JP6242865B2 - 抗ｐｍｅｌ１７抗体および免疫複合体 - Google Patents

抗ｐｍｅｌ１７抗体および免疫複合体 Download PDF

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Description

本発明は、抗ＰＭＥＬ１７抗体および免疫複合体ならびにそれらを使用する方法に関する。
メラニン細胞タンパク質ＰＭＥＬ１７は、小胞体からゴルジ装置へと運び出され、そこでグリコシル化され、最終的にメラノソームへと輸送される、内在性膜タンパク質である。成熟ＰＭＥＬ１７がメラノソームへと向かう具体的な経路は、議論の対象となってきたが、タンパク質の一部の画分が第Ｉ期メラノソームへの進入前に、細胞表面において一過性で提示されることは明らかである。メラノソームは、ＰＭＥＬ１７タンパク質に由来するタンパク質分解断片からなるフィブリル上に堆積されるメラニン色素を産生する、特化したリソソーム関連オルガネラである。メラニン色素の合成は、メラニン細胞および有糸分裂後の眼部色素上皮に大部分が限定される。メラニン細胞は、色素形成に必要とされる特化した遺伝子を固有に発現し、それらの一部は、黒色腫へのそれらの形質転換後にも維持される。
ヒトＰＭＥＬ１７は、６６１アミノ酸タンパク質（アミノ末端シグナル配列を含む）であり、このうち膜貫通領域がアミノ酸５９６および６１６に位置する。ＰＭＥＬ１７は、複雑なプロセシングを経るが、タンパク質の生活環の少なくとも一部分は、細胞表面上で費やされる。
当該技術分野において、がん等のＰＭＥＬ１７関連病態の診断および治療のために、ＰＭＥＬ１７を標的とする薬剤に対する必要性が存在する。本発明はその必要性を満たし、また他の便益を提供する。
本発明は、抗ＰＭＥＬ１７抗体および免疫複合体ならびにそれらを使用する方法を提供する。
いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７に結合する単離抗体が提供される。いくつかのかかる実施形態において、本抗体は、配列番号２６のアミノ酸１０５〜１２５内のエピトープに結合する。いくつかのかかる実施形態において、本抗体は、配列番号２６のアミノ酸２５〜４５内のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体断片である。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７は、ヒトＰＭＥＬ１７である。いくつかの実施形態において、ヒトＰＭＥＬ１７は、配列番号２６または配列番号２７の配列を有する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、またはＩｇＧ２ｂ抗体である。
いくつかの実施形態において、本抗体は、ａ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および（ｉｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、またはｂ）（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、またはｃ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｈ３、ＨＶＲ−Ｌ３、およびＨＶＲ−Ｈ２を含む。
いくつかの実施形態において、本抗体は、ａ）（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、またはｂ）（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、またはｃ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、およびＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態において、本抗体は、ａ）（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｖｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、またはｂ）（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｖｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、またはｃ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、およびＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本抗体は、ａ）（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、またはｂ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、またはｃ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、およびＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本抗体は、ａ）配列番号１もしくは５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、またはｂ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、またはｃ）（ａ）にあるＶＨ配列および（ｂ）にあるＶＬ配列、またはｄ）配列番号９もしくは４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、またはｅ）配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、またはｆ）（ｄ）にあるＶＨ配列および（ｅ）にあるＶＬ配列、またはｇ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＨ配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、またはｈ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＬ配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、またはｉ）（ｇ）にあるＶＨ配列および（ｈ）にあるＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１もしくは５０のアミノ酸配列を有するＶＨ配列、配列番号９もしくは４９のアミノ酸配列を有するＶＨ配列、またはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ配列、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＬ配列、またはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１もしくは５０のアミノ酸配列を有するＶＨ配列および配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ配列、または（ｂ）配列番号９もしくは４９のアミノ酸配列を有するＶＨ配列および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＬ配列、または（ｃ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＨ配列およびＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７に結合する単離抗体が提供され、この抗体は、ａ）（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および（ｉｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、またはｂ）（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、またはｃ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｉｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、またはｄ）（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｖｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、またはｅ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列または５１、またはｆ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、またはｇ）（ｅ）にあるＶＨ配列および（ｆ）にあるＶＬ配列、またはｈ）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ配列または５１、またはｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬ配列、またはｊ）（ｈ）にあるＶＨ配列および（ｉ）にあるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、またはＩｇＧ２ｂ抗体である。
いくつかの実施形態において、前述の抗体のうちのいずれかをコードする単離核酸が提供される。いくつかの実施形態において、核酸を含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態において、抗体が産生されるように宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法が提供される。
いくつかの実施形態において、免疫複合体が提供される。いくつかのかかる実施形態において、免疫複合体は、前述の抗体のうちのいずれかと、細胞傷害性薬剤とを含む。いくつかの実施形態において、免疫複合体は、式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、（ａ）Ａｂは、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の抗体であり、（ｂ）Ｌは、リンカーであり、（ｃ）Ｄは、メイタンシノイド、オーリスタチン、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン、およびネモルビシン（ｎｅｍｏｒｕｂｉｃｉｎ）誘導体から選択される薬物であり、（ｄ）ｐは、１〜８の範囲である。
いくつかの実施形態において、Ｄは、オーリスタチンである。いくつかのかかる実施形態において、Ｄは、式ＤＥ
Figure 0006242865
を有し、Ｒ２およびＲ６は各々、メチルであり、Ｒ３およびＲ４は各々、イソプロピルであり、Ｒ５は、Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ−ブチルであり、各Ｒ８は独立して、ＣＨ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＨ、およびＨから選択され、Ｒ９は、Ｈであり、Ｒ１８は、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリールである。
いくつかの実施形態において、薬物（Ｄ）は、ＭＭＡＥである。
いくつかの実施形態において、Ｄは、式Ａ、
Figure 0006242865
のピロロベンゾジアゼピンであり、式中、点線は、Ｃ１とＣ２またはＣ２とＣ３との間の二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ２は独立して、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ、およびＣＯＲから選択され、任意に、ハロまたはジハロからさらに選択され、ＲＤは独立して、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、およびハロから選択され、
Ｒ６およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、およびハロから選択され、
Ｒ７は独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、およびハロから選択され、
Ｑは独立して、Ｏ、Ｓ、およびＮＨから選択され、
Ｒ１１は、Ｈ、もしくはＲであるか、または、ＱがＯである場合、ＳＯ３Ｍであるいずれかであり、式中、Ｍは、金属陽イオンであり、
ＲおよびＲ’は各々独立して、置換されていてもよいＣ１−８アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル、およびＣ５−２０アリール基から選択され、任意に、基ＮＲＲ’に関して、ＲおよびＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒に、置換されていてもよい４、５、６、または７員の複素環式環を形成し、
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９、およびＲ１７は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９、およびＲ７について定義される通りであり、
Ｒ″は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、置換されていてもよい１個以上のヘテロ原子および／または芳香族環によって分断され得、
ＸおよびＸ’は独立して、Ｏ、Ｓ、およびＮ（Ｈ）から選択される。
いくつかのかかる実施形態において、Ｄは、構造、
Figure 0006242865
を有し、式中、ｎは、０または１である。
いくつかの実施形態において、Ｄは、
Figure 0006242865
から選択される構造を有し、式中、ＲＥおよびＲＥ”は各々独立して、ＨまたはＲＤから選択され、式中、ＲＤは独立して、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、およびハロから選択され、
Ａｒ１およびＡｒ２は各々独立して、置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり、
ｎは、０または１である。
いくつかの実施形態において、Ｄは、ネモルビシン誘導体である。いくつかのかかる実施形態において、Ｄは、
Figure 0006242865
から選択される構造を有する。
いくつかの実施形態において、リンカーは、プロテアーゼによって切断可能である。いくつかのかかる実施形態において、リンカーは、ｖａｌ−ｃｉｔジペプチドまたはＰｈｅ−Ｌｙｓジペプチドを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、酸不安定性である。いくつかのかかる実施形態において、リンカーは、ヒドラゾンを含む。
いくつかの実施形態において、免疫複合体は、式、
Figure 0006242865
を有し、式中、Ｓは、硫黄原子である。
いくつかの実施形態において、免疫複合体は、式、
Figure 0006242865
を有する。
いくつかの実施形態において、免疫複合体は、
Figure 0006242865
Figure 0006242865
から選択される式を有する。
前述の免疫複合体のいくつかの実施形態において、ｐは、２〜５の範囲である。
いくつかの実施形態において、免疫複合体が提供され、この免疫複合体は、ａ）（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｖｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、またはｂ）（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｖｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、またはｃ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、およびＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を含む。
いくつかの実施形態において、免疫複合体が提供され、この免疫複合体は、（ａ）配列番号１もしくは５０のアミノ酸配列を有するＶＨ配列および配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ配列、または（ｂ）配列番号９もしくは４９のアミノ酸配列を有するＶＨ配列および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＬ配列、または（ｃ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＨ配列およびＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＬ配列を含む、抗体を含む。
いくつかの実施形態において、医薬製剤が提供される。いくつかのかかる実施形態において、医薬製剤は、本明細書に記載される抗体および薬学的に許容される担体を含む。いくつかの実施形態において、医薬製剤は、追加の治療剤をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体を治療する方法が提供される。いくつかのかかる実施形態において、本方法は、個体に、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む有効量の免疫複合体を投与することを含む。いくつかのかかる実施形態において、本方法は、個体に、ＰＭＥＬ１７の細胞外ドメインに結合する抗体を含む有効量の免疫複合体を投与することを含む。いくつかのかかる実施形態において、本方法は、個体に、本明細書に記載される抗体を含む有効量の免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんは、黒色腫である。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体を治療する方法は、追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体を治療する方法が提供され、このＰＭＥＬ１７陽性がんは、第１の治療薬に対して耐性である。いくつかの実施形態において、本方法は、個体に、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む有効量の免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんは、黒色腫である。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、ＰＭＥＬ１７以外の抗原に結合する第１の抗体を含む。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、ＰＭＥＬ１７以外の抗原に結合する第１の抗体と、第１の細胞傷害性薬剤とを含む、第１の免疫複合体である。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、エンドセリンＢ受容体（ＥＴＢＲ）、チロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＹＲＰ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、および糖タンパク質ＮＭＢ（ＧＰＮＭＢ）から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、ＥＴＢＲに結合する。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、ｈｕ５Ｅ９．ｖ１である。いくつかの実施形態において、第１の免疫複合体は、ｈｕ５Ｅ９．ｖ１−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである。いくつかの実施形態において、第１の細胞傷害性薬剤およびＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、異なる。いくつかのかかる実施形態において、第１の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥであり、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン、およびネモルビシン誘導体から選択される。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、ピロロベンゾジアゼピンおよびネモルビシン誘導体から選択される。
いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体を治療する方法が提供され、本方法は、個体に、本明細書に記載される有効量の第１の免疫複合体を、ＥＴＢＲに結合する抗体を含む第２の免疫複合体と組み合わせて投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲに結合する抗体は、配列番号３３の配列を含むＨＶＲ Ｈ１、配列番号３４の配列を含むＨＶＲ Ｈ２、配列番号３５の配列を含むＨＶＲ Ｈ３、配列番号３６の配列を含むＨＶＲ Ｌ１、配列番号３７の配列を含むＨＶＲ Ｌ２、および配列番号３８の配列を含むＨＶＲ Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲに結合する抗体は、配列番号４０の配列を含む重鎖可変領域および配列番号３９の配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、第１の免疫複合体は、オーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン、およびネモルビシン誘導体から選択される細胞傷害性薬剤を含み、第２の免疫複合体は、オーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン、およびネモルビシン誘導体から選択される細胞傷害性薬剤を含む。いくつかの実施形態において、第１の免疫複合体は、ピロロベンゾジアゼピンおよびネモルビシン誘導体から選択される細胞傷害性薬剤を含み、第２の免疫複合体は、オーリスタチンを含む。いくつかの実施形態において、第２の免疫複合体は、ＭＭＡＥを含む。いくつかのかかる実施形態において、第２の免疫複合体は、ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを含むリンカー−薬物部分を含む。いくつかの実施形態において、第２の免疫複合体は、ｈｕ５Ｅ９．ｖ１−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである。前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、ＰＭＥＬ１７陽性がんは、黒色腫であり得る。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんはまた、ＥＴＢＲ陽性でもある。
いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性細胞の増殖を阻害する方法が提供される。いくつかのかかる実施形態において、本方法は、細胞を、本明細書に記載される免疫複合体に、細胞の表面上のＰＭＥＬ１７への免疫複合体の結合を許容する条件下で曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む。いくつかの実施形態において、細胞は、黒色腫細胞である。
いくつかの実施形態において、標識に複合されたＰＭＥＬ１７に結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、標識は、陽電子放出体である。いくつかのかかる実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
いくつかの実施形態において、生体試料中のヒトＰＭＥＬ１７を検出する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、生体試料を、本明細書に記載される抗ＰＭＥＬ１７抗体と、自然発生ヒトＰＭＥＬ１７への抗ＰＭＥＬ１７抗体の結合を許容する条件下で接触させることを含む。いくつかの実施形態において、方法は、複合体が、生体試料中で、抗ＰＭＥＬ１７抗体と自然発生ヒトＰＭＥＬ１７との間で形成されるかどうかを検出することをさらに含む。いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体は、ａ）（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｖｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、またはｂ）（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｖｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、またはｃ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、およびＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、生体試料は、黒色腫試料である。
いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんを検出するための方法が提供される。いくつかのかかる実施形態において、本方法は、（ｉ）標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体を、ＰＭＥＬ１７陽性がんを有するかまたはそれを有することが疑われる対象に投与するステップであって、この標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体が、本明細書に記載される抗ＰＭＥＬ１７抗体を含むステップと、（ｉｉ）対象において標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体を検出するステップであって、この標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体の検出が、対象におけるＰＭＥＬ１７陽性がんを示すステップを含む。いくつかのかかる実施形態において、標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体は、陽電子放出体に複合された抗ＰＭＥＬ１７抗体を含む。いくつかの実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
実施例Ａに記載される、（Ａ）種々の組織におけるヒトＰＭＥＬ１７遺伝子発現のレベルのグラフ表示、および（Ｂ）種々のヒト細胞株におけるヒトＰＭＥＬ１７のレベルのグラフ表示を示す。 抗体８Ｇ３、１７Ａ９、および１５Ｆ２についての（Ａ）軽鎖可変領域配列および（Ｂ）重鎖可変領域配列のアライメントを示す。 抗体８Ｇ３、１７Ａ９、および１５Ｆ２についての（Ａ）軽鎖可変領域配列および（Ｂ）重鎖可変領域配列のアライメントを示す。 実施例Ｄに記載される、７７Ｅ６（ＡおよびＢ）、１７Ａ９（ＣおよびＤ）、および３１Ｄ１（Ｄ）のエピトープマッピングを示す。 実施例Ｇに記載される、黒色腫細胞内の１７Ａ９の内部移行を示す。 実施例Ｉに記載される、１７Ａ９ ＡＤＣの濃度を増加させることによる、種々のＰＭＥＬ１７＋黒色腫細胞株の殺滅を示す。 実施例Ｊに記載される、（Ａ）正常な皮膚における３１Ｄ１染色の分布、（Ｂ）ＦＡＣＳによる正常なメラニン細胞および黒色腫細胞株ＳＫ−ＭＥＬ−５の１７Ａ９染色を示し、（Ｃ）正常なメラニン細胞上の１７Ａ９のＩＣ５０は、黒色腫細胞株上の１７Ａ９のＩＣ５０よりもほぼ１００倍高い。 実施例Ｋに記載される、（Ａ）ＰＭＥＬ１７染色の各レベルについての例となる染色、および（Ｂ）ヒト黒色腫試料のパネルについてのＩＨＣスコアを示す。 実施例Ｌに記載される、ＳＫ−ＭＥＬ−２３細胞株異種移植片における１７Ａ９ ＡＤＣの有効性を示す。 実施例Ｆに記載される、ヒト、マウス、ラット、およびカニクイザルＰＭＥＬ１７のアライメントを示す。 実施例Ｆに記載される、ヒト、マウス、ラット、およびカニクイザルＰＭＥＬ１７のアライメントを示す。 実施例Ｍに記載される、（Ａ）ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２黒色腫細胞を接種され、様々な用量の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥ（「５Ｅ９ｖ１−ｖｃＥ」）投与されたマウスにおける経時的な腫瘍体積、ならびに（Ｂ）漸増濃度の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥ ＡＤＣの存在下で、インビトロで増殖させられた親および耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を示す。 実施例Ｍに記載される、インビボ（ＡおよびＣ）およびインビトロ（ＢおよびＤ）で誘導された親および耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞における、ＥＴＢＲ（ＡおよびＢ、「ＥＤＮＲＢ」とも称される）およびＰＭＥＬ１７（ＣおよびＤ）の発現を示す。 実施例Ｍに記載される、（Ａ）親ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞、（Ｂ）インビボで誘導された耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞、ならびに（Ｃ）インビトロで誘導された耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞の、漸増濃度の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、抗ＰＭＥＬ１７−ｖｃ−ＭＭＡＥ、および抗ｇＤ−ｖｃ−ＭＭＡＥに対する感受性を示す。 実施例Ｍに記載される、（Ａ）親ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞、（Ｂ）インビボで誘導された耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞、ならびに（Ｃ）インビトロで誘導された耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞の、漸増濃度の抗ＥＴＢＲ−ＰＮＵ、抗ＰＭＥＬ１７−ＰＮＵ、および抗ｇＤ−ＰＮＵに対する感受性を示す。 実施例Ｍに記載される、（Ａ）親ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞、（Ｂ）インビボで誘導された耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞、ならびに（Ｃ）インビトロで誘導された耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞の、漸増濃度の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＰＮＵ、抗ＰＭＥＬ１７−ｖｃ−ＰＮＵ、および抗ｇＤ−ｖｃ−ＰＮＵに対する感受性を示す。 （Ａ）Ａｂ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、（Ｂ）Ａｂ−ＭＣ−アセタール−ＰＮＵ−１５９６８２、（Ｃ）Ａｂ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＵ−１５９６８２、（Ｄ）Ａｂ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＢＤ、および（Ｅ）Ａｂ−ＰＮＵ−１５９６８２を含む、種々の抗体−薬物複合体の構造を示す。 （Ａ）Ａｂ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、（Ｂ）Ａｂ−ＭＣ−アセタール−ＰＮＵ−１５９６８２、（Ｃ）Ａｂ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＵ−１５９６８２、（Ｄ）Ａｂ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＢＤ、および（Ｅ）Ａｂ−ＰＮＵ−１５９６８２を含む、種々の抗体−薬物複合体の構造を示す。
Ｉ．定義
本明細書における目的のために、「アクセプターヒトフレームワーク」は、下に記載される、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、またはそれは、アミノ酸配列変化を含有し得る。いくつかの実施形態において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、ＶＬヒト免役グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、総計の非共有性相互作用の強度を指す。別途指定されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示説明および例となる実施形態が、以下に記載される。
「親和性成熟」抗体は、変化を有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１つ以上の変化を有し、かかる変化が抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす、抗体を指す。
「抗ＰＭＥＬ１７抗体」および「ＰＭＥＬ１７に結合する抗体」という用語は、抗体が、診断剤および／または治療剤として、ＰＭＥＬ１７を標的とすることにおいて有用であるように、ＰＭＥＬ１７に十分な親和性で結合可能である抗体を指す。一実施形態において、無関係の非ＰＭＥＬ１７タンパク質への抗ＰＭＥＬ１７抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定するとき、ＰＭＥＬ１７への抗体の結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態において、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５Ｎｍ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、異なる種由来のＰＭＥＬ１７の間で保存されるＰＭＥＬ１７のエピトープに結合する。
「抗体」という用語は、本明細書で最も広義に使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、およびそれらが所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含むが、これらに限定されない、種々の抗体構造を包含する。
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体（ｌｉｎｅａｒ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）；１本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；および抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、その抗原への参照抗体の結合を５０％以上遮断する抗体、および逆に、競合アッセイにおいて、その抗原への抗体の結合を５０％以上遮断する参照抗体を指す。例となる競合アッセイが本明細書に提供される。
「がん」および「がん性」という用語は、無秩序な細胞成長／増殖によって典型的に特徴付けられる、哺乳動物における生理的状態を指すか、または説明する。がんの例としては、黒色腫、がん腫、リンパ腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。かかるがんのより特定の例としては、扁平上皮細胞がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がん、肺の扁平上皮がん、腹膜のがん、肝細胞がん、消化器がん、膵臓がん、神経膠腫、子宮頚がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮がん腫、唾液腺がん、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝臓がん、白血病および他のリンパ増殖性障害、ならびに種々の種類の頭頸部がんが挙げられる。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部分が特定の源または種に由来する一方で、重鎖および／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する、抗体を指す。
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。５つの主要な抗体クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのうちの数個は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分割され得る。免役グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
本明細書で使用される「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を阻害するもしくは阻止する、および／または細胞死もしくは破壊を引き起こす、物質を指す。細胞傷害性薬剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体）；化学療法剤もしくは化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）；増殖阻害剤；核酸分解酵素等の酵素およびそれらの断片；抗生物質；細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片および／または変異体を含む）等の毒素；ならびに下に記載される種々の抗腫瘍または抗がん薬剤が含まれるが、これらに限定されない。
「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学化合物である。化学療法剤の例としては、チオテパおよびシクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、イムプロスルファン、およびピポスルファン等のスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボクオン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミンおよびメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、および９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドレゼシン、カルゼルシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）、およびビセレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミン酸化物塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニマスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等の窒素マスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）等のニトロソ尿素；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンγ１ＩおよびカリケアミシンωＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連する色素タンパクエンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等の、抗生物質；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝拮抗物質；デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート等の葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；葉酸等の葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフオルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）等のメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメト（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）（特に、Ｔ−２トキシン、ベラクリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ Ａ）、ロリジンＡ（ｒｏｒｉｄｉｎ Ａ）、およびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド；、例えば、（ＴＡＸＯＬ（登録商標）；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．），ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）クレモホールを含有しない、アルブミン操作されたパクリタキセルのナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）；Ｒｈoｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチンおよびカルボプラチン等の白金類似体；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボビン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸のレチノイド；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびにＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語）；ＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの略語）；およびＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵおよびロイコボビンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））を用いた治療レジメンの略語）等の上記の２つ以上の組み合わせが挙げられる。
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプにより様々である、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、必要な複数回投薬量で一定期間にわたる、所望の治療的または予防的結果を達成するために有効な量を指す。
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する、免役グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域および変異形Ｆｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在することもあれば、しないこともある。本明細書で別途明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵ付番系に従う。
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメインＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲおよびＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列で現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、および「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有する、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する、抗体を指すように交換可能に使用される。
「ＰＭＥＬ１７のグリコシル化型」という用語は、炭水化物残基の付加によって翻訳後修飾されている、ＰＭＥＬ１７の自然発生型を指す。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、および「宿主細胞培養物」という用語は、交換可能に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞には、初代形質転換細胞および継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」および「形質転換細胞」が含まれる。子孫は、核酸含量において親細胞と完全に同一でない場合があるが、突然変異を含有し得る。元々形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体子孫が、本明細書に含まれる。
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、あるいは他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特異的に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免役グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表する、フレームワークである。一般に、ヒト免役グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位集団から行われる。一般に、配列の下位集団は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にあるような下位集団である。一実施形態において、ＶＬについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団カッパＩである。一実施形態において、ＶＨについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団ＩＩＩである。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基およびヒトＦＲからのアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの、可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが、非ヒト抗体のそれらに対応し、そのＦＲの全てまたは実質的に全てが、ヒト抗体のそれらに対応する。ヒト化抗体は任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化型」は、ヒト化を経た抗体を指す。
本明細書で使用される「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列が高度に変化する、かつ／または構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、天然４本鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、このうち３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。ＨＶＲは一般に、超可変ループからのおよび／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、このうち後者が、配列可変性が最も高く、および／または抗原認識に関与する。例となる超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、および９６〜１０１（Ｈ３）において生じる。（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。例となるＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４〜３４、Ｌ２の５０〜５６、Ｌ３の８９〜９７、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜６５、およびＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。ＶＨにおけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原に接触する残基である、「特異性決定残基」または「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮型（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ）ＣＤＲ、またはａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含有される。例となるａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、およびａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１〜３４、Ｌ２の５０〜５５、Ｌ３の８９〜９６、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜５８、およびＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）。別途指定されない限り、可変ドメインにおけるＨＶＲ残基および他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において上記のＫａｂａｔらに従って付番される。
「免疫複合体」は、細胞傷害性薬剤を含むが、これらに限定されない１個以上の異種性分子（複数可）に複合される抗体である。
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒト、およびサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、個体または対象は、ヒトである。
「単離抗体」は、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定するとき、９５％超または９９％超の純度まで精製される。抗体の純度の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
「単離核酸」は、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を指す。単離核酸には、核酸分子を普通は含有する細胞内に含有される核酸分子が含まれるが、その核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体上の場所とは異なる染色体上の場所に、存在する。
「抗ＰＭＥＬ１７抗体をコードする単離核酸」は、抗体重鎖および軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１個以上の核酸分子を指し、それには単一のベクターまたは別個のベクターにおけるかかる核酸分子（複数可）が含まれ、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
本明細書で使用される「ＰＭＥＬ１７」という用語は、任意の天然ＰＭＥＬ１７を指す。別途指定されない限り、この用語には、霊長類（例えば、ヒトおよびカニクイザル）および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来のＰＭＥＬ１７が含まれる。この用語は、「完全長」のプロセシングされていないＰＭＥＬ１７、ならびに細胞内のプロセシングからもたらされるＰＭＥＬ１７の任意の形態を指す。この用語にはまた、ＰＭＥＬ１７の自然発生変異体、例えば、スプライス変異体または対立遺伝子変異体が含まれる。シグナル配列（アミノ酸１〜２４）を含む、例となるヒトＰＭＥＬ１７プレプロタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２６に示される。例となるヒトＰＭＥＬ１７プロタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２７に示される。例となるカニクイザルＰＭＥＬ１７（シグナル配列を含まない）の予測される配列は、配列番号２８に示される。シグナル配列（アミノ酸１〜２５）を含む、およびシグナル配列を含まない、例となるラットＰＭＥＬ１７についてのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号２９および３０に示される。シグナル配列（アミノ酸１〜２５）を含む、およびシグナル配列を含まない、例となるマウスＰＭＥＬ１７についてのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号３１および３２に示される。
「ＰＭＥＬ１７陽性がん」という用語は、細胞の表面上でＰＭＥＬ１７を発現する（一過性発現を含む）細胞を含むがんを指す。
「ＰＭＥＬ１７陽性細胞」という用語は、その表面上でＰＭＥＬ１７を発現する細胞を指す。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、かつ／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有する、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する、可能性のある変異体抗体を除き、かかる変異体は一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する。故に、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されないものとする。例えば、本発明による使用対象のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免役グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、多様な技法によって作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法および他の例となる方法が、本明細書に記載されている。
「ネイキッド抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識に複合されていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、医薬製剤中に存在してもよい。
「天然抗体」は、様々な構造を有する、自然発生免役グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ ｈｅａｖｙ ｄｏｍａｉｎ）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ ｌｉｇｈｔ ｄｏｍａｉｎ）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの型うちの１つが割り当てられ得る。
「添付文書」という用語は、かかる治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、および／またはその使用に関する警告を含有する、治療薬の商用のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアライメントし、必要な場合、ギャップを導入して、配列同一性最大パーセントを得た後に、配列同一性の部分としていかなる保存的置換も考慮に入れずに、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、当該技術分野における技術の範囲内である種々の方式で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較されている配列の完全長にわたる最大のアライメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアライメントするために適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述され、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権庁（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ），Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能であるか、またはソースコードから編集されてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用する場合は編集すべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変更はない。
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が用いられる場合、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比した、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比したある特定のアミノ酸配列同一性％を有する、またはそれを含む、所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、次のように算出される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡおよびＢのアライメントにおいて同一マッチとしてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である）。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％と等しくはならないことが理解されよう。特に別途定めのない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるように、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
「医薬製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、製剤が投与されるであろう対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を何ら含有しない、調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬剤的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または保存料が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用されるとき、「治療」（および「治療する」または「治療すること」等のその文法上の変形形態）は、治療されている個体の自然過程を変えることを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程の間に行うことができる。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行速度の低減、疾患状態の寛解または一時緩和、および緩解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延するために、または疾患の進行を緩徐にするために使用される。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体を抗原に結合することに関与する、抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨおよびＶＬ）は一般に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）および３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ９１（２００７）を参照されたい）。抗原結合特異性を付与するためには、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分であり得る。さらに、抗原に結合する抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを使用して、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングして、特定の抗原に結合する抗体を単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、連結している別の核酸を増殖することが可能な核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびに導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある特定のベクターは、作動的に連結された核酸の発現を導くことが可能である。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
「アルキル」は、ノルマル、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有する、Ｃ１〜Ｃ１８炭化水素である。例としては、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３がある。
本明細書で使用される「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」基には、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、−ｎ−ヘキシル、−ｎ−ヘプチル、−ｎ−オクチル、−ｎ−ノニルおよび−ｎ−デシルが含まれるが、これらに限定されない一方で、分岐鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルには、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、２−メチルブチルが含まれるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１〜Ｃ８アルキルには、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、−アセチレニル、−プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニル、−３−メチル−１ブチニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ１〜Ｃ８アルキル基は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない１個以上の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
本明細書で使用される「Ｃ１〜Ｃ１２アルキル」という用語は、１〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和炭化水素を指す。Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない１個以上の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
本明細書で使用される「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」基には、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、および−ｎ−ヘキシルが含まれるが、これらに限定されない一方で、分岐鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルには、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、および２−メチルブチルが含まれるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１〜Ｃ６アルキルには、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、および−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、および３−ヘキシルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ１〜Ｃ６アルキル基は、置換されていないか、またはＣ１〜Ｃ８アルキル基について上述される、１個以上の基で置換されている可能性がある。
「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」という用語は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」基には、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチルが含まれるが、これらに限定されない一方で、分岐鎖Ｃ１〜Ｃ４アルキルには、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチルが含まれるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１〜Ｃ４アルキルには、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、および−イソブチレニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ１〜Ｃ４アルキル基は、置換されていないか、またはＣ１〜Ｃ８アルキル基について上述される、１個以上の基で置換されている可能性がある。
「アルコキシ」は、酸素に単結合されたアルキル基である。例となるアルコキシ基には、メトキシ（−ＯＣＨ３）およびエトキシ（−ＯＣＨ２ＣＨ３）が含まれるが、これらに限定されない。「Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ」は、１〜５個の炭素原子を有するアルコキシ基である。アルコキシ基は、置換されていないか、またはアルキル基について上述される、１個以上の基で置換されている可能性があり得る。
「アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有するノルマル、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有する、Ｃ２〜Ｃ１８炭化水素である。例としては、エチレンまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、シクロペンテニル（−Ｃ５Ｈ７）、および５−ヘキセニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ２〜Ｃ８アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有する２〜８個のノルマル、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有する、炭化水素である。
「アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有するノルマル、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有する、Ｃ２〜Ｃ１８炭化水素である。例としては、アセチレン系（−Ｃ≡ＣＨ）およびプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ２〜Ｃ８アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する２〜８個のノルマル、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有する、炭化水素である。
「アルキレン」は、１〜１８個の炭素原子からなり、親アルカンの同じまたは２個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去によってもたらされる２つの一価基中心を有する、飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素基を指す。典型的なアルキレン基には、メチレン（−ＣＨ２−）１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）等が含まれるが、これらに限定されない。
「Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン」は、式−（ＣＨ２）１−１０−の直鎖、飽和炭化水素基である。Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン（ｏｃｙｔｙｌｅｎｅ）、ノニレン、およびデカレンが挙げられる。
「アルケニレン」は、２〜１８個の炭素原子からなり、親アルケンの同じまたは２個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去によってもたらされる２つの一価基中心を有する、不飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素基を指す。典型的なアルケニレン基には、１，２−エチレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）が含まれるが、これらに限定されない。
「アルキニレン」は、２〜１８個の炭素原子からなり、親アルキンの同じまたは２個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去によってもたらされる２つの一価基中心を有する、不飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素基を指す。典型的なアルキニレン基には、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）、および４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）が含まれるが、これらに限定されない。
「アリール」は、炭素環式芳香族基を指す。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。炭素環式芳香族基または複素環式芳香族基は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない１個以上の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
「Ｃ５〜Ｃ２０アリール」は、炭素環式芳香族環内に５〜２０個の炭素原子を有する、アリール基である。Ｃ５〜Ｃ２０アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ５〜Ｃ２０アリール基は、アリール基について上述されるように、置換されているか、または置換されていない可能性がある。「Ｃ５〜Ｃ１４アリール」は、炭素環式芳香族環内に５〜１４個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５〜Ｃ１４アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ５〜Ｃ１４アリール基は、アリール基について上述されるように、置換されているか、または置換されていない可能性がある。
「アリーレン」は、２つの共有結合を有するアリール基であり、次の構造、
Figure 0006242865
に示されるオルト、メタ、またはパラ配置にあり得、そのフェニル基は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない最大４個の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
「アリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子に結合した水素原子のうちの１個が、アリール基と置き換えられている、非環式アルキル基を指す。典型的なアリールアルキル基には、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イル等が含まれるが、これらに限定されない。アリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル基を含む、アルキル部分は、１〜６個の炭素原子であり、アリール部分は、５〜１４個の炭素原子である。
「ヘテロアリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子に結合した水素原子のうちの１個が、ヘテロアリール基と置き換えられている、非環式アルキル基を指す。典型的なヘテロアリールアルキル基には、２−ベンズイミダゾリルメチル、２−フリルエチル等が含まれるが、これらに限定されない。ヘテロアリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル基を含む、アルキル部分は、１〜６個の炭素原子であり、ヘテロアリール部分は、５〜１４個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、およびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、３〜７個の環員を有する単環（２〜６個の炭素原子、または７〜１０環員を有する二環（４〜９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、およびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であり得る。
「置換アルキル」、「置換アリール」、および「置換アリールアルキル」は、１個以上の水素原子が各々独立して置換基と置き換えられている、それぞれ、アルキル、アリール、およびアリールアルキルを意味する。典型的な置換基には、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３ −、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２，−ＰＯ− ３、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２ −、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２が含まれるが、これらに限定されず、式中、各Ｘは独立して、ハロゲン、すなわちＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩであり、各Ｒは独立して、−Ｈ、Ｃ２〜Ｃ１８アルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ３〜Ｃ１４複素環、保護基、またはプロドラッグ部分である。上述のアルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン基もまた、同様に置換され得る。
「ヘテロアリール」および「複素環」は、１個以上の環原子がヘテロ原子、例えば、窒素、酸素、および硫黄である、環系を指す。複素環基は、３〜２０個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、およびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む。複素環は、３〜７個の環員を有する単環（２〜６個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、およびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）、または７〜１０環員を有する二環（４〜９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、およびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であり得る。
例となる複素環は、例えば、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６８）、特に第１、３、４、６、７、および９章、“Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９５０〜現在）、特に第１３、１４、１６、１９、および２８巻、ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載される。
複素環の例としては、限定ではなく例として、ピリジル、ジヒドロピリジル（ｄｉｈｙｄｒｏｙｐｙｒｉｄｙｌ）、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化型テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル（ａｚｏｃｉｎｙｌ）、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソキサゾリル、オキシンドリル、ベンゾキサゾリニル、およびイサチノイル（ｉｓａｔｉｎｏｙｌ）が挙げられる。
限定ではなく例として、炭素が結合する複素環は、ピリジンの２、３、４、５、もしくは６位、ピリダジンの３、４、５、もしくは６位、ピリミジンの２、４、５、もしくは６位、ピラジンの２、３、５、もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、もしくはテトラヒドロピロールの２、３、４、もしくは５位、オキサゾール、イミダゾール、もしくはチアゾールの２、４、もしくは５位、イソキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４、もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３、もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、もしくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、もしくは８位において結合される。さらにより典型的に、炭素が結合した複素環には、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、または５−チアゾリルが含まれる。
限定ではなく例として、窒素が結合した複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリニン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドール、またはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、およびカルバゾールまたはβ−カルボリンの９位において結合される。さらにより典型的に、窒素が結合した複素環には、１−アジリジル、１−アゼテジル（ａｚｅｔｅｄｙｌ）、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル、および１−ピペリジニルが含まれる。
「Ｃ３〜Ｃ８複素環」は、環炭素原子のうちの１〜４個が独立して、Ｏ、Ｓ、およびＮからなる群からのヘテロ原子と置き換えられている、芳香族または非芳香族Ｃ３〜Ｃ８炭素環を指す。Ｃ３〜Ｃ８複素環の代表的な例としては、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、およびテトラゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ３〜Ｃ８複素環は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない最大７個の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
「Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ」は、複素環基の水素原子のうちの１個が結合と置き換えられている、上に定義されるＣ３〜Ｃ８複素環基を指す。Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロは、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない最大６個の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
「Ｃ３〜Ｃ２０複素環」は、環炭素原子のうちの１〜４個が独立して、Ｏ、Ｓ、およびＮからなる群からのヘテロ原子と置き換えられている、芳香族または非芳香族Ｃ３〜Ｃ８炭素環を指す。Ｃ３〜Ｃ２０複素環は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない最大７個の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
「Ｃ３〜Ｃ２０ヘテロシクロ」は、複素環基の水素原子のうちの１個が結合と置き換えられている、上に定義されるＣ３〜Ｃ２０複素環基を指す。
「炭素環」は、単環として３〜７個の炭素原子、または二環として７〜１２個の炭素原子を有する、飽和または不飽和の環を意味する。単環式炭素環は、３〜６個の環原子、さらにより典型的には５または６個の環原子を有する。二環式炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、もしくは［６，６］系として配置される、７〜１２個の環原子、またはビシクロ［５，６］もしくは［６，６］系として配置される、９もしくは１０個の環原子を有する。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが挙げられる。
「Ｃ３〜Ｃ８炭素環」は、３、４、５、６、７、または８員の飽和または不飽和の非芳香族炭素環式環である。代表的なＣ３〜Ｃ８炭素環には、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−シクロペンタジエニル、−シクロヘキシル、−シクロヘキセニル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−シクロヘプチル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニル、−シクロオクチル、および−シクロオクタジエニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ３〜Ｃ８炭素環基は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない１個以上の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
「Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ」は、炭素環基の水素原子のうちの１個が結合と置き換えられている、上に定義されるＣ３〜Ｃ８炭素環基を指す。
「リンカー」は、共有結合、または抗体を薬物部分に共有結合する原子の鎖を含む、化学部分を指す。種々の実施形態において、リンカーには、アルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイル等の二価基、‐（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ‐等の部分、アルキルオキシ（例えば、ポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）およびアルキルアミノ（例えば、ポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））の反復単位、ならびにスクシネート、スクシンアミド、ジグリコレート、マロネート、およびカプロアミドを含む二酸エステルおよびアミドが含まれる。種々の実施形態において、リンカーは、バリン、フェニルアラニン、リジン、およびホモリジン等の１個以上のアミノ酸残基を含むことができる。
「キラル」という用語は、鏡像パートナーと重ね合せできない（ｎｏｎ−ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓａｂｉｌｉｔｙ）特性を有する分子を指し、一方で「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーと重ね合せできる（ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓａｂｉｌｉｔｙ）分子を指す。
「立体異性体」という用語は、同一の化学構成を有するが、空間内の原子または基の配置に関して異なる、化合物を指す。
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラル性の中心を有し、それらの分子が互いの鏡像でない、立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、および反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動法およびクロマトグラフィー等の高解像度分析手順の下で分離されてもよい。
「鏡像異性体」は、互いに重ね合せできない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。
本明細書で使用される立体化学的な定義および慣例は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、およびＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学活性型で存在し、すなわち、それらは、平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する際、接頭辞ＤおよびＬ、またはＲおよびＳは、そのキラル中心（複数可）の周りの分子の絶対配置を表すように使用される。接頭辞ｄおよびｌまたは（＋）および（−）は、化合物による平面偏光の回転の徴候を指定するために用いられ、このうち（−）またはｌは、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、それらが互いの鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、鏡像異性体とも称され得、かかる異性体の混合物は、しばしば鏡像異性体混合物と呼ばれる。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、それらは化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性が存在していない場合に生じ得る。「ラセミ混合物」および「ラセミ体」という用語は、光学活性を欠く２つの鏡像異性体種の等モル混合物を指す。
「脱離基」は、別の官能基によって置換され得る官能基を指す。ある特定の脱離基は、当該技術分野で周知であり、例としては、ハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、メタンスルホニル（メシル）、ｐ−トルエンスルホニル（トシル）、トリフルオロメチルスルホニル（トリフル酸塩）、およびトリフルオロメチルスルホン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
「保護基」という用語は、特定の官能性を、化合物上の他の官能基を反応させながら、ブロッキングするまたは保護するために一般的に用いられる置換基を指す。例えば、「アミノ保護基」は、化合物中のアミノ官能性をブロッキングするまたは保護する、アミノ基に結合した置換基である。好適なアミノ保護基には、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｅｎｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）（Ｆｍｏｃ）が含まれるが、これらに限定されない。保護基の一般的な説明およびそれらの使用については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１、またはより最新版を参照されたい。
ＩＩ．組成物および方法
一態様において、本発明は、部分的に、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体およびかかる抗体を含む免疫複合体に基づく。本発明の抗体および免疫複合体は、例えば、ＰＭＥＬ１７陽性がんの診断または治療に有用である。
Ａ．例となる抗ＰＭＥＬ１７抗体
いくつかの実施形態において、本発明は、ＰＭＥＬ１７に結合する単離抗体を提供する。ＰＭＥＬ１７は、メラニン細胞の細胞表面において一過性で提示される、内在性膜タンパク質である。本明細書で実証されるように、ＰＭＥＬ１７は、試験されたヒト黒色腫検体の大部分において発現される。
シグナル配列（アミノ酸１〜２４）を含む、例となる自然発生ヒトＰＭＥＬ１７プレプロタンパク質配列は、配列番号２６に提供され、対応するＰＭＥＬ１７プロタンパク質配列は、配列番号２７（配列番号２６のアミノ酸２５〜６６１に対応する）に示される。
ある特定の実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号２６のアミノ酸１０５〜１２５内のエピトープに結合するか、または配列番号２６のアミノ酸２５〜４５内のエピトープに結合する。非限定的な例となるかかる抗体には、１７Ａ９、８Ｇ３、および３１Ｄ１が含まれる。いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒトＰＭＥＬ１７に結合する。いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒト、カニクイザル、マウス、およびラットＰＭＥＬ１７から選択されるＰＭＥＬに結合する。
いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号２６のアミノ酸１０５〜１２５内のエピトープに結合する。いくつかのかかる実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＰＭＥＬ１７に、５ｎＭ以下、または４ｎＭ以下、または３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下、かつ任意に０．０００１ｎＭ以上、または０．００１ｎＭ以上、または０．０１ｎＭ以上の親和性で結合する。非限定的な例となるかかる抗体には、本明細書に記載される１７Ａ９および８Ｇ３が含まれる。いくつかの実施形態において、配列番号２６のアミノ酸１０５〜１２５内のエピトープに結合する抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒトＰＭＥＬ１７に結合する。いくつかの実施形態において、配列番号２６のアミノ酸１０５〜１２５内のエピトープに結合する抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒトＰＭＥＬ１７および／またはカニクイザルＰＭＥＬ１７に結合する。
いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号２６のアミノ酸２５〜４５内のエピトープに結合する。いくつかのかかる実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＰＭＥＬ１７に、５ｎＭ以下、または４ｎＭ以下、または３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下、かつ任意に０．０００１ｎＭ以上、または０．００１ｎＭ以上、または０．０１ｎＭ以上の親和性で結合する。非限定的な例となるかかる抗体は、本明細書に記載される３１Ｄ１である。いくつかの実施形態において、配列番号２６のアミノ酸２５〜４５内のエピトープに結合する抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒトＰＭＥＬ１７に結合する。いくつかの実施形態において、配列番号２６のアミノ酸１０５〜１２５内のエピトープに結合する抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒトＰＭＥＬ１７および／またはカニクイザルＰＭＥＬ１７に結合する。
ＰＭＥＬ１７に結合するさらなる抗体が提供される。非限定的な例となる抗ＰＭＥＬ１７抗体は、本明細書に記載される１５Ｆ２である。いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＰＭＥＬ１７に、５ｎＭ以下、または４ｎＭ以下、または３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下、かつ任意に０．０００１ｎＭ以上、または０．００１ｎＭ以上、または０．０１ｎＭ以上の親和性で結合する。いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒトＰＭＥＬ１７に結合する。いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒトＰＭＥＬ１７および／またはカニクイザルＰＭＥＬ１７に結合する。
アッセイ
抗ＰＭＥＬ１７抗体が「配列番号２６のアミノ酸１０５〜１２５内のエピトープに結合する」か、それとも「配列番号２６のアミノ酸２５〜４５内のエピトープに結合する」かを決定するために、実施例Ｄに記載されるように、Ｎ末端およびＣ末端欠失を伴うＰＭＥＬ１７ポリペプチドを２９３細胞内で発現させ、切断型ポリペプチドへの抗体の結合をＦＡＣＳによって試験し、ここで２９３細胞内で発現される完全長ＰＭＥＬ１７への結合と比べた、切断型ポリペプチドへの抗体の結合の実質的な低減（７０％以上の低減）または排除は、その抗体が切断型ポリペプチドに結合しないことを示す。
抗ＰＭＥＬ１７抗体が「５ｎＭ以下、または４ｎＭ以下、または３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下の親和性で結合する」かどうかは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）アッセイに従って決定される。例えば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用した表面プラスモン共鳴アッセイを使用して測定される。ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）リサーチグレードＣＭ５チップを、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）試薬により、供給業者の指示に従って活性化する。ヤギ抗ヒトＦｃ ＩｇＧをチップにカップリングして、各フローセルにおいておよそ１０，０００応答単位（ＲＵ）を達成する。未反応のカップリング基を、１Ｍエタノールアミンによりブロッキングする。動態測定のために、抗ＰＭＥＬ１７抗体を捕捉して、およそ３００のＲＵを達成する。ヒトＰＭＥＬ１７ ＥＣＤ（例えば、バキュロウイルス系において発現されたＣ末端Ｆｃに融合されたアミノ酸２５〜２９１、またはＦｃに融合されたアミノ酸２２〜５５８、１２５ｎＭ〜０．４９ｎＭ）の２倍段階希釈液を、ＨＢＳ−Ｐ緩衝液中（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）、２５℃で、３０μＬ／分の流量により注射する。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ソフトウェア第３．２版）を使用して算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出する。オン速度が、上の表面プラスモン共鳴アッセイによって、１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップトフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００−シリーズＳＬＭ−Ａｍｉｎｃｏ（登録商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭ抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する、蛍光消光技法を使用することによって、決定することができる。
抗体１７Ａ９および他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗ＰＭＥＬ１７抗体を提供する。
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、本抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号５から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメイン、ならびに（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗ＰＭＥＬ１７抗体を提供する。
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。さらなる実施形態において、本抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号５から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメイン、ならびに（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
いくつかの実施形態において、配列番号１７におけるＸ１は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、およびＡｌａから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１７におけるＸ１は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、およびＡｌａから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１７におけるＸ１は、ＡｒｇおよびＧｌｙから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１８におけるＸ２は、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ａｌａ、およびノルロイシンから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１８におけるＸ２は、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、およびＶａｌから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１８におけるＸ２は、ＴｙｒおよびＩｌｅから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１９におけるＸ３は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、およびＶａｌから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１９におけるＸ３は、ＳｅｒおよびＴｈｒから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１９におけるＸ４は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、およびＶａｌから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１９におけるＸ４は、ＳｅｒおよびＴｈｒから選択される。
上の実施形態のいずれにおいても、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、上の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパ１（ＶＬＫＩ）フレームワークおよび／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。いくつかの実施形態において、ヒト化抗ＰＭＥＬ１７抗体は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗ＰＭＥＬ１７抗体は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号１または５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１または５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１または５０において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１または５０において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号１または５０のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体が提供され、この抗体は、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号２のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様において、抗ＰＭＥＬ１７抗体が提供され、この抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、および上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１および配列番号２におけるＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号５０および配列番号２におけるＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗ＰＭＥＬ１７抗体と同じエピトープに結合する、抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号１または５０のＶＨ配列および配列番号２のＶＬ配列を含む抗ＰＭＥＬ１７抗体と同じエピトープに結合する、抗体が提供される。ある特定の実施形態において、アミノ酸１０５〜１２５からの、その内の、またはそれと重複する、配列番号２６のエピトープに結合する、抗体が提供される。
本発明のさらなる態様において、上の実施形態のいずれかによる抗ＰＭＥＬ１７抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
さらなる態様において、上の実施形態のいずれかによる抗ＰＭＥＬ１７抗体は、下の第１〜７節に記載される特徴のうちのいずれをも、単独でまたは組み合わせて、組み込んでもよい。
抗体８Ｇ３および他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗ＰＭＥＬ１７抗体を提供する。
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、本抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号１５から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択され、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメイン、ならびに（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗ＰＭＥＬ１７抗体を提供する。
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。さらなる実施形態において、本抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号１５から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択され、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメイン、ならびに（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
いくつかの実施形態において、配列番号１７におけるＸ１は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、およびＡｌａから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１７におけるＸ１は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、およびＡｌａから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１７におけるＸ１は、ＡｒｇおよびＧｌｙから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１８におけるＸ２は、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ａｌａ、およびノルロイシンから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１８におけるＸ２は、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、およびＶａｌから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１８におけるＸ２は、ＴｙｒおよびＩｌｅから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１９におけるＸ３は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、およびＶａｌから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１９におけるＸ３は、ＳｅｒおよびＴｈｒから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１９におけるＸ４は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、およびＶａｌから選択される。いくつかの実施形態において、配列番号１９におけるＸ４は、ＳｅｒおよびＴｈｒから選択される。
上の実施形態のいずれにおいても、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、上の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗ＰＭＥＬ１７抗体は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗ＰＭＥＬ１７抗体は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号９または４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号９または４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する、ＶＨ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号９または４９において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号９または４９において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号９または４９のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体が提供され、この抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１０において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１０において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号１０のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様において、抗ＰＭＥＬ１７抗体が提供され、この抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、および上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号９および配列番号１０におけるＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号４９および配列番号１０におけるＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗ＰＭＥＬ１７抗体と同じエピトープに結合する、抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号９または４９のＶＨ配列および配列番号１０のＶＬ配列を含む抗ＰＭＥＬ１７抗体と同じエピトープに結合する、抗体が提供される。ある特定の実施形態において、アミノ酸１０５〜１２５からの、その内の、またはそれと重複する、配列番号２６のエピトープに結合する、抗体が提供される。
本発明のさらなる態様において、上の実施形態のいずれかによる抗ＰＭＥＬ１７抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
さらなる態様において、上の実施形態のいずれかによる抗ＰＭＥＬ１７抗体は、下の第１〜７節に記載される特徴のうちのいずれをも、単独でまたは組み合わせて、組み込んでもよい。
抗体１５Ｆ２および他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗ＰＭＥＬ１７抗体を提供する。
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、本抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号２２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択され、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメイン、ならびに（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
上の実施形態のいずれにおいても、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、上の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗ＰＭＥＬ１７抗体は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号１１または５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１１または５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する、ＶＨ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１１または５１において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１１または５１において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号１１または５１のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体が提供され、この抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１２において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１２において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、配列番号１２のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様において、抗ＰＭＥＬ１７抗体が提供され、この抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、および上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１１および配列番号１２におけるＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号５１および配列番号１２におけるＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗ＰＭＥＬ１７抗体と同じエピトープに結合する、抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号１１または５１のＶＨ配列および配列番号１２のＶＬ配列を含む抗ＰＭＥＬ１７抗体と同じエピトープに結合する、抗体が提供される。
本発明のさらなる態様において、上の実施形態のいずれかによる抗ＰＭＥＬ１７抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
さらなる態様において、上の実施形態のいずれかによる抗ＰＭＥＬ１７抗体は、下の第１〜７節に記載される特徴のうちのいずれをも、単独でまたは組み合わせて、組み込んでもよい。
抗体３１Ｄ１および他の実施形態
一態様において、本発明は、「７５０９（３１Ｄ１．６．７）」と指定され、２０１２年４月２４日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマによって産生された抗体の少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗ＰＭＥＬ１７抗体を提供する。本節の目的のために、ＨＶＲは、ＣＤＲ、すなわち、軽鎖可変領域のアミノ酸残基２４〜３４、５０〜５６、および８９〜９７、ならびに重鎖可変領域のアミノ酸残基３１〜３５Ｂ、５０〜６５、および９５〜１０２において生じるＣＤＲ（それぞれ、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３）に対応する、アミノ酸範囲によって描写される。Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい。
一態様において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、本抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｈ３およびＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｈ３、ＨＶＲ−Ｌ３、およびＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、およびＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、およびＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン、および（ｂ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインを含む。
別の態様において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、およびＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
上の実施形態のいずれにおいても、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ヒト化されている。１つのかかる実施形態において、本抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のヒト化型である。さらなる実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、上の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＨに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、ＶＨ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＨにおいて置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＨは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、およびＨＶＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様において、抗ＰＭＥＬ１７抗体が提供され、この抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＬに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＬにおいて置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＬは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、およびＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様において、抗ＰＭＥＬ１７抗体が提供され、この抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、および上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体のＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗ＰＭＥＬ１７抗体と同じエピトープに結合する、抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８６２を有するハイブリドーマ７５０９（３１Ｄ１．６．７）によって産生された抗体と同じエピトープに結合する、抗体が提供される。
本発明のさらなる態様において、上の実施形態のいずれかによる抗ＰＭＥＬ１７抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ２ｂ抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
さらなる態様において、上の実施形態のいずれかによる抗ＰＭＥＬ１７抗体は、下の第１〜７節に記載される特徴のうちのいずれをも、単独でまたは組み合わせて、組み込んでもよい。
１．抗体親和性
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下、かつ任意に、１０−１３Ｍ以上（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
一実施形態において、Ｋｄは、目的の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原と共に行われる、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、次のアッセイによって記載されるように測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、Ｆａｂを、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉することによって、測定される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍＬの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンにより、室温（およそ２３℃）で２〜５時間ブロッキングする。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致するように）。目的のＦａｂを次いで一晩インキュベートするが、インキュベーションは、平衡に到達することを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物を、室温での（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために、捕捉プレートに移す。溶液を次いで除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したとき、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）γ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）により１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおいて使用するために選定する。
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用した表面プラスモン共鳴アッセイを使用して、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて測定される。簡潔に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５，ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシン酸イミド（ＮＨＳ）により、供給業者の指示に従って活性化する。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）まで希釈した後、５μＬ／分の流速で注射して、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注射後、１Ｍのエタノールアミンを注射して、未反応の基をブロッキングする。動態測定のために、Ｆａｂ（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）の２倍段階希釈液を、ＰＢＳ中、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）と共に、２５℃で、およそ２５μＬ／分の流量で注射する。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して、会合センサグラムおよび解離センサグラムを同時に適合することによって、算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出する。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。オン速度が、上の表面プラスモン共鳴アッセイによって、１０６ Ｍ−１ ｓ−１を超える場合、オン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップトフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭ抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する、蛍光消光技法を使用することによって、決定することができる。
２．抗体断片
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ断片、ならびに下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈuｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、また、国際公開第９３／１６１８５号、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有する、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
ダイアボディは、二価性または二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ（Ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）およびテトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）もまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載される。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部分または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部分を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６ Ｂ１号を参照されたい）。
抗体断片は、本明細書に記載される、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、ならびに組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、種々の技法によって作製することができる。
３．キメラおよびヒト化抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、およびＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載される。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長類に由来する可変領域）およびヒト定常領域を含む。さらなる実施例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のそれから変更された、「クラススイッチされた」抗体である。キメラ抗体には、それらの抗原結合断片が含まれる。
ある特定の実施形態において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するために、ヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。任意にヒト化抗体はまた、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元するまたは改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体およびそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説され、また例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、および同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記載する）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載する）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載する）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８（２００５）およびＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチを記載する）にさらに記載される。
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、次のものが含まれるが、これらに限定されない：「最良適合（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、およびＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞株フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）およびＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）。
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）およびＬｏｎｂｅｒｇ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載される。
ヒト抗体は、免疫原を、抗原攻撃に応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を含むインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に投与することによって、調製されてもよい。かかる動物は典型的に、内因性免役グロブリン遺伝子座を置き換える、または染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体中に無作為に組み込まれる、ヒト免役グロブリン遺伝子座の全てまたは一部分を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免役グロブリン遺伝子座は一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する）、米国特許第５，７７０，４２９号（ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載する）、米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する）、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ ２００７／００６１９００号（ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する）を参照されたい。かかる動物によって生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾されてもよい。
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、およびＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ−細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載される。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、およびＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）およびＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）にも記載される。
ヒト抗体はまた、Ｆｖクローン可変ドメイン配列をヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択して単離することによって、生成されてもよい。かかる可変ドメイン配列は次いで、所望のヒト定常ドメインと組み合わされてもよい。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が、下に記載される。
５．ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、コンビナトリアルライブラリを、所望の活性（単数または複数）を有する抗体についてスクリーニングすることによって、単離されてもよい。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、かかるライブラリを、所望の結合特性を保有する抗体についてスクリーニングするための、多様な方法が当該技術分野で知られている。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、またさらに、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、およびＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載される。
ある特定のファージディスプレイ法において、ＶＨおよびＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリ中で無作為に組み換えられ、それを次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは典型的に、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片としてまたはＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片を提示する。免疫された源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。代替的に、ナイーブレパートリーをクローニングして（例えば、ヒトから）、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように、いずれの免疫化も伴わずに、広範な非自己抗原およびまた自己抗原に対する抗体の単一の源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、無作為配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリを記載する特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、および米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、および同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書でヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有する、モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態において、結合特異性のうちの一方は、ＰＭＥＬ１７に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態において、結合特異性のうちの一方は、ＰＭＥＬ１７に対するものであり、他方は、ＣＤ３に対するものである。例えば、米国特許第５，８２１，３３７号を参照されたい。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、ＰＭＥＬ１７の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体をまた使用して、細胞傷害性薬剤を、ＰＭＥＬ１７を発現する細胞に限局させてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製することができる。
多重特異性抗体を作製するための技法には、異なる特異性を有する２つの免役グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））、国際公開第９３／０８８２９号、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。多重特異性抗体はまた、静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、およびＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、および１本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体を調製することによって、作製されてもよい。
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、米国公開特許第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照されたい）。
本明細書における抗体または断片にはまた、ＰＭＥＬ１７ならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む、「二重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」が含まれる（例えば、米国公開特許第２００８／００６９８２０号を参照されたい）。
７．抗体変異体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましいことがある。抗体のアミノ酸配列変異体は、適切な修飾を、抗体をコードするヌクレオチド配列中に導入することによって、またはペプチド合成によって、調製されてもよい。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、および／またはそこへ残基の挿入、および／またはその内の残基の置換が含まれる。欠失、挿入、および置換の任意の組み合わせを作製して、最終構築物に到達することができるが、但し、その最終構築物が、所望の特性、例えば、抗原結合性を保有することを条件とする。
ａ） 置換、挿入、および欠失変異体
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換型突然変異生成に対する目的の部位には、ＨＶＲおよびＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例となる置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して下にさらに記載される。アミノ酸置換が目的の抗体中に導入され、産物が、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについて、スクリーニングされてもよい。
Figure 0006242865
アミノ酸は、次の一般的な側鎖特性に従って分類されてもよい：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うであろう。
置換型変異体の１つの種類は、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１個以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる研究のために選択される、結果として生じる変異体（複数可）は、親抗体と比べて、ある特定の生物学的特性における修飾（例えば、改善）（例えば、増加した親和性、低減された免疫原性）を有することになり、および／または親抗体の、実質的に保持されたある特定の生物学的特性を有することになる。例となる置換型変異体は、例えば、本明細書に記載されるもの等のファージディスプレイベースの親和性成熟技法を使用して、好都合に生成され得る、親和性成熟抗体である。簡潔に述べると、１個以上のＨＶＲ残基が突然変異させられ、変異体抗体がファージ上で提示され、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
変化（例えば、置換）をＨＶＲにおいて行って、例えば、抗体親和性を改善してもよい。かかる変化は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、および／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において行われてもよく、結果として生じる変異体ＶＨまたはＶＬが、結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、そこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態において、多様性が、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性突然変異生成）のうちのいずれかによって、成熟のために選定された可変遺伝子中に導入される。二次ライブラリが次いで作り出される。ライブラリは次いで、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を特定するために、スクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法は、数個のＨＶＲ残基（例えば、１回に４〜６個の残基）が無作為化される、ＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニン走査突然変異生成またはモデリングを使用して、具体的に特定されてもよい。特にＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３が、しばしば標的とされる。
ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、かかる変化が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減しない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的変化（例えば、本明細書に提供される保存的置換）が、ＨＶＲにおいて行われてもよい。かかる変化は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外側にあってもよい。上に提供される変異体ＶＨおよびＶＬ配列のある特定の実施形態において、各ＨＶＲは、変化させられないか、またはわずか１、２、もしくは３つのアミノ酸置換を含有するにすぎないかのいずれかである。
突然変異生成のための標的とされ得る、抗体の残基または領域の特定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって記載される、「アラニン走査突然変異生成」と呼ばれるものである。この方法において、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕ等の荷電残基）のうちのある残基または基が特定され、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗体の抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の場所に導入されてもよい。代替的に、または追加的に、抗原−抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点が特定される。かかる接触残基および隣接する残基は、置換の候補として標的とされるか、または排除されてもよい。変異体は、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定するために、スクリーニングされてもよい。
アミノ酸配列挿入は、１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲の長さである、アミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一のまたは多数のアミノ酸残基の配列内（ｉｎｔｒａｓｅｑｕｅｎｃｅ）挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入型変異体には、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が含まれる。
ｂ） グリコシル化変異体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変化させられる。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、または除去されるように、アミノ酸配列を変化させることによって、好都合に遂行されてもよい。
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合した炭水化物が変化させられてもよい。哺乳類細胞によって産生される天然抗体は、典型的に、一般にＮ−結合によって、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖類には、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖類構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれる。いくつかの実施形態において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の改善された特性を有する抗体変異体を作り出すために行われてもよい。
一実施形態において、Ｆｃ領域に結合される（直接的にまたは間接的に）フコースを欠いた炭水化物構造を有する、抗体変異体が提供される。例えば、かかる抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であってもよい。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定するとき、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖鎖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、および高マンノース構造）の合計と比べた、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を算出することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小規模な配列変形形態に起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位の間にも位置する。かかるフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異体に関連する刊行物の例としては、米国公開特許第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国公開特許第２００３／０１１５６１４号、米国公開特許第２００２／０１６４３２８号、米国公開特許第２００４／００９３６２１号、米国公開特許第２００４／０１３２１４０号、米国公開特許第２００４／０１１０７０４号、米国公開特許第２００４／０１１０２８２号、米国公開特許第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ ２００３／０１５７１０８ Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、および国際公開第２００４／０５６３１２ Ａ１号（Ａｄａｍｓら）（特に実施例１１で））、およびα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８ ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、および国際公開第２００３／０８５１０７号を参照されたい）が挙げられる。
二分されたオリゴ糖類を有する、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖類がＧｌｃＮＡｃによって二分される、抗体変異体がさらに提供される。かかる抗体変異体は、低減されたフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）、および米国公開特許第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載される。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖類において少なくとも１個のガラクトース残基を有する、抗体変異体もまた提供される。かかる抗体変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）、国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、および国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載される。
ｃ） Ｆｃ領域変異体
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾を本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入し、それによってＦｃ領域変異体を生成してもよい。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含んでもよい。
ある特定の実施形態において、本発明は、いくつかのエフェクター機能を保有するが、全てのエフェクター機能は保有せず、それにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、なおもある特定のエフェクター機能（補体およびＡＤＣＣ等）が不必要または有害である場合の適用に対する望ましい候補となる、抗体変異体を企図する。インビトロおよび／またはインビボ細胞傷害性アッセイを実行して、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（よって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、およびＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページの表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載される。代替的に、非放射性アッセイ法が用いられてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ、およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代替的に、または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるもの等の動物モデルにおいて、評価されてもよい。Ｃ１ｑ結合アッセイをまた行って、抗体がＣ１ｑに結合不可能であり、よってＣＤＣ活性を欠いていることを確認してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号および国際公開第２００５／１００４０２号におけるＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５−１０５２（２００３）、およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合およびインビボクリアランス／半減期決定もまた、当該技術分野で既知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
低減されたエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、および３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ突然変異体には、アラニンへの残基２６５および２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７、および３２７位のうちの２つ以上において置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる。
ＦｃＲへの改善されたまたは減少した結合を有する、ある特定の抗体変異体が記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、国際公開第２００４／０５６３１２号、およびＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい）。
ある特定の実施形態において、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、および／または３３４位（残基のＥＵ付番）における置換を有する、Ｆｃ領域を含む。
いくつかの実施形態において、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、およびＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、変化した（すなわち、改善されたまたは減少したのいずれか）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす変化が、Ｆｃ領域において行われる。
母体のＩｇＧの胎児への移入に関与する、増加した半減期および新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））が、米国公開特許第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載される。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する、１つ以上の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異体には、Ｆｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）を有するものが含まれる。
また、Ｆｃ領域変異体の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、および国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。
ｄ） システイン操作された抗体変異体
ある特定の実施形態において、抗体の１個以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオＭａｂ」を作り出すことが望ましい場合がある。特に実施形態において、置換残基は、抗体の利用しやすい部位において生じる。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基はそれによって、抗体の利用しやすい部位に位置付けられ、それを使用して、抗体を、薬物部分またはリンカー−薬物部分等の他の部分に複合して、本明細書にさらに記載される、免疫複合体を作り出してもよい。ある特定の実施形態において、次の残基のうちの任意の１個以上が、システインで置換されてもよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ付番）、および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ付番）。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成されてもよい。
ｅ） 抗体誘導体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な、追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾されてもよい。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、およびデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってもよく、分岐しているか、または非分岐であり得る。抗体に結合したポリマーの数は、様々であってもよく、１つを超えるポリマーが結合される場合、それらは、同じ分子または異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または種類は、改善対象の抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法において使用されるかどうか等を含むが、これらに限定されない考慮に基づいて、決定することができる。
別の実施形態において、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体および非タンパク質性部分の複合体が提供される。一実施形態において、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブ（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０２：１１６００−１１６０５（２００５））である。放射線は、任意の波長のものであってもよく、一般の細胞を害さないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞が死滅させられる温度まで加熱する波長が含まれるが、これらに限定されない。
Ｂ．組換え法および組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組み換え法および組成物を使用して産生されてもよい。一実施形態において、本明細書に記載される、抗ＰＭＥＬ１７抗体をコードする単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態において、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ球系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体を作製する方法が提供され、本方法は、上に提供される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
抗ＰＭＥＬ１７抗体の組み換え産生のために、例えば、上述の、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニングおよび／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、慣例の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能である、オリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
抗体コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核性または真核性細胞が含まれる。例えば、抗体は、特にグリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌において産生されてもよい。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、および同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４（大腸菌における抗体断片の発現を記載する）も参照されたい）。発現後、抗体は、可溶性画分として細菌細胞ペーストから単離されてもよく、またさらに精製することができる。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体コードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全ヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌および酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、およびＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物および昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために、使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、および同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載している）を参照されたい。
脊椎動物細胞もまた、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で増殖するように適応される哺乳類細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓系（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される、２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載される、ＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頚がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝がん細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載される、ＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；およびＦＳ４細胞がある。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ− ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６（１９８０）を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびにＹ０、ＮＳ０、およびＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される抗ＰＭＥＬ１７抗体は、それらの物理／化学特性および／または生物活性について、当該技術分野で既知の種々のアッセイによって、特定され、スクリーニングされ、または特徴付けられてもよい。
一態様において、本発明の抗体は、その抗原結合活性について、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＦＡＣＳ、またはウェスタンブロット等の既知の方法によって、試験される。
別の態様において、競合アッセイを使用して、ＰＭＥＬ１７への結合に対して、本明細書に記載される抗体のいずれかと競合する抗体を特定してもよい。ある特定の実施形態において、かかる競合抗体は、本明細書に記載される抗体によって結合される、同じエピトープ（例えば、直線状または立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例となる方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供される。
例となる競合アッセイにおいて、固定化されたＰＭＥＬ１７は、ＰＭＥＬ１７に結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか）、およびＰＭＥＬ１７への結合に対して第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体を含む、溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＰＭＥＬ１７が、第１の標識抗体を含むが、第２の未標識抗体を含まない、溶液中でインキュベートされる。ＰＭＥＬ１７への第１の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰の非結合抗体が除去され、固定化されたＰＭＥＬ１７に関連する標識の量が測定される。固定化されたＰＭＥＬ１７に関連する標識の量が、対照試料と比べて試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＰＭＥＬ１７への結合に対して第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
Ｄ．免疫複合体
本発明はまた、本明細書において、化学療法剤もしくは化学療法薬、増殖阻害性薬剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体（すなわち、放射性物質複合体（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））等の、１つ以上の細胞傷害性薬剤に複合される抗ＰＭＥＬ１７抗体を含む、免疫複合体も提供する。
免疫複合体は、腫瘍への薬物部分の標的化された送達、および、いくつかの実施形態においては、複合されていない薬物の全身投与が、正常な細胞にとって許容できないレベルの毒性をもたらし得る場合に、腫瘍中の細胞内蓄積を可能にする（Ｐｏｌａｋｉｓ Ｐ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５：３８２−３８７）。
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、強力な細胞傷害性薬物の標的を抗原発現腫瘍細胞に定め（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ９：９８２−１００４）、それによって、有効性を最大限にし、オフターゲット毒性を最小限にすることにより治療指数を増強することによって、抗体および細胞傷害性薬物の両方の特性を組み合わせる、標的を定められた化学療法分子である（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．ａｎｄ Ｓｅｎｔｅｒ Ｐ．Ｄ．（２００８）Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒ．１４（３）：１５４−１６９、Ｃｈａｒｉ，Ｒ．Ｖ．（２００８）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４１：９８−１０７。
本発明のＡＤＣ化合物には、抗がん活性を有するものが含まれる。いくつかの実施形態において、ＡＤＣ化合物には、薬物部分に複合された、すなわち、共有結合された、抗体が含まれる。いくつかの実施形態において、本抗体は、リンカーを通じて薬物部分に共有結合される。本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、有効用量の薬物を腫瘍組織に選択的に送達し、それによって、治療指数（「治療域」）を増加させながら、より高い選択性、すなわちより低い効果的用量が、達成され得る。
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の薬物部分（Ｄ）は、細胞傷害性または細胞分裂阻害効果を有する任意の化合物、部分、または基を含んでもよい。薬物部分は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合またはインターカレーション、ならびにＲＮＡポリメラーゼ、タンパク質合成、および／またはトポイソメラーゼの阻害を含むが、これらに限定されない機構によって、それらの細胞傷害性および細胞分裂阻害効果を付与し得る。例となる薬物部分には、メイタンシノイド、ドラスタチン、オーリスタチン、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ネモルビシンおよびその誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、ビンカアルカロイド、タキサン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、カンプトテシン、エリナフィド、ならびに細胞傷害性活性を有するそれらの立体異性体、同配体、類似体、および誘導体が含まれるが、これらに限定されない。かかる免疫複合体の非限定的な例が、下にさらに詳細に考察される。
１．例となる抗体−薬物複合体
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）化合物の例となる実施形態は、腫瘍細胞を標的とする抗体（Ａｂ）、薬物部分（Ｄ）、およびＡｂをＤに結合するリンカー部分（Ｌ）を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、リジンおよび／またはシステイン等の１個以上のアミノ酸残基を通じて、リンカー部分（Ｌ）に結合される。
例となるＡＤＣは、式Ｉ、
Ａｂ‐（Ｌ‐Ｄ）ｐ Ｉ
を有し、式中、ｐは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、抗体に複合され得る薬物部分の数は、遊離システイン残基の数によって限定される。いくつかの実施形態において、遊離システイン残基は、本明細書に記載される方法によって抗体アミノ酸配列中に導入される。式Ｉの例となるＡＤＣには、１、２、３、または４個の操作されたシステインアミノ酸を有する抗体が含まれるが、これらに限定されない（Ｌｙｏｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ （２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ．５０２：１２３−１３８）。いくつかの実施形態において、１個以上の遊離システイン残基が、操作の使用なしに、抗体においてすでに存在しており、その場合、既存の遊離システイン残基を使用して、抗体を薬物に複合してもよい。いくつかの実施形態において、本抗体は、１個以上の遊離システイン残基を生成するために、抗体の複合前に還元条件に曝露される。
ａ） 例となるリンカー
「リンカー」（Ｌ）は、１個以上の薬物部分（Ｄ）を抗体（Ａｂ）に連結して、式Ｉの抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を形成するために使用することができる、二官能性または多官能性部分である。いくつかの実施形態において、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、薬物におよび抗体に共有結合するための反応性官能基を有するリンカーを使用して、調製することができる。例えば、いくつかの実施形態において、抗体の（Ａｂ）システインチオールは、リンカーの反応性官能基との結合、または薬物−リンカー中間体を形成して、ＡＤＣを作製することができる。
一態様において、リンカーは、抗体上に存在する遊離システインと反応して、共有結合を形成することが可能である、官能性を有する。かかる非限定的な例となる反応性官能基には、マレイミド、ハロアセトアミド、α−ハロアセチル、スクシンイミドエステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル等の活性化エステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート、およびイソチオシアネートが含まれる。例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ｅｔ ａｌ（２００４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １５（４）：７６５−７７３の７６６ページにおける複合方法、およびその中の実施例を参照されたい。
いくつかの実施形態において、リンカーは、抗体上に存在する求電子基と反応することが可能である、官能性を有する。例となるかかる求電子基には、アルデヒド基およびケトンカルボニル基が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、リンカーの反応性官能基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、抗体単位との共有結合を形成することができる。非限定的な例となるかかる反応性官能基には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが含まれるが、これらに限定されない。
リンカーは、１つ以上のリンカー構成要素を含んでもよい。例となるリンカー構成要素には、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」または「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、４−（２−ピリジルチオ）ペンタン酸Ｎ−スクシンイミジル（「ＳＰＰ」）、および４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（「ＭＣＣ」）が含まれる。種々のリンカー構成要素は、当該技術分野で知られており、このうちのいくつかが下に記載される。
リンカーは、薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。非限定的な例となる切断可能なリンカーには、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンを含む）、プロテアーゼ感受性（例えば、ペプチダーゼ感受性）リンカー、感光性リンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５２０８０２０号）が含まれる。
ある特定の実施形態において、リンカーは、次の式ＩＩ、
Figure 0006242865
を有し、式中、Ａは、「ストレッチャ（ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）単位」であり、ａは、０〜１の整数であり、Ｗは、「アミノ酸単位」であり、ｗは、０〜１２の整数であり、Ｙは、「スペーサー単位」であり、ｙは、０、１、または２であり、Ａｂ、Ｄ、およびｐは、式Ｉについて上にあるように定義される。かかるリンカーの例となる実施形態は、米国特許第７，４９８，２９８号に記載され、それは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、抗体を別のリンカー構成要素にまたは薬物部分に連結する、「ストレッチャ単位」を含む。非限定的な例となるストレッチャ単位が下に示される（ここで波線は、抗体、薬物、または追加のリンカー構成要素への共有結合の部位を示す）：
Figure 0006242865
Figure 0006242865
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、「アミノ酸単位」を含む。いくつかのかかる実施形態において、アミノ酸単位は、プロテアーゼによるリンカーの切断を可能にし、それによって、リソソーム酵素等の細胞内プロテアーゼへの曝露時に免疫複合体からの薬物の放出を容易にする（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８−７８４）。例となるアミノ酸単位には、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、およびペンタペプチドが含まれるが、これらに限定されない。例となるジペプチドには、バリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ−ｐｈｅ）、フェニルアラニン−リジン（ｆｋまたはｐｈｅ−ｌｙｓ）、フェニルアラニン−ホモリジン（ｐｈｅ−ｈｏｍｏｌｙｓ）、およびＮ−メチル−バリン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）が含まれるが、これらに限定されない。例となるトリペプチドには、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）およびグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が含まれるが、これらに限定されない。アミノ酸単位は、自然発生アミノ酸残基、ならびに／または微量アミノ酸、および／もしくはシトルリン等の非自然発生アミノ酸類似体を含んでもよい。アミノ酸単位は、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、およびＤ、またはプラスミンプロテアーゼによる、酵素的切断のために設計し、最適化することができる。
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、直接、またはストレッチャ単位および／もしくはアミノ酸単位を通じてのいずれかで、抗体を薬物部分に連結する、「スペーサー単位」を含む。スペーサー単位は、「自己犠牲型（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）」または「非自己犠牲型」であり得る。「非自己犠牲型」スペーサー単位は、ＡＤＣの切断時にスペーサー単位の一部または全てが薬物部分に結合したままであるものである。非自己犠牲型スペーサー単位の例としては、グリシンスペーサー単位およびグリシン−グリシンスペーサー単位が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞関連プロテアーゼによる、グリシン−グリシンスペーサー単位を含有するＡＤＣの酵素的切断は、ＡＤＣの残りの部分からのグリシン−グリシン−薬物部分の放出をもたらす。いくつかのかかる実施形態において、グリシン−グリシン−薬物部分は、腫瘍細胞内で加水分解ステップを受け、故にグリシン−グリシンスペーサー単位を薬物部分から切断する。
「自己犠牲型」スペーサー単位は、薬物部分の放出を可能にする。ある特定の実施形態において、リンカーのスペーサー単位は、ｐ−アミノベンジル単位を含む。いくつかのかかる実施形態において、ｐ−アミノベンジルアルコールは、アミド結合を介してアミノ酸単位に結合し、カルバメート、メチルカルバメート、またはカーボネートが、ベンジルアルコールと薬物との間に作製される（Ｈａｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（２００５）１５：１０８７−１１０３）。いくつかの実施形態において、スペーサー単位は、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）である。いくつかの実施形態において、自己犠牲型リンカーを含むＡＤＣは、構造、
Figure 0006242865
を有し、式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロ、または−シアノであり、ｍは、０〜４の範囲の整数であり、ｐは、１〜約２０の範囲である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４の範囲である。
自己犠牲型スペーサーの他の例としては、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体等の、ＰＡＢ基と電子的に同様である芳香族化合物（米国特許第７，３７５，０７８号、Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）およびオルト−またはパラ−アミノベンジルアセタールが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、置換および非置換４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ｅｔ ａｌ （１９９５）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍ ｅｔ ａｌ（１９７２）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）、ならびに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ，ｅｔ ａｌ（１９９０）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）等の、アミド結合加水分解時に環化を経るスペーサーを使用することができる。グリシン残基のα−炭素への薬物の結合は、ＡＤＣにおいて有用であり得る自己犠牲型スペーサーの別の例である（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ ｅｔ ａｌ（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）。
いくつかの実施形態において、リンカーＬは、分岐する多官能性リンカー部分を通じた、抗体への１つを超える薬物部分の共有結合のための、樹状型リンカーであり得る（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：２２１３−２２１５、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １１：１７６１−１７６８）。樹状リンカーは、ＡＤＣの効力に関連する、薬物対抗体のモル比、すなわち、負荷を増加させることができる。故に、抗体が１個のみの反応性システインチオール基を担持する場合、多数の薬物部分が、樹状リンカーを通じて結合され得る。
非限定的な例となるリンカーが、式ＩのＡＤＣの関連において下に示される：
Figure 0006242865
さらなる非限定的な例となるＡＤＣには、次の構造が含まれる：
Figure 0006242865
（式中、Ｘは、
Figure 0006242865
であり、
Ｙは、
Figure 0006242865
であり、
各Ｒは独立して、ＨまたはＣ１‐Ｃ６アルキルであり、ｎは、１〜１２である）。
典型的に、ペプチド型リンカーは、２つ以上のアミノ酸および／またはペプチド断片の間にペプチド結合を形成することによって、調製することができる。かかるペプチド結合は、例えば、液相合成法に従って、調製することができる（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒoｄｅｒ ａｎｄ Ｋ．Ｌuｂｋｅ（１９６５）“Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，ｖｏｌｕｍｅ １，ｐｐ ７６−１３６，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）。
いくつかの実施形態において、リンカーは、溶解度および／または反応性を調節する基で置換される。非限定的な例として、スルホネート（−ＳＯ３ −）またはアンモニウム等の荷電置換基は、リンカー試薬の水溶性を増加させ、抗体および／もしくは薬物部分とのリンカー試薬のカップリング反応を促進し得るか、またはＡＤＣを調製するために用いられる合成経路に応じて、ＤとのＡｂ−Ｌ（抗体−リンカー中間体）、もしくはＡｂとのＤ−Ｌ（薬物−リンカー中間体）のカップリング反応を促進し得る。いくつかの実施形態において、リンカーの一部分が抗体にカップリングされ、リンカーの一部分が薬物にカップリングされ、次いでＡｂ−（リンカー部分）ａが薬物−（リンカー部分）ｂにカップリングされて、式ＩのＡＤＣを形成する。いくつかのかかる実施形態において、本抗体は、１つを超える薬物が、式ＩのＡＤＣにおいて抗体にカップリングされるように、１つを超える（リンカー部分）ａ置換基を含む。
本発明の化合物は、次のリンカー試薬、すなわちビス−マレイミド−トリオキシエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン（ＨＢＶＳ）、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロン酸スクシンイミジル）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、３−（ブロモアセトアミド）プロピオン酸スクシンイミジル（ＳＢＡＰ）、ヨード酢酸スクシンイミジル（ＳＩＡ）、（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸スクシンイミジル（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸スクシンイミジル（ＳＭＣＣ）、４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸スクシンイミジル（ＳＭＰＢ）、６−［（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサン酸スクシンイミジル］（ＳＭＰＨ）、イミノチオラン（ＩＴ）、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、およびスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにスクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）を用いて、また次のビス−マレイミド試薬、すなわちジチオビスマレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビスマレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビスマレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、ＢＭ（ＰＥＧ）２（下に示される）、およびＢＭ（ＰＥＧ）３（下に示される）；イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ等）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムンゾイル）−エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（２，６−ジイソシアン酸トルエン等）、およびビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン等）を含めて、調製される、ＡＤＣを明示的に企図するが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ビス−マレイミド試薬は、チオール含有薬物部分、リンカー、またはリンカー−薬物中間体への、抗体におけるシステインのチオール基の結合を可能にする。チオール基と反応性である他の官能基には、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート、およびイソチオシアネートが含まれるが、これらに限定されない。
Figure 0006242865
ある特定の有用なリンカー試薬は、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）等の、種々の商業的供給源から得るか、または当該技術分野において、例えば、Ｔｏｋｉ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３８：５２５７−６０、Ｗａｌｋｅｒ，Ｍ．Ａ．（１９９５）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０：５３５２−５３５５、Ｆｒｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．７：１８０−１８６、米国特許出願公開第６２１４３４５号、国際公開第０２／０８８１７２号、米国特許出願公開第２００３１３０１８９号、米国特許出願公開第２００３０９６７４３号、国際公開第０３／０２６５７７号、国際公開第０３／０４３５８３号、および国際公開第０４／０３２８２８号に記載される手順に従って、合成することができる。
炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの複合のための、例となるキレート剤である。例えば、国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。
ｂ） 例となる薬物部分
（１） メイタンシンおよびメイタンシノイド
いくつかの実施形態において、免疫複合体は、１個以上のメイタンシノイド分子に複合される抗体を含む。メイタンシノイドは、メイタンシンの誘導体であり、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂（ｍｉｔｏｔｏｔｉｃ）阻害剤である。メイタンシンは、東アフリカの低木メイテナス・セラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ ｓｅｒｒａｔａ）から最初に単離された（米国特許第３８９６１１１号）。その後、ある特定の微生物もまた、メイタンシノールおよびＣ−３メイタンシノールエステル等のメイタンシノイドを産生することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成メイタンシノイドは、例えば、米国特許第４，１３７，２３０号、同第４，２４８，８７０号、同第４，２５６，７４６号、同第４，２６０，６０８号、同第４，２６５，８１４号、同第４，２９４，７５７号、同第４，３０７，０１６号、同第４，３０８，２６８号、同第４，３０８，２６９号、同第４，３０９，４２８号、同第４，３１３，９４６号、同第４，３１５，９２９号、同第４，３１７，８２１号、同第４，３２２，３４８号、同第４，３３１，５９８号、同第４，３６１，６５０号、同第４，３６４，８６６号、同第４，４２４，２１９号、同第４，４５０，２５４号、同第４，３６２，６６３号、および同第４，３７１，５３３号に開示される。
メイタンシノイド薬物部分は、それらが、（ｉ）発酵または発酵産物の化学修飾もしくは誘導体化によって調製するのに比較的利用しやすく、（ｉｉ）抗体への非ジスルフィドリンカーを通じた複合に好適な官能基による誘導体化を受けやすく、（ｉｉｉ）血漿中で安定しており、かつ（ｉｖ）多様な腫瘍細胞系に対して有効であるので、抗体−薬物複合体における魅力的な薬物部分である。
メイタンシノイド薬物部分として使用するのに好適なある特定のメイタンシノイドは、当該技術分野で知られており、既知の方法に従って天然源から単離するか、または遺伝子操作技法を使用して産生することができる（例えば、Ｙｕ ｅｔ ａｌ（２００２）ＰＮＡＳ ９９：７９６８−７９７３を参照されたい）。メイタンシノイドはまた、既知の方法に従って合成的に調製されてもよい。
例となるメイタンシノイド薬物部分には、Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４２５６７４６号）（例えば、アンサミトシン（ａｎｓａｍｙｔｏｃｉｎ）Ｐ２の水素化アルミニウムリチウム還元によって調製される）；Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４３６１６５０号および同第４３０７０１６号）（例えば、ストレプトミセスもしくはアクチノミセスを使用したデメチル化、またはＬＡＨを使用した脱塩素によって調製される）；およびＣ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許第４，２９４，７５７号）（例えば、塩化アシルを使用したアシル化によって調製される）等の、修飾された芳香族環を有するもの、ならびに芳香族環の他の位置に修飾を有するものが含まれるが、これらに限定されない。
例となるメイタンシノイド薬物部分にはまた、Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４４２４２１９号）（例えば、Ｈ２ＳまたはＰ２Ｓ５とのメイタンシノールの反応によって調製される）；Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４３３１５９８号）；Ｃ−１４−ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４４５０２５４号）（例えば、ノカルジアから調製される）；Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４３６４８６６号）（例えば、ストレプトミセスによるメイタンシノールの変換によって調製される）；Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４３１３９４６号および同第４３１５９２９号）（例えば、トレビア・ヌーディフロラ（Ｔｒｅｗｉａ ｎｕｄｌｆｌｏｒａ）から単離される）；Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４３６２６６３号および同第４３２２３４８号）（例えば、ストレプトミセスによるメイタンシノールのデメチル化によって調製される）；および４，５−デオキシ（米国特許第４３７１５３３号）（例えば、メイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元によって調製される）等の、修飾を有するものも含まれる。
メイタンシノイド化合物上の多くの位置は、結合位置として有用である。例えば、エステル結合は、従来のカップリング技法を使用したヒドロキシル基との反応によって形成され得る。いくつかの実施形態において、反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位、およびヒドロキシル基を有するＣ−２０位において生じ得る。いくつかの実施形態において、結合は、メイタンシノールまたはメイタンシノール類似体のＣ−３位において形成される。
メイタンシノイド薬物部分は、次の構造を有するものを含む：
Figure 0006242865
（式中、波線は、ＡＤＣのリンカーへの、メイタンシノイド薬物部分の硫黄原子の共有結合を示す。各Ｒは独立して、ＨまたはＣ１‐Ｃ６アルキルであり得る）。アミド基を硫黄原子に結合するアルキレン鎖は、メタニル、エタニル、またはプロピルであり得、すなわち、ｍは、１、２、または３である（米国特許第６３３４１０号、米国特許第５２０８０２０号、Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ９３：８６１８−８６２３）。
メイタンシノイド薬物部分の全ての立体異性体、すなわちキラル炭素におけるＲおよびＳ配置の任意の組み合わせが、本発明のＡＤＣについて企図される（米国特許第７２７６４９７号、米国特許第６９１３７４８号、米国特許第６４４１１６３号、米国特許第６３３４１０号（ＲＥ３９１５１）、米国特許第５２０８０２０号、Ｗｉｄｄｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４９：４３９２−４４０８、参照によりそれらの全体が組み込まれる）。いくつかの実施形態において、メイタンシノイド薬物部分は、次の立体化学を有する：
Figure 0006242865
メイタンシノイド薬物部分の例となる実施形態には、次の構造を有する、ＤＭ１、ＤＭ３、およびＤＭ４が含まれるが、これらに限定されない：
Figure 0006242865
（式中、波線は、抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）への、薬物の硫黄原子の共有結合を示す）。
他の例となるメイタンシノイド抗体−薬物複合体は、次の構造および略号を有する（式中、Ａｂは、抗体であり、ｐは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜１０であるか、ｐは、１〜７であるか、ｐは、１〜５であるか、またはｐは、１〜４である）：
Figure 0006242865
ＤＭ１がＢＭＰＥＯリンカーを通じて、抗体のチオール基に連結される場合の、例となる抗体−薬物複合体は、次の構造および略号を有する：
Figure 0006242865
（式中、Ａｂは、抗体であり、ｎは、０、１、または２であり、ｐは、１〜約２０である）。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜１０であるか、ｐは、１〜７であるか、ｐは、１〜５であるか、またはｐは、１〜４である。
メイタンシノイドを含有する免疫複合体、それを作製する方法、およびそれらの治療的使用は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号および同第５，４１６，０６４号、米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２ Ａ１号、および欧州特許第ＥＰ ０ ４２５ ２３５ Ｂ１号に開示され、それらの開示は参照により本明細書に明示的に組み込まれる。また、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：８６１８−８６２３（１９９６）、およびＣｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）も参照されたい。
いくつかの実施形態において、抗体−メイタンシノイド複合体は、抗体またはメイタンシノイド分子のいずれの生物活性も有意に減少させることなく、抗体をメイタンシノイド分子に化学結合することによって調製されてもよい。例えば、米国特許第５，２０８，０２０号を参照されたい（その開示は参照により本明細書に明示的に組み込まれる）。いくつかの実施形態において、１抗体分子当たり平均３〜４個のメイタンシノイド分子が複合されたＡＤＣが、抗体の機能または溶解度に悪影響を及ぼすことなく標的細胞の細胞傷害性を増強することにおいて、有効性を示してきた。いくつかの事例において、毒素／抗体の１個の分子でさえも、ネイキッド抗体の使用を上回って細胞傷害性を増強することが予想される。
抗体−メイタンシノイド複合体を作製するための例となる連結基には、例えば、本明細書に記載されるもの、ならびに米国特許第５２０８０２０号、欧州特許第０ ４２５ ２３５ Ｂ１号、Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２ Ａ１号、および米国特許出願公開第２００５／０１６９９３ Ａ１号に開示されるものが含まれ、それらの開示は参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
（２） オーリスタチンおよびドラスタチン
薬物部分には、ドラスタチン、オーリスタチン、ならびにそれらの類似体および誘導体が含まれる（米国特許第５６３５４８３号、米国特許第５７８０５８８号、米国特許第５７６７２３７号、米国特許第６１２４４３１号）。オーリスタチンは、海洋軟体動物化合物ドラスタチン−１０の誘導体である。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図するものではないが、ドラスタチンおよびオーリスタチンは、微小管運動、ＧＴＰ加水分解、ならびに核および細胞分裂を干渉し（Ｗｏｙｋｅ ｅｔ ａｌ（２００１）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４５（１２）：３５８０−３５８４）、抗がん（米国特許第５６６３１４９号）および抗真菌活性（Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ（１９９８）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４２：２９６１−２９６５）を有することが示されてきた。ドラスタチン／オーリスタチン薬物部分は、ペプチド性薬物部分のＮ（アミノ）末端またはＣ（カルボキシル）末端を通じて抗体に結合し得る（国際公開第０２／０８８１７２号、Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２１（７）：７７８−７８４、Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｂｌｏｏｄ １０２（４）：１４５８−１４６５）。
例となるオーリスタチン実施形態には、米国特許第７４９８２９８号および米国特許第７６５９２４１号に開示される、次のＮ末端連結モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥおよびＤＦが含まれ、その開示は参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる：
Figure 0006242865
（式中、ＤＥおよびＤＦの波線は、抗体または抗体−リンカー構成要素への共有結合部位を示し、各場所において独立して、
Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環、およびＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環、およびＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され、
Ｒ５は、Ｈおよびメチルから選択されるか、
あるいはＲ４およびＲ５は共同で、炭素環式環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、式中、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびＣ３〜Ｃ８炭素環から選択され、ｎは、２、３、４、５、および６から選択され、
Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環、およびＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され、
各Ｒ８は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、およびＯ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）から選択され、
Ｒ９は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ１０は、アリールまたはＣ３〜Ｃ８複素環から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ１２であり、式中、Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３〜Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され、
ｍは、１〜１０００の範囲の整数であり、
Ｒ１３は、Ｃ２〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１４は、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１５の各出現は独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、‐（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、‐（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または‐（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１６の各出現は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、または‐（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１８は、‐Ｃ（Ｒ８）２‐Ｃ（Ｒ８）２‐アリール、‐Ｃ（Ｒ８）２‐Ｃ（Ｒ８）２‐（Ｃ３〜Ｃ８複素環）、および‐Ｃ（Ｒ８）２‐Ｃ（Ｒ８）２‐（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）から選択され、
ｎは、０〜６の範囲の整数である）。
一実施形態において、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ７は独立して、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５は、−Ｈまたはメチルである。例となる実施形態において、Ｒ３およびＲ４は各々、イソプロピルであり、Ｒ５は、−Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ−ブチルである。
なおも別の実施形態において、Ｒ２およびＲ６は各々、メチルであり、Ｒ９は、−Ｈである。
依然として別の実施形態において、Ｒ８の各出現は、−ＯＣＨ３である。
例となる実施形態において、Ｒ３およびＲ４は各々、イソプロピルであり、Ｒ２およびＲ６は各々、メチルであり、Ｒ５は、−Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各出現は、−ＯＣＨ３であり、Ｒ９は、−Ｈである。
一実施形態において、Ｚは、−Ｏ−または−ＮＨ−である。
一実施形態において、Ｒ１０は、アリールである。
例となる実施形態において、Ｒ１０は、−フェニルである。
例となる実施形態において、Ｚが−Ｏ−であるとき、Ｒ１１は、−Ｈ、メチル、またはｔ−ブチルである。
一実施形態において、Ｚが−ＮＨであるとき、Ｒ１１は、−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５は、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、Ｒ１６は、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである。
別の実施形態において、Ｚが−ＮＨであるとき、Ｒ１１は、−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５は、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈである。
式ＤＥの例となるオーリスタチン実施形態は、次のＭＭＡＥであり、式中、波線は、抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）への共有結合を示す：
Figure 0006242865
式ＤＦの例となるオーリスタチン実施形態は、次のＭＭＡＦであり、式中、波線は、抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）への共有結合を示す：
Figure 0006242865
他の例となる実施形態には、ペンタペプチドオーリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニンカルボキシ修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８８４８号）、およびペンタペプチドオーリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニン側鎖修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８６０３号）が含まれる。
ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦおよび種々のリンカー構成要素を含む、式ＩのＡＤＣの非限定的な例となる実施形態は、次の構造および略号を有する（式中、「Ａｂ」は、抗体であり、ｐは、１〜約８であり、「Ｖａｌ−Ｃｉｔ」は、バリン−シトルリンジペプチドであり、「Ｓ」は、硫黄原子である：
Figure 0006242865
ＭＭＡＦおよび種々のリンカー構成要素を含む、式ＩのＡＤＣの非限定的な例となる実施形態には、Ａｂ−ＭＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦおよびＡｂ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦがさらに含まれる。タンパク分解性に切断可能でないリンカーによって抗体に結合したＭＭＡＦを含む免疫複合体は、タンパク分解性に切断可能なリンカーによって抗体に結合したＭＭＡＦを含む免疫複合体に匹敵する活性を保有することが示されてきた（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１７：１１４−１２４）。いくつかのかかる実施形態において、薬物放出は、細胞内の抗体分解によって達成されると考えられている。
典型的に、ペプチドベースの薬物部分は、２つ以上のアミノ酸および／またはペプチド断片との間にペプチド結合を形成することによって、調製することができる。かかるペプチド結合は、例えば、液相合成法に従って、調製することができる（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒoｄｅｒ ａｎｄ Ｋ．Ｌuｂｋｅ，“Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，ｖｏｌｕｍｅ １，ｐｐ ７６−１３６，１９６５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。オーリスタチン／ドラスタチン薬物部分は、いくつかの実施形態において、米国特許第７４９８２９８号、米国特許第５６３５４８３号、米国特許第５７８０５８８号、Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：５４６３−５４６５、Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ（１９９８）Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ １３：２４３−２７７、Ｐｅｔｔｉｔ，Ｇ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９６，７１９−７２５、Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１ ５：８５９−８６３、およびＤｏｒｏｎｉｎａ（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１（７）：７７８−７８４の方法に従って調製されてもよい。
いくつかの実施形態において、ＭＭＡＥ等の式ＤＥ、およびＭＭＡＦ等の式ＤＦのオーリスタチン／ドラスタチン薬物部分、ならびにＭＣ−ＭＭＡＦ、ＭＣ−ＭＭＡＥ、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、およびＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ等のそれらの薬物−リンカー中間体および誘導体は、米国特許第７４９８２９８号、Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１７：１１４−１２４、およびＤｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１：７７８−７８４に記載される方法を使用して調製されてもよく、次いで目的の抗体に複合されてもよい。
（３） カリケアミシン
いくつかの実施形態において、免疫複合体は、１個以上のカリケアミシン分子に複合される抗体を含む。抗生物質のカリケアミシンファミリー、およびそれらの類似体は、ピコモル未満の濃度で２本鎖ＤＮＡ切断をもたらすことが可能である（Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：３３３６−３３４２、Ｌｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５８：２９２５−２９２８）。カリケアミシンは、細胞内作用部位を有するが、ある特定の事例において、形質膜を容易に通過しない。したがって、抗体媒介性内部移行を通じたこれらの薬剤の細胞取り込みは、いくつかの実施形態において、それらの細胞傷害効果を大幅に増強し得る。カリケアミシン薬物部分との抗体−薬物複合体を調製する非限定的な例となる方法は、例えば、米国特許第５７１２３７４号、米国特許第５７１４５８６号、米国特許第５７３９１１６号、および米国特許第５７６７２８５号に記載される。
（４）ピロロベンゾジアゼピン
いくつかの実施形態において、ＡＤＣは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）を含む。いくつかの実施形態において、ＰＤＢ二量体は、具体的なＤＮＡ配列を認識し、それに結合する。天然産物アントラマイシンであるＰＢＤは、１９６５年に最初に報告された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７：５７９３−５７９５、Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、８７：５７９１−５７９３）。それ以来、自然発生および類似体の両方として、三環式ＰＢＤ足場の二量体を含む、いくつかのＰＢＤが、報告されてきている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５（米国特許第６８８４７９９号、米国特許第７０４９３１１号、米国特許第７０６７５１１号、米国特許第７２６５１０５号、米国特許第７５１１０３２号、米国特許第７５２８１２６号、米国特許第７５５７０９９号）。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図せずに、二量体構造が、Ｂ型ＤＮＡの副溝との等螺旋性（ｉｓｏｈｅｌｉｃｉｔｙ）に適切な三次元形状を付与し、結合部位において滑り嵌めをもたらすと考えられている（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）、Ｈｕｒｌｅｙ ａｎｄ Ｎｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，（１９８６）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９：２３０−２３７）。Ｃ２アリール置換基を担持する二量体ＰＢＤ化合物は、細胞傷害性薬剤として有用であることが示されてきた（Ｈａｒｔｌｅｙ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７０（１７）：６８４９−６８５８、Ａｎｔｏｎｏｗ（２０１０）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５３（７）：２９２７−２９４１、Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ（２００９）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１９（２２）：６４６３−６４６６）。
ＰＢＤ二量体は、抗体に複合されており、結果として生じるＡＤＣは、抗がん特性を有することが示されてきた。ＰＢＤ二量体上の非限定的な例となる結合部位には、５員のピロロ環、ＰＢＤ単位の間のテザー、およびＮ１０−Ｃ１１イミン基が含まれる（国際公開第２００９／０１６５１６号、米国特許出願公開第２００９／３０４７１０号、米国特許出願公開第２０１０／０４７２５７号、米国特許出願公開第２００９／０３６４３１号、米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５７号、国際公開第２０１１／１３０５９８号）。
ＡＤＣの非限定的な例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ、
Figure 0006242865
のもの、ならびにその塩および溶媒和物であり、式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
点線は、Ｃ１とＣ２またはＣ２とＣ３との間の二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ２は独立して、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ、およびＣＯＲから選択され、任意に、ハロまたはジハロからさらに選択され、ＲＤは独立して、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、およびハロから選択され、
Ｒ６およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、およびハロから選択され、
Ｒ７は独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、およびハロから選択され、
Ｑは独立して、Ｏ、Ｓ、およびＮＨから選択され、
Ｒ１１は、Ｈ、もしくはＲであるか、または、ＱがＯである場合、ＳＯ３Ｍであるいずれかであり、式中、Ｍは、金属陽イオンであり、
ＲおよびＲ’は各々独立して、置換されていてもよいＣ１−８アルキル、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル、Ｃ３−２０複素環、およびＣ５−２０アリール基から選択され、任意に、基ＮＲＲ’に関して、ＲおよびＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒に、置換されていてもよい４、５、６、または７員の複素環式環を形成し、
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９、およびＲ１７は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９、およびＲ７について定義される通りであり、
Ｒ″は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、１個以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅ、および／または芳香族環、例えば、ベンゼンまたはピリジンによって分断され得、それらの環は、任意に置換されており、
ＸおよびＸ’は独立して、Ｏ、Ｓ、およびＮ（Ｈ）から選択される。
いくつかの実施形態において、Ｒ９およびＲ１９は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ６およびＲ１６は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ７は、Ｒ１７は両方とも、ＯＲ７Ａであり、式中、Ｒ７Ａは、置換されていてもよいＣ１−４アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ７Ａは、Ｍｅである。いくつかの実施形態において、Ｒ７Ａは、Ｃｈ２Ｐｈであり、式中、Ｐｈは、フェニル基である。
いくつかの実施形態において、Ｘは、Ｏである。
いくつかの実施形態において、Ｒ１１は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、各単量体単位におけるＣ２とＣ３との間に二重結合が存在する。
いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は独立して、ＨおよびＲから選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は独立して、Ｒである。いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は独立して、置換されていてもよいＣ５−２０アリールまたはＣ５−７アリールまたはＣ８−１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は独立して、置換されていてもよいフェニル、チエニル、ナフチル（ｎａｐｔｈｙｌ）、ピリジル、キノリニル、またはイソキノリニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は独立して、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ−ＲＤ、および＝Ｃ（ＲＤ）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は各々、＝ＣＨ２である。いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は各々、Ｈである。いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は各々、＝Ｏである。いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は各々、＝ＣＦ２である。いくつかの実施形態において、Ｒ２および／またはＲ１２は独立して、＝Ｃ（ＲＤ）２である。いくつかの実施形態において、Ｒ２および／またはＲ１２は独立して、＝ＣＨ−ＲＤである。
いくつかの実施形態において、Ｒ２および／またはＲ１２が＝ＣＨ−ＲＤであるとき、各基は独立して、下に示されるいずれかの配置を有し得る：
Figure 0006242865
いくつかの実施形態において、＝ＣＨ−ＲＤは、配置（Ｉ）にある。
いくつかの実施形態において、Ｒ″は、Ｃ３アルキレン基またはＣ５アルキレン基である。
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（Ｉ）、
Figure 0006242865
の構造を有し、式中、ｎは、０または１である。
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＩ）、
Figure 0006242865
の構造を有し、式中、ｎは、０または１である。
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＩＩ）、
Figure 0006242865
の構造を有し、式中、ＲＥおよびＲＥ”は各々独立して、ＨまたはＲＤから選択され、式中、ＲＤは、上にあるように定義され、
ｎは、０または１である。
いくつかの実施形態において、ｎは、０である。いくつかの実施形態において、ｎは、１である。いくつかの実施形態において、ＲＥおよび／またはＲＥ”は、Ｈである。いくつかの実施形態において、ＲＥおよびＲＥ”は、Ｈである。いくつかの実施形態において、ＲＥおよび／またはＲＥ”は、ＲＤであり、式中、ＲＤは、置換されていてもよいＣ１−１２アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲＥおよび／またはＲＥ”は、ＲＤであり、式中、ＲＤは、メチルである。
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＶ）、
Figure 0006242865
の構造を有し、式中、Ａｒ１およびＡｒ２は各々独立して、置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり、Ａｒ１およびＡｒ２は、同じであっても異なってもよく、
ｎは、０または１である。
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（Ｖ）、
Figure 0006242865
の構造を有し、式中、Ａｒ１およびＡｒ２は各々独立して、置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり、Ａｒ１およびＡｒ２は、同じであっても異なってもよく、
ｎは、０または１である。
いくつかの実施形態において、Ａｒ１およびＡｒ２は各々独立して、置換されていてもよいフェニル、フラニル、チオフェニル、およびピリジルから選択される。いくつかの実施形態において、Ａｒ１およびＡｒ２は各々独立して、置換されていてもよいフェニルである。いくつかの実施形態において、Ａｒ１およびＡｒ２は各々独立して、置換されていてもよいチエン−２−イルまたはチエン−３−イルである。いくつかの実施形態において、Ａｒ１およびＡｒ２は各々独立して、置換されていてもよいキノリニルまたはイソキノリニルである。キノリニルまたはイソキノリニル基は、任意の利用可能な環の位置を通じて、ＰＢＤコアに結合されてもよい。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル、およびキノリン−８−イルであり得る。いくつかの実施形態において、キノリニルは、キノリン−３−イルおよびキノリン−６−イルから選択される。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル、およびイソキノリン−８−イルであり得る。いくつかの実施形態において、イソキノリニルは、イソキノリン−３−イルおよびイソキノリン−６−イルから選択される。
ＡＤＣのさらなる非限定的な例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ｂ、
Figure 0006242865
のもの、ならびにその塩および溶媒和物であり、式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
ＯＨに接続された波線は、ＳまたはＲ配置を示し、
ＲＶ１およびＲＶ２は独立して、Ｈ、メチル、エチル、およびフェニル（このフェニルは、特に４位において、フルオロで任意に置換されてもよい）、Ｃ５−６ヘテロシクリルから選択され、式中、ＲＶ１およびＲＶ２は、同じであっても異なってもよく、
ｎは、０または１である。
いくつかの実施形態において、ＲＶ１およびＲＶ２は独立して、Ｈ、フェニル、および４−フルオロフェニルから選択される。
いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｂ環のＮ１０イミン、Ｃ環のＣ−２エンド／エキソ位、またはＡ環を連結するテザー単位を含む、ＰＢＤ二量体薬物部分の種々の部位のうちの１つにおいて結合されてもよい（下の構造Ｃ（Ｉ）およびＣ（ＩＩ）を参照されたい）。
ＡＤＣの非限定的な例となるＰＢＤ二量体構成要素には、式Ｃ（Ｉ）およびＣ（ＩＩ）、が含まれる。
Figure 0006242865
式Ｃ（Ｉ）およびＣ（ＩＩ）は、それらのＮ１０−Ｃ１１イミン型で示される。例となるＰＢＤ薬物部分にはまた、下の表に示される、カルビノールアミンおよび保護されたカルビノールアミン型も同様に含まれる：
Figure 0006242865
（式中、
Ｘは、ＣＨ２（ｎ＝１〜５）、Ｎ、またはＯであり、
ＺおよびＺ’は独立して、ＯＲおよびＮＲ２から選択され、式中、Ｒは、１〜５個の炭素原子を含有する第一級、第二級、または第三級アルキル鎖であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２およびＲ’２は各々独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ５−２０アリール（置換アリールを含む）、Ｃ５−２０ヘテロアリール基、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＯＨ、および−ＳＨから選択され、いくつかの実施形態において、アルキル、アルケニル、およびアルキニル鎖は、最大５個の炭素原子を含み、
Ｒ３およびＲ’３は独立して、Ｈ、ＯＲ、ＮＨＲ、およびＮＲ２から選択され、式中、Ｒは、１〜５個の炭素原子を含有する第一級、第二級、または第三級アルキル鎖であり、
Ｒ４およびＲ’４は独立して、Ｈ、Ｍｅ、およびＯＭｅから選択され、
Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ５−２０アリール（ハロ、ニトロ、シアノ、アルコキシ、アルキル、ヘテロシクリルによって置換されたアリールを含む）、およびＣ５−２０ヘテロアリール基から選択され、いくつかの実施形態において、アルキル、アルケニル、およびアルキニル鎖は、最大５個の炭素原子を含み、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、または保護基（アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、またはバリン−シトルリン−ＰＡＢ等の自己犠牲単位を含む部分等）であり、
Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、または保護基であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、Ｒ’２、Ｒ５、もしくはＲ１２の１つの水素、またはＡ環の間の−ＯＣＨ２ＣＨ２（Ｘ）ｎＣＨ２ＣＨ２Ｏ−スペーサーの水素は、ＡＤＣのリンカーに接続された結合と置き換えられている）。
ＡＤＣの例となるＰＤＢ二量体部分には、次のものが含まれるが、これらに限定されない（波線は、リンカーへの共有結合の部位を示す）：
Figure 0006242865
ＰＢＤ二量体を含むＡＤＣの非限定的な例となる実施形態は、次の構造を有する：
Figure 0006242865
（式中、ｎは、０〜１２である）。いくつかの実施形態において、ｎは、２〜１０である。いくつかの実施形態において、ｎは、４〜８である。いくつかの実施形態において、ｎは、４、５、６、７、および８から選択される。
ＰＢＤ二量体−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＡｂおよびＰＢＤ二量体−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ−Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ切断可能である一方で、ＰＢＤ二量体−マレイミド−アセタールのリンカーは、酸不安定性である。
ＰＢＤ二量体およびＰＢＤ二量体を含むＡＤＣは、当該技術分野で既知の方法に従って調製されてもよい。例えば、国際公開第２００９／０１６５１６号、米国特許出願公開第２００９／３０４７１０号、米国特許出願公開第２０１０／０４７２５７号、米国特許出願公開第２００９／０３６４３１号、米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５７号、国際公開第２０１１／１３０５９８号を参照されたい。
（５）アントラサイクリン
いくつかの実施形態において、アントラサイクリンを含むＡＤＣ。アントラサイクリンは、細胞傷害性活性を示す抗生物質化合物である。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図するものではないが、研究は、アントラサイクリンが、１）細胞のＤＮＡ中への薬物分子のインターカレーションによって、ＤＮＡ依存性核酸合成を阻害すること、２）薬物により遊離ラジカルが産生され、それが次いで細胞巨大分子と反応して、細胞への損傷を引き起こすこと、および／または３）薬物分子の細胞膜との相互作用を含む、いくつかの異なる機構によって、細胞を死滅させるように作動し得ることを示してきた（例えば、Ｃ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ａｎｄ Ｓｔｏｒａｇｅ Ｏｆ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ Ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｅｍｉａ”ｉｎ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｎ．Ｒ．Ｂａｃｈｕｒ，“Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｄａｍａｇｅ”ｉｄ．ａｔ ｐｐ．９７−１０２を参照されたい）。それらの細胞傷害性の可能性のために、アントラサイクリンは、白血病、乳がん、肺がん腫、卵巣腺がん、および肉腫等の多数のがんの治療において使用されてきた（例えば、Ｐ．Ｈ− Ｗｉｅｒｎｉｋ，ｉｎ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ Ａｎｄ Ｎｅｗ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｐ １１を参照されたい）。
非限定的な例となるアントラサイクリンには、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノマイシン、ネモルビシン、およびそれらの誘導体が含まれる。ダウノルビシンおよびドキソルビシンの免疫複合体およびプロドラッグが、調製され、研究されてきた（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３、Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１６：３５８−３６２、Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ（２００５）Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１、Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９７：８２９−８３４、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１２：１５２９−１５３２、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３、欧州特許第０３２８１４７号、米国特許第６６３０５７９号）。抗体−薬物複合体ＢＲ９６−ドキソルビシンは、腫瘍関連抗原Ｌｅｗｉｓ−Ｙと特異的に反応し、第Ｉ相およびＩＩ相研究において評価されてきた（Ｓａｌｅｈ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １８：２２８２−２２９２、Ａｊａｎｉ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒ．６：７８−８１、Ｔｏｌｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ１７：４７８−４８４）。
ＰＮＵ−１５９６８２は、ネモルビシンの強力な代謝産物（または誘導体）である（Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １１（４）：１６０８−１６１７）。ネモルビシンは、ドキソルビシンのグリコシドアミノ上に２−メトキシモルホリノ基を有する、ドキソルビシンの半合成類似体であり、臨床評価段階にあり（Ｇｒａｎｄｉ ｅｔ ａｌ（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．１７：１３３、Ｒｉｐａｍｏｎｔｉ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６５：７０３）、肝細胞がんに対する第ＩＩ／ＩＩＩ相治験が含まれる（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２２，Ａｂｓ１４４８、Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４４：１ｓｔ Ｅｄ，Ａｂｓ４６４９、Ｐａｃｃｉａｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｊｏｕｒ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ２４：１４１１６）。
ネモルビシンまたはネモルビシン誘導体を含む非限定的な例となるＡＤＣは、式Ｉａ、
Figure 0006242865
に示され、式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ、またはメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ基、またはその薬学的に許容される塩であり、
Ｌ１およびＺは共に、本明細書に記載されるリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは、本明細書に記載される抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｍは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４である。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は両方とも、メトキシ（−ＯＭｅ）である。
ネモルビシンまたはネモルビシン誘導体を含むさらなる非限定的な例となるＡＤＣは、式Ｉｂ、
Figure 0006242865
に示され、式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ、またはメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ基、またはその薬学的に許容される塩であり、
Ｌ２およびＺは共に、本明細書に記載されるリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは、本明細書に記載される抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｍは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４である。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は両方とも、メトキシ（−ＯＭｅ）である。
いくつかの実施形態において、ネモルビシン含有ＡＤＣのネモルビシン構成要素は、ＰＮＵ−１５９６８２である。いくつかのかかる実施形態において、ＡＤＣの薬物部分は、次の構造のうちの１つを有し得る：
Figure 0006242865
（式中、波線は、リンカー（Ｌ）への結合を示す）。
ＰＮＵ−１５９６８２を含む、アントラサイクリンは、数個の結合部位、および本明細書に記載されるリンカーを含む多様なリンカー（米国特許出願公開第２０１１／００７６２８７号、国際公開第２００９／０９９７４１号、米国特許出願公開第２０１０／００３４８３７号、国際公開第２０１０／００９１２４号）を通じて、抗体に複合されてもよい。
ネモルビシンおよびリンカーを含む例となるＡＤＣには、次のものが含まれるが、これらに限定されない：
Figure 0006242865
Figure 0006242865
ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタール−Ａｂのリンカーは、酸不安定性である一方で、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサー−Ａｂ、およびＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサー（Ｒ１Ｒ２）−Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ切断可能である。
（６）他の薬物部分
薬物部分にはまた、ゲルダナマイシン（Ｍａｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３−１５８１、Ｍａｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １０：１０２５−１０２８、Ｍａｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１３：７８６−７９１）；ならびにジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、アレウリテス・フォーディ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・チャランチア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）を含むが、これらに限定されない、それらの酵素活性毒素および断片も含まれる。例えば、国際公開第９３／２１２３２号を参照されたい。
薬物部分にはまた、核酸分解活性（例えば、リボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ）を有する化合物も含まれる。
ある特定の実施形態において、免疫複合体は、高放射性原子を含んでもよい。放射性物質複合（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）抗体の産生のために、多様な放射性同位体が利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体が挙げられる。いくつかの実施形態において、免疫複合体が検出に使用されるとき、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えばＴｃ９９もしくはＩ１２３、またはジルコニウム−８９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄等の、核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ＭＲＩとしても知られる）のためのスピン標識を含んでもよい。ジルコニウム−８９は、例えば、ＰＥＴ画像法のために、種々の金属キレート剤に複合体化され、抗体に複合される（国際公開第２０１１／０５６９８３号）。
放射標識または他の標識が、既知の方式で免疫複合体に組み込まれてもよい。例えば、ペプチドは、例えば、１個以上の水素の代わりに１個以上のフッ素−１９原子を含む、好適なアミノ酸前駆体を使用して、生合成または化学合成されてもよい。いくつかの実施形態において、Ｔｃ９９、Ｉ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、およびＩｎ１１１等の標識は、抗体におけるシステイン残基を介して結合することができる。いくつかの実施形態において、イットリウム−９０は、抗体のリジン残基を介して結合することができる。いくつかの実施形態において、ＩＯＤＯＧＥＮ法（Ｆｒａｋｅｒ ｅｔ ａｌ（１９７８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．８０：４９−５７を使用して、ヨウ素−１２３を組み込むことができる。“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ”（Ｃｈａｔａｌ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９８９）は、ある特定の他の方法を記載する。
ある特定の実施形態において、免疫複合体は、プロドラッグ活性化酵素に複合される抗体を含んでもよい。いくつかのかかる実施形態において、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、国際公開第８１／０１１４５号を参照されたい）を、抗がん薬等の活性な薬物に変換する。かかる免疫複合体は、いくつかの実施形態において、抗体依存性酵素媒介性プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体に複合され得る酵素には、ホスフェート含有プロドラッグを遊離薬物へと変換するのに有用である、アルカリホスファターゼ；サルフェート含有プロドラッグを遊離薬物へと変換するのに有用である、アリールスルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンを抗がん剤５−フルオロウラシルへと変換するのに有用である、シトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物へと変換するのに有用である、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、およびカテプシン（カテプシンＢおよびＬ等）等のプロテアーゼ；Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するのに有用である、Ｄ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物へと変換するのに有用である、β−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ等の炭水化物切断酵素；β−ラクタムにより誘導体化された薬物を遊離薬物へと変換するのに有用である、β−ラクタマーゼ；ならびにそれらのアミン窒素においてそれぞれフェノキシアセチル基またはフェニルアセチル基により誘導体された薬物を遊離薬物へと変換するのに有用である、ペニシリンＶアミダーゼおよびペニシリンＧアミダーゼ等のペニシリンアミダーゼが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、酵素は、当該技術分野で周知の組み換えＤＮＡ技術によって、抗体に共有結合されてもよい。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照されたい。
ｃ） 薬物負荷
薬物負荷は、式Ｉの分子における１抗体当たりの薬物部分の平均数である、ｐによって表される。薬物負荷は、１抗体当たり１〜２０個の薬物部分（Ｄ）の範囲であり得る。式ＩのＡＤＣは、１〜２０個の範囲の薬物部分と共に複合された抗体の集団を含む。複合反応からのＡＤＣの調製における、１抗体当たりの薬物部分の平均数は、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、およびＨＰＬＣ等の従来の手段によって特徴付けられてもよい。ｐの単位でのＡＤＣの定量分布がまた決定されてもよい。いくつかの事例において、ｐがある特定の値である同種のＡＤＣの、他の薬物負荷を有するＡＤＣからの分離、精製、および特性評価は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動等の手段によって達成されてもよい。
いくつかの抗体−薬物複合体について、ｐは、抗体上の結合部位の数によって限定され得る。例えば、上のある特定の例となる実施形態にあるように、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１個のみもしくは数個のシステインチオール基を有し得るか、または、１個のみもしくは数個の十分に反応性のチオール基を有し得、それを通じてリンカーが結合され得る。ある特定の実施形態において、より高い薬物負荷、例えば、５超のｐは、ある特定の抗体−薬物複合体において凝集、不溶性、毒性、または細胞透過性の喪失を引き起こし得る。ある特定の実施形態において、ＡＤＣについての平均薬物負荷は、１〜約８、約２〜約６、または約３〜約５の範囲である。実際、ある特定のＡＤＣについて、１抗体当たりの薬物部分の最適な比率は、８未満であり得、また約２〜約５であり得ることが示されてきた（米国特許第７４９８２９８号）。
ある特定の実施形態において、理論上の最大数よりも少ない薬物部分が、複合反応中に抗体に複合される。抗体は、下に考察されるように、例えば、薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応しないリジン残基を含有し得る。一般に、抗体は、薬物部分に連結し得る多くの遊離および反応性システインチオール基を含有せず、実際、抗体におけるほとんどのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態において、本抗体は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤により、部分または完全還元条件下で還元されて、反応性システインチオール基を生成し得る。ある特定の実施形態において、本抗体は、リジンまたはシステイン等の反応性求核基を明らかにするために、変性条件に供される。
ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比）は、異なる方式で、および例えば、（ｉ）抗体と比べてモル過剰の薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬を限定すること、（ｉｉ）複合反応時間または温度を限定すること、および（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分または限定的還元条件によって、制御されてもよい。
１個を超える求核基が薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応する場合、結果として生じる産物は、１個以上の薬物部分の分布が抗体に結合した、ＡＤＣ化合物の混合物であることを理解されたい。１抗体当たりの薬物平均数は、抗体に特異的および薬物に特異的である、二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から算出されてもよい。個々のＡＤＣ分子は、質量分析法によって混合物中で特定され、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって、分離されてもよい（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ １９（７）：２９９−３０７、Ｈａｍｂｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０、Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ−ＣＤ３０ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４、Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４）を参照されたい。ある特定の実施形態において、単一の負荷値を有する同種のＡＤＣが、電気泳動またはクロマトグラフィーによって複合混合物から単離されてもよい。
ｄ） 免疫複合体を調製するある特定の方法
式ＩのＡＤＣは、（１）抗体の求核基を二価リンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＡｂ−Ｌを形成し、続いて薬物部分Ｄと反応させることと、（２）薬物部分の求核基を二価リンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＤ−Ｌを形成し、続いて抗体の求核基と反応させることとを含む、いくつかの経路によって、当業者に既知の有機化学反応、条件、および試薬を用いて調製されてもよい。後者の経路を介して式ＩのＡＤＣを調製するための例となる方法は、米国特許第７４９８２９８号に記載され、それは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
抗体上の求核基には、（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えば、リジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えば、システイン、および（ｉｖ）抗体がグリコシル化される糖ヒドロキシルまたはアミノ基が含まれるが、これらに限定されない。アミン、チオール、およびヒドロキシル基は、求核性であり、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート（ｈａｌｏｆｏｒｍａｔｅｓ）、および酸ハロゲン化物等の、活性エステル、（ｉｉ）ハロアセトアミド等のアルキルおよびベンジルハロゲン化物、ならびに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、およびマレイミド基を含む、リンカー部分およびリンカー試薬上の求電子基と反応して、共有結合を形成することが可能である。ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。抗体は、抗体が完全または部分還元されるように、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤での処理によって、リンカー試薬との複合に対して反応性にされ得る。各システイン架橋はこのようにして、理論上、２つの反応性のチオール求核剤を形成するであろう。追加の求核基は、リジン残基の修飾を通じて、例えば、リジン残基を２−イミノチオラン（トラウト試薬（Ｔｒａｕｔ’ｓ ｒｅａｇｅｎｔ））と反応させて、アミンのチオールへの変換をもたらすことによって、抗体中に導入することができる。反応性のチオール基もまた、１個、２個、３個、４個、またはそれを超えるシステイン残基を導入することによって（例えば、１個以上の非天然システインアミノ酸残基を含む変異体抗体を調製することによって）、抗体中に導入され得る。
本発明の抗体−薬物複合体はまた、アルデヒドまたはケトンカルボニル基等の抗体上の求電子基と、リンカー試薬または薬物上の求核基との間の反応によって産生されてもよい。リンカー試薬上の有用な求核基には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸塩、およびアリールヒドラジドが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、本抗体は、リンカー試薬または薬物上の求核置換基と反応可能である求電子部分を導入するように修飾される。別の実施形態において、グリコシル化抗体の糖を、例えば、過ヨウ素酸塩酸化試薬で酸化させて、リンカー試薬または薬物部分のアミン基と反応し得るアルデヒドまたはケトン基を形成してもよい。結果として生じるイミンシッフ塩基群は、安定した結合を形成し得るか、または例えば、水素化ホウ素試薬によって還元されて、安定したアミン結合を形成し得る。一実施形態において、グリコシル化された抗体の炭水化物部分の、ガラクトースオキシダーゼまたはメタ過ヨウ素酸ナトリウムのいずれかとの反応は、抗体において、薬物上の適切な基と反応することができるカルボニル（アルデヒドおよびケトン）基を生み出し得る（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）。別の実施形態において、Ｎ末端セリンまたはスレオニン残基を含有する抗体は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応して、第１のアミノ酸の代わりにアルデヒドの産生をもたらすことができる（Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ＆Ｓｔｒｏｈ，（１９９２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．３：１３８−１４６、米国特許第５３６２８５２号）。かかるアルデヒドは、薬物部分またはリンカー求核剤と反応させることができる。
薬物部分上の例となる求核基には、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、および酸ハロゲン化物等の、活性エステル、（ｉｉ）ハロアセトアミド等のアルキルおよびベンジルハロゲン化物、ならびに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、およびマレイミド基を含む、リンカー部分およびリンカー試薬上の求電子基と反応して、共有結合を形成することが可能な、アミン、チオール、ヒドロキシル、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジド基が含まれるが、これらに限定されない。
ＡＤＣを調製するために使用され得る、非限定的な例となるクロスリンカー試薬は、本明細書における「例となるリンカー」と題される節に記載される。かかるクロスリンカー試薬を使用して、タンパク質性部分および化学部分を含む、２つの部分を連結する方法は、当該技術分野で知られている。いくつかの実施形態において、抗体および細胞傷害性薬剤を含む融合タンパク質は、例えば、組み換え技法またはペプチド合成によって作製されてもよい。組み換えＤＮＡ分子は、互いに隣接しているか、または複合体の所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって隔離されているかのいずれかの、複合体の抗体および細胞傷害性部分をコードする領域を含んでもよい。
なおも別の実施形態において、抗体は、腫瘍の事前標的化（ｐｒｅ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）において利用するために「受容体」（ストレプトアビジン等）に複合されてもよく、その腫瘍の事前標的化において抗体−受容体複合体が、患者に投与され、続いて除去剤を使用した循環からの非結合複合体の除去、次いで細胞傷害性薬剤（例えば、薬物または放射性ヌクレオチド）に複合されている「リガンド」（例えば、アビジン）の投与が行われる。
Ｅ．診断および検出のための方法および組成物
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗ＰＭＥＬ１７抗体のいずれも、生体試料中のＰＭＥＬ１７の存在を検出するために有用である。本明細書で使用される「検出すること」という用語は、定量または定性検出を包含する。「生体試料」は、例えば、細胞または組織（例えば、可能性のあるまたは確認された黒色腫を含む、がん性のまたはがん性の可能性がある皮膚組織を含む、生検材料；皮膚Ｔ細胞リンパ腫等のリンパ腫からの生検材料；および腎腫瘍からの生検材料）を含む。
一実施形態において、診断または検出方法において使用するための抗ＰＭＥＬ１７抗体が提供される。さらなる態様において、生体試料中のＰＭＥＬ１７の存在を検出する方法が提供される。ある特定の実施形態において、本方法は、生体試料を、本明細書に記載される抗ＰＭＥＬ１７抗体と、ＰＭＥＬ１７への抗ＰＭＥＬ１７抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、複合体が、生体試料中で、抗ＰＭＥＬ１７抗体とＰＭＥＬ１７との間で形成されるかどうかを検出することとを含む。かかる方法は、インビトロ方法であっても、インビボ方法であってもよい。一実施形態において、例えば、ＰＭＥＬ１７が患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗ＰＭＥＬ１７抗体を使用して、抗ＰＭＥＬ１７抗体での治療法にふさわしい対象を選択する。さらなる実施形態において、生体試料は、細胞または組織（可能性のあるまたは確認された黒色腫を含む、がん性のまたはがん性の可能性がある皮膚組織；皮膚Ｔ細胞リンパ腫等のリンパ腫からの生検材料；および腎腫瘍からの生検材料）である。
さらなる実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体は、例えば、がんを診断する、がんの予後を判定する、もしくはがんを病期分類する、適切な治療過程を決定する、または治療法に対するがんの反応を監視する目的のために、インビボで使用されて、例えば、インビボ画像法によって、対象におけるＰＭＥＬ１７陽性がんを検出する。インビボ検出のための当該技術分野で既知の１つの方法は、例えば、ｖａｎ Ｄｏｎｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ １２：１３７９−１３８９（２００７）ａｎｄ Ｖｅｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４：１２７１−１２８１（２００３）に記載される、免疫−陽電子放出断層撮影（免疫−ＰＥＴ）である。かかる実施形態において、対象においてＰＭＥＬ１７陽性がんを検出するための方法が提供され、本方法は、標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体を、ＰＭＥＬ１７陽性がんを有するかまたはそれを有することが疑われる対象に投与することと、対象における標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体を検出することとを含み、その標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体の検出は、対象におけるＰＭＥＬ１７陽性がんを示す。かかる実施形態のある特定のものにおいて、標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体は、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、および１２４Ｉ等の陽電子放出体に複合される抗ＰＭＥＬ１７抗体を含む。特定の実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
さらなる実施形態において、診断または検出方法は、基質に固定化された第１の抗ＰＭＥＬ１７抗体を、ＰＭＥＬ１７の存在について試験されるべき生体試料と接触させることと、その基質を第２の抗ＰＭＥＬ１７抗体に曝露することと、その第２の抗ＰＭＥＬ１７が、生体試料中で、第１の抗ＰＭＥＬ１７抗体とＰＭＥＬ１７との間の複合体に結合されるかどうかを検出することとを含む。基質は、任意の支持培地、例えば、ガラス、金属、セラミック、ポリマービーズ、スライド、チップ、および他の基質であってもよい。ある特定の実施形態において、生体試料は、細胞または組織（可能性のあるまたは確認された黒色腫を含む、がん性のまたはがん性の可能性がある皮膚組織；皮膚Ｔ細胞リンパ腫等のリンパ腫からの生検材料；および腎腫瘍からの生検材料）を含む。ある特定の実施形態において、第１または第２の抗ＰＭＥＬ１７抗体は、本明細書に記載される抗体のいずれかである。
上の実施形態のいずれかにより診断または検出され得る、例となる障害には、ＰＭＥＬ１７陽性皮膚がん（黒色腫等）、ＰＭＥＬ１７陽性リンパ腫（皮膚Ｔ細胞リンパ腫等）、およびＰＭＥＬ１７陽性腎腫瘍等の、ＰＭＥＬ１７陽性がんが含まれる。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんは、本明細書における実施例Ｋに記載される条件下で、「０」（腫瘍細胞の９０％超における非常に弱いまたはゼロの染色に対応する）を超える抗ＰＭＥＬ１７免疫組織化学（ＩＨＣ）スコアを受けるがんである。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんは、本明細書における実施例Ｋに記載される条件下で、３１Ｄ１抗体を使用して（３１Ｄ１発現ハイブリドーマは、２０１２年４月２４日に７５０９（３１Ｄ１．６．７）としてＡＴＣＣにおいて寄託された）定義するとき、１＋、２＋、または３＋レベルでＰＭＥＬ１７を発現する。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんは、インサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）アッセイに従ってＰＭＥＬ１７を発現するがんである。いくつかのかかる実施形態において、ＩＨＣについて使用されるものと同様のスコアリング体系が使用される。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんは、ＰＭＥＬ１７ ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従って、ＰＭＥＬ１７を発現するがんである。いくつかの実施形態において、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
ある特定の実施形態において、標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体が提供される。標識には、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、および放射性標識等）、ならびに例えば、酵素反応または分子相互作用を通じて、間接的に検出される酵素またはリガンド等の部分が含まれるが、これらに限定されない。例となる標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、および１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセインもしくはその誘導体等のフルオロフォア、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、例えば、ホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、およびグルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた、ウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼ等の複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカル等が含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態において、標識は、陽電子放出体である。陽電子放出体には、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、および１２４Ｉが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
Ｆ．医薬製剤
本明細書に記載される抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体の医薬製剤は、所望の程度の純度を有するかかる抗体または免疫複合体を、１つ以上の任意の薬剤的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）と混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、調製される。薬剤的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量および濃度で、受容者に対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；保存料（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免役グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート薬剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。本明細書における例となる薬剤的に許容される担体には、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の、介在性（ｉｎｓｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）薬物分散剤がさらに含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例となるｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号および同第２００６／０１０４９６８号に記載される。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
例となる凍結乾燥抗体または免疫複合体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載される。水性抗体または免疫複合体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号および国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されるものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
本明細書における製剤はまた、治療されている特定の適応症に対する必要に応じて、１つを超える活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含有してもよい。
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製される、マイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）中またはマクロエマルション中の、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に、封入されてもよい。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示される。
徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性調製物の好適な例としては、抗体または免疫複合体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが挙げられ、そのマトリクスは、成形物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
インビボ投与のために使用されるべき製剤は、一般に滅菌されている。滅菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって、容易に遂行され得る。
Ｇ．治療方法および組成物
本明細書に提供される抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体のいずれも、方法、例えば、治療方法において使用され得る。
一態様において、本明細書に提供される抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体は、ＰＭＥＬ１７陽性細胞の増殖を阻害する方法において使用され、本方法は、細胞を、抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体に、細胞の表面上のＰＭＥＬ１７への抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体の結合を許容する条件下で曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む。ある特定の実施形態において、本方法は、インビトロ方法またはインビボ方法である。いくつかの実施形態において、細胞は、黒色腫細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は、皮膚Ｔ細胞リンパ腫細胞等のリンパ腫細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は、腎腫瘍細胞である。
インビトロでの細胞増殖の阻害は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）から市販されている、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを使用してアッセイされてもよい。そのアッセイは、代謝的に活性な細胞を示す、存在するＡＴＰの定量に基づいて、培養物中の生細胞の数を決定する。Ｃｒｏｕｃｈ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許第６６０２６７７号を参照されたい。アッセイは、自動化高処理スクリーニング（ＨＴＳ）を受けやすくする、９６ウェルまたは３８４ウェル形式で行われてもよい。Ｃｒｅｅ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ６：３９８−４０４を参照されたい。アッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養細胞に直接添加することを伴う。これは、細胞溶解およびルシフェラーゼ反応によって生み出される発光シグナルの生成をもたらす。発光シグナルは、培養物中に存在する生細胞の数に直接比例する、存在するＡＴＰの量に比例する。データは、ルミノメーターまたはＣＣＤカメラ画像化デバイスによって記録することができる。発光出力は、相対発光量（ＲＬＵ）として表される。
別の態様において、薬として使用するための抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体が提供される。さらなる態様において、治療方法において使用するための抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんを治療することにおいて使用するための抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態において、本発明は、ＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体を治療する方法において使用するための抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体を提供し、本方法は、個体に、有効量の抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、例えば、下に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。
さらなる態様において、本発明は、薬の製造または調製における、抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体の使用を提供する。一実施形態において、薬は、ＰＭＥＬ１７陽性がんの治療のためである。さらなる実施形態において、薬は、ＰＭＥＬ１７陽性がんを治療する方法において使用するためのものであり、本方法は、ＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体に、有効量の薬を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、例えば、下に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。
さらなる態様において、本発明は、ＰＭＥＬ１７陽性がんを治療するための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、かかるＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体に、有効量の抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。
上の実施形態のいずれかによるＰＭＥＬ１７陽性がんは、例えば、ＰＭＥＬ１７陽性皮膚がん（黒色腫を含む）、ＰＭＥＬ１７陽性リンパ腫（ｌｙｍｐｈｏｍｓ）（皮膚Ｔ細胞リンパ腫等）、およびＰＭＥＬ１７陽性腎腫瘍であってもよい。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんは、本明細書における実施例Ｋに記載される条件下で、「０」（腫瘍細胞の９０％超における非常に弱いまたはゼロの染色に対応する）を超える抗ＰＭＥＬ１７免疫組織化学（ＩＨＣ）またはインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコアを受けるがんである。別の実施形態において、本明細書における実施例Ｋに記載される条件下で、３１Ｄ１抗体を使用して（３１Ｄ１発現ハイブリドーマは、２０１２年４月２４日に７５０９（３１Ｄ１．６．７）としてＡＴＣＣにおいて寄託された）定義するとき、１＋、２＋、または３＋レベルでＰＭＥＬ１７を発現する。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんは、ＰＭＥＬ１７ ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従って、ＰＭＥＬ１７を発現するがんである。いくつかの実施形態において、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体を治療する方法が提供され、このＰＭＥＬ１７陽性がんは、第１の治療薬に対して耐性である。いくつかの実施形態において、本方法は、個体に、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む有効量の免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７陽性がんは、黒色腫である。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、ＰＭＥＬ１７以外の抗原に結合する第１の抗体を含む。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、ＰＭＥＬ１７以外の抗原に結合する第１の抗体と、第１の細胞傷害性薬剤とを含む、第１の免疫複合体である。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、エンドセリンＢ受容体（ＥＴＢＲ）、チロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＹＲＰ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、および糖タンパク質ＮＭＢ（ＧＰＮＭＢ）から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、ＥＴＢＲに結合する。いくつかのかかる実施形態において、第１の免疫複合体は、免疫複合体ｈｕ５Ｅ９．ｖ１−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ等の、抗ＥＴＢＲ抗体ｈｕ５Ｅ９．ｖ１を含む。米国公開第ＵＳ ２０１１／０２０６７０２号を参照されたい。ｈｕ５Ｅ９．ｖ１の超可変領域（ＨＶＲ）は、本明細書で、例えば、配列番号３３〜３８において示される。ｈｕ５Ｅ９．ｖ１の重鎖および軽鎖可変領域は、本明細書で、例えば、それぞれ配列番号４０および３９において示される。いくつかの実施形態において、第１の細胞傷害性薬剤およびＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、異なる。いくつかのかかる実施形態において、第１の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥであり（例えば、第１の免疫複合体がｈｕ５Ｅ９．ｖ１−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥであるとき等）、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン、およびネモルビシン誘導体から選択される。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、ピロロベンゾジアゼピンおよびネモルビシン誘導体から選択される。
いくつかの実施形態において、がんを有する個体を治療する方法が提供され、このがんは、第１の治療薬に対して耐性である。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、第１のリンカーを通じて第１の細胞傷害性薬剤に連結された第１の抗体を含む、第１の免疫複合体である。いくつかの実施形態において、第１の治療薬（第１の免疫複合体等）に対して耐性であるがんを有する個体を治療する方法は、第２のリンカーを通じて第２の細胞傷害性薬剤に連結された第２の抗体を含む、第２の免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、第１の抗体および第２の抗体は、異なる抗原に結合し、第１の細胞傷害性薬剤および第２の細胞傷害性薬剤は、同じであるか、または異なる。いくつかの実施形態において、第１の抗体および第２の抗体は、同じ細胞のうちの少なくともいくつかの上に存在する、異なる抗原に結合する。いくつかの実施形態において、第１の抗体および第２の抗体は、異なる抗原に結合し、第１の細胞傷害性薬剤および第２の細胞傷害性薬剤は、異なる。いくつかの実施形態において、第１の抗体および第２の抗体は、同じ抗原に結合し、第１の細胞傷害性薬剤および第２の細胞傷害性薬剤は、異なる。前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、第１のリンカーおよび第２のリンカーは、同じであっても、異なってもよい。いくつかの実施形態において、第１の抗体および第２の抗体は、異なる抗原に結合し、第１および第２のリンカーは、異なり、第１および第２の細胞傷害性薬剤は、異なる。
上の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
さらなる態様において、本発明は、例えば、上の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体のいずれかを含む、医薬製剤を提供する。一実施形態において、医薬製剤は、本明細書に提供される抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体のいずれかと、薬剤的に許容される担体とを含む。別の実施形態において、医薬製剤は、本明細書に提供される抗ＰＭＥＬ１７抗体または免疫複合体のいずれかと、例えば、下に記載される、少なくとも１つの追加の治療剤とを含む。
本発明の抗体または免疫複合体は、治療法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、本発明の抗体または免疫複合体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与されてもよい。
いくつかの実施形態において、がんを治療する方法は、本明細書に記載される免疫複合体を、エンドセリンＢ受容体（ＥＴＢＲ）、チロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＹＲＰ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、および糖タンパク質ＮＭＢ（ＧＰＮＭＢ）から選択される抗原に結合する抗体を含む第２の免疫複合体と組み合わせて、投与することを含む。いくつかのかかる実施形態において、第２の免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥ、カリケアミシン、ネモルビシン誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンから選択される。本明細書に記載される免疫複合体（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｅ）の細胞傷害性薬剤および第２の免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、同じであっても、異なってもよい。いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、異なる。いくつかの実施形態において、各細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥ、ネモルビシン誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンから選択される。
いくつかの実施形態において、がんを治療する方法は、本明細書に記載される免疫複合体を、ＥＴＢＲに結合する抗体を含む第２の免疫複合体と組み合わせて、投与することを含む。いくつかのかかる実施形態において、がんは、ＰＭＥＬ１７陽性がん、およびまたＥＴＢＲ陽性がんでもある。がんがまたＥＴＢＲ陽性でもあるかどうかの決定は、がんがＰＭＥＬ１７陽性であるかどうかを決定することについて本明細書に記載される方法、および米国公開第ＵＳ ２０１１／０２０６７０２号に記載される方法を含むが、これらに限定されない任意の方法によって行われてもよい。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲに結合する抗体は、ｈｕ５Ｅ９．ｖ１であり、それは例えば、米国公開第ＵＳ ２０１１／０２０６７０２号に記載される。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲに結合する抗体は、配列番号３３の配列を含むＨＶＲ Ｈ１、配列番号３４の配列を含むＨＶＲ Ｈ２、配列番号３５の配列を含むＨＶＲ Ｈ３、配列番号３６の配列を含むＨＶＲ Ｌ１、配列番号３７の配列を含むＨＶＲ Ｌ２、および配列番号３８の配列を含むＨＶＲ Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲに結合する抗体は、配列番号４０の配列を含む重鎖可変領域および配列番号３９の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態において、がんを治療する方法は、ｈｕ５Ｅ９．ｖ１−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（例えば、米国公開第ＵＳ ２０１１／０２０６７０２号を参照されたい）等の抗ＥＴＢＲ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ免疫複合体を、本明細書に記載されるもの等の抗ＰＭＥＬ１７抗体を含む免疫複合体と組み合わせて、投与することを含む。抗ＰＭＥＬ１７抗体を含む免疫複合体は、抗ＥＴＢＲ抗体を含む免疫複合体と同じまたは異なる細胞傷害性薬剤を含んでもよい。いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７抗体を含む免疫複合体は、例えば、抗ＥＴＢＲ免疫複合体がＭＭＡＥを含むとき、ネモルビシン誘導体またはピロロベンゾジアゼピン等の異なる細胞傷害性薬剤を含む。
「組み合わせた」投与は、組み合わせた投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、および別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本発明の抗体または免疫複合体の投与は、追加の治療剤（抗ＥＴＢＲ免疫複合体等）および／またはアジュバントの投与の前、それと同時、および／またはその後に生じ得る。いくつかの実施形態において、抗ＰＭＥＬ１７免疫複合体の投与および抗ＥＴＢＲ免疫複合体の投与は、互いの約１ヶ月以内、または約１、２、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に生じる。本発明の抗体または免疫複合体はまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
本発明の抗体または免疫複合体（および任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、および鼻腔内、ならびに局所治療のために所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、任意の好適な経路による、例えば、投与が短時間であるか慢性的であるかに部分的に応じて、静脈内または皮下注射等の、注射によることができる。単回または種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、およびパルス注入を含むが、これらに限定されない、種々の投薬スケジュールが本明細書で企図される。
本発明の抗体または免疫複合体は、良好な医療行為と一致した様式で、製剤化され、投薬され、投与されるであろう。この文脈における考慮の要因には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的病態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール管理、および医療従事者に既知の他の要因が含まれる。抗体または免疫複合体は、必要ではないが、任意に、問題の障害を予防または治療するために現在使用される１つ以上の薬剤と共に製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体または免疫複合体の量、障害または治療の種類、および上に考察された他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載されるのと同じ投薬量で、本明細書に記載される投与経路により、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量で、任意の経路によって、使用される。
疾患の予防または治療のために、本発明の抗体または免疫複合体の適切な投薬量（単独でまたは１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用されるとき）は、治療対象の疾患の種類、抗体または免疫複合体の種類、疾患の重症度および経過、抗体または免疫複合体が予防目的でそれとも治療目的で投与されるか、以前の治療法、患者の病歴および抗体または免疫複合体への反応、ならびに担当医師の裁量に依存するであろう。抗体または免疫複合体は、患者に、１回で、または一連の治療にわたって、好適に投与される。疾患の種類および重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によってであれ、連続注入によってであれ、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体または免疫複合体が、患者への投与のための初回の候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。病態に応じて数日間またはより長い日数にわたる反復投与について、治療は、一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるであろう。抗体または免疫複合体の１つの例となる投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であろう。故に、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）の１回以上の用量が患者に投与されてもよい。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週または３週間毎に（例えば、患者が抗体の約２〜約２０回、または例えば、約６回用量を受容するように）投与されてもよい。初回よりも高い負荷用量、続いて１回以上のより低い用量が投与されてもよい。しかしながら、他の投薬レジメンが有用であってもよい。この治療法の進行は、従来の技術およびアッセイによって容易に監視される。
上の製剤または治療方法のうちのいずれも、本発明の免疫複合体および抗ＰＭＥＬ１７抗体の両方を使用して行われ得ることが理解される。
Ｈ．製品
本発明の別の態様において、上述の障害の治療、予防、および／または診断に有用な材料を含有する製品が提供される。製品は、容器、および容器上のまたは容器と関連したラベルまたは添付文書を含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の多様な材料から形成され得る。容器は、組成物を、それ自体で、または障害を治療する、予防する、および／もしくは診断するのに有効な別の組成物と組み合わせて保有し、また滅菌アクセスポートを有し得る（例えば容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性な薬剤は、本発明の抗体または免疫複合体である。標識または添付文書は、組成物が選定した病態を治療するために使用されることを表示する。さらに、製品は、（ａ）組成物がその中に含有された第１の容器（その組成物は本発明の抗体または免疫複合体を含む）、および（ｂ）組成物がその中に含有された第２の容器（その組成物はさらなる細胞傷害性薬剤または治療剤を含む）を含んでもよい。本発明のこの実施形態の製品は、組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを表示する、添付文書をさらに含んでもよい。代替的に、または追加的に、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液またはデキストロース溶液等の、薬剤的に許容される緩衝液を含む、第２の（または第３の）容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザの立場から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
Ｉ．生物材料の寄託
次の生物材料が、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０−２２０９，ＵＳＡ（ＡＴＣＣ）に寄託されている：
ハイブリドーマ指定 ＡＴＣＣ番号 寄託日
７５０９（３１Ｄ１．６．７） ＰＴＡ−１２８６２ ２０１２年４月２４日
上に参照される寄託されたハイブリドーマは、本明細書で言及される３１Ｄ１抗体を産生する。
この寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約、およびそれに基づく規則（ブダペスト条約）の規定に基づいて行われた。これは、寄託日から３０年間、および寄託試料の供給に係る最新の請求から少なくとも５年間、生存可能な寄託培養物を維持することを保証するものである。寄託物は、ブダペスト条約の条項に基づいてＡＴＣＣにより利用可能とされ、またＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，とＡＴＣＣとの間の合意に従うことになり、これは、寄託された材料を公共に利用可能とすることに関して寄託者により課される全ての制限が、関連する米国特許の付与時に取消不能の形で取り除かれることを保障し、関連する米国特許の発行時または任意の米国もしくは外国特許出願の公開時のいずれか早い方の到来時に、寄託培養物の子孫を公共に永久的および非制限的に利用可能とすることを保障し、また米国特許法第１２２条およびそれに準じる特許庁長官規則（特に８８６ ＯＧ ６３８を参照して３７ＣＦＲ第１．１４条を含む）により権利を有すると米国特許庁長官が決定した者に対して子孫を利用可能とすることを保証するものである。
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法および組成物の実施例である。上に提供される一般的説明を考慮すると、種々の他の実施形態が実施され得ることが理解される。
Ａ．ヒトＰＭＥＬ１７遺伝子発現
ＰＭＥＬ１７ ｍＲＮＡ発現の分析のために複数のヒト腫瘍および正常な生検試料を、Ｇｅｎｅ Ｌｏｇｉｃ，Ｉｎｃ．（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）から得たＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘデータを使用して分析した。示される分析は、ＨＧＵ１３３ Ｐｌｕｓ ｖ２ ＧｅｎｅＣｈｉｐを使用して、３８７９個の正常なヒト組織試料、１６０５個のヒトがん組織試料（１２９１個が原発性および３１４個が転移性）、および３８７２個のヒト非がん性疾患組織試料に対して行われた、プローブセット２０９８４８＿ｓ＿ａｔについてのものである。マイクロアレイデータを、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＭＡＳ（Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｕｉｔｅ）バージョン５．０ソフトウェアを使用して正規化し、このうち試料の発現値は、５００のトリム平均にスケーリングした。培養された細胞株の分析を同様の様式で行った。
結果が図１ＡおよびＢに示される。ｙ軸上の目盛りは、ハイブリダイゼーションシグナル強度に基づいた遺伝子発現レベルを示す。図１Ａにおいて、列挙される各組織の名称から延長する線の上および下の両方に点が見える。線の上に見える点は、正常な組織における遺伝子発現を表し、線の下に見える点は、腫瘍および病変組織における遺伝子発現を表す。図１Ａに示されるように、ＰＭＥＬ１７ ｍＲＮＡの高レベルの発現は、皮膚に由来する新生物に大部分が限定され、これらの全ては、黒色腫として分類された。同様に陽性であった少数の良性腎臓腫瘍は、類上皮型（ｅｐｉｔｈｅｌｏｉｄ）腎血管筋脂肪腫として分類され、ほんの一部の陽性リンパ腫は、皮膚Ｔ細胞リンパ腫として特定された。図１Ｂは、ＰＭＥＬ１７が多くの黒色腫細胞株において過剰発現されるが、一方で他のヒトがんに由来する細胞株においては発現がほとんどまたは全くないことを示す。ＢＣ、乳がん；ＣＲＣ、直腸結腸がん；ＧＢ、膠芽腫；ＮＳＣＬＣ、非小細胞肺がん；ＳＣ、小細胞肺がん；ＮＨＬ、非ホジキンリンパ腫；ＭＥＬ、黒色腫；ＭＭ、多発性骨髄腫；ＯＶＣＡ、卵巣がん；ＰＡＮＣ、膵臓がん；ＰＲＯＳ、前立腺がん。分析された４８７個の異なる細胞株のうちの５％のみが図において特定される。
Ｂ．マウスモノクローナル抗体生成
ヒトＰＭＥＬ１７に対するモノクローナル抗体を、次の手順を使用して生成した。Ｂａｌｂ／Ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）の２つの別個の群を、Ｒｉｂｉアジュバント中の精製ヒトＰＭＥＬ１７ ＥＣＤ（ＣＨＯ細胞内で発現されたＣ末端Ｆｃを含むアミノ酸２５〜５９１）（第１群）で、または完全長ＰＭＥＬ１７をコードするプラスミドＤＮＡ（第２群）でのいずれかにより、流体力学的尾静脈（ＨＴＶ）注射を介して、前述のプロトコルの修正版を使用して過免疫した（例えば、Ｈｅｒｗｅｉｊｅｒ，Ｈ．，ａｎｄ Ｗｏｌｆｆ，Ｊ．Ａ．（２００３）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １０（６），４５３−４５８、Ｌｉｕ，Ｆ．，Ｓｏｎｇ，Ｙ．，ａｎｄ Ｌｉｕ，Ｄ．（１９９９）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ６（７），１２５８−１２６６、ａｎｄ Ｚｈａｎｇ，ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １０（１０），１７３５−１７３７）を参照されたい）。融合の３日前にタンパク質（第１群）またはＰＭＥＬ１７を過剰発現するＰＣ３細胞（第２群）で最終追加免疫した後、両方の群からのＦＡＣＳによりＰＣ３細胞への強力な特異的結合を示すマウス由来のＢ細胞を、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｗｉｌｌｅ，ＭＤ）と１：１比で電気融合し（ＢＴＸ ＥＣＭ ２００１、Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ）、１倍アザセリンおよびヒポキサンチン（ＨＡ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含有する培養培地中、１００，０００細胞／ウェルでプレートし、３７℃、７％ ＣＯ２でインキュベートした。
１０〜１４日後、上清を採取し、ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳによってスクリーニングした。ＦＡＣＳ分析のために、黒色腫細胞株ＳＫ−ＭＥＬ−２３（Ｐａｕｌ Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｓｅｃｔｉｏｎによる提供）、１３００ｍｅｌ（Ｐａｕｌ Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｓｅｃｔｉｏｎによる提供）、ＳＫＭＥＬ５（ＡＴＣＣ ＨＴＢ−７０）、およびＵＡＣＣ２５７（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、正常なメラニン細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、およびヒトＰＭＥＬ１７を安定に発現する前立腺がん細胞株ＰＣ３を、抗体と接触させた。１７Ａ９と指定される、ＰＭＥＬ１７免疫化マウス由来の１つの抗体は、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）によって、黒色腫生細胞、正常なヒトメラニン細胞、およびＰＭＥＬ１７ ｃＤＮＡを安定に発現するＰＣ３細胞株と強力に反応したが、親ＰＣ３細胞株とは反応しなかった。ＤＮＡ免疫化マウスから得た、別の抗体７７Ｅ６もまた、ＦＡＣＳによって陽性であったが、７７Ｅ６は、ＰＭＥＬ１７を発現する生細胞株と、いくらか一貫性なく、また１７Ａ９よりも弱く反応した。
ＦＡＣＳによって強力なＰＭＥＬ１７特異的結合を示す陽性クローンを次いで増大させ、限界希釈によってサブクローニングした。２回のサブクローニングおよびスクリーニングに次いで、最終クローンをバイオリアクター（Ｉｎｔｅｇｒａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｕｒ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）中で培養し、上清を、以前に記載されたように（Ｈｏｎｇｏ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １９（４），３０３−３１５）、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーによって精製した。ＰＭＥＬ１７ ＥＣＤ免疫化マウス由来の３つの抗体クローン８Ｇ３、１５Ｆ２、１７Ａ９、および３１Ｄ１、ならびにＤＮＡ免疫化マウス由来の１つの抗体クローン７７Ｅ６を、さらなる分析のために選択した。
Ｃ．マウスモノクローナル抗体クローニング
総ＲＮＡを、標準方法を使用して、マウス８Ｇ３、１５Ｆ２、および１７Ａ９を産生するハイブリドーマ細胞から抽出した。可変軽（ＶＬ）および可変重（ＶＨ）ドメインを、ＲＴ−ＰＣＲを使用して、重鎖および軽鎖に対する縮重プライマーにより増幅した。順方向プライマーは、ＶＬおよびＶＨ領域のＮ末端アミノ酸配列に特異的であった。それぞれ、ＬＣおよびＨＣ逆方向プライマーを、複数種にわたって高度に保存されている、定常軽（ＣＬ）および定常重ドメイン１（ＣＨ１）における領域に対してアニーリングするように設計した。挿入物のポリヌクレオチド配列を、通例の配列決定方法を使用して決定した。１７Ａ９ ＶＨおよびＶＬアミノ酸配列は、それぞれ配列番号５０および２に示される。重鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３は、それぞれ配列番号３、４、および５に示される。軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ配列番号６、７、および８に示される。８Ｇ３ ＶＨおよびＶＬアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４９および１０に示される。重鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３は、それぞれ配列番号１３、１４、および１５に示される。軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ配列番号１６、７、および８に示される。１５Ｆ２ ＶＨおよびＶＬアミノ酸配列は、それぞれ配列番号５１および１２に示される。重鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３は、それぞれ配列番号２０、２１、および２２に示される。軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ配列番号２３、２４、および２５に示される。
抗体８Ｇ３、１７Ａ９、および１５Ｆ２軽鎖および重鎖可変領域のアライメントが、それぞれ図２Ａおよび２Ｂに示される。
Ｄ．モノクローナル抗体エピトープマッピング
エピトープマッピングのための全ての構築物を、各断片のＰＣＲ増幅、ならびにＮ末端ｇＤタグを有するｐＲＫｔｋｎｅｏベクター、またはＮ末端ｇＤタグおよびＣ末端ＧＰＩアンカーを有するｐＲＫｔｋｎｅｏベクターのいずれかへのサブクローニングによって作製した。トランスフェクションを、ＦｕＧｅｎｅ ６（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して行い、空のベクターを対照として使用した。完全長ヒトＰＭＥＬ１７を、Ｎ末端ｇＤタグを有するｐＲＫｔｋｎｅｏベクター中にサブクローニングした。
シグナル配列およびｇＤエピトープタグを一連の欠失突然変異体のＮ末端配列に融合し、それを次いで哺乳類細胞内で発現させ、ライセートを免疫ブロッティングによって、１７Ａ９または７７Ｅ６との反応性について分析した。試験されたＮ末端欠失体には、Δ１００、Δ２５５、Δ２９２、Δ３１５、Δ４４４、Δ５１５、およびΔ５６７が含まれた。
さらに、Ｎ末端ｇＤタグおよびＣ末端ＧＰＩアンカーを有するＣ末端欠失体を、２９３細胞内に一過性でトランスフェクトし、抗体結合についてＦＡＣＳによって分析した。試験されたＣ末端欠失には、ＰＭＥＬ１７２５〜１２５、ＰＭＥＬ１７２５〜１０５、ＰＭＥＬ１７２５〜８５、ＰＭＥＬ１７２５〜６５、およびＰＭＥＬ１７２５〜４５が含まれた。最後に、アミノ酸５１５から膜貫通ドメインまでの領域を含むが、細胞質領域を欠いているＰＭＥＬ１７断片（「Δ５１５−Ｃ」）、ならびにＮ末端ｇＤタグおよびＣ末端ＧＰＩアンカーを有する細胞質ドメインのみを含むＰＭＥＬ１７断片を、免疫ブロッティングによって、７７Ｅ６との反応性について分析した。
その実験の結果が図３に示される。図３Ａは、Ｎ末端ＰＭＥＬ１７欠失突然変異体の図表、ならびに抗ｇＤ抗体および７７Ｅ６との反応性を示す免疫ブロットを示す。７７Ｅ６は、試験されたＮ末端欠失体の全てと反応した。図３Ｂは、Δ５１５−Ｃ断片および細胞質（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｄ）ドメイン断片の図表、ならびに抗ｇＤ抗体および７７Ｅ６との反応性を示す免疫ブロットを示す。７７Ｅ６は、細胞質ドメインを含有する全ての欠失突然変異体に結合したが、細胞質ドメインを欠いているΔ５１５−Ｃ突然変異体には結合しなかった。これらの結果は、７７Ｅ６がＰＭＥＬ１７の細胞質ドメイン内のエピトープに結合することを裏付ける。
図３Ｃは、抗ｇＤ抗体および１７Ａ６との反応性を示す免疫ブロットを示す。１７Ａ６は、完全長ＰＭＥＬ１７のみに結合し、Δ２２５またはΔ１００突然変異体には結合しなかった。図３Ｄは、Ｃ末端ＰＭＥＬ１７欠失突然変異体の図表、およびそれらの突然変異体への抗ｇＤ、１７Ａ９、および３１Ｄ１抗体結合のＦＡＣＳ分析を示す。１７Ａ９は、ＰＭＥＬ１７２５〜１２５のみに結合し、ＰＭＥＬ１７２５〜１０５を含む、その他の突然変異体のうちのいずれにも結合しなかったことから、１７Ａ９が、ＰＭＥＬ１７のアミノ酸１０５〜１２５の領域内のエピトープに結合することが示唆される。３１Ｄ１は、ＰＭＥＬ１７２５〜４５を含む、試験された断片の全てに結合したことから、３１Ｄ１がＰＭＥＬ１７のアミノ酸２５〜４５の領域内のエピトープに結合することが示唆される。
Ｅ．ＰＭＥＬ１７エピトープの細胞内局在化
ＰＭＥＬ１７は、メラノソームへのその経路選択中にかなり複合のプロセシングを経ることが知られており、これらのうちのいくつかは、タンパク質分解切断を伴って、最終的に、限定されたＲＰＴドメイン含有断片の、成熟オルガネラ内のフィブリル構造中への堆積をもたらす。このプロセシングは、Ａｒｇ−４６９において、プロタンパク質変換酵素による切断を伴い、ジスルフィド結合によってテザリングされたままであるＮ末端ＭαおよびＣ末端Ｍβ断片をもたらす。Ｍβ断片は、Ｇｌｎ−５８３のメタロプロテイナーゼ（ｍｅｔａｌｌｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）によって、および膜貫通領域におけるγ−セクレターゼによって、さらに切断される。故に、細胞質エピトープおよびＮ末端エピトープを含有するＰＭＥＬ１７の領域は、このプロセシング中に解離される。
ＰＭＥＬ１７は、この複雑なプロセシングを経るので、固定された透過処理済み９２８ｍｅｌ細胞（Ｐａｕｌ Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｓｅｃｔｉｏｎによる提供）の細胞内のＰＭＥＬ１７抗体エピトープの細胞内分布を、Ｃｙ３フルオロフォアで標識された７７Ｅ６およびＡｌｅｘａ ４８８で標識された１４Ｃ１０を使用して決定した。抗体１４Ｃ１０は、１７Ａ９と同じ欠失断片に結合する。細胞質エピトープ（７７Ｅ６によって検出）およびＮ末端エピトープ（１４Ｃ１０によって検出）の両方を含有するＰＭＥＬ１７の大量のプールが、核周囲の構造、おそらくは小胞体中に存在した。しかしながら、細胞周辺に向かって拡張すると、７７Ｅ６による染色強度の下方勾配、続いて細胞膜における反応性を含む、１４Ｃ１０染色の上方勾配が明らかである。これらの結果は、７７Ｅ６によって認識される細胞質エピトープが、形質膜へのＰＭＥＬ１７の移動中に除去されるが、一方でＮ末端エピトープが細胞表面へと進行することを示唆する。
分泌プロセシング中の細胞質構造の切り離しと一致するように、条件培地から回収されたＰＭＥＬ１７もまた、７７Ｅ６と反応することができなかった。非還元ＳＤＳゲルから切り出されると、この分泌ＰＭＥＬ１７は、質量分析によって決定するとき、ＭαおよびＭβの両方に由来するが、細胞質領域には由来しないペプチド配列を生成した。２−メルカプトエタノールで還元すると、分泌ＰＭＥＬ１７は、ＳＤＳゲル上で増強された移動度を示し、ＭβではなくＭα配列がこの切り出されたバンドから生成された。これらの結果は、分泌ＰＭＥＬ１７がジスルフィドによってテザリングされたＭαおよびＭβ領域を含有するが、細胞質配列を欠いていることを示唆する。
細胞質エピトープと比べた、細胞表面におけるＮ末端エピトープの優位性は、７７Ｅ６よりも１７Ａ９で観察されたより強力なＦＡＣＳシグナルと一致している。それにもかかわらず、７７Ｅ６で観察されたＦＡＣＳシグナルを説明するように、細胞質領域のいくつかの部分が細胞表面上に存在するようである。これに取り組むために、生細胞を、それぞれＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒｓ ５５５および４８８で直接標識された７７Ｅ６および１７Ａ９抗体と反応させた。抗体が生細胞への結合に対して互いに競合しなかったことを実証するために、９２８ｍｅｌ細胞を、標識された抗体を単独でまたは両方を一緒にしてのいずれかと共にインキュベートし、ＦＡＣＳ分析を行い、個々のフルオロフォアについてゲートをかけた。個々の抗体の結合は、他方の抗体の存在による影響を受けなかった。生存標識された（ｌｉｖｅ−ｌａｂｅｌｅｄ）細胞の可視化は、形質膜においてアクセスしやすい豊富なＮ末端エピトープと一致するように、１７Ａ９で均一な細胞表面染色を明らかにした。対照的に、７７Ｅ６染色はより分離され、まばらであり、大部分が１７Ａ９反応性と重複しなかった。さらに、１７Ａ９は、全ての細胞を均一に一貫して染色したが、７７Ｅ６染色は、細胞ごとに変動し、全体的な染色の程度は、調製物にわたって多様であった。その後の実験により、細胞の懸濁が細胞表面における７７Ｅ６染色の存在を大幅に増強することが実証されたことから、培養条件がこの変動性を説明し得ることが示唆される。全体的に、黒色腫細胞に対する１７Ａ９の均一で強力な反応性は、この抗体を薬物複合のための良好な候補としている。
Ｆ．種の交差反応性
抗体１７Ａ９を試験して、それがヒト以外の種由来のＰＭＥＬ１７と交差反応するかどうかを決定した。図９は、ヒト（配列番号２６）、カニクイザル（配列番号２８）、ラット（配列番号２９）、およびマウス（配列番号３１）ＰＭＥＬ１７の間のアライメントを示す。カニクイザルＰＭＥＬ１７を除く、配列の全てがシグナル配列を含む。４つ全ての種の間で同一である残基がアスタリスク（＊）によって示される。ラット配列が欠失を有する領域において、残りの３つの種の間で同一である残基がプラス（＋）によって示される。ＰＭＥＬ１７の各種への結合を、ＦＡＣＳ分析によって、Ｎ末端ｇＤタグ融合ＰＭＥＬ１７（ヒト、カニクイザル、ラット、またはマウスＰＭＥＬ１７）で安定にトランスフェクトされた２９３Ｓ細胞を使用して決定し、１０μｇ／ｍＬの１７Ａ９抗体で染色し、Ｒ−フィコエリトリン標識ヤギ抗マウス抗体で検出した。トランスフェクトされていない２９３細胞は、ＰＭＥＬ１７を通常発現しない。１７Ａ９は、試験されたＰＭＥＬ１７の４つ全ての種、すなわちヒト、カニクイザル、ラット、およびマウスに結合することが見出された。
Ｇ．抗ＰＭＥＬ１７抗体の内部移行
ＡＤＣ標的の１つの望ましい属性は、抗体を細胞内の分解性の区画中へと内部移行させる能力である。１３００ｍｅｌ黒色腫細胞を、Ｌａｂ−Ｔｅｋ ＩＩの細胞培養処理された４ウェルチャンバスライド（Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）に播種し、ＰＭＥＬ１７ ｍＡｂと共に、２μｇ／ｍＬでそれぞれ５０ｎＭおよび５ｎＭでのリソソーム性プロテアーゼ阻害剤ロイペプチンおよびペプスタチンＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の存在下で、２時間または２０時間のいずれかにわたって、５％ ＣＯ２を含む３７°Ｃのインキュベーター中でインキュベートした。細胞を次いでＰＢＳで洗浄し、４％パラホルムアルデヒド（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）中に室温で５分間固定し、０．５％ＢＳＡを含むＰＢＳ中０．０５％サポニン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）により３７℃で５分間透過処理し、細胞を次いで、リソソームマーカーに対する抗体である２μｇ／ｍＬのウサギポリクローナル抗ＬＡＭＰ１（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）と共に１時間インキュベートし、続いてＣｙ３標識抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）およびＡｌｅｘａ−４８８標識抗ラビットＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）の１時間のインキュベーションを行なった。ＰＭＥＬ１７抗体もまた、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｒｏ ５５５またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｒｏ ４８８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）のいずれかで直接標識し、それらを上述のように固定し、透過処理した後に細胞を染色した。Ｌｅｉｃａ ＳＰ５共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を画像解析に使用した。
図４に示されるように、１７Ａ９およびＬＡＭＰ１染色のかなりの重複が細胞内で明らかであった。５２６ｍｅｌ、ＳＫ−ＭＥＬ−５、およびＵＡＣＣ２５７を含む、追加のＰＭＥＬ１７＋黒色腫細胞株中への１７Ａ９の急速な取り込みが一貫して観察された。これらの結果は、１７Ａ９ ＡＤＣが効果的に内部移行し、分解を経、薬物を放出して黒色腫細胞を死滅させるはずであることを予測する。
Ｈ．抗ＰＭＥＬ１７抗体薬物複合体の産生
より大規模な抗体産生のために、抗体をＣＨＯ細胞内で産生した。ＶＬおよびＶＨをコードするベクターを、ＣＨＯ細胞中にトランスフェクトし、ＩｇＧを、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーによって細胞培養培地から精製した。
プロテアーゼ切断可能なｖａｌ−ｃｉｔリンカーおよび薬物ＭＭＡＥを含む、抗ＰＭＥＬ１７抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を、１７Ａ９またはｃｈ１７Ａ９（例えば、配列番号４７および４８を参照されたい）を、薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥに複合することによって産生し、それは本明細書に描写される。プロテアーゼ切断可能なｖａｌ−ｃｉｔリンカーおよび薬物ＭＭＡＥを含む、抗ＥＴＢＲ ＡＤＣを、ｃｈ５Ｅ９（例えば、配列番号４３および４４を参照されたい）またはｈｕ５Ｅ９．ｖ１（例えば、配列番号４５および４６を参照されたい）を、薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥに複合することによって産生した。便宜上、薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥはときに、これらの実施例においておよび図において、「ｖｃＭＭＡＥ」または「ＶＣＥ」と称される。
複合前に、抗体を、ＴＣＥＰにより、国際公開第２００４／０１０９５７ Ａ２号に記載される手法に従った標準方法を使用して、部分的に還元した。部分的に還元された抗体を、例えば、Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．（２００３） Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８−７８４および米国公開特許第２００５／０２３８６４９ Ａ１号に記載される手法に従った標準方法を使用して、薬物−リンカー部分に複合した。簡潔に述べると、部分的に還元された抗体を薬物−リンカー部分と組み合わせて、抗体の還元されたシステイン残基への薬物−リンカー部分の複合を可能にした。複合反応を、いずれの遊離リンカー−薬物部分とも反応する過剰のＮ−アセチル−システインを添加することによって反応停止処理し、ＡＤＣを精製した。ＡＤＣについての薬物負荷（１抗体当たりの薬物部分の平均数）を２．７８と決定した。ｖａｌ−ｃｉｔ−ＭＭＡＥリンカー−薬物（ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥとも称される）を含むＡＤＣの構造が図１５Ａに示される。
プロテアーゼ切断可能なｖａｌ−ｃｉｔリンカーおよび薬物ＰＮＵ−１５９６８２を含む、抗ＰＭＥＬ１７抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を、実質的に上述されるように、ｃｈ１７Ａ９を薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＰＮＵ−１５９６８２に複合することによって産生した。プロテアーゼ切断可能なｖａｌ−ｃｉｔリンカーおよび薬物ＰＮＵ−１５９６８２を含む、抗ＥＴＢＲ ＡＤＣを、実質的に上述されるように、ｃｈ５Ｅ９を薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＰＮＵ−１５９６８２に複合することによって産生した。ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＵ−１５９６８２を含むＡＤＣの構造が図１５Ｃに示される。
酸不安定性アセタールリンカーおよび薬物ＰＮＵ−１５９６８２を含む、抗ＰＭＥＬ１７抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を、実質的に上述されるように、ｃｈ１７Ａ９を薬物−リンカー部分ＭＣ−アセタール−ＰＮＵ−１５９６８２に複合することによって産生した。酸不安定性アセタールリンカーおよび薬物ＰＮＵ−１５９６８２を含む、抗ＥＴＢＲ ＡＤＣを、実質的に上述されるように、ｃｈ５Ｅ９を薬物−リンカー部分ＭＣ−アセタール−ＰＮＵ−１５９６８２に複合することによって産生した。ＭＣ−アセタール−ＰＮＵ−１５９６８２を含むＡＤＣの構造が図１５Ｂに示される。
切断不可能なリンカーおよび薬物ＰＮＵ−１５９６８２を含む、抗ＰＭＥＬ１７抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を、実質的に上述されるように、ｃｈ１７Ａ９を薬物−リンカー部分ＭＣ−ＰＮＵ−１５９６８２に複合することによって産生した。切断不可能なリンカーおよび薬物ＰＮＵ−１５９６８２を含む、抗ＥＴＢＲ ＡＤＣを、実質的に上述されるように、ｃｈ５Ｅ９を薬物−リンカー部分ＭＣ−ＰＮＵ−１５９６８２に複合することによって産生した。ＰＮＵ−１５９６８２を含むＡＤＣの構造が図１５Ｅに示される。
プロテアーゼ切断可能なｖａｌ−ｃｉｔリンカーおよびＰＢＤ二量体薬物を含む、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を、実質的に上述されるように、抗体を薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＢＤに複合することによって産生する。抗体−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＢＤの構造が図１５Ｄに示される。
Ｉ．抗ＰＭＥＬ１７抗体薬物複合体によるインビトロ細胞増殖の阻害
１７Ａ９ ＡＤＣの存在下での増殖を、９６ウェルの透明底プレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）中、５０μＬの通常の増殖培地中に１ウェル当たり２，０００でプレートした、ＰＭＥＬ１７＋黒色腫細胞およびＰＭＥＬ１７を安定に発現するＰＣ３細胞を使用して、評価した。２４時間後、１７Ａ９ ＡＤＣの段階希釈液を含む追加の５０μＬの培養培地を３連のウェルに添加した。３日または５日後、細胞数を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏＩＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）を使用して、およびＥｎＶｉｓｉｏｎ ２１０１ Ｍｕｔｉｌａｂｅｌ Ｒｅａｄｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）により決定した。
図５に示されるように、１７Ａ９ ＡＤＣによるＰＭＥＬ１７＋黒色腫細胞のパネルの滴定は、有効な細胞殺滅をもたらし、ＩＣ５０が１０〜１００ｎｇ／ｍＬのＡＤＣの範囲であった。ＰＭＥＬ１７を安定に発現する前立腺がん細胞株ＰＣ３は、効果的に殺滅されたが、ベクター対照ＰＣ３親細胞株の殺滅は、１０μｇ／ｍＬのＡＤＣまで見られなかった。
いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、黒色腫細胞株に対するＡＤＣ ＩＣ５０値の変動性は、ＡＤＣにとってアクセスしやすいＰＭＥＬ１７のレベルの変動性を反映し得るが、追加の要因が寄与する可能性が高い。例えば、１３００ｍｅｌ細胞株は、ＳＫ−ＭＥＬ−５細胞株よりも細胞表面ＰＭＥＬ１７を有意により多く発現するが、なおもＡＤＣ ＩＣ５０は、１３００ｍｅｌのほうが若干高い。さらに、放出されたＭＭＡＥ薬物製品への細胞株の反応の変動性は、別の寄与要因であり得る。８つの黒色腫細胞株にわたる遊離ＭＭＡＥについてのＩＣ５０値は、およそ０．１〜０．５ｎＭの範囲であった。遊離薬物および１７Ａ９ ＡＤＣへの反応の間に厳密な相関はなかったが、遊離薬物の感受性の数倍の差異は、いくつかの事例において、ＡＤＣへの感受性の変動性を説明し得る。実際、ＳＫ−ＭＥＬ−５は、１３００ｍｅｌよりも遊離ＭＭＡＥに対してより感受性が高く、それは、１３００ｍｅｌよりも低いレベルの細胞表面ＰＭＥＬ１７を有することの補償となり得る。抗体の内部移行の相対速度を含む、他の要因もまた、ＡＤＣへの反応に影響を及ぼし得る。したがって、抗体を経時的に蓄積し、内部移行させる、４つの異なる黒色腫細胞株の能力を比較した。予想通り、より高いレベルの細胞表面ＰＭＥＬ１７を有する細胞は、より多くの抗体を蓄積したが、内部移行されたその量の割合は同等であるように見えたことから、取り込みの相対的効率に差異がほとんどないことが示される。
Ｊ．正常なメラニン細胞内の抗ＰＭＥＬ１７ ＡＤＣの毒性
正常なメラニン細胞上のＰＭＥＬ１７を標的とすることの潜在的な不利益を評価するために、正常なヒト皮膚におけるこの標的の発現のレベルを免疫組織化学法によって評定した。免疫組織化学法（ＩＨＣ）を、ガラススライドに載置した４μｍ厚のホルマリン固定パラフィン包埋組織切片上で行った。全てのＩＨＣステップは、Ｖｅｎｔａｎａ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＸＴ（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）自動染色装置により行った。前処理をＣｅｌｌ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｒ １により標準時間で行った。一次抗体ＰＭＥＬ１７クローン３１Ｄ１を１０μｇ／ｍＬの濃度で使用し、スライド上で、３７℃で１時間インキュベートした。Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｏｕｓｅ ＯｍｎｉＭａｐ（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ；ＡＺ）を検出系として使用した。Ｖｅｎｔａｎａ ＤＡＢおよびヘマトキシリンＩＩを発色検出および対比染色に使用した。
その実験の結果が図６Ａに示される。ＰＭＥＬ１７抗体３１Ｄ１での染色は、皮膚内のメラニン細胞の分布と一致するように、真皮の基底層に沿って断続的な反応性を明らかにした。
正常なヒトメラニン細胞およびＳＫ−ＭＥＬ−５黒色腫細胞をキメラ１７Ａ９、または一次抗体を含まないもの、続いてＡｌｅｘａ４８８標識抗ヒトＩｇＧと反応させ、フローサイトメトリーによって分析した。図６Ｂに示されるように、培養された正常なヒトメラニン細胞もまた抗体１７Ａ９によりＦＡＣＳ＋であり、その強度は、黒色腫細胞株ＳＫ−ＭＥＬ−５で観察されたものと同等であった。
最後に、ＳＫ−ＭＥＬ−５およびＳＫ−ＭＥＬ−２３黒色腫細胞、または正常なヒトメラニン細胞を１７Ａ９ ＡＤＣの段階希釈液と共にインキュベートし、５日後、細胞数を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏＩＩを使用して決定した。図６Ｃに示されるように、１７Ａ９ ＡＤＣによる正常なメラニン細胞の滴定は、細胞殺滅をもたらし、ＩＣ５０が黒色腫細胞株で観察されたものよりもほぼ１００倍高かった。これらの結果は、抗有糸分裂薬ＭＭＡＥの作用機序および黒色腫細胞と比べて低減された正常なメラニン細胞の増殖能力と一致している。
Ｋ．ヒト黒色腫組織検体上のＰＭＥＬ１７の発現
ＰＭＥＬ１７の発現を、ヒト黒色腫組織検体（ｓｐｅｃｉｍｉｎｅｓ）のパネルにわたって、免疫組織化学によって、実質的に上述されるように、１７Ａ９および３１Ｄ１の両方を使用して評定した。染色を、次のように不在を示す０から最も強力な３＋まで任意の目盛り上でスコア化した：
０（陰性）：黒色腫細胞の９０％超における非常に弱いまたはゼロの染色
１＋（軽度）：優勢的な染色パターンが弱い
２＋（中程度）：優勢的な染色パターンが黒色腫細胞の大部分（５０％超）において中程度に強い
３＋（強）：優勢的な染色パターンが黒色腫細胞の大部分（５０％超）において強い
目盛りのレベルの各々についての例となる染色が図７Ａ、左パネルに示される。
５８個の検体を３０個の原発性黒色腫および２８個の転移性黒色腫から得た。図７Ｂの表に示されるように、５８個のヒト黒色腫検体にわたって染色の全範囲が観察され、このうちの大部分がいずれかの抗体により陽性のスコアであった。ヒト黒色腫検体の８３％（４８／５８）は、３１Ｄ１により検出されたときにＰＭＥＬ１７＋であり、６４％（３７／５８）は、１７Ａ９により検出されたときにＰＭＥＬ１７＋であった。１７Ａ９と比べて、３１Ｄ１による染色は、目盛りの上限に向かってより高度に傾斜していた。黒色腫細胞株の固定パラフィン包埋ペレットもまた薄片化し、それらを組織検体と平行して染色して、実際の黒色腫と比べたそれらの染色強度を計測した。図７Ａ、右パネルを参照されたい。
Ｌ．ＳＫ−ＭＥＬ−２３黒色腫細胞株異種移植片における抗ＰＭＥＬ１７抗体薬物複合体の有効性
全ての研究は、実験動物の管理と使用に関する指針に従って行った（参照：Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，“Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ”，（ＮＩＨ刊行物番号８５−２３）．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ（ＤＣ）：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ；１９９６。
抗ＰＭＥＬ１７ ＡＤＣの有効性を、ＳＫ−ＭＥＬ−２３黒色腫細胞株異種移植片モデルを使用して調査した。Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのメスＣＲＬ Ｎｕ／Ｎｕマウスに、マトリゲルを含むＨＢＳＳ中、５００万個のＳＫ−ＭＥＬ−２３細胞を背側右脇腹から皮下接種した。ＳＫ−ＭＥＬ−２３細胞は、２＋〜３＋の染色強度を示す。腫瘍体積が約２００ｍｍ３に到達したとき（０日目）、動物を各々１０匹からなる群に無作為割り当てし、２または６ｍｇ／ｋｇの１７Ａ９ ＡＤＣの単回ＩＶ注射を投与した。抗ＧＰ１２０抗体に複合されたＭＭＡＥを対照として使用した。腫瘍体積を研究終了まで週２回測定した。腫瘍体積を、デジタルカリパス（Ｆｒｅｄ Ｖ．Ｆｏｗｌｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．）を使用して、式（Ｌ×Ｗ×Ｗ）／２を使用して決定した。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％）を、ＴＧＩ％＝１００×［１−（ＡＵＣ処置／日）／（ＡＵＣビヒクル／日）］となるように、ビヒクルに対する、それぞれの１日当たり用量群についての当てはめられた曲線下面積（ＡＵＣ）の割合として算出した。曲線当てはめを、Ｒパッケージｎｌｍｅ、Ｒ ｖ２．１０．１のバージョン３．１−９６を使用した線形混合効果モデルを使用して、Ｌｏｇ２変換された個々の腫瘍体積データに適用した。
図８に示されるように、６ｍｇ／ｋｇ用量の１７Ａ９ ＡＤＣは、腫瘍増殖を数週間にわたって遅延させた一方で、対照ＡＤＣのいずれの用量も腫瘍増殖に対して特記すべき効果を有しなかった。これらの結果は、ＰＭＥＬ１７を標的とするＡＤＣによる、ヒト黒色腫腫瘍異種移植片に対する強固で特異的な有効性を実証する。
Ｍ．抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥに対して耐性のＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２黒色腫細胞における抗ＰＭＥＬ１７抗体薬物複合体の有効性
別の治療薬に対する耐性を生じた黒色腫における抗ＰＭＥＬ１７ ＡＤＣの有効性を決定するために、ｖａｌ−ｃｉｔリンカーおよびＭＭＡＥ薬物を含む抗エンドセリンＢ受容体（ＥＴＢＲ）免疫複合体（抗ＥＤＮＲＢ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、抗ＥＴＢＲ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ等とも称される、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、例えば、米国公開第ＵＳ ２０１１／０２０６７０２号を参照されたい）に対して耐性であるＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２黒色腫細胞を、インビボおよびインビトロで発達させた。
インビボで生じる耐性について、ＮＣｒヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｈｕｄｓｏｎ，ＮＹ）に、マトリゲルを含むＨＢＳＳ中、５００万個のＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を背側右脇腹から皮下接種した。ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞は、ＵＡＣＣ−２５７細胞（国立癌研究所）に由来し、それをインビボ増殖のために次のように最適化する。ＵＡＣＣ−２５７細胞をメスＮＣｒヌードマウスの右脇腹から皮下注射して、腫瘍増殖を誘導した。１つの腫瘍を採取し、インビトロで増殖させた（ＵＡＣＣ−２５７Ｘ１．２細胞株と称される）。ＵＡＣＣ−２５７Ｘ１．２株をメスＮＣｒヌードマウスの右脇腹から再び皮下注射して、インビボの細胞株の増殖を改善させた。第２回目の注射からの腫瘍を収集し、インビトロ増殖のために再び適応させてＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２を生成した。ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞株およびこの株に由来する腫瘍は、親細胞株ＵＡＣＣ−２５７と同等のレベルでＥＴＢＲを発現する。
ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を接種した１０匹のマウスに、３ｍｇ／ｋｇのｈｕ５Ｅ９．ｖ１−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを、０日目に静脈内投薬した（ｈｕ５Ｅ９．ｖ１についての重鎖および軽鎖配列は、それぞれ配列番号４６および４５に示される）。マウスに再投薬するか、およびどの用量で投薬するかを決定するために、次の事項を考慮した：腫瘍が最初の処置後に再増殖（すなわち、成長して０日目の最初の腫瘍体積まで戻った腫瘍）するか否か、および再増殖の速度。投与された用量の頻度は、経時的に様々であったが、２回用量／週を超えることはなかった。静脈内投薬は、３００μＬを超えることはなかった。投与された用量の範囲は、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇであった。腫瘍が、一連の漸増用量に対してもはや反応しなくなる（すなわち、それが耐性を示す）と、投薬を中止した。
図１０Ａに示されるように、ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２腫瘍番号３５９は、約１２０日後に抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥに対して耐性を生じたが、一方で腫瘍番号３６８は、より緩徐に耐性を生じた。腫瘍番号３５９を採取し、細胞をインビトロ増殖のために解離した（本明細書でインビボ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞と称される）。
インビトロで生じる耐性について、ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を、培養皿中、漸増濃度の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥに２か月間の経過にわたって適応させた。図１０Ｂは、最大で少なくとも１０μｇ／ｍＬの濃度の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥによって比較的影響を受けなかった、インビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞株（本明細書でインビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞と称される）を示す。図１０Ｂはまた、対照ＡＤＣであるα−ｇＤ−ｖｃ−ＭＭＡＥと共にインキュベートしたインビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞、およびα−ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥと共にインキュベートした親ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞も示す。
インビボ由来およびインビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞および親ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞の表面上でのＥＴＢＲおよびＰＭＥＬ１７の発現を次いで、ＦＡＣＳによって決定した。細胞を抗ＥＴＢＲ抗体（ｈｕ５Ｅ９．ｖ１またはｃｈ５Ｅ９）でまたは抗ＰＭＥＬ１７抗体（ｃｈ１７Ａ９）で染色し、続いて抗ヒトＡｌｅｘａ４８８抗体複合体で染色した。図１１ＡおよびＢに示されるように、インビボ由来およびインビトロ由来の両方の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞は、親細胞株と比べて細胞の表面上でＥＴＢＲの減少した発現を有した。ＰＭＥＬ１７の表面発現は、親細胞と比較して耐性細胞内で変化がなかった。図１１ＣおよびＤを参照されたい。各図における対照ピークは、二次抗体のみでの染色を示す。
インビボ由来およびインビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を次いで、漸増濃度の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、抗ＰＭＥＬ１７−ｖｃ−ＭＭＡＥ、および対照ＡＤＣである抗ｇＤ−ｖｃ−ＭＭＡＥに対する感受性についてアッセイした。実施例Ｈおよび図１５Ａを参照されたい。
免疫複合体の存在下での細胞株のインビトロ細胞増殖を評価した。細胞を、９６ウェルの透明底プレート中、５０μＬの通常の増殖培地中に１ウェル当たり１，５００細胞でプレートした。２４時間後、免疫複合体の段階希釈液を含む追加の５０μＬの培養培地を３連のウェルに添加した。５日後、細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇ７５７２，Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用し、ＥｎＶｉｓｉｏｎ ２１０１ Ｍｕｔｉｌａｂｅｌ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して決定した。
その実験の結果が図１２に示される。親ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞株は、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥおよび抗ＰＭＥＬ１７−ｖｃ−ＭＭＡＥの両方に対して感受性があり、ＥＣ５０がそれぞれ４５ｎｇ／ｍＬおよび３３ｎｇ／ｍＬであった。図１２Ａを参照されたい。親株はまた、リンカー−薬物（抗体を含まない、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、図１２において「遊離薬物」と称される）に対しても感受性があり、ＥＣ５０が０．２８ｎＭであった。インビボ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞は、抗ＰＭＥＬ１７−ｖｃ−ＭＭＡＥに対して感受性がいくらか低く、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥに対しては感受性が有意に低く、ＥＣ５０がそれぞれ１１９ｎｇ／ｍＬおよび２３５ｎｇ／ｍＬであった。図１２Ｂを参照されたい。インビボ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞はまた、リンカー−薬物（抗体を含まない）に対しても感受性が低く、ＥＣ５０が０．７７ｎＭであった。インビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞は、抗ＰＭＥＬ１７−ｖｃ−ＭＭＡＥに対して感受性が有意に低く、ＥＣ５０が７６４ｎｇ／ｍＬであり、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥに対しては感受性がなかった。図１２Ｃを参照されたい。インビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞はまた、リンカー−薬物（抗体を含まない）に対しても感受性が低く、ＥＣ５０が３．５ｎＭであった。これらの結果は、耐性がＡＤＣの抗体部分および薬物部分の両方に対して生じせしめられ得ることを示唆する。
ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞における耐性に対するＡＤＣの抗体部分の効果を決定するために、インビボおよびインビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を、耐性細胞を発達させるために使用されたものとは異なるリンカーおよび異なる薬物を含むＡＤＣに対する感受性についてアッセイした。この実験において試験されたＡＤＣは、切断不可能なリンカーを通じてＰＮＵ−１５９６８２に連結された抗ＥＴＢＲ（抗ＥＴＢＲ−ＰＮＵ）、および切断不可能なリンカーを通じてＰＮＵ−１５９６８２に連結された抗ＰＭＥＬ１７（抗ＰＭＥＬ１７−ＰＮＵ）であった。実施例Ｈおよび図１５Ｅを参照されたい。切断不可能なリンカーを通じてＰＮＵ−１５９６８２に連結された、無関係の抗体である抗ｇＤ（抗ｇＤ−ＰＮＵ）を対照として使用した。
その実験の結果が図１３に示される。親ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞株は、抗ＥＴＢＲ−ＰＮＵおよび抗ＰＭＥＬ１７−ＰＮＵの両方に対して感受性があり、ＥＣ５０がそれぞれ４．２ｎｇ／ｍＬおよび５．５ｎｇ／ｍＬであった。図１３Ａを参照されたい。親株はまた、リンカー−薬物（抗体を含まない、ＭＣ−ＰＮＵ−１５９６８２、図１３において「遊離薬物」と称される）に対しても感受性があり、ＥＣ５０がこの実験において０．１８ｎＭであった。インビボ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞は、抗ＰＭＥＬ１７−ＰＮＵに対して親株と同程度に感受性があったが、抗ＥＴＢＲ−ＰＮＵに対しては感受性がいくらか低く、ＥＣ５０がそれぞれ４．７ｎｇ／ｍＬおよび１４．３ｎｇ／ｍＬであった。図１３Ｂを参照されたい。インビボ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞はまた、リンカー−薬物（抗体を含まない）に対しても、親株と同程度に感受性があり、ＥＣ５０が０．１３３ｎＭであった。インビボ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞と同様に、インビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞は、抗ＰＭＥＬ１７−ＰＮＵに対して同程度に感受性があったが、抗ＥＴＢＲ−ＰＮＵに対しては感受性がいくらか低く、ＥＣ５０がそれぞれ４．８ｎｇ／ｍＬおよび１４．６ｎｇ／ｍＬであった。図１３Ｃを参照されたい。インビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞はまた、リンカー−薬物（抗体を含まない）に対しても、親株と同程度に感受性があり、ＥＣ５０が０．１５ｎＭであった。これらの結果は、インビボ由来およびインビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞における耐性の程度が、ＡＤＣのＭＭＡＥ薬物部分への耐性ではなく、ＡＤＣの抗体部分に帰する（例えば、ＥＴＢＲの発現の減少のため）ことを実証する。同様の結果を、酸不安定性リンカーを通じてＰＮＵ−１５９６８２に連結された抗ＥＴＢＲおよび抗ＰＭＥＬ１７によって得た。
インビボ由来およびインビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を、ＭＭＡＥ免疫複合体において使用されたｖｃリンカーを通じてＰＮＵ−１５９６８２に連結された抗ＥＴＢＲ（抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＰＮＵ）、およびｖｃリンカーを通じてＰＮＵ−１５９６８２に連結された抗ＰＭＥＬ１７（抗ＰＭＥＬ１７−ｖｃ−ＰＮＵ）に対する感受性についてアッセイした。実施例Ｈおよび図１５Ｃを参照されたい。ｖｃリンカーを通じてＰＮＵ−１５９６８２に連結された、無関係の抗体である抗ｇＤ（抗ｇＤ−ｖｃ−ＰＮＵ）を対照として使用した。
その実験の結果が図１４に示される。親ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞株は、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＰＮＵおよび抗ＰＭＥＬ１７−ｖｃ−ＰＮＵの両方に対して感受性があり、ＥＣ５０がそれぞれ３ｎｇ／ｍＬおよび２．５ｎｇ／ｍＬであった。図１４Ａを参照されたい。親株はまた、リンカー−薬物（抗体を含まない、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＰＮＵ−１５９６８２）に対しても感受性があり、ＥＣ５０がこの実験において２ｎＭであった。インビボ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞は、抗ＰＭＥＬ１７−ｖｃ−ＰＮＵに対して親株よりも感受性が若干低く、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＰＮＵに対して感受性が低く、ＥＣ５０がそれぞれ６．４ｎｇ／ｍＬおよび２３ｎｇ／ｍＬであった。図１４Ｂを参照されたい。インビボ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞はまた、リンカー−薬物（抗体を含まない）に対しても親株よりも感受性が若干低く、ＥＣ５０が４．２ｎＭであった。同様に、インビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞は、抗ＰＭＥＬ１７−ＰＮＵおよび抗ＥＴＢＲ−ＰＮＵに対して感受性が低く、ＥＣ５０がそれぞれ１１．６ｎｇ／ｍＬおよび４１ｎｇ／ｍＬであった。図１４Ｃを参照されたい。インビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞はまた、リンカー−薬物（抗体を含まない）に対しても親株よりも感受性が若干低く、ＥＣ５０が６．６ｎＭであった。これらの結果は、ＡＤＣのリンカー構成要素がインビボ由来およびインビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞における耐性に寄与し得ることを示唆する。例えば、耐性株を発達させるために使用されたＡＤＣとは異なる抗体および薬物を有するが、それと同じリンカーを有する、抗ＰＭＥＬ１７−ｖｃ−ＰＮＵに対する親株およびインビトロ由来の耐性株の感受性（ＥＣ５０がそれぞれ２．５ｎｇ／ｍＬおよび１１．６ｎｇ／ｍＬ）と、異なる抗体、薬物、およびリンカーを有する、抗ＰＭＥＬ１７−ＰＮＵに対する親株およびインビトロ由来の耐性株の感受性（ＥＣ５０がそれぞれ５．５ｎｇ／ｍＬおよび４．８ｎｇ／ｍＬ）とを比較されたい。
インビボ由来およびインビトロ由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を、ＭＭＡＥ免疫複合体において使用されたｖｃリンカーを通じてＰＢＤ二量体に連結された抗ＥＴＢＲ（抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＰＢＤ）に対する感受性についてアッセイした。ｖｃ−ＰＢＤは、本明細書で「ＰＢＤ二量体−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ」として示される構造を有した。また、実施例Ｈおよび図１５Ｄも参照されたい。その実験において、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＰＮＵによる結果と同様に、耐性細胞株は、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＰＢＤに対して親株よりも感受性が低かったが、それらは完全に耐性ではなかったことから、耐性のうちの一部が抗体およびリンカー部分に起因するが、一部の感受性が免疫複合体の薬物部分を変更することによって回復され得ることが示唆される。
上述の発明は、明確な理解のための説明および例としてある程度詳細に記載してきたが、説明および例は、本発明の範囲を限定すると見なされるべきではない。本明細書で引用される全ての特許および科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
Figure 0006242865
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Claims (71)

  1. ＰＭＥＬ１７に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｖｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体。
  2. モノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗体。
  3. ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である、請求項１に記載の抗体。
  4. ＰＭＥＬ１７に結合する抗体断片である、請求項１に記載の抗体。
  5. ＰＭＥＬ１７は、ヒトＰＭＥＬ１７である、請求項１に記載の抗体。
  6. ヒトＰＭＥＬ１７は、配列番号２６または配列番号２７の配列を有する、請求項５に記載の抗体。
  7. 抗体が、
    ａ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、または
    ｂ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
    ｃ）ａ）に記載のＶＨ配列およびｂ）に記載のＶＬ配列
    を含む、請求項１に記載の抗体。
  8. 配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ配列を含む、請求項７に記載の抗体。
  9. 配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ配列を含む、請求項７に記載の抗体。
  10. 配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ配列および配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ配列を含む、単離抗体。
  11. ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、またはＩｇＧ２ｂ抗体である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体。
  12. 請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体をコードする、単離核酸。
  13. 請求項１２に記載の核酸を含む、宿主細胞。
  14. 前記抗体が産生されるように、請求項１３に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
  15. 請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体および細胞傷害性薬剤を含む、免疫複合体。
  16. 式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、
    （ａ）Ａｂは、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体であり、
    （ｂ）Ｌは、リンカーであり、
    （ｃ）Ｄは、メイタンシノイド、オーリスタチン、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン、およびネモルビシン（ｎｅｍｏｒｂｉｃｉｎ）誘導体から選択される薬物であり、
    （ｄ）ｐは、１〜８の範囲である、請求項１５に記載の免疫複合体。
  17. Ｄは、オーリスタチンである、請求項１６に記載の免疫複合体。
  18. Ｄは、式ＤＥ
    Figure 0006242865
    を有し、Ｒ２およびＲ６は各々、メチルであり、Ｒ３およびＲ４は各々、イソプロピルであり、Ｒ５は、Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ−ブチルであり、各Ｒ８は独立して、ＣＨ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＨ、およびＨから選択され、Ｒ９は、Ｈであり、Ｒ１８は、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリールである、請求項１７に記載の免疫複合体。
  19. 前記薬物は、ＭＭＡＥである、請求項１６に記載の免疫複合体。
  20. Ｄは、式Ａ、
    Figure 0006242865
    のピロロベンゾジアゼピンであり、式中、点線は、Ｃ１とＣ２またはＣ２とＣ３との間の二重結合の任意の存在を示し、
    Ｒ２は独立して、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ、およびＣＯＲから選択され、任意選択的に、ハロまたはジハロからさらに選択され、ＲＤは独立して、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、およびハロから選択され、
    Ｒ６およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、およびハロから選択され、
    Ｒ７は独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、およびハロから選択され、
    Ｑは独立して、Ｏ、Ｓ、およびＮＨから選択され、
    Ｒ１１は、Ｈ、もしくはＲであるか、または、ＱがＯである場合、ＳＯ３Ｍであるいずれかであり、式中、Ｍは、金属陽イオンであり、
    ＲおよびＲ’は各々独立して、置換されていてもよいＣ１−８アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル、およびＣ５−２０アリール基から選択され、任意選択的に、基ＮＲＲ’に関して、ＲおよびＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒に、置換されていてもよい４、５、６、または７員の複素環式環を形成し、
    Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９、およびＲ１７は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９、およびＲ７について定義される通りであり、
    Ｒ″は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、１個以上のヘテロ原子および／または置換されていてもよい芳香族環によって分断されていてもよく、
    ＸおよびＸ’は独立して、Ｏ、Ｓ、およびＮ（Ｈ）から選択される、請求項１６に記載の免疫複合体。
  21. Ｄは、構造、
    Figure 0006242865
    を有し、ｎは、０または１である、請求項２０に記載の免疫複合体。
  22. Ｄは、
    Figure 0006242865
    Figure 0006242865
    から選択される構造を有し、式中、ＲＥおよびＲＥ”は各々独立して、ＨまたはＲＤから選択され、式中、ＲＤは独立して、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、およびハロから選択され、
    Ａｒ１およびＡｒ２は各々独立して、置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり、
    ｎは、０または１である、請求項２０に記載の免疫複合体。
  23. Ｄは、式Ｂ、
    Figure 0006242865
    のピロロベンゾジアゼピンであり、式中、水平の波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
    ＲＶ１およびＲＶ２は独立して、Ｈ、メチル、エチル、フェニル、フルオロ置換フェニル、およびＣ５−６ ヘテロシクリルから選択され、
    ｎは、０または１である、請求項１６に記載の免疫複合体。
  24. Ｄは、ネモルビシン誘導体である、請求項１６に記載の免疫複合体。
  25. Ｄは、
    Figure 0006242865
    から選択される構造を有する、請求項２４に記載の免疫複合体。
  26. 前記リンカーは、プロテアーゼによって切断可能である、請求項１６〜２５のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  27. 前記リンカーは、ｖａｌ−ｃｉｔジペプチドまたはＰｈｅ−Ｌｙｓジペプチドを含む、請求項２６に記載の免疫複合体。
  28. 前記リンカーは、酸不安定性である、請求項１６〜２５のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  29. 前記リンカーは、ヒドラゾンを含む、請求項２８に記載の免疫複合体。
  30. 式、
    Figure 0006242865
    を有し、式中、Ｓは、硫黄原子である、請求項１８に記載の免疫複合体。
  31. 式、
    Figure 0006242865
    を有する、請求項２１に記載の免疫複合体。
  32. Figure 0006242865
    Figure 0006242865
    から選択される式を有する、請求項２５に記載の免疫複合体。
  33. ｐは、２〜５の範囲である、請求項１６〜３２のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  34. 請求項１０に記載の抗体を含む、請求項１６〜３３のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  35. 請求項１６〜３４のいずれか１項に記載の免疫複合体、および薬剤的に許容される担体を含む、医薬製剤。
  36. 追加の治療剤をさらに含む、請求項３５に記載の医薬製剤。
  37. ＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体を治療するための医薬であって、有効量の、請求項１５〜３４のいずれか１項に記載の免疫複合体を含む、医薬。
  38. ＰＭＥＬ１７陽性がんは、黒色腫である、請求項３７に記載の医薬。
  39. 追加の治療剤をさらに含む、請求項３８に記載の医薬。
  40. ＰＭＥＬ１７陽性細胞の増殖を阻害するための医薬であって、請求項１５〜３４のいずれか１項に記載の免疫複合体を含む、医薬。
  41. 前記細胞は、黒色腫細胞である、請求項４０に記載の医薬。
  42. 標識にコンジュゲートされる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体。
  43. 標識は、陽電子放出体である、請求項４２に記載の抗体。
  44. 陽電子放出体は、８９Ｚｒである、請求項４３に記載の抗体。
  45. 生体試料中のヒトＰＭＥＬ１７を検出するためのキットであって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗ＰＭＥＬ１７抗体を含み、該生体試料が、天然ヒトＰＭＥＬ１７への抗ＰＭＥＬ１７抗体の結合を許容する条件下で該抗ＰＭＥＬ１７抗体に接触させられ、該生体試料中で、該抗ＰＭＥＬ１７抗体と天然ヒトＰＭＥＬ１７との間で複合体が形成されるかどうかが検出される、キット。
  46. 抗ＰＭＥＬ１７抗体は、請求項１０に記載の抗体である、請求項４５に記載のキット。
  47. 生体試料は、黒色腫試料である、請求項４５に記載のキット。
  48. ＰＭＥＬ１７陽性がんを有するかまたはそれを有することが疑われる対象においてＰＭＥＬ１７陽性がんを検出するためのキットであって、標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体を含み、該標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体は、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗ＰＭＥＬ１７抗体を含み、該対象において該標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体が検出され、該標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体の検出が、該対象におけるＰＭＥＬ１７陽性がんを示す、キット。
  49. 標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体は、標識されている、請求項１０に記載の抗体である、請求項４８に記載のキット。
  50. 標識された抗ＰＭＥＬ１７抗体は、陽電子放出体にコンジュゲートされた抗ＰＭＥＬ１７抗体を含む、請求項４８または請求項４９に記載のキット。
  51. 陽電子放出体は、８９Ｚｒである、請求項５０に記載のキット。
  52. ＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体を治療するための医薬であって、有効量の、請求項１５〜３４のいずれか１項に記載の免疫複合体を含み、該ＰＭＥＬ１７陽性がんは、第１の治療薬に対して耐性である、医薬。
  53. ＰＭＥＬ１７陽性がんは、黒色腫である、請求項５２に記載の医薬。
  54. 第１の治療薬は、ＰＭＥＬ１７以外の抗原に結合する第１の抗体を含む、請求項５２または請求項５３に記載の医薬。
  55. 第１の治療薬は、ＰＭＥＬ１７以外の抗原に結合する第１の抗体と、第１の細胞傷害性薬剤とを含む、第１の免疫複合体である、請求項５４に記載の医薬。
  56. 第１の抗体は、エンドセリンＢ受容体（ＥＴＢＲ）、チロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＹＲＰ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、および糖タンパク質ＮＭＢ（ＧＰＮＭＢ）から選択される抗原に結合する、請求項５４または請求項５５に記載の医薬。
  57. 第１の抗体は、ＥＴＢＲに結合する、請求項５６に記載の医薬。
  58. 第１の抗体は、ｈｕ５Ｅ９．ｖ１である、請求項５７に記載の医薬。
  59. 第１の免疫複合体は、ｈｕ５Ｅ９．ｖ１−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである、請求項５８に記載の医薬。
  60. 第１の細胞傷害性薬剤と、請求項１５〜３４のいずれか１項に記載の免疫複合体の細胞傷害性薬剤とは、異なる、請求項５５〜５９のいずれか１項に記載の医薬。
  61. 第１の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥであり、請求項１５〜３４のいずれか１項に記載の免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン、およびネモルビシン（ｎｅｍｏｒｕｂｉｃｉｎ）誘導体から選択される、請求項６０に記載の医薬。
  62. 請求項１５〜３４のいずれか１項に記載の免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、ピロロベンゾジアゼピンおよびネモルビシン誘導体から選択される、請求項６１に記載の医薬。
  63. ＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体を治療するための医薬であって、有効量の、請求項１５〜３４のいずれか１項に記載の第１の免疫複合体を含み、ＥＴＢＲに結合する抗体を含む第２の免疫複合体と組み合わせて投与される、医薬。
  64. ＰＭＥＬ１７陽性がんを有する個体を治療するための医薬であって、有効量の、ＥＴＢＲに結合する抗体を含む第２の免疫複合体を含み、請求項１５〜３４のいずれか１項に記載の第１の免疫複合体と組み合わせて投与される、医薬。
  65. 第１の免疫複合体は、オーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン、およびネモルビシン誘導体から選択される細胞傷害性薬剤を含み、第２の免疫複合体は、オーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン、およびネモルビシン誘導体から選択される細胞傷害性薬剤を含む、請求項６３または６４に記載の医薬。
  66. 第１の免疫複合体は、ピロロベンゾジアゼピンおよびネモルビシン誘導体から選択される細胞傷害性薬剤を含み、第２の免疫複合体は、オーリスタチンを含む、請求項６３〜６５のいずれか１項に記載の医薬。
  67. 第２の免疫複合体は、ＭＭＡＥを含む、請求項６６に記載の医薬。
  68. 第２の免疫複合体は、ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを含むリンカー−薬物部分を含む、請求項６３〜６７のいずれか１項に記載の医薬。
  69. 第２の免疫複合体は、ｈｕ５Ｅ９．ｖ１−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである、請求項６３〜６８のいずれか１項に記載の医薬。
  70. ＰＭＥＬ１７陽性がんは、黒色腫である、請求項６３〜６９のいずれか１項に記載の医薬。
  71. ＰＭＥＬ１７陽性がんはまた、ＥＴＢＲ陽性でもある、請求項６３〜７０のいずれか１項に記載の医薬。
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