JP6199955B2 - 炎症を治療するための方法および組成物 - Google Patents
炎症を治療するための方法および組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6199955B2 JP6199955B2 JP2015502510A JP2015502510A JP6199955B2 JP 6199955 B2 JP6199955 B2 JP 6199955B2 JP 2015502510 A JP2015502510 A JP 2015502510A JP 2015502510 A JP2015502510 A JP 2015502510A JP 6199955 B2 JP6199955 B2 JP 6199955B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- antigen
- mhc
- pmhc
- inflammatory
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0216—Bacteriodetes, e.g. Bacteroides, Ornithobacter, Porphyromonas
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
- A61K47/6923—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being an inorganic particle, e.g. ceramic particles, silica particles, ferrite or synsorb
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
- Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
- Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Ceramic Engineering (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
本出願は、2012年3月26日に出願された米国特許仮出願第61/615,743号に対する米国特許法第119条(e)の下での優先権を主張するものであり、この出願の内容はその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
本開示は、免疫療法と医学に関連した組成物および方法に指向している。特に、本開示は、炎症、例えば胃腸管の炎症を治療するための治療学に関する。
炎症性腸疾患(IBD)は、腸に炎症を生じさせる(赤く腫れる)疾患のグループの名称である。毎年60万人を上回る米国人が何らかの炎症性腸疾患に罹患している。このグループの疾患は、多くの場合、慢性的な性質であり、腹痛、嘔吐、下痢、直腸出血、骨盤領域における重度の内部けいれん/筋痙縮、および体重減少などの症状を伴っている。IBDに関連した症状は、生活の質を制限し、罹患した人々に日常的に悪影響を及ぼし得る。
当技術分野の必要性に応じて、本明細書では、慢性的な炎症反応を抑制することに指向された既存の内因性メカニズムを活性化しかつ増幅する治療方法ならびに治療用組成物が記載される。一局面において、組成物および方法は、胃腸管の炎症を治療するために提供される。
[本発明1001]
抗原-MHC複合体を含むナノ粒子であって、該複合体が、胃腸管の微生物に由来する抗原と複合体化されたかまたはGI関連抗原である抗原と複合体化されたMHCタンパク質を含む、ナノ粒子。
[本発明1002]
約1nm〜約100nm、約5nm〜約50nm、または約5nm〜約15nmの直径の群より選択される直径を有する、本発明1001のナノ粒子。
[本発明1003]
抗原-MHC複合体対ナノ粒子の比が約10:1〜約1000:1である、前記本発明のいずれかのナノ粒子。
[本発明1004]
前記抗原-MHC複合体が前記ナノ粒子に共有結合または非共有結合で連結されている、前記本発明のいずれかのナノ粒子。
[本発明1005]
前記抗原-MHC複合体が、5kD未満の大きさのリンカーを介して前記ナノ粒子に共有結合で連結されている、前記本発明のいずれかのナノ粒子。
[本発明1006]
前記抗原が、バクテロイデス属(Bacteroides)、クロストリジウム属(Clostridium)、フゾバクテリウム属(Fusobacterium)、ユウバクテリウム属(Eubacterium)、ルミノコッカス属(Ruminococcus)、ペプトコッカス属(Peptococcus)、ペプトストレプトコッカス属(Peptostreptococcus)、もしくはビフィドバクテリウム属(Bifidobacterium)の群のうちの微生物に由来するか、または、前記抗原が、オボアルブミン、酵母マンナン、もしくはグリアジンの群のうちのタンパク質に由来するGI関連抗原である、前記本発明のいずれかのナノ粒子。
[本発明1007]
前記抗原が、バクテロイデス属に由来するか、またはバクテロイデス属のタンパク質に由来する、前記本発明のいずれかのナノ粒子。
[本発明1008]
前記抗原がインテグラーゼに由来する、前記本発明のいずれかのナノ粒子。
[本発明1009]
前記抗原が、SEQ ID NO:1、4、5、6、7、または8の群のうちのペプチド配列に対して少なくとも80%の同一性を有するペプチドを含む、前記本発明のいずれかのナノ粒子。
[本発明1010]
生体適合性または生体吸収性である、前記本発明のいずれかのナノ粒子。
[本発明1011]
前記MHCがMHCクラスIまたはMHCクラスIIを含む、前記本発明のいずれかのナノ粒子。
[本発明1012]
リポソームではない、前記本発明のいずれかのナノ粒子。
[本発明1013]
本発明1001〜1012のいずれかのナノ粒子および担体を含む、組成物。
[本発明1014]
本発明1001〜1012のいずれかのナノ粒子を調製するかまたは得るための方法であって、前記抗原-MHC複合体を該ナノ粒子と複合体化させる工程を含む、方法。
[本発明1015]
SEQ ID NO:1、4、5、6、7、もしくは8の群のうちのアミノ酸配列を含む単離および精製されたポリペプチド、あるいは、SEQ ID NO:1、4、5、6、7、もしくは8に対して少なくとも約80%の配列同一性を有するポリペプチド、あるいは、SEQ ID NO:1、4、5、6、7、もしくは8をコードするかまたはSEQ ID No:1、4、5、6、7もしくは8に対して少なくとも約80%の配列同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに中程度ストリンジェンシー条件から高ストリンジェンシー条件の下でハイブリダイズするポリヌクレオチドまたはその相補体によってコードされる、ポリペプチド。
[本発明1016]
本発明1015のポリペプチドもしくは等価物をコードする単離および精製されたポリヌクレオチド、または、約25℃〜約37℃のインキュベーション温度、約6×SSC〜約10×SSCのハイブリダイゼーションバッファー濃度、約0%〜約25%のホルムアミド濃度、および約4×SSC〜約8×SSCの洗浄液を含むストリンジェントな条件下で、該ポリヌクレオチド、その等価物、もしくはその相補体にハイブリダイズする、ポリヌクレオチド。
[本発明1017]
本発明1015のポリペプチドおよび担体を含む、組成物。
[本発明1018]
本発明1016のポリヌクレオチドおよび担体を含む、組成物。
[本発明1019]
細胞または組織において抗炎症反応を誘導するための方法であって、該細胞または該組織を本発明1001〜1012のいずれかのナノ粒子の有効量と接触させる工程を含む、方法。
[本発明1020]
それを必要とする患者において炎症を治療するための方法であって、本発明1001〜1012のいずれかのナノ粒子複合体の有効量を該患者に投与し、それによって炎症を治療する工程を含む、方法。
[本発明1021]
それを必要とする患者のGI管において抗炎症性T細胞および/または抗炎症性細胞を蓄積するための方法であって、本発明1001〜1012のいずれかのナノ粒子の有効量を該患者に投与し、それによって該患者を治療する工程を含む、方法。
[本発明1022]
前記患者が、炎症性腸疾患、大腸炎、クローン病、胃腸管のアレルギー性炎症、またはセリアック病の群のうちの胃腸疾患に罹患している、本発明1020または本発明1021の方法。
[本発明1023]
前記細胞または前記組織が、GI管の細胞または組織である、本発明1019の方法。
[本発明1024]
前記T細胞がCD4+ T細胞またはCD8+ T細胞である、本発明1021または1022の方法。
[本発明1025]
前記T細胞がIL-10またはTGFβを分泌する、本発明1021、1022、または1024のいずれかの方法。
[本発明1026]
前記抗炎症反応が胃腸管において誘導される、本発明1019または1023の方法。
[本発明1027]
胃腸管の炎症が治療される、本発明1020の方法。
[本発明1029]
それを必要とする患者において、腸内細菌のエピトープを標的とする細胞傷害性Tリンパ球を移入するための方法であって、本発明1001〜1012のいずれかの抗原-MHC-ナノ粒子複合体の有効量を該患者に投与する工程を含む、方法。
[本発明1030]
前記細胞傷害性Tリンパ球が、低い結合活性を有する前記腸内細菌のエピトープを認識する、本発明1029の方法。
(図1)図1A〜1Cは、BacIYLが高い親和性でH-2Kdに結合し、かつ、得られたpMHC複合体がIGRP206-214特異的T細胞に結合することを示す。A:RMA-SKd細胞上のKd分子のペプチド誘導安定化。TUMは陽性対照であり、Gp33は陰性(Db結合性)対照である。BおよびC:BacIYL/Kd四量体は、NRP-V7/Kd四量体よりも低い結合活性ではあるが、8.3-CD8+ T細胞に特異的に結合する。
(図2A)BacIYLが単独でアンタゴニストとして機能するが、LPSの存在下では部分的アゴニストとして機能し、そのドナータンパク質が樹状細胞によって有効に交差提示されることを示す。BacIYL、IGRP206-214(陽性対照)、またはTUM(陰性対照)の存在下で培養した8.3-CD8+ T細胞におけるCD44およびCD69の発現。
(図2B)BacIYLが単独でアンタゴニストとして機能するが、LPSの存在下では部分的アゴニストとして機能し、そのドナータンパク質が樹状細胞によって有効に交差提示されることを示す。アンタゴニズムアッセイ法。TUMは陰性対照として使用される。BacIYL(しかし、Kdを結合させる陰性対照のTUMではない)の増加する濃度が、IGRP206-214で誘導される8.3-CD8+ T細胞応答(IFNg分泌、上;および増殖、下)にどれほどアンタゴナイズするかに留意されたい。
(図2C)BacIYLが単独でアンタゴニストとして機能するが、LPSの存在下では部分的アゴニストとして機能し、そのドナータンパク質が樹状細胞によって有効に交差提示されることを示す。BacIYLはLPSの存在下でアゴニストとして機能する。NTG、非トランスジェニック(CD8+ T細胞)。
(図2D)BacIYLが単独でアンタゴニストとして機能するが、LPSの存在下では部分的アゴニストとして機能し、そのドナータンパク質が樹状細胞によって有効に交差提示されることを示す。DCは、組換え野生型インテグラーゼまたは組換え変異型インテグラーゼ(BacIYLエピトープがIGRP206-214をコードするように変異している)由来のBacIYLまたはBACIGRP206-214様エピトープをプロセシングすることができる。
(図3A)BacIYLペプチドがインビトロでメモリーCD8+ T細胞の形成を誘導することを示す。ペプチドパルス(10または0.001μg/ml)適用されたDCの存在下で培養してから28日後の8.3-CD8+ T細胞の表現型。17.6-CD8+ T細胞は非常に低い結合活性のIGRP206-214特異的CD8+ T細胞であり;予想通り、それらはBacIYLとの培養下の28日後にナイーブのままである。
(図3B)BacIYLペプチドがインビトロでメモリーCD8+ T細胞の形成を誘導することを示す。ペプチドパルス(10または0.001μg/ml)適用されたDCの存在下で培養してから28日後の8.3-CD8+ T細胞の表現型。17.6-CD8+ T細胞は非常に低い結合活性のIGRP206-214特異的CD8+ T細胞であり;予想通り、それらはBacIYLとの培養下の28日後にナイーブのままである。
(図3C)BacIYLペプチドがインビトロでメモリーCD8+ T細胞の形成を誘導することを示す。ペプチドチャレンジに応答する細胞内IFNγ含有量。BacIYLと培養した8.3-CD8+ T細胞は、IGRP206-214刺激に応答してIFNγを速やかに産生する。
(図3D)BacIYLペプチドがインビトロでメモリーCD8+ T細胞の形成を誘導することを示す。ペプチドチャレンジに応答する(BacIYLにより誘導された)メモリー様8.3-CD8+ T細胞によるIFNγの分泌およびその増殖。
(図4A)BacIYL36-44反応性CD8+ T細胞応答がDSS誘導性大腸炎からの保護を与えることを示す。未処置マウスに対するDSS処置後の8.3-NODと17.6-NODの体重曲線を示す。
(図4B)BacIYL36-44反応性CD8+ T細胞応答がDSS誘導性大腸炎からの保護を与えることを示す。未処置マウスに対するDSS処置後の8.3-NODと17.6-NODの疾患活動性スコアを示す。
(図4C)BacIYL36-44反応性CD8+ T細胞応答がDSS誘導性大腸炎からの保護を与えることを示す。DSS処置後の8.3-NOD対Itgβ7-/- 8.3-NODマウスの体重曲線を示す。
(図4D)BacIYL36-44反応性CD8+ T細胞応答がDSS誘導性大腸炎からの保護を与えることを示す。DSS処置後の8.3-NOD対Itgβ7-/- 8.3-NODマウスの疾患活動性スコアを示す。
(図4E)BacIYL36-44反応性CD8+ T細胞応答がDSS誘導性大腸炎からの保護を与えることを示す。図4A〜Dにおいて試験したマウスの生存曲線を示す。
(図4F)BacIYL36-44反応性CD8+ T細胞応答がDSS誘導性大腸炎からの保護を与えることを示す。図4A〜Dにおいて試験したマウスの生存曲線を示す。
(図4G)BacIYL36-44反応性CD8+ T細胞応答がDSS誘導性大腸炎からの保護を与えることを示す。NODマウスではなく、IGRP206-214 -/- NODマウスが、4%DSSにより誘導された大腸炎に応答する体重減少に対して抵抗性であることを実証する。
(図4H)BacIYL36-44反応性CD8+ T細胞応答がDSS誘導性大腸炎からの保護を与えることを示す。IGRP206-214 -/- NODマウスへのBacIYL36-44交差反応性CD8+ CTLの養子移入が、その非CTL移入対応マウスと比較して、疾患活動性スコアの有意な減少をもたらしたことを示す。
(図5)図5Aおよび5Bは、BacIYL36-44反応性CD8+ CTLがDSS誘導性大腸炎から17.6-NODマウスを保護することを示す。図5Aは、DSS処置+8.3-CTL移入、DSS処置のみ、および無処置に応答する17.6-NODマウスの体重曲線を示し、図5Bは疾患活動性スコアを示す。17.6-NODマウスへのBacIYL36-44交差反応性CD8+ CTLの養子移入が、その非CTL移入対応マウスと比較して、DSSに応答する疾患活動性スコアおよび体重減少をどれほど有意に減少させたかに留意されたい。
(図6)IGRP4-22/I-Ag7-NP処置NODマウスにおける腸管関連リンパ組織へのTr1様自己調節性CD4+ T細胞の動員を示す。2匹のマウスについてのデータが示される。
(図7)pMT/V5におけるBacInt40-54-I-Ab-C-Junのマップを示す。Nco I(854)部位からXho I(1738)部位までのDNA構築物は、HA-BacInt40-54-I-Aβ(b)-C-Jun融合タンパク質(293a.a.)をコードする。この融合タンパク質は、15a.a.のHAリーダー配列と、これに続くBacInt40-54 (TNV)ペプチド(15a.a.)を含む。ペプチドをコードするDNA配列は、16a.a.のGSリンカーを介してI-Aβ(b)(199a.a.)に連結された。I-Aβ(b)のC末端は、8a.a.のGSリンカーを介してC-Jun配列(40a.a.)に連結された。a.a.=アミノ酸。
(図8)BacInt40-54-I-Aβ(b)-C-Jun構築物のタンパク質およびDNA配列を示す。融合タンパク質の各成分の配列は、HAリーダー(下線)、これに続く
の配列である。GSリンカーは強調表示されていない。
(図9)pMT/V5におけるI-Aα(b)-C-Fos-BirA-His6のマップを示す。HAリーダー-I-Aα(b)-C-Fos-BirA-His×6融合タンパク質(284a.a.)をコードするDNA構築物は、pMT/V5ハエ細胞発現ベクターのNco I(854)とXba I(1711)の間にクローニングした。この融合タンパク質はI-Aα(d)(195a.a.)と、これに続いてGSリンカー(6a.a.)を介するC-Fosと、その後のBirA配列および6×Hisを含む。
(図10)I-Aα(b)-C-Fos構築物のタンパク質配列およびDNA配列を示す。融合タンパク質の各成分の配列は、HAリーダー(下線)、これに続く
(網掛け)、および6×Hisの配列である。GSリンカーは強調表示されていない。
(図11)pMT/V5におけるBacInt81-95-I-Ab-C-Junのマップを示す。Nco I(854)部位とXho I(1738)部位間のDNA構築物は、HA-BacInt81-95-I-Aβ(b)-C-Jun融合タンパク質(293a.a.)をコードする。この融合タンパク質は、15a.aのHAリーダー配列と、その後にBecInt81-95(LGY)ペプチド(15a.a.)を含む。ペプチドをコードするDNA配列は、16a.a.のGSリンカーを介してI-Aβ(b)(199a.a.)に連結された。I-Aβ(b)のC末端は、8a.a.のGSリンカーを介してC-Jun配列(40a.a.)に連結された。
(図12)BacInt81-95-I-Aβ(b)-C-Jun構築物のタンパク質およびDNA配列を示す。融合タンパク質の各成分の配列は、HAリーダー(下線)、これに続く
(網掛け)の配列である。GSリンカーは強調表示されていない。
(図13)pMT/V5におけるBacInt365-379-I-Ab-C-Junのマップを示す。Nco I(854)部位とXho I(1738)部位間のDNA構築物は、HA-BacInt365-379-I-Aβ(b)-C-Jun融合タンパク質(293 a.a.)をコードする。この融合タンパク質は、15a.a.のHAリーダー配列と、その後にBacInt365-379(TQI)ペプチド(15a.a.)を含む。ペプチドをコードするDNA配列は、16a.a.のGSリンカーを介してI-Aβ(b)(199a.a.)に連結された。I-Aβ(b)のC末端は、8a.a.のGSリンカーを介してC-Jun配列(40a.a.)に連結された。
(図14)BacInt365-379-I-Aβ(b)-C-Jun構築物のタンパク質およびDNA配列を示す。融合タンパク質の各成分の配列は、HAリーダー(下線)、これに続く
(網掛け)の配列である。GSリンカーは強調表示されていない。
(図15)pMT/V5におけるBacInt57-71-I-Ab-C-Junのマップを示す。Nco I(854)部位とXho I(1738)部位間のDNA構築物は、HA-BacInt57-71-I-Aβ(b)-C-Jun融合タンパク質(293a.a.)をコードする。この融合タンパク質は、15a.a.のHAリーダー配列と、その後にBacInt57-71(INH)ペプチド(15a.a.)を含む。ペプチドをコードするDNA配列は、16a.a.のGSリンカーを介してI-Aβ(b)(199a.a.)に連結された。I-Aβ(b)のC末端は、8a.a.のGSリンカーを介してC-Jun配列(40a.a.)に連結された。
(図16)BacInt57-71-I-Aβ(b)-C-Jun構築物のタンパク質およびDNA配列を示す。融合タンパク質の各成分の配列は、強調表示されており:HAリーダー(下線)、これに続く
(網掛け)の配列である。GSリンカーは強調表示されていない。
(図17)pMT/V5におけるBacInt88-102-I-Ab-C-Junのマップを示す。Nco I(854)部位とXho I(1738)部位間のDNA構築物は、HA-BacInt88-102-I-Aβ(b)-C-Jun融合タンパク質(293a.a.)をコードする。この融合タンパク質は、15a.a.のHAリーダー配列と、その後にBacInt88-102(IPA)ペプチド(15a.a.)を含む。ペプチドをコードするDNA配列は、16a.a. GSリンカーを介してI-Aβ(b)(199a.a.)に連結された。I-Aβ(b)のC末端は、8a.a. GSリンカーを介してC-Jun配列(40a.a.)に連結された。
(図18)BacInt88-102-I-Aβ(b)-C-Jun構築物のタンパク質およびDNA配列を示す。融合タンパク質の各成分の配列は、強調表示されており:HAリーダー(下線)、これに続く
(網掛け)の配列である。GSリンカーは強調表示されていない。
(図19)高密度(約5×1013個/ml)に濃縮されかつ単分散されたpMHCコーティング金NP(約14nm)の代表的なTEM像を示す。倍率:50,000倍。
(図20)pMHCコーティングGNPのアゴニスト特性に及ぼすpMHC(GNP)用量およびpMHC結合価の影響を示す。この図は、2つの異なるpMHC-GNP試料(両方とも約2×1013個/mlの直径14nmのGNPからなる)に応答して同起源8.3-CD8+ T細胞により分泌されたIFNγの量を比較している。Au-022410およびAu-21910は、それぞれ、GNP1個あたり約250個および約120個のpMHCを保持していた。Au-011810-Cは、GNP1個あたり約120個の対照pMHCを保持していた。
(図21)pMHC結合価の関数としての8.3-CD8+ T細胞によるIFNγのpMHC-NP誘導性分泌を示す。8.3-CD8+ T細胞(2.5×105個/ml)は、3つの異なるIGRP206-214/Kd結合価でコーティングされたNPの数を増加させながら培養した。
(図22)pMHC-NPのより低いアゴニスト活性がpMHC-NP密度を増加させることによって、ただしpMHC結合価の閾値を上回って補償され得ることを示す。グラフは、広範なNP密度にわたって3つの異なるpMHC-NP調製物(pMHCの3つの異なる結合価数を保持している)のアゴニスト活性を比較するものである。54個のpMHCを保持するNPと比較した場合、8個のpMHCを保持するNPは、11個のpMHCを保持するものとは異なって、高いpMHC-NP密度でさえも、IFNγ分泌を十分に引き起こすことができないことに留意されたい。
(図23)全pMHC入力の関数としてのpMHC-NPのアゴニスト活性に及ぼすpMHC結合価閾値の影響を示す。
(図24)より大きな酸化鉄NPコアを用いて作製したpMHC-NPのアゴニスト活性に及ぼすpMHC結合価の影響を示す。
(図25)アゴニスト活性に及ぼすサイズの影響を示す。Au-0224-15は、比較的低いpMHC結合価でコーティングしたが高密度に調製した14nmのGNPであった。Au-0323-40は、高pMHC結合価であるが低密度にコーティングした40nmのGNPであった。Au-0224-15はAu-0323-40試料よりも優れたアゴニスト活性を有していた。
(図26)pMHC-GNPの機能に対する保護PEGの効果を示す。Au-021910は、2kD チオール-PEGで保護されかつ約120個pMHC/GNPでコーティングされた、約2×1013個/mlの直径14nmのGNPからなっていた。Au-012810 GNP(同様に約2×1013個/mlの14nm GNP)は、5kD チオール-PEGで保護され、約175個pMHC/GNPでコーティングされた。試料Au-021910は優れたアゴニスト活性を有していた。
(図27)NRP-V7/Kdコーティング金NPによるNRP-V7反応性CD8+ T細胞の効率的な増殖を示す。25μgのpMHCを保持する3×1012個のNP(サイズ約10nm)(150個pMHC/NP)を使用した。前糖尿病性の10週齢NODマウスをNRP-V7/kdコーティング金NPの週2回の注射で5週間処置した。TUM/Kd四量体は陰性対照である。パネルの各列は異なるマウスに対応する。
(図28)pMHCコーティングNPで処理したマウスにおける同起源CD8+ T細胞の大量増殖を示す。25μgのpMHCを保持する3×1012個のIGRP206-214/Kd-NP(サイズ約10nm)(150個pMHC/NP)を使用した。上のパネル:4回投与後に屠殺したマウスのプロファイル。下のパネル:10回注射後の2匹の異なるマウスのプロファイル(血液のみ;この投稿の時点で生存)。
本発明は、記載された特定の態様に限定されず、そのため、当然変化し得るものであることを理解されるべきである。さらに、本明細書中で用いる用語は、特定の態様のみを説明する目的のためであり、限定することを意図したものではないことを理解すべきである。なぜなら、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるからである。
他に定義されない限り、本明細書中で用いるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が通常理解している意味と同じ意味を有する。本明細書中で用いる場合、以下の用語は以下の意味を有する。
胃腸管の共生細菌由来の抗原ペプチドが、プロフェッショナル抗原提示細胞(APC、例えば樹状細胞またはDC)によってプロセシングされると内因性宿主T細胞によって特異的に認識されること、および同起源T細胞とAPCの間のこの抗原駆動型相互作用がIBDを抑制し得ることは、以前には知られていなかった。理論によって拘束されるものではないが、本出願人らは、胃腸管内に生息するかまたは胃腸管に感染する細菌由来のタンパク質が、プロテアソームによってプロセシングされるかまたはエンドソーム内でプロセシングされて、結果として生じたペプチドが、内因性MHCクラスIまたはクラスII分子への結合のために小胞体にピストン輸送され、次いでAPCの原形質膜に輸送され、その後同起源T細胞を活性化すると考えている。
本明細書に記載される方法は、以下の1つもしくはそれ以上を行うための、細胞、組織、もしくは対象への抗原-MHC-ナノ粒子複合体の有効量の投与を含むか、またはその代わりに該投与から本質的になるか、またはなおさらに該投与からなる:(1)細胞もしくは組織において抗炎症反応を誘導すること;(2)それを必要とする患者において炎症を治療もしくは軽減すること;(3)それを必要とする患者において自己調節性、抗炎症性T細胞を蓄積すること;および/または(4)それを必要とする患者において腸内細菌のエピトープを標的とする細胞傷害性Tリンパ球を移入すること。一態様では、細胞傷害性Tリンパ球は、低い結合活性を有する、腸内細菌のエピトープを認識する。
特定の局面は、全身性免疫を損なうことなく、腸の炎症を特異的に標的とする腸抗原特異的な抗IBD薬を作製するための方法に関する。実施例2には抗原-MHC-ナノ粒子複合体の作製が記載される。本発明において有用な抗原-MHC-ナノ粒子複合体は、胃腸管の微生物に由来する抗原を含む。腸特異的抗原-MHC複合体でコーティングされたナノ粒子を患者に投与することは、結果的に、全循環T細胞の約0.5%〜約90%、または約1%〜約80%、または約5%〜約80%、または約10%〜約80%、または約10%〜約50%、または約50%〜約90%、または約20%〜約50%、または約30%〜約60%、または約35%〜約65%、または約40%〜約70%、または約45%〜約75%、または約50%〜約80%、または約25%〜約55%、または約0.5%〜約1%、または約1%〜約2.5%、または約2.5%〜約5%、または約0.1%〜約5%、または約1%〜約5%、または約0.1%〜約10%である腸抗原特異的な循環T細胞の増殖につながると考えられる。
さらなる局面は、SEQ ID NO:1のアミノ酸配列を含むか、または該アミノ酸配列から本質的になるか、またはなおさらに該アミノ酸配列からなる、単離もしくは精製されたポリペプチドに、あるいは、SEQ ID NO:1に対して少なくとも約80%の配列同一性、またはその代わりに少なくとも85%、またはその代わりに少なくとも90%、またはその代わりに少なくとも95%、またはその代わりに少なくとも98%の配列同一性を有するポリペプチドに関する。さらに、SEQ ID NO:1に対して少なくとも約80%の配列同一性、またはその代わりにSEQ ID NO:1に対して少なくとも85%、もしくはその代わりに少なくとも90%、もしくはその代わりに少なくとも95%、もしくはその代わりに少なくとも98%の配列同一性でSEQ ID NO:1に対応するポリペプチドまたは等価物をコードする単離および精製されたポリヌクレオチド、あるいは、該ポリヌクレオチド、その等価物、またはその相補体にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド、ならびに、これらのポリヌクレオチドによってコードされる単離または精製されたポリペプチドが提供される。
SEQ ID NO:1: BacIYLエピトープ
SEQ ID NO:2: インテグラーゼタンパク質(バクテロイデス・ブルガタス)
SEQ ID NO:3: インテグラーゼDNA配列(バクテロイデス・ブルガタス)
SEQ ID NO:4: BacInt40-54ペプチド配列:
SEQ ID NO:5: BacInt81-95ペプチド配列:
SEQ ID NO:6: BacInt365-379ペプチド配列:
SEQ ID NO:7: BacInt57-71ペプチド配列:
SEQ ID NO:8: BacInt88-102ペプチド配列:
細胞内抗原および細胞外抗原は、認識の観点と適切な応答の観点の両面から、免疫系に対してまったく異なるチャレンジを示す。T細胞への抗原の提示は、異なる抗原プロセシング経路を用いる、2つの別個のクラスの分子MHCクラスI(MHC-I)とMHCクラスII(MHC-II)によって媒介される。細胞内抗原に由来するペプチドは、ほぼすべての細胞に発現されているMHCクラスI分子によってCD8+ T細胞に提示されるのに対し、細胞外抗原に由来するペプチドは、MHC-II分子によってCD4+ T細胞に提示される。しかしながら、この二分法には一定の例外がある。いくつかの研究は、エンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれた粒状または可溶性タンパク質から生成されたペプチドが、マクロファージのみならず樹状細胞でもMHC-I分子上に提示されることを示した。本発明の特定の態様では、特定の抗原は、同定されて、適切なMHCクラスIまたはIIポリペプチドの下で抗原-MHC-ナノ粒子複合体で提示される。特定の局面では、特定の患者および特定のペプチドセットのためにどのMHCポリペプチドが使用されるべきかを判定するために、対象の遺伝子構造が評価され得る。
本発明の特定の局面は、抗原組成物に関しての方法および組成物を包含し、該抗原組成物には、一般に抗原と呼ばれる、ポリペプチド、ペプチド、核酸、糖質、脂質、および抗原応答を惹起または誘導する他の分子のセグメント、断片またはエピトープが含まれる。特に、自己免疫応答を介して細胞の破壊に導く、抗原決定基の抗原セグメントまたは抗原断片を同定して、本明細書に記載の抗原-MHC-ナノ粒子複合体を作製するのに使用することができる。本発明の態様は、体の細胞または組織において免疫応答を調節するための組成物および方法を包含する。
特定の局面において、抗原/MHC複合体は基材に機能的に結合される。基材は、生体適合性で生体吸収性の材料を任意で含むナノ粒子の形態であり得る。したがって、一態様では、ナノ粒子は生体適合性および/または生体吸収性である。基材はまた、その全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許出願公開第2009/0155292号に以前に記載されたようなナノ粒子の形態をとることもできる。ナノ粒子はさまざまな寸法の構造をしていてよく、ナノスフェア、ナノ粒子、または生体適合性で生分解性のナノスフェアもしくは生体適合性で生分解性のナノ粒子として種々に知られている。そのような抗原/MHC複合体を含む粒子状製剤は、ナノ粒子への該複合体の共有結合または非共有結合によって形成することができる。
基材またはナノスフェアを抗原-MHC複合体に結合させるために、以下の手法を適用することができる。
本発明では、本発明のさまざまな態様で使用するためのポリペプチド、ペプチド、およびタンパク質が記載される。例えば、特定のペプチドおよびそれらの複合体は、免疫応答を誘発または調節するそれらの能力についてアッセイされる。特定の態様では、本発明のペプチドまたはタンパク質の全部もしくは一部はまた、従来の技術に従って、溶液中でまたは固相支持体上で合成することが可能である。種々の自動合成装置が市販されており、公知のプロトコールに従って使用することができる。例えば、各々が参照により本明細書に組み入れられる、Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. Ed., Pierce Chemical Co.l, (1984); Tam et al., J. Am. Chem. Soc., 105:6442, (1983); Merrifield, Science, 232(4748):341-347, (1986); およびBarany and Merrifield, The Peptides, Gross and Meinhofer (Eds.), Academic Press, NY, 1-284, (1979)を参照されたい。あるいは、組換えDNA技術を用いることができ、この方法では、本発明のペプチドをコードするヌクレオチド配列が発現ベクターに挿入され、適切な宿主細胞に形質転換またはトランスフェクションされ、かつ発現に適する条件下で培養される。
本発明は、例えばSEQ ID NO:1、2、または3などの本発明のタンパク質、ポリペプチド、ペプチドをコードする組換えポリヌクレオチドを含むことができる。例示的な抗原および該抗原を提示するためのMHC分子に関する核酸配列が含まれ、かつ抗原-MHC複合体を調製するために使用され得る。
本明細書において、疾患の治療のために有用である薬学的組成物を提供する。
本発明の組成物は通常、例えば、静脈、皮下、または筋肉内に、注射によって非経口的に投与されることができる。他の投与様式に適する追加の製剤としては、経口製剤が挙げられる。経口製剤は、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの、通常用いられる賦形剤を含む。こうした組成物は、溶液剤、懸濁液剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性製剤または粉剤の形をとり、約10%〜約95%の活性成分、好ましくは約25%〜約70%を含有する。対象の免疫状態を調整する抗原-MHC-ナノ粒子複合体を含有する水性組成物の調製は、本開示を踏まえて、当業者には公知である。特定の態様では、組成物は吸入されることが可能である(例えば、米国特許第6,651,655号参照;その全体が参照により本明細書に組み入れられる)。一態様では、抗原-MHC-ナノ粒子複合体を全身投与する。
本発明の組成物および関連する方法、特に、抗原-MHC-ナノ粒子複合体の投与はまた、従来の治療の投与と組み合わせて使用することができる。これらには、スルファサラジンなどの抗炎症薬、プレドニゾンなどのコルチコステロイド、ならびにアザチオプリンおよびメルカプトプリンなどの免疫系抑制剤が含まれるが、これらに限定されない。また、抗生物質、例えばメトロニダゾールもまた、腸内細菌を死滅させるのに有用であり得る。
本明細書中で用いるインビトロ投与という用語とは、対象から取り出された細胞、または培養下の細胞を含むがこれに限定されない、対象の外部に取り出された細胞に対して実施される操作を指す。エクスビボ投与という用語とは、インビトロで操作されて、その後対象に投与される細胞を指す。インビボ投与という用語には、投与を含めて、対象の内部に実施されたすべての操作が含まれる。
以下の実施例は、本発明のさまざまな態様を説明する目的で提供され、どのような形であっても本発明を限定するものではない。当業者であれば、本発明は、その目的を成し遂げて、記載した結果および効果を得るだけでなく、本発明に固有の目的、結果および効果を得るのによく適合していることが容易に理解されよう。本明細書に記載の方法とともに本実施例は、ここで態様を代表しており、例示的であり、本発明の範囲への限定を目的としたものではない。特許請求の範囲によって定義される本発明の精神の範囲内に包含されるそれらの変更および他の使用が、当業者には想起されると考えられる。
メモリー様自己調節性T細胞の抗原標的としてのバクテロイデス属インテグラーゼ
バクテロイデス属インテグラーゼの新規エピトープ(BacIYL: SEQ ID NO:1)が、TUM(陽性対照)、IGRP206-214、およびLCMVコード化Gp33(Db結合性陰性対照)と比較して、広範な濃度にわたってNODマウスの主要組織適合遺伝子複合体クラスI分子H-2Kdに結合することができるかどうかを検討した。図1Aに示すように、BacIYL配列(SEQ ID NO:1)は、抗原ペプチドトランスポーター(TAP)欠損RMA-SKd細胞の表面上にKd分子を、IGRP206-214およびTUMと同様に効率的に結合させた。
抗原-MHC-ナノ粒子複合体の作製のための方法
所望のサイズの無機ナノ粒子(酸化鉄=IONP;金=GNP)。IONPは熱分解によって作製される。そのように合成されたIONPは、生体適合性であり、タンパク質結合のためにPEG化することができる。IONP上にpMHCおよび/または他のタンパク質をコーティングするには、界面活性剤をコーティングしたNPを、適切な長さの官能化PEGリンカーと反応させる。リンカーは、HPLCで精製して、化学的同一性、純度、分子量、および多分散性を確認するために、1H-NMR、MALDI/GPC、およびGPCによって特徴決定する。同様のリンカーおよびアプローチを用いてGNPをコーティングすることができるが、ただし、該リンカーはそのNP結合端にチオール(SH)基を有するものである。
pMHCコーティングされたナノ粒子のサイズ、密度、および曝露
I. 金ベースのpMHCでコーティングされたNPの合成および特徴決定
特定のサイズの金ナノ粒子(GNP)を合成した。GNP調製物のサイズ、密度、表面電荷および単分散性は、分光光度計、透過型電子顕微鏡(TEM)、および動的光散乱を用いて測定する。次にGNP試料を濃縮し、以下で説明するように異なるアプローチを用いて単一特異性pMHC複合体と結合させる。本出願人らは、GNP1個あたりのpMHC結合価を定量するための方法、および単分散性を損なうことなく高い密度(約1014個/ml)で異なるサイズのpMHCコーティングGNP調製物を濃縮するための方法を開発した(図19)。
pMHC複合体は、2つの異なるアプローチを用いてさまざまなサイズのGNPにコーティングした:(i)静電相互作用によるGNP表面へのpMHCのランダム結合;および(ii)チオール-PEG-NH2リンカーを介する方向性結合(この場合は、GNP安定剤として追加のチオール-PEGリンカーを用いて凝集を防止した)。第1のアプローチは、(GNP1個あたりのpMHCの)非常に高いリガンド密度を可能にするが、pMHC結合の方向性を損なうと考えられた(すなわち、分子のほんの一部だけが、同起源Tリンパ球による認識に利用可能であるようになる可能性がある)。第2のアプローチは、より低い密度のpMHCを保持するがそのC末端を介して指向的に結合された、pMHCコーティングGNPを生成することを目的としていた。両方のアプローチは、14〜40nmの範囲のさまざまな直径のGNPで試験された。両アプローチとも、GNPのpMHC結合能は、サイズの関数、より具体的には表面積の関数であることが確認された(より大きなNP上にはより多くのpMHC数)。驚くべきことに、PEGが介在する結合は、結合の方向性を保証するだけでなく、(当初の予想に反して)個々のGNPの結合能を向上させることが見出された。以下の表1は、そのデータをまとめたものである。
インビトロでpMHCコーティングGNPの機能(アゴニスト)活性に対する、pMHC結合価、GNPサイズ、GNP密度、およびコーティング戦略の影響を試験した。T細胞受容体(TCR)トランスジェニックNODマウス(または8.3-NODマウス)に由来する同起源(IGRP206-214特異的)ナイーブCD8+ T細胞(本明細書では「8.3-CD8+ T細胞」と呼ばれる)を活性化する各種IGRP206-214-Kd-GNP調製物の能力を比較した。第1セットの実験は、培養物中の広範なGNP密度にわたってIGRP206-214-Kd(pMHC)結合価の影響を比較することを目的とした。対照(非同起源)pMHC複合体(Tum-Kd)と結合したGNPを陰性対照として使用した。予想通りに、IGRP206-214-KdコーティングされたGNPは(IFNγ産生により測定した場合)これらのT細胞を活性化し、それらはGNP用量(それゆえにpMHC用量)に依存した様式でそのように活性化した(しかし、TUM-KdコーティングされたGNPはそうでなかった)。図20は、リンカー法を用いてGNP1個あたり異なる数のpMHC分子でコーティングされた約14nmのGNPを使用する実験を示している。図20では、2つの異なるpMHC-GNP試料(両方とも約2×1013個/mlの直径14nmのGNPからなる)に応答して同起源8.3-CD8+ T細胞により分泌されたIFNγの量を比較している。Au-022410およびAu-21910は、それぞれ、約250および約120個pMHC/GNPを保持していた。Au-011810-Cは、約120個対照pMHC/GNPを保持していた。約2倍多い数のpMHC複合体/GNPでコーティングされたGNPは優れたアゴニスト活性を有していた。かくして、pMHCコーティングGNPのアゴニスト活性は、全pMHC(GNP)含有量の関数である。これらの結果は反直感的な結果であった。というのは、最新の技術は、NP上の共刺激分子の非存在下で、各NP上のpMHCの数を増加させることは、同起源T細胞の増殖およびサイトカイン分泌よりもむしろ、結合活性を増加させて、消失(細胞死)を促進し得ることを示唆すると考えられるからである。このことは、低結合活性と高結合活性の両方のT細胞に当てはまると考えられる。例えば、本出願人らによる以前の研究(Han et al., Nature Medicine, 2005)などは、高結合活性で認識されるペプチド、または低結合活性で認識されるが高濃度を与えられたペプチドがインビボで同起源T細胞を消失させる能力を増大させていることを示した。したがって、抗原-MHCコーティングされたナノ粒子または可溶性ペプチドの静脈内への治療的送達の状況において、同起源T細胞は、ペプチド親和性および用量に依存した様式で消失するはずである。この予想は、図20に示したデータによって満たされなかった。
pMHC結合ナノ粒子(pMHC-NP)のアゴニスト活性に対するペプチド-MHC(pMHC)結合価の役割をさらに検討するために、インビトロで同起源(IGRP206-214/Kd特異的)CD8+ T細胞(本明細書では8.3-CD8+ T細胞と呼ばれる)によるIFNガンマ(IFNγ)の分泌を引き起こすための、IGRP206-214/Kd pMHC単量体の増加する数を共有結合させた直径8nmの酸化鉄(Fe3O4)NPの能力を比較した。表2に示すように、8.3-CD8+ T細胞は、NP1個あたり8個のpMHC単量体でコーティングされたNPの存在下で培養した場合、無視できる量のIFNγを産生したにすぎなかったが、より高いpMHC結合価でコーティングされたNPに応答して、たとえ11個pMHC単量体/NPほどの低い結合価でも、用量応答的に、実質的により多量のIFNγを産生した。
さらなる解析は、全pMHC含有量がインビトロでpMHC-NPのアゴニスト活性に影響を与える唯一の要因ではないこと、およびNPのサイズもまた重要な独立した役割を果たしていることを示した。これを検討するにあたって、異なるサイズ(それぞれ、直径14および40nm)および異なるpMHC結合価であるが、同様の全pMHC含有量の条件下にある、2つのpMHC-GNP試料のアゴニスト活性を比較した。図25に示した実験では、約200個pMHC分子/GNPを保持する14nm GNP、および約5,000個pMHC/GNPを保持する40nm GNPを使用した。これら2つの試料のGNP密度は、各試料の全pMHC含有量が約450μg/mlとなるように(それぞれ、3×1013および1012個のGNP/mLに)調整した。注目すべきことに、8.3-CD8+ T細胞は、広範な全pMHC含有量にわたって、40nmのものに対してよりも14nmのpMHC/GNP化合物に対して、前者が後者よりもはるかに多くのpMHC複合体で装飾されていたという事実にもかかわらず、かなり良好に応答した。このことは、GNP密度(より多くのGNP/同起源T細胞)が鍵となることを示唆した。つまり、4×の1000個pMHC/GNP(4000個pMHC)を保持する40nm NPは、40×の100個pMHC/GNP(4000個pMHC)を保持する10nm NPほど望ましくないと考えられる。したがって、総合すると、これらのデータは、最適なpMHC-GNP調製物は高いpMHC密度で使用される小さなGNPで構成されたものであることを示唆している。これらの小さいNP上のpMHC結合価数の増加は、それらの驚くべき予想外のアゴニスト特性をさらに増大させる。
上述したように、pMHCコーティングされたGNP試料は、(pMHCカルボキシ末端のアクセプターとしての)3.4kDのチオール-PEG-NH2リンカーを有するGNPを、GNP安定剤として機能するチオール-PEGリンカーで同時コーティングすることによって作製される。安定化用のチオール-PEGリンカーの長さがそのGNP抗凝集特性に影響を与えるかどうかを調べるために、pMHC分子を結合させるチオール-PEG-NH2リンカーの能力、ならびに/またはpMHCコーティングGNP、異なるサイズ(2kDおよび5kD、それぞれpMHC-アクセプターリンカーよりも短いサイズと長いサイズ)の安定化用リンカーを用いて調製したpMHCコーティングGNPのアゴニスト特性を比較した。両方のリンカーは同様の抗凝集特性を有すること、および5kDのリンカーはより短い3.4kDのチオール-PEG-NH2リンカーへのpMHCの結合を妨げなかったことが判明した。しかし、注目すべきことに、短い(2kD)チオール-PEGで保護されたpMHC-GNPは、長い(5kD)チオール-PEGで同時コーティングされたものよりもインビトロで優れたアゴニスト活性を有していた(図26)。このことは、保護用の長いチオール-PEGリンカーがアクセプターリンカーに結合されたpMHC分子を同起源T細胞への曝露から遮蔽することを示唆している。
NRP-V7/Kd(IGRP206-214-Kdとも呼ばれる)またはTUM/Kd(対照)のいずれかに結合された、平均径約10nmのナノ粒子を、本明細書に記載の方法に従って作製し、インビボで同起源自己調節性CD8+ T細胞の増殖を誘導するそれらの能力について試験した。図27は、抗原-MHC-GNPを10週齢の野生型NODマウスに週2回、5週間連続して静脈内注射した実験の結果を示す。治療に応答する循環中のおよび異なるリンパ系組織中の同起源T細胞集団のサイズの変化は、蛍光標識した抗原-MHC四量体を(同起源はもちろん関連のない対照四量体も)用いて細胞懸濁液を染色することによって評価した。以前に当技術分野で示されていたもの(例えば、1〜8個pMHCでコーティングされたナノ粒子が試験された、Tsai et al., Immunity, 2010を参照)よりも10〜100個少ないが、GNP1個あたり150個の抗原-MHCでコーティングされた、GNPの投与は、実質的により高い増殖をもたらした(図27)。それらは、結合価 約8のpMHCでコーティングされたナノ粒子により一般的に得られるレベル(血液中の1〜2%の細胞;例えば、Tsai et al., Immunity, 2010、図1C参照)よりも数倍高いレベル(すべての循環CD8+ T細胞の最大44%)にCD8+ T細胞をインビボで増殖させた。上記のデータは、高い抗原-MHC結合価でコーティングされた小さなナノ粒子が最大のT細胞増殖効果を提供することを示している。これらの結果は予想外であった。したがって、それは、治療効果に関与しているpMHC-NP-T細胞相互作用の全体的な結合活性ではなく、むしろpMHC-NP療法に応答して増殖するT細胞を生じさせる前駆体集団の結合活性である。この解釈は、本明細書に記載したデータと一致しており、NP上のpMHCの結合価数がpMHC-NPの治療効果を増大させるべきであることを暗示している。
より高いpMHC結合価でコーティングされたpMHC-GNPによる同起源CD8+T細胞の大規模増殖
次に、pMHC-NPがインビボで同起源T細胞の大量増殖を誘導する可能性があるかどうかを確認した。これは、25μgの全pMHC(NP1個あたり約150個のIGRP206-214/Kd分子)を保持する3×1012個の10〜14nm NPの数回の注射でマウスを処理することによって行った。図28に示したとおり、10回の注射(週2回で10週間)で処理されたマウスは、未処理の対応マウスに比べて、末梢血における同起源IGRP206-214(NRP-V7)反応性CD8+T細胞の大量増殖を示した(<0.4〜>17%または47%のCD8+T細胞)(下のパネル)。このような増殖は4回のpMHC-NP注射後に屠殺したマウスですでに見られた(上のパネル)。pMHC-NPで増殖された細胞は、同起源pMHC四量体を特異的に結合させたが、非同起源pMHC四量体を結合させなかった(それぞれNRP-V7/Kd対TUM/Kd)。
pMHC結合金ナノ粒子の調製
pMHCを結合させた金ナノ粒子(pMHC-GNP、12および30nm)の調製。GNPの調製。ボールフラスコ内のダブル蒸留(D.D.)水(200mL)をシリコンオイルバスで沸騰するまで加熱することによって、GNPを調製した。次に、1% HAuCl4の溶液(4mL)を沸騰水に加えた。その溶液を10分攪拌してから、1%クエン酸Na溶液を添加した。12nmのGNPの場合は、12mLのクエン酸Na溶液を添加した。30nmのGNPの場合は、12mLのクエン酸Na溶液を添加した。クエン酸Na溶液を添加した直後にワイン色が現れる。この反応を完了させるために、GNP溶液をさらに30分攪拌した。これは、Levy, R.ら("Rational and combinatorial design of peptide capping ligands for gold nanoparticles." J Am Chem Soc 126, 10076-84 (2004))に記載される方法を改良したものであり、この文献を参照により本明細書に組み入れる。
pMHC結合金ナノ粒子の調製
pMHCを結合させたGNP(pMHC-GNP、2〜10nm)の調製。GNP(2〜5nm)の調製。250mg(2nm GNPの場合)または50mg(4nm GNPの場合)のドデシルアミンを10mLのDDAB溶液(トルエン中の100mM臭化ジドデシルジメチルアンモニウム(DDAB))中に溶解することによって、2〜5nmのGNPを調製した。次に、100mgの水素化ホウ素テトラブチルアンモニウム(TBAB)を4mLのDDAB溶液中に溶解した。その後、ドデシルアミンとTBABの溶液を50mL三つ口フラスコ内で窒素下に攪拌しながら混合した。34mgのAuCl3を4.5mLのDDAB溶液に溶解し、TBABとドデシルアミンの混合溶液に速やかに注入した。溶液はすぐに真っ赤になり、これはGNPの形成を示す。この混合物を30分間連続して攪拌し、15mLのエタノールをその混合物に添加した。その後混合物を4,100×gで12分遠心分離してGNPを沈降させた。
Claims (35)
- 複数のペプチド抗原-MHC複合体を含む高粒子密度ナノ粒子組成物であって、各ペプチド抗原-MHC複合体がナノ粒子コアに機能的に結合しており、
(a)該ペプチド抗原-MHC複合体が、バクテロイデス属インテグラーゼに由来するペプチド抗原と複合体化されたMHCタンパク質を含み、
(b)該ナノ粒子のナノ粒子コアが、5nm〜50nmの直径を有し、かつ
(c)ペプチド抗原-MHC複合体:ナノ粒子コアの比が10:1〜1000:1である、
高粒子密度ナノ粒子組成物。 - 前記ナノ粒子コアがナノ粒子コアの外表面上に生分解性の層をさらに含み、前記ペプチド抗原-MHC複合体が該ナノ粒子コアまたは該生分解性の層に機能的に結合している、請求項1に記載の組成物。
- 前記生分解性の層が、デキストラン、マンニトール、またはポリエチレングリコールの1種または複数種を含む、請求項2に記載の組成物。
- ペプチド抗原-MHC複合体:ナノ粒子コアの前記比が10:1〜100:1である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ペプチド抗原-MHC複合体が前記ナノ粒子コアまたは前記生分解性の層に共有結合または非共有結合で連結されている、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ペプチド抗原-MHC複合体が、5kD未満の大きさのリンカーを介して前記ナノ粒子コアまたは前記生分解性の層に共有結合で連結されている、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記リンカーがポリエチレングリコールを含む、請求項6に記載の組成物。
- 前記ペプチド抗原が、SEQ ID NO:1、4、5、6、7、または8の群のうちのペプチド配列に対して少なくとも80%の同一性を有するペプチドを含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ナノ粒子コアが生体適合性または生体吸収性である、請求項1〜8のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ペプチド抗原-MHC複合体のMHCがMHCクラスI、MHCクラスII、またはそれらの組み合わせを含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ナノ粒子コアがリポソームではない、請求項1〜10のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ナノ粒子コアが、金属、金属酸化物、金属硫化物、金属セレン化物、磁性材料、ポリマー、金、鉄、または酸化鉄の1種または複数種を含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ナノ粒子コアが、金、鉄、または酸化鉄の1種または複数種を含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の組成物。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の組成物および担体を含む、薬学的組成物。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の複数の高粒子密度ナノ粒子を調製するかまたは得るための方法であって、前記ペプチド抗原-MHC複合体を該ナノ粒子コアまたは該生分解性の層と複合体化させる工程を含む、方法。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の高粒子密度ナノ粒子組成物を含む、細胞または組織においてまたはそれを必要とする患者において抗炎症反応を誘導するための薬学的組成物。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の高粒子密度ナノ粒子組成物を含む、それを必要とする患者において炎症を治療するための薬学的組成物。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の高粒子密度ナノ粒子組成物を含む、それを必要とする患者のGI管において抗炎症性T細胞および/または抗炎症性細胞を蓄積するための薬学的組成物。
- 前記患者が、炎症性腸疾患、大腸炎、クローン病、胃腸管のアレルギー性炎症、またはセリアック病の群のうちの胃腸疾患に罹患している、請求項16〜18のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 前記細胞または前記組織が、GI管の細胞または組織である、請求項16に記載の薬学的組成物。
- 前記T細胞がCD4+ T細胞またはCD8+ T細胞である、請求項18または19に記載の薬学的組成物。
- 前記T細胞がIL-10またはTGFβを分泌する、請求項18、19、または21のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 前記抗炎症反応が胃腸管において誘導される、請求項16または20に記載の薬学的組成物。
- 炎症が胃腸管の炎症である、請求項17に記載の薬学的組成物。
- 以下の工程を含む、GI特異的な抗炎症性T細胞および/または抗炎症性細胞の集団の増殖をモニターするためのインビトロ方法:
(a)請求項1〜13のいずれか一項に記載の高粒子密度ナノ粒子組成物または請求項14に記載の薬学的組成物の有効量を対象に投与した後に該対象から得られた適切な試料を、該ペプチド抗原-MHC複合体を含む四量体複合体の有効量と接触させる工程であって、該患者がGI特異的な抗炎症性T細胞および/または抗炎症性細胞の集団を含有すると疑われる、工程;および
(b)該四量体複合体に結合したGI特異的な抗炎症性T細胞および/または抗炎症性細胞の数を検出および定量する工程。 - 工程(b)のGI特異的な抗炎症性T細胞の数を定量する工程が、フローサイトメトリーの使用を含む、請求項25に記載の方法。
- 細胞または組織においてまたはそれを必要とする患者において抗炎症反応を誘導するための医薬の製造における、請求項1〜13のいずれか一項に記載の高粒子密度ナノ粒子組成物の使用。
- それを必要とする患者において炎症を治療するための医薬の製造における、請求項1〜13のいずれか一項に記載の高粒子密度ナノ粒子組成物の使用。
- それを必要とする患者のGI管において抗炎症性T細胞および/または抗炎症性細胞を蓄積するための医薬の製造における、請求項1〜13のいずれか一項に記載の高粒子密度ナノ粒子組成物の使用。
- 前記患者が、炎症性腸疾患、大腸炎、クローン病、胃腸管のアレルギー性炎症、またはセリアック病の群のうちの胃腸疾患に罹患している、請求項27〜29のいずれか一項に記載の使用。
- 前記細胞または前記組織が、GI管の細胞または組織である、請求項27に記載の使用。
- 前記T細胞がCD4+ T細胞またはCD8+ T細胞である、請求項29または30に記載の使用。
- 前記T細胞がIL-10またはTGFβを分泌する、請求項29、30、または32のいずれか一項に記載の使用。
- 前記抗炎症反応が胃腸管において誘導される、請求項27または31に記載の使用。
- 炎症が胃腸管の炎症である、請求項28に記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201261615743P | 2012-03-26 | 2012-03-26 | |
US61/615,743 | 2012-03-26 | ||
PCT/IB2013/052352 WO2013144811A2 (en) | 2012-03-26 | 2013-03-25 | Methods and compositions for treating inflammation |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017160799A Division JP6570082B2 (ja) | 2012-03-26 | 2017-08-24 | 炎症を治療するための方法および組成物 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015518467A JP2015518467A (ja) | 2015-07-02 |
JP2015518467A5 JP2015518467A5 (ja) | 2016-05-19 |
JP6199955B2 true JP6199955B2 (ja) | 2017-09-20 |
Family
ID=48444453
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015502510A Active JP6199955B2 (ja) | 2012-03-26 | 2013-03-25 | 炎症を治療するための方法および組成物 |
JP2017160799A Active JP6570082B2 (ja) | 2012-03-26 | 2017-08-24 | 炎症を治療するための方法および組成物 |
JP2019074507A Pending JP2019108399A (ja) | 2012-03-26 | 2019-04-10 | 炎症を治療するための方法および組成物 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017160799A Active JP6570082B2 (ja) | 2012-03-26 | 2017-08-24 | 炎症を治療するための方法および組成物 |
JP2019074507A Pending JP2019108399A (ja) | 2012-03-26 | 2019-04-10 | 炎症を治療するための方法および組成物 |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10988516B2 (ja) |
EP (2) | EP2830654B8 (ja) |
JP (3) | JP6199955B2 (ja) |
CN (2) | CN110354278B (ja) |
AU (2) | AU2013202911A1 (ja) |
CA (1) | CA2868551C (ja) |
DK (1) | DK2830654T3 (ja) |
ES (1) | ES2744491T3 (ja) |
HK (1) | HK1206641A1 (ja) |
IL (2) | IL234829B (ja) |
MX (1) | MX363000B (ja) |
PL (1) | PL2830654T3 (ja) |
PT (1) | PT2830654T (ja) |
RU (1) | RU2689563C2 (ja) |
WO (1) | WO2013144811A2 (ja) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9511151B2 (en) | 2010-11-12 | 2016-12-06 | Uti Limited Partnership | Compositions and methods for the prevention and treatment of cancer |
US10988516B2 (en) | 2012-03-26 | 2021-04-27 | Uti Limited Partnership | Methods and compositions for treating inflammation |
US9603948B2 (en) | 2012-10-11 | 2017-03-28 | Uti Limited Partnership | Methods and compositions for treating multiple sclerosis and related disorders |
MX2016005822A (es) | 2013-11-04 | 2016-12-02 | Uti Limited Partnership | Metodos y composiciones para inmunoterpia sostenida. |
MA41020A (fr) | 2014-11-25 | 2017-10-03 | Evelo Biosciences Inc | Compositions probiotiques et prébiotiques, et leurs procédés d'utilisation pour la modulation du microbiome |
SG10202105996WA (en) * | 2014-12-23 | 2021-07-29 | 4D Pharma Res Ltd | Pirin polypeptide and immune modulation |
CA2984485A1 (en) * | 2015-05-06 | 2016-12-15 | Uti Limited Partnership | Nanoparticle compositions for sustained therapy |
RU2752620C2 (ru) * | 2015-05-27 | 2021-07-29 | Нортвестерн Юниверсити | Модифицированные углеводами частицы и порошкообразные композиции для модуляции иммунного ответа |
US10481158B2 (en) | 2015-06-01 | 2019-11-19 | California Institute Of Technology | Compositions and methods for screening T cells with antigens for specific populations |
CN111741746A (zh) * | 2017-11-29 | 2020-10-02 | 乌第有限合伙公司 | 治疗自身免疫性疾病的方法 |
BE1026147B1 (nl) * | 2018-03-29 | 2019-10-28 | Farm@Nutrition Besloten Vennootschap Met Beperkte Aansprakelijkheid | Samenstelling voor een voedingsadditief voor dieren en werkwijze om het additief toe te dienen. |
CN116790402B (zh) * | 2023-01-14 | 2024-05-14 | 西北农林科技大学 | 一株具有抗炎特性的单形拟杆菌菌株、培养方法及应用 |
Family Cites Families (140)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4367110A (en) | 1979-07-02 | 1983-01-04 | Toppan Printing Co. | Decorative laminate and a manufacturing method therefor |
US4452901A (en) | 1980-03-20 | 1984-06-05 | Ciba-Geigy Corporation | Electrophoretically transferring electropherograms to nitrocellulose sheets for immuno-assays |
US4554101A (en) | 1981-01-09 | 1985-11-19 | New York Blood Center, Inc. | Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity |
FR2504010B1 (fr) | 1981-04-15 | 1985-10-25 | Sanofi Sa | Medicaments anticancereux contenant la chaine a de la ricine associee a un anticorps antimelanome et procede pour leur preparation |
GB2097032B (en) | 1981-04-22 | 1984-09-19 | Teron International Urban Dev | A combined ceiling air and services distribution system mechanical chasse and structural roof member |
US4478946A (en) | 1981-07-02 | 1984-10-23 | South African Inventions Development Corporation | Carrier bound immunosorbent |
US4671958A (en) | 1982-03-09 | 1987-06-09 | Cytogen Corporation | Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites |
DE3377484D1 (en) | 1982-04-19 | 1988-09-01 | Nissan Motor | Method for controlling reduction ratio of continuously variable transmission with acceleration compensation |
US4818542A (en) | 1983-11-14 | 1989-04-04 | The University Of Kentucky Research Foundation | Porous microspheres for drug delivery and methods for making same |
US4542225A (en) | 1984-08-29 | 1985-09-17 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Acid-cleavable compound |
US4659839A (en) | 1984-10-10 | 1987-04-21 | Mallinckrodt, Inc. | Coupling agents for radiolabeled antibody fragments |
DE3680924D1 (de) | 1985-01-14 | 1991-09-26 | Neorx Corp | Metall-radionuklid markiertes protein fuer diagnose und therapie. |
US5171582A (en) | 1985-07-31 | 1992-12-15 | Ghent William R | Treatment of iodine deficiency diseases |
US4680338A (en) | 1985-10-17 | 1987-07-14 | Immunomedics, Inc. | Bifunctional linker |
US4699784A (en) | 1986-02-25 | 1987-10-13 | Center For Molecular Medicine & Immunology | Tumoricidal methotrexate-antibody conjugate |
US5258499A (en) | 1988-05-16 | 1993-11-02 | Vestar, Inc. | Liposome targeting using receptor specific ligands |
US6106840A (en) | 1988-06-23 | 2000-08-22 | Anergen, Inc. | MHC conjugates useful in ameliorating autoimmunity |
US5260422A (en) | 1988-06-23 | 1993-11-09 | Anergen, Inc. | MHC conjugates useful in ameliorating autoimmunity |
US4859839A (en) | 1988-07-08 | 1989-08-22 | Counter Computer Corporation | Point-of-sale terminal for laundry or dry cleaning establishments |
US5543390A (en) | 1990-11-01 | 1996-08-06 | State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University | Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting |
DE69232875T2 (de) | 1991-04-23 | 2003-08-21 | Anergen Inc | MHC-Konjugate zur Verbesserung der Autoimmunität. |
US5200189A (en) | 1991-07-23 | 1993-04-06 | Ecolab Inc. | Peroxyacid antimicrobial composition |
CA2130997A1 (en) | 1992-02-27 | 1993-09-02 | C. Garrison Fathman | Early antigen for autoimmune diabetes |
JP2631436B2 (ja) | 1992-07-24 | 1997-07-16 | 徳厚 小島 | 排水立て管継手 |
US5972336A (en) | 1992-11-03 | 1999-10-26 | Oravax Merieux Co. | Urease-based vaccine against helicobacter infection |
ZA952485B (en) | 1994-03-28 | 1995-12-15 | Nycomed Imaging As | Liposomes |
US6103379A (en) | 1994-10-06 | 2000-08-15 | Bar-Ilan University | Process for the preparation of microspheres and microspheres made thereby |
WO1996018105A1 (en) | 1994-12-06 | 1996-06-13 | The President And Fellows Of Harvard College | Single chain t-cell receptor |
DE19508058A1 (de) | 1995-02-21 | 1996-08-22 | Schering Ag | Verfahren zur Herstellung von DTPA-Tetraestern der terminalen Carbonsäuren und deren Verwendung zur Herstellung pharmazeutischer Mittel |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
US5840839A (en) * | 1996-02-09 | 1998-11-24 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Alternative open reading frame DNA of a normal gene and a novel human cancer antigen encoded therein |
US6033864A (en) * | 1996-04-12 | 2000-03-07 | The Regents Of The University Of California | Diagnosis, prevention and treatment of ulcerative colitis, and clinical subtypes thereof, using microbial UC pANCA antigens |
US20050003431A1 (en) | 1996-08-16 | 2005-01-06 | Wucherpfennig Kai W. | Monovalent, multivalent, and multimeric MHC binding domain fusion proteins and conjugates, and uses therefor |
EP0935607B1 (en) | 1996-08-16 | 2004-07-28 | The President And Fellows Of Harvard College | Soluble monovalent and multivalent mhc class ii fusion proteins, and uses therefor |
US6270772B1 (en) | 1997-09-16 | 2001-08-07 | Oregon Health Sciences University | Recombinant MHC molecules useful for manipulation of antigen-specific T-cells |
JP2002504342A (ja) | 1998-02-19 | 2002-02-12 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | 一価mhc結合ドメイン融合タンパク質および接合体、多価mhc結合ドメイン融合タンパク質および接合体、ならびに多量体mhc結合ドメイン融合タンパク質および接合体、そしてそれらのための使用 |
WO1999056763A1 (en) | 1998-05-07 | 1999-11-11 | The Regents Of The University Of California | Use of neglected target tissue antigens in modulation of immune responses |
DE19825371A1 (de) | 1998-06-06 | 1999-12-09 | Bayer Ag | Elektrochrome Anzeigevorrichtung mit isolierten Zuleitungen |
IL125608A0 (en) | 1998-07-30 | 1999-03-12 | Yeda Res & Dev | Tumor associated antigen peptides and use of same as anti-tumor vaccines |
US7807377B2 (en) | 1998-10-20 | 2010-10-05 | Salvatore Albani | Method of isolating antigen-specific T cells employing artificial antigen presenting cells |
US6150022A (en) | 1998-12-07 | 2000-11-21 | Flex Products, Inc. | Bright metal flake based pigments |
JP2000213425A (ja) | 1999-01-20 | 2000-08-02 | Hino Motors Ltd | Egrク―ラ |
US7090973B1 (en) * | 1999-04-09 | 2006-08-15 | Oscient Pharmaceuticals Corporation | Nucleic acid sequences relating to Bacteroides fragilis for diagnostics and therapeutics |
CN1377279A (zh) | 1999-05-06 | 2002-10-30 | 遗传研究所有限公司 | 可溶性共同刺激分子增强免疫应答的用途 |
JP2003510341A (ja) | 1999-10-06 | 2003-03-18 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | 細胞ターゲッティング組成物及びそれらを使用する方法 |
US6585947B1 (en) | 1999-10-22 | 2003-07-01 | The Board Of Trustess Of The University Of Illinois | Method for producing silicon nanoparticles |
US6651655B1 (en) | 2000-01-18 | 2003-11-25 | Quadrant Technologies Limited | Inhaled vaccines |
US7572631B2 (en) | 2000-02-24 | 2009-08-11 | Invitrogen Corporation | Activation and expansion of T cells |
US6797514B2 (en) | 2000-02-24 | 2004-09-28 | Xcyte Therapies, Inc. | Simultaneous stimulation and concentration of cells |
KR100379250B1 (ko) | 2000-12-04 | 2003-04-08 | 한국과학기술연구원 | 나노 단위 크기의 금속 입자가 함유된 고분자 복합 소재및 그 제조 방법 |
US7094555B2 (en) | 2001-04-05 | 2006-08-22 | Benaroya Research Institute At Virginia Mason | Methods of MHC class II epitope mapping, detection of autoimmune T cells and antigens, and autoimmune treatment |
DE10117858A1 (de) | 2001-04-10 | 2002-10-24 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | MHC-Tetramere |
US20070129307A1 (en) | 2001-06-22 | 2007-06-07 | The University Of British Columbia | Insulin epitopes for the treatment of type 1 diabetes |
US20050129617A1 (en) | 2001-06-22 | 2005-06-16 | Rusung Tan | Type1 diabetes diagnostics and therapeutics |
US20030124149A1 (en) | 2001-07-06 | 2003-07-03 | Shalaby Shalaby W. | Bioactive absorbable microparticles as therapeutic vaccines |
CA2453417A1 (en) | 2001-07-10 | 2003-06-26 | North Carolina State University | Nanoparticle delivery vehicle |
DE10144252A1 (de) | 2001-08-31 | 2003-03-27 | Fraunhofer Ges Forschung | Nanopartikel mit daran immobilisiertem biologisch aktivem TNF |
AU2002365279B2 (en) * | 2001-12-17 | 2009-08-13 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of inflammatory bowel disease |
US6688494B2 (en) | 2001-12-20 | 2004-02-10 | Cima Nanotech, Inc. | Process for the manufacture of metal nanoparticle |
US7285289B2 (en) | 2002-04-12 | 2007-10-23 | Nagy Jon O | Nanoparticle vaccines |
US20040115216A1 (en) | 2002-07-12 | 2004-06-17 | The Johns Hopkins University | Reagents and methods for engaging unique clonotypic lymphocyte receptors |
DE10310261A1 (de) | 2003-03-05 | 2004-09-23 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Identifizierung von Antigen-Epitopen |
US20040197304A1 (en) | 2003-04-01 | 2004-10-07 | The Procter & Gamble Company And Alimentary Health, Ltd. | Methods of determining efficacy of treatments of inflammatory diseases of the bowel |
US6929675B1 (en) | 2003-04-24 | 2005-08-16 | Sandia Corporation | Synthesis metal nanoparticle |
US20050118102A1 (en) | 2003-04-28 | 2005-06-02 | Intematix Corporation | Spin resonance heating and/or imaging in medical applications |
MXPA05012080A (es) | 2003-05-08 | 2006-02-22 | Xcyte Therapies Inc | Generacion y aislamiento de celulas t especificas al antigeno. |
US8758767B2 (en) | 2003-05-20 | 2014-06-24 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Antigens targeted by prevalent pathogennic T cells in type 1 diabetes and uses thereof |
US7060121B2 (en) | 2003-06-25 | 2006-06-13 | Hsing Kuang Lin | Method of producing gold nanoparticle |
US7812116B2 (en) | 2003-07-03 | 2010-10-12 | Rush University Medical Center | Immunogenic peptides |
WO2005020933A2 (en) | 2003-09-02 | 2005-03-10 | University Of South Florida | Nanoparticles for drug-delivery |
GB0321937D0 (en) | 2003-09-19 | 2003-10-22 | Univ Liverpool | Nanoparticle conjugates and method of production thereof |
US8100382B2 (en) | 2003-10-09 | 2012-01-24 | Brooks Instrument, LLP | Valve assembly |
DE102004023187A1 (de) | 2004-05-11 | 2005-12-01 | Ganymed Pharmaceuticals Ag | Identifizierung von Oberflächen-assoziierten Antigenen für die Tumordiagnose und -therapie |
AU2005326322B2 (en) | 2004-07-01 | 2009-02-05 | Yale University | Targeted and high density drug loaded polymeric materials |
US9079765B2 (en) | 2004-10-01 | 2015-07-14 | Midatech Ltd. | Nanoparticles comprising antigens and adjuvants, and immunogenic structures |
WO2006054806A1 (ja) | 2004-11-22 | 2006-05-26 | Locomogene, Inc. | クローン病関連自己抗原 |
US7462446B2 (en) | 2005-03-18 | 2008-12-09 | University Of Washington | Magnetic nanoparticle compositions and methods |
US20070059775A1 (en) | 2005-03-29 | 2007-03-15 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Synthesis and conjugation of iron oxide nanoparticles to antibodies for targeting specific cells using fluorescence and MR imaging techniques |
US7562421B2 (en) | 2005-04-03 | 2009-07-21 | Magen Eco Energy A.C.S. Ltd. | Connecting clasp |
US7326399B2 (en) | 2005-04-15 | 2008-02-05 | Headwaters Technology Innovation, Llc | Titanium dioxide nanoparticles and nanoparticle suspensions and methods of making the same |
EP1932538A4 (en) | 2005-08-25 | 2009-10-21 | Taiho Pharmaceutical Co Ltd | BIODEGRADABLE NANOTEHICLES WITH IMMOBILIZED OR CAPACITATED T-CELL-RECOGNIZABLE EPITOPEPEPID |
US9393215B2 (en) | 2005-12-02 | 2016-07-19 | Novartis Ag | Nanoparticles for use in immunogenic compositions |
WO2007084775A2 (en) | 2006-01-20 | 2007-07-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for modulation of suppressor t cell activation |
ES2657480T3 (es) | 2006-08-11 | 2018-03-05 | Life Sciences Research Partners Vzw | Péptidos inmunogénicos y su uso en trastornos inmunitarios |
US7816814B1 (en) | 2006-08-18 | 2010-10-19 | Hennessy Michael J | Bi-directional power converters |
US10004703B2 (en) | 2006-10-12 | 2018-06-26 | Biogen Chesapeake Llc | Treatment of alzheimer's disease using compounds that reduce the activity of non-selective CA++ activated ATP-sensitive cation channels regulated by SUR1 channels |
US20100056444A1 (en) | 2006-10-12 | 2010-03-04 | Sven Martin Jacobson | Treatment of Alzheimer's Disease Using Compounds that Reduce the Activity of Non Selective Ca Activated ATP- Sensitive Cation Channels Regulated by SUR1 Receptors |
JP2010530955A (ja) | 2006-12-29 | 2010-09-16 | ユニヴァーシティ オブ ワシントン | 二重機能性非汚染表面および材料 |
US8889117B2 (en) | 2007-02-15 | 2014-11-18 | Yale University | Modular nanoparticles for adaptable vaccines |
US20140105980A1 (en) | 2012-10-11 | 2014-04-17 | Uti Limited Partnership | Methods and compositions for treating multiple sclerosis and related disorders |
US20150250871A1 (en) | 2007-03-07 | 2015-09-10 | Uti Limited Partnership | Methods and compositions for treating multiple sclerosis and related disorders |
JP5650406B2 (ja) | 2007-03-07 | 2015-01-07 | ユーティーアイ リミテッド パートナーシップ | 自己免疫状態の予防および治療のための組成物および方法 |
US20100151031A1 (en) | 2007-03-23 | 2010-06-17 | Desimone Joseph M | Discrete size and shape specific organic nanoparticles designed to elicit an immune response |
EP3023436A1 (en) | 2007-07-03 | 2016-05-25 | Dako Denmark A/S | Improved methods for generation, labeling and use of mhc multimers |
WO2009013741A2 (en) | 2007-07-22 | 2009-01-29 | Camtek Ltd | Method and system for controlling a manufacturing process |
JP5085240B2 (ja) | 2007-09-03 | 2012-11-28 | 日本電波工業株式会社 | 水晶デバイス及び水晶デバイスの製造方法 |
EP2399610A3 (en) | 2007-09-24 | 2012-09-05 | Bar-Ilan University | Polymer nanoparticles coated by magnetic metal oxide and uses thereof |
WO2009064273A1 (en) | 2007-11-16 | 2009-05-22 | Paul Appelbaum | Apparatus and method for packaging articles in clear plastic packages |
US8779088B2 (en) * | 2007-12-17 | 2014-07-15 | Marfl Ab | Vaccine for the treatment of Mycobacterium related disorders |
US8629098B2 (en) | 2008-01-15 | 2014-01-14 | Yale University | Compositions and methods for adoptive and active immunotherapy |
EP2240782A2 (en) | 2008-02-04 | 2010-10-20 | Ulive Enterprises Limited | Nanoparticle conjugates |
US20110151015A1 (en) | 2008-03-04 | 2011-06-23 | Liquikia Technologies, Inc. | Immunomodulator particles and methods of treating |
WO2009126835A2 (en) | 2008-04-09 | 2009-10-15 | University Of Washington Techtransfer Invention Licensing | Magnetic nanoparticle and method for imaging t cells |
US20090258355A1 (en) | 2008-04-11 | 2009-10-15 | Brookhaven Science Associates, Llc | Nanoscale Clusters and Methods of Making Same |
US20110223188A1 (en) | 2008-08-25 | 2011-09-15 | Solomon Langermann | Targeted costimulatory polypeptides and methods of use to treat cancer |
US8323696B2 (en) | 2008-08-29 | 2012-12-04 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne | Nanoparticles for immunotherapy |
WO2010037397A1 (en) | 2008-10-01 | 2010-04-08 | Dako Denmark A/S | Mhc multimers in cmv immune monitoring |
WO2010037395A2 (en) | 2008-10-01 | 2010-04-08 | Dako Denmark A/S | Mhc multimers in cancer vaccines and immune monitoring |
US8343497B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-01-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics |
CA2642141A1 (en) | 2008-10-20 | 2010-04-20 | Innovative Microelectronics Inc. | Flange alignment pin |
US9267945B2 (en) | 2008-11-12 | 2016-02-23 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Diagnosis of multiple sclerosis |
WO2010080032A2 (en) | 2009-01-09 | 2010-07-15 | Stichting Het Nederlands Kanker Instituut | Bead-assisted viral transduction |
SG193843A1 (en) | 2009-01-20 | 2013-10-30 | Univ Northwestern | Compositions and methods for induction of antigen-specific tolerance |
US8383085B2 (en) | 2009-05-29 | 2013-02-26 | University Of Manitoba | Methods of making iron-containing nanoparticles |
CA2777053A1 (en) | 2009-10-06 | 2011-04-14 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Human single-chain t cell receptors |
GB0922066D0 (en) | 2009-12-17 | 2010-02-03 | Univ Belfast | Modulator |
GB201003088D0 (en) | 2010-02-24 | 2010-04-14 | Univ Exeter | Method for the preparation of a novel nanoparticle conjugate |
EP3235506B1 (en) | 2010-07-26 | 2023-12-06 | Qu Biologics Inc. | Immunogenic anti-inflammatory compositions |
PL2640711T3 (pl) | 2010-08-25 | 2016-06-30 | Davuluri Ramamohan Rao | Ulepszony sposób otrzymywania rufinamidu |
US20130171179A1 (en) | 2010-09-03 | 2013-07-04 | Oregon Health & Science University | Recombinant t-cell receptor ligands with covalently bound peptides |
EP2621523B1 (en) | 2010-09-29 | 2017-08-09 | UTI Limited Partnership | Methods for treating autoimmune disease using biocompatible bioabsorbable nanospheres |
US9511151B2 (en) | 2010-11-12 | 2016-12-06 | Uti Limited Partnership | Compositions and methods for the prevention and treatment of cancer |
JP6077544B2 (ja) | 2011-09-07 | 2017-02-08 | ミダテック リミテッド | ナノ粒子−ペプチド組成物 |
US20140251917A1 (en) | 2011-09-22 | 2014-09-11 | Marv Enterprises,LLC | Method for the treatment of multiple sclerosis |
EP2591801A1 (en) | 2011-11-14 | 2013-05-15 | Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf | Nanoparticle compositions for generation of regulatory T cells and treatment of autoimmune diseases and other chronic inflammatory conditions |
US20130128138A1 (en) | 2011-11-18 | 2013-05-23 | Shenzhen China Star Optoelectronics Technolog Co., LTD. | Flat Panel Display Device, Stereoscopic Display Device, Plasma Display Device |
US10758487B2 (en) | 2011-12-09 | 2020-09-01 | The Johns Hopkins University | Artificial antigen presenting cells having a defined and dynamic shape |
US10988516B2 (en) | 2012-03-26 | 2021-04-27 | Uti Limited Partnership | Methods and compositions for treating inflammation |
US20150150996A1 (en) | 2012-06-06 | 2015-06-04 | Northwestern University | Compositions and methods for antigen-specific tolerance |
US9603948B2 (en) | 2012-10-11 | 2017-03-28 | Uti Limited Partnership | Methods and compositions for treating multiple sclerosis and related disorders |
MX361076B (es) | 2012-12-21 | 2018-11-27 | Hoffmann La Roche | Proteínas multifunción que comprenden complejo mayor de histocompatibilidad (cmh) de clase i multivalente unido mediante disulfuro. |
US9335768B2 (en) | 2013-09-12 | 2016-05-10 | Lam Research Corporation | Cluster mass flow devices and multi-line mass flow devices incorporating the same |
MX2016005822A (es) | 2013-11-04 | 2016-12-02 | Uti Limited Partnership | Metodos y composiciones para inmunoterpia sostenida. |
EA201692512A1 (ru) | 2014-06-25 | 2017-07-31 | Селекта Байосайенсиз, Инк. | Способы и композиции для лечения синтетическими наноносителями и ингибиторами иммунной контрольной точки |
EP3067366A1 (en) | 2015-03-13 | 2016-09-14 | Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin | Combined T cell receptor gene therapy of cancer against MHC I and MHC II-restricted epitopes of the tumor antigen NY-ESO-1 |
WO2016145605A1 (zh) | 2015-03-17 | 2016-09-22 | 王忠堂 | 一种便携式智能超声多普勒动态实时监测装置 |
CA2984485A1 (en) | 2015-05-06 | 2016-12-15 | Uti Limited Partnership | Nanoparticle compositions for sustained therapy |
EP3538559A4 (en) | 2016-11-09 | 2020-06-24 | UTI Limited Partnership | RECOMBINANT PMHC CLASS II MOLECULES |
WO2018185564A2 (en) | 2017-04-07 | 2018-10-11 | Uti Limited Partnership | Assay to measure the potency of receptor-ligand interactions in nanomedicines |
CN111741746A (zh) | 2017-11-29 | 2020-10-02 | 乌第有限合伙公司 | 治疗自身免疫性疾病的方法 |
-
2013
- 2013-03-15 US US13/842,302 patent/US10988516B2/en active Active
- 2013-03-25 CA CA2868551A patent/CA2868551C/en active Active
- 2013-03-25 EP EP13722836.7A patent/EP2830654B8/en active Active
- 2013-03-25 DK DK13722836.7T patent/DK2830654T3/da active
- 2013-03-25 CN CN201910811575.4A patent/CN110354278B/zh active Active
- 2013-03-25 MX MX2014011623A patent/MX363000B/es unknown
- 2013-03-25 PL PL13722836T patent/PL2830654T3/pl unknown
- 2013-03-25 CN CN201380022126.2A patent/CN104321077A/zh active Pending
- 2013-03-25 AU AU2013202911A patent/AU2013202911A1/en not_active Abandoned
- 2013-03-25 WO PCT/IB2013/052352 patent/WO2013144811A2/en active Application Filing
- 2013-03-25 EP EP19175655.0A patent/EP3590531A1/en active Pending
- 2013-03-25 RU RU2014141984A patent/RU2689563C2/ru active
- 2013-03-25 ES ES13722836T patent/ES2744491T3/es active Active
- 2013-03-25 PT PT13722836T patent/PT2830654T/pt unknown
- 2013-03-25 JP JP2015502510A patent/JP6199955B2/ja active Active
-
2014
- 2014-09-23 IL IL234829A patent/IL234829B/en active IP Right Grant
-
2015
- 2015-08-03 HK HK15107409.3A patent/HK1206641A1/xx unknown
-
2016
- 2016-05-18 AU AU2016203231A patent/AU2016203231B2/en active Active
-
2017
- 2017-08-24 JP JP2017160799A patent/JP6570082B2/ja active Active
-
2019
- 2019-04-10 JP JP2019074507A patent/JP2019108399A/ja active Pending
- 2019-09-08 IL IL26916619A patent/IL269166A/en unknown
-
2021
- 2021-01-20 US US17/153,212 patent/US20210230237A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6570082B2 (ja) | 炎症を治療するための方法および組成物 | |
JP6899863B2 (ja) | 多発性硬化症および関連障害を治療するための方法および組成物 | |
AU2014343379B2 (en) | Methods and compositions for sustained immunotherapy | |
US20210205470A1 (en) | Methods and compositions for treating multiple sclerosis and related disorders | |
BR112014023859B1 (pt) | Nanopartícula, uso da mesma, e composição | |
NZ727956A (en) | Methods and compositions for treating inflammation | |
NZ727956B2 (en) | Methods and compositions for treating inflammation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20150515 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160323 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160323 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170123 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170420 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170615 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170720 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170726 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170824 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6199955 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |