААТОАССТОООТСС
ОССАООСТССАОООААОааССТООАОТООАТСОООАТСАТТООТАСТАТТООТАСС
АСАТАСТАСОСОАОСТОООСОАААООССОАТТСТТСАТСТССААААССТСОАССАСТ
ОТООАТСТОААААТСАТТАОТССОАСААССОАООАСАССОССАССТАТТТСТОТССС
АСАОАТОСТООСОТТАСТОТТСАТООТТАТООСТАСТАСТТТААСАТСТОООССССА ООСАСССТСОТСАССОТСТСОАОС (5 ЕС) Ю N0: 353).
В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с ЗЕО ГО N0: 154:
САОТСООТООАООАОТТСОООООТСОССТООТСАСОССТОООАСАССССТОА САСТСАССТОСАССОТСТСТООАТТСТСССТСААТААСТАТОСААТОАССТОООТСС ОССАООСТССАОООААООООСТООАОТООАТСОООАТСАТТООТАОТАТТООТАСС АСАТАСТАСОСОАОСТОООСОАААООССОАТТСТТСАТСТССААААССТСОАССАСТ ОТООАТСТОААААТСАТТАОТССОАСААССОАООАСАСООССАССТАТТТСТОТОСС АОАОАТОСТООСОТТАСТОТТОАТООТТАТООСТАСТАСТТТААСАТСТООООСССА ООСАСССТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСССССТО ОСАСССТССТССААОАОСАССТСТОООООСАСАОСООСССТОООСТОССТООТСАА ООАСТАСТТССССОААССООТОАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАССАОСО ОСОТОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОСАОСО ТООТОАССОТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТС АСААОСССАОСААСАССААООТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТГОТОАСААА АСТСАСАСАТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТООООООАССОТСАОТСТТС СТСТТССССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСАСА ТОСОТООТООТОСАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСААСТООТАСОТ ООАСООСОТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСОСС АОСАСОТАССОТОТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАООАСТООСТОААТООС ААООАОТАСААОТОСААОСТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОААААС САТСТССАААОССАААОООСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОСССССАТ СССОООАООАОАТОАССААОААССАООТСАСССТСАССТОССТОСТСАААООСТТС ТАТСССАСтСОАСАТСОССОТООАОТОООАОАОСААТСОССАСССССАОААСААСТА СААОАССАСОССТСССОТОСТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТ САССОТООАСААОАОСАООТООСАОСАООООААСОТСТГСТСАТОСТССОТОАТОС АТОАООСТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТАААТ СА (5Εζ) ГО N0: 354).
В дополнительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с ЗЕО ГО N0: 355; ЗЕО ГО N0: 356 и ЗЕО ГО N0: 357, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОР, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 151 или последовательности легкой цепи ЗЕО ГО N0: 152.
- 98 028913
В дополнительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8ЕЦ ГО N0: 358; 8ЕЦ ГО N0: 359 и 8ЕЦ ГО N0: 360, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 153 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 154.
По изобретению также предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8ЕЦ ГО N0: 351, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 151; полинуклеотид 8ЕЦ ГО N0: 352, кодирующий последовательность легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 152; полинуклеотид 8ЕЦ ГО N0: 353, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 153; полинуклеотид 8ЕЦ ГО N0: 354, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 154; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 355; 8ЕЦ ГО N0: 356 и 8ЕЦ ГО N0: 357) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 151 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 152; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 358; 8ЕЦ ГО N0: 359 и 8ЕЦ ГО N0: 360) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 153 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 154.
В предпочтительном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ16 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ16, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8ЕЦ ГО N0: 352, кодирующего последовательность легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 152, и полинуклеотида с 8ЕЦ ГО N0: 354, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 154.
В другом варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспресии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК-293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ракЮпк. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ16 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ16 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ16 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ракЮпк.
Антитело АЬ17.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ17, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА без существенного ингибирования связывания ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ17. Изобретение дополнительно необязательно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 161:
ОССАТСОАААТОАСССАОАСТССАТТСТССОТСТСТОСАОСТОТСООАООСА САОТСАССАТСААОТОССАООССАОТСАОАССАТТАОСААСГАСГГАОССТООТАТС АОСАОАААССАОСОСАОССТСССААОСТССТОАТСТАТООТОСАТССААТСТООАА ТСТООООТСССАТСОСООТТСАААОССАСТССАТСТСООАСАСАСТТСАСТСТСАСС АТСАССОАССТССАСТСТСАСОАТОСТОССАСТТАСТАСТОТСААСАОООТТАТАСТ АТСАОТААТОТТОАТААСААТОТТТТСОаСООАОСОАССОАООТООТСаТСАААСО Т (ЗЕ<3 ГО N0:361).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей поли- 99 028913
пептидную последовательность легкой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 162:
ОССАТСОАААТОАСССАОАСТССАТТСТСССТОТСТССАОСТСТОООАООСА
САОТСАССАТСААОТОССАОаССАОТСАОАССАТТАОСААСТАСТТАОССТООТАТС
АОСАОАААССАОООСАОССТСССААОСТССТОАТСТАТООТОСАТССААТСТООАА
ТСТООООТСССАТСОСООТТСАААОССАОТООАТСТОООАСАСАОТТСАСТСТСАСС
АТСАОСОАССТООАОТСТОАСОАТОСТОССАСТТАСТАСТОТСААСАОСОТТАТАСТ
АТСАОТААТОТТОАТААСААТОТТТТСООСООАООСАССОАОСТООТООТСАААСО
ТАСООТАОСОбЗССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАААТС
ТООААСТОССТСТОТТОТОТОССТОСТОААТААСТТСТАТСССАСАОАООССАААОТ
АСАОТСОААООТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАООАОАОТОТСАСАО
АОСАООАСАаСААООАСАаСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТСАСОСТОАОСААА
ОСАОАСТАСОАОАААСАСАААОТСТАСОССТОСОААОТСАСССАТСАОООССТОАО
СТСОСССОТСАСАААОАОСТТСААСАООООАОАОТСТТАО (ЗЕО ГО N0: 362).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 163:
САОТСОСТООАаОАОТССОаОООТСОССТООТСАСОССТОаСООАТСССТОА САСТСАССТССаСАОССТСТСОАТТСТСССТСАСТОаСТАСААСТТООТСТааОТСС ОССАООСТССАСООААООООСТОСАОТООАТСООАТТСАТТАОТТАТООТОАТАСС АСАТАСТАСОСОАОСТОООСОАААООССОАТТСАССАТСТССААААССТСОАССАС аОТаАСТСТОАСОАТСАССОАТСТОСААССТТСАОАСАСОООСАССТАТТТСТОТОС САаАОАаАСТОСТААТАСТТАТОАТТАТСОСАТСТОООаСССАООСАСССТСОТСАС СОТСТСОАОС (3Εζ> ПЗ ΝΟ: 363).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8ЕЦ ГО N0: 164:
САОТСОСТООАООАОТССОООООТСОССТООТСАСОССТОООООАТСССТОА САСТСАССТОСОСАОССТСТСОАТТСТСССТСАСТООСТАСААСТТООТСТОООТСС ОССАООСТССАОООААООООСТООАОТООАТСООАТТСАТТАОТТАТООТОАТАСС АСАТАСТАСОСОАОСТОООСОАААООССОАТТСАССАТСТССААААССТССАССАС аОТОАСТСТОАСОАТСАССОАТСТССААССТТСАОАСАСОООСАССТАТТТСТаТОС САОАОАОАСТОСТААТАСТГАТОАТТАТаОСАТСТООООСССАООСАСССТСОТСАС СОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСССССТООСАСССТССТССАА ОАОСАССТСТОООООСАСАОСООСССТОООСТСССТООТСААООАСТАСТТССССО ААССООТОАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАССАОСООСОТОСАСАССТТС ССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТООТОАССОТОССС ТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТСАСААОСССАОСАА САССААООТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОАСААААСТСАСАСАТОСС САССОТОСССАОСАССТОААСТССТООООООАССОТСАОТСТТССТСТТССССССАА ААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСАСАТОСОТООТООТО ОАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСААСТООТАСОТООАСООСОТООА ООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСОССАОСАСОТАССОТО ТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАООАСТООСТОААТООСААООАОТАСААО ТОСААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОААААССАТСТССАААОС САААОООСАОССССОАОААССАСАаОТОТАСАСССТОСССССАТСССОООАООАОА ТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТаССТООТСАААООСТТСТАТСССАаСОАС АТСОССаТООАОТОООАаАОСААТОООСАаССОаАОААСААСТАСААОАССАСОС СТСССОТОСТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТСАССОТООАСА АОАОСАООТООСАОСАООООААСОТСТТСТСАТОСТССОТОАТОСАТОАООСТСТО САСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТСТСТССОООТАААТОА (ЗЕО ГО N0:
364).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8ЕЦ ГО N0: 365; 8ЕЦ ГО N0: 366 и 8ЕЦ ГО N0: 367, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОР, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 161 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 162.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из
- 100 028913
полинуклеотидных последовательностей с 8Еф ГО N0: 368; 8Еф ГО N0: 369 и 8Еф ГО N0: 370, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СГОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 163 или последовательности тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 164.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Еф ГО N0: 361, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Еф ГО N0: 161; полинуклеотид 8Еф ГО N0: 362, кодирующий последовательность легкой цепи 8Еф ГО N0: 162; полинуклеотид 8Еф ГО N0: 363, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 163; полинуклеотид 8Еф ГО N0: 364, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 164; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Еф ГО N0: 365; 8Еф ГО N0: 366 и 8Еф ГО N0: 367) вариабельной последовательности легкой цепи 8Еф ГО N0: 161 или последовательности легкой цепи 8Еф ГО N0: 162; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Еф ГО N0: 368; 8Еф ГО N0: 369; и 8Е0 ГО N0: 370) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 163 или последовательности тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 164.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ17 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ17, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Еф ГО N0: 362, кодирующего последовательность легкой цепи 8Еф ГО N0: 162, и полинуклеотида с 8Еф ГО N0: 364, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Еф ГО N0: 164.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа.
Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раПогЫ В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ17 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ17 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ17 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа раПогЫ
Антитело АЬ18.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ18, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ18. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность легкой цепи с 8Еф ГО N0: 171:
аЛСАТССАОАТОАСССАОТСТССТТССАСССТОТСТССАТСТОТАССАСАСАО АОТСАССАТСАСТТОТСАООСТАОТСАСАССАТТАОСААСТАСТТАСССТООТАТСА ОСАОАААССАООААААОССССТААОСТССТОАТСТАТООТОСАТССААТСТООААТ СТООАОТСССАТСААООТТСАаСООСАОТООАТСТООААСАОААТТСАСТСТСАССА ТСАССАСССТОСАСССТОАТОАТТТТОСААСТТАСТАСТОТСААСАОООТТАТАСТА ТСАСТААТОТТОАТААСААТОТТТТСОаСООАООААССААООТООАААТСАААСОТ (ЗЕОЮИО: 371).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Еф ГО N0: 172:
ОАСАТССАОАТОАСССАСТСТССТТССАСССТОТСТОСАТСТОТАООАСАСАС
АОТСАССАТСАСТГОТСАОССТАОТСАОАССАТГАОСААСТАСТТАОССТООТАТСА
- 101 028913
ОСАОАААССАСОААААОССССТААССТССТОАТСТАТООТССАТССААТСТООААТ
СТООАОТСССАТСААОСТТСАСССССАОТСОАТСТаОААСАСААТТСАСТСТСАССА
ТСАОСАСССТОСАСССТСАТОАТТТТОСААСТТАСТАСТОТСААСАОООТТАТАСТА
ТСАОТААТСТГОАТААСААТОТт'ССССООАООААССААООТООАААТСАААСОТ
АСОСТАОСООССССАТСТОТСТТСАТСТТССССССАТСТОАТСАаСАСТТСАААТСТ
ОСААСТОССТСТСТТСТОТОССТОСТОААТААСТТСТАТСССАСАОАСОССАААСТА
САСТООААССТССАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАСОАСАОТСТСАСАОА
ССАООАСАССААОСАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТСАСОСТОАОСАААО
САСАСТАССАОАААСАСАААСТСТАСОССТОСОААОТСАСССАТСАООСССТОАОС
ТСОСССОТСАСАААОАОСТТСААСАООООАОАаТОТТАО <8ЕЦ ГО N0: 372).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 173:
ОАООТССАОСТООТОСАСТСТОООООАООСТТООТССАОССТООООООТССС ТОАОАСТСТССТСТОСАОССТСТООАТТСАССОТСАОТООСТАСААСТТООТСТООО ТССОТСАООСТССАОаОААООаССТООАОТООСТСООАТТСАТТАаТТАТаОТОАТ АССАСАТАСТАСОСТАОСТСТССТАААООССОАТТСАССАТСТССАОАОАСААТТСС ААОААСАСССТОТАТСТТСАААТОААСАОССТОАСАОСТОАООАСАСТССТатаТА ТТАСТОТОСТАОАОАОАСТОСТААТАСТТАТОАТТАТООСАТСТСООаССААОООАС ССТСОТСАССОТСТСОАОС (ЗЕО ГО N0: 373).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 174:
ОАООТОСАОСТООТООАОТСТООООСАООСГГООТССАСССТССССОСТССС
ТОАОАСТСТССТОТОСАОССТСТООАТТСАССОТСАОТООСТАСААСТТООТСТССО
ТСССТСАООСТССАСООААОСООСТООАОТОООТСООАТТСАТТАОТТАТООТОАТ
АССАСАТАСТАСОСТАОСТСТОСТАААООССОАТТСАССАТСТССАОАОАСААТТСС
ААОААСАСССТОТАТСТТСАААТОААСАОССТСАОАОСТОАООАСАСТОСТОТОТА
ТТАСТОТОСТАОАОАОАСТОСТААТАСТТАТСАТТАТООСАТСТООООССААСООАС
ССТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСССССТООСАСС
СТССТССААОАОСАССТСТОООСОСАСАОССССССТООССТСССТООТСААОСАСТ
АСТТССССОААССООТОАСООТОТСОТООААСТСАООСОСССТОАССАОСООСОТО
САСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТООТа
АССОТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТСАСАА
ОСССАОСААСАССААООТООАСААСАСАСТТОАОСССАААТСТТОТОАСААААСТС
АСАСАТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТООООООАССОТСАОТСТТССТСТ
ТССССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАООТСАСАТОСО
ТООТООТООАСОТОАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТТСААСТООТАСОТООАС
ООСОТеОАООТаСАТААТОССААОАСАААОССССОООАООАОСАОТАСОССАОСА
СОТАССОТОТСатСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАОСАСТОССТСААТООСААОО
АОТАСААОТОСААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАСААААССАТС
ТССАААОССАААОООСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОСССССАТСССО
ООАООАОАТОАССААОААССАООТСАаССТСАССТСССТООТСАААООСТГСТАТС
ССАОССАСАТСОССОТООАОТОООАОАССААТОСОСАаССООАОААСААСТАСАА
ОАССАСОССТСССаТОСТаОАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАССААССТСАС
СОТСОАСААОАОСАОатаОСАОСАООООААСаТСТТСТСАТОСТССОТОАТССАТО
АООСТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТАААТОА
(8ЕЦ ГО N0: 374).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ГО N0: 375; 8Е0 ГО N0: 376 и 8Е0 ГО N0: 377, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СИР, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 171 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 172.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ГО N0: 378; 8Е0 ГО N0: 379 и 8Е0 ГО N0: 380, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СИР, или
- 102 028913
гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 173 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 174.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с δΕΟ ΙΌ N0: 371, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 171; полинуклеотид δΕΟ ΙΌ N0: 372, кодирующий последовательность легкой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 172; полинуклеотид δΕΟ ΙΌ N0: 373, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 173; полинуклеотид δΕΟ ΙΌ N0: 374, кодирующий последовательность тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 174; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (δΕΟ ΙΌ N0: 375; δΕΟ ΙΌ N0: 376 и δΕΟ ΙΌ N0: 377) вариабельной последовательности легкой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 171 или последовательности легкой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 172; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (δΕΟ ΙΌ N0: 378; δΕΟ ΙΌ N0: 379 и δΕΟ ΙΌ N0: 380) вариабельной последовательности тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 173 или последовательности тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 174.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих ЕаЪ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЪ18 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЪ18, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с δΕΟ ΙΌ N0: 372, кодирующего последовательность легкой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 172, и полинуклеотида с δΕΟ ΙΌ N0: 374, кодирующего последовательность тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ N0: 174.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, Ж0, ΗΕΚ293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи Р1сЫа. Подходящие виды Р1сЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, Р1сЫа раЧогш. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), ЕаЪ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЪ18 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЪ18 или его ЕаЪ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЪ18 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, Ж0 или ΗΕΚ 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные Р1сЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Р1сЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РкЫа раЧогш.
Антитело АЪ19.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЪ19, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЪ19. Изобретение дополнительно необязательно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с δΕΟ ΙΌ N0: 181:
ОССОССОТОСТОАСССАОАСТССАТСТСССОТОТСТОСАССТОТОООАСССА САОТСАОСАТСАОТТОССАОТССАОТСАОААТОТТТАТААОААСААСТАТТТАТССТ ООТАТСАОСАОАААССАОООСАОССТСССААОСТССТОАТСТАСААООСТТССАСТС ТООСАТСТООООТСССАТСОССОТТСАААСОСАОТООАТСТОООАСАОАТТТСАСТС ТСАССАТСАОСОАСОТОСАОТОТОАСОСТССТОССАСТГАСТАСТОТОСАООСООТТ АТАОТАСТАОТАОТОАТААТОСТТТСООСООАОаОАССОАООТООТОатСАААСОТ (ЗЕр Ю ΝΟ: 381).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с δΕΟ ΙΌ N0: 182:
- 103 028913
ОССОССОТОСТОАСССАОАСТССАТСТСССОТОТСТОСАОСТОТОООАООСА
САОТСАОСАТСАОГГОССАОТССАОТСАаААТОТТТАТААОААСААСТАТТТАТССТ
ООТАТСАОСАОАААССАОООСАОССТСССААОСТССТОАТСТАСААОССТГССАСТС
ТООСАТСТООООТСССАТСасааТТСАААСССАСТСОАТСТСООАСАСАТТТСАСТС
ТСАССАТСАОСаАСаТОСАОТОТОАСССТССТОССАСТТАСТАСТаТОСАООСООТТ
АТАОТАОТАОТАОТОАТААТОСТТГСООСООАОООАССОАООТООТООТСАААСОТ
АСООТАОСООССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАААТСТ
ООААСТОССТСТОТГОТОТСССТОСТОААТААСТТСТАТСССАОАСАООССАААОТА
САОТООААООТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАООАОАОТОТСАСАОА
осаооасаосааооасаосасстасаосстсаосассассстоасостоаосааао САОАСТАСОАОАААСАСАААСТСТАССССТОСОААОТСАСССАТСАООаССТОАОС ТСОСССОТСАСАААОАОСТТСААСАССООАОАОТСТТАО (8ЕЦ 1ΟΝΟ: 382).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 5>Е0 ΙΌ ΝΟ: 18З:
САетссстсоАсссотссесссотсотстоотсАтасстоаАООАТСсстоА САСГСАССТОСАСАОССТСТООАТТСТСССТСАаТАССТАСТООАТОТССТОООТСС СЮСАООСТССАаООААааООСТаСААТООАТСООАОАСАТТТАТТТТАОТААТСАС аАААСАААСТАСОСаАССТСООСОАААОаССОАТТТАССАТСТССААААССТССАС САСОСТССАТСТОААТОТСАТСАСТССОАСААССОАеСАСАСеОССАССТАТТТСТС ТаСААОАаОТТСТССТОАТаТТОАОАТТОСТАТАОАТАТОТаОООССАОООСАСССТ СОТСАССОТСТСОАОС (8Б<2 ГО ΝΟ: 383).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 5>Е0 ГО ΝΟ: 184:
САаТСОСТСОАОССОТССаОСООТСОТСТСОТСАТаССТОСАСОАТСССТОА
САСТСАССТОСАСАСССТСТООАТТСТСССТСАОТАССТАСТООАТОТССТОООТСС
ОССАООСТССАОООААООООСтаОААТСОАТСООАОАСАТТТАТТГТАСТААТОАО
ОАААСАААСТАССССАССТОаОСОАААаОССОАТТТАССАТСТССААААССТСаАС
САССЗОТООАТСТОААТОТСАТСАОТССОАСААССОАООАСАСООССАССТАТТГСТО
ТОСААСАООТТСТССТОАТОТТаАаАТТССТАТАСАТАТОТООООССАаОаСАСССТ
СОТСАССаТСТСОАОСОССТССАССААаОаСССАТСООТСТТСССССТООСАСССТС
СТССААОАОСАССТСТОаССОСАСАССООСССТССССТаССТОСТСААООАСТАСТ
ТССССОААССОСТСАСаСТСТСОТООААСТСАаОСССССТОАССАССООСаТССАС
АССТТСССаОСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТООТСАСС
ОТССССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТОААТСАСААОССС
АОСААСАССААООТООАСААОАОАОТГОАОСССАААТСТТОТОАСААААСТСАСАС
АТОСССАССОТОСССАОСАССТОААСТССТОаОаООАССОТСАОТСТГССТСТТССС
СССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАаОТСАСАТОСОТСОТ
ОаТООАСОТаАОССАСОААОАСССТОАООТСААОТГСААСТаОТАСаТООАСООСа
ТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТАСОССАОСАСОТА
ССОТОТООТСАОСОТССТСАССатССТОСАССАООАСТОаСТОААТООСААООАОТ
АСААСТССААСОТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОААААССАТСТСС АААОССАААООаСАОССССОАОААССАСАООТОТАСАСССТОСССССАТСССОаОА ООАОАТОАССААОААССАООТСАОССТОАССТСССТООТСАААОССТТСТАТСССА аСОАСАТСОССОТООАОТОООАОАОСААТОООСАОССаОАОААСААСТАСААОАС САССЗССТСССОТССТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАОСААОСТСАССОТ аОАСААОАОСАООТООСАССАООООААСОТСТГСТСАТССТССОТОАТОСАТаАОО СТСТОСАСААССАСТАСАСССАОААОАОССТСТСССТаТСТССОООТАААТСА (5Ер ГО N0: 384).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 5>Е0 ГО ΝΟ: З85; 5>Е0 ГО ΝΟ: З8б и 5>Е0 ГО ΝΟ: З87, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 5>Е0 ГО ΝΟ: 181 или последовательности легкой цепи 5>Е0 ГО ΝΟ: 182.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 5>Е0 ГО ΝΟ: З88; 5>Е0 ГО ΝΟ: З89 и 5>Е0 ГО ΝΟ: З90, которые
- 104 028913
соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СБК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Ер ГО N0: 183 или последовательности тяжелой цепи 8Ер ГО N0: 184.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Ер ГО N0: 381, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Ер ГО N0: 181; полинуклеотид 8Ер ГО N0: 382, кодирующий последовательность легкой цепи 8Ер ГО N0: 182; полинуклеотид 8Ер ГО N0: 383, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Ер ГО N0: 183; полинуклеотид 8Ер ГО N0: 384, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Ер ГО N0: 184; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Ер ГО N0: 385; 8Ер ГО N0: 386 и 8Ер ГО N0: 387) вариабельной последовательности легкой цепи 8Ер ГО N0: 181 или последовательности легкой цепи 8Ер ГО N0: 182; и полинуклеотиды!, кодирующие определяющие комплементарность области (8Ер ГО N0: 388; 8Ер ГО N0: 389 и 8Ер ГО N0: 390) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Ер ГО N0: 183 или последовательности тяжелой цепи 8Ер ГО N0: 184.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ19 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ19, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Ер ГО N0: 382, кодирующего последовательность легкой цепи 8Ер ГО N0: 182, и полинуклеотида с 8Ер ГО N0: 384, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Ер ГО N0: 184.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ра§1оп8. В одном необязательном варианте воплощения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ19 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ19 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ19 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ра§1ог18.
Антитело АЬ20.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование с целью лечения или профилактики боли и состояний, связанных с болью, полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ20, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ20. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН. В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды! по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность легкой цепи с 8Ер ГО N0: 191:
ОАСАТССАОАТОАСССАОТСТССАТССТСССТОТСТОСАТСТОТАООАОАСАС АОТСАССАТСАСТТОССАОТССАОТСАОААТОТТТАТААОААСААСТАСТГАТССТО ОТАТСАОСАОАААССАОССАААОТСССТААОСТССТОАТСТАТААООСАТССАСТСТ СОСАТСТСССОТСССАТСТССТТГСАОТООСАОТСОАТСТОООАСАСАТТГСАСТСТ САССАТСАОСАОССТОСАОССТОААОАТСТТОСААСТТАТТАСТОТОСАООСООТТА ТАССАОТАОТАОТОАТААТОСТТТСООСООАООААССААООТООАААТСАААСОТ (8Е(3 ГО N0:391).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Ер ГО N0: 192:
- 105 028913
ОАСАТССАОАТСАСССАОТСТССАТССТСССТОТСТОСАТСТОТАСОАСАСАО АОТСАССАТСАСТТОССАаТССАОТСАОААТОТТТАТААОААСААСТАСТТАТССТО ОТАТСАОСАОАААССАСООАААОТСССТААОСТССТОАТСТАТААООСАТССАСТСТ ООСАТСТООООТСССАТСТСОТТТСАОТООСАОТООАТСТОООАСАОАТТТСАСТСТ САССАТСАОСАСССТОСАОССТСААОАТОТТОСААСТТАТТАСТОТССАООСООТТА ТАССАОТАОТАСТОАТААТОСТТТСООССОАООААССААСОТСОАААТСАААСОТА СООТАОСООССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАААТСТО ОААСТОССТСТОТТСТСТОССТССТОААТААСТТСТАТСССАОАОАООССАААОТАС АОТОСААаОТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАООАОАСТСТСАСАОАО САООАСАОСААОСАСАОСАССТАСАОССТСАОСАаСАСССТСАСОСТОАОСАААОС АОАСТАСОАОАААСАСАААСТСТАСОССТССОААОТСАСССАТСАСООССТСАОСТ ССССССТСАСАААОАОСТТСААСАООаОАСАОТОТТАС (8ЕС) ГО N0: 392).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 193:
ОАООТОСАОСТСОТООАОТСТООООСАСОСТТОСТССАОССТСОООООТССС
ТСАСАСТСТССТОТОСАСССТСТССАТТСАСССТСАСТАССТАСТООАТОАССТООС
ТССОТСАООСТССАСООААООООСТООАОТОООТССОАОАСАТТТАСТТТАСТААТ
оааоааасааастасосоассаососоаааооссоаттсассатстссаоаоасаа
ТТССААОААСАСССТСТАТСТТСАААТСААСАСССТСАОАССТОАСОАСАСТОСТОТ
отаттастотсстаоасоттстсстоатсттоаоаттостатаоататотсооосса
АСОСАСССТСОТСАССОТСТССАСС )ЗЕ<) ГО ΝΟ: 393).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Е0 ГО N0: 194:
ОАООТССАОСТООТСОАОТСТОООООАООСТТСОТССАОССТСОООССТССС ТСАОАСТСТССТОТОСАОССТСТООАТТСАССОТСАОТАССТАСТСОАТСАССТССС ТССОТСАОССТССАОООААСОООСТООАОТСООТСССАОАСАТТГАСТТТАОТААТ ОААОАААСАААСТАСОСОАССАОСОСОАААООССОАТТСАССАТСТССАОАОАСАА ТТССААОААСАСССТОТАТСТТСАААТОААСАОССТОАОАССТОАООАСАСТОСТОТ СТАТТАСТОТССТАОАООТТСТССТОАТСТТОАОАТТОСТАТАСАТАТОТСОССССА АООСАСССТССТСАССОТСТСОАСССССТССАССААОСССССАТСССТСТТСССССТ ООСАСССТССТССААСАОСАССТСТОООСОСАСАОСООСССТОООСТОССТСОТСА АООАСТАСТТССССОААСССОТСАСССТСТССТООААСТСАООСОСССТОАССАСС ООССТОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАССАОС СТООТСАСССТОСССТССАОСАОСТТОООСАСССАОАССТАСАТСТОСААСОТСААТ САСААОСССАОСААСАССААООТООАСААОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОАСАА ААСТСАСАСАТССССАСССТОСССАОСАССТСААСТССТССОССОАСССТСАСТСТТ сстсттссссссаааасссааооасассстсатоатстсссооасссстоаоотсас АТОСОТСОТОСТССАСОТСАОССАСОААОАСССТОАООТСААСТТСААСТССТАСО ТООАССССОТССАССТССАТААТОССААСАСАААСССССССОАССАССАСТАСОС САОСАСОТАСССТСТССТСАОСОТССТСАСССТССТССАССАССАСТСССТСААТСС СААОСАОТАСААОТОСААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАОАААА ССАТСТССАААСССАААОООСАОССССОАСААССАСАССТОТАСАСССТОСССССА ТССССССАССАСАТСАССААОААССАССТСАСССТОАССТСССТССТСАААСССТТ СТАТСССАСССАСАТСССССТССАСТСССАСАССААТССССАСССССАСААСААСТ АСААОАССАССССТССССТССТООАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАССААСС ТСАССОТООАСААСАОСАООТООСАССАССООААСОТСТТСТСАТОСТСССТСАТО САТОАООСТСТОСАСААССАСТАСАСССАОААОАОССТСТСССТСТСТССОООТААА ТСА (5ЕГ)ЮЬЮ: 394).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ГО N0: 395; 8Е0 ГО N0: 396 и 8Е0 ГО N0: 397, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 191 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 192.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирую- 106 028913
щие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Е0 ГО N0: 398; 8Е0 ГО N0: 399 и 8Е0 ГО N0: 400, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 193 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 194.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8Е0 ГО N0: 391, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 191; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 392, кодирующий последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 192; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 393, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 193; полинуклеотид 8Е0 ГО N0: 394, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 194; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 395; 8Е0 ГО N0: 396 и 8Е0 ГО N0: 397) вариабельной последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 191 или последовательности легкой цепи 8Е0 ГО N0: 192; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8Е0 ГО N0: 398; 8Е0 ГО N0: 399 и 8Е0 ГО N0: 400) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 193 или последовательности тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 194.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ20 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ20, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 392, кодирующего последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 192, и полинуклеотида с 8Е0 ГО N0: 394, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 194.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ20 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ20 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ20 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа разЮпз.
Антитело АЬ21.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов антитела АЬ21, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и связывание ФРН с р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ21. Изобретение дополнительно необязательно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную вариабельную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0: 51:
ОАСАТССАОАТОАСССАОТСТССТТССАСССТОТСТОСАТСТСТАООАОАСАО
АСТСАССАТСАСТТСССАССССАОТСАОАССАТТТАСАССААТСТТСССТССТАТСА
ОСАОАААССАООААААОССССТААОСТССТОАТСТАТСАТОСАТССАСТСТСОААТ
СТООАСТСССАТСААОСТТСАССаОСАаТОСАТСТОССАСАаАСТАСАСТСТСАСС
АТСАССАОССТОСАСССТОАТСАТТТТОСААСТТАСТАСТОССААСАОСОТТТГАСТ
ОТТАОТСАТАТТОАТААТОСТТТСааСаОАСОААССААООТСОАААТСАААСОТ
(δΕζΙΙΏΝΟ: 251).
В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению необязательно содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8Е0 ГО N0:401:
- 107 028913
ОАСАТССАСАТСАСССАОТСТССТТССАСССТОТСТОСАТСТОТАООАОАСАО АОТСАССАТСАСТТОССАООССАОТСАОАОСАТГГАСАОСААТСТТОССТООТАТСА ОСАОАААССАООААААОССССТААОСТССТОАТСТАТОАТОСАТССАСТСТООААТ СТССАОТСССАТСААСОТТСАОСООСАОТОСАТСТСОСАСАОАОТАСАСТСТСАСС АТСАОСАСССТОСАОССТОАТОАПТГОСААСТТАСТАСТСССААСАОООТТТТАСТ СТТАОТСАТАТТСАТААТССТТТССССССАССААССААООТООАААТСАААССТАС ССТАССССССССАТСТОТСТТСАТСТТССССССАТСТСАТСАОСАСТТСАААТСТСС ААСТСССТСТСТТСТСТСССТССТСААТААСТТСТАТСССАСАСАССССАААОТАСА ОТООААООТООАТААСОСССТССААТСОСОТААСТСССАООАОАОТОТСАСАОАОС АООАСАОСААООАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТОАССАААОСА САСТАСОАОАААСАСАААОТСТАСОССТОСОААОТСАСССАТСАООСССТОАОСТС ОССССТСАСАААОАОСТТСААСАСОООАОАОТСТТАО (5Ер ГО N0: 403).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Ер Ιϋ N0: 53:
ОАССТССАССТОСТООАСТСТСССССАСССТТССТССАСССТООССССТССС ТОАОАСТСТССТатаСАОССТСТООАТТСАССОТСАОТААСТАТОСАОТОООСТСОС ТССОТСАСССТССАССОААСССССТССАСТСССТСССААТСАТТССТССТААТССТ ААСАСАТСОТАСОСОАОСТСТОСААСАООССОАТТСАССАТСТССАОАОАСААТТС СААСААСАСССТСТАТСТТСАААТСААСАСССТСАОАССТСАССАСАСТССТСТСТ АТТАСТОТОСТАОАООАТАТОСЗССОТАОТОТТОСТГАТТАСОТСТТГААСАТСТОСС ОСССАОООАСССТСОТСАССаТСТССАСС (ЗЕЦ ГО N0: 253).
В одном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной
последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи с 8Нр Ιϋ N0:
402:
САООТОСАОСТООТООАОТСТОООООАООСТТООТССАаССТаОООООТССС ТОАОАСТСТССТОТОСАОССТСТООАТТСАССОТСАОТААСТАТОСАОТСОССТОСО ТССОТСАООСТССАССОААООООСТООАОТОООТССОААТСАТТООТСОТААТООТ ААСАСАТООТАСОСОАОСТСТОСААОАООССОАТТСАССАТСТССАОАОАСААТТС СААОААСАСССТСТАТСТГСАААТОААСАОССТОАОАОСТОАООАСАСТССТОТОТ АТТАСТОТОСТАСАООАТАТООССОТАСТСТТОСТТАСТАСОТСТТГААСАТСТООО ОСССАСООАСССТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСС СССТООСАСССТССТССААОАОСАССТСТОООООСАСАОСООСССТОООСТОССТСО ТСААССАСТАСТТССССОААССООТОАСООТОТСОТСОААСТСАООСОСССТОАСС АССООСОТОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОС АСССТССТСАССОТССССТССАОСАОСТТСООСАСССАОАССТАСАТСТССААССТО ААТСАСААОСССАОСААСАССААООТООАСОСОАОАОТТОАОСССАААТСТТОТОА СААЛАСТСАСАСАТОСССАССОТССССАОСАССТСААСТССТОООСОСАСССТСАО ТСТТССТСТТССССССААААСССААООАСАСССТСАТОАТСТСССООАССССТОАОС ТСАСАТОСОТООТООТООАСОТОАСССАСОААОАСССТОАСОТСААОТТСААСТОО ТАСОТООАСаОСОТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСОООАООАОСАОТ АСОССАОСАСОТАССОТОТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАССАССАСТСОСТОА АТСОСААООАОТАСААОТОСААООТСТССААСАААОСССТСССАОСССССАТСОАО ААААССАТСТССАААОССАААОООСАОСССССАОААССАСАООТОТАСАСССТОСС СССАТСССОСОАСОАОАТОАССААОААССАООТСАСССТОАССТСССТООТСАААС ОСТТСТАТСССАОСОАСАТСОССОТООАСТОООАОАОСААТОООСАОССОСАОААС ААСТАСААОАССАСОССТСССОТССТССАСТССОАСООСТССТТСТТССТСТАСАСС ААОСТСАССОТОСАСААОАОСАОСТСаСАОСАСООСААСОТСТТСТСАТОСТССОТ ОАТОСАТОАСССТСТОСАСААССАСТАСАСОСАСААОАСССТСТСССТСТСТССООО ТАААТСА (5Е0 ГО N0: 404).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Ер Ιϋ N0: 255; 8Ер Ιϋ N0: 256 и 8Ер Ιϋ N0: 257, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СБВ, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи 8Нр Ιϋ N0: 51 или последовательности легкой цепи 8Ер Ιϋ N0: 401.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают или, иначе, состоят из одной или более из полинуклеотидных последовательностей с 8Ер Ιϋ N0: 258; 8Ер Ιϋ N0: 259 и 8Ер Ιϋ N0: 260, которые
- 108 028913
соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СОК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 53 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 402.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с 8ЕЦ ГО N0: 251, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 51; полинуклеотид 8ЕЦ ГО N0: 403, кодирующий последовательность легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 401; полинуклеотид 8ЕЦ ГО N0: 253, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 53; полинуклеотид 8ЕЦ ГО N0: 404, кодирующий последовательность тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 402; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 255; 8ЕЦ ГО N0: 256 и 8ЕЦ ГО N0: 257) вариабельной последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 51 или последовательности легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 401; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (8ЕЦ ГО N0: 258; 8ЕЦ ГО N0: 259 и 8ЕЦ ГО N0: 260) вариабельной последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 53 или последовательности тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 402.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих РаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к антителу АЬ21 полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело АЬ21, содержат или, иначе, состоят из полинуклеотида с 8ЕЦ ГО N0: 403, кодирующего последовательность легкой цепи 8ЕЦ ГО N0: 401, и полинуклеотида с 8ЕЦ ГО N0: 404, кодирующего последовательность тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 402.
В другом необязательном варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, N80, НЕК293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи РюЫа. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ракЮпк. В одном необязательном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), РаЬ-фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением (например, с папаином) АЬ21 после экспрессии полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В другом варианте воплощения изобретения антитела против ФРН, такие как АЬ21 или его РаЬ-фрагменты, могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов АЬ21 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, N80 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные РюЫа) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды РюЫа включают, не ограничиваясь перечисленным, РюЫа ракЮпк.
РаЬ2-фрагмент антитела.
Изобретение дополнительно необязательно направлено на использование с целью лечения или профилактики боли и состояний, связанных с болью, полинуклеотидов, определенных ниже, для получения полипептидов фрагмента антитела РаЬ2, обладающего специфичностью связывания с ФРН, которое ингибирует связывание ФРН с ТгкА и р75, по способам лечения боли у индивида, содержащим введение указанному индивиду полипептидов антитела АЬ1. Изобретение дополнительно направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды фрагмента антитела, обладающего специфичностью связывания с ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды РаЬ по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи с 8НС) ГО N0: 407:
ОАСАТССАОАТОАСССАОТСТССТТССАСССТОТСТОСАТСТСТАООАОАСАС АОТСАССАТСАСТТСССАООССАаТСАОАаСАТГТАСАОСААТСТТаССТООТАТСА ОСАОАААССАСОААААОССССТААОСТССТОАТСТАТОАТОСАТССАСТСТООААТ СТаОАОТСССАТСААООТТСАОСаОСАаТООАТСТОООАСАОАОТАСАСТСТСАСС АТСАОСАОССТОСАОССТОАТОАТТТТаСААСТТАСТАСТСССААСАОаОТТТТАСТ ОТТАОТОАТАТТОАТААТССТТТССОСООАООААССААООТООАААТСАААСаТАС СОТАОСОСССССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАААТСТОО ААСТОССТСТОТТОТСТОССТОСТСААТААСТТСТАТСССАОАОАООССАААОТАСА ОТООААОаТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАООАОАОТаТСАСАОАаС АОСАСАОСААСОАСАОСАССТАСАОССТСАОСАаСАСССТОАСаСТОАОСАААОСА ОАСТАСОАаАААСАСАААОТСТАСОССТаСОААаТСАСССАТСАОООССТОАОСТС ОСССОТСАСАААОАОСТТСААСАООООАОАОТСТТАО (КЕО ЮНО: 409).
В другом необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению содержат или, иначе, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей поли- 109 028913
пептидную последовательность тяжелой цепи с ЗЕф ΙΌ Ν0: 408:
аАООТОСАОСТаОТООАОТСТСООООАаОСТГООТССАОССТООООООТССС
ТОАОАСТСТССТСТОСАаССТСТООАТТСАССОТСАОТААСТАТОСАОТОаОСТСОО
ТССОТСАСССТССАСЗООААООООСТООАаТСаОТСООААТСАТТаОТСОТААТООТ
ААСАСАТСОТАСОСОАОСТСТОСААОАОаССОАТГСАССАТСТССАОАОАСААТГС
СААОААСАСССТОТАТСТТСАААТОААСАОССТСАОАОСТОАООАСАСТССТОТат
АТТАСТСТССТАОАаОАТАТаОСССТАСТОТТССТТАСТАСОТСТТТААСАТСТООО
ОСССАОООАСССТСОТСАССОТСТСОАОСОССТССАССААОООСССАТСООТСТТСС
СССТОаСАСССТССТССААОАОСАССТСТСССООСАСАОСООСССТОООСТОССТСО
ТСААООАСТАСТТССССОААССООТСАСаОТОТСОТООААСТСАСОСОСССТОАСС
АОСаОСаТССАСАССТТССССОСТОТССТАСАОТССТСАООАСТСТАСТСССТСАОС
АОСОТОатОАССаТОСССТССАОСАаСТТаОаСАСССАОАССТАСАТСТССААСОТО
ААТСАСААОСССАОСААСАССААОСТООАСОСОАОАОТТОАОСССАААТСТТСТОА
СААААСТСАСТАО (5Е<Э ГО N0:410).
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие ΡаЬ-фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают одну или более из полинуклеотидных последовательностей с ЗЕф ГО Ν0: 255; ЗЕф ГО Ν0: 256 и ЗЕф ГО Ν0: 257, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СИК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 51 или последовательности легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 409.
В дополнительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела ΡаЬ для лечения или профилактики боли и состояний, ассоциированных с болью, обладающие специфичностью связывания с ФРН, включают одну или более из полинуклеотидных последовательностей с ЗЕф ГО Ν0: 258; ЗЕф ГО Ν0: 259 и ЗЕф ГО Ν0: 260, которые соответствуют полинуклеотидам, кодирующим определяющие комплементарность области (СИК, или гипервариабельные области) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 53 или последовательности тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 410.
По изобретению также необязательно предлагаются полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, описанных здесь. В одном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, обладающие специфичностью связывания с ФРН, содержат или, иначе, состоят из одного, двух, трех или более, включая все из следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотид с ЗЕф ГО Ν0: 251, кодирующий вариабельную последовательность легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 51; полинуклеотид ЗЕф ГО Ν0: 409, кодирующий последовательность легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 407; полинуклеотид ЗЕф ГО Ν0: 253, кодирующий вариабельную последовательность тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 53; полинуклеотид ЗЕф ГО Ν0: 410, кодирующий последовательность тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 408; полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (ЗЕф ГО Ν0: 255; ЗЕф ГО Ν0: 256 и ЗЕф ГО Ν0: 257) вариабельной последовательности легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 51 или последовательности легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 407; и полинуклеотиды, кодирующие определяющие комплементарность области (ЗЕф ГО Ν0: 258; ЗЕф ГО Ν0: 259 и ЗЕО ГО Ν0: 260) вариабельной последовательности тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 53 или последовательности тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 408.
В предпочтительном необязательном варианте воплощения изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, иначе, состоят из полинуклеотидов, кодирующих ΡаЬ-фрагменты (фрагменты антигенного связывания), обладающие специфичностью связывания с ФРН. По отношению к ΡаЬ2фрагменту антитела, полинуклеотиды, кодирующие ΡаЬ-фрагмент, содержат полинуклеотид ЗЕф ГО Ν0: 409, кодирующий последовательность легкой цепи ЗЕф ГО Ν0: 407, и полинуклеотид с ЗЕф ГО Ν0: 410, кодирующий последовательность тяжелой цепи ЗЕф ГО Ν0: 408.
В другом варианте воплощения изобретения предлагаются эти полинуклеотиды, встроенные в вектор экспрессии, для экспрессии в клетках млекопитающего, таких как СНО, Ν50, НЕК-293, или в системах от гриба, насекомого, растения или микроба, например, в клетках дрожжей, таких как дрожжи ΡκΗϊη. Подходящие виды Ρχΐιίίΐ включают, не ограничиваясь перечисленным, Ρ^сН^а ракЮпк. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), ΡаЬ-фрагменты могут быть получены путем экспрессии полинуклеотидов ΡаЬ2 в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО, Ν50 или НЕК 293, в системах от грибов, насекомых, растений или микробов, таких как клетки дрожжей (например, диплоидных дрожжей, таких как диплоидные Ρ^сН^а) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Ρ^сН^а включают, не ограничиваясь перечисленным, Ρ^сЫа ракЮпк.
В одном варианте воплощения изобретение необязательно направлено на изолированный полинуклеотид, содержащий полинуклеотид, кодирующий УН аминокислотную последовательность антитела против ФРН, выбранную из ЗЕО ГО Ν0: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123, 133, 143, 153, 163, 173, 183, 193 или 402, или кодирующий ее вариант, в котором по меньшей мере один каркасный ос- 110 028913
таток (РК-остаток) был замещен на аминокислоту, присутствующую в соответствующем положении в νΗ полипептиде кроличьего антитела против ФРН, или подвергся консервативной аминокислотной замене.
В другом необязательном варианте воплощения изобретение направлено на изолированный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидную последовательность, кодирующую ν2 аминокислотную последовательность антитела против ФРН, выбранную из БЕф ΙΌ ΝΘ: 1, 11,21,31,41,51,61,71,81,91, 101, 111, 121, 131, 141, 151, 161, 171, 181, 191 или 401, или кодирующий ее вариант, в котором по меньшей мере один каркасный остаток (РК-остаток) был замещен на аминокислоту, присутствующую в соответствующем положении в V полипептиде кроличьего антитела против ФРН, или подвергся консервативной аминокислотной замене.
В еще одном необязательном варианте воплощения изобретение направлено на один или более гетерологических полинуклеотидов, включающих последовательность, кодирующую полипептиды, содержащиеся в БЕС) ГО ΝΘ:1 и БЕС) ГО ΝΘ:3; БЕС) ГО ΝΘ:11 и БЕС) ГО ΝΘ:13; БЕС) ГО ΝΘ:21 и БЕС) ГО ΝΘ:23; БЕС) ГО ΝΘ:31 и БЕС) ГО ΝΘ:33; БЕС) ГО ΝΘ:411 и БЕС) ГО ΝΘ:43; БЕС) ГО ΝΘ:51 и БЕС) ГО ΝΘ:53, БЕС) ГО ΝΘ:61 и БЕС) ГО ΝΘ:63; БЕС) ГО ΝΘ:71 и БЕС) ГО ΝΘ:73; БЕС) ГО ΝΘ:81 и БЕС) ГО ΝΘ:83; БЕС) ГО ΝΘ:91 и БЕС) ГО ΝΘ:93; БЕС) ГО ΝΘ:101 и БЕС) ГО ΝΘ:103; БЕС) ГО ΝΘ:111 и БЕС) ГО ΝΘ:113; БЕС) ГО ΝΘ:121 и БЕС) ГО ΝΘ:123; БЕС) ГО ΝΘ:131 и БЕС) ГО ΝΘ:133; БЕС) ГО ΝΘ:141 и БЕС) ГО ΝΘ:143; БЕС) ГО ΝΘ:151 и БЕС) ГО ΝΘ:153; БЕС) ГО ΝΘ:161 и БЕС) ГО ΝΘ:163; БЕС) ГО ΝΘ:171 и БЕС) ГО ΝΘ:173; БЕС) ГО ΝΘ:181 и БЕС) ГО ΝΘ:183; БЕС) ГО ΝΘ:191 и БЕС) ГО ΝΘ:193; или БЕС) ГО ΝΘ:401 и БЕС) ГО ΝΘ:403.
В другом варианте воплощения изобретение необязательно направлено на изолированный полинуклеотид, который экспрессирует полипептид, содержащий по меньшей мере один полипептид СИК, происходящий из антитела против ФРН, отличающийся тем, что указанный экспрессируемый полипептид по отдельности специфически связывает ФРН или специфически связывает ФРН при экспрессии в ассоциации с другой полинуклеотидной последовательностью, экспрессирующей полипептид, содержащий по меньшей мере один полипептид СИК, происходящий из антитела против ФРН, для лечения или профилактики боли и ассоциированных с болью состояний, причем указанная по меньшей мере одна СИК выбрана из тех, которые содержатся в V,, или νΗ полипептидах БЕф ГО ΝΘ: 1, 3, 11, 13, 21, 23, 31, 33, 41, 43, 51, 53, 61, 63, 71, 73, 81, 83, 91, 93, 101, 103, 111, 113, 121, 123, 131, 133, 141, 143, 151, 153, 161, 163, 171, 173, 181, 183, 191, 193, 401 или БЕС) ГО ΝΘ: 403.
Также предлагаются клетки-хозяева и векторы, содержащие указанные полинуклеотиды.
По изобретению дополнительно необязательно предлагаются вектора, содержащие полинуклеотидные последовательности, кодирующие вариабельные полипептидные последовательности тяжелой и легкой цепей, а также индивидуальные определяющие комплементарность области (СИК или гипервариабельные области), как установлено здесь, а также клетки-хозяева, содержащие упомянутые векторные последовательности. В одном варианте воплощения изобретения клетка-хозяин является дрожжевой клеткой. В другом варианте воплощения изобретения дрожжевая клетка-хозяин принадлежит к роду Р1сЫа.
Примеры
Следующие примеры приведены, чтобы предоставить специалисту в данной области техники полное раскрытие и описание того, как изготавливать и использовать предмет изобретения, и не предназначены для того, чтобы ограничивать охват того, что рассматривается в качестве изобретения. Были предприняты меры для обеспечения правильности указанных численных значений (например, количеств, температуры, концентрации и т.д.), но допустимы некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иное, то доли указаны в виде массовых долей, молекулярная масса представляет собой среднюю молекулярную массу, температура указана в градусах Цельсия, а давление близко или равно атмосферному.
Пример 1.
В этом примере описаны способы культивирования, по которым повышается чистота рекомбинантных антител, продуцируемых культивируемыми клетками Р. ра81оп8. Если при культивировании добавляется этанол болюсно, то среди полученных антител наблюдается выраженное снижение концентрации нежелательного продукт-ассоциированного варианта.
Способы
Для получения инокулята выращивали диплоидные Р. ра81оп8 на среде, состоящей из следующих питательных веществ (процентные количества указаны в виде м/об): экстракт дрожжей 3%, безводная декстроза 2%, ΥΝΒ 1,34%, биотин 0,004% и 100 мМ калия фосфат (рН 6,0). Инокулятная среда для серий Б355, Б357, Б358, Б359 и Б360 была составлена из следующих питательных веществ (процентные количества указаны как м/об): экстракт дрожжей 3%, глицерин 2%, ΥΝΒ 1,34%, биотин 0,004%, 200 мМ калия фосфат (рН 6,0). Инокулят выращивали примерно 24-29 ч в инкубаторе с встряхиванием при 30°С и 300 об/мин. Затем в сосуды ЬаЬ£ог8 с рабочим объемом 2,5 л, содержащие по 1 л стерильной питательной среды, добавляли 10% инокулят. Питательная среда была составлена из следующих питательных веществ: калия сульфат 18,2 г/л, аммония фосфат одноосновный 36,4 г/л, калия фосфат двухосновный 12,8 г/л, магния сульфата гептагидрат 3,72 г/л, натрия цитрата дигидрат 10 г/л, глицерин 40 г/л, экстракт дрожжей 30 г/л, микроэлементы РТМ1 4,35 мл/л и пеногаситель-204 1,67 мл/л. Раствор микроэлементов
- 111 028913
РТМ1 был составлен из следующих компонентов: меди сульфата пентагидрат 6 г/л, натрия иодид 0,08 г/л, марганца сульфата гидрат 3 г/л, натрия молибдата дигидрат 0,2 г/л, борная кислота 0,02 г/л, кобальта хлорид 0,5 г/л, цинка хлорид 20 г/л, железа сульфата гептагидрат 65 г/л, биотин 0,2 г/л и серная кислота 5 мл/л. Штамм дрожжей был сконструирован так, чтобы экспрессировать антитело АЪ-А из четырех встроенных геномных копий геномной последовательности, кодирующей тяжелую цепь (δΕΟ ΙΌ N0: 441) и 3 копий последовательности, кодирующей легкую цепь (δΕΟ ΙΌ N0: 440). Копии гена тяжелой цепи были встроены в локус рОАР (3 копии) и в локус ΗΙδ4 ТТ (1 копия), и 3 копии гена легкой цепи были встроены в локус рОАР. Каждая копия гена цепи антитела находилась под контролем промотора ОАР. Контрольные параметры процесса в биореакторе были выставлены следующим образом: перемешивание 1000 об/мин, поток воздуха 1,35 стандартно л/мин, температура 28°С, рН контролировали (на уровне 6) при помощи аммония гидроксида. Добавочный кислород не вводили.
После введения инокулята ферментационные культуры выращивались приблизительно 12-16 ч ("фаза роста"). Фаза роста завершалась по исчерпании первоначального глицерина в среде, о чем судили по всплеску растворенного кислорода ("РК") (внезапное повышение концентрации растворенного кислорода). После всплеска растворенного кислорода культуры выдерживались без подкормки в течение примерно трех часов ("фаза голодания") в случае серии Ь306. Для остальных серий болюс этанола вводили сразу после всплеска РК. Болюс этанола затем вводили в реактор до итоговой концентрации в 1% этанола (м/об). Контрольные культуры обрабатывались таким же образом, за исключением того, что не вводили болюс этанола. Ферментационным культурам давали уравновеситься 15-30 мин ("фаза уравновешивания"). После фазы уравновешивания добавляли подкормки с постоянной скоростью в 30 г/л/ч в течение 40 мин ("переходная фаза"). В течение остального периода культивирования ("продуктивная фаза") концентрацию этанола определяли при помощи этанолчувствительного зонда (Кауеп В1о1есН). который использовался для контроля скорости подкармливания, причем скорость подкармливания устанавливалась на 15 г/л/ч при концентрации этанола ниже установленного уровня, или 7,5 г/л/ч при концентрации этанола выше установленного уровня. В случае, если высокая скорость подкармливания, равная 15 г/л/ч, была недостаточна для поддержания этанола на установленном уровне (что наблюдалось при ферментации серии Ь315), высокую скорость подкармливания устанавливали на 22,5 г/л/ч, а низкую скорость подкармливания - на 15 г/л/ч. Одинаковый уровень поддерживали независимо от того, добавлялся ли или нет болюс этанола в культуру (продуцирование этанола дрожжами приводило к достижению установленного уровня и без болюсного добавления этанола). Подкормка состояла из следующих компонентов: дрожжевой экстракт 50 г/л, безводная декстроза 500 г/л, магния сульфата гептагидрат 3 г/л, микроэлементы РТМ1 12 мл/л, и натрия цитрата дигидрат 0,5 г/л. Общее время ферментации в этих экспериментах обычно составляло 85-97 ч, хотя также могут использоваться и более короткие или длинные периоды времени.
После продуктивной фазы в ферментационные культуры добавляли ПЭИ (полиэтиленимин) и ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) до итоговых концентраций 0,05% м/об и 3 мМ соответственно. Затем культуры центрифугировали, антитела выделяли из культурального супернатанта посредством аффинной хроматографии с протеином А. Вкратце, приблизительно 20 мл 0,2 мкл осветленных супернатантов после сбора ферментационного бульона, разбавляли таким же объемом равновесного буферного раствора (20 мМ гистидина рН6). 20 мл этого разбавленного бульона загружались в предварительно уравновешенную колонку 1 мл ШТгар ΜаЪδе1есΐ διιΐΌ (ΟΕ, Пискатауэй, Нью-Джерси). Колонку затем промывали 40 объемами равновесного буфера. Антитело, связавшееся в колонке, элюировали ступенчатым градиентом 100% элюирующего буфера (100 мМ Лимонной кислоты рН 3,0). Собирали фракции по одному мл, которые незамедлительно нейтрализовывались 100 мкл буферного раствора 2М трис с рН 8,0. Протеинсодержащие фракции выявляли путем измерения поглощения на 280 нм, и протеинсодержащие фракции объединялись.
Очищенные с Протеином А антитела анализировались на чистоту ДСН-ПААГ-электрофорезом. В случае невосстановленных образцов ДСН-ПААГ-электрофорез выполняли в предварительно залитых полиакриламидных гелях (NиРАОΕ® В15-Тг15 Ое1з) содержащих градиент 4-12% полиакриламида, с использованием подвижного буфера ДСН NиРАОΕ® ΜΕδ и буфера образца NиРАОΕ® ΕΌδ (все материалы от ΙηνίίΐΌ^η, Карлсбад, Калифорния) в соответствии с инструкциями производителя. Затем белки были визуализированы путем окрашивания с Кумасси синим. Восстановленные образцы обрабатывались аналогичным способом, за исключением того, что образцы восстанавливались до загрузки, используя восстановитель образца NиРАОΕ® ОпуЦгодеп. Карлсбад, Калифорния) согласно инструкциям производителя.
Результаты
Чтобы определить эффект от болюсного добавления этанола при культивировании на чистоту антитела, антитело АЪ-А было продуцировано в культурах дрожжей без или с добавлением болюса этанола до итоговой концентрации 1% (10 г/л) в конце фазы роста перед продуктивной фазой. Продуктивная фаза продолжалась 97 ч (фиг. 1), 87 ч (фиг. 2), или 86 ч (фиг. 3). Антитело, продуцированное каждой культурой, затем собиралось из питательной среды и очищалось аффинной хроматографией с Протеином А.
- 112 028913
ДСН-ПААГ-электрофорез использовался для определения относительного содержания полноразмерного антитела, "половинного антитела" или комплекса Н1Ь1 (содержащего одну тяжелую и одну легкую цепь) и комплекса Н2Ь1 (содержащего две тяжелые и одну легкую цепь). Содержание комплексов Н1Ь1 и Н2Ь1 было сильно понижено в культурах, которые были продуцированы при болюсном добавлении этанола. Это улучшение было воспроизведено в трех экспериментах, показанных на фиг. 1А, ср. полосы 2, 3 (с болюсом) и 5 (без болюса); фиг. 2А, ср. полосы 2 (с болюсом) и 3 (без болюса); фиг. 3А, ср. полосы 2, 4 (с болюсом) и 5-7 (без болюса). В восстановительных условиях Н1Ь1, Н2Ь1 и полноразмерный вид антител были, каждый, разделены на отдельные тяжелые и легкие цепи для подтверждения того, что линия на 75 кДа состояла из одной легкой и одной тяжелой цепи, соединенных дисульфидной связью (фиг. 1В и 2В; порядок полос аналогичен фиг. 1А и 1В соответственно).
Снижение количества вида Н1Ь1 затем измеряли при помощи 1таде1 для того, чтобы построить график зависимости плотности полосы геля от длины невосстановленных гелей (фиг. 1С-Е и 2С-0 соответственно, соответствующие фиг. 1А, полосы 2, 3 и 5 и фиг. 2А, полосы 2, 3 и фиг. 3В, соответствующий полосам 2 и 4-6 фиг. 3А). Измеряли площадь под пиком Н1Ь1, результаты представлены в виде таблицы на фиг. 1Р, 2Е и 3В. Основываясь на этих измерениях, при добавлении этанола болюсно до продуцирования антител, снижается относительное количество линии на 75 кДа на приблизительно 90% на фиг. 1 А, на приблизительно 85% на фиг. 2А и на приблизительно 87% на фиг. 3А.
Совокупно, эти результаты свидетельствуют о том, что концентрация вида Н1Ь1 сильно снижается при болюсном добавлении этанола в культуру, что приводит к снижению продуцирования вида Н1Ь1 на приблизительно 85-90%.
Пример 2.
В этом примере получены дополнительные результаты в сравнении с примером 1, показано, что по тем же способам достигается аналогичное повышение чистоты антител при использовании для продуцирования двух дополнительных антител.
Способы
Антитела АЪ-В и АЪ-С были получены рекомбинантно по способам, описанным в примере 1. Антитело АЪ-С экспрессировалось из дрожжевого штамма, сконструированного так, чтобы содержать четыре копии кодирующей последовательности тяжелой цепи (ЗЕО ГО N0: 439) и 3 копии последовательности, кодирующей легкую цепь (ЗЕО ГО N0: 438). Из реакторов были взяты образцы и супернатант культур, содержащий антитела, был взят по истечении всего времени ферментации в 67 ч (Т67) или 87 ч (Т87) для антитела АЪ-В и 86 ч (Т86) для антитела АЪ-С, затем их очистили аффинно с Протеином А и проанализировали ДСН-ПААГ-электрофорезом, как описано в примере 1.
Результаты
Антитела АЪ-В (фиг. 4) и АЪ-С (фиг. 5) были продуцированы без или с добавлением болюса этанола до итоговой концентрации 1% в конце фазы роста перед продуктивной фазой. В случае антител, продуцированных без болюсного добавления этанола, наблюдались выраженные отдельные линии вида Н1Ь1 или половинных антител и вида Н2Ь1 (фиг. 4А, полосы 6 и 7; фиг. 4С, полосы 6, 7; фиг. 5А, полосы 5, 6). Интенсивность этих полос существенно снижалась при продуцировании культуры с болюсным добавлением этанола (фиг. 4А, полосы 2-3; фиг. 4С, полосы 2-3; фиг. 5А, полоса 3). В восстановительных условиях линии Н1Ь1 и Н2Ь1 были разделены на отдельные тяжелые и легкие цепи для подтверждения того, что эти виды состоят из полноразмерных тяжелой и легкой цепей (фиг. 4В, 4Ό и 5В; порядок полос аналогичен фиг. 4А, 4Ό и 5А соответственно).
Снижение количества вида Н1Ь1 затем измеряли при помощи 1таде1 для того, чтобы построить график зависимости плотности полосы геля от длины невосстановленных гелей. На фиг. 4Е и 4Р в табличном виде представлены площади пиков Н1Ь1, показанных на фиг. 4А (Т67) и 4С (Т87) соответственно, свидетельствуя о том, что при болюсном добавлении этанола происходит, в среднем, снижение относительного содержания комплексов Н1Ь1 примерно на 73% на более ранний момент времени, показанный на фиг. 4А, и снижение относительного содержания комплексов Н1Ь1 примерно на 34% на более поздний момент времени, показанный на фиг. 4С. Аналогично, на фиг. 5С в табличном виде представлены площади пиков Н1Ь1, показанных на фиг. 5А, свидетельствующие о снижении относительного содержания комплексов Н1Ь1 примерно на 61% при болюсном добавлении этанола.
Совокупно, эти результаты свидетельствуют о том, что концентрация видов Н1Ь1 и Н2Ь1 сильно снижалась на примерно 61-73% при болюсном добавлении этанола в культуру для двух дополнительных антител, обладающих специфичностью связывания с различными мишенями.
Пример 3.
В этом примере дополнительно описано повышение чистоты рекомбинантных антител, продуцируемых культивируемыми клетками Р. раЧопк при добавлении болюса этанола во время культивирования. Помимо выраженного снижения содержания видов Н1Ь1 и Н2Ь1, в этом примере дополнительно показано снижение концентрации других продукт-ассоциированных вариантов.
Способы
Рекомбинантные антитела АЪ-А, АЪ-В и АЪ-С были получены и выделены из культур Р. раЧопк так, как описано в примерах 1 и 2. Антитела были продуцированы либо без, либо с добавлением болюса эта- 113 028913
нола до итоговой концентрации 1% (м/об) в конце фазы роста перед продуктивной фазой. Чтобы проанализировать чистоту препаратов, очищенных с протеином А, использовалась эксклюзионная высокоэффективная жидкостная хроматография (Э-ВЭЖХ). Вкратце, использовался прибор для ВЭЖХ с УФдетектированием ЛдПеШ (Санта-Клара, Калифорния) серии 1200. Для отделения образца использовалась колонка Т8Кде1 30008АХЬ 7,8x300 тт, соединенная с Т8Кде1 Сиагб 8АХЬ 6x40 тт от Тозой ВюЮепсе (Кинг-ов-Пруссиа, Пенсильвания). В качестве подвижной фазы применялся раствор 100 мМ натрия фосфата, 200 мМ натрия хлорида с рН 6,5 со скоростью потока 0,5 мл/мин в изократическом режиме, и отслеживали УФ-поглощение на 215 нм. Перед инжекцией образцов колонка была уравновешена до достижения стабильности базовой линии. Образцы были разбавлены до концентрации в 1 мг/мл подвижной фазой и инжектировали объем в 30 мкл. Для мониторинга работы колонки применялись гельфильтрационные стандарты ВюКаб (Геркулес, Калифорния).
Результаты
Препараты антител АЬ-А, описанные в примере 1, и дополнительные препараты, полученные по тем же способам, экспрессировались в дрожжах, очищались аффинно с протеином А, а затем анализировались на чистоту при помощи эксклюзионной хроматографии (ЭХ). В использованных условиях половинный вид антител (Н1Ь1) коэлюируется с полноразмерным антителом, что, видимо, связано с нековалентным связыванием пар полуантител. Однако по этому способу можно оценивать чистоту относительно других продукт-ассоциированных вариантов, таких как комплексы с отклоняющейся стехиометрией, фрагменты, гликозилированные формы и агрегаты.
Данные Э-ВЭЖХ показаны для образцов АЬ-А, продуцированных без (фиг. 6А, 6С и 6Е) или с (фиг. 6В, 6Ό и 6Р) болюсным добавлением этанола. Был обнаружен продукт-ассоциированный вариант, состоящий из агрегата двух полноразмерных антител (содержащий четыре тяжелых и четыре легких цепи) (стрелка), и его содержание в среднем было пониженным в образцах, изготовленных с добавлением болюса. На фиг. 7 показано количественное определение чистоты АЬ-А путем определения процентного содержания препарата антитела, содержащегося в основном пике (содержащем полное антитело). При болюсном добавлении этанола повышалось среднее процентное содержание в главном пике от 80,3 до 90,6%.
Аналогичный анализ был выполнен для препаратов антител АЬ-В и АЬ-С, описанных в примере 2, количественные результаты которого представлены на фиг. 8 и 9 соответственно. Повысилась общая чистота антитела АЬ-В, средняя фракция в главном пике повысилась с 76 до 79% для Т67 и с 60 до 73% для Т87. В случае антитела АЬ-С заметная разница в чистоте антител, оцениваемая по этому способу, была мала, вероятно, вследствие высокой изначальной чистоты антитела АЬ-С даже в отсутствие добавления болюса.
Совокупно эти результаты показывают, что добавление болюса этанола к культуре может понизить концентрацию иных продукт-ассоциированных вариантов, помимо половинного вида антител.
Пример 4.
В этом примере описано последующее подтверждение принадлежности 75 кДа продуктассоциированного варианта к половинному виду антител, содержащему только одну тяжелую цепь антитела и только одну легкую цепь антитела. Эта гипотеза основывалась на ряде наблюдений. Во-первых, линия 75 кДа присутствовала в образцах, очищенных с протеином А (см. Пример 1), свидетельствуя о том, что в ней содержится по меньшей мере связывающаяся с протеином А часть тяжелой цепи антитела. Во-вторых, линия 75 кДа была выражена у невосстановленных образцах при анализе ДСН-ПААГэлектрофорезом (см, например, фиг. 1А, полосы 2-3), но в восстановительных условиях те же образцы не содержали линий сравнимой интенсивности (отличных от ожидаемых тяжелой и легкой цепей), свидетельствуя о том, что линия 75 кДа не включает других компонентов, кроме тяжелой и легкой цепей антитела (или иных видов с такой же электрофоретической подвижностью). В-третьих, исчезновение линии 75 кДа в восстановленных образцах также свидетельствует о том, что ее составляющие связаны по меньшей мере одной дисульфидной связью. В-четвертых, ЭХ-анализ выявил коэлюирование вида 75 кДа с полноразмерным антителом, что является весомым доказательством в пользу того, что вид 75 кДа может нековалентно самоассоциироваться с образованием полного антитела (или иного комплекса с таким же кажущимся гидродинамическим радиусом). Наконец, кажущаяся молекулярная масса приблизительно в 75 кДа (определенная сравнением с электрофоретическими стандартами), при рассмотрении с наблюдением (в денатурирующих гелях) о том, что этот комплекс состоял только из цепей полноразмерного антитела, согласовывалась с комплексом, содержащим только одну тяжелую цепь и только одну легкую цепь, но не согласовывалась с другими комплексами.
Способы
Для детектирования относительного содержания тяжелых цепей, у которых отсутствовали дисульфидные связи между тяжелыми цепями (в норме присутствующие у аминокислот 220 и 223) в различных образцах, применялась масс-спектрометрия. Двести пятьдесят микрограмм каждого образца помещали в пробирку Эппендорфа. Подходящее количество (~450 мкл) денатурирующего буфера (6 М гуанидинНС1, 1 мМ ЭДТА, 0,25 М трис, рН 7,5) добавляли в пробирку для получения итогового объема в 500 мкл
- 114 028913
и концентрации образца 0,5 мг/мл. Двенадцать с половиной микролитров 2 М иодоацетамида добавляли в каждый образец для алкилирования свободного цистеина. Затем образцы перемешивали на вихревой мешалке и инкубировали при комнатной температуре в темноте в течение 30 ± 5 мин. Образцы затем были обессолены в колонках NАР-5, предварительно уравновешенных расщепляющим буфером (0,1 М трис-НС1, рН 7,5). Каждый образец раствора добавляли к отдельной (предварительно уравновешенной) колонке и давали ему проникнуть в слой колонки. По одному миллилитру расщепляющего буфера добавляли в каждую колонку, элюент собирали в пробирки Эппендорфа. Образцы были разделены на равные аликвоты, содержащие приблизительно по 50 мкг материала (пять аликвот по 200 мкл). Алкилированные и обессоленные аликвоты сохранялись при минус 20°С до необходимости. Одну аликвоту каждого образца (алкилированного и обессоленного) использовали для каждого расщепления. Раствор трипсина на 0,5 мг/мл добавляли в каждую аликвоту образца до соотношения 1:25 м:м трипсин:белок (4 мкл). Все пробирки с трипсином инкубировались при 37 ± 2°С в течение 4 ч. После инкубирования ферментативное расщепление останавливали, добавляя по 1 мкл трифторуксусной кислоты в каждую пробирку. Образцы затем были разделены на две равные части, восстановленную и невосстановленную. Половину образцов восстанавливали в присутствии 1 М ДТТ в течение 1 ч при 37 ± 2°С. Содержимое восстановленных и невосстановленных образцов помещали в ВЭЖХ-флаконы и помещали в автодозатор для анализа.
Данные МС и МС/МС снимали на масс-спектрометре Мюготазз О-Т0Р ИШта, используя ионизацию в электроспрее (Е81) в режиме положительных ионов. Данные собирали по т/ζ 200-1950 в режиме МС. Перед анализом масс-спектрометр был откалиброван при помощи 5го порядка фрагментов ионов [Глу1]-фибринопептида, охватывающего интервал т/ζ от 175 до 1285. Объемы инжекции были подкорректированы так, чтобы достичь загрузки в колонку приблизительно 20 пмоль белка.
Результаты
Основываясь на наблюдениях, обсуждавшихся выше, Заявители предположили, что линия 75 кДа принадлежала к виду "полуантител", содержащему одну тяжелую цепь антитела и одну легкую цепь антитела, ковалентно связанные друг с другом дисульфидными связями, и что пары комплексов полуантител могут нековалентно ассоциироваться с образованием комплекса, обладающего такой же стехиометрией, как у полного антитела (две тяжелые цепи и две легкие цепи), но без дисульфидных связей между двумя тяжелыми цепями ("несвязанные тяжелые цепи"). Исходя из этого, предсказывалось, что относительный уровень линии 75 кДа будет коррелировать с относительной пропорцией несвязанных тяжелых цепей, которая определялась при помощи анализа масс-спектрометрией расщепленных трипсином образцов антител.
Интересующими пептидными фрагментами в этом исследовании являлись Т17 трипсиновый фрагмент тяжелой цепи (Т17Н), который составлен из аминокислот 217-242, соответственно. Аминокислоты 220 и 223 ответственны за дисульфидное связывание между тяжелыми цепями антитела. Как правило, анализ на свободный цистеин может быть проведен путем определения соотношения алкилированных остатков цистеина к неалкилированным остаткам в восстановленных образцах после трипсинового расщепления. Однако алкилированные виды не присутствовали ни в одной партии материала. Было выдвинуто предположение о том, что два остатка цистеина интересующего пептидного фрагмента Т17Н были связаны друг с другом, либо цистеины были защищены четвертичной структурой антитела. В любом из этих случаев остатки цистеина были бы не доступны для алкилирования. Вместо этого для расчета процентной разницы применялся аналитический подход, в котором определялось соотношение невосстановленных видов к восстановленным видам в обеих партиях. У невосстановленных образцов наблюдалось снижение молекулярной массы на 2 Да, свидетельствующее о дисульфидном связывании. Это использовалось для расчета процентного количества свободного Т17Н. Теоретическая масса составила 2727,41 Да для невосстановленного вида Т17Н (дисульфидное связывание между Цис220 и Цис223) и 2729,41 Да для восстановленного пептида.
Извлеченные ионные хроматограммы восстановленных и невосстановленных образцов были проанализированы на репрезентативные зарядные состояния. Соотношение количеств в невосстановленном и восстановленном образцах дало уровень свободного вида Т17Н в 2,3% для антитела, полученного при болюсном добавлении этанола, и 26,1% для образца, полученного без болюсного добавления этанола. Эти результаты представлены в табличном виде на фиг. 9.
Таким образом, содержание тяжелых цепей без дисульфидной связи между тяжелыми цепями было сильно повышено в образце, полученном без болюсного добавления этанола, что дополнительно подтверждает принадлежность этого вида к содержащим одну тяжелую цепь и одну легкую цепь, но не имеющим дисульфидной связи между тяжелыми цепями. Помимо этого, детектирование вида на 2 Да легче ожидаемой массы свидетельствовало о том, что тяжелая цепь в виде Н1Ь1 может содержать дополнительную внутреннюю дисульфидную связь, что может влиять на образование нормальной дисульфидной связи между тяжелыми цепями.
- 115 028913
Пример 5.
В данном примере показана корреляция между жизнеспособностью клеток и чистотой антител. При добавлении этанольного болюса совокупно повышалась жизнеспособность клеток и чистота антител в случае антител АЬ-А и АЬ-В. Помимо этого для антитела АЬ-С, уже обладавшего высокой чистотой даже без добавления болюса, тоже наблюдалось повышение жизнеспособности культуры. При совместном рассмотрении эти результаты свидетельствуют о том, что повышение чистоты антитела при болюсном добавлении этанола, по меньшей мере, частично связано с повышением жизнеспособности культуры.
Способы
Жизнеспособность культуры определялась при помощи Се11оте!ег (№хсе1от). Образцы культур были разбавлены ФСБ до конечного содержания клеток в 1х107-5х 107 клеток/мл. Половина образца затем обрабатывалась нагреванием до 75 °С в течение 10 мин и служила положительным контролем окрашивания с пропидия иодидом (ПИ). Необработанный образец и обработанный образец затем смешивались с ПИ (20 мкл образца и 20 мкл ПИ). Затем образец помещали в выдвижную кассету, и жизнеспособность определяли подсчетом количества нефлуоресцентных клеток, которое затем делили на общее количество клеток. В мертвые клетки проникает пропидия иодид и они флуоресцируют, и как следствие, положительный контроль убитого нагреванием образца должен показывать менее 1% живых клеток.
Результаты
Жизнеспособность клеток определяли для продуцирующих антитело культур, выращенных без или с болюсным добавлением этанола, как описано в примерах 1 и 2. Как описано выше, чистота антител АЬА и АЬ-В существенно повышалась при болюсном добавлении этанола к культуре дрожжей (см. Примеры 1-2 и фиг. 1-4). При добавлении этанольного болюса повышалась также жизнеспособность клеток в этих культурах. В случае антитела АЬ-А жизнеспособность, в среднем, повышалась с 91,9 до 97,2% (фиг. 11), а для антитела АЬ-В жизнеспособность, в среднем, повышалась с 84,8 до 95,1% (фиг. 12). Поскольку антитело АЬ-С уже обладало высокой чистотой даже без болюсного добавления этанола, повышение чистоты этого антитела при болюсном добавлении этанола было более умеренным (см. Пример 3 и фиг. 5). Согласуясь с наблюдением о том, что высокая жизнеспособность клеток коррелировала с более высокой чистотой антитела, культуры с антителом АЬ-С проявляли высокую клеточную жизнеспособность (в среднем 95,8%%) в отсутствие болюсного добавления этанола, лишь незначительно изменявшуюся при болюсном добавлении этанола (96,8%).
При совместном рассмотрении эти результаты свидетельствуют о том, что повышение чистоты антитела при добавлении болюса этанола может быть частично обусловлено (или по меньшей мере коррелирует с) повышением жизнеспособности клеток.
Пример 6.
В данном примере показано, что схожее повышение чистоты антител может быть достигнуто с различными концентрациями болюса этанола.
Способы
Антитело АЬ-А было получено так, как в примере 1, за исключением того, что этанол добавлялся болюсно на уровне 5 г/л (0,5% м/об), 10 г/л (1% м/об), или 15 г/л (1,5% м/об). Образцы антител были выделены из питательной среды на 63 и 86 ч и очищены аффинно с протеином А, затем чистоту анализировали невосстановительным ДСН-ПААГ-электрофорезом, как в примере 1.
Результаты
Чистота антител была сходно высока независимо от концентрации добавленного болюса (от 0,5 до 1,5% м/об), при обеих испытанных временных точках: 63 ч (фиг. 14А) и 86 ч (фиг. 14В). Детектированные уровни видов Н1Ь1 и Н2Ь1 были сходно низки в обеих культурах.
Эти результаты показывают, что повышение чистоты антител может быть достигнуто при варьировании концентрации болюса этанола.
Пример 7.
В данном примере показано, что сходное повышение чистоты антитела может быть достигнуто при варьировании продолжительности "периода голодания" между повышением уровня растворенного кислорода и добавлением болюса этанола в культуры.
Способы
Антитело АЬ-А было продуцировано так, как описано в примере 1, за исключением того, что продолжительность периода голодания - времени между подъемом уровня растворенного кислорода (что свидетельствует об исчерпании источника углерода в культуре) и болюсным добавлением этанола, составляла 0 либо 3 ч. Образцы антител были выделены из питательной среды и очищены аффинно с протеином А, затем чистоту анализировали невосстановительным ДСН-ПААГ-электрофорезом, как в примере 1.
Результаты
Чистота антитела была сходно высока независимо от варьирования периода голодания в пределах 0-3 ч (фиг. 15А, ср. полосы 5 (0 ч голодания) и 6 (3 ч голодания)). Детектированные уровни видов Н1Ь1 и Н2Ь1 были сходно низки в обеих культурах.
- 116 028913
Эти результаты показывают, что повышение чистоты антител может быть достигнуто при варьировании продолжительности периода голодания.
Пример 8.
В данном примере проверено влияние на чистоту антитела различной продолжительности "периода уравновешивания" между добавлением болюса этанола и началом введения подкормки в культуры.
Способы
Антитело АЬ-В было продуцировано так, как описано в примере 2, за исключением того, что продолжительность периода уравновешивания - времени между добавлением болюса этанола и началом подкормки культуры, составляла 0, 30 или 60 мин. Помимо этого в дрожжевом штамме, из которого получали антитело АЬ-В, содержалось три копии гена легкой цепи вместо четырех. Образцы антител были выделены из питательной среды и очищены аффинно с протеином А, затем чистоту анализировали невосстановительным ДСН-ПААГ-электрофорезом, как в примере 1. Жизнеспособность также оценивалась по способам, описанным в примере 5.
Результаты
Чистота антитела была аналогичным образом высокой при периоде уравновешивания 0 или 30 мин (фиг. 16А, полосы 7 и 8 (0 мин уравновешивания) и полоса 3 (30 мин уравновешивания). Однако детектированные уровни видов Н1Ь1 и Н2Ь1 были повышены в культуре с 60-минутным периодом уравновешивания (фиг. 16А, полосы 5, 6).
Жизнеспособность также оценивалась для каждой культуры на временных точках 23 и 85 ч. В случае 60-минутного периода уравновешивания жизнеспособность составляла в пределах 75 и 80% на 23 ч, в то время как для той же временной точки выживаемость составляла приблизительно 88-90% в случае 0 и 30-минутных периодов уравновешивания (фиг. 16В). Затем для 85 ч выживаемость повысилась, но оставалась несколько пониженной для 60-минутного периода уравновешивания относительно 0 и 30минутных периодов уравновешивания (фиг. 16С).
Эти результаты свидетельствуют о том, что повышения чистоты антител можно достичь путем варьирования периода уравновешивания по меньшей мере в пределах 0 и 30 мин, в то время как при периоде уравновешивания 60 мин или больше может наблюдаться некоторое снижение жизнеспособности и чистоты (хотя чистота может все же быть повышена в сравнении с контрольной культурой без болюсного добавления этанола).
Вышеизложенное описание различных вариантов воплощения изобретения не подразумевается как всеобъемлющее или ограничивающее изобретение точно раскрытой формой. Конкретные варианты воплощения и примеры для изобретения описаны здесь в иллюстративных целях, но возможны различные эквивалентные модификации, которые находятся в охвате изобретения, что понятно специалистам в данной области техники. Рекомендации по изобретению, представленные здесь, могут быть применены и с другими целями, отличными от описанных выше примеров.
Изобретение может использоваться практически способами, отличными от конкретно описанных выше в описании и примерах. Возможно множество модификаций и вариаций изобретения в свете рекомендаций, изложенных выше, которые охватываются прилагаемой формулой изобретения.
В изобретение могут быть внесены эти и другие изменения в свете детального описания выше. В общем случае, в следующей ниже формуле изобретения использованные термины не должны пониматься как ограничивающие изобретение конкретными вариантами воплощения, раскрытыми в спецификации и формуле изобретения. Соответственно, изобретение не ограничивается раскрытием, и охват изобретения определяется исключительно следующей ниже формулой изобретения.
Ряд рекомендаций в отношении способов получения клонированной популяции антигенспецифичесих В-клеток был раскрыт в Предварительной патентной заявке США № 60/801412, поданной 19 мая 2006 г., раскрытие которой включено сюда во всей полноте посредством ссылки.
Ряд рекомендаций в отношении гуманизации кроличьих моноклональных антител и предпочтительного модифицирования последовательностей для поддержания антигенсвязывающей аффинности был раскрыт в Международной заявке № РСТ/ЦЬ2008/064421, соответствующей Международной публикации № νΟ/2008/144757, озаглавленной "№уе1 КаЬЬй АпйЬобу Ниташ/аПоп МсПюбк апб Ниташ/еб КаЬЫ! АпйЬобхек", поданной 21 мая 2008 г., раскрытие которой включено сюда во всей полноте посредством ссылки.
Ряд рекомендаций в отношении получения антител или их фрагментов путем спаривания компетентных дрожжей и соответствующие способы были раскрыты в Патентной заявке США № 11/429053, поданной 8 мая 2006 г. (Патентная публикация США № υδ2006/0270045), раскрытие которой включено сюда во всей полноте посредством ссылки.
Сюда включено посредством ссылки во всей полноте раскрытие целиком каждого документа, процитированного здесь (включая патенты, патентные заявки, журнальные статьи, рефераты, руководства, книги или иные раскрытия), включая каждый документ, процитированный в разделах "Уровень техники", "Сущность", "Детальное описание" и "Примеры".
- 117 028913

Claims (70)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ продуцирования антитела, содержащего по меньшей мере одну дисульфидную связь, включающий:
    (а) получение культуры, содержащей клетки РюЫа разЫпз, содержащие гены, которые обеспечивают экспрессию субъединиц указанного антитела;
    (б) добавление болюса этанола к указанной культуре из (а) до обеспечения в результате концентрации этанола 0,5-1,5% м/об в культуре и
    (в) культивирование указанной культуры (Ь) с получением указанного антитела.
  2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что этанольный болюс способствует образованию по меньшей мере одной правильной дисульфидной связи в указанном антителе в сравнении с тем же способом при выполнении в отсутствие болюса этанола.
  3. 3. Способ по любому из пп.1-2, отличающийся тем, что относительное содержание одного или более вариантов антител, содержащих по меньшей мере одну неправильную дисульфидную связь, снижается в сравнении с тем же способом, выполненным в отсутствие болюса этанола.
  4. 4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что относительное содержание вариантов антител с более высокой или более низкой молекулярной массой, чем у указанного желаемого антитела по данным эксклюзионной хроматографии или гель-электрофореза снижается в сравнении с тем же способом, выполненным в отсутствие болюса этанола.
  5. 5. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что относительное содержание вариантов антител с отклоняющейся стехиометрией снижается в сравнении с тем же способом, выполненным в отсутствие болюса этанола.
  6. 6. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что относительное содержание вариантов антител с восстановленными цистеинами снижается в сравнении с тем же способом, выполненным в отсутствие болюса этанола.
  7. 7. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что относительное содержание вариантов антител с неправильным гликозилированием снижается в сравнении с тем же способом, выполненным в отсутствие болюса этанола.
  8. 8. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что увеличивается образование правильных дисульфидных связей между тяжелыми цепями и/или уменьшается образование неправильных дисульфидных связей между тяжелыми цепями.
  9. 9. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что увеличивается образование правильных дисульфидных связей, связывающих легкую и тяжелую цепи и/или уменьшается образование неправильных дисульфидных связей, связывающих легкую и тяжелую цепи.
  10. 10. Способ по п.3, отличающийся тем, что указанные варианты антитела включают один или более из Н1Ь1, Н2Ь1 и Н4Ь4.
  11. 11. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что чистота указанного антитела увеличивается в сравнении с указанным способом, выполненным в отсутствие указанного болюса этанола.
  12. 12. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что на этапе (б) обеспечивается концентрация этанола, которая максимально составляет приблизительно 1,0% (м/об).
  13. 13. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что этап (в) включает предоставление кислорода указанным клеткам.
  14. 14. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанное предоставление кислорода включает перемешивание указанной культуры.
  15. 15. Способ по п.13 или 14, отличающийся тем, что указанное предоставление кислорода включает контактирование указанной культуры с газовой смесью, содержащей кислород.
  16. 16. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что этап (в) включает добавление подкормки, содержащей источник углерода, в указанную культуру.
  17. 17. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанная подкормка содержит по меньшей мере один ферментируемый источник углерода.
  18. 18. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанная подкормка содержит одно или более соединений, выбранных из глюкозы, этанола, цитрата, сорбитола, ксилозы, трегалозы, арабинозы, галактозы, фруктозы, мелибиозы, лактозы, мальтозы, рамнозы, рибозы, маннозы, маннитола и раффинозы.
  19. 19. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что время между этапами
    (а) и (б) составляет меньше чем приблизительно 72 ч, меньше чем приблизительно 48 ч, меньше чем приблизительно 24 ч, меньше чем приблизительно 12 ч, меньше чем приблизительно 9 ч, меньше чем приблизительно 6 ч, меньше чем приблизительно 5 ч, меньше чем приблизительно 4 ч, меньше чем приблизительно 3 ч, меньше чем приблизительно 90 мин, меньше чем приблизительно 30 мин, меньше чем приблизительно 5 мин или меньше чем приблизительно 1 мин.
  20. 20. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что время между этапами
    (б) и (в) составляет меньше чем приблизительно 10 ч, меньше чем приблизительно 9 ч, меньше чем при- 118 028913
    близительно 8 ч, меньше чем приблизительно 7 ч, меньше чем приблизительно 6 ч, меньше чем приблизительно 5 ч, меньше чем приблизительно 4 ч, меньше чем приблизительно 3 ч, меньше чем приблизительно 2 ч, меньше чем приблизительно 90 мин, меньше чем приблизительно 80 мин, меньше чем приблизительно 70 мин, меньше чем приблизительно 60 мин, меньше чем приблизительно 50 мин, меньше чем приблизительно 40 мин, меньше чем приблизительно 30 мин, меньше чем приблизительно 20 мин, меньше чем приблизительно 10 мин, меньше чем приблизительно 5 мин или меньше чем приблизительно 1 мин.
  21. 21. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что культура на этапе (а) получена добавлением в нее источника углерода и культивированием до израсходования источника углерода.
  22. 22. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанный источник углерода содержит одно или более соединений, выбранных из глицерола, глюкозы, этанола, цитрата, сорбитола, ксилозы, трегалозы, арабинозы, галактозы, фруктозы, мелибиозы, лактозы, мальтозы, рамнозы, рибозы, маннозы, маннитола и раффинозы.
  23. 23. Способ по п.21 или 22, отличающийся тем, что израсходование источника углерода выявляется путем детектирования снижения метаболической активности указанных клеток РюЫа разЮпз.
  24. 24. Способ по п.23, отличающийся тем, что указанное снижение метаболической активности указанных клеток РюЫа разЮпз обнаруживается путем детектирования снижения потребления кислорода указанными клетками РюЫа разЮпз, детектирования повышения рН культуры, детектирования стабилизации массы влажных клеток, или детектирования повышения концентрации аммиака в культуре.
  25. 25. Способ по п.24, отличающийся тем, что указанное снижение потребления кислорода указанными клетками РюЫа разЮпз выявляется путем детектирования повышения концентрации растворенного кислорода в указанной культуре.
  26. 26. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что гены, обеспечивающие экспрессию указанного антитела, встроены в один или более геномных локусов клеток РюЫа разЮпз.
  27. 27. Способ по п.26, отличающийся тем, что по меньшей мере один из указанных геномных локусов выбран из группы, состоящей из локуса рОАР, локуса 3' АОХ ТТ; РрИКА5; 0СН1; АОХ1; Ш84; ОАР; рОАР; 3' АОХ ТТ; АКО и локуса Ш84 ТТ.
  28. 28. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что по меньшей мере один из генов, кодирующих указанные субъединицы антитела, экспрессируется под контролем индуцируемого или конститутивного промотора.
  29. 29. Способ по п.28, отличающийся тем, что указанный индуцируемый промотор выбран из группы, состоящей из промоторов АОХ1, СИР1, тетрациклин-индуцируемого, тиамин-индуцируемого и РЬОТ
  30. 30. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что по меньшей мере один из генов, кодирующих указанные субъединицы антитела, экпрессируется под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из: промоторов СИР1, АОХ1, !СЫ1, глицеральдегид-3фосфатдегидрогеназы (ОАР), ΡΤΌ1, АОН1, алкогольдегидрогеназы ΙΙ, ОАЬ4, РНО3, РНО5 и Рук, тетрациклин-индуцируемых промоторов, тиамин-индуцируемых промоторов, полученных из них химерных промоторов, промоторов дрожжей, промоторов млекопитающих, промоторов насекомых, промоторов растений, промоторов пресмыкающихся, промоторов амфибий, промоторов вирусов и промоторов птиц.
  31. 31. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанная клетка Р1сЫа разЮпз является диплоидной, тетраплоидной клеткой или полиплоидной.
  32. 32. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что дополнительно включает очистку указанного антитела от указанных клеток РюЫа разЮпз или от культуральной среды, когда антитело секретируется в указанную среду.
  33. 33. Способ по п.32, отличающийся тем, что указанное антитело отделено от внутриклеточного компонента, цитоплазмы, нуклеоплазмы или мембраны указанных клеток РюЫа разЮпз.
  34. 34. Способ по п.32, отличающийся тем, что указанное антитело очищается от указанной культуральной среды.
  35. 35. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанное антитело является моноспецифическим или биспецифическим антителом.
  36. 36. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанное антитело является человеческим или гуманизированным антителом либо его фрагментом.
  37. 37. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное гуманизированное антитело имеет мышиное, крысиное, кроличье, козье, овечье или коровье происхождение.
  38. 38. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное гуманизированное антитело происходит от кролика.
  39. 39. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанное антитело является моновалентным, бивалентным или мультивалентным антителом.
  40. 40. Способ по п.34, отличающийся тем, что указанное антитело очищено от культуральной среды по аффинности с протеином А и/или протеином О.
  41. 41. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что по меньшей мере один
    - 119 028913
    из генов, обеспечивающих экспрессию субъединиц указанного антитела по меньшей мере в одной из указанных клеток РюЫа раЛопх оптимизирован для экспрессии в клетке РюЫа раЛопз
  42. 42. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что чистота указанного антитела оценивается путем измерения фракции антитела, продуцируемого указанной клеткой РюЫа раЛопх которое имеет ожидаемый гидродинамический радиус, имеет ожидаемую молекулярную массу и/или специфически связывается с мишенью указанного антитела.
  43. 43. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что выход указанного антитела оценивается путем определения количества антитела, продуцируемого указанной клеткой РюЫа раЛопх за вычетом любых вариантов антител, которые аномально гликозилированы, не имеют ожидаемый гидродинамический радиус, не имеют ожидаемую молекулярную массу, и/или которые не могут специфически связываться с мишенью указанного антитела.
  44. 44. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что молекулярная масса указанных антител определяется невосстановительным ДСН-ПААГ-электрофорезом.
  45. 45. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанная клеточная культура продуцирует антитело с супернатантным титром по меньшей мере 100 мг/л, по меньшей мере 150 мг/л, по меньшей мере 200 мг/л, по меньшей мере 250 мг/л, по меньшей мере 300 мг/л, от 100 до 300 мг/л, от 100 до 500 мг/л, от 100 до 1000 мг/л, по меньшей мере 1000 мг/л, по меньшей мере 1250 мг/л, по меньшей мере 1500 мг/л, по меньшей мере приблизительно 1750 мг/л, по меньшей мере приблизительно 2000 мг/л, по меньшей мере приблизительно 10000 мг/л или больше.
  46. 46. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что одна или более субъединиц указанного антитела экспрессируются из более чем одной копии гена.
  47. 47. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что антитело экспрессируется с 1-10 копий гена, кодирующего легкую цепь указанного антитела, и с 1-10 копий гена, кодирующего тяжелую цепь указанного антитела.
  48. 48. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что гены, обеспечивающие экспрессию указанного антитела, содержатся в экстрахромосомном элементе, плазмиде или искусственной хромосоме.
  49. 49. Способ по п.26 или 48, отличающийся тем, что указанные клетки содержат больше копий гена, обеспечивающих экспрессию легкой цепи указанного антитела, нежели копий гена, обеспечивающих экспрессию тяжелой цепи указанного антитела.
  50. 50. Способ по п.26 или 48, отличающийся тем, что соответствующие количества копий гена, кодирующего тяжелую цепь указанного антитела, и количество копий гена, кодирующего легкую цепь указанного антитела, в указанных клетках составляют 2 и 2, 2 и 3, 3 и 3, 3 и 4, 3 и 5, 4 и 3, 4 и 4, 4 и 5, 4 и 6, 5 и 4, 5 и 5, 5 и 6 или 5 и 7.
  51. 51. Способ по п.26 или 48, отличающийся тем, что соответствующие количества копий гена, кодирующего тяжелую цепь указанного антитела, и количество копий гена, кодирующего легкую цепь указанного антитела, в указанных клетках составляют: 2 и 1, 3 и 1, 4 и 1, 5 и 1, 6 и 1, 7 и 1, 8 и 1, 9 и 1, 10 и 1, 1 и 2, 2 и 2, 3 и 2, 4 и 2, 5 и 2, 6 и 2, 7 и 2, 8 и 2, 9 и 2, 10 и 2, 1 и 3, 2 и 3, 3 и 3, 4 и 3, 5 и 3, 6 и 3, 7 и 3, 8 и 3, 9 и 3, 10 и 3, 1 и 4, 2 и 4, 3 и 4, 4 и 4, 5 и 4, 6 и 4, 7 и 4, 8 и 4, 9 и 4, 10 и 4, 1 и 5, 2 и 5, 3 и 5, 4 и 5, 5 и 5, 6 и 5, 7 и 5, 8 и 5, 9 и 5, 10 и 5,1 и 6, 2 и 6, 3 и 6,4 и 6, 5 и 6, 6 и 6, 7 и 6, 8 и 6, 9 и 6, 10 и 6, 1 и 7, 2 и 7, 3 и 7, 4 и 7, 5 и 7, 6 и 7, 7 и 7, 8 и 7, 9 и 7, 10 и 7, 1 и 8, 2 и 8, 3 и 8, 4 и 8, 5 и 8, 6 и 8, 7 и 8, 8 и 8, 9 и 8, 10 и 8, 1 и 9, 2 и 9, 3 и 9, 4 и 9, 5 и 9, 6 и 9, 7 и 9, 8 и 9, 9 и 9, 10 и 9, 1 и 10, 2 и 10, 3 и 10, 4 и 10, 5 и 10, 6 и 10, 7 и 10, 8 и 10, 9 и 10, 10 и 10.
  52. 52. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что культура этапа (в) выращена на производственной среде.
  53. 53. Способ по п.52, отличающийся тем, что указанная производственная среда является минимальной средой.
  54. 54. Способ по п.52, отличающийся тем, что в указанной минимальной среде отсутствуют селективные агенты.
  55. 55. Способ по п.52, отличающийся тем, что в указанной минимальной среде отсутствуют готовые аминокислоты или иные сложные биомолекулы.
  56. 56. Способ по п.52, отличающийся тем, что производственная среда является комплексной средой.
  57. 57. Способ по п.56, отличающийся тем, что комплексная среда содержит один или более компонентов, выбранных из дрожжевого экстракта, соевых пептонов и других растительных пептонов.
  58. 58. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что культура этапа (в) выращивается до высокой плотности клеток.
  59. 59. Способ по п.58, отличающийся тем, что указанная высокая плотность клеток составляет по меньшей мере 50 г/л.
  60. 60. Способ по п.58, отличающийся тем, что указанная высокая плотность клеток составляет по меньшей мере 100 г/л.
  61. 61. Способ по п.58, отличающийся тем, что указанная высокая плотность клеток составляет по меньшей мере 300 г/л.
    - 120 028913
  62. 62. Способ по п.58, отличающийся тем, что указанная высокая плотность клеток составляет по меньшей мере 400 г/л.
  63. 63. Способ по п.58, отличающийся тем, что указанная высокая плотность клеток составляет по меньшей мере 500 г/л.
  64. 64. Способ по п.58, отличающийся тем, что указанная высокая плотность клеток составляет по меньшей мере 750 г/л.
  65. 65. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что клетки РюЫа раз!опз культивируют по меньшей мере до 20 удвоений и в них поддерживаются высокие уровни экспрессии указанного антитела после указанных по меньшей мере 20 удвоений.
  66. 66. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что клетки этапа (в) культивируют по меньшей мере до 50 удвоений и в них поддерживаются высокие уровни экспрессии указанного антитела после указанных по меньшей мере 50 удвоений.
  67. 67. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что клетки этапа (в) культивируют по меньшей мере до 100 удвоений и в них поддерживаются высокие уровни экспрессии указанного антитела после указанных по меньшей мере 100 удвоений.
  68. 68. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что по меньшей мере одна субъединица указанного антитела включает сигнал секреции.
  69. 69. Способ по п.68, отличающийся тем, что указанное антитело является гуманизированным антителом.
  70. 70. Способ по п.68 или 69, отличающийся тем, что сигнал секреции содержит один или более полипептидов, выбранных из группы, состоящей из §ЕР ΙΌ N0: 414-437 и любой их комбинации.
EA201301294A 2011-05-20 2012-05-08 Получение антител высокой чистоты в pichia pastoris EA028913B9 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161488660P 2011-05-20 2011-05-20
US201161496860P 2011-06-14 2011-06-14
US201161496873P 2011-06-14 2011-06-14
US201161525307P 2011-08-19 2011-08-19
PCT/US2012/036953 WO2012161956A2 (en) 2011-05-20 2012-05-08 High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as pichia pastoris

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA201301294A1 EA201301294A1 (ru) 2014-05-30
EA028913B1 true EA028913B1 (ru) 2018-01-31
EA028913B9 EA028913B9 (ru) 2018-03-30

Family

ID=47217961

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201301294A EA028913B9 (ru) 2011-05-20 2012-05-08 Получение антител высокой чистоты в pichia pastoris

Country Status (21)

Country Link
EP (1) EP2710114B1 (ru)
JP (2) JP6193220B2 (ru)
KR (1) KR101981662B1 (ru)
CN (2) CN110408644A (ru)
BR (1) BR112013029902A2 (ru)
CA (1) CA2837000C (ru)
CY (1) CY1124796T1 (ru)
DK (1) DK2710114T3 (ru)
EA (1) EA028913B9 (ru)
ES (1) ES2899381T3 (ru)
HR (1) HRP20211873T1 (ru)
HU (1) HUE060418T2 (ru)
IL (1) IL229430B (ru)
LT (1) LT2710114T (ru)
MX (2) MX368546B (ru)
PL (1) PL2710114T3 (ru)
PT (1) PT2710114T (ru)
RS (1) RS62628B1 (ru)
SG (1) SG194937A1 (ru)
SI (1) SI2710114T1 (ru)
WO (1) WO2012161956A2 (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111973740A (zh) * 2014-03-21 2020-11-24 泰华制药国际有限公司 针对降钙素基因相关肽的拮抗剂抗体及其使用方法
TW202140776A (zh) * 2016-04-26 2021-11-01 美商美國泰福生技股份有限公司 細胞培養基
GB201803832D0 (en) * 2018-03-09 2018-04-25 Syndermix Ag Methods and compositions for lectin production
CN108913732B (zh) * 2018-07-31 2022-02-08 华东理工大学 一种莫纳可林j异源生产的方法及应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040077069A1 (en) * 2000-12-13 2004-04-22 Van De Laar Antonius Johannes Method for the production of a heterologous protein by a fungus
US7927863B2 (en) * 2003-10-22 2011-04-19 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Methods of synthesizing heteromultimeric polypeptides in yeast using a haploid mating strategy

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4855231A (en) 1984-10-30 1989-08-08 Phillips Petroleum Company Regulatory region for heterologous gene expression in yeast
US4818700A (en) 1985-10-25 1989-04-04 Phillips Petroleum Company Pichia pastoris argininosuccinate lyase gene and uses thereof
US4812405A (en) 1986-02-18 1989-03-14 Phillips Petroleum Company Double auxotrophic mutants of Pichia pastoris and methods for preparation
US4929555A (en) 1987-10-19 1990-05-29 Phillips Petroleum Company Pichia transformation
AU6445894A (en) 1993-03-19 1994-10-11 Duke University Method of treatment of tumors with an antibody binding to tenascin
IL114909A (en) 1994-08-12 1999-10-28 Immunomedics Inc Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
US5955349A (en) 1996-08-26 1999-09-21 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for producing heterologous polypeptides in Pichia methanolica
US5736383A (en) 1996-08-26 1998-04-07 Zymogenetics, Inc. Preparation of Pichia methanolica auxotrophic mutants
US6653104B2 (en) 1996-10-17 2003-11-25 Immunomedics, Inc. Immunotoxins, comprising an internalizing antibody, directed against malignant and normal cells
US6730499B1 (en) 1998-07-03 2004-05-04 Research Corporation Technologies, Inc. Promoter for the Pichia pastoris formaldehyde dehydrogenase gene FLD1
WO2000056903A2 (en) * 1999-03-22 2000-09-28 Zymogenetics, Inc. IMPROVED METHODS FOR PRODUCING PROTEINS IN TRANSFORMED $i(PICHIA)
US6258559B1 (en) 1999-03-22 2001-07-10 Zymogenetics, Inc. Method for producing proteins in transformed Pichia
WO2008063302A2 (en) * 2006-10-10 2008-05-29 Keck Graduate Institute Novel p. pastoris pastoris promoters, and the use thereof to direct expression of proteins in yeast, preferably using a haploid mating strategy
SI2164514T1 (sl) 2007-05-21 2017-04-26 Alderbio Holdings Llc Protitelesa proti IL-6 in njihova uporaba
CA2688829A1 (en) 2007-05-21 2008-11-27 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
AU2011336470B8 (en) * 2010-12-01 2017-09-14 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF compositions and use thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040077069A1 (en) * 2000-12-13 2004-04-22 Van De Laar Antonius Johannes Method for the production of a heterologous protein by a fungus
US7927863B2 (en) * 2003-10-22 2011-04-19 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Methods of synthesizing heteromultimeric polypeptides in yeast using a haploid mating strategy

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MICHELE SALIOLA et al.: "Use of the K1ADH4 promoter for ethanol-dependent production of recombinant human serum albumin in Kluyveromyces lactis"; In Applied and Environmental Microbiology, January 1999, vol. 65(1), pp. 53-60, ISSN 0099-2240. See the whole document. *
STEPHAN HELLWIG et al.: "Analysis of single-chain antibody production in Pichia pastoris using on-line methanol control in fed-batch and mixed-feed fermentations"; In Biotechnology and Bioengineering. 20 August 2001, vol. 74(4), pp.344-352, ISSN 0006-3592. See the whole document. *
TEUN VAN DE LAAR et al.: "Increased heterologous protein production by Saccharomyces cerevisiae growing on ethanol as sole carbon source"; In Biotechnology and Bioengineering, 15 February 2007, vol. 96(3), pp. 483-494, ISSN 0006-3592. See the whole document. *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2710114B1 (en) 2021-11-03
WO2012161956A3 (en) 2013-01-17
MX368546B (es) 2019-10-07
EP2710114A4 (en) 2014-11-19
CN103827290A (zh) 2014-05-28
ES2899381T3 (es) 2022-03-11
EA201301294A1 (ru) 2014-05-30
IL229430A0 (en) 2014-01-30
KR20140033445A (ko) 2014-03-18
JP2018007656A (ja) 2018-01-18
HUE060418T2 (hu) 2023-02-28
RS62628B1 (sr) 2021-12-31
NZ718187A (en) 2017-10-27
EA028913B9 (ru) 2018-03-30
IL229430B (en) 2020-07-30
PT2710114T (pt) 2021-12-09
LT2710114T (lt) 2021-12-10
KR101981662B1 (ko) 2019-05-23
JP6193220B2 (ja) 2017-09-06
CA2837000A1 (en) 2012-11-29
SI2710114T1 (sl) 2022-01-31
DK2710114T3 (da) 2021-12-06
CY1124796T1 (el) 2022-11-25
WO2012161956A2 (en) 2012-11-29
CN110408644A (zh) 2019-11-05
NZ618635A (en) 2016-09-30
EP2710114A2 (en) 2014-03-26
SG194937A1 (en) 2013-12-30
MX2019012022A (es) 2019-11-18
MX2013013532A (es) 2015-08-20
CA2837000C (en) 2021-09-14
WO2012161956A9 (en) 2013-09-06
PL2710114T3 (pl) 2022-01-17
HRP20211873T1 (hr) 2022-03-04
JP2014517698A (ja) 2014-07-24
JP6491696B2 (ja) 2019-03-27
BR112013029902A2 (pt) 2016-12-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA1341411C (en) Method for producing fv fragments in eukaryotic cells
AU634314B2 (en) Chimeric mouse-human a10 antibody with specificity to a human tumor cell antigen
CN108699151A (zh) 用于制备免疫球蛋白单可变结构域的方法
CA3118640A1 (en) Single domain antibodies that bind human serum albumin
US9890216B2 (en) Antibodies with engineered IgG Fc domains
EA028913B1 (ru) Получение антител высокой чистоты в pichia pastoris
CN110691796A (zh) 用于增加血液半衰期的抗体fc变体
TW201313899A (zh) 在經轉形的微生物如巴斯德畢赤氏酵母中的多－複製策略用於多－次級單元的蛋白質如抗體之高效價且高純度生產技術
AU632474B2 (en) 14-beta-gal mammalian lectins
US11214610B2 (en) High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as Pichia pastoris
EP0393045B1 (en) Fv antibody fragment production
Parente et al. Clavin, a Type‐1 Ribosome‐Inactivating Protein from Aspergillus clavatus IF0 8605: cDNA Isolation, Heterologous Expression, Biochemical and Biological Characterization of the Recombinant Protein
EP0404003A2 (en) Chimeric mouse-human KM10 antibody with specificity to a human tumor cell antigen
WO1993013209A1 (de) Expression signalpeptid-freier staphilokinasen
CN106674352B (zh) 抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物及应用
CN111909267B (zh) 低免疫原性抗TNF-α人源化单克隆抗体TCX063及其应用
EP0667394A2 (en) Recombinant antibody produced by transformed Bacillus bacteria
CN114591432B (zh) 抗TNFα的单域抗体及其用途
WAGNER et al. Isolation and characterization of two monoclonal antibodies raised against tmsl protein of fission yeast
KR101516054B1 (ko) 신규한 지속형 인간 성장호르몬 단량체를 제조하는 방법
CN116375875A (zh) 一种抗lag3的单域抗体及其用途
CN114763369A (zh) 脂肪肽链及Fab-脂肪链偶联物
COLNAGHI et al. from zyxwvutsrqponmlkjih
NZ618635B2 (en) High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as pichia pastoris
MXPA06004334A (es) Metodos de sintetizacion de polipetidos heteromultimericos en levadura utilizando una estrategia de apareamiento haploide

Legal Events

Date Code Title Description
TH4A Publication of the corrected specification to eurasian patent
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM

PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment