JP6469476B2

JP6469476B2 - 外用剤及び内用剤

Info

Publication number: JP6469476B2
Application number: JP2015036025A
Authority: JP
Inventors: 紘介深田; 山羽　宏行; 宏行山羽; 坂井田　勉; 勉坂井田
Original assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Current assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Priority date: 2015-02-26
Filing date: 2015-02-26
Publication date: 2019-02-13
Anticipated expiration: 2035-02-26
Also published as: JP2016155789A

Description

本発明は、特定の抽出法による赤霊芝の抽出物と黒霊芝の抽出物とを含む抽出物を含有することを特徴とする、美白剤、シワ予防又は改善剤、ＭＭＰ産生抑制剤に関する。

一般にシミ、ソバカス、日焼け等に見られる皮膚の色素沈着は、ホルモンの異常や紫外線の刺激により、皮膚内に存在するメラニン色素生成細胞がメラニン色素を過剰に生成し、これが皮膚内に沈着することが原因と考えられている。このような色素沈着を防ぐ方法の一つに、メラニンの過剰な生成を抑制する方法が知られている。従来、色素沈着の治療にはハイドロキノンやアスコルビン酸（ビタミンＣ）等を外用する処置が行われてきた。

皮膚の老化に伴う変化を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ；ＭａｔｒｉｘＭｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ）の関与が指摘されている。このＭＭＰｓの中でも、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）は、皮膚の真皮細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンを分解する酵素として知られているが、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、コラーゲンの減少・変性の一因となり、皮膚のしわの形成、弾力性の低下等の大きな要因となると考えられている。このようなＭＭＰ−１活性阻害作用を有するものとしては、例えば、マツ科マツ属二葉松類の樹皮の抽出物等が知られている（特許文献１）。

ゼラチナーゼ群に属する酵素であるマトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）は、基底膜の主要構成成分であるＩＶ型コラーゲンやラミニン５を分解する酵素として知られているが、その発現及び活性は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線による基底膜成分の減少、基底膜の構造変化の原因となり、皮膚におけるシワやたるみの形成等の大きな要因となることが明らかとなっている（非特許文献１）。

さらに、ＭＭＰ−２は、血管内皮細胞下に存在する基底膜を構成するＩＶ型コラーゲン等を分解し、分解された血管内皮細胞は間質へ遊走していき、間質中で増殖し、管腔を形成し、新生血管を構築していく。そして、この新生された血管が腫瘍細胞に到達して、栄養源と酸素とを腫瘍細胞に供給し、腫瘍が大きくなっていくことが知られている（非特許文献２）。また、ＭＭＰ−２のノックアウトマウスにおいて、血管新生の未発達やガンの増殖抑制が認められるなど、ＭＭＰ−２は、ガンの増殖や血管新生において重要な役割を果たしている（非特許文献３）。

温度が２０〜１５０℃及び圧力が５〜１００ＭＰａの状態にある二酸化炭素で抽出することにより得られるマンネンタケ抽出物としては、美白用の化粧品、医薬部外品、医薬品、又は食品として利用できることが知られている（特許文献２）。また、温度が２０〜１５０℃及び圧力が５〜１００ＭＰａの状態にある二酸化炭素で抽出することにより得られる、赤霊芝と黒霊芝の抽出物を利用する発毛促進剤（特許文献３）及び皮膚のしわ形成防止・改善剤（特許文献４）が知られている。しかし、温度が２０〜１５０℃及び圧力が５〜１００ＭＰａの状態にある二酸化炭素で抽出することにより得られる、赤霊芝と黒霊芝とを組み合わせることにより、美白作用、シワ予防又は改善作用が相乗的に高まることは全く知られていなかった。

特開２００３−２７７２２３号公報特開２００５−１０４８７３号公報特開２０１３−７１９２７号公報特開２０１４−４３４１３号公報

ＧａｒｙＪ．Ｆｉｓｈｅｒｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９６年，第３７９巻，第２５号，ｐ．３３５血管新生とマトリックスメタロプロテアーゼ，「第１２０回日本医学会シンポジウム記録集血管新生の基礎と臨床」，２００１年１２月１３日，ｐ．４３−４９ＩｔｏｈＴｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９８，５８，１０４８−１０５１

温度が２０〜１５０℃及び圧力が５〜１００ＭＰａの状態にある二酸化炭素で抽出することにより得られる、マンネンタケの抽出物は、抽出率が非常に低く、美白作用、シワ予防又は改善作用等の効果を発揮するためには、大量のマンネンタケが必要であり、生産コストがかかるため、より高い作用を発揮する美白剤、シワ予防又は改善剤等が望まれていた。

本発明は、美白作用、シワ予防又は改善作用等の優れた効果を有する化粧品、医薬部外品、医薬品、食品等を提供することを課題とする。

本発明者らは、この問題点を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、超臨界又はその近傍の状態にある二酸化炭素で抽出することにより得られる、赤霊芝と黒霊芝とを組み合わせることにより、それぞれが有するメラニン生成抑制作用やＭＭＰ産生抑制作用が相乗的に高まることを発見し、本発明を完成するに至った。

本発明の温度が２０〜１５０℃及び圧力が５〜１００ＭＰａの状態にある二酸化炭素で抽出することにより得られる、赤霊芝抽出物と黒霊芝抽出物とを組み合わせた抽出物は、それぞれ単独での効果と比較して、美白作用やシワ予防又は改善作用等が大変優れており、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品の分野において貢献できるものである。

以下に、本発明について詳細に述べる。

本発明に用いられる赤霊芝及び黒霊芝は、マンネンタケ科（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｔａｃｅａｅ）、マンネンタケ属（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）に属する。赤霊芝の学名は（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄｕｍ）であり、黒霊芝の学名は（Ｇ．ａｔｒｕｍ、Ｇ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｇ．ｓｉｎｅｎｓｅ）である。これらは広く中国や日本市場などで流通しているものを用いることができるし、自生品や栽培品を用いても良い。また、菌糸体の培養物も用いることができる。これらは乾燥や粉砕したものを用いることができる。

本発明における赤霊芝及び黒霊芝の抽出法は、温度が２０〜１５０℃及び圧力が５〜１００ＭＰａの状態にある二酸化炭素による抽出によるものであり、それ自体既知の抽出方法に従って実施することができる。

一般に本発明の抽出条件は、温度約２０〜１５０℃、圧力約５〜１００ＭＰａ、好ましくは温度約３０〜６０℃、圧力約１０〜５０ＭＰａの範囲内で、目的に応じた温度及び圧力を採用することができる。また、抽出時間や二酸化炭素の供給量は、目的に応じて適宜選択できる。さらに、共溶媒（エントレーナー）として有機溶媒を用いることもできる。共溶媒としては、エタノール、アセトン等があげられる。中でも、安全性の面からエタノールが好ましい。

抽出は、例えば、上記抽出条件の二酸化炭素を連続的に吹き込むことによって行うことができる。次いで、抽出物を含有する二酸化炭素流体を分離槽に導き、常用されている方法、例えば、圧力を下げる方法、温度を変化させる方法などで分離する。この際、分離槽には抽出された溶質を吸着できる吸着剤や、溶解や分散させることができる媒体（溶剤、基剤）などを充填しておくこともでき、抽出条件に応じた適当な分離手段を採用できる。分離された二酸化炭素は液化槽に輸送して再利用することができる。

本発明の抽出物は、赤霊芝及び黒霊芝は同時に抽出しても、それぞれを抽出後に混合しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。

上記抽出物は、抽出物のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過、脱色、脱臭、乾燥等の処理をして用いても良い。更には、カラム精製等を行って有効成分を濃縮や単離しても良い。

本発明の抽出物は、上記抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内で、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、乳糖、微結晶セルロースなどの希釈剤、潤滑剤、崩壊剤等の成分を配合することもできる。

本発明の抽出物は、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、マッサージクリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、乳濁剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、シロップ剤、飲料、錠剤等が挙げられる。

本発明に用いる上記抽出物の含有量は、外用の場合、全量に対し、固形物に換算して０．００００１重量％以上、好ましくは０．０００１〜１０重量％の含有が良い。０．００００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を越えて含有した場合、効果の増強はみられにくく不経済である。一方、内用の場合、摂取量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、０．１〜５，０００ｍｇ／日、好ましくは１〜１，０００ｍｇ／日が良い。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。

次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、実験例及び処方例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。製造例に示す％とは重量％を、実施例に示す含有量の部とは重量部を示す。

製造例１赤霊芝の超臨界抽出物１
内容積５リットルの抽出槽に赤霊芝の粉砕物１ｋｇを仕込み、これに超臨界二酸化炭素（圧力２５ＭＰａ、温度６０℃、二酸化炭素供給量１０．５ｍ^３）を約４．５時間供給し、抽出槽に接続した分離槽（温度４０℃、圧力４ＭＰａ）に導いて炭酸ガスと抽出物を分離し、抽出物を５．２ｇ得た。

製造例２黒霊芝の超臨界抽出物１
製造例１において赤霊芝を黒霊芝に変え、二酸化炭素供給量を９．０ｍ^３とした以外は、製造例１と同様に処理して抽出物を８．９ｇ得た。

製造例３赤霊芝の超臨界抽出物２
製造例１において、エントレーナーとしてエタノールを約０．３ｋｇ／ｈで供給した以外は製造例１と同様に処理して抽出物のエタノール溶液を１．５Ｌ得た。これをろ過、濃縮乾固し、抽出物を１０．５ｇ得た。

製造例４黒霊芝の超臨界抽出物２
製造例２において、エントレーナーとしてエタノールを約０．３ｋｇ／ｈで供給した以外は製造例２と同様に処理して抽出物のエタノール溶液を１．５Ｌ得た。これをろ過、濃縮乾固し、抽出物を１７．３ｇ得た。

処方例１化粧水
処方含有量(部)
１．赤霊芝の超臨界抽出物１（製造例１）０．００５
２．黒霊芝の超臨界抽出物１（製造例２）０．００５
３．１，３−ブチレングリコール８．０
４．グリセリン２．０
５．キサンタンガム０．０２
６．クエン酸０．０１
７．クエン酸ナトリウム０．１
８．エタノール５．０
９．パラオキシ安息香酸メチル０．１
１０．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）０．１
１１．香料適量
１２．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜７及び１２と、成分１、２及び８〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し、濾過して製品とする。

処方例２クリーム
処方含有量(部)
１．赤霊芝の超臨界抽出物１（製造例１）０．０７
２．黒霊芝の超臨界抽出物１（製造例２）０．０３
３．スクワラン５．５
４．オリーブ油３．０
５．ステアリン酸２．０
６．ミツロウ２．０
７．ミリスチン酸オクチルドデシル３．５
８．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
９．ベヘニルアルコール１．５
１０．モノステアリン酸グリセリン２．５
１１．香料０．１
１２．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１３．パラオキシ安息香酸エチル０．０５
１４．１，３‐ブチレングリコール８．５
１５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１０を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１２〜１５を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１１を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

処方例３乳液
処方含有量(部)
１．赤霊芝の超臨界抽出物１（製造例１）０．０１
２．黒霊芝の超臨界抽出物１（製造例２）０．０４
３．スクワラン５．０
４．オリーブ油５．０
５．ホホバ油５．０
６．セタノール１．５
７．モノステアリン酸グリセリン２．０
８．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
９．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
１０．香料０．１
１１．プロピレングリコール１．０
１２．グリセリン２．０
１３．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

処方例４ゲル剤
処方含有量(部)
１．赤霊芝の超臨界抽出物１（製造例１）０．０１
２．黒霊芝の超臨界抽出物１（製造例２）０．０１
３．エタノール５．０
４．パラオキシ安息香酸メチル０．１
５．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）０．１
６．香料適量
７．１，３‐ブチレングリコール５．０
８．グリセリン５．０
９．キサンタンガム０．１
１０．カルボキシビニルポリマー０．２
１１．水酸化カリウム０．２
１２．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６と、成分７〜１２をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。

処方例５パック
処方含有量(部)
１．赤霊芝の超臨界抽出物２（製造例３）０．０１
２．黒霊芝の超臨界抽出物２（製造例４）０．０１
３．ポリビニルアルコール１２．０
４．エタノール５．０
５．１，３‐ブチレングリコール８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）０．５
８．クエン酸０．１
９．クエン酸ナトリウム０．３
１０．香料適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。

処方例６ファンデーション
処方含有量(部)
１．赤霊芝の超臨界抽出物１（製造例１）０．０７
２．黒霊芝の超臨界抽出物２（製造例４）０．０３
３．ステアリン酸２．４
４．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）１．０
５．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
６．セタノール１．０
７．液状ラノリン２．０
８．流動パラフィン３．０
９．ミリスチン酸イソプロピル６．５
１０．カルボキシメチルセルロースナトリウム０．１
１１．ベントナイト０．５
１２．プロピレングリコール４．０
１３．トリエタノールアミン１．１
１４．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１５．二酸化チタン８．０
１６．タルク４．０
１７．ベンガラ１．０
１８．黄酸化鉄２．０
１９．香料適量
２０．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例７浴用剤
処方含有量(部)
１．赤霊芝の超臨界抽出物２（製造例３）０．０３
２．黒霊芝の超臨界抽出物１（製造例２）０．０７
３．炭酸水素ナトリウム５０．０
４．黄色２０２号（１）適量
５．香料適量
６．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６を均一に混合し製品とする。

処方例８軟膏
処方含有量(部)
１．赤霊芝の超臨界抽出物１（製造例１）０．１
２．黒霊芝の超臨界抽出物２（製造例４）０．１
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）２．０
４．モノステアリン酸グリセリン１０．０
５．流動パラフィン５．０
６．セタノール６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル０．１
８．プロピレングリコール１０．０
９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例９顆粒
処方含有量(部)
１．赤霊芝の超臨界抽出物２（製造例３）２．０
２．黒霊芝の超臨界抽出物１（製造例２）２．０
３．還元麦芽糖水あめ３６．０
４．微結晶セルロース６０．０
［製造方法］成分１〜４に７０％エタノールを適量加えて練和し、押出し造粒した後、乾燥して顆粒剤を得る。当該顆粒を１日１ｇ内用する。

次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。

実験例１メラニン生成抑制試験
対数増殖期にあるＢ１６マウスメラノーマをφ６０ｍｍｄｉｓｈに３×１０^４個播種し、各試料（終濃度は表１に記載）を含むＥａｇｌｅ’ｓＭＥＭ（１０％牛胎児血清含有）培地を加え、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下にて培養した。培養５日後に細胞をｄｉｓｈから剥離し、細胞を超音波破砕した後、４ＮＮａＯＨを加え６０℃で２時間の処理を行い、分光光度計でＯ．Ｄ．４７５ｎｍを測定した。尚、超音波処理後の細胞破砕液をＬｏｗｒｙの方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９３，２６５−２７５，１９５１）でタンパク定量し、タンパク量当りのメラニン量を比較することによって、メラニン生成抑制効果の指標とした。

これらの試験結果を表１に示した。本発明の赤霊芝及び黒霊芝の抽出物を組み合わせた試料は、それぞれ単独の抽出物よりも優れたメラニン生成抑制作用を有していることが認められた。

実験例２ＭＭＰ産生抑制試験
ＭＭＰ産生抑制作用をＭＭＰ−１及びＭＭＰ−２ｍＲＮＡ発現量を指標として評価した。

ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−２ｍＲＮＡ発現量の測定方法
正常ヒト皮膚線維芽細胞を１０％ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ培地にて３７℃、５％ＣＯ_２条件下で培養し、コンフルエントな状態になったところで試料（終濃度は表２及び３に記載）を添加したＤＭＥＭ培地にてさらに２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。総ＲＮＡの抽出にはＲＮＡｉｓｏ（Ｔａｋａｒａ）を用いた。線維芽細胞から抽出した総ＲＮＡを基にリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法によりＭＭＰ−１及びＭＭＰ−２ｍＲＮＡ発現量の測定を行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法にはＳＹＢＲＳｅｌｅｃｔＭａｓｔｅｒＭｉｘ（ライフテクノロジーズ）を用い、ＭＭＰ−１用のｐｒｉｍｅｒとしては５’ＧＧＧＡＧＡＴＣＡＴＣＧＧＧＡＣＡＡＣＴＣ３’（配列番号１）及び５’ＴＧＡＧＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣＡＡＴＡＣＣ３’（配列番号２）を用いた。ＭＭＰ−２用のｐｒｉｍｅｒとしては５’ＣＣＧＴＣＧＣＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡ３’（配列番号３）及び５’ＣＴＴＣＴＧＣＡＴＣＴＴＣＴＴＴＡＧＴＧＴＧＴＣＣＴＴ３’（配列番号４）を用いた。また、内部標準としてはβ−Ａｃｔｉｎを用い、β−Ａｃｔｉｎ用のｐｒｉｍｅｒとしては５’ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ３’（配列番号５）及び５’ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ３’（配列番号６）を用いた。その他の操作は定められた方法に従い、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−２のｍＲＮＡ発現量を内部標準であるβ−ＡｃｔｉｎｍＲＮＡ発現量に対する割合として求めた。

これらの試験結果を表２及び３に示した。本発明の赤霊芝及び黒霊芝の抽出物を組み合わせた試料は、それぞれ単独の抽出物よりも優れたＭＭＰ産生抑制作用を有していることが認められた。

以上のことから、本発明の赤霊芝及び黒霊芝の抽出物は、優れたメラニン生成抑制作用及びＭＭＰ産生抑制作用を示した。よって、本発明の抽出物は、皮膚の老化や美白といった美容分野だけでなく、ガンの予防及び治療といった医療分野にも利用でき、食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品等への応用が期待される。

Claims

温度が２０〜１５０℃及び圧力が５〜１００ＭＰａの状態にある二酸化炭素で抽出することにより得られる、赤霊芝の抽出物と黒霊芝の抽出物とを含有することを特徴とする美白剤。
温度が２０〜１５０℃及び圧力が５〜１００ＭＰａの状態にある二酸化炭素で抽出することにより得られる、赤霊芝の抽出物と黒霊芝の抽出物とを含有することを特徴とするＭＭＰ-1及びＭＭＰ−２産生抑制剤（皮膚外用剤を除く）。